JPH01320066A - 吸着体および除去装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は体液から有害な成分を吸着除去するための吸着
体およびそれを用いた除去装置に関する。さらに詳しく
は体液中より腎糸球体基底膜付着性蛋白質を除去し、腎
炎などの腎疾患を抑制するための吸着体およびそれを用
いた腎糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装置に関する。

［従来の技術・発明が解決しようとする課題］腎臓は、
人体のあらゆる部分から血液によって運ばれてきた老廃
物を、尿として体外へ排出してしまおうとする器官であ
る。つまり、腎臓は血液の濾過器として機能する。一般
に１個の腎臓に対して、１分間に約０，５リツトルの血
流が流れているといわれている。したがって、かりに人
体で腎臓が働かなかったとすると、人体にできた老廃物
が取り除かれないために、老廃物が体内にたまってしま
い、生命の維持が困難となる。このように、腎臓は生命
維持に重要な役割を果たしている。

この腎臓のなかには成書（からだの読本、監修　石山俊
次、小林太刀夫、高橋忠夫、暮しの手帳社刊、１９７１
年）にあるように糸まりのような形の糸球体と呼ばれる
、直径が約０．２ミリのものがある。腎臓ひとつについ
て約１３０万個の糸球体が存在している。そしてこの糸
球体のなかで血液が、濾過される。この糸球体には、血
液と接触する面に腎糸球体基底膜と呼ばれる膜が存在し
、それによって血液成分の大きさや荷電などを認識して
老廃物と必要物とが選別される。したがって、この腎糸
球体基底膜に付着する物質が体内に入り込んだり、生成
したりするとその物質が付着した腎糸球体基底膜が機能
しなくなり、腎臓の濾過機能が失われて生命維持ができ
なくなり、死に至ることとなる。

このような機序により発症する腎臓の病気として代表的
なものの一つに全身性エリテマトーデス（以下、ＳＬＥ
という）があげられている。

この疾患は、免疫系異常疾患の代表例の一つで、腎炎、
中枢神経障害などの症状を特徴とした全身性の疾患であ
る。とくにＳＬＥ患者の腎炎（ループス腎炎という）の
進行は、患者に重篤な影響を与えるため、治療の指針と
なっている。

ＳＬＥ患者には正常な免疫グロブリンのほかに、自己の
成分に対する抗体、すなわち自己抗体といわれる異常免
疫グロブリンが多種類かつ大量に産生され、°血中に存
在している。ＳＬＥの諸症状はこれらの自己抗体や自己
抗体と抗原との反応生成物である免疫複合体が組織に沈
着することにより引きおこされる。ＳＬＨの症状のうち
もっとも重篤であるループス腎炎のばあいでは、腎機能
のもっとも重要な部分、すなわち血液成分濾過機能をに
なう腎糸球体基底膜に自己抗体が付着することにより発
症すると考えられている。つまりこれは、ＳＬＥ患者中
には腎糸球体基底膜（以下、ＧＢＭともいう）に対する
免疫グロブリン（以下、抗ＧＢＭ抗体ともいう）が存在
することが証明されており（前縁　新−、リウマチ、２
６巻、４４５〜４４８頁、（１９８Ｇ））　、また別の
報文（ファーバー、ピー（Ｆａａｂｏｒ、　Ｐ、）ら、
ジャーナルφオブ・クリニカル・インベスティゲーショ
ン（Ｊ、Ｃ１１ｎ。

Ｉ　ｎｖｃｓ　ｔ、　）、７７巻、１８２４〜１８３０
頁、＜１９８８））によるとＳＬＥ患者中には腎糸球体
基底膜を構成するヘパラン硫酸に反応する免疫グロブリ
ンが存在することが証明されていることから明らかであ
る。

このようにＳＬＨにおいてループス腎炎の治療が重要で
あること、および−船内な腎炎においてＧＢＭに血液成
分が詰まり腎機能が阻害されることからＳＬＥ患者の治
療には腎糸球体基底膜に付着する性質をもった抗Ｇ　Ｂ
　Ｍ抗体などの蛋白質（以下、腎糸球体基底膜付着性蛋
白質という）を除去することが非常に重要である。

従来よりこのループス腎炎を治療する目的でステロイド
剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤などが治療に広
く用いられている。なかでもステロイド剤はもっとも一
般的に用いられ、パルス療法と呼ばれるステロイドの短
期超大全投与療法もしばしば行われている。しかしなが
ら、ステロイドは少量の投与によっても副作用を生じや
すいのでステロイドの短期超大全投与療法によれば、さ
らに大きな副作用を生じさせやす°くなるのは自明であ
る。また、これらの薬剤は長期にわたって用いられるこ
とが多く、そのようなばあいには副作用がさらに出やす
く、また薬剤耐性によりしだいに増量しなければならな
いことも多いため症例によってはこれらの薬剤の使用が
不可能であったり、充分な効果を発揮しないばあいも多
い。とくにループス腎炎の活動期は、腎糸球体基底膜付
着性蛋白質の産生を抑制することが必要な時期であるに
もかかわらず、前記の理由によりパルス療法や免疫抑制
剤などの薬剤を用いる強力な療法を採用できないばあい
も多い。また副作用として薬物投与中に感染防御力が大
幅に低下するために入院が必要となり、退院まで数カ月
かかり社会復帰が遅れるといった聞届がある。

一方、これらの薬剤療法とは別のアプローチとして、体
液中の腎糸球体基底膜付着性蛋白質を含む血漿を体外循
環によって直接除去しようとする試みがなされている。

もっとも簡便な方法は、患者の血漿を健常人の血漿と交
換する、いわゆる血漿交換療法である。この方法によっ
て血中の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の濃度が大幅に低
下し、症状の改善がみられている。しかしながらこの方
法では大量の健常血漿が必要となり高価であるばかりで
なく、該療法処置中に血清肝炎などの感染の危険性を伴
うために広く普及するには至っていない。

また、血漿交換療法では血漿中のすべての成分が除かれ
、健常血漿と交換されるわけであるが、これに対して病
因物質である腎糸球体基底膜付着性蛋白質を選択的に除
去する目的で、分子サイズにより病因物質を分離する血
漿分離膜法が開発された。この方法は１、膜により血漿
を高分子量画分と低分子量画分に分離し、病因物質が含
まれている高分子量画分を廃棄し、主要蛋白であるアル
ブミンが含まれている低分子量画分を患者に戻す方法で
ある。この方法は、底置（二重濾過血漿分離交換法、阿
岸鉄三編、医学書院（１９８４））にあるように、ＳＬ
Ｅをはじめとする全身性疾患の腎病変のひとつである急
速進行性糸球体腎炎において抗ＧＢＭ抗体がみられ、か
つこの腎炎の発症に抗ＧＢＭ抗体が寄与していると考え
られているところから急速進行性糸球体腎炎に対して用
いられている。しかし、抗ＧＢＭ抗体は、分子量約１６
万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）からなるために、正常
なＩｇＧをはじめとする免疫グロブリンとの分離は必ず
しも充分でなく、腎糸球体基底膜付着性蛋白質を除去す
る際に免疫グロブリンも大量に除去され、さらに病因物
質である抗ＧＢＭ抗体と同等以上の分子量の蛋白質はす
べて除去されるなどの欠点がある。

したがって、現在重篤な患者が透析に至るまでの時間を
薬物以外の手段で延長できたり、最少二の薬物と新規治
療システムとの併用で、患者の社会復帰が早くなるとい
った目的で病因物質である腎糸球体基底膜付着性蛋白質
をより選択的に除去し、体液中の有用成分がほとんど失
われることのない腎糸球体基底膜付着性蛋白質の除去手
段の出現が望まれている。

本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意研究を重ねた結果
、体液中の有効成分をほとんど失うことなくほぼ腎糸球
体基底膜付着性蛋白質を吸着しうる吸着体を見出し、本
発明を完成するに至った。

［課題を解決するための手段］ すなわち本発明は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定されてなる腎糸球体基底膜付
着性蛋白質の吸着体ならびに流体の流入口および流出口
を有する容器、流体および該流体に含まれる成分は通過
できるが、前記腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体は
通過できないフィルター、および前記容器内に充填され
た前記腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体からなる腎
糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装置に関する。

【実施例〕

本明細書において体液とは血液、血漿、血清、腹水、リ
ンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分、
ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。

本発明において腎糸球体基底膜付着性蛋白質とは、腎糸
球体基底膜や腎糸球体基底膜構成成分であるヘパラン硫
酸やコンドロイチン硫酸などのアニオン性官能基に付着
する性質を有する体液中の蛋白質をいう。これらの代表
例として、抗ＧＢＭ抗体、抗ヘパラン硫酸抗体、抗コン
ドロイチン硫酸抗体などがあげられるが、これらに限定
されるわけではない。

腎糸球体基底膜付着性蛋白質の存在を証明する方法とし
ては、底置（日本臨床１９８５年秋期増刊、広範囲血液
、尿化学検査、免疫学的検査−その数値をどう読むか一
日本臨床社刊（１９８５））などにもその数例があるよ
うに種々あり、いかなる方法を用いても構わないが酵素
免疫抗体法（ＥＬＬＳＡ法）が簡便である。つまり、底
置（スピロ、アール、ジー（Ｓｐｌｒｏ、　Ｒ、Ｇ、）
　、ジャーナル争オブ・バイオロジカル・ケミストリー
（Ｊ、ＢＩｏｌ、Ｃｈｅ＊、）　、２４２巻、１９１５
〜１９２２頁、（１９８７））などの標準的方法にした
がって腎糸球体基底膜を抽出したのち、腎糸球体基底膜
を可溶化させる。この腎糸球体基底膜をマイクロプレー
トに固定させたのち患者の体液を接触させる。体液を除
去したのちに蛍光物質、ペルオキシダーゼなどで標識さ
れた免疫グロブリンなどの体液成分に結合する物質と反
応させ、この標識物質の多寡を種々の測定手段で測定し
て、腎糸球体基底膜付着性蛋白質の存在を証明する。

本発明において水不溶性多孔質担体とは、アニオン性官
能基を有する化合物を固定するための水に溶解しない性
質を有する物質をいう。本発明に用いる水不溶性多孔ｉ
担体は、大きな径の連続した細孔を有するものが好まし
い。すなわち腎糸球体基底膜付着性蛋白質は、抗ＧＢＭ
抗体をはじめとして、分子量が１０数万以上の巨大分子
であるために、これを効率よく吸着するためには腎糸球
体基底膜付着性蛋白質が容易に多孔質体内に侵入しうる
ことが必要である。

細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入法がもっとも
よく用いられているが、親水性多孔質体を測定するばあ
いには適用が難しい。これにかわる細孔径の目安として
排除限界分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水
性多孔質体のいずれにも適用できる。排除限界分子量と
は底置（たとえば波多野博之、花卉俊彦著、実験高速液
体クロマトグラフィー、化学同人）などに述べられてい
るごとく、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔内
に侵入できない（排除される）分子のうちもっとも小さ
い分子量をもつものの分子量をいう。

排除限界分子量は、対象とする化合物により異なること
が知られており、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポ
リエチレングリコールなどについてよく調べられている
が、本発明に用いる担体のばあい、腎糸球体基底膜付着
性蛋白質にもっとも類似していると思われる球状蛋白質
を用いてえられた値を用いるのが適当である。

排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質担体を用いて検
討した結果、腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着に適当
な細孔径の範囲は、４０万以上８０００万以下であるこ
とが明らかになった。すなわち４０万未満の排除限界分
子量をもつ水不溶性多孔質担体を用いたばあいには腎糸
球体基底膜付着性蛋白質の吸着量は小さく実用に耐えな
（なる傾向がある。一方排除限界分子量が大きくなるに
つれて、腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着量は増加す
るがやがて頭打ちとなり、排除限界分子量が８０００万
以上になると表面積が少なすぎ吸着量は目だって低下す
るばかりでなく、目的とする腎糸球体基底膜付着性蛋白
質以外の吸着、すなわち非特異吸着が増加し選択性がい
ちじるしく低下する傾向がある。

したがって本発明に用いる水不溶性多孔質担体の好まし
い排除限界分子量は４０万以上８０００万以下であり、
さらに好ましくはより選択性吸着容量の大きい点から６
０万以上２０００万以下であるのがよい。

つぎに水不溶性多孔質担体の多孔構造については表面多
孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が吸着容量が
大きいという点から２０％以上で”あることが望ましい
。水不溶性多孔質担体の形状は、粒状、球状、繊維状、
膜状、ホローファイバー状など任意の形状を選ぶことが
できる。

粒状の水不溶性多孔質担体を用いるばあい、その粒径は
１−未満のばあい圧カ績失が大きく、５０００虜をこえ
るばあい吸着容量が小さい点がら１摩以上５０００ρ以
下であるのが好ましい。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機性、無機性の
いずれであってもよいが、目的とする腎糸球体基底膜付
着性蛋白質以外の体液成分の吸着（いわゆる非特異吸着
）の少ないものが好ましい。親水性であるほうが非特異
吸着が少ないので水不溶性多孔質担体は疎水性であるよ
りも、親水性であるほうが好ましい。

さらに、水不溶性多孔質担体表面には、リガンドの固定
化反応に用いうる官能基が存在していると好都合である
。これらの官能基の代表例としては、水酸基、アミノ基
、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノ
ール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、スクシニ
ルイミド基、酸無水物基などがあげられるが、これらに
限定されるわけではない。

また、水不溶性多孔質担体は前記官能基のなかでも水酸
基を有する化合物よりなるものであるばあい非特異吸着
が少ないので、とくに好ましい。これら官能基をスペー
サーとして導入された水不溶性多孔質担体も用いうろこ
とはいうまでもない。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および／またはセルロースなどの天然高分
子を原料とする多孔質ポリマーハードゲルなどがあげら
れるが、これらに限定されるわけではない。

本発明の吸着体を体外循環治療に用いる際には、”血液
、血漿のごとき高粘性流体を高速で流す必要があるため
に、圧密化を引き起こさない充分な機械的強度を有する
硬質水不溶性多孔質担体を用いるのが好ましい。すなわ
ち硬質水不溶性多孔質担体とは後記参考例に示すごとく
、水不溶性多孔質担体を円筒状カラムに均一に充填し、
水性流体を流通したばあいの圧力損失と流速との関係が
少なくとも０．３ｋｇ／ｃｊまで直線関係にあるものを
いう。

本発明の吸着体のアニオン性官能基は、ｐＨが中性付近
で負に帯電するような官能基であればいかなるものも使
用しうる。これらの代表例としては、カルボキシル基、
スルホン酸基、スルホン基、硫酸エステル基、シラノー
ル基、リン酸エステル基、フェノール性水酸基などがあ
げられるが、これらに限定されるものではない。

アニオン性官能基を有する化合物としては、１分子あた
りひとつのアニオン性官能基を有する化合物であっても
、また複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化
合物であってもよい。ポリアニオン化合物は、腎糸球体
基底膜付着性蛋白質に対する親和性が大きく、また単位
量の水不溶性多孔質担体に多くのアニオン性官能基を導
入しやすいので好ましい。なかでも分子量が１０００以
上のポリアニオン化合物は親和性、アニオン性官能基導
入量の点で好ましい。ポリアニオン化合物が有するアニ
オン性官能基は１種類であってもよいし、複数の種類で
あってもよい。

本発明に用いるポリアニオン化合物の代表例としては、
ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン
酸、ポリビニルリン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリ
スチレンリン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイ
ン酸共重合体などの合成ポリアニオン化合物、およびヘ
パリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン、コンドロ
イチン硫酸、ホスホマンナンなどのアニオン性官能基含
有多糖類があげられるが、これらに限定されるわけでは
ない。

本゛発明の吸着体に固定されるアニオン性官能基を有す
る化合物は１種類であってもよいし、２種類以上であっ
てもよい。

本発明の吸着体は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定された状態のものをいう。そ
のようなアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる状態をうるためにアニオン性官能基を水不溶性多孔
質担体に導入する方法としては公知の種々の方法を特別
な制限なしに用いることができるが、そのようなアニオ
ン性官能基を有する化合物が固定されてなる状態をうる
ためのアニオン性官能基の担体への導入方法は種々あり
、いかなる方法で導入してもよく、代表的な導入方法と
しては、（１）　　アニオン性官能基または容易にアニ
オン性官能基に変換しうる官能基を含有する化合物をモ
ノマーまたは架橋剤として用いる重合によって吸着体を
形成させる方法、 （′２Ｊ　　アニオン性官能基を含有する化合物を水不
溶性多孔質担体に固定させる方法、 （３）　　アニオン性官能基を形成する化合物と水不溶
性多孔質担体とを直接反応させることによって、水不溶
性多孔質担体にアニオン性官能基を有する化合物を固定
させる方法 などがあげられる。

もちろんガラス、シリカ、アルミナなどもともとアニオ
ン性官能基を含有する化合物を試薬として用いてもよい
。

（１）の方法において用いるアニオン性官能基または容
易にアニオン性官能基に変換しうる官能基を含をするモ
ノマーまたは架橋剤の代表例としては、アクリル酸およ
びそのエステル、メタクリル酸およびそのエステル、ス
チレンスルホン酸などがあげられるが、これらに限定さ
れるわけではない。

（２）の方法、すなわちアニオン性官能基を含有する化
合物を水不溶性多孔質担体に固定させる方法としては、
物理的吸着による方法、イオン結合による方法、共有結
合により固定する方法などがあり、いかなる方法を用い
てもよいが、吸着体の保存性ならびに安定性のためには
アニオン性官能基含有化合物が脱離しないことが重要で
あるので、強固な固定が可能な共有結合法が望ましい。

共有結合によりアニオン性官能基含有化合物を固定させ
るばあい、アニオン性官能基含有化合物がアニオン性官
能基以外に固定に利用できる官能基を有するのが好まし
い。

固定に利用できる官能基の代表例としては、アミノ基、
アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシニルイ
ミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン
基、エポキシ基、シラノール基などがあげられるが、こ
れらに限定されるわけではない。

これらの官能基を有するアニオン性官能基含有化合物は
多数存在するが、実施例に記載した、タウリン、スルフ
ァニル酸、グリシン、ホスホリルエタノールアミンなど
はその一例である。

また、アニオン性官能基を含有する化合物のうち硫酸エ
ステル基を含有する化合物の代表例としてはアルコール
、糖類、グリコールなどの水酸基含有化合物の硫酸エス
テルがあげられるが、これらのなかでも多価アルコール
の部分硫酸エステル化合物、とりわけ糖類の硫酸エステ
ル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官能基の双方を
含んでいるうえに、生体適合性および活性ともに高く、
さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔質担体に固定
しうろことからとくに好ましい。

つぎに、（３）の方法、すなわちアニオン性官能基を形
成する化合物と水不溶性多孔質担体とを反応させること
によって、水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有
する化合物を固定させてアニオン性官能基を導入する方
法の代表例として水酸基含有多孔質担体に硫酸エステル
基を導入する反応があげられる。このばあい、水酸基含
有水不溶性多孔質担体とクロロスルホン酸、濃硫酸など
の試薬を反応させることによって直接硫酸エステル基を
導入することができる。

導入されるアニオン性官能基の量は、吸着体１ｍｌ’あ
たり０．０１．ｃｚｍｏ１以上１０■ｏｌ以下が好まし
い。０．Ｏ１μｍｏ１未満のばあい吸着能力が充分でな
く、ｌＯ■ｍｏｌをこえるばあい非特異吸着が多すぎて
実用に供することが困難になる。より好ましいアニオン
性官能基導入量は１μｌｌ０１以上１００μｎｏ１以下
であるのがよい。

本発明の吸着体を治療に用いるには種々の方法がある。

もっとも簡便な方法としては患者の血液を体外に導出し
て血液バッグに貯め、これに本発明の吸着体を混合して
腎糸球体基底膜付着性蛋白質を除去後、フィルターを通
して吸着体を除去し、血液を患者に戻す方法がある。こ
の方法は、￥ｉ雑な装置を必要としないが、１回の処理
量が少なく治療に時間を要し、操作が煩雑になるという
欠点を有する。

つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体外循環回路に
組み込みオンラインで吸着除去を行うものである。すな
わち流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
質担体にアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体は通過できな
いフィルター、および前記容器内に充填された前記腎糸
球体基底膜付着性蛋白質の吸着体からなる腎糸球体基底
膜付着性蛋白質の除去装置に体液を通液する方法が簡便
で好ましい。

第２図に本発明の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装
置の一実施例の概略断面図を示す。

第２図中、（１）および（２）はそれぞれの流体の流入
口と流出口、（３）は本発明の吸着体、（４）および（
５）は流体および流体に含まれる成分は通過できるが本
発明の吸着体は通過できないフィルターまたはメツシュ
、（６）はカラム、（７）は容器である。

ここで流体の流入口側のフィルター（４）は存在しなく
てもよい。

本発明の吸着体の適用可能な腎炎の代表例としては、前
述のループス腎炎のほかに、グツドパスチャー症候群、
急速進行性糸球体腎炎などがあるが、これらに限定され
るわけではない。

以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明す−るが
、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない
。

参考例 両端に孔径１５ａｍのフィルターを装着したガラス製円
筒カラム（内径９關、カラム長さ１５０關）にアガロー
スゲル（バイオラド（Ｂｌｏｒａｄｏ）社製のバイオゲ
ルＡ５ａ＋（Ｂｉｏｇｅｌ　Ａ５ｍ）　、粒径５０〜１
００メツシユ）、ポリマー硬質ゲル（東ソー■製のトヨ
パールＨＷ８５、粒径５０〜１００虜、およびチッソ■
製のセルロファインＣＣ−７００ｍ　、粒径４５〜１０
５　）ｓ）をそれぞれ均一に充填しベリスタルティック
ポンプによりカラム内に水を流通し、流速と圧力損失Δ
Ｐとの関係を求めた。その結果を第１図に示す。

同図より明らかなように軟質ゲルであるアガロースゲル
は一定の流速以上では圧密化をおこし、圧力を増加させ
ても流速が増加しないのに対し、トヨパール、セルロフ
ァインなどの硬質ゲルは圧力の増加にほぼ比例して流速
が増加する。

製造例１ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ３（商品名、チ
ッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量５０００万、粒
径４５〜１０５　Ａｍ）　１００　ｍｌに２０％（重量
％、以下同様）　ＮａＯＨ４０Ｈ、ヘプタン１２０　ｇ
およびノニオン系界面活性剤トウィーン２Ｇ　（商品名
、花王アトラス■製）を１０滴（０，５ｍ１）加えた。

４０℃で２時間撹拌後、エピクロルヒドリン５０゜を加
えて２時間撹拌し、ゲルを水洗濾過し、エポキシ基の導
入されたセルロースゲル（以下、エポキシ化ゲルという
）をえた。

実施例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにスルファニル
酸０．１７ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐＨ９，９に調
整した溶液を加え、常温で２４時間振盪した。

その後ゲルを濾別して、０．５％モノエタノールアミン
水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してス
ルファニル酸が固定されたセルロースゲルをえた。

固定されたスルファニル酸により導入されたアニオン性
官能基量は、吸着体１　ｍｌあたり８．５μｍｏｌであ
った。

実施例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにホスホリルエ
タノールアミン０．１ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐＨ
９，８に調整した溶液を加え、４０℃で４時間振盪した
。その後ゲルを濾別して０．５％モノエタノールアミン
水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してホ
スホリルエタノールアミンが固定されたセルロースゲル
をえた。

固定されたホスホリルエタノールアミンにより導入され
たアニオン性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり４μｓｏ
ｌであった。

実施例３ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌに分子量的５０
００．イオウ含量１５％のデキストラン硫酸ナトリウム
４ｇを水５　ｍｌに溶解してｐＨ９に調整した溶液を加
え、４５℃で１６時間振盪した。その後、ゲルを濾別し
て、２月食塩水溶液、０，５Ｍ食塩水溶液および水を用
いてこの順に洗浄し、０．５％モノエタノールアミン水
溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してデキ
ストラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルを
えた。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１　ｍｌあたり１０μｓｏｌであ
った◎ 実施例４ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにグリシン０．
２２ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐＨ９，８に調整した
溶液を加えて常温で２４時間振盪した。その後、ゲルを
濾別して、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加え
て振盪し未反応のエポキシ基を封止してグリシンが固定
されたセルロースゲルをえた。

固定されたグリシンにより導入されたアニオン性官能基
量は、吸着体１　ｍｌあたり９μｓｏｌであった。

実施例５ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにタウリン０．
３７．をｌｏｍｌの水に溶解してｐＨ９，０に調整した
溶液を加えて常温で２４時間振盪した。その後、ゲルを
濾別して、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加え
て振盪し未反応のエポキシ基を封止してタウリンが固定
されたセルロースゲルをえた。

固定されたタウリンにより導入されたアニオン性官能基
量は、吸着体１　ｍｌあたり５μｓｏｌであった。

実施例６ 製造例１で用いたものと同様のＣＫゲルＡ３．１０ｍ１
を水洗後吸引濾過し、これにジメチルスルホキシド６　
ｍｌ　、　２Ｎ−ＮａＯＩＩ２．６ｍｌ、エピクロルヒ
ドリン１．５ｍｌを加えて４０℃で２時間撹拌した。反
応後ゲルを濾別し、水洗してエポキシ基の導入されたセ
ルロースゲルをえた。

これに濃アンモニア水６ｍｌを加え４０℃で２時間反応
させてアミノ化セルロースゲルをえた。

このゲル５　ｍｌに分子ｆｆ１１９万〜５０万のポリア
クリル酸ナトリウム０．２ｇを１０ｍ１の水に溶解して
ｐＨ４，５に調整した溶液を加え、さらに■−エチルー
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド２
００■をｐＨ４，５に保ちながら添加し、４℃で２４時
間振盪した。反応後ゲルを濾別し、水洗してポリアクリ
ル酸の導入されたセルロースゲルをえた。

固定されたポリアクリル酸により導入されたアニオン性
官能基量は、吸着体１　ｍｌあたり１４μ＋ａｏｌであ
った。

実施例７ 多孔質セルロースゲルをＣＫゲルＡ２２（商品名、チッ
ソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量２０００万、粒径
４５〜１０５泊）、セルロファインＧＣＬ−２０００ｍ
　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子
量３００万、粒径４５〜１０５　韓）　、セルロファイ
ンＧＣ−７００ｍ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白
質の排除限界分子量４０万、粒径４５〜１０５泊）、セ
ルロファインＣＣＣＣ−２Ｏ０商品名、チッソ■製、球
状蛋白質の排除限界分子量１２万、粒径４５〜１０５刷
）、セルロファインＧＣＬ−９０（商品名、チッソ■製
、球状蛋白質の排除限界分子量３．５万、゛粒径４５〜
１０５刷ｃｍ）にかえたほかは製造例１および実施例３
と同様にしてデキストラン硫酸ナトリウムの固定された
セルロースゲルをえた。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１ｍｌあたりそれぞれ１Ｂ、１８
．２４．３０．３７μａｏｌであった。

実施例８ エポキシ化架橋アガロースゲルであるエポキシアクティ
ベイティッドセファロースＣＬ−６Ｂ（商品名、ファル
マシアファインケミカルズ社製、球状蛋白質の排除限界
分子ｆｆｉ　４００万、粒径４５〜１８５．ｉａ）ゲル
を用いたほかは実施例３と同様の方法でデキストラン硫
酸ナトリウムを固定した。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり２０μ０１Ｏ１であ
った。

実施例９ ポリメタクリル酸メチルを主成分とする親水性多孔性硬
質ヒドロゲルであるＰＰ−ＨＧ　　（商品名、三菱化成
■製、球状蛋白質の排除限界分子量４００万、粒径１２
０遍）を用いたほかは製造例１および実施例３と同様に
してデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたゲルをえ
た。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり９μｍｏｌであった
。

実施例１０ 実施例６と同様にしてえたアミノ化セルロースゲル２ｇ
に、実施例３で用いたものと同様の分子間約５０００、
イオウ含１１１５％のデキストラン硫酸ナトリウム４ｇ
を　０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）８ｍｌに
溶解した液を加え室温で１６時間振盪した。反応後Ｎａ
ＣＮＢＩｌｓ　２０ｍｇを加え室温で３０分攪拌後、４
０℃で４時間加熱したのちゲルを濾別水洗してデキスト
ラン硫酸ナトリウムの固定されたセルロースゲルをえた
。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基量は、吸着体１ｍｌあたり１８μ藷ｏ１であっ
た。

実施−例１１ 実施例１〜６および１０でえられた吸着体および比較の
目的で製造例１で用いた担体のＣＫゲルＡ３を生理食塩
水で洗浄したのち、各吸着体１．Ｏｍｌずつをポリプロ
ピレン製マイクロチューブ（容量　７　ｍｌ　）にとり
、これに腎糸球体基底膜付着性蛋白質を含む血清４．Ｏ
ｍｌずつを加え、３７℃で２時間振盪した。この吸着操
作終了後、遠心分離してゲルを沈降させ、採取した上清
中の腎糸球体基底膜付着性蛋白質濃度を酵素免疫抗体法
（ＥＬＩＳＡ法）により測定した。つまり、ヒトの腎臓
より抽出した糸球体基底膜をコートしたプレートに希釈
した検体を加え、腎糸球体基底膜と血清中の腎糸球体基
底膜付着性蛋白質との反応を行い、ペルオキシダーゼ標
識抗ヒト免疫グロブリン抗体を滴下し、酵素発色反応を
５ＬＴ−２１０（商品名、ラボサイエンス■製）にて測
定波長４８６ｎ＋ｇで測定した。第１表に、各吸着体に
固定されたアニオン性官能基を有する化合物乞、および
原血清の腎糸球体基底膜付着性蛋白質濃度に対する各吸
着体による吸着後の上清中の腎糸球体基底膜付着性蛋白
質濃度を上清中の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の濃度と
して百分率で示す。

第１表から水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を宵
する化合物が固定されてなる吸着体は、腎糸球体基底膜
付着性蛋白質を吸着しているのがわかる。そして、デキ
ストラン硫酸が固定された吸着体の腎糸球体基底膜付着
性蛋白質の吸着能がとくに優れていることがわかる。

［以下余白］ 第　　１　　表 実施例１２ 実施例３および７〜９でえられた兎着体を用いたほかは
実施例１１と同様の方法にしたがって上清中の腎糸球体
基底膜付着性蛋白質濃度を求めた。えられた結果を用い
た・種々の水不溶性多孔質担体名とともに第２表に示す
。

第２表から、排除限界分子量が４０万以下の水不溶性多
孔質担体である実施例７のセルロファインＣＣ１００ｍ
　、セルロファインＱＣ−２００ｍおよびセルロファイ
ンＧＣＬ−９０の腎糸球体基底膜付着性蛋白質吸着能が
おとることがわかる。また、逆に、排除限界分子量を５
０００万と大きくしすぎても実施例３のセルロースＣＫ
ゲルＡ３の結果から腎糸球体基底膜付着性蛋白質吸着能
は落ちる傾向にあることがわかる。

［以下余白］ 第　　２　　表 ［発明の効果］ 本発明の吸着体およびそれを用いた除去装置は体液より
腎糸球体基底膜付着性蛋白質を除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

第１図は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフであり、第２図は本発明の腎
糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装置の一実施例の概略
断面図である。 （図面の主要符号） （１）二流入口 （ｚ：流出口 （３）：吸着体 （４）、（５）：フィルター （刀：容　器 特許出願人　　鐘淵化学工業株式会社 才１図 圧力損失、４　Ｐ　（ｋｇ／Ｃｍ２） 第２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有する化
   合物が固定されてなる腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸
   着体。 ２　水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量
   が４０万以上８０００万以下である請求項１記載の腎糸
   球体基底膜付着性蛋白質の吸着体。 ３　水不溶性多孔質担体が水酸基を有する化合物よりな
   る請求項１記載の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体
   。 ４　アニオン性官能基を有する化合物が、１分子内に複
   数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化合物であ
   る請求項１記載の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体
   。 ５　流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
   び該流体に含まれる成分は通過できるが、請求項１記載
   の腎糸球体基底膜付着性蛋白質の吸着体は通過できない
   フィルター、および前記容器内に充填された前記腎糸球
   体基底膜付着性蛋白質の吸着体からなる腎糸球体基底膜
   付着性蛋白質の除去装置。