JPS60126227A - 発熱性物質吸着用不溶性担体 - Google Patents
発熱性物質吸着用不溶性担体Info
- Publication number
- JPS60126227A JPS60126227A JP58234856A JP23485683A JPS60126227A JP S60126227 A JPS60126227 A JP S60126227A JP 58234856 A JP58234856 A JP 58234856A JP 23485683 A JP23485683 A JP 23485683A JP S60126227 A JPS60126227 A JP S60126227A
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- Japan
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- pyrogenic
- immobilized
- solution
- insoluble
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔利用分野〕
本発明はコリスチン類およびポリミキシン類から選ばれ
た化合物を支持体に固定化した、発熱性物質吸着用不溶
性担体に関する。
た化合物を支持体に固定化した、発熱性物質吸着用不溶
性担体に関する。
発熱性物質の本体はグラム陰性菌のりボポリサツカシイ
ド中のりン脂賀であるリピッドＡ部分であることが知ら
れている。リピッドＡによる発熱の機構は、顆粒球中に
存在する白血球由来発熱性物質および組繊細胞中の内因
性発熱性物質がリピッドＡにより血中に放出され、これ
が視床下部などの温熱中枢に働いて発鶴′＆−起こすた
めン言われている。このような重篤な有害作用のために
ヒト生体内に直接投与する注射用製剤に関しては、発熱
性物質が含まれることは本来許されない。従って、注射
剤から発熱性物質を除去する手段が必要となる。
ド中のりン脂賀であるリピッドＡ部分であることが知ら
れている。リピッドＡによる発熱の機構は、顆粒球中に
存在する白血球由来発熱性物質および組繊細胞中の内因
性発熱性物質がリピッドＡにより血中に放出され、これ
が視床下部などの温熱中枢に働いて発鶴′＆−起こすた
めン言われている。このような重篤な有害作用のために
ヒト生体内に直接投与する注射用製剤に関しては、発熱
性物質が含まれることは本来許されない。従って、注射
剤から発熱性物質を除去する手段が必要となる。
発熱性物質を除去する方法としては蒸留水の場合に紘酸
またはアルカリを加えて再蒸留する方法、その他の注射
剤の場合には活性アルミナ、活性炭、カオリン、イオン
交換樹脂による吸着法などが用いられている。しかじな
か（酵素や抗体を含む製剤ある“いは血液製剤から発熱
性物質を除去するには、多くの困難が伴い、簡易な方法
が望まれていた。
またはアルカリを加えて再蒸留する方法、その他の注射
剤の場合には活性アルミナ、活性炭、カオリン、イオン
交換樹脂による吸着法などが用いられている。しかじな
か（酵素や抗体を含む製剤ある“いは血液製剤から発熱
性物質を除去するには、多くの困難が伴い、簡易な方法
が望まれていた。
本発明者らは、発熱性物質の簡便な除去方法について鋭
意研究した結果、ポリミキシン系抗１生物質の中で価格
的にも有利なコリスチン類あるいはポリミキシン類を用
い、そのｒ−アミン基と支持体を結合い〔固定化させた
不溶性担体が発熱性物質の除去に有用であることを見出
し本発明を完成した。
意研究した結果、ポリミキシン系抗１生物質の中で価格
的にも有利なコリスチン類あるいはポリミキシン類を用
い、そのｒ−アミン基と支持体を結合い〔固定化させた
不溶性担体が発熱性物質の除去に有用であることを見出
し本発明を完成した。
本発明で用いられ基コリスチン類あるいはポリミキシン
類は有芽胞細菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａの
培養液中に産生されるポリペプチド系抗生物質であシ下
記のような構造式を有する。
類は有芽胞細菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａの
培養液中に産生されるポリペプチド系抗生物質であシ下
記のような構造式を有する。
Ｌ−Ｔｈｒ ←Ｒ，←Ｒ１
式中Ｘ 、Ｒ，、Ｒ，は下記の関係にある。
これら以外にもコリスチンＡ、Ｈの硫酸塩、メタンスル
ホン酸ナトリウム、塩酸塩、塩基、またはポリミキシン
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよびこれらの硫酸塩も好適に用い
られる。これらはいずれも日本薬局方収載の医薬品であ
り、容易に入手可能である。
ホン酸ナトリウム、塩酸塩、塩基、またはポリミキシン
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよびこれらの硫酸塩も好適に用い
られる。これらはいずれも日本薬局方収載の医薬品であ
り、容易に入手可能である。
支持体として社アガロース、セルロース、ソノ他の不溶
性？リサツカライドまたはポリアクリルアミド、樹脂、
ガラス等が挙けられる。これら支持体へのコリスチン類
あるいはポリミキシン類の同定化の方法は特に限定され
るものではなく、既知の方法で行うことができる。
性？リサツカライドまたはポリアクリルアミド、樹脂、
ガラス等が挙けられる。これら支持体へのコリスチン類
あるいはポリミキシン類の同定化の方法は特に限定され
るものではなく、既知の方法で行うことができる。
（２） セルロース（Ｎａｔｕｒｅ４ｇｇ、５７６（１
９６１１）（４） ポリアクリルアミド（Ｂｌｏｅｈｅ
ｍ、、８，４０７４（１９６６））具体的に例示すると
、コリスチン類またはポリミキシン類を含む水溶液と活
性化された支持体を混合し、室温でｌ〜ｉｏａ寺間指盪
後、反応停止剤を加えることによってコリスチン類また
はポリミキシン類を固定化する。こうして回収した担体
は洗浄後乾燥処理することによって、発熱性物質吸着用
不溶性担体が提供される。固定化のメカニズムとしては
コリスチン＠またはポリミキシンゆのｆ −Ｎ ｔ（、
基が支持体の反応基と共有結合しているものと考えられ
る。
９６１１）（４） ポリアクリルアミド（Ｂｌｏｅｈｅ
ｍ、、８，４０７４（１９６６））具体的に例示すると
、コリスチン類またはポリミキシン類を含む水溶液と活
性化された支持体を混合し、室温でｌ〜ｉｏａ寺間指盪
後、反応停止剤を加えることによってコリスチン類また
はポリミキシン類を固定化する。こうして回収した担体
は洗浄後乾燥処理することによって、発熱性物質吸着用
不溶性担体が提供される。固定化のメカニズムとしては
コリスチン＠またはポリミキシンゆのｆ −Ｎ ｔ（、
基が支持体の反応基と共有結合しているものと考えられ
る。
こうして得られた不溶性担体中のコリスチン類またはポ
リミキシ／かの固定化量は担体１−当９５〜５０１１ｂ
ｙであり、また発熱性物質の吸着能は担体ｌ−当り０．
１〜１０１’ｌｌＦであることが判明した。
リミキシ／かの固定化量は担体１−当９５〜５０１１ｂ
ｙであり、また発熱性物質の吸着能は担体ｌ−当り０．
１〜１０１’ｌｌＦであることが判明した。
またこの不溶性担体は）々クチ法めるいはカラム法によ
シ発熱性物質の除去に用いることができる。
シ発熱性物質の除去に用いることができる。
本発明によシ調製される不溶性担体は発熱性物質の除去
に役立つだけで°ｔく高濃度塩類による溶出も可能でｔ
！Ｊ ｊ５、検体の生理活性を低下させることもなく、
またに液の澄明化などの効果を有し、また担体の再生も
容易である。
に役立つだけで°ｔく高濃度塩類による溶出も可能でｔ
！Ｊ ｊ５、検体の生理活性を低下させることもなく、
またに液の澄明化などの効果を有し、また担体の再生も
容易である。
従って本発明により得られる不溶性担体を用いれば、血
漿製剤あるいは生理学的製剤等の発熱性物質を確実に吸
着除去でき、より安全な注射用製剤を供給ならしめるこ
とができる。
漿製剤あるいは生理学的製剤等の発熱性物質を確実に吸
着除去でき、より安全な注射用製剤を供給ならしめるこ
とができる。
以下に、本発明を実施例および実験例により説明するが
、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない
。
、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない
。
実施例１
粒子径４０〜１９０μのセファロース４Ｂ（スウェーデ
ン、ファルマシア社製）約３１に、臭化シアン７５０Ｆ
を投入しＣかきまぜながら、４Ｎ−ＮａＯＨでｐｒ（を
１１に調整する。この間温度を１０〜２０℃に保った。
ン、ファルマシア社製）約３１に、臭化シアン７５０Ｆ
を投入しＣかきまぜながら、４Ｎ−ＮａＯＨでｐｒ（を
１１に調整する。この間温度を１０〜２０℃に保った。
ｐＨをＨに保たせながら約１０分間かきまぜを続ける。
次いでこの反応液を濾過して濾液を除き、残渣を集めて
（ＬＩＭ炭酸水素ナトリウムで洗浄し、活性化セファロ
ース４Ｂ約３２を得た。
（ＬＩＭ炭酸水素ナトリウムで洗浄し、活性化セファロ
ース４Ｂ約３２を得た。
そして、ｉ ｚ ＜ｗ７ｖ）ａ度のコリスチンＡ含有水
浴液Ｌｌ）ＩＩに上記の活性化セファロ・−ス４Ｂ約洗
浄し°Ｃ除いた後、乾燥処理を施して不溶性コリスチン
を得た。このものは２ｍＰβの発熱性物質結合能を有し
ていた。
浴液Ｌｌ）ＩＩに上記の活性化セファロ・−ス４Ｂ約洗
浄し°Ｃ除いた後、乾燥処理を施して不溶性コリスチン
を得た。このものは２ｍＰβの発熱性物質結合能を有し
ていた。
実施例２
ＣＮＢ ｒ活性化セファロース４Ｂを０．１Ｍ炭酸水素
ナトリウム緩衝液（ｐＨ＆３．以下濾液と記す）で懸濁
し調整した。一方、同様の緩衝液を用いてポリミキシン
Ｂ、の１４（ｗ／マ）溶液を調整した。これらをｌ：２
の容量比で混合し、室温で約２時間攪拌した。その後、
０．１ＭＴｒ ｉ ＠−ＭＣＩ 緩衝液（ｐＨ＆ｏ）次
いで乾燥処理を施し゛Ｃ５不溶北ポリミキシンーセファ
ロース４ｎｆ得た、このものは１．５ ｒｎ５１／Ｍｌ
の発熱性物質吸着能を有し°Ｃいた。
ナトリウム緩衝液（ｐＨ＆３．以下濾液と記す）で懸濁
し調整した。一方、同様の緩衝液を用いてポリミキシン
Ｂ、の１４（ｗ／マ）溶液を調整した。これらをｌ：２
の容量比で混合し、室温で約２時間攪拌した。その後、
０．１ＭＴｒ ｉ ＠−ＭＣＩ 緩衝液（ｐＨ＆ｏ）次
いで乾燥処理を施し゛Ｃ５不溶北ポリミキシンーセファ
ロース４ｎｆ得た、このものは１．５ ｒｎ５１／Ｍｌ
の発熱性物質吸着能を有し°Ｃいた。
実験例１
コリス壬ンＡ（７５０９）をＣＮＢ ｒ活性化セファロ
ース４ Ｂ （ｒｓｏ肩ｔ）に固足化し°Ｃ得られた不
溶性担体をカラムに充填し、０．３ Ｍ Ｎ ａ Ｃλ
浴液で調製した。
ース４ Ｂ （ｒｓｏ肩ｔ）に固足化し°Ｃ得られた不
溶性担体をカラムに充填し、０．３ Ｍ Ｎ ａ Ｃλ
浴液で調製した。
マウス腹水から摂取したモノクローナル抗体溶液（１０
０Ｍｔ）をこのカラムにアゾライし、ｂ；；：速１００
１／ｈ ｒで０．３Ｍ ＮａＣｊｌ溶液を用いて溶出し
、モノクローナル抗体画分を回収した。この給米、処理
前の発熱性物引濃度がｔｏｎｙ、〆ａであったのに対し
て処理後は０Ａ−１ｎ！／／＋ｅとなった。
０Ｍｔ）をこのカラムにアゾライし、ｂ；；：速１００
１／ｈ ｒで０．３Ｍ ＮａＣｊｌ溶液を用いて溶出し
、モノクローナル抗体画分を回収した。この給米、処理
前の発熱性物引濃度がｔｏｎｙ、〆ａであったのに対し
て処理後は０Ａ−１ｎ！／／＋ｅとなった。
実験例２
ポリアクリルアミｒによる内定化ポリミキシンＢ１を用
いて実践例１と同様の実験を行った。その結果、発熱性
物質の濃度は１ ｎ ｙＡ’以下となった。
いて実践例１と同様の実験を行った。その結果、発熱性
物質の濃度は１ ｎ ｙＡ’以下となった。
特許出願人 株式会社ミドリ十字
代理人弁理士 庄 司 隆
・ｄへ
手続ネｍ正轡く自発） ’Ｌ−
昭和５９年 ２月１６日
特許庁長官殿
１、事件の表示
昭和５８年特許願第２３４８５６号
２、発明の名称
発熱性物質吸着用不溶性担体
３、補正をする者
＠例との関係 特許出願人
氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字
４、代理人
住所 〒５４１ 大阪市東区今ｍ１丁目１５番地の１株
式会社ミドリ十字内 電話（０６１２２８−０７００ ６、補正によりＩ！加する発明の数 なし７、補正の対
象 ｌｌｌｌｌＩｌｌ円の発明の名称の欄、ｖｆ軒請求
の範囲の欄、発明の詳細な説明のＷ − 明 １［１書（訂正） １、発明の名称 発熱性物質吸着用不溶性担体 ２、特許請求の範囲 コリスチンにクーＺ入に声−に町ｊ−；−■匁Ａ を固
定化したことを特徴とづる発熱性物質吸着用不溶性担体
。
式会社ミドリ十字内 電話（０６１２２８−０７００ ６、補正によりＩ！加する発明の数 なし７、補正の対
象 ｌｌｌｌｌＩｌｌ円の発明の名称の欄、ｖｆ軒請求
の範囲の欄、発明の詳細な説明のＷ − 明 １［１書（訂正） １、発明の名称 発熱性物質吸着用不溶性担体 ２、特許請求の範囲 コリスチンにクーＺ入に声−に町ｊ−；−■匁Ａ を固
定化したことを特徴とづる発熱性物質吸着用不溶性担体
。
３、発明の詳細な説明
〔利用分野〕
本梵明はコリスチンメタンスルホン酸ナト１戸ンムを支
持体に固定化した、発熱性物質愚老用不溶性担体に関づ
“る。
持体に固定化した、発熱性物質愚老用不溶性担体に関づ
“る。
発熱性物質の本体はグラム陰性菌のりポポリリッカライ
ド中のリン脂質であるリピッドＡ部分であることが知ら
れている。リピッドＡによる発熱の機構は、顆粒球中に
存在する白面球由来発熱性物質および組繊細胞中の内因
性発熱性物Ｗ’［ｈＳ ＩリピッドＡにより血中に放出
され、これが視床下８１〜／ｒどの温熱中枢に動いて発
熱を起こづためと言われている。このような重篤な有害
作用のためにヒト生体内の直接投与する注射用製剤に関
しては、光熱性物質が含まれることは本来許されない。
ド中のリン脂質であるリピッドＡ部分であることが知ら
れている。リピッドＡによる発熱の機構は、顆粒球中に
存在する白面球由来発熱性物質および組繊細胞中の内因
性発熱性物Ｗ’［ｈＳ ＩリピッドＡにより血中に放出
され、これが視床下８１〜／ｒどの温熱中枢に動いて発
熱を起こづためと言われている。このような重篤な有害
作用のためにヒト生体内の直接投与する注射用製剤に関
しては、光熱性物質が含まれることは本来許されない。
従１）で、注射剤から発熱性物質を除去する手段が必要
となる。
となる。
発熱性物質を除去づる方法としては蒸溜水の場合には酸
またはアルカリを加えて再蒸溜する方法、その他の注射
剤の場合には活性アルミナ、活性病、カオリン、イオン
交換樹脂による吸着法などが用いられている。しかしな
がら酵素や抗体を含む製剤あるいは血液製剤から発熱性
物質を除去するには、多くの困難が伴い、簡易な方法が
望まれていＩこ。
またはアルカリを加えて再蒸溜する方法、その他の注射
剤の場合には活性アルミナ、活性病、カオリン、イオン
交換樹脂による吸着法などが用いられている。しかしな
がら酵素や抗体を含む製剤あるいは血液製剤から発熱性
物質を除去するには、多くの困難が伴い、簡易な方法が
望まれていＩこ。
本発明者らは、発熱性物質の簡便な除去方法について鋭
意研究した結果、ポリミキシン系抗生物質の中で価格的
にも右利であり安全性にもずぐれたコリスチンメタンス
ルボン酸ナトリウムを用い、そのＴ−アミノ基と支持体
を結合して固定化させた不溶性担体が発熱性物質の除去
に有用であることを見出し本発明を完成した。
意研究した結果、ポリミキシン系抗生物質の中で価格的
にも右利であり安全性にもずぐれたコリスチンメタンス
ルボン酸ナトリウムを用い、そのＴ−アミノ基と支持体
を結合して固定化させた不溶性担体が発熱性物質の除去
に有用であることを見出し本発明を完成した。
本発明で用いられるコリスチンメタンスルボン酸ナトリ
ウムは右芽胞細菌Ｂａｃｉ ｌ ｌｕｓ ｐｏｌｙｎ＋
ｙｘａの培養液中に産生されるポリペプチド系抗生物質
コリスヂンのメタンスルホン酸す１−リウムであり下記
のような構造式を右づる。
ウムは右芽胞細菌Ｂａｃｉ ｌ ｌｕｓ ｐｏｌｙｎ＋
ｙｘａの培養液中に産生されるポリペプチド系抗生物質
コリスヂンのメタンスルホン酸す１−リウムであり下記
のような構造式を右づる。
これらはいずれも日本桑局方収載の医薬品であり、容易
に入手可能である。
に入手可能である。
支持体としてはアガロース、ヒルロース、その他の不溶
性ポリサッカライドまたはポリアクリルアミド、樹脂、
ガラス等が挙げられる。これら支持体への固定化の方法
は特に限定されるものではなく、既知の方法で行うこと
かできる。
性ポリサッカライドまたはポリアクリルアミド、樹脂、
ガラス等が挙げられる。これら支持体への固定化の方法
は特に限定されるものではなく、既知の方法で行うこと
かできる。
（１） アミノ酸共重合体（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、
、２３６．１９７０（１９６１） ） （２） セルロース（Ｎａｔｕ、ｒｅ、 １８９．５７
６（１９６１））（３） アガロースまたはけファデッ
クス（Ｎａｔｕｒｅ、２１５．１４９１（ｔ９６７）；
Ｎａｔｕｒｅ、２４５．３０５９（１９７０１）（４）
ポリアクリルアミド（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、８．４０
７４（１９６Ｇ） ） 具体的に例示すると、コリスチンメタンスルホン酸す１
−リウムを含む水溶液と活性化された支持体を混合し、
室温で１〜１０時間振盛後、反応停止剤を加えることに
にってコリスヂンメタンスルホン煎ノ１〜リウムを固定
化する。こうして回収した１１ｊ体は洗浄することによ
って、発熱性物質吸着用不溶性１１１体が提供される。
、２３６．１９７０（１９６１） ） （２） セルロース（Ｎａｔｕ、ｒｅ、 １８９．５７
６（１９６１））（３） アガロースまたはけファデッ
クス（Ｎａｔｕｒｅ、２１５．１４９１（ｔ９６７）；
Ｎａｔｕｒｅ、２４５．３０５９（１９７０１）（４）
ポリアクリルアミド（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、８．４０
７４（１９６Ｇ） ） 具体的に例示すると、コリスチンメタンスルホン酸す１
−リウムを含む水溶液と活性化された支持体を混合し、
室温で１〜１０時間振盛後、反応停止剤を加えることに
にってコリスヂンメタンスルホン煎ノ１〜リウムを固定
化する。こうして回収した１１ｊ体は洗浄することによ
って、発熱性物質吸着用不溶性１１１体が提供される。
必要があれば凍結乾燥りることｂできる。固定化のメカ
ニズムどしては］リスチンメタンスルホン酸すｌ〜リウ
ムのγ−Ｎｔｉ 、、 Ｊｘが支持体の反応基と共有結
合しているものと考えられる。
ニズムどしては］リスチンメタンスルホン酸すｌ〜リウ
ムのγ−Ｎｔｉ 、、 Ｊｘが支持体の反応基と共有結
合しているものと考えられる。
こうして得られ−た不溶性担体中のコリスチンメタンス
ルボン酸ナトリウムの固定化但は担体１ ｍｇ当り５〜
５０ ｍｇ７１”あり、また光熱性物質の吸ｇ ｆｌｌ
ｉは担体１ｒｄ、当り０．１〜１Ｑｍｙであることが判
明した。
ルボン酸ナトリウムの固定化但は担体１ ｍｇ当り５〜
５０ ｍｇ７１”あり、また光熱性物質の吸ｇ ｆｌｌ
ｉは担体１ｒｄ、当り０．１〜１Ｑｍｙであることが判
明した。
この不溶性担体はバッヂ払あるいはカラム法により発熱
性物質の除去に用いることかできる。
性物質の除去に用いることかできる。
本発明により調製される不溶性担体は、光熱ｆｌ物質の
除去に役立つだりでなく高濃度塩類による溶出も可能で
あり、検体のうし埋活性を低１；さＵることもなく、ま
た溶液の澄明化などの効果をイ１し、また担体、の再生
も容易である。しかも１本発明で選択したコリスチンメ
タンスルホン酸す１〜リウムは、きわめて毒性が低い化
合物でありしかｂ、フ仁熱性物質との親和性が高いため
他のぺＪＪ〜ド系４シ′Ｌ生物質を利用したのと違い、
血液剤あるいはイし物学的製剤等の発熱性物質を確実に
安全に吸ン１除去て゛ぎ、たどえコリスナンメタンスル
ホン酸ノ１〜リウムが溶出したとしてｂより安全な注口
・ｊ用製剤を供給ならしめることができる。
除去に役立つだりでなく高濃度塩類による溶出も可能で
あり、検体のうし埋活性を低１；さＵることもなく、ま
た溶液の澄明化などの効果をイ１し、また担体、の再生
も容易である。しかも１本発明で選択したコリスチンメ
タンスルホン酸す１〜リウムは、きわめて毒性が低い化
合物でありしかｂ、フ仁熱性物質との親和性が高いため
他のぺＪＪ〜ド系４シ′Ｌ生物質を利用したのと違い、
血液剤あるいはイし物学的製剤等の発熱性物質を確実に
安全に吸ン１除去て゛ぎ、たどえコリスナンメタンスル
ホン酸ノ１〜リウムが溶出したとしてｂより安全な注口
・ｊ用製剤を供給ならしめることができる。
以下に、本発明を実施例および実験例により説明するが
、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない
。なお以下において、発熱性物質試験は局方記載の方法
に準拠した。゛ 実施例１ 粒子径４０〜１９０μのしフッ０−ス４Ｂ（スウェーデ
ン、ファルマシア社製）約３Ｉに、臭化シアン７５０ｇ
を投入してかぎまぜながら、４Ｎ−ＮａＯＨでｐｌ＋を
１１に調整する。この間温度を一１０〜２０℃に保った
。ｐｌ＋を１１に保たせながら約１０分間かきまぜを続
（プる。次いぐこの反応液を濾過して濾液を除き、残渣
を集めて０．１Ｍ炭酸水素ナト１戸シムで洗浄し、活性
化セファロース４１３約３）を得た。
、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない
。なお以下において、発熱性物質試験は局方記載の方法
に準拠した。゛ 実施例１ 粒子径４０〜１９０μのしフッ０−ス４Ｂ（スウェーデ
ン、ファルマシア社製）約３Ｉに、臭化シアン７５０ｇ
を投入してかぎまぜながら、４Ｎ−ＮａＯＨでｐｌ＋を
１１に調整する。この間温度を一１０〜２０℃に保った
。ｐｌ＋を１１に保たせながら約１０分間かきまぜを続
（プる。次いぐこの反応液を濾過して濾液を除き、残渣
を集めて０．１Ｍ炭酸水素ナト１戸シムで洗浄し、活性
化セファロース４１３約３）を得た。
そして、１％（−／ν）濃度のコリスヂンメタンスルホ
ン酸す１−リウム含有水溶液１．ＯＪ！に上記の活性化
セファロース４Ｂ約３．、ｉ！を加え、室温で４時間か
きまぜを続は反応させた後、反応を止めるために０ 、
Ｉ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＩＩＣＩ緩衝液（ｐＨ８，ｏ）１
０λを加え、撹拌し１こ。
ン酸す１−リウム含有水溶液１．ＯＪ！に上記の活性化
セファロース４Ｂ約３．、ｉ！を加え、室温で４時間か
きまぜを続は反応させた後、反応を止めるために０ 、
Ｉ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＩＩＣＩ緩衝液（ｐＨ８，ｏ）１
０λを加え、撹拌し１こ。
反応液中に残った未反応の物質を１１１１１７．’／１
．０゜１Ｍリン酸塩緩衝液＜０．１５Ｍ塩化す１−リウ
１１を含む）および１１＋１４ 、０．０．１ Ｍｉｌ
を酸緩雨液（０，５Ｍ塩化プトリウムを含む）で洗浄し
て除いた後、乾燥処理を施して不溶性コリスヂンΔメタ
ンスルボンｌ！ｉｆトリウムを臂だ。このものは３３ｍ
９ ／ ｄの発熱性物質結合能を右していた。
．０゜１Ｍリン酸塩緩衝液＜０．１５Ｍ塩化す１−リウ
１１を含む）および１１＋１４ 、０．０．１ Ｍｉｌ
を酸緩雨液（０，５Ｍ塩化プトリウムを含む）で洗浄し
て除いた後、乾燥処理を施して不溶性コリスヂンΔメタ
ンスルボンｌ！ｉｆトリウムを臂だ。このものは３３ｍ
９ ／ ｄの発熱性物質結合能を右していた。
実施例２
ＣＮＢｒ活性化レフ７０−ス４Ｂを０．１Ｍ炭酸水素プ
川用リウム緩衝液（ｐＨ１８，３、以下Ａ液と記す）で
懸濁し調製した。一方、１１１様の緩山液を用いてコリ
スヂンＢメタンスルホン酸す］・リウ１１の１％（Ｗ／
Ｖ）溶液を調製した。これらを１：２の容量比で詳合し
、室温で約２時冊撹拌した。イの後、０． Ｉ Ｍ Ｔ
ｒｉｓ−ＩＩｃＩ Ｍ衝液（ｐＨ８，ｏ）を十分ｍに添
加して反応を停止させた後、グル両分を分離した。ゲル
画分をＡ液Ｊ３よび０．５ＭＩＭ化ナトリウム含有０．
１Ｍ酢酸緩衝液（１１１１４、０）で十分に洗浄し、不
溶性コリスチンＢメタンスルボン酸ナトリウムセフ１０
−ス４８ ＠ 冑だ。このものは２．５■／ｄの発熱性
物質吸着能を有してい１．ｌ：。
川用リウム緩衝液（ｐＨ１８，３、以下Ａ液と記す）で
懸濁し調製した。一方、１１１様の緩山液を用いてコリ
スヂンＢメタンスルホン酸す］・リウ１１の１％（Ｗ／
Ｖ）溶液を調製した。これらを１：２の容量比で詳合し
、室温で約２時冊撹拌した。イの後、０． Ｉ Ｍ Ｔ
ｒｉｓ−ＩＩｃＩ Ｍ衝液（ｐＨ８，ｏ）を十分ｍに添
加して反応を停止させた後、グル両分を分離した。ゲル
画分をＡ液Ｊ３よび０．５ＭＩＭ化ナトリウム含有０．
１Ｍ酢酸緩衝液（１１１１４、０）で十分に洗浄し、不
溶性コリスチンＢメタンスルボン酸ナトリウムセフ１０
−ス４８ ＠ 冑だ。このものは２．５■／ｄの発熱性
物質吸着能を有してい１．ｌ：。
実験例１
コリスヂンＡメタンスルホン酸ナトリウム（７０■）を
ＣＮＢｒ活性化セフ７７０−ス４Ｂ（１−５０１１１！
りに固定化して得られＩＣ不溶性担体をカラム１、：
充填シ、０．３ＭＮａＣｌ溶液で調製した。マウス腹水
から接種したモノクローナル抗体溶液（１００−）をこ
のカラムにアプライし、流速ｉｏｏ＊／ｈｒで０．３Ｍ
ＮａＣｌ溶液を用いて溶出し、モノクローナル抗体画分
を回収した。この結果、処理前の発熱性物質濃度が１０
ｎ！ＩＦ／ｄであったのに対しで処理後は検出できなか
った。
ＣＮＢｒ活性化セフ７７０−ス４Ｂ（１−５０１１１！
りに固定化して得られＩＣ不溶性担体をカラム１、：
充填シ、０．３ＭＮａＣｌ溶液で調製した。マウス腹水
から接種したモノクローナル抗体溶液（１００−）をこ
のカラムにアプライし、流速ｉｏｏ＊／ｈｒで０．３Ｍ
ＮａＣｌ溶液を用いて溶出し、モノクローナル抗体画分
を回収した。この結果、処理前の発熱性物質濃度が１０
ｎ！ＩＦ／ｄであったのに対しで処理後は検出できなか
った。
実験例２
コリスヂンメタンスルホン酸ナトリウム、Ｆａ酸］リス
チンおにび硫酸ポリミキシンのマウスに対する急性毒性
ＬＤ５ｏを調べ、本発明で選択した化合物の安全性を確
認したく表１）。
チンおにび硫酸ポリミキシンのマウスに対する急性毒性
ＬＤ５ｏを調べ、本発明で選択した化合物の安全性を確
認したく表１）。
以Ｆ余白
実験例３
実施例１に準拠して、固定化コリスヂンＡ＠調製し、そ
の発熱性物質の吸着能をしらべた。値は１．５〜２ ｍ
’ｊ ／ ｍＱであり、本発明化合物の吸着能のりぐれ
ていることを立証した。
の発熱性物質の吸着能をしらべた。値は１．５〜２ ｍ
’ｊ ／ ｍＱであり、本発明化合物の吸着能のりぐれ
ていることを立証した。
特ム′［出願人 株式会社 ミドリ十字代 理 人 弁
理士 圧用 隆
理士 圧用 隆
Claims (1)
- コリスチン類およびポリミキシン類から選ばれた化合物
を固定化したことを特徴とする発熱性物質吸着用不溶ｉ
９；担体
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58234856A JPS60126227A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 発熱性物質吸着用不溶性担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58234856A JPS60126227A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 発熱性物質吸着用不溶性担体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60126227A true JPS60126227A (ja) | 1985-07-05 |
| JPH0479360B2 JPH0479360B2 (ja) | 1992-12-15 |
Family
ID=16977418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58234856A Granted JPS60126227A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 発熱性物質吸着用不溶性担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60126227A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5813519A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
-
1983
- 1983-12-12 JP JP58234856A patent/JPS60126227A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5813519A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0479360B2 (ja) | 1992-12-15 |
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