JP3235671B2 - 生理活性物質固定化担体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は求核性を有する置換基を
含有する水不溶性固体表面に、両末端にアルデヒドを有
する親水性スペーサーを介して生理活性を有する物質を
固定して成ることを特徴とする生理活性物質固定化担体
に関するものである。より詳細に述べると、求核性を有
する置換基を含有する水不溶性固体表面上に、ポリアル
キレンオキサイド骨格を有し、両末端にアルデヒドを持
った親水性スペーサーを、求核性置換基のアルデヒドへ
の求核反応を利用して結合せしめ、さらにスペーサーの
もう一方のアルデヒドと生理活性物質の求核性置換基と
を同様の方法で固定した生理活性物質固定化担体に関す
る。本発明において生理活性物質とは、酵素、補酵素、
酵素阻害剤、ホルモン、抗菌剤、抗原、抗体、細胞、そ
の他機能を有する蛋白質、さらにこのような物質と親和
性を有する低分子化合物および（または）高分子化合物
を指し、これらをリガンドと称することもある。また、
本発明において生理活性物質を固定化する水不溶性固体
を単に担体と称することもあり、スペーサーとは生理活
性物質を担体表面から離して固定するための腕のことを
指す。

【０００２】

【従来の技術】生理活性物質を不溶性固体に固定し、得
られた生理活性物質固定化担体を化学反応触媒、分離精
製用特異的吸着材、臨床検査材料、医療用材料として利
用する方法は１９６０年代から活発な研究が開始され、
現在各国で盛んに研究が進められている。生理活性物質
を固体に担持させる方法は、物理的方法と化学的方法に
大別できる。前者はアガロースゲルなどに包み込んで閉
じこめる包括法や、非特異的な吸着力を利用した吸着法
などがある。後者には生理活性物質の官能基を利用して
化学結合させる共有結合法や、生理活性物質の持つ電荷
と反対の電荷を固体に付与して両者をイオン結合で結合
させるイオン結合法などがある。

【０００３】生理活性物質の固定で最も重要な問題とな
るのはいかにしてもとの活性を損なうことなく、安定に
固定し、なおかつ使用に際して生理活性物質の遊離が防
げるかということである。物理的方法によって固定した
場合、包括法では生理活性物質を包み込んでしまうた
め、酵素そのものは活性を維持していながら反応溶媒と
の接触が妨げられ、もとの活性が充分に発揮されない可
能性が大きく、吸着法では使用中の生理活性物質遊離の
問題がある。従って、このような問題を解決するには、
化学的方法、なかでも非有結合法によって固定化を行う
ことが望ましい。

【０００４】従来、共有結合法として採用されてきた方
法としては、臭化シアン法、エポキシ法が一般的であ
る。臭化シアン法は、担体上の水酸基と臭化シアン（Ｃ
ＮＢｒ）を作用させてシアン酸エステル（ＲＯＣＮ）ま
たはイミドカーボネート（（ＲＯ）Ｃ＝ＮＨ）を生成さ
せ、これにアミノ基を有する物質をイソウレア結合（Ｒ
ＯＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｌ）やウレタン結合（ＲＯ（Ｃ
Ｏ）ＮＨ−Ｌ）で固定する方法である。（Ｒは固定を行
う担体、Ｌは生理活性物質）この方法は比較的容易に固
定化ができるので広く利用されているが、架橋部に形成
されるイミド基が帯電しているため、これとの静電相互
作用によって非特異吸着が起こる。また、固定化された
生理活性物質と担体との結合が不安定であるため、生理
活性物質が遊離する可能性がある。リガンドが遊離する
という欠点は特に医療用材料、つまり、血液や血液成分
を接触させて含有される病因物質を吸着除去する吸着材
では致命的とも言える。さらに、臭化シアンはそれ自体
毒性を持った化合物であるため、未反応の臭化シアンが
残存する可能性のあるこの方法は医療用材料には事実上
応用ができない。

【０００５】エポキシ法は臭化シアン法のこのような欠
点を解消するために考案された方法のひとつである。こ
の方法は例えば、担体上の水酸基とエピクロルヒドリン
をアルカリ性条件のもとで作用させてフポキシ基を導入
し、これに水酸基を有する物質を作用させてエーテル結
合により固定化させるものである。この方法は、水酸基
の代わりにアミノ基を利用して固定する方法や、担体に
直接エポキシ基を導入するのではなく、両末端にエポキ
シ基を有する化合物をスペーサーとして担体の水酸基と
反応させ、もう一方のエポキシ基を利用して含水酸基物
質を固定する方法などのバリエーションも考案されてい
る。

【０００６】エポキシ法では臭化シアン法と比べて （１）静電相互作用による非特異吸着がない。 （２）生理活性物質との結合部位にあるエーテル結合、
アルキルアミノ結合は安定であり、生理活性物質の遊離
が少ない。 などの利点を有する。しかし、このエポキシ法では生理
活性固定の際、高温のアルカリ溶液で長時間の処理を要
するという欠点があり、これは生理活性物質の失活を招
く恐れがおおいにある。

【０００７】さらに別の方法としては、以下のような手
段が考案されている。 （１）含オレフィン化合物溶液と酵素溶液とを担体表面
に塗布し、これに電離性放射線を照射する方法（特公平
３−６１４２６） （２）アミド化反応を利用して生理活性物質を固定する
方法（有機合成化学、第３８巻、１２８〜１３８頁（１
９８０年）：Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第８７巻、５３５
〜５４０頁（１９８０年）） （３）両末端にアルデヒドを有する化合物をスペーサー
として導入し、これを介して生理活性物質を固定する方
法（特公平３−５９０８０）

【０００８】（１）の方法は包括法に分類されるもの
で、酵素水溶液およびガラス化性ビニル系重合性単量体
から成る混合物を多孔質粒子の表面に被覆した後電離性
放射線を照射して重合せしめ、酵素を固定するものであ
る。この方法では包括法の利点、すなわち活性の保持、
複数成分から成る複雑な酵素反応系をそのまま固定でき
ることなどを保ったまま、酵素の遊離が低く抑えられ
る。しかしながら、反応溶媒との接触が制限されてしま
うことは避けられず、また、固定化に電離性放射線の照
射を要するので装置が大がかりなものとなってしまい、
手軽に実施しにくい。

【０００９】（２）の方法は、エポキシ活性化担体をア
ンモニアでアミノ誘導体とした後、無水コハク酸で処理
し、スクシニルアミノ誘導体とし、これにカルボジイミ
ドとアミノ基を有する生理活性物質とを作用させて生理
活性物質の固定化を行うものである。しかし、水溶性カ
ルボジイミドを用いるこの方法では反応中間体の転位に
よる副反応が起こる可能性がある。また、最適酸性度で
あるｐＨ４、５でも、これよりも低いｐＨ値ではなおさ
ら、生理活性物質の重合が起こり易いという欠点がある
のは発明者自身も認めているところである。

【００１０】（３）の方法は、アミノ基を有する担体
（もしくはアミノ基を導入した担体）と、両末端にアル
デヒドを有する化合物を作用させ、シッフ塩基形成−還
元によってアルキルアミノ結合でこれを固定し、さらに
アミノ基を有する生理活性物質を同様にして結合させ
て、スペーサーを介して生理活性物質を担体に固定する
方法である。この方法は生理活性物質を固定するという
目的を達成するだけなら優れた方法であるが、使用時の
生理活性発揮について考えると、改善の余地がある。

【００１１】この発明においては両末端にアルデヒドを
有する化合物、すなわちスペーサーについての考慮が充
分でない。スペーサーの効果は生理活性物質の運動性を
高めることによって、使用の際にその活性を充分に引き
出すということが挙げられる。ところが、特公平３−５
９０８０の方法に用いられるスペーサーはその鎖長が、
炭素数にしてわずかに２〜１０となっている。このよう
に短いスペーサーでは生理活性物質の運動性向上に対す
る寄与は充分ではないと考えられる。

【００１２】また、生理活性物質固定化担体は主とし
て、水系溶媒中で使用されることが圧倒的に多い。特公
平３−５９０８０に挙げられたスペーサーは疎水性のメ
チレン鎖から成っているため水系溶媒中では充分に伸び
きったコンフォメーションをとるのが困難であり、スペ
ーサー鎖長と併せて考えると、本来スペーサーに期待さ
れる効果はほとんど発揮されないと言っても過言ではな
い。

【００１３】生理活性物質固定化担体が医療用材料、す
なわち血液や血液成分を接触させて含有される病因物質
を吸着除去する吸着材として使用される場合には親水性
スペーサーの持つ意義はさらに大きくなる。すなわち、
血液中の血球成分や、被吸着物質でない蛋白の付着を防
止することである。親水性スペーサーはその周辺に水を
吸着している。このため吸着材表面は水の層に覆われ、
この水の層が血球成分の付着を防いでいる（排除体積効
果）。また、水の層を形成するスペーサーが運動するこ
とにより、さらに血球成分の付着は困難になり、付着し
た血球成分は脱離しやすくなる。また、凝固因子や補体
の活性化が抑制されるといった利点を有する。

【００１４】本発明は上記従来技術の欠点を解決し、簡
便な方法で種々の生理活性物質の固定を汎用的に、充分
な濃度で、安定に行うことができ、かつ生理活性物質の
活性を充分に引き出すことのできる生理活性物質固定化
担体を提供しようとしたものである。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明の生理活性物質固
定化担体は、求核性基を有する置換基を含有する水不溶
性固体表面に、両末端にアルデヒドを有する親水性スペ
ーサーを介して生理活性を有する物質を固定して成るこ
とを特徴とするものである。

【００１６】本発明の生理活性物質固定化担体は、水不
溶性固体がポリスチレン、ポリメタクリル酸およびその
誘導体或いはこれらの共重合体などの合成有機高分子化
合物、セルロース、キチン、キトサン等の天然有機高分
子化合物、またはアシルセルロース、アシルキチン等の
改質天然有機高分子化合物に適当な方法で求核性置換基
を導入した化合物であることが好ましい。これらの高分
子化合物のうち、機械的強度、親水性スペーサー導入の
容易さ、親水性スペーサー導入後の不水溶性の保持を考
慮すると、適度に架橋したポリスチレン、ポリメタクリ
ル酸およびその誘導体或いはこれらの共重合体、セルロ
ースに適当な方法で求核性置換基を導入した化合物やキ
トサンが望ましく、さらに好ましくは架橋ポリメタクリ
ル酸誘導体、セルロースに適当な方法で求核性置換基を
導入した化合物、あるいはキトサンが望ましい。

【００１７】本発明において求核性を有する置換基と
は、公知、またはこれから新規に合成されるであろうい
かなる求核性置換基をも包含する。具体的にはアミノ
基、イミノ基、ヒドロキシルアミノ基、水酸基、アルコ
キシド基、チオール基、ヒドロセレノ基（−ＳｅＨ）、
ヒドロテルロ基（−ＴｅＨ）、ホスフィノ基（−Ｐ
Ｈ₂ ）、アルシノ基（−ＡｓＨ₂ ）、スチビノ基（−Ｓ
ｂＨ₂ ）、ビスムチノ基（−ＢｉＨ₂ ）などの置換基あ
るいは、ヒドラジン、ヒドラジド、スルフィド、ヒドロ
ポリスルフィド（Ｒ−ＳｎＨ）、ポリスルフィド（Ｒ−
Ｓｎ−Ｒ）、セレニド（Ｒ−Ｓｅ−Ｒ）、テルリド（Ｒ
−Ｔｅ−Ｒ）、あるいはグリニャール試薬（ＲＭｇＸ）
や有機リチウムといった有機金属化合物などの構造を有
する置換基を指す。このなかで入手や取扱いの容易さ、
反応性からアミノ基、イミノ基、水酸基が好ましく、反
応後野生成物の安定性を考えると、アミノ基、イミノ
基、特に第１級アミノ基が最も好ましい。

【００１８】本発明において利用される水不溶性担体は
求核性置換基を含有していることが必要である。キトサ
ンのようにすでに分子中にアミノ基を持っている化合物
はそのまま利用できるが、もともと求核性置換基のない
化合物にはあらかじめ求核性置換基を導入する必要があ
る。導入方法については特に制限されないが、ポリスチ
レンを利用する場合、以下のような方法でアミノ基を導
入する手段が利用され得る。 （１）架橋ポリクロロメチルスチレンの合成 ジビニルベンゼンを１重量％〜７０重量％、好ましくは
２重量％〜３５重量％含む架橋ポリスチレンにクロロホ
ルムを加え、室温で１５分以上、好ましくは３０分以上
攪拌して充分に膨潤させた後、クロロメチルメチルエー
テルと触媒を加え、２５℃〜１００℃、好ましくは３０
℃〜６０℃で３０分〜１２時間、好ましくは２時間〜７
時間窒素気流気下にて攪拌しながら反応させると、クロ
ロメチル基導入率１０％〜１００％、好ましくは２５％
から９５％の架橋ポリクロロメチルスチレンが得られ
る。上記触媒としては、塩化アルミニウムのようなアル
ミニウム系触媒、塩化錫のような錫系触媒、塩化亜鉛の
ような亜鉛系触媒が挙げられる。触媒は反応溶液中に
０．３％〜５．０％、好ましくは０．４％〜３．０％の
含量で添加される。上記クロロメチル化反応において、
各成分の混合重量比は次の通りである。ポリスチレンと
クロロホルムの重量比は２／１〜１／１０、好ましくは
１／１〜１／７：ポリスチレンとクロロホルムの合計量
とクロロメチルメチルエーテルの混合重量比は３０／１
〜１／５、好ましくは１５／１〜１／３である。

【００１９】（２）アミノ基の導入 ポリアミン化合物を不活性溶媒に溶解させる。これに上
記（１）で得たポリクロロメチルスチレンを加え、０℃
から徐々に室温まで反応温度を上げ、３０分〜１２時
間、好ましくは１時間〜４時間に亘り反応させる。これ
に水酸化ナトリウム水溶液を加え、約３０分攪拌した
後、生成物を回収する。以上の操作によってアミノ基含
量０．２０ｍｍｏｌ／ｇ〜２０ｍｍｏｌ／ｇ、好ましく
は１．０ｍｍｏｌ／ｇ〜１０ｍｍｏｌ／ｇの化合物下記
（化２）が得られる。

【００２０】

【化２】 化２は、ポリアミンとして、テトラエチルペンタミンを
用いたときを示すものである。

【００２１】上記の反応に用いられる溶媒はクロロホル
ム、ベンゼンなどの有機溶媒、アルカリ水溶液などの水
系溶媒も用いられ得るが、テトラヒドロフラン、テトラ
ヒドロビシン、ジオキサン等の環状エーテル類が好まし
い。上記反応に用いられるポリアミン化合物はアンモニ
ア：ヒドラジン：エチレンジアミン：ジエチレントリア
ミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタ
ミンなどのエチレンジアミン縮合化合物：ジアミノプロ
パン、ジアミノブタン、ジアミノペンタン、ジアミノヘ
キサン、トリアミノプロパン、トリアミノブタン、トリ
アミノペンタン、トリアミノヘキサンなどのポリアミノ
アルキル：ジアミノシクロペンタン、トリアミノシクロ
ペンタン、ジアミノシクロヘキサン、トリアミノシクロ
ヘキサンなどのポリアミノシクロアルキル：ジアミノベ
ンゼン：ジアミノナフタレン、トリアミノベンゼン、ト
リアミノナフタレンなどのポリアミノアリール等が挙げ
られるが、本発明の要旨であるアルデヒドへの求核反応
が容易なのは第１級アミノ基なので、第１級アミノ基が
少なくともひとつ、好ましくはふたつ以上含まれるポリ
アミン化合物が望ましい。上記反応におけるポリクロロ
メチルスチレン中のクロロメチル基とポリアミン化合物
との混合モル比は３／１〜１／１０好ましくは１／１〜
１／５である。

【００２２】セルロースを利用する場合、以下のような
方法が利用され得る。 （１）アルデヒド基の導入 過沃素酸ナトリウムを０．１規定から５．０規定、好ま
しくは０．５規定から１．５規定の硫酸に溶解した溶液
に、粒状多孔質セルロースを添加し、１０℃から５０
℃、好ましくは２０℃から３０℃で、５時間から３０時
間、好ましくは１０時間から２４時間反応させる。上記
過沃素酸ナトリウム−硫酸溶液の過沃素酸ナトリウム濃
度は２重量％から１５重量％、好ましくは４重量％から
１０重量％である。また、上記粒状多孔質セルロースの
過沃素酸ナトリウム溶液への浴比は１０容量％から３０
容量％、好ましくは１５容量％から２５容量％である。
この反応混合物を濾過して生成物を回収し、充分に水洗
して、膨潤状態でアルデヒド含量０．１０ｍｅｑ／ｍｌ
から２．００ｍｅｑ／ｍｌ、好ましくは０．２０ｍｅｑ
／ｍｌから１．５０ｍｅｑ／ｍｌのアルデヒドセルロー
スを得る。このアルデヒドセルロース要部構造は下記
（化３）に示すように、一部のグルコースユニットが開
環した構造をしている。

【００２３】

【化３】

【００２４】（２）アミノ基の導入 ポリアミン化合物をｐＨ９．５の緩衝液に溶解させる。
これに上記（１）で得たアルデヒドセルロースを添加し
て攪拌しながら１０℃から５０℃好ましくは２０℃から
３０℃で、５時間から３０時間、好ましくは１０時間か
ら２４時間反応させる。上記ポリアミン化合物−緩衝液
の濃度は０．２重量％から５．０重量％、好ましくは
０．４重量％から３．０重量％、この溶液へのアルデヒ
ドセルロースの浴比は３容量％から２０容量％、好まし
くは５容量％から１５容量％であり、アルデヒドセルロ
ースに含まれるアルデヒドとポリアミン化合物の混合モ
ル比が３／１〜１／１０好ましくは１／１〜１／５とな
るよう適当に調整されるのが望ましい。

【００２５】この反応混合物を濾過して生成物を回収、
水洗し、これをｐＨ９．０の緩衝液に分散させ、水素化
ホウ素ナトリウムを添加して１０℃から５０℃好ましく
は２０℃から３０℃で、５時間から３０時間、好ましく
は１０時間から２４時間反応させてシッフ塩基の水素添
加を行う。含シッフ塩基［セルロース］−［ポリアミン
化合物］の緩衝液への浴比は３容量％から２０容量％、
好ましくは５容量％から１５容量％、含シッフ塩基［セ
ルロース］−［ポリアミン化合物］と水素化ホウ素ナト
リウムの仕込比は２０／１から３／２、好ましくは１５
／１から３／１（いずれも容量／重量比）である。こう
してアミノ基含量０．０５０ｍｅｑ／ｍｌから３．００
ｍｅｑ／ｍｌ、好ましくは０．２０ｍｅｑ／ｍｌから
２．００ｍｅｑ／ｍｌの［セルロース］−［ポリアミン
化合物］を得る。

【００２６】上記反応に用いられるポリアミン化合物は
アンモニア：ヒドラジン：エチレンジアミン：ジエチレ
ントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレ
ンペンタミンなどのエチレンジアミン縮合化合物：ジア
ミノプロパン、ジアミノブタン、ジアミノペンタン、ジ
アミノヘキサン、トリアミノプロパン、トリアミノブタ
ン、トリアミノペンタン、トリアミノヘキサンなどのポ
リアミノアルキル：ジアミノシクロペンタン、トリアミ
ノシクロペンタン、ジアミノシクロヘキサン、トリアミ
ノシクロヘキサンなどのポリアミノシクロアルキル：ジ
アミノベンゼン、じあみのナフタレン、トリアミノベン
ゼン、トリアミノナフタレンなどのポリアミノアリール
等が挙げられるが、本発明の要旨であるアルデヒドへの
求核反応が容易なのは第１級アミノ基なので、第１級ア
ミノ基が少なくともひとつ、好ましくはふたつ以上含ま
れるポリアミン化合物が望ましい。さらに、ポリアミン
化合物の緩衝液への溶解性を考慮すると、エチレンジア
ミンおよびエチレンジアミン縮合化合物が望ましい。

【００２７】本発明において両末端にアルデヒドを有す
る親水性スペーサーとは、化１の構造を有する化合物で
あることを特徴とするものである。

【００２８】この化合物の合成方法については特に制限
されないが、両末端にアルデヒド基を持つポリエチレン
グリコール（以下ＰＥＯアルデヒドと略記する。）を合
成する場合、分子量２００から２００００、好ましくは
４００から１００００、さらに好ましくは１０００から
５０００のポリエチレングリコールをＤＭＳＯによって
酸化する方法が好ましい。

【００２９】本発明に用いられる両末端にアルデヒド基
を有する親水性スペーサーの鎖長は、固定化される生理
活性物質の種類、得られた生理活性物質固定化担体の用
途によって適当に選択されることが好ましい。例えば、
生理活性物質として抗ＬＤＬ（低比重リポ蛋白）抗体を
固定し、血液中のＬＤＬを選択的に除去する吸着材とし
て用いる場合、ＰＥＯアルデヒドをスペーサーに用いる
のであれば、分子量にして２００から１００００、好ま
しくは４００から５０００が望ましい。

【００３０】前記のような方法で水不溶性固体に導入し
た求核性置換基であるアミノ基や、他の求核性置換基を
利用して、両末端にアルデヒドを有する親水性スペーサ
ーを介し、生理活性物質の固定を行う。求核性置換基
は、親水性スペーサー末端アルデヒドのカルボニル炭素
を求核攻撃し、水酸基やアルコキシド基の場合はアセタ
ール、第１級アミノ基の場合はシッフ塩基、有機金属化
合物の場合はアルコールを生成することによって結合さ
れる。水酸基、第１級アミノ基、グリニャール試薬の反
応についてその機構を以下に示す。

【００３１】

【化４】

【００３２】

【化５】

【００３３】

【化６】 化４〜化６において、Ｒは水不溶性固体の残基を示し、
Ｒ′は親水性スペーサーの残基を示す。

【００３４】化６において、グリニャール試薬の詳細な
反応機構については、はっきりと解明されていないのが
現状であり、この反応についても確実にこの反応で進行
しているか定かでない部分もある。水不溶性固体への両
末端アルデヒド親水性スペーサーの導入、さらに生理活
性物質の固定化については、例えば、アミノ基導入済み
セルロースにＰＥＯアルデヒドを介して抗ＬＤＬ抗体を
固定する場合には以下のような方法が用いられ得る。

【００３５】（１）アミノ基導入済みセルロースへのＰ
ＥＯアルデヒドの導入 アミノ基含量０．０５０ｍｅｑ／ｍｌから３．００ｍｅ
ｑ／ｍｌ、好ましくは０．２０ｍｅｑ／ｍｌから２．０
０ｍｅｑ／ｍｌのアミノ基導入済みセルロースをｐＨ
９．５の緩衝液に分散させておく。これに分子量２００
から１００００、好ましくは４００から５０００のＰＥ
Ｏアルデヒドを加え、ｐＨを９．５調整した後１０℃か
ら５０℃、好ましくは２０℃から３０℃で、５時間から
３０時間、好ましくは１０時間から２４時間攪拌して反
応させる。上記アミノ基導入済みセルロースとＰＥＯア
ルデヒドとの仕込比は、それぞれに含まれるアミノ基と
アルデヒド基のモル比が３／１から１／１０、好ましく
は２／１から１／５となるよう適当に調整されるのが望
ましい。この反応混合物を濾過して生成物を回収する。

【００３６】（２）生理活性物質の固定 抗ＬＤＬ抗体をｐＨ９．５の緩衝液に分散、あるいは溶
解させておく。これに上記で得た［セルロース］−［Ｐ
ＥＯアルデヒド］を加え、０℃から５０℃、好ましくは
１５℃から３０℃で３０分から３０時間、好ましくは１
時間から２４時間、さらに好ましくは２時間から１８時
間攪拌して反応させる。この反応混合物を濾過して生成
物を回収、水洗し、［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒ
ド］−［抗ＬＤＬ抗体］を得る。上記抗ＬＤＬ抗体−緩
衝液の濃度は０．０５重量％から５．０重量％、好まし
くは０．１重量％から３．０重量％であり、この溶液へ
の［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒド］の浴比は２容
量％から２０容量％、好ましくは４容量％から１５容量
％である。

【００３７】（３）シッフ塩基の還元 上記で得られる［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒド］
−［抗ＬＤＬ抗体］はアゾメチン結合（Ｒ−Ｎ＝ＣＨ−
Ｒ′）によって結合しているので、このままでは不安定
であり、結合の開裂が起こり易い。そこで、還元によっ
てアゾメチン結合をアルキルアミノ結合へと転化してお
くことが好ましい。上記で得た［セルロース］−［ＰＥ
Ｏアルデヒド］−［抗ＬＤＬ抗体］をｐＨ９．０の緩衝
液に分散させる。これに水素化ホウ素ナトリウムを添加
して０℃から５０℃、好ましくは１５℃から３０℃で３
０分から３０時間、好ましくは１時間から２４時間、さ
らに好ましくは２時間から１８時間攪拌して反応させ
る。この反応混合物を濾過して生成物を回収、水洗し、
抗ＬＤＬ抗体固定化セルロースを得る。含シッフ塩基
［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒド］−［抗ＬＤＬ抗
体］の緩衝液への浴比は２容量％から２０容量％、好ま
しくは４容量％から１５容量％、含シッフ塩基［セルロ
ース］−［ＰＥＯアルデヒド］−［抗ＬＤＬ抗体］と水
素化ホウ素ナトリウムの仕込比は２０／１から３／２、
好ましくは１５／１から３／１（いずれも容量／重量
比）である。

【００３８】上記は抗ＬＤＬ抗体固定化セルロースにつ
いての例であるが、生理活性物質は種類によって取扱い
方が極めて多様であり、また、固定化担体の用途によっ
て固定化量なども異なってくる。したがって、固定化す
る生理活性物質、固定化担体の用途に応じて適当な条
件、混合比などを設定することが必要である。また、こ
れも固定化する生理活性物質、およびその用途によって
であるが、生理活性物質固定化後に残存するスペーサー
末端の未反応アルデヒド基が悪影響を及ぼす可能性もあ
るので、必要に応じエタノールアミン等の適当な試薬で
ブロックすることも推奨される。

【００３９】本発明に使用される水不溶性固体の現状は
粒子状、繊維状、膜状等いずれの公知の形状も用いられ
得るが、固定化される生理活性物質の種類、得られた生
理活性物質固定化担体の用途によって適当に選択される
ことが好ましい。例えば、生理活性物質として抗ＬＤＬ
（低比重リポ蛋白）抗体を固定し、血液中のＬＤＬを選
択的に除去する吸着材として用いる場合、粒子状担体の
平均粒径は１０μｍから５ｍｍ、好ましくは３０μｍか
ら１ｍｍ、さらに好ましくは５０μｍから５００μｍの
範囲にあることが望ましい。これより粒径が小さくなる
と血液、あるいは血液成分の流通抵抗が大きくなり、粒
径が大きくなると担体充填量の減少、ひいては有効表面
積の減少を招くこととなる。粒子形状については、細胞
に損傷を与えにくいことや、物理的外圧に対する強度、
さらに調整の容易さから、球状であることが望ましい。
同じ理由から、繊維状担体の繊維直径は０．１μｍから
５０μｍ、好ましくは０．３μｍから２５μｍ、さらに
好ましくは０．５μｍから１５μｍが望ましい。

【００４０】固定化される生理活性物質の種類、得られ
た生理活性物質固定化担体の用途によっては、有効表面
積を拡大するために担体表面に微小孔が存在することが
好ましい場合も多い。例えば、生理活性物質として抗Ｌ
ＤＬ（低比重リポ蛋白）抗体を固定し、血液中のＬＤＬ
を選択的に除去する吸着材として用いる場合、粒子状担
体では、２０Åから２００００Å、好ましくは１００Å
から１５０００Å、さらに好ましくは１０００Åから１
２０００Å、繊維状担体では２０Åから３０００Å、好
ましくは１００Åから２０００Åの微小孔が存在するこ
とが望ましい。これより平均孔径が小さいと被吸着物質
が微小孔内部まで到達できず、これより大きいと有効表
面積を拡大する効果が不十分であり、また担体の強度低
下を招く恐れがある。

【００４１】

【実施例】以下実施例を用いて本発明を説明する。実施
例中の部は、とくに注釈を加えない限り重量部を意味す
る。

【００４２】（実施例１）粒状多孔質セルロース（平均
粒径５０μｍ、平均孔径１５００Å）１０００部（容
量）を、過沃素酸ナトリウム３２５部を１規定−硫酸５
０００部に溶解した溶液に添加し、２５℃で１８時間反
応させた後、濾別、水洗し、アルデヒド含量１．３０ｍ
ｅｑ／ｍｌのアルデヒドセルロース（ＣＡ−１）を得
た。アルデヒドの定量はオキシム法によって行った。す
なわち、ＣＡ−１約１．０ｍｌを正確に秤量し（この量
をＶ₁ ｍｌとする）、これに０．５規定塩酸ヒドロキシ
ルアミン溶液（塩酸ヒドロキシルアミン３５ｇを水１６
０ｍｌに溶かし、９５％エタノールで希釈して１ｌとし
たもの）１０ｍｌ、ピリジンブロムフェノールブルー溶
液（４％ブロムフェノールブルー０．２５ｍｌとピリジ
ン２０ｍｌの混合液を９５％エタノールに希釈して１ｌ
としたもの）３５ｍｌを加えた。この懸濁液（以下サン
プルと呼ぶ）を、ＣＡ−１を入れず０．５規定塩酸ヒド
ロキシルアミン溶液１０ｍｌとピリジンブロムフェノー
ルブルー溶液３５ｍｌを加えたもの（以下ブランクと呼
ぶ）と併せて超音波洗浄器内に１５分間放置した。サン
プルとブランクを取り出し、サンプルの呈する色がブラ
ンクと同じになるまで０．１規定水酸化ナトリウム−メ
タノール溶液を滴下した。この際滴下した水酸化ナトリ
ウム量をＷ₁ ｍｌ、力価をＦ₁ とすると、アルデヒド含
量ｘ₁ ｍｅｑ／ｍｌは次式によって得られる。 ｘ₁ ＝（０．１×Ｆ₁ ×Ｗ₁ ）／Ｖ₁

【００４３】テトラエチレンペンタミン６２部をｐＨ
９．５の炭酸緩衝液５０００部（容量）に溶解させてお
き、これに上記で得たＣＡ−１を２５０部（容量）添加
して攪拌しながら２５℃で、１８時間反応させた。この
反応混合物を濾過して生成物を回収、水洗し、これをｐ
Ｈ９．０の炭酸緩衝液５０００部（容量）に分散させ、
水素化ホウ素ナトリウム７０部を添加して２５℃で、１
８時間反応させてシッフ塩基の水素添加を行った。こう
してテトラエチレンペンタミン由来のアミノ基含量１．
０６ｍｅｑ／ｍｌの［セルロース］−［テトラエチレン
ペンタミン］（Ｃｅｎ−１）を得た。アミノ基の定量は
以下の方法によって行った。Ｃｅｎ−１約０．１ｍｌを
正確に秤量し（この量をＶ₂ ｍｌとする）、０．１規定
塩酸水溶液１０ｍｌ（力価をＦとする）を加え、この懸
濁液をジオキサンで希釈して全量で４０ｍｌにする（こ
の懸濁液を以下サンプルと呼ぶ）。サンプルを約３０分
攪拌した後、自動滴定装置（平沼産業製ＣＯＭＴＩＴＥ
１０１）を用いて０．１規定水酸化ナトリウム水溶液
（力価をＦ′とする）で滴定を行う。サンプルを中和す
るまでに要した０．１規定水酸化ナトリウム水溶液の量
をＷ₂ ｍｌとすると、ＣＣ−１のアミノ基含量ｘ₂ ｍｅ
ｑ／ｍｌは次式によって得られる。 Ｖ₂ ×ｘ₂ ＋０．１×Ｆ₂ ′×Ｗ₂ ＝０．１×Ｆ ×１
０

【００４４】上記で得たＣｅｎ−１を１００部（容量）
取ってｐＨ９．５の炭酸緩衝液２４００部（容量）に分
散させておき、これに分子量４０００、アルデヒド含量
０．４０ｍｅｑ／ｇのＰＥＯアルデヒド６３０部を加え
た。炭酸ナトリウムと重炭酸ナトリウムを適当に加えて
ｐＨを９．５に調節して、２５℃で約１８時間攪拌して
反応させた。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になる
まで充分にイオン交換水で洗浄して［セルロース］−
［ＰＥＯアルデヒド］（ＣＰＥＯ−１）を得た。

【００４５】上記で得たＣＰＥＯ−１を１００部（容
量）取ってｐＨ９．５の炭酸緩衝液２４００部（容量）
に分散させておき、これに抗ＬＤＬ抗体１０部を加えて
２５℃で６時間攪拌して反応させた。ここで用いた抗Ｌ
ＤＬ抗体は、以下の方法で得た抗ヒトＬＤＬ抗体であ
る。すなわち、ヒトＬＤＬを完全アジュバントとともに
注射により投与し免疫したレグホンの鶏卵の卵黄部分を
取り出し、その５倍量の０．１％λカラギーナン水溶液
を混合して１５００×ｇ、１０分遠心分離し、その上清
をＤＥＡＥクロマトグラフィおよび塩析により精製し
た。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分
にイオン交換水で洗浄して含シッフ塩基［セルロース］
−［ＰＥＯアルデヒド］−［抗ＬＤＬ抗体］（ｓ−ＣＰ
ＥＯＩｇＹ−１）を得た。

【００４６】上記ｓ−ＣＰＥＯＩｇＹ−１を１００部
（容量）取ってｐＨ９．０の炭酸緩衝液２４００部（容
量）に分散させておき、これに水素化ホウ素ナトリウム
３０部を加えて２５℃で４時間攪拌して反応させた。生
成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分にイオ
ン交換水で洗浄して［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒ
ド］−［抗ＬＤＬ抗体］（ＣＰＥＯＩｇＹ−１）を得
た。

【００４７】上記で得たＣＰＥＯＩｇＹ−１を８０部
（容量）１００ｍｌのカラムに充填し、１００Ｕ／ｍｌ
のヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌ、続いて１Ｕ／
ｍｌのヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌでカラム
内、および血液回路内を洗浄した。一方、クエン酸加豚
血１ｌをビーカーにとり、カラムを通して再びこのビー
カーに戻すよう血液回路を組んだ。この装置を用いて血
液流量５０ｍｌ／ｍｉｎで灌流実験を３時間連続して行
い、カラム前後の血中ＬＤＬの量を測定した。また、灌
流開始前後の全血液中のアルブミン量、総蛋白量、血小
板量を測定した。ＬＤＬの定量は和光純薬製β−リポ蛋
白Ｃ−テストワコーを用いてヘパリン沈殿・比色法によ
って行った。アルブミン量はブロムクレゾールグリーン
法、総蛋白量はビウレット法、血小板量は自動血球算定
装置を用いて定量した。結果は表１、表２に示した。な
お、ＬＤＬの量は実際の測定値、アルブミン、総蛋白、
血小板については残存率で表示した。

【００４８】

【表１】 表１において、単位はｍｇ／ｄｌ、ＬＤＬ（前）はカラ
ム流入直前の血中ＬＤＬ量であり、ＬＤＬ量（後）とは
カラム流出直後の血中ＬＤＬ量を示す。

【００４９】

【表２】 表２において、残存率（％）は、３時間灌流後の濃度
（ｍｇ／ｄｌ）を灌流前の濃度で除して、１００を乗じ
た値である。ただし、血小板については（個／ｍｌ）で
もって前記方式と同じ処理をした値である。

【００５０】（実施例２）実施例１で得たＣＰＥＯ−１
を１００部（容量）取り、ｐＨ８．５の炭酸緩衝液２４
００部（容量）に分散させておき、これに市販ヒトハブ
トグロビン溶液（２０Ｕ／ｍｌ：ミドリ十字社製）２０
０部（容量）を加えて２５℃で６時間攪拌して反応させ
た。生成物を回収、充分にイオン交換水で洗浄して含シ
ップ塩基［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒド］−［ハ
ブシグロビン］（ｓ−ＣＰＥＯＨｐ−２）を得た。

【００５１】上記ｓ−ＣＰＥＯＨｐ−２を１００部（容
量）取ってｐＨ８．０のモノエタノールアミン含有炭酸
緩衝液２００部（容量）を添加し、２５℃で３時間攪拌
して過剰のアルデヒド基をブロックした。反応混合物を
濾過して生成物を回収し、充分に水洗した後、ｐＨ８．
５の炭酸緩衝液２４００部（容量）に分散させておき、
これに水素化ホウ素ナトリウム３０部を加えて２５℃で
４時間攪拌して反応させた。生成物を回収、これをｐＨ
８．３のリン酸緩衝液、０．５Ｍの食塩を含有する０．
００２Ｍ酢酸緩衝液で交互に洗浄、最後にｐＨ７．２の
リン酸緩衝液で洗浄し、［セルロース］−［ＰＥＯアル
デヒド］−［ハブシグロビン］（ＣＰＥＯＨｐ−２）を
得た。

【００５２】上記で得たＣＰＥＯＨｐ−２を８０部取っ
て１００ｍｌのカラムに充填し、１００Ｕ／ｍｌのヘパ
リンを含む生理食塩液１００ｍｌ、続いて１Ｕ／ｍｌの
ヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌでカラム内、およ
び血液回路内を洗浄した。一方、抗ヒトハブトグロビン
抗体を固定化した担体を用いて、ヒト全血からヒト遊離
ハブトグロビンを除去したクエン酸加ハブトグロビンフ
リー血に、ヒト遊離ヘモグロビンを５０ｍｇ／ｄｌ添加
し、これを１ｌビーカーに取って、カラムを通して再び
このビーカーに戻すよう血液回路を組んだ。この装置を
用いて血液流量５０ｍｌ／ｍｉｎで灌流実験を１時間連
続して行い、カラム後の血中ヒト遊離ヘモグロビン量を
測定した。また、灌流開始前後の全血液中のアルブミン
量、総蛋白量、血小板量を測定した。遊離ヘモグロビン
量はテトラメチルベンジジン法により定量した。アルブ
ミン量はブロムクレゾールグリーン法、総蛋白量はビウ
レット法、血小板量は自動血球算定装置を用いて定量し
た。結果は表３に示した。なお、アルブミン、総蛋白、
血小板については残存率で表示した。

【００５３】

【表３】 表３中、数値は表２で示したものと同じ意味である。

【００５４】（実施例３）実施例１で得たＣＰＥＫ−１
を５０部（容量）取り、ｐＨ８．５の炭酸緩衝液１２０
０部（容量）に分散させておき、これにバチスル属由来
のアミラーゼを６０００単位（ＪＩＳ Ｋ−７００１に
よる糖化力）添加し、１０℃で４時間攪拌して反応させ
た。生成物を回収、充分にイオン交換水で洗浄して含シ
ッフ塩基［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒド］−［ア
ミラーゼ］（ｓ−ＣＰＥＯＡｍ−３）を得た。この反応
に用いたアミラーゼは、新規にスクリーニングを行って
得られたバチルス属由来のもので、耐アルカリ性を有し
ている（至適ｐＨは８から９）。

【００５５】上記ｓ−ＣＰＥＯＡｍ−３を５０部（容
量）取ってｐＨ８．０のモノエタノールアミン含有炭酸
緩衝液１００部（容量）を添加し、１０℃で１時間攪拌
して過剰のアルデヒド基をブロックした。反応混合物を
濾過して生成物を回収し、充分に水洗した後、ｐＨ８．
５の炭酸緩衝液１２００部（容量）に分散させておき、
これに水素化ホウ素ナトリウム１５部を加えて１０℃で
４時間攪拌して反応させた。生成物を回収、イオン交換
水で充分に洗浄し、［セルロース］−［ＰＥＯアルデヒ
ド］−［アミラーゼ］（ＣＰＥＯＡｍ−３）を得た。

【００５６】上記で得られたＣＰＥＯＡｍ−３を、可溶
性デンプンを０．１％の濃度で溶解させた緩衝液に分散
させ、３７℃で３０分攪拌後、濾過を行い、濾液におけ
る加水分解度によってＣＰＥＯＡｍ−３におけるアミラ
ーゼ活性を測定した。活性測定は、反応溶液にヨウ素・
ヨウ化カリウム水溶液を加え、その吸光度低下率から算
出した。結果は表４に示した。なお、固定化酵素の活性
は固定を行っていない遊離アミラーゼのｐＨ８．５にお
ける活性を１００として百分率によって表示した。

【００５７】

【表４】 表４中のＦｒｅｅは、担体への固定を行っていないフリ
ーのアミラーゼによる値である。

【００５８】上記で得られたＣＰＥＯＡｍ−３をｐＨ１
０の緩衝液に分散させて攪拌し、経過時間と活性との関
係を測定した。結果は図１に示す。活性は、処理前の遊
離アミラーゼの活性を１００として、相対値で表示し
た。

【００５９】（比較例１）実施例１で得たＣｅｎ−１を
１００部（容量）取ってｐＨ９．５の炭酸緩衝液２４０
０部（容量）に分散させておき、２５％グルタルアルデ
ヒド水溶液５０部を加えた。炭酸ナトリウムと重炭酸ナ
トリウムを適当に加えてｐＨを９．５に調節して、２５
℃で約１８時間攪拌して反応させた。生成物を回収、洗
浄水がｐＨ７．０になるまで充分にイオン交換水で洗浄
して［セルロース］−［グルタルアルデヒド］（ＣＧ−
４）を得た。

【００６０】上記で得たＣＧ−４を１００部（容量）取
ってｐＨ９．５の炭素緩衝液２４００部（容量）に分散
させておき、これに抗ＬＤＬ抗体１０部を加えて２５℃
で６時間攪拌して反応させた。ここで用いた抗ＬＤＬ抗
体は、実施例１で用いたのと同じものである。生成物を
回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分にイオン交換
水で洗浄して含シッフ塩基［セルロース］−［グルタル
アルデヒド］−［抗ＬＤＬ抗体］（ｓ−ＣＧＩｇＹ−
４）を得た。

【００６１】上記ｓ−ＣＧＩｇＹ−４を１００部（容
量）取ってｐＨ９．０の炭酸緩衝液２４００部（容量）
に分散させておき、これに水素化ホウ素ナトリウム３０
部を加えて２５℃で４時間攪拌して反応させた。生成物
を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分にイオン交
換水で洗浄して［セルロース］−［グルタルアルデヒ
ド］−［抗ＬＤＬ抗体］（ＣＧＩｇＹ−４）を得た。

【００６２】上記で得たＣＧＩｇＹ−４のＬＤＬ吸着
能、アルブミン、総蛋白、血小板の残存率を実施例１と
同様の方法で評価した。結果は表１、表２に示した。

【００６３】（比較例２）実施例１で得たＣｅｎ−１を
１００部（容量）取ってｐＨ４．５のクエン酸緩衝液２
０００部（容量）に分散させておき、Ｎ−シクロヘキシ
ル−Ｎ′−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド・
メト−ｐ−トルエンスルホン酸塩０．２部、抗ＬＤＬ抗
体１０部を加えて、２５℃で約６時間攪拌して反応させ
た。ここで用いた抗ＬＤＬ抗体は、実施例１で用いたの
と同じものである。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０
になるまで充分にイオン交換水で洗浄して［セルロー
ス］−［抗ＬＤＬ抗体］（ＣＩｇＹ−５）を得た。

【００６４】上記で得たＣＩｇＹ−５のＬＤＬ吸着能、
アルブミン、総蛋白、血小板の残存率を実施例１と同様
の方法で評価した。結果は表１、表２に示した。 （比較例３）比較例１で得たＣＧ−４を１００部（容
量）取り、ｐＨ８．５の炭酸緩衝液２４００部（容量）
に分散させておき、これに市販ヒトハブトグロビン溶液
（２０Ｕ／ｍｌ：ミドリ十字社製）２００部（容量）を
加えて２５℃で６時間攪拌して反応させた。生成物を回
収、充分にイオン交換水で洗浄して含シッフ塩基［セル
ロース］−［グルタルアルデヒト］−［ハブトグロビ
ン］（ｓ−ＣＧＨｐ−６）を得た。

【００６５】上記ｓ−ＣＧＨｐ−６を１００部（容量）
取ってｐＨ８．０のモノエタノールアミン含有炭酸緩衝
液２００部（容量）を添加し、２５℃で３時間攪拌して
過剰のアルデヒド基をブロックした。反応混合物を濾過
して生成物を回収し、充分に水洗した後、ｐＨ８．５の
炭酸緩衝液２４００部（容量）に分散させておき、これ
に水素化ホウ素ナトリウム３０部を加えて２５℃で４時
間攪拌して反応させた。生成物を回収、これをｐＨ８．
３のリン酸緩衝液、０．５Ｍの食塩を含有する０．００
２Ｍ酢酸緩衝液で交互に洗浄、最後にｐＨ７．２のリン
酸緩衝液で洗浄し、［セルロース］−［グルタルアルデ
ヒド］−［ハブトグロビン］（ＣＧＨｐ−６）を得た。

【００６６】上記で得たＣＧＨｐ−６の性能を実施例２
と同様の方法で評価した。結果は表３に示した。

【００６７】（比較例４）実施例１で得たＣｅｎ−１を
１００部（容量）取り、ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に
２０００部（容量）に分散させておき、Ｎ−シクロヘキ
シル−Ｎ′−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド
−メト−ｐ−トルエンスルホン酸塩０．２部、市販ヒト
ハブトグロビン溶液（２０Ｕ／ｍｌ：ミドリ十字社製）
２００部（容量）を加えて２５℃で６時間攪拌して反応
させた。生成物を回収、充分にイオン交換水で洗浄して
含シッフ塩基［セルロース］−［ハブトグロビン］（Ｃ
Ｈｐ−７）を得た。

【００６８】上記で得たＣＨｐ−７の性能を実施例２と
同様の方法で評価した。結果は表３に示した。 （比較例５）比較例１で得たＣＧ−４を５０部（容量）
取り、ｐＨ８．５の炭酸緩衝液１２００部（容量）に分
散させておき、バチルス属由来のアミラーゼを６０００
単位（ＪＩＳ Ｋ−７００１による糖化力）を添加し、
１０℃で４時間攪拌して反応させた。ここで用いたアミ
ラーゼは実施例３で用いたのとおなじものである。生成
物を回収、充分にイオン交換水で洗浄して含シッフ塩基
［セルロース］−［グルタルアルデヒド］−［アミラー
ゼ］（ｓ−ＣＧＡｍ−８）を得た。

【００６９】上記ｓ−ＣＧＡｍ−８を５０部（容量）取
ってｐＨ８．０のモノエタノールアミン含有炭酸緩衝液
１００部（容量）を添加し、１０℃で１時間攪拌して過
剰のアルデヒド基をブロックした。反応混合物を濾過し
て生成物を回収し、充分に水洗した後、ｐＨ８．５の炭
酸緩衝液１２００部（容量）に分散させておき、これに
水素化ホウ素ナトリウム１５部を加えて１０℃で４時間
攪拌して反応させた。生成物を回収、イオン交換水で充
分に洗浄し、［セルロース］−［グルタルアルデヒド］
−［アミラーゼ］（ＣＧＡｍ−８）を得た。

【００７０】上記で得られたＣＧＡｍ−８の性能を、実
施例３と同様の方法で評価した。結果は表４、グラフ１
に示した。 （比較例６）実施例１で得たＣｅｎ−１を１００部（容
量）取り、ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液２０００部（容
量）に分散させておき、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ′−
（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メト−ｐ−
トルエンスルホン酸塩０．２部、バチルス属由来のアミ
ラーゼを６０００単位（ＪＩＳ Ｋ−７００１による糖
化力）を添加し、１０℃で４時間攪拌して反応させた。
ここで用いたアミラーゼは実施例３でもちいたのとおな
じものである。生成物を回収、充分にイオン交換水で洗
浄して［セルロース］−［アミラーゼ］（ＣＡｍ−９）
を得た。

【００７１】上記で得られたＣＡｍ−９の性能を、実施
例３と同様の方法で評価した。結果は表４、グラフ１に
示した。表１〜４、および図１から明らかなように、本
発明の生理活性物質固定化担体は生理活性物質の持つ活
性を充分に保持したまま簡便に固定化することが可能で
あることがわかった。これは親水性スペーサーによって
もたらされる効果が大きいと考えることができる。生理
活性物質固定化担体が主として水系溶媒中で使用される
ことに着目し、生理活性物質の溶媒中におけるモービリ
ティー向上を実現するために親水性スペーサーを導入し
たことが妥当であったと考えられる。特に血液処理の分
野に本発明の生理活性物質固定化担体を用いた場合、親
水性スペーサーの排除体積効果によってアルブミン、血
小板等の吸着が抑制され、良好な血液適合性が実現され
た。

【００７２】

【発明の効果】本発明の生理活性物質固定化担体は、両
末端にアルデヒドを有する親水性スペーサーを介して生
理活性物質を固定化しているため、水系溶媒中における
生理活性物質のモービリティーが増し、生理活性物質の
持つ活性が充分に発揮される。特に、本発明の生理活性
物質固定化担体を血液処理の分野に応用した場合、親水
性スペーサーの排除体積効果によって良好な血液適合性
をも実現サレル。また、本発明の生理活性物質固定化担
体は共有結合によって生理活性物質を固定化しているた
め、吸着法や包括法でしばしば見られる生理活性物質の
遊離もない。さらに、本発明ではカルボジイミドなどの
縮合剤を使用しないので、こういった縮合剤による生理
活性物質の変性を招くこともない。このようなことか
ら、本発明により簡便な操作で効果的に生理活性物質固
定化担体を得ることができ、化学反応触媒、分離精製用
特異的吸着材、臨床検査材料、医療用材料など広範な分
野への応用が可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例３と比較例５、６での経過時間と活性と
の関係を図示したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−158970（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−165859（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−236539（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−115725（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−71837（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61M 1/00 - 1/36

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 求核性を有する置換基を含有する水不溶
   性固体表面に、両末端にアルデヒドを有する親水性スペ
   ーサーを介して生理活性を有する物質を固定して成るこ
   とを特徴とする生理活性物質固定化担体。
2. 【請求項２】 両末端にアルデヒドを有する親水性スペ
   ーサーが下記化１の構造を有する化合物であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の生理活性物質固定
   化担体。 【化１】 化１において、 ｎ＝０〜１０の整数 ｍ＝５〜３００の整数 ｌ＝１ま
   たは２ Ｒ¹ 、Ｒ² は水素原子またはメチル基で、それぞれ同じ
   もしくは異なってもよい。