JP3084437B2 - 抗脂質抗体の除去装置 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、体液中から抗脂質抗体
を吸着除去あるいは吸着回収するための抗脂質抗体の除
去装置に関する。 【０００２】 【従来の技術および発明が解決しようとする問題点】自
己免疫疾患は、その名称のごとく、自己の組織の構成成
分に対する抗体（以下、自己抗体という）が出現する疾
患であるが、全身性エリテマトーデス（以下、ＳＬＥと
いう）および関連する自己免疫疾患において、血栓症、
血小板減少症および子宮内胎児死亡などの症例に関して
は、細胞膜のリン脂質成分に対する抗体（以下、抗脂質
抗体という）が体液中に出現し、その病態と密接な関連
があると考えられている。産生された自己抗体が病気の
発症に係わる機序は必ずしも明確ではないが、自己抗体
自身が細胞を障害する機構、あるいは自己抗体が抗原と
結合して免疫複合体を形成し、組織に沈着することによ
り組織障害をおこす機構などが提唱されている。該症例
のばあいは、発生した抗脂質抗体が、血小板膜上のリン
脂質に結合し、その機能を活性化あるいは阻害し、それ
ぞれ血栓症あるいは血小板減少症を誘発すること、ま
た、胎盤導管の内皮細胞膜上のリン脂質に結合して血行
を阻害し、胎児死亡を誘発する機構などが提唱されてい
る。 【０００３】このように、産生した抗脂質抗体または該
抗体と細胞膜上のリン脂質との免疫複合体によりさまざ
まな症状がひきおこされるわけであるから、該症例の治
療には抗脂質抗体のコントロールが非常に重要である。 【０００４】従来より抗脂質抗体の産生を抑制する目的
で、ステロイド剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤
などがＳＬＥの治療に広く用いられている。なかでも、
ステロイド剤はもっとも一般的に用いられ、パルス治療
と呼ばれるステロイドの短期超大量投与療法もしばしば
行なわれている。しかしながら、ステロイドは少量の投
与によっても副作用を生じさせやすいので、ステロイド
の短期超大量投与療法によればさらに大きな副作用を生
じさせやすくなるのは自明である。また、これらの薬剤
は長期にわたって用いられることが多く、そのようなば
あいには副作用がさらに出やすく、また、薬剤耐性によ
りしだいに増量しなければならないことも多いため、症
例によってはこれらの薬剤の使用が不可能であったり、
充分な効果を発揮しないばあいも多い。とくに、該症例
の現われる時期は抗脂質抗体の抑制がもっとも必要な時
期であるにもかかわらず、上記の理由によりパルス療法
や免疫抑制剤などの薬剤を用いる強力な療法を採用でき
ないばあいも多い。 【０００５】一方、これらの薬剤療法とは別のアプロー
チとして、体液中の抗脂質抗体を対外循環により直接除
去しようとする試みがなされている。もっとも簡便な方
法は、抗脂質抗体を含む患者の血漿を健常人の血漿と交
換する、いわゆる血漿交換療法である。この方法によっ
て血中の抗脂質抗体は大幅に低下し、症状の改善が見ら
れている。しかしながら、この方法では大量の健常血漿
が必要となり、高価であるばかりでなく、該療法処置中
に血清肝炎などの感染の危険性を伴うため広く普及する
には至っていない。 【０００６】血漿交換療法では血漿中のすべての成分が
除去され、健常血漿と交換されるわけであるが、これに
対して、病因物質である抗脂質抗体を選択的に除去する
目的で、分子サイズにより病因物質を分離する血漿分離
膜法が開発された。この方法では膜により血漿を高分子
量画分と低分子量画分に分離し、病因物質が含まれてい
る高分子量画分を廃棄し、主要蛋白であるアルブミンが
含まれている低分子量画分を患者に戻すが、抗脂質抗体
は分子量約１６万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）が主で
あり、アルブミン（分子量約６万）と分子量が近いため
両者間の分離はわるく、抗脂質抗体を除去する際にアル
ブミンも大量に除去され、さらに病因物質と同等以上の
分子量の蛋白はすべて除去されるなどの欠点がある。 【０００７】したがって、病因物質である抗脂質抗体を
より選択的に除去し、体液中の他の有用成分がほとんど
失われることのない除去手段の出現が望まれていた。 【０００８】 【問題点を解決するための手段】本発明者らはかかる実
情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、体液中の有効成分をほ
とんど失うことなく抗脂質抗体のみを選択的に吸着しう
る吸着体を見出し、本発明を完成するに至った。 【０００９】すなわち、本発明は、流体の流入口および
流出口を有する容器、流体および該流体に含まれる成分
は通過できるが、水不溶性多孔質体に分子量１０００以
上の硫酸化多糖類が固定されてなる抗脂質抗体の吸着体
は通過できないフィルター、および前記容器内に充填さ
れた前記抗脂質抗体の吸着体からなる抗脂質抗体の除去
装置に関する。 【００１０】 【実施例】本明細書において体液とは、血液、血漿、血
清、腹水、リンパ液、関節内液およびこれらからえられ
た分画成分、ならびにその他の生体由来の液性成分をい
う。 【００１１】本発明に用いる水不溶性多孔質体は、大き
な径の連続した細孔を有するものが好ましい。すなわ
ち、抗脂質抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ（免疫グロブリン
Ｍ）などの免疫グロブリンからなり、分子量が１６〜９
０万の巨大分子であるため、これを効率よく吸着するた
めには抗脂質抗体が容易に多孔質体内に侵入しうること
が必要である。 【００１２】細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入
法がもっともよく用いられているが、親水性多孔質体の
ばあいには適用が難しい。これにかわる細孔径の目安と
して排除限界分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、
疎水性多孔質体いずれにも適用できる。排除限界分子量
とは成書（たとえば波多野博行、花井俊彦著、実験高速
液体クロマトグラフィー、化学同人）などに述べられて
いるごとく、ゲル浸透クロマトグラフィにおいて細孔内
に侵入できない（排除される）分子のうちもっとも小さ
い分子量をもつものの分子量をいう。 【００１３】排除限界分子量は対象とする化合物により
異なることが知られており、一般に球状蛋白質、デキス
トラン、ポリエチレングリコールなどについてよく調べ
られており、抗脂質抗体にもっとも類似していると思わ
れる球状蛋白質（ビールスを含む）を用いてえられた値
を用いるのが適当である。 【００１４】排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質体
を用いて検討した結果、予想に反し排除限界分子量が抗
脂質抗体の分子量より小さい１０万程度のものでもある
程度の吸着能を示し、また細孔径の大きいもの程能力が
大きいわけでなく、むしろ能力が低下したり抗脂質抗体
以外の蛋白が吸着されること、すなわち最適な細孔径の
範囲が存在することが明らかになった。すなわち、１０
万未満の排除限界分子量を持つ水不溶性多孔質体を用い
たばあいには抗脂質抗体の吸着量は小さく実用に耐えな
いが、排除限界分子量が１０万ないし１５万と抗脂質抗
体の分子量に近い水不溶性多孔質体を用いてもある程度
実用に供しうる吸着体がえられた。一方、排除限界分子
量が大きくなるにつれ、抗脂質抗体の吸着量は増加する
がやがて頭打ちとなり、排除限界分子量が６０００万を
こえると、表面積が少なすぎ、吸着量は目立って低下す
るばかりでなく、目的とする抗脂質抗体以外の成分の吸
着、すなわち、非特異吸着が増加し、選択性がいちじる
しく低下する。 【００１５】したがって、本発明に用いる水不溶性多孔
質体の好ましい排除限界分子量は１０万以上６０００万
以下であり、さらに好ましくはより選択性吸着容量の大
きい点から６０万以上６０００万以下、さらには６０万
以上３０００万以下であるのがよい。 【００１６】つぎに、水不溶性多孔質体の多孔構造につ
いては、表面多孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容
積が吸着容量が大きいという点から２０％以上であるこ
とが好ましい。水不溶性多孔質体の形状は、粒状、球
状、繊維状、膜状、ホローファイバー状など任意の形状
を選ぶことができる。粒子状の水不溶性多孔質体を用い
るばあい、その粒子径が１μｍ未満のばあいには圧力損
失が大きく、５０００μｍをこえるばあいには吸着容量
が小さい点から、１μｍ以上５０００μｍ以下であるの
が好ましい。 【００１７】本発明に用いる水不溶性多孔質体は有機
性、無機性いずれであってもよいが、目的とする抗脂質
抗体以外の体液成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少
ないものが好ましい。親水性である方が非特異吸着が少
ないので水不溶性多孔質体は疎水性であるよりも、親水
性であるほうが好ましく、分子中に水酸基を有する化合
物よりなる水不溶性多孔質体がより好ましい。 【００１８】本発明に使用する水不溶性多孔質体の代表
例としては、アガロース、デキストラン、ポリアクリル
アミドなどの軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリ
カゲルなどの無機多孔質体、ポリメチルメタクリレー
ト、ポリビニルアルコール、スチレン−ジビニルベンゼ
ン共重合体などの合成高分子および／またはセルロース
などの天然高分子を原料とする多孔質ポリマーハードゲ
ルなどがあげられるがこれらに限定されるわけではな
い。 【００１９】本発明に用いる吸着体を体外循環治療に用
いる際には、血液、血漿のごとき高粘性流体を高速で流
す必要があるため、圧密化を引き起こさない充分な機械
的強度を有する硬質水不溶性多孔質体を用いるのが好ま
しい。前記硬質多孔質体とは後記参考例に示すごとく、
水不溶性多孔質体を円筒状カラムに均一に充填し、水性
流体を流通したばあいの圧力損失と流量との関係が少な
くとも０．３ｋｇ／ｃｍ²まで直線関係にあるものをい
う。 【００２０】 【００２１】本発明に用いる分子量が１０００以上の硫
酸化多糖類は、１分子内に複数の硫酸エステル基を有す
る分子量１０００以上の多糖類をいう。 【００２２】本発明に用いる硫酸化多糖類の代表例とし
ては、ヘパリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫
酸などがあげられるが、これらに限定されるわけではな
い。 【００２３】本発明に用いる吸着体に固定されている分
子量１０００以上の硫酸化多糖類は１種であってもよい
し、２種以上であってもよい。 【００２４】本発明に用いる吸着体は、水不溶性多孔質
体にアニオン性官能基を有する分子量１０００以上の硫
酸化多糖類が固定された状態のものをいう。そのような
分子量１０００以上の硫酸化多糖類の吸着体への導入方
法には種々あり、いかなる方法で導入してもよい。アニ
オン性官能基を有する分子量１０００以上のポリアニオ
ン化合物やそれ以外のアニオン性官能基を有する化合物
の固定された状態をうるためのアニオン性官能基の代表
的な導入方法としては （１）アニオン性官能基あるいは容易にアニオン性官能
基に変換しうる官能基を含有する化合物をモノマーある
いは架橋剤として用いる重合によって吸着体を形成させ
る方法、 （２）アニオン性官能基を含有する化合物を水不溶性多
孔質体に固定させる方法、 （３）アニオン性官能基を形成する化合物と水不溶性多
孔質体を直接反応させることによって、水不溶性多孔質
体にアニオン性官能基を有する化合物を固定させる方法 などがあげられる。 【００２５】（１）の方法において用いるアニオン性官
能基あるいは容易にアニオン性官能基に変換しうる官能
基を含有するモノマーあるいは架橋剤の代表例として
は、アクリル酸およびそのエステル、メタクリル酸およ
びそのエステル、スチレンスルホン酸などがあげられる
がこれらに限定されるわけではない。 【００２６】（２）の方法、すなわちアニオン性官能基
を含有する化合物を水不溶性多孔質体に固定させる方法
としては、物理的吸着による方法、イオン結合による方
法、共有結合により固定する方法などがあり、いかなる
方法を用いてもよいが、治療目的に吸着体を用いるに
は、滅菌時あるいは治療中にアニオン性官能基含有化合
物が離脱しないことが重要であるので、強固な固定が可
能な共有結合法が好ましい。 【００２７】共有結合によりアニオン性官能基含有化合
物を固定させるばあい、アニオン性官能基含有化合物が
アニオン性官能基以外に固定に利用できる官能基を有す
るのが好ましい。 【００２８】固定に利用できる官能基の代表例として
は、アミノ基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物
基、スクシニルイミド基、水酸基、チオール基、アルデ
ヒド基、ハロゲン基、エポキシ基、シラノール基などが
あげられるがこれらに限定されるわけではない。 【００２９】これらの官能基を有するアニオン性官能基
含有化合物は多数存在するが、後述するスルファニル
酸、硫酸水素２−アミノエチル、テレフタル酸、ホスホ
リルエタノールアミン、グルコース６−リン酸、エタン
ジチオールなどはその一例である。 【００３０】また、アニオン性官能基を含有する化合物
のうち硫酸エステル基を含有する化合物の代表例として
は、アルコール、糖類、グリコールなどの水酸基含有化
合物の硫酸エステルがあげられるが、これらのなかでも
多価アルコールの部分硫酸エステル化物、とりわけ糖類
の硫酸エステル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官
能基の双方を含んでいるうえに、生体適合性および活性
ともに高く、さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔
質体に固定しうることからとくに好ましい。 【００３１】つぎに（３）の方法、すなわちアニオン性
官能基を形成する化合物と水不溶性多孔質体とを反応さ
せることによって、水不溶性多孔質体にアニオン性官能
基を有する化合物を固定させてアニオン性官能基を導入
する方法の代表例として水酸基含有多孔質体に硫酸エス
テル基を導入する反応があげられる。このばあい、水酸
基含有水不溶性多孔質体とクロロスルホン酸、濃硫酸な
どの試薬を反応させることによって直接硫酸エステル基
を導入することができる。 【００３２】導入されるアニオン性官能基の量は、吸着
体１ｍｌあたり０．０１μｍｏｌ以上１０ｍ ｍｏｌ以
下が好ましい。０．０１μｍｏｌ未満のばあい吸着能力
が充分でなく、１０ｍ ｍｏｌをこえるばあい非特異吸
着が多すぎて実用に供することが困難になる。より好ま
しいアニオン性官能基導入量は１μｍｏｌ以上１００μ
ｍｏｌ以下であるのがよい。 【００３３】本発明に用いる吸着体を用いて体液から抗
脂質抗体を除去する方法には種々あり、いかなる方法を
用いてもよいが、流体の流入口および流出口を有する容
器、流体および該流体に含まれる成分は通過できるが、
水不溶性多孔質体に分子量１０００以上の硫酸化多糖類
が固定されてなる抗脂質抗体の吸着体は通過できないフ
ィルター、および前記容器内に充填された前記抗脂質抗
体の吸着体からなる抗脂質抗体の除去装置に体液を通液
する方法が簡便で好ましい。 【００３４】図１に本発明の抗脂質抗体の除去装置の一
実施例の概略断面図を示す。図１中、１および２はそれ
ぞれの流体の流入口と流出口、３は本発明の吸着体、４
および５は流体および流体に含まれる成分は通過できる
が本発明に用いる吸着体は通過できないフィルターまた
はメッシュ、６はカラム、７は容器である。ここで流体
の流入口側のフィルター４は存在しなくてもよい。 【００３５】以下、実施例により本発明の除去装置をさ
らに詳しく説明するが、本発明はかかる実施例のみに限
定されるものではない。 【００３６】参考例 両端に孔径１５μｍのフィルターを装着したガラス製カ
ラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）にアガロース
ゲルＢｉｏｇｅｌ Ａ５ｍ（商品名、バイオラド社製、
粒径５０〜１００メッシュ）、合成ポリマーよりなるゲ
ル、トヨパールＨＷ６５（商品名、東洋曹達工業（株）
製、粒径５０〜１００μｍ）、および多孔質セルロース
ゲル、セルロファインＧＣ−７００（商品名、チッソ
（株）製、粒径４５〜１００μｍ）をそれぞれ均一に充
填し、ペリスタティックポンプによりカラム内に水を流
通し、流量と圧力損失ΔＰとの関係を求めた。その結果
を図２に示す。同図より明らかなように軟質ゲルである
アガロースゲルは一定の流量以上では圧密化を起こし、
圧力を増加させても流量が増加しないのに対し、トヨパ
ール、セルロファインなどの硬質ゲルは圧力の増加にほ
ぼ比例して流量が増加する。 【００３７】製造例１ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ３（商品名、チ
ッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量５０００
万、粒径６３〜１２５μｍ）１００ｍｌに水６０ｍｌお
よび２Ｍ ＮａＯＨ ８０ｍｌを加えて４５℃で１時間攪
拌した。攪拌後、さらにエピクロロヒドリン２５ｍｌを
加えて４５℃で２時間攪拌して反応終了後、ゲルを濾別
水洗してエポキシ化セルロースゲル（以下、エポキシ化
ゲルという）をえた。 【００３８】比較製造例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル１０ｍｌに、スルファニ
ル酸０．１４ｇを７．５ｍｌの水に溶解したものを加
え、さらに２Ｍ ＮａＯＨを加えて溶液のｐＨを１０に
調整したのち４５℃で２０時間放置した。反応終了後、
ゲルを濾別水洗してスルファニル酸が固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたスルファニル酸により導入
されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり１０μ
ｍｏｌであった。 【００３９】比較製造例２ スルファニル酸のかわりに硫酸水素２−アミノエチル
０．１１ｇを用いたほかは比較製造例１とまったく同様
にして、硫酸水素２−アミノエチルが固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定された硫酸水素２−アミノエチル
により導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあ
たり１０μｍｏｌであった。 【００４０】比較製造例３ スルファニル酸のかわりにホスホリルエタノールアミン
０．１１ｇを用いたほかは比較製造例１とまったく同様
にして、ホスホリルエタノールアミンが固定されたセル
ロースゲルをえた。固定されたホスホリルエタノールア
ミンにより導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍ
ｌあたり１０μｍｏｌであった。 【００４１】比較製造例４ スルファニル酸のかわりに１，２−エタンジチオール
０．０８ｇを用いたほかは比較製造例１とまったく同様
にして、１，２−エタンジチオールが固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定された１，２−エタンジチオール
により導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあ
たり１０μｍｏｌであった。 【００４２】実施製造例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル１０ｍｌに、分子量約５
０００、イオウ含量１８％のデキストラン硫酸ナトリウ
ム５ｇ、および水８ｍｌを加え、さらに２ＭＮａＯＨを
加えて溶液のｐＨを１０に調整したのち４５℃で１７時
間放置した。反応終了後ゲルを濾別水洗し、０．５％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて室温で２０時間放置
し、未反応のエポキシ基を封止した。反応終了後ゲルを
濾別水洗してデキストラン硫酸ナトリウムが固定された
セルロースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸に
より導入されたアニオン性官能基量は、吸着体１ｍｌあ
たり２９μｍｏｌであった。 【００４３】製造例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル４０ｍｌに、エチレンジ
アミン０．５ｇを３０ｍｌの水に溶解したものを加えて
４５℃で２０時間放置した。反応終了後ゲルを濾別水洗
してアミノ基が導入されたセルロースゲル（以下、アミ
ノ化ゲルという）をえた。 【００４４】比較製造例５ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍｌに、水１０ｍｌと
それに続いてグルコース６−リン酸バリウム塩１ｇを加
え、さらに２Ｍ ＮａＯＨ ０．５ｍｌを加えて１時間４
５℃に保った。これにＮａＢＨ₄ ０．１ｇを加え室温で
２４時間放置した。反応終了後ゲルを濾別水洗してグル
コース６−リン酸が固定されたセルロースをえた。固定
されたグルコース６−リン酸により導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１ｍｌあたり１０μｍｏｌであっ
た。 【００４５】比較製造例６ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍｌをＮ，Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）中に懸濁させ全容を１８ｍｌ
とした。それにテレフタル酸０．２７ｇを溶解させたの
ち、縮合試薬（Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド）１ｇを加え室温で２４時間攪拌した。反応終了後
ゲルを濾別し、ＤＭＦ、エタノール、水の順に洗浄して
テレフタル酸が固定されたセルロースゲルをえた。固定
されたテレフタル酸により導入されたアニオン性官能基
量は吸着体１ｍｌあたり１０μｍｏｌであった。 【００４６】実施製造例２ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍｌに、実施製造例１
で用いたものと同種のデキストラン硫酸ナトリウム５ｇ
および水８ｍｌを加え、さらに２Ｍ ＮａＯＨ０．５ｍ
ｌを加えて１時間４５℃に保った。これにＮａＢＨ₄
０．１ｇを加えて室温で２４時間放置した。反応終了後
ゲルを濾別水洗してデキストラン硫酸ナトリウムが固定
されたセルロースゲルをえた。固定されたデキストラン
硫酸により導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍ
ｌあたり３９μｍｏｌであった。 【００４７】製造例３ 製造例１で用いたものと同種の多孔質セルロースゲル
（ＣＫゲルＡ３）４０ｍｌをヘプタン中に懸濁させ全容
を７０ｍｌとした。これに２０％ＮａＯＨ １０ｍｌお
よびノニオン系界面活性剤トゥイーン２０（商品名、バ
イオラッド社製）４０滴を加えて４０℃で３０分間振盪
した。続いてエピクロロヒドリン１０ｍｌを加えて４０
℃で６時間振盪した。反応終了後ゲルを濾別し、エタノ
ール、水の順で洗浄してエポキシ化ゲルをえた。 【００４８】実施製造例３ 製造例１でえたエポキシ化ゲルのかわりに製造例３でえ
たエポキシ化ゲル１０ｍｌを用いたほかは実施製造例１
とまったく同様にして、デキストラン硫酸ナトリウムが
固定されたセルロースゲルをえた。固定されたデキスト
ラン硫酸により導入されたアニオン性官能基量は、吸着
体１ｍｌあたり３６μｍｏｌであった。 【００４９】比較製造例７ 製造例３でえたエポキシ化ゲル１０ｍｌに、片末端にア
ミノ基を有するポリアクリル酸（分子量約１０００）１
ｇを水５ｍｌに溶解したものを加え、これに２Ｍ Ｎａ
ＯＨ １ｍｌを加えて室温で４８時間放置した。反応終
了後ゲルを濾別水洗してポリアクリル酸が固定されたセ
ルロースゲルをえた。固定されたポリアクリル酸により
導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり５
６０μｍｏｌであった。片末端にアミノ基を有するポリ
アクリル酸は、２−アミノエタンチオールを連鎖移動剤
とし、α，α′−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢ
Ｎ）を開始剤とするアクリル酸の低重合反応によりえら
れたものを用いた（日本化学会誌、１９７７、Ｎｏ．
１、８８〜９２頁、「２−ヒドロキシエチル＝メタクリ
ラート−スチレン系ＡＢＡ型ブロック共重合体の合成お
よびその構造とぬれ」、岡野光夫、他参照）。 【００５０】比較製造例８ 片末端にアミノ基を有するポリアクリル酸（分子量約１
０００）のかわりに片末端にアミノ基を有するポリアク
リル酸（分子量約１万）１ｇを用いたほかは比較製造例
７とまったく同様にして、ポリアクリル酸が固定された
セルロースゲルをえた。固定されたポリアクリル酸によ
り導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり
５．６ｍ ｍｏｌであった。片末端にアミノ基を有する
ポリアクリル酸は比較製造例７に記載した方法と類似の
方法にしたがって合成した。 【００５１】製造例４ 製造例３でえたエポキシ化ゲル１０ｍｌに、エチレンジ
アミン０．１２ｇを水６ｍｌに溶解したものを加えたほ
かは製造例２とまったく同様にして、アミノ化ゲルをえ
た。 【００５２】実施製造例４ 製造例２でえたアミノ化ゲルのかわりに製造例４でえた
アミノ化ゲル１０ｍｌを用いたほかは実施製造例２とま
ったく同様にして、デキストラン硫酸ナトリウムが固定
されたセルロースゲルをえた。固定されたデキストラン
硫酸により導入されたアニオン性官能基量は、吸着体１
ｍｌあたり７６μｍｏｌであった。 【００５３】製造例５ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ２２（商品名、
チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量３０００
万、粒径５３〜１２５μｍ）２５ｍｌに水１０ｍｌおよ
び２Ｍ ＮａＯＨ ３０ｍｌを加え、４０℃で２０分間振
盪した。これにエピクロロヒドリン１２ｍｌを加えて４
０℃で３時間振盪した。反応終了後ゲルを濾別水洗して
エポキシ化ゲルをえた。 【００５４】製造例６ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ３２（商品名、
チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量２０００
万、粒径５３〜１２５μｍ）２５ｍｌに、水１５ｍｌ、
２Ｍ ＮａＯＨ ２１ｍｌおよびエピクロロヒドリン７．
１ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にしてエポキシ化
ゲルをえた。 【００５５】製造例７ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣＬ−２
０００ｍ（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除
限界分子量３００万、粒径４４〜１０５μｍ）２５ｍ
ｌ、水２５ｍｌ、２Ｍ ＮａＯＨ １５ｍｌおよびエピク
ロロヒドリン５ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にし
てエポキシ化ゲルをえた。 【００５６】製造例８ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣＬ−１
０００ｍ（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除
限界分子量６０万、粒径４４〜１０５μｍ）２５ｍｌ、
水２５ｍｌ、２Ｍ ＮａＯＨ １１．７５ｍｌおよびエピ
クロロヒドリン４ｍｌを用いたほかは製造例５と同様に
してエポキシ化ゲルをえた。 【００５７】製造例９ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣ−７０
０ｍ（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界
分子量４０万、粒径４４〜１０５μｍ）２５ｍｌ、水２
５ｍｌ、２Ｍ ＮａＯＨ ８．７５ｍｌおよびエピクロロ
ヒドリン３ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にしてエ
ポキシ化ゲルをえた。 【００５８】製造例１０ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣ−２０
０ｍ（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界
分子量１２万、粒径４４〜１０５μｍ）２５ｍｌ、水２
５ｍｌ、２Ｍ ＮａＯＨ ７ｍｌおよびエピクロロヒドリ
ン２．５ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にしてエポ
キシ化ゲルをえた。 【００５９】実施製造例５ 製造例５でえたエポキシ化ゲル（ＣＫゲルＡ２２）２０
ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキストラ
ン硫酸ナトリウム１０ｇおよび水を加え全容を３３ｍｌ
とした。２Ｍ ＮａＯＨを加えて溶液のｐＨを１０．０
に調整したのち４５℃で１７時間放置した。反応終了後
ゲルを濾別水洗し、０．５％モノエタノールアミン水溶
液を加えて室温で２０時間放置し、未反応のエポキシ基
を封止した。反応終了後ゲルを濾別水洗してデキストラ
ン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。
固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１ｍｌあたり３１μｍｏｌであっ
た。 【００６０】実施製造例６ 製造例６でえたエポキシ化ゲル（ＣＫゲルＡ３２）２０
ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキストラ
ン硫酸ナトリウム１０ｇおよび水を加えて全容を３６ｍ
ｌとしたこと、および溶液のｐＨを９．９に調整したこ
とのほかは実施製造例５と同様にして、デキストラン硫
酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。固定
されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性官
能基量は、吸着体１ｍｌあたり２７μｍｏｌであった。 【００６１】実施製造例７ 製造例７でえたエポキシ化ゲル（ＧＣＬ−２０００ｍ）
２０ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキス
トラン硫酸ナトリウム９．３ｇおよび水を加えて全容を
３５ｍｌとしたこと、および溶液のｐＨを９．３に調整
したことのほかは実施製造例５と同様にして、デキスト
ラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえ
た。固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニ
オン性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり３０μｍｏｌで
あった。 【００６２】実施製造例８ 製造例８でえたエポキシ化ゲル（ＧＣＬ−１０００ｍ）
２０ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキス
トラン硫酸ナトリウム９．３ｇおよび水を加えて全容を
３５ｍｌとしたこと、および溶液のｐＨを９．３に調整
したことのほかは実施製造例５と同様にして、デキスト
ラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえ
た。固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニ
オン性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり３０μｍｏｌで
あった。 【００６３】実施製造例９ 製造例９でえたエポキシ化ゲル（ＧＣ−７００ｍ）２０
ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキストラ
ン硫酸ナトリウム９．０ｇおよび水を加えて全容を３６
ｍｌとしたこと、および溶液のｐＨを９．３に調整した
ことのほかは実施製造例５と同様にして、デキストラン
硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。固
定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性
官能基量は、吸着体１ｍｌあたり３０μｍｏｌであっ
た。 【００６４】実施製造例１０ 製造例１０でえたエポキシ化ゲル（ＧＣ−２００ｍ）２
０ｍｌに、実施製造例１で用いたものと同種のデキスト
ラン硫酸ナトリウム９．０ｇおよび水を加えて全容を３
６ｍｌとしたこと、および溶液のｐＨを９．２に調整し
たことのほかは実施製造例５と同様にして、デキストラ
ン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。
固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり３２μｍｏｌであっ
た。 【００６５】実験例１および比較実験例１ 実施製造例１〜４および比較製造例１〜８でえられた吸
着体を０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した
のち、各吸着体０．１ｍｌずつをポリプロピレン製マイ
クロチューブ（容量１．５ｍｌ）に取り、０．５Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７．４）を加えて全容を１ｍｌとした。
それに抗脂質抗体を含む血清０．２ｍｌずつを加え、３
７℃で２時間振盪した。この吸着操作終了後、遠心分離
してゲルを沈降させ、採取した上澄中の抗脂質抗体価を
酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ法）により測定した。抗脂
質抗体価は、カルジオリピンをコートしたプレートに、
希釈した検体を加え、抗原−抗体反応を行ない、ペルオ
キシダーゼ標識抗ヒト免疫グロブリン抗体を加え、酵素
発色反応をＣＳ−９３０（商品名、（株）島津製作所
製）にて測定した。表１に、各吸着体に固定されたアニ
オン性官能基を有する化合物名、および各吸着体の原血
清中の抗脂質抗体価に対する吸着操作終了後の上澄中の
抗脂質抗体価を百分率で相対抗体価として示す。 【００６６】表１から、デキストラン硫酸が固定された
吸着体の抗脂質抗体吸着能がとくにすぐれていることが
わかる。 【００６７】実験例２ 実施製造例１および５〜１０でえられた吸着体を用い、
加えた血清量を０．１５ｍｌとしたほかは実験例１と同
様の方法にしたがって相対抗体価を求めた。えられた結
果を用いた種々の水不溶性多孔質体名とともに表２に示
す。 【００６８】表２から、排除限界分子量が４０万以下の
多孔質体であるセルロファインＧＣ−７００ｍおよびセ
ルロファインＧＣ−２００ｍを用いた吸着体の抗脂質抗
体吸着能がややおとることがわかる。また逆に、排除限
界分子量を５０００万と大きくしすぎても抗脂質抗体吸
着能はおちる傾向にあることがわかる。 【００６９】 【表１】【００７０】 【表２】 【００７１】 【発明の効果】本発明の除去装置は体液より抗脂質抗体
を選択的に除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】 【図１】本発明の抗脂質抗体の除去装置の一実施例の概
略断面図である。 【図２】３種のゲルを用いて流速と圧力損失との関係を
調べた結果を示すグラフである。 【符号の説明】 １ 流入口 ２ 流出口 ３ 吸着体 ４、５ フィルター ７ 容 器

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61M 1/36 545 B01D 15/08 B01J 20/22 G01N 30/00 G01N 33/53

Claims (1)

1. (57)【特許請求の範囲】 １ 流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
   び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
   質体に分子量１０００以上の硫酸化多糖類が固定されて
   なる抗脂質抗体の吸着体は通過できないフィルター、お
   よび前記容器内に充填された前記抗脂質抗体の吸着体か
   らなる抗脂質抗体の除去装置。 ２ 水不溶性多孔質体の球状蛋白質の排除限界分子量が
   ６０万以上６０００万以下である特許請求の範囲第１項
   記載の抗脂質抗体の除去装置。 ３ 水不溶性多孔質体が水酸基を有する化合物よりなる
   特許請求の範囲第１項記載の抗脂質抗体の除去装置。