JPH03505287A - 生理学的流体を処理するための生物適合性、物質特異的試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生理学的流体を処理するための生物適合性、物質特異的試薬技術分野 本発明は、特異的結合性配位子および担体の支持体の表面上に固定化された生物 適合性因子からなる、生理学的流体から物質を除去するための生物適合性水不溶 性試薬の調製および使用に関する。

発明の背景 血液、血漿、または他の生理学的流体から有害物質の選択的除去は、重要治療学 的利益を提供することができる。例えば、低い密度のりボタンバク質（ＬＤＬ） 中で運ばれる、循環する脂質、とくにコレステロールの高いレベルは、アテロー ム性硬化症は、検査しないままにしておくと、重大な循環系の病気に導き、発作 および／または心筋梗塞を生ずることがある。血漿のＬＤＬレベルの減少は、危 険が高い患者におけるこのような事象の発生を有意に減少すると信じられる［Ａ 、　Ｍ、　　ゴツト（Ｇｏｔｔ）ら、循環（Ｃｉｃｕｒｅｔｉｏｎ）１，６９． １０６５Ａ−１０９０Ａ　（１９８４）］。ＬＤＬの選択的除去は、アテローム 性硬化症を減少するために有効な方法であろう。同様に、循環のリウマチ様因子 の除去により関節炎に、抗体の除去により免疫に関連する病気に、あるいは悪性 細胞の除去により癌に干渉する能力は、医学的科学において実行されている。現 在において、選択的吸着剤を含有する体外の装置に２〜４１の血液または血漿を 通過させることを包含する、選択的除去のプラズマフエレーシスは、魅力的治療 を表す。

このような処置の物理療法の臨床的使用は、必然的に、生理学的流体を異質表面 と接触させる。血液または血漿の場合において、生じうる続発症の１つは生命を 脅かすアナフィラキンーに導きうる補体のカスケードの活性化である。このよう な処置の物理療法を実施するとき、血液または血漿はクエン酸塩および／または ヘパリンの使用により抗蛙固性とされる。クエン酸塩は、しばしば、等しく凝固 をブロッキングするその能力について、補体のカスケードを妨害するその能力の ために使用される。抗凝固剤として使用するためのその投与量に非常に近い投与 量においてクエン酸塩は毒性であるので、補体を阻害するクエン酸塩についての 信頼性は危険であることがある。典型的には、クエン酸塩は、おだやかな毒性が 観察される投与量において使用される（舌の麻酔および刺痛）。

したがって、クエン酸塩の毒性は、カルシウムのキレート化のために、正常の神 経の状態を妨害する。したがって高度に選択性の吸着性物質を含有する体外の装 置の有用性は、前記物質の特異性および親和性に依存するばかりでなく、かつま た体の組織および生化学的系とのその生物適合性に依存する。

ストラフエル（Ｓｔｏｆｆｅｌ）およびデマント（Ｄｅｍａｎｔ）［プロシーデ ィンゲス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔ　］、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ　ｉ、　）　ＵＳＡ、　７８−１６１１−６１ ５　（１，９８１）］は、血漿から低い密度のりボタンバク質を除去するための 免疫吸着クロマトグラフィーの適用および有効性を記載している。セファ０−ズ （Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）ＣＬ−４Ｂへ共有結合により取り付けられたポリクロー ナル抗ブタＬ　Ｄ　Ｌ抗体を利用し、て、ブタを同静脈シャント中に直列に介在 するプラスミド分離器および免疫吸着剤を有する体外の装置で処置した。血漿の Ｌ　Ｄ　Ｌの濃度は、期間および流れの体積が処置において増加するにつれて、 漸進的に減少することが発見された。

コウレン（Ｋｏ　ｒ　ｅ　ｎ）ら［バイオヒミカ・エト・バイオフィジカ・アク タ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　　ｅｔ　　Ｂｉｏｐｈｙｓｃａ　　Ａｃｔａ）、− 亀ｌ美−１２０２−２０７（１９８６）］は、アガロース支持体に結合したマウ スモノクローナル抗ヒトＬＤＬ抗体を使用して、血漿からＬＤＬを除去すること を開示している。有機体にアフェレシス（ａｐｈｅｒｅｓｉｓ）は実施されなか った。

パーカー（Ｐａｒｋｅｒ）ら［プロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデ ミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ。

Ｓｃ　ｉ、）ＵＳＡ、８３．７７７−７８１　（１９８６）］は、セファローズ （Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）に取り付けられたヒツジポリクローナル抗ＬＤＬ抗体を 利用するＬＤＬ−フエレーシスにより患者を処置した。ＬＤＬレベルの有意の減 少は治療により達成された。

欧州特許出願筒８３１１１２０４２．３号、１９８４年６月６日公開、は、免疫 化ヘパリンまたは硫酸デキストランを使用して血漿からＬＤＬを除去することを 開示している。利用された吸着剤は、結合性配位子が取り付けられた水不溶性多 孔質硬質ゲルからなっていた。エピクロロヒドリンまたはポリオキシラン化合物 との反応によりポリマーのゲル中に導入されたエポキシ基との反応を通して、あ るいは無機ゲルの場合において、エポキシシラン結合剤との反応により導入され たエポキシ基との反応を通して、配位子は取り付けられた。したがって、表面の ヒドロキシル基をもつゲルは好ましかった。選択的結合性配位子の数は開示され ているが、ヘパリンまたは硫酸デキストラン（吸着剤は多数の血漿タンパク質を 除去する’）ＬＤＬ除去系として例示された。

日本国特許出願ＪＰ６００８７８５４号は、血液または血漿から悪性物質または 細胞を除去するための、血液精製吸着剤を開示している。吸着剤は、負に帯電し たおよび有機配位子が取り付けられた、担体、例えば、ガラス、木炭、セルロー ストリアセテート、および種々のポリマーからなる。しかしながら、取り付けは 強い親電気性試薬の使用を必要とし、これらの試薬は複合体の生物学的結合性配 位子を組み込む、同時のまたは引き続く反応において利用することができない。

欧州特許出願ＥＰ−１０３１８４Ａ号は、固定化された生物学的因子を実施する 生物特異的ポリマーを開示している。生物適合性ポリマーの支持体は、一般に、 生物適合性因子が共有結合されている、ヒドロゲルまたは他の湿潤性ポリマーで ある。一般に、生体内の悪い反応に対する保護を提供するであろう、生物適合性 因子は開示されていない。

日本国特許出願Ｊ６０２２３９４２５号は、取り付けられたモノクローナルアポ リタンバク質Ｂ抗体をもつ固体担体を使用して、ヒト血漿からＬＤＬ除去するこ とを開示している。生物適合性因子を利用して、生体内の組織または系との悪い 反応に対する保護を促進した。

日本国特許出願ＪＰ５９２００６５５号は、負に帯電した基を含有する取り付け られた有機化合物をもつ、好ましくは親水性の、不溶性担体から成る吸着剤の使 用を開示している。結合性配位子の固定化は、負に帯電した基を通してなされる 。悪性細胞を除去するための吸着剤の適用が開示されている。

この時において、生理学的流体から悪性物質を除去するために特異的結合性配位 子および生物適合性因子を組み込んだ、吸着試薬が明らかに必要とされている。

このような試薬は、補体系または血液の凝固の活性化に対して高い選択性および 保護の両者を示すべきである。試薬の増強した生物適合性は、投与した抗凝固剤 の量を減少することができるであろう。複合体の生物学的配位子の活性は、固定 化技術に対する高度に感受性である。変性を回避するために十分に温和であり、 しがち結合性配位子および生物適合性因子の同時のまたは順次の固定化を可能と するために十分に柔軟性である、このような試薬を調製する方法は、また、要求 される。

発明の要約 広範な種類の担体の支持体への特異的結合性配位子および生物適合性因子の両者 を固定化する方法は、開示する。生成された新規な試薬は、物質を生理学的流体 から除去すると同時に悪い反応、例えば、補体の活性化を最小とする。詳しくは 、本発明の１つの面は、生理学的流体からある物質を除去するための水不溶性試 薬であり、前記試薬は（ａ）担体の支持体、および前記担体の支持体の表面上に 固定化されている、（ｂ）前記物質に対して特異的な結合性配位子、および（Ｃ ）スペーサーアームにより分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ有 機分子からなる生物適合性因子からなり、前記生物適合性因子は前記親核部分と の反応により前記表面上に固定化されている。本発明の第２の面は、生理学的流 体からある物質を除去するためのこのような水不溶性試薬を調製する方法であり 、この方法は、担体の支持体を前記物質に対して特異的な結合性配位子およびス ペーサーアームにより分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ有機分 子からなる生物適合性因子の水溶液と接触させそして反応させる工程からなる。

この方法は、担体の支持体を結合性配位子および生物適合性因子の水溶液と同時 にまたは順次に接触および反応させることからなることができる。本発明のなお 他の面は、生理学的流体を処理して、前記流体を前述したように水不溶性試薬と 接触させることからなる物質を除去する方法を包含する。最後に、本発明は、特 定の物質を除去するための体外の生理学的流体の処理のための装置であり、この 装置は、哺乳動物から全血を抜き出す手段、前記全血から血漿を分離する手段、 前述の水不溶性試薬を含有するチャンバーを含む前記血漿を処理する手段、前記 水不溶性試薬は前記物質と相互作用しそして前記物質を前記血漿から除去し、そ して前記物質を実質的に除去した血漿を前記全血の残部と再結合しそして再結合 した全血を前記哺乳動物に戻す手段からなる。

血漿からＬＤＬを除去する場合において、好ましい試薬および方法は、活性化し た中性のポリマーの担体の支持体、ポリクローナル抗ＬＤＬ抗体、および生物適 合性因子を利用し、固定化は非親核緩衝液によりコントロールされた約４〜約１ ０のｐＨにおいて２工程において実施する。

最も好ましくは、リン酸カリウム緩衝液中で約ｐＨ８において１工程の同時の反 応においてトレシル−セファロース（Ｔｒｅｓｙｌ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ）上に モノクローナル抗ＬＤＬ抗体およびスルファミン酸の固定化からなる試薬は、調 製の便利さおよび／または作業の効率のおか第１図は、ヒトの血漿を生体外で利 用する２つの実験のための処理の前および後のＬＤＬおよびＨＤＬの血漿濃度を 表す棒グラフである。

本発明は、感受性の生物学的配位子の活性を保存する温和な条件下に、支持体の 担体上への特定の結合性配位子および生物適合性因子の固定化を通して、生理学 的流体から特定の物質を除去するための新規な生物適合性因子する合成する融通 性のある方法を提供する。この開示に関して、ある数の用語を利用するであろう 。ここで使用するとき、「担体の支持体」は固体のマトリックスであり、これは 担体の支持体上に固定化すべき結合性配位子または生物適合性因子の結合による 親核の攻撃および１換に感受性である反応性表面部分を、よく知られているカッ プリング化学により導入して「活性化」されている。「結合性配位子」は、他の 物質を除外して、生理学的流体から除去すべき物質に対して親和性を有する、物 質または物質の群を呼ぶ。結合性配位子は、全抗血清または腹水の形態のポリク ローナル抗体またはモノクローナル抗体、このような物質の活性断片としてＩｇ Ｇ分画から成ることができる。他の特異的結合性タンパク質、例えば、レクチン 、抗原、またはプロティンＡを利用することができる。ここで使用するとき、「 生物適合性因子」は、担体の支持体を補体活性化に対してより生物適合性とする 物質を呼ぶ。用語「親核部分」は、化学基、例えば、ＮＨ２、ＳＨまたはＯＨを 呼び、これらは不対電子対を有し、そして一般に原子核が外の電子によるシール ドが劣っている部位において他の分子を攻撃する。ここて使用するとき、用語「 負に帯電した部分」は、化学基、例えば、ｏｓｏ３−１Ｒ８Ｏ３−１Ｒ８Ｏ２− １ＣＯＯ−を呼び、これらは正味の負の外形上の電荷を有する。

親核部分および負に帯電した部分は、２つの機能的部分を分離する「スペーサー アーム」を構成する同一の分子実在物内に含有される。

ここで使用するとき、用語「中性のポリマー」は、反復するサブユニットから成 り、そして種々の可能な形状、例えば、平らなシート、繊維、ビーズ、多孔質ビ ーズ、膜、フオームなどに形成することができる、天然または合成の水不溶性物 質を呼ぶ。「非親核緩衝液」は、親核部分、例えば、Ｒ−ＯＨ，ＲＳＨ，Ｒ，Ｎ Ｈ２、Ｒ２ＮＨなどを含有しない、水緩衝化物質を呼ぶ。「ポリクローナル抗体 」は、ある物質に対して向けられた抗体の集合が多数の異なる抗体産生細胞から 生ずる、ある物質に対して向けられた抗体の集合を呼ぶ。「モノクローナル抗体 」は、単一の抗体産生細胞系から来る抗体を呼ぶ。

担体の支持体 本発明の水不溶性試薬は、感受性生物学的配位子および生物適合性因子を同時に 反応させることができるような温和なカップリング化学を利用して、活性化され た固体の支持マトリックス（担体の支持体）上に結合性配位子および生物適合性 因子を固定化することを包含する。固定化のプロセスは、結合性配位子（Ｌ）お よび生物適合性因子（ＢＡ）の順次または同時の反応の可能性を示す反応式１で 、概略的に表示される。

えＡＣＴ 種々の固体支持マトリックスの活性化は、結合性配位子および生物適合性因子の 分子内の化学基による親核攻撃に対して感受性の化学部分（ＡＣＴ）を導入する ために適当な化学を使用して達成される。

種々の物質は、本発明のための固体支持マトリックスとして適当である。これら の物質は、一般に、次の特性を有する＝　（１）孔が存在するか、あるいは微細 な状態で入手可能であるために、標的物質を効果的に捕捉および除去するために 十分な表面積、（２）体外の処置装置に構成するとき、物質の上をまたはそれを 通して生理学的流体を流すことができること、（３）結合性配位子および生物適 合性因子との引き続く反応のために活性化することができる、表面の化学基、お よび（４）生物学的環境に対する安定性。これらの基準を満足する物質は、合成 ポリマー、天然ポリマー、シリカ、アルミナおよびジルコニアを包含する。固体 支持マトリックスの物理学的形状寸法は、粒子、ビーズ、繊維、中空繊維、薄い シート、フオームまたは物質の上にまたはそれを通して流体を流すことができる 他のもののようなものであることができる。表１は、本発明の実施において利用 することができる、種々の商業的に入手可能な担体の支持体を列挙する。この列 挙は代表的なものである。なぜなら、上の４つの基準を満足する他の物質および 活性化化学物質はこの分野において知られているからである。

アフィゲル（Ａ　ｆ　ｆ　ｊｇｅ　り　１’０　（ＮＨ８活性化アガロース、Ｂ ｉ。

Ｒａｄ　　Ｃｏ、、カリフォルニア州すッチモンド）、アフィゲル１５（ＮＨ８ 活性化アガロース、ＢｉｏＲａｄ　　Ｃｏ、、カリフォルニア州すッチモンド） 、 トレシル−セファ０−ス（Ｔｒｅｓｙｌ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ）０レシル活性化 アガロース、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、　スウェーデン国つ プサラ）、 ＣＮＢｒ−セファ０−ス（ＣＮＢｒ活性化アガロース、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　　 Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、スウェーデン国つプサラ）、レアクチ−ゲル（Ｒｅａｃｔ ｊ−Ｇｅｌ）（ＣＤＩ活性化アガロース／デキストラン、Ｐｉｅｒｃｅ　　Ｃｈ ｅｍｉｃａｌ）。

エウベルギット（Ｅｕｐｅｒｇｉ　ｔ）Ｃ（アリルグリシジルエーテルを含有す るターポリマー、Ｒｏｈｎ　　Ｐｈａｒｍａ、　　ドイツ国ダーマシュタット） 、 エポキシ活性化セファロース、 エポキシ活性化シリカ、 カルボキシセファロース、 チオール（活性化）セファロース、 トリチル−アガロース、 オキシランアクリルビーズ、 ｐ−ニトロフェノールアガロース、 トシル−アガロース、 バーイオデート処理アガロース、 活性化ＣＭ−セルロース、 活性化セルロース、 ポリ−グリシジルメタクリレート、 ＰＥｌ−グルタルアルデヒド活性化ナイロン、ＰＥＩグルタルアルデヒド活性化 シリカ、グルタルアルデヒド活性化アガロース、イソシアネート活性化アガロー ス、 マレイミド活性化アガロース、 クロロメチルポリスチレン。

親核的攻撃に対して感受性の表面の基をもつ適当な担体の支持体を産生ずるため の、支持マトリックスの材料の活性化は、よ（知られている化学的技術および方 法の試薬を使用して実施する。参照、スコウテン（Ｓｃｏｕ　ｔ　ｅｎ）　、Ｗ 、　Ｈ，親和性クロマトグラフィｍ：不活性マトリックス上の生物選択性吸着（ Ａｆｆｉｎｉｔｙ　　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｂｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖ ｅ　　Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　　ｏｎ　　１ｎｅｒｔ　　Ｍａｔｒｉｃｅｓ）、 Ｗｉｌｅｙ　　＆　　５ｏｎｓｓニユーヨーク（１９８１）、これを開示をここ に引用によって加える。合成および自然のポリマーの場合において、活性化試薬 は、ハロゲン化シアン、エビクロロヒドリン、ポリオキシラン、パーイオデート 、ポリエチレンイミン、またはグルタルアルデヒドを包含することができる。血 漿からのＬＤＬの除去のために最も好ましい試薬の場合において、表面のヒドロ キシル基をもつセファ０−ズ（Ｓｅｐｈａ　ｒｏｓｅ＠）４Ｂ　（Ｐｈａｒｍａ ｃｉａ　　Ｆｉｎｅ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、スウェーデン国つップサラ；ビー ズ状アガロースゲル）を塩化トレシル（２，２，２−トリフルオロエタンスルホ ニルクロライド）と反応させて、反応式２に概略的に示す、表面スルホネートエ ステル（トレシル活性化セファローズ（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ＠）４Ｂ　（Ｐｈａ ｒｍａｃｉａ　　Ｆｉｎｅ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））を生成する。

反応式２ ％式％ アガロース　塩化トレシル　「トレシル活性化」アガロースこのようなスルホネ ートエステルは、アミン、チオール、ヒドロキシルおよびイミダゾール基により 親核置換を行って、種々の結合性配位子を固定化する安定な化学的結合を生成す ることが報告された［ニルシラン（Ｎｉｌｓｓｏｎ）、Ｋ、およびモスバッチ（ Ｍｏｓｂａｃｈ）　、Ｋ。

バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケション（Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、）、ス０２．４４９−４５ ７　（１９８１）およびメソッズ・イン・エンジモロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ　　 ｉｎ　　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、１旦Ａ、（１９８４）］。

シリカ、アルミナまたはジルコニアを包含する無機支持マトリックス材料の場合 において、活性化はエポキシシラン、例えば、ガンマ−グリシ下キシピルトリメ トキシシラン、アミノシラン、例えば、ガンマ−アミノプロピルトリエトキシシ ラン、またはポリエチレンイミン−グルタルアルデヒドとの反応により達成する ことができる。

結合性配位子 広範な種類の結合性配位子を、本発明において、生理学的流体から除去すべき特 異的物質に依存して利用することができる。大きい活性を有する結合性配位子は 、処理する生理学的流体の組成への少なくとも全体の衝撃をもつ物質の選択性除 去を可能とする。結合性配位子、除去すべき接合体物質、および処置すべき病気 ／疾患の代表的な列挙を表Ｉｆ中に示す。

異種抗原　　　　　　　　　　対応する抗体　　　　治療、診断に基づ（抗体を の脂質疾患、すなわち、） 血症、異色拒否、有害な抗 またはＩｇ結合性ペプチド断片　免疫グロブリン　　　自己免疫病、高グロブリ ン　Ｌ−２ 本発明の結合性配位子は、例示を意味する表ＩＩに記載するものに限定されない 。これらの結合性配位子は、単独でか、あるいは適当ならば混合物で使用できる 。

血漿からＬＤＬを除去する場合、高度に特異的なモノクローナル抗体は結合性配 位子として最も好ましい。抗ＬＤＬ抗体は、標準のモノクローナル抗体を使用し て調製した［ベルノン（ｖｅｒｎｏｎ）　、Ｔ、オイ（Ｏｌ）およびレオナード （Ｌｅｏｎａｒｄ）　、Ａ、　ハーゼンバーブ（Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ）、細胞 免疫学における選択した方法（Ｓｅｌｅｃｔｅｃｉ　　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ 　　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　　Ｉｍｍｎｏｌｏｇｙ）　、Ｂ、　Ｍｉ　ｓｈｅ　１　 ］およびＳ、Ｓｈｉｉｇｉ編、１９８０、ｐｐ。

３５１−３７２１゜Ｂａ１ｂ／ＣＪマウスを、完全フロインドアジュバントを使 用しておよび使用しないで、精製したヒトＬＤＬで免疫化した。

マウスを規則的間隔で促進し、そして免疫化後数週の間の種々の時点で採血した 。血清の試料をＥＬＩ　ＳＡにおいて試験して、非免疫化Ｂａ１ｂ／ＣＪに対し て免疫化したマウス中に存在する抗ＬＤＬ抗体の量を決定した。

最初の免疫死後数カ月で、マウスを抗原で促進し、そして最初の融合を実施した 。ブライミングしたマウスからの牌臓細胞の懸濁液を５Ｐ２１０骨髄腫細胞と融 合し、照射したフィーダー牌臓細胞懸濁液と混合し、そして平板培養した。クロ ーンを種々の間隔で供給し、そして増殖について観察した。

クローンを選択し、そしてアッセイして産生されるＩｇＧの量を決定し、そして 各クローンはアイソタイプであった。クローンを規則的に試験してＩｇＧの産生 を監視した。後の日に、選択したクローンからの細胞をＬＤＬのＥＬＩＳＡにお いて試験して、各選択したクローンの比活性を決定した。最も産生的クローンを 選択し、そして液体窒素中で凍結した。いくつかのよりよいクローンをサブクロ ーニングし、そして、アッセイしてモノクローナル抗ＬＤＬが産生されているこ とを確保し、そしてＩｇＧの産生およびＬＤＬの特異性を試みかつ増加した。特 異的抗しＤＬモノクローナル抗体を産生ずるクローンのすべてを、本発明におけ る使用のために最良のクローンを選択するであろう他の因子、例えば、安定性、 抗体の産生、親和性などについてさらにアッセイした。

生物適合性因子 担体の支持体との反応のための親核部分、およびスペーサーアームにより分離さ れた負に帯電した部分の両者を組み込んだ２官能性化学的実在物は、本発明の生 物適合性因子として考えられる。負に帯電した部分は表面に拘束されており、担 体の支持体と親核部分との反応後、生物適合性因子を固定化する。

親核部分および負に帯電した部分の多数の組み合わせは、本発明によす包含サレ ル。例文ば、ＲＮＨ２、ＲＳＨＸＲＯＨ，まｆ：はＲ，ＮＨを包含する親核部分 を利用することができる。０３Ｏ３−１Ｒ８Ｏｓ−１Ｒ８Ｏ２＼ＣＯＯ−を包含 する負に帯電した部分は適当である。生物適合性因子の好ましいリストを表ＩＩ Ｉに示す。

点上上± アミノ　　　　　　　サルフェート　　　　　スルファミン酸タウリン スルファニル酸 アミノ　　　　　　　カルボキシレート　　すべてのアミノ酸、例えば、グリシ ン、　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　アスパラギン酸、システィン ヒドロキシ　　　　　サルフェート　　　　イセチオン酸、ヒドロキシベンゼン ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ルホン酸、硫酸グルコース ヒドロキシ　　　　　カルボキシレート　　乳酸、ウロン酸、例えば、グリクロ ン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　酸、グルコン酸、例えば、グルコ ン酸チオール　　　　　　　サルフェート　　　　２−メルカプトエタンスルホ ン酸 チオール　　　　　　カルボキシレート　　メルカプト酢酸、チオサリチル酸、 チ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　オール乳酸表ＩＩＩから明らかなよ うに、ある数の分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ２官能性分子 は生物適合性因子として機能することができる。理解されるように、このような 部分を組み込んだ分子構造体は部分を分離するたえのスペーサーアームとして働 き、そして独立の機能、すなわち、担体の支持体との反応および悪い生物学的相 互作用に対する保護を可能とする。それ自体、スペーサーアームは臨界的でなく 、そして当業者は機能的部分を組み込むためのスペーサーアームとして種々の分 子構造体を選択することができる。

水不溶性試薬 結合性配位子および生物適合性因子は、担体の支持体への結合性配位子または生 物適合性因子および活性化された部分の親核を包含する親核置換反応により、担 体の支持体の表面上に固定化される。タンパク質結合性配位子、例えば、抗体の 場合において、抗体内の多数のアミノ基は便利な反応のための親核物質として働 く。本発明の方法は、反応式Ｉにより概略的に表される。

配位子を含有する反応溶液に担体の支持体を添加するか、あるいはその逆の順序 で添加することによって調製される。担体の支持体、例えば、表１に列挙するも のを乾燥した物質として添加するか、あるいは適当な緩衝液により湿潤すること ができる。反応溶液は、結合性配位子を約１０ｍｇ／ｍＩ！〜約１００ｍｇ／ｍ Ａ’の濃度で含有し、そして生物適合性因子を約０．０１モル〜約５モルの濃度 で含有する。反応溶液は、また、非親核緩衝液、例えば、ホスフェートで約０． ０１モモル的２モルの緩新液濃度で緩衝化することができる。反応溶液のｐＨの 範囲は約４〜約１０で変化することができる。反応溶液と担体の支持体との組み 合わせ後、反応混合物を３０分以上、必要に応じて数日間まで、混合物を凍結し ないか、あるいは担体の支持体を変形しない温度、典型的には４Ｃまたは４５Ｃ において撹拌する。カップリング後、反応溶液を水溶性試薬から分離し、そして すすいで未反応の生物適合性因子および結合性配位子を除去する。生ずる誘導化 された担体の支持体は水不溶性試薬からなる。

担体の支持体上への結合性配位子および生物適合性因子の段階的取り付け；この 方法において、水不溶性試薬は、まず担体の支持体を結合性配位子と反応させ、 次いで第２工程において生物適合性因子を反応溶液を添加することによって調製 する。これは、結合性配位子および生物適合性因子が同一溶液中で相溶性でない 場合、あるいは結合性配位子および生物適合性因子の固定化の反応条件が十分に 異なるる場合、好ましい方法である。段階的反応における反応のパラメーターに ついての範囲は、前述の同時の反応についてと同一である。

性試薬の逆相ニドレジルーセファロース（担体の支持体＋３５ｇ）をアセトンで 洗浄し、そして無菌の焼結ガラスの漏斗を通して濾過することによって滅菌した 。次いで、アセトンで洗浄したビーズを無菌のローラーびんに移した（移送を促 進するために、ビーズをアセトンでわずかに湿潤することが推奨される）。ロー ラーびんに、モノクローナル抗体ＣＬＬＩ　（３，０ｍｇ／ｍＡ）　、スルファ ミン酸（０，２５モル）およびリン酸カリウム（０，２５モル）を含有する反応 溶液、ｐＨ８，０、の１０５ｍｆを添加した。スラリーを周囲温度において一夜 （１６時間）おだやかに撹拌した。−夜撹拌した後、スラリーを焼結ガラスの漏 斗を使用して濾過し、そして−緒にした収着剤を１１のクエン酸（ｐＨ３゜０） で、次いで１１の緩衝化生理的塩類溶液（ｐＨ７，１）で洗浄した。

濾液を再処理および再使用のために集めた。無菌の抗ＬＤＬ収着剤を無菌の容器 に移し、ここでメルチオレートをそれ以上の使用のために無菌の防腐剤として添 加した（最終濃度０，１％）。

ミン酸（生物適合性因子）の段階的取り付けを使用する抗ＬＤＬ水不溶性試薬の 調製ニドレジルーセファロース（担体の支持体：０．５ｇ）をアセトンで洗浄し 、そして無菌の焼結ガラスの漏斗を通して濾過することによって滅菌した。次い で、アセトンで洗浄したビーズを無菌のローラーびんに移した（移送を促進する ために、ビーズをアセトンでわずかに湿潤することが推奨される）。遠心管に、 モノクローナル抗体ＣＬＬ１　（３，０ｍｇ／ｍｊり　、および重炭酸ナトリウ ム（０，１０モル）を含有する反応溶液、ｐＨ８，０、の５ｍｌを添加した。こ のスラリー周囲温度において４時間撹拌した。抗体溶液を担体の支持体から１０ ００×ｇにおいて１０分間遠心し、そして未反応抗体をデカンテーションするこ とによって分離した。次いで、炭酸ナトリウム緩衝液（０，２０モル）　、ｐＨ ９，０、中のスルファミン酸（０，２０モル）を添加し、そしてこの混合物を周 囲温度において一夜（１６時間）おだやかに撹拌した。−夜撹拌した後、スラリ ーを焼結ガラスの漏斗を使用して濾過し、そして−緒にした収着剤を１１のクエ ン酸（ｐＨ３，０）で、次いで１１の緩衝化生理的塩類溶液（ｐＨ７，１）で洗 浄した。デカンテーション上澄み液および濾液を再処理および再使用のために集 めた。無菌の抗−ＬＤＬ収着剤を無菌の容器に移し、ここでメルチオレートをそ れ以上の使用のために無菌の防腐剤として添加した（最終濃度０．１％）。

実用性 前述の水不溶性試薬を使用して、結合性配位子により結合された生理学的流体か ら物質を選択的に除去した。水不溶性試薬を容器のハウジング中に拘束し、ここ でこのハウジング水不溶性試薬を通して生理学的流体を流すことを許す。生理学 的流体が血液または血漿である場合、水不溶性試薬を使用して血液または血漿か ら、病気または病気のプロセスに関連する物質を除去する。これは、病気に関連 する物質の除去が有益であることが知られているか、あるいは疑われる、ある数 の病気の場合であろう。これらは自己免疫病気、代謝疾患などを包含する。この 治療を受けるすることができる病気、除去すべき物質、およびこれを達成できる 可能な配位子のより完全なリストは表ＩＩに示されている。表１に列挙する水不 溶性試薬、表ＩＩに列挙する１または２以上の結合性配位子、および表ＩＩＩに 列挙する１または２以上の生物適合性因子。

治療の目的の本発明の使用を例示するために、前述の試薬の体積または量は血液 または血漿の流れを許すハウジング内に含有されるであろう。

患者からの凝固した血液または血漿を、水不溶性試薬を含有するハウジンを通し てボンピングし、次いで患者に戻す。このようにして処理した血液または血漿は 、水不溶性試薬中の配位子の結合により結合した所望の物質の除去を除外して、 こうして影響を受けないであろう。この系の性能または実用性を評価する２つの パラメーターが存在する＝１）結合性配位子の有効性、および２）生物適合性因 子の有効性。

結合性配位子の有効性は、水不溶性試薬の上を通過させる前後の生理学的流体中 の物質の量を測定することによって決定することができる。

除去したこの物質の量は、試薬の性能の測度である。除去した物質の量を決定す るアッセイ系は、もちろん、物質に依存する。これを達成する方法をさらに例示 するために、ＬＤＬの場合において、抗凝固処理した血漿を抗ＬＤＬ水不溶性試 薬の上に還流する。血漿の試料を、組み合わせた収着剤の上の還流の前後に、集 めそしてアッセイする。次いで、血漿の試料を合計のコレステロールおよびＨＤ Ｌについてアッセイした。

ＬＤＬのレベルは、血漿の合計のコレステロールのレベルがＨＤＬおよびＬＤＬ の合計であると仮定されるので、ＨＤＬおよび合計のコレステロール値から容易 に計算される。

合計のコレステロールの決定は、標準の臨床的実験室の手順により実施される。

この手順は、コレステロールエステルの化学的鹸化に従うコレステロールオキシ ダーゼを使用する、定量的酵素反応である。コレステロールオキシダーゼの副生 物（ＨｚＯｚ）を、ペルオキシダーゼおよび測色基質とカップリングする。この 反応は着色した最終生成物に導き、この生成物は分光光度計を使用して測定でき る［スティン（Ｓ　ｔ　ｅ　ｉ　ｎ）Ｅ、　Ａ、　、臨床的化学のテキストブッ ク（Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　　ｏｆ　　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ） 、Ｔｉｅｔｚ、Ｎ、Ｗ、ｉｉ、ＷＢ　　５ａｕｎｄｅｒｓ、フィラデルフィア、 １９８６、ｐｐ、８７９−８８６．１８１８、および１８２９コ。

ＨＤＬの決定は、沈澱試薬を使用して、まずＬ　Ｄ　Ｌを沈澱させ、そして上の 合計のコレステロール手順により上澄み液をアッセイすることによって実施する 。

生物適合性因子の有効性は、−緒にした収着剤への暴露の結果、血漿中の補体の 量を測定することによって決定することができる。未処理のポリマーの担体に比 較した補体の活性化の減衰は、生物適合性因子の性能の実証である。異質基質に よる補体のカスケードの活性化は、別の通路の活性化を経て起こる。活性化の量 を決定するために定量される補体カスケードの成分はＣ３＋およびＣ５，である 。Ｃ３１（またはＣ５，）は、既知のＲＩＡ技術により決定される［参照、チェ ノウェス（Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ）、Ｄ、Ｅ、およびフグリ（Ｈｕｇｌ　ｉ）Ｔ、 Ｅ、　、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、Ｂｊｏｌ、Ｃ ｈｅｍ、）、２５０．８２９３　（１９７５）　、この開示をここに引用によっ て加える〕ここでヒトＣｓ、（またはＣ５−）に対して特異的な抗体を、水不溶 性試薬に暴露した、ヘパリン凝固した血漿の試料と反応させる。他の抗凝固剤、 例えば、クエン酸塩の使用は、有意に補体の活性を変更することができる。特異 的抗体が０３．（またはＣｓ　−）に結合する程度は、ラジオアイソトープのプ ローブにより決定される。次いで、血漿試料中の０３．（またはＣ５−）の量は 、放射能の測定した量から計算することができる。ＣＩおよびＣ６，の量を合計 して、試験した物質の合計の生体外補体の活性化の代表的な値を得る。

水不溶性試薬は、固体支持物質の物理学的形態または適用に依存して、種々の形 状のハウジング内に含有させることができる。使用する装置の形状はこの開示に 対して臨界的ではなく、水不溶性試薬を保持しそして生理学的流体の流れを許す 任意の装置を使用することができる。

上の技術を利用して、血漿からＬＤＬを除去する水不溶性試薬の有効性は、血漿 試料を水不溶性試薬の上に還流する前後のＬＤＬのレベルを測定することによっ て、実証することができる。トレシル−セファロース上に固定化された抗ＬＤＬ モノクローナル抗体ＣＬＬＩ（結合性配位子）およびスルファミン酸（生物適合 性因子）からなる、実施例１の水不溶性試薬を利用して、免疫収着剤へのＬＤＬ の結合および血漿からのＬＤＬの除去は、第１図に示す２つの実験により例示さ れる。免疫収着剤による血漿処理の前後における、ＬＤＬコレステロール（充実 の棒）およびＨＤＬコレステロール（ハツチングを施した棒：合計のコレステロ ールはＨＤＬおよびＬＤＬの合計である）について値が表されている。

高いコレステロール（＞３００ｍｇ／ｄＩりまたは低いコレステロール（１５５ ｍｇ／ｃＨ’）の血漿のいずれを使用しても、免疫収着剤は血漿からＬＤＬを効 果的に除去する。また、ＨＤＬのレベルはＬＤＬ免疫収着剤を使用する処理によ り影響を受けず、水不溶性試薬の特異性に対する照明であることに注意すべきで ある。

未処理のポリマーの担体に比較した、血漿中の補体の活性化を減衰する生物適合 性因子の有効性を、表ＩＶに示す。

表ＩＶ 未処理セファローズ　　　　　　　　　８２　　　１９　　　１０１加水分解し たトレシル−セファロース　　５６　　　１５　　　　７１トリス−セファロー ズ　　　　　　　　　６０　　　３　　　　６３スルファニリン−セファローズ 　　　　　４４　　　４　　　　４ｇスルファミン−セファローズ　　　　　　 ４３　　　４　　　　４７前述したように、合計の補体の活性化はＣ３ｍおよび ０５ｍの合計であり、そして試験血漿中のμｇ／ｍｌ！として表す。表１１１か らの生物適合性因子の使用におけるスルファニリン酸およびスルファミン酸の処 理の結果およびその物質の補体活性化の有意の減少が見られる。トリス（トリス （ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｓｉｇｍａ　　ＣｈｅｍｉｃａｌＣａｍｐ ａｎｙ）または加水分解したトレシル−セファロースを使用する処理は、負に帯 電した部分を物質上に組み込まず、そして生物適合性因子の使用から得られた保 護を与えない。

結合性配位子および生物適合性因子を使用して調製した組み合わせの収着剤は、 水不溶性試薬に結合性質および生物適合性の両者を付与する。

詳しくは、抗ＬＤＬ抗体ＣＬＬＩおよびスルファミン酸を使用して調製した水不 溶性試薬（実施例１）は、組み合わせた効果を実証する：補体を減衰生物適合性 因子の能力、およびＬＤＬを結合しかつそれを除去する結合性配位子の能力。結 果を表■に示し、これは水不溶性試薬の結合したＬＤＬの量（ｍｇ／ｍｆ）なら びに関連する補体の活性化を記載する。

未処理セファ０−ズ　　　　　　　　　　０１４３セファローズ−ＣＬＬＩ−） リス　　　　　　　４．０　　　　　　　７２セファローズ−ＣＬＬＩ−スルフ ァミン酸　　　４．０　　　　　　　５３ブランク　　　　　　　　　　　　　 　　Ｎハ　　　　　　　５抗ＬＤＬ試薬（１，５ｍ１）を、底にフリットディス クを含有する１゜ＱｘｌＱｃｍのカラム中に詰めて水不溶性試薬物質を充填する 。充填した試薬をいくつかの床の体積のリン酸塩緩衝液、ｐＨ７，５、で洗浄し てメルチオレートを除去する。次いで、クエン酸処理した血漿をカラムを通して １時間再循環する。再循環前後の血漿の試料をアッセイして、ＬＤＬまたは他の 構成成分を血漿からの除去量を決定した。血漿からのＬＤＬの除去を第１図に例 示する。血漿中のりボタンバク質のレベル（ＨＤＬおよびＬＤＬ）の定量は、そ れぞれのりボタンバク質のコレステロール含量を測定することによって達成され る。抗ＬＤＬ水不溶性試薬による血漿処理の前後における、ＬＤＬコレステロー ル（充実の棒）およびＨＤＬコレステロール（ハツチングを施した棒：合計のコ レステロールはＨＤＬおよびＬＤＬの合計である）の値が表されている。第１図 に示す研究において、高いコレステロール（＞３００ｍｇ／ｄＩり＊たは低いコ レステロール（１５５ｍｇ／ｄｔりの血漿のいずれを使用しても、試薬は血漿か らＬＤＬを効果的に除去することに注意すべきである。表Ｖｌは、循環前後の水 溶性試薬の上を再循環する血漿の他の血漿成分への作用を示す。他の血漿成分の レベルの有意の変化は存在しない。

表ＶＩ 血漿成分中の変化についての試験の要約実験１　　　　　実験２ 試験　　　　　　　　　　　単位　　　　前後　　　　　前後。

ＬＤＨｕ／１　　１５０．０　１３７．０　　１２０．０　１０８．０ＳＧＯＴ 　　　　　　　　　　　　ｕ／１　　　２０．０　２８．０　　２６．０　３５ ．０ＳＧＰＴ　　　　　　　　　　　　ｕ／１　　　１４．０　１３．０　　３ ０．０　１６．０ビリルビンｍｇ／ｄｉ　　　Ｏ，６０，３０，４０，２合計の タンパク質　　　　　ｇｍ／ｄｌ　　　６．０　　５．９　　　６．１　　５． ５アルブミン　　　　　　　　ｇ＋Ｉｌ／ｄｌ　　　３．９　　３．７　　　３ ．９　　３．６グロブリン　　　　　　　ｇｍ／ｄｉ　　　２．１　　２．２　 　２．２　　１．９ナトリウム　　　　　　　　ｍｅｑ／１　１５５．０　１５ ８．０　　１５３．０　１４４．０す：／　　　　　　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ 　　　２．７　　４．６　　　２．１　　３．１尿酸　　　　　　　　　　　ｍ ｇ／ｄｉ　　　４．３　　３．４　　　４．２　　３．８グルコ一スｍｇ／ｄ１ 　　８３．０　　？４．０　　１０２．０　９３．０グレアチニン　　　　　　 　ｍｇ／ｄｉ　　　１．０　　１．０　　　０．８　　０．９尿素　　　　　　 　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　　１７．０　１６．０　　　８．０　　７．０アルカ リ性ホスフアターゼ　ｕ／１　　　５９．０　４ｇ、０　　６１０　６５．０ト リグ！ＪセｌＪＦ　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　１１１．０　１４１．０　　１ ７９．０　１３７．０コレステロール　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　１５５，０　 ７０．０　　３２５．０　１７５．０ＨＤＬ　　　　　　　　　　　　　ｉｇ／ ｄｉ　　　３０．０　２７．０　　４６．０　４７．０ＬＤＬ　　　　　　　　 　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　１０５．０　２０．０　　２４ｇ、０　１０３．０ア ルフア抗トリプシン　　　ｍｇ／ｄｉ　　１７０．０　１６６、ＯＮ／Ａ　　　 Ｉ７８．０表ＶＩ（続き） 血漿成分中の変化についての試験の要約実験３　　　　　実験４ 試験　　　　　　　　　　　単位　　　　前後　　　　　前後ＬＤＨｕ／ｌ　　 　　６６．０　６３．０　　４５．０　５３．０ＳＧＯＴ　　　　　　　　　　 　ｕ／１　　　１３．０　１４．０　　２１．０　　４．ＧＳＧＰＴ　　　　　 　　　　　　ｕ／１　　　１７．０　１６．０　　１１．０　　６．０ビリルビ ンｍｇ／ｄｉ　　　Ｏ，１０，１０，２０，１合計のタンパク質　　　　　ｇ箇 ／ｄｉ　　　５．２　　５．０　　　５．３　　４．９アルブミンｇｍ／ｄｉ　 　　３．４　　３．３　　　３．４　　３．０グロブリン　　　　　　　　ｇｍ ／ｄｉ　　　１．８　　１．６　　　１．９　　１．９ナトリウム　　　　　　 　　＠ｅｑ／ｌ　　１６０．０　１６０．０　　１６０．０　１６０．０カリウ ム　　　　　　　　　ｆｆ１ｅｑ／１　　３．５　　３．４　　　３．３　　３ ．２塩化物　　　　　　　　　　ｍｅｑ／１　１１１．０　１１３．０　　１１ ２．０　１２９．０リン　　　　　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　　４．９　　４ ．８　　　４．９　　６．８尿酸　　　　　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　　５． ０　　４Ｊ　　　　５．７　　４．８グル：）−スｍｇ／ｄｉ　　１１９．０　 １１５．０　　５４．０　６８．０グレアチニン　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　 　９．７　　９．４　　１０．９　　９．７尿素　　　　　　　　　　　ｍｇ／ ｄｉ　　　５８．０　５７．０　　５９．０　４９．０アルカリ性ホスフアター ゼ　ｕ／１　　　４５．０　４２．０　　３６．０　３０．０トリグリセリド　 　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　１２４．０　１０５．０　　９１．０　７０．０コレ ステロール　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　１５６．０　１０２．０　　１４０．０ 　１００．０ＨＤＬ　　　　　　　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　　　２４．０　２ ５．０　　２１．０　２０．０ＬＤＬ　　　　　　　　　　　　　ｍｇ／ｄｉ　 　１３２．０　７７．０　　１２０．０　　ｇｏ、０アルフア抗トリプシン　　 　ｍｇ／ｄｉ　　１５７．０　１５０．ＯＮ／Ａ　　　Ｎ／Ａ上に提供した詳細 な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施態様を示すが、例示のみを 目的することを理解すべきである。この開示から、当業者は本発明の特徴を確認 することができ、そしてその精神および範囲を逸脱しないで、種々の用途および 条件に適合するための種々の変化および変更を行うことができる。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生理学的流体からある物質を除去するための水不溶性試薬であって、前記試 薬は（ａ）担体の支持体、および前記担体の支持体の表面上に固定化されている 、（ｂ）前記物質に対して特異的な結合性配位子、および（ｃ）スペーサーアー ムにより分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ有機分子からなる生 物適合性因子からなり、前記生物適合性因子は前記親核部分との反応により前記 表面上に固定化されている、生理学的流体からある物質を除去するための水不溶 性試薬。 ２、前記担体の支持体は中性のポリマーである、上記第１項記載の水不溶性試薬 。 ３、前記中性のポリマーは、アフィゲル（Ａｆｆｉｇｅｌ）１０、アフィゲル１ ５、トレシルーセファロース（Ｔｒｅｓｙｌ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）、ＣＮＢｒ −セファロース、レアクチーゲル（Ｒｅａｃｔｉ−Ｇｅｌ）（ＣＤＩ活性化アガ ロース／デキストラン）、エウペルギット（Ｅｕｐｅｒｇｉｔ）Ｃ、エポキシ活 性化セファロース、エポキシ活性化シリカ、カルボキシセファロース、チオール （活性化）セファロース、トリチル−アガロース、オキシランアクリルビーズ、 ｐ−ニトロフェノールアガロース、トシルーアガロース、パーイオデート処理ア ガロース、活性化ＣＭ−セルロース、活性化セルロース、ポリーグリシジルメタ クリレート、ＰＥＩ−グルタルアルデヒド活性化ナイロン、ＰＥＩグルタルアル デヒド活性化シリカ、グルタルアルデヒド活性化アガロース、イソシアネート活 性化アガロース、マレイミド活性化アガロースおよびクロロメチルポリスチレン から成る群より選択される、上記第２項記載の水不溶性試薬。 ４、前記中性のポリマーはトレシルーセファロースである、上記第３項記載の水 不溶性試薬。 ５、前記結合性配位子は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ホルモン −レセプター、レクチン、抗原およびビタミン結合性タンパク質から成る群より 選択される、上記第１項記載の水不溶性試薬。 ６、前記結合性配位子は、生理学的流体から除去すべき物質に対して特異的であ るモノクローナル抗体である、上記第５項記載の水不溶性試薬。 ７、前記モノクローナル抗体は低い密度のリボタンパク質に対して特異的である 、上記第６項記載の水不溶性試薬。 ８、前記生物適合性因子は、ＯＳＯ３−、ＲＳＯ３−、ＲＳＯ２−およびＣＯＯ −から成る群より選択される負に帯電した部分をもつ有機分子からなる、上記第 １項記載の水不溶性試薬。 ９、前記生物適合性因子は、ＮＨ２、ＳＨおよびＯＨから成る群より選択される 前記親核部分をもつ有機分子からなる、上記第１項記載の水不溶性試薬。 １０、前記生物適合性因子は、スルファミン酸、タウリン、スルファニル酸、グ リシン、アスパルテート、システイン、イセチオン酸、ヒドロキシベンゼンスル ホン酸、硫酸グルコース、乳酸、グルクロン酸、グルコン酸、２−メルカプトエ タンスルホン酸、メルカプト酢酸、チオサリチル酸、およびチオ乳酸から成る群 より選択される、上記第１０項記載の水不溶性試薬。 １１、前記生物適合性因子はスルファミン酸である、上記第１０項記載の水不溶 性試薬。 １２、生理学的流体からある物質を除去するための水不溶性試薬を調製する方法 であって、担体の支持体を前記物質に対して特異的な結合性配位子およびスペー サーアームにより分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ有機分子か らなる生物適合性因子の水溶液と接触させそして反応させる工程からなる方法。 １３、前記結合性配位子の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌであり 、そして前記生物適合性因子の濃度は約０．０１モル〜約５．０モルである、上 記第１２項記載の方法。 １４、ｐＨを非親核緩衝液で約４〜約１０の範囲にコントロールする、上記第１ ３項記載の方法。 １５、生理学的流体からある物質を除去するための水不溶性試薬を調製する方法 であって、工程：（ａ）担体の支持体を前記物質に対して特異的な結合性配位子 の水溶液と接触させそして反応させ、そして（ｂ）工程（ａ）の産生物をスペー サーアームにより分離された親核部分および負に帯電した部分をもつ有機分子か らなる生物適合性因子の水溶液と接触させそして反応させて前記水不溶性試薬を 生成する工程からなる方法。 １６、前記結合性配位子の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌであり 、そして前記生物適合性因子の濃度は約０．０１モル〜約５．０モルである、上 記第１５項記載の方法。 １７、ｐＨを非親核緩衝液で約４〜約１０の範囲にコントロールする、上記第１ ５項記載の方法。 １８、生理学的流体を上記第１項記載の水不溶性試薬と接触させることからなる 、生理学的流体を処理してある物質を除去する方法。 １９、前記生理学的流体は哺乳動物の血漿である、上記第１８項記載の方法。 ２０、前記物質は低い密度のリボタンパク質である、上記第１８項記載の方法。 ２１、特定の物質を除去するための体外の生理学的流体の処理のための装置であ って、哺乳動物から全血を抜き出す手段、前記全血から血漿を分離する手段、上 記第１項記載の水不溶性試薬を含有するチャンバーを含む前記血漿を処理する手 段、前記水不溶性試薬は前記物質と相互作用しそして前記物質を前記血漿から除 去し、そして前記物質を実質的に除去した血漿を前記全血の残部と再結合しそし て再結合した全血を前記哺乳動物に戻す手段からなる装置。 ２２、前記水不溶性試薬は、低い密度のリボタンパク質のためのモノクローナル 抗体を有するトレシルーセファロースおよび前記トレシルーセファロースの表面 上に固定化されたスルファミン酸からなる、上記第２１項記載の装置。