JPS5810397B2 - 新規なエストラジオ−ル誘導体とその製造方法及び抗腫瘍剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性ステロイドホルモン結合体に
関するものである。

詳しくは、エストラジオール誘導体と抗腫瘍剤とを化学
的に結合させたエストラジオール誘導体の結合体及び、
その製造方法及び、本結合体を主成分とする抗腫瘍剤に
関するものである。

周知の如（、既知抗腫瘍剤の多（は、癌細胞を破壊する
と同時に、正常細胞にも一部著しい影響を及ぼすものが
多く、副作用が強く、長期投与が困難なために、癌細胞
を根絶することが困難であると考えられている。

本発明者等は、従来の抗腫瘍剤の欠点を解決し、治療効
果の高い抗腫瘍剤を開発するための研究をおこなった結
果、ある特定の組織又は細胞が癌化した場合に、それを
集中的に攻撃して消滅せしめる新規化合物を見い出し、
本発明に到達したのである。

この新規化合物の結合体の構造は次の一般式（Ｉ）によ
って表示される。

一般式 す） この結合体の特徴は、エストラジオールのレセプターを
有する組織又は細胞に選択的に作用するもので、エスト
ラジオールをキャリヤーとしこれに殺細胞力の強い既知
制ガン剤を化学的に結合せしめたものである。

従って、もし組織の細胞がガン化した場合に、本結合体
はその部所に選択的に分布し、他に副作用を及ぼすこと
なく破壊し得るものである。

更に、本発明の結合体はエストラジオールが制ガン剤の
キャリヤーとして十分にその目的を果すように３位のＯ
Ｈ基をアシルオキシ基例えばルに変換しているのが特徴
である。

これ等のアシルオキシ基は体内で自然に分解し、ＯＨ基
にもどってレセプターへの結合を可能ならしめているも
のである。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合に際しては、エス
トラジオールの活性部位が阻害されないように結合させ
ることが重要であり、一方、エストラジオールと結合す
る抗腫瘍剤の部位は、該結合によって抗腫瘍活性を阻害
しない部位でなければならない。

かかる結合は、導入結合剤を用いておこないうる。

導入結合剤を用いる場合、これによって新たな毒性が生
じるようなものであってはならない。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合は、モノブロモア
セチルプロミド、モノクロロアセチルクロリド、モノク
ロロ酢酸、モノブロモ酢酸等の導入結合剤を用い、エス
トラジオールの非活性部位の水酸基と反応させて 一般式 （ここに、Ｂはエストラジオールから１個の水酸基がと
れた基を表わし、Ｘは、ハロゲン原子を表わす） で示されるエステルとし、このノ・ロゲンを抗腫ＪＪＡ
剤の所望の基と反応させて、本発明のエストラジオール
−抗腫瘍剤の結合体を得る。

さらに具体的に反応条件を説明するならば、エストラジ
オールの３位のＯＨ基をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
等の溶媒中でアルカリと作用させて、−０Ｎａ又は−Ｏ
Ｋとなしさらに、無水ＴＨＦ、ＣＨＣｌ３、ベンゼン等
の溶剤中でベンゾイルクロリド、或いはアセチルクロリ
ド、或いはプロピオニルクロリド等を作用させそれ等の
酸のエステルとする。

次に、この生成物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ピリジン、アセト
ン、ＴＨＦ等の溶剤中で、エストラジオールの１７位の
ＯＨ基と上記の導入結合剤すなわち、モノブロモアセチ
ルプロミド等とを反応させ、次に、該反応生成物をジメ
チルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、
トルエン、四塩化炭素、クロロホルム、テトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）等の溶剤中で、所定の抗腫瘍剤と反応さ
せる。

たとえば、反応温度は、通常Ｏ乃至１００℃好ましくは
、Ｏ乃至５０℃であり、反応時間は、２乃至７４時間で
ある。

得られた反応生成物を常法により精製することによって
、本発明のエストラジオール誘導体の結合体が得られる
。

結合体の合成の順序は必要に応じて変化し得るものであ
る。

例えば、エストラジオールと制ガン剤を先に結合剤を用
いて合成した後に、エストラジオールの骨格上の３位Ｏ
Ｈ基を所望の酸でエステル化を行うこともできる。

この種の製造法の詳細は、下記の実施例より容易に理解
される。

勿論、該実施例は具体的−態様を示すものに過ぎず、上
述の反応において種々の反応条件を考慮しうる。

このようにして得られた本発明の結合体は、赤外吸収ス
ペクトル、紫外吸収スペクトル、核磁気共鳴、元素分析
、融点等の手段により構造を確認した結果、一般式Ｉで
示されるエストラジオール誘導体の結合体であることを
確認した。

さらに、本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急
性毒性、エストロゲン感受性を有する細胞へのとりこみ
試験、制癌試験をおこなった結果、毒性が著しく低く、
かつエストロゲン感受性を有する細胞へのとりこみが著
しく、かつ、制癌作用が著しいことが明らかとなった。

本発明の結合体は、エストラジオール感受性を有する組
織或いは細胞がガン化した場合に特に有効に作用するこ
とから、子宮ガン、乳ガン、前立腺ガン、甲状腺ガン等
に適用される。

しかして、その他のガン、例えば胃ガン、直腸ガン、口
頭ガン、食道ガン、肺ガン、皮フガン、白血癌等に対し
ても、有効であり既知制ガン剤に比してはるかに毒性が
低い。

その理由は今後の研究に待たねばならないが、レセプタ
ー概念に立脚した薬効の発現化外の機構によるものと考
えられる。

本結合体を治療薬として使用する際には、既知制癌剤と
同様な任意慣用の方法で調製することが出来る。

例えば、経口投与用の錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル等
は組成物中に結合剤、賦形剤、包含剤、潤滑剤、界面活
性剤、崩壊剤の如きものを含有してもよい。

又、経口用液体製剤は水性又は油性懸濁液、溶液、シロ
ップ、振とう合剤であってもよい。

座薬は親油性又は親水性基剤と安定剤、分解剤、着色剤
等を配合してもよい。

注射液は水性又は可溶化剤、栄養剤、安定剤、界面活性
剤、等が混入してもよい。

又、場合により薬剤活性を維持又は高めるため、許容範
囲内でアルカリ、酸、塩類等が添加されることもある。

このように目的に応じて製剤化された結合体は、経口、
経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、直腸内、局所等の諸経
路によって投与される。

其の投与量は投与方式及び治療の程度によって異なるも
のであるが、大略、次の通りである。

成人に対し、経口投与１日当り約０． Ｉｍｐ／ｋｇ〜
５０”ｖ／ｋｙｏ成人に対し、静脈注射１日当り約０．
０１〜／に５７〜２０〜／ｋｇ０而して、係る結合体か
らなる本発明は、以下の如き優れた特徴によって集約さ
れる。

（１） レセプターを有する組織が癌化した場合に、
その部位に選択的に作用し癌細胞を攻撃、消滅せしめる
。

したがって少量投与で効果がある。（２）既知制癌剤単
独投与に比し、副作用が少なく、長期投与が可能なので
癌細胞を根絶できる。

（３）結合体に使われるキャリヤとしてのエストラジオ
ールは明確な単一構造化合物で、且つ、生理作用も明ら
かなので安心して使用できる。

（４）結合体に使われる抗腫瘍剤は構造、活性共に既知
のものであるため安心して使用できる。

（５）癌細胞のレセプターを分析し、これに対応するス
テロイドホルモンを結合体のキャリヤに選ぶことにより
、目的をもって多種の癌を治療することができる。

（６）結合体は、経口、−注射、座薬等の通常の手段で
投与し得る。

このように優れた特徴をもつ本発明は、今後、医学界は
もとより人類に大きく貢献できるものと思われる。

以下、実施例に以って、本発明を説明するが、特にこれ
によって本発明は限定されない。

実施例 １ ３−ベンゾイルオキシ−１・３・５（１０）−エストラ
トリエン−１７β−〔４−（ｐ（ビス（２−クロロエチ
ル）アミノ）フェニル）ブタノイルオキシ〕アセテート
の合成 ｌ・３ ・５（１０）−エストラトリエン−３・１７β
−ジオール１０グをＴＨＦ １００ｒ７１１に溶解し
、ＮａＯＨ１，４７ｆｌを含む水溶液１０ｍ１を加え、
室温で３０分間攪拌した。

次いで、８０℃の浴上で減圧下に蒸発乾固し、水分を出
来うる限り除去した。

残留物を再度無水ＴＨＦに溶解し、ベンゾイル クロリ
ド５．５１を含むエチルエーテル溶液５ｏｍｌを滴下し
、室温で１６時間反応した。

反応終了後、生成した食塩を常法により分離し、Ｐ液を
減圧下に蒸発乾固し、未反応のベンゾイル クロリドを
除去するために、０．ＩＮ −ＮａＯＨ溶液２００ｍ１
を加え、室温で１５分間攪拌した。

得られた白色結晶をＧ−３フイルターで分離し、蒸溜水
で良（洗浄し、デシケータ−中で減圧乾燥した。

シリカゲルによる薄層クロマトグラフィー分析では、エ
チルアセテート：シクロヘキサン５０：３０容量比の展
開溶媒でＲｆＯ，３４のメインスポットを示した。

この粗結晶をエチルアセテ−１・、エチルエーテルより
結晶化し、白色結晶８．６１を得た。

融点、元素分析、ＩＲスペクトルにより、該生成物が１
７β−ヒドロキシ−１・３・５（１０）−エストラトリ
エン−３−ベンゾエートであることを確認した。

次いで、この化合物７．０１を無水ＴＨＦに溶解し、ピ
リジン２．ＯＳ’を加え、−５℃に冷却した。

３０％モノブロモアセチルプロミド−四塩化炭素溶液１
５．５Ｐ′をＴＨＦ ５０ｍｌに溶解させたものを上
記の混合物に、ゆっくりと滴下した。

滴下後、混合物を一５℃で２時間、次いで水浴上で４時
間攪拌後に冷蔵庫中に１６時間静置し反応させた。

反応終了後、生成した白色沈澱をＧ−４フイルターで沢
別し、・３０℃の湯浴上で減圧下に蒸発乾固し、エチル
エーテル２００ｍ１を加えて攪拌した結果、白色結晶５
．３２を得た。

このものの元素分析値、及び融点は下記の通りであった
。

元素分析値 シリカゲル薄層クロマトグラフィー分析では、エチルア
セテート：シクロヘキサン５０ ： ３０容量比の展開
溶媒を用いた場合、Ｒｆ＝０．７７のシングルスポット
を示した。

赤外吸収スペクトル測定結果は、水酸基の特性バンドが
消失しており、３−ベンゾイルオキシ−■・３・５（１
０）−エストラトリエン−１７β−モノブロモアセテー
トが得られていることを確認した。

赤外吸収スペクトル（ＣｒｒＬ’） ＩＲバンド２９
２０．１７３５．１７２８．１５９５゜１５７９．１４
９０．１４４８．１４１２゜１３８２．１２８６．１２
８０，１２６０゜１２１０．１２００．１１７０．１１
４５゜１０９５．１０７５．１０１９．１００４゜８９
７．７８０．７００．６８０、 得られた３−ベンゾイルオキシ−１・３・５（１０）−
エストラトリエン−１７β−モノブロモアセテート１８
２．３１ｎ９、シルバー４−（ｐ−（ヒス（２−クロロ
エチル）アミノ）フェニル）ブタノエイト１４８．５１
ｖを５ｍｌのＤＭＳＯに分散溶解させ、光のしゃ断下に
おいて、室温で３日間反応させた。

反応終了後、生成した臭化銀を沢別し、水４００ｍ１を
加え、白色沈澱物を遠心分離により分離し、沈澱物を５
０ｍ１のアセトンに溶解させ、Ｇ−４フイルターを用い
て不溶性成分を除去した。

沢液を減圧乾燥し、油状物１６５〜を得た。

シリカゲルによる薄層クロマトグラフィー分析では、エ
チルアセテート：シクロヘキサン１０：５０の容量比の
展開溶媒でＲｆＯ，４４のメインスポットを示した。

生成物中に未反応物が残存しているので、エチルアセテ
ート：シクロヘキサン１０ ：５０の容量比の混合溶媒
を用いて、シリカゲルによるカラムクロマトグラフィー
により、生成物を精製した。

得られた精製物は２０℃で粘稠な油状物質であり、元素
分析値、赤外吸収スペクトルは下記の通りであった。

これにより、３−ベンゾイルオキシ−１・３・５（１０
）−エストラトリエン−１７，β−（４−（ｐ−（ビス
（２〜クロロエチル）アミン）フェニル）ブタノイルオ
キシ〕アセテートであることを確認した。

元素分析値 赤外吸収スペクトル（ｃｒｆＬ’） ＩＲバンド２９
２０．２８６０．１７５５．１７３５゜１６１２．１５
８２．１５１６．１４９１、１４５０．１４２０．１３
８０，１３５５゜１２６０．１２２４．１２１０．１１
７４゜１１４５．１０７９．１０２２．１００５゜９６
０．９１５．８９０．８００．７４０゜７０５、 得られた油状物質をエーテル：酢酸エチル８５：１５容
量比の混合溶媒を用いて再結晶を繰返したところ融点１
１０．５〜１１１．５℃の結晶が得られた。

実施例 ２ ゛ ３−プロピオニルオキシ−１・３・５（１０）−エスト
ラトリエン−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロロ
エチル）アミノ）フェニル）ブタノイルオキシ〕アセテ
ートの合成 １・３・５（１０）−エストラトリエン−３・１７β−
ジオール１０ｆＩをＴＨＦ １００ ｍｌに溶解し、
ＮａＯＨ１，４７？を含む水溶液１０ｍ１を加え室温で
３０分間攪拌した。

次いで８０℃の浴上で減圧下に蒸発乾固し、水分を出来
うる限り除去した。

残留物を再度無水ＴＨＦに溶解させ、グロピオニルクロ
リド３．４０ｆを含む無水ＴＨＦ溶液５０ｍ１を滴下し
、室温で１６時間反応した。

反応終了後、生成した食塩を常法により分離し、沢液を
減圧下に蒸発乾固し、エタノールより再結晶することに
より、白色結晶９ｖを得た。

元素分析、赤外吸収スペクトルにより、該生成物が、１
７β−ヒドロキシート３・５（１０）−エストラトリエ
ン−３−プロピオネートであることを確認した。

次いで、この化合物７．０２を無水ＴＨＦ７０ｍｌに溶
解し、ピリジン３．０１を加え、−５℃に冷却した。

３０％モノブロモアセチルプロミド−四塩化炭素溶液１
７．３ＰをＴＨＦ ５０ｍｌに溶解させたものを上記の
混合物に、ゆっくりと滴下した。

滴下後、混合物を一５℃で２時間、次いで冷蔵庫中で１
６時間かげて反応させた。

反応終了後、生成した白色沈澱を沢別し、３０℃の湯浴
上で減圧下に蒸発乾固し、エチルエーテル２００ｍ１を
加えて攪拌した結果、白色結晶６．０１を得た。

さらに沢液を濃縮することにより白色結晶３．５１を得
た。

この結晶をさらにエーテル−アルコール混合溶媒より再
結晶した。

生成物の元素分析値は下記の通りであった。

元素分析値 生成物の赤外吸収スペクトルにおいて、水酸基の特性バ
ンドが完全に消失していることより、生成物は３−プロ
ピオニルオキシ−１・３・５（１０）−エストラトリエ
ン−１７β−モノブロモアセテートであることを確認し
た。

次いで、この化合物１．Ｏｆ？、シルバー４−（ｐ−（
ヒス（２−クロロエチル）アミノ）フェニル）ブタノニ
ー）０．９ｉを５０〜のＤＭＳＯに分散溶解し、光のし
ゃ断下において、室温で３日間反応させた。

反応終了後、生成した臭化銀を沢別し、水４ｔを加え、
遠心分離により分離し、沈澱物を５０ｍ１のアセトンに
白濁沈澱物を溶解させ、Ｇ−４フイルターを用いて不溶
性成分を除去し、沢液を減圧乾燥し、油状物質１．３７
を得た。

この生成物をエチルアセテート：シクロヘキサン１０：
５０容量比の混合溶媒を用いてシリカゲルによるカラム
クロマトグラフィーにより精製した。

得られた精製物は、２０℃で粘稠な油状物質であり、元
素分析値は下記の通りであった。

元素分析値 ２９１６．２８４０．１７５０．１７４０゜１６１０．
１５１２．１４８８．１４４１゜１４１５．１３７９．
１３６１．１２７０゜１２１０．１２００．１１７０．
１１４０゜１０６８．１００４．９５６．９３１．８８
５゜８１７．７９３．７３５ｃｒｆＬ ’ 赤外吸収スペクトルは上記の通りであり、生成物は、３
−プロピオニルオキシ−１・３・５（１０）−エストラ
トリエン−１７β−（４−（ｐ−（ヒス（２−１０ロエ
チル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシ〕アセテー
トであることを確認した。

実施例 ３ ３−アセトキシ−１・３・５（１０）−エストラトリエ
ン−１７β−（４−（、ｐ、−（ビス（２−クロロエチ
ル）アミン）フェニル）フタノイルオキシ〕アセテート
の合成 実施例１と同様の方法により合成した３−アセトキシー
ト３・５（１０）−エストラトリエン−１７β−モノブ
ロモアセテ−）１．０Ｐとシルバー４−（ｐ−（ビス（
２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブタノエイ）Ｏ
，’ｌを５０ｍ１のＤＭＳＯに溶解し、暗室中で、２５
℃で３日間反応させた。

反応終了後、生成したＡｇＢｒを沢別し、水４ｔを加え
白濁沈澱物を遠心分離により分離した。

沈澱物を５０ｒｕｌのアセトンに溶解し、Ｇ−４フイル
ターにて不溶性成分を除去し、沢液を減圧乾燥し、。

油状物質１．２１を得た。

この生成物をエチルアセテート：シクロヘキサン１０
：５０容量比の混合溶媒を用いてシリカゲルによるカラ
ムクロマトグラフィーにより精製した。

この精製物は、２０℃で高粘度の油状物質であり、元素
分析値は、下記の通りであった。

元素分析値 生成物の赤外吸収スペクトルにおいて、水酸基の特性バ
ンドが完全に消失しており、生成物が３−アセトキシ−
１・３・５（１０）−エストラトリエン−１７β−（４
−（ｐ−（ビス（２−クロ。

ロエチル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセ
テートであることを確認した。

赤外吸収スペクトル（ｃｒｒＬ’）ＩＲバンド２９１５
．２８４０．１７５０．１７４０゜１６１０．１５１２
．１４８８．１４４２、 。

１４１５．１３７８．１３６０．１２７０゜１２１０．
１２００．１１７０．１１４０゜１０６８．１００５．
９５６．９３１．８８５゜８１７．７９３．７３５、 実施例 ４ ３−アセトキシート３ ・５（１０）−エストラトリエ
ン−１７β−（４−（Ｐ−（ビス（２−クロロエチル）
アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテートの合
成 シルバー４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチル）・アミ
ン）フェニル）ブチレート（クロラムブチル−銀塩）２
００ｍ９を１０ｍ１のジメチルスルホキジッド（ＤＭＳ
Ｏ）に溶解分散させた。

完全には溶解せず、白色のコロイド状であった。

次いで、３−ヒドロキシ−１・３・５（１０）−エスト
ラトリエン−１７β−ブロモアセテート１９０．８１ｎ
９を加え、６４時間光を遮断して攪拌を行った（室温）
。

６４時間後、沈澱は黄緑色に変化していた。

アセトンを少量加え、Ｇ−４フイルターでこの沈澱を分
離した。

光をうけて、黄緑色から黒縁色に沈澱は変色した。

ｆ液は、無色透明であった。８０℃の湯浴上で、すみや
かにＤＭＳＯを減圧除去し、ついで水１００ｍ１を加え
ると、白色結晶が析出した。

この物を１時間放置してＤＭＳＯを除去し、Ｇ−４フイ
ルターでこの結晶を分別し、蒸留水で充分洗浄後、デシ
ケータ−中で、減圧乾固した。

粗収量３３０．５〜であった。

粗結合体３３０．５ｍ９をシクロヘキサン５０容：酢酸
エチル１０容よりなる混合溶媒に溶かし、シリカゲル４
０グをつめたカラムの中へ注ぎ込み、ゆっくり分離させ
た。

高純度の結合体１８８．２７Ｑ（収量６２．８６％）が
得られた。

このものの元素分析、融点は下記の如くであった。

元素分析値 融点 室温（２５℃）で半熔融状 この結果より、生成物が３−ヒドロキシ−１・３・５（
１０）−エストラトリエン−１７β−（４−（ｐ−（ビ
ス（２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブタノイル
オキシタアセテートであることを確認した。

３−ヒドロキシ−１・３・５（１０）エストラトリエン
−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロ肋エチル）ア
ミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテート５０１
ｎ９を無水ピリジン１ ｍｌに溶解し、さらに、１ｍｌ
の無水酢酸を加え、冷蔵庫中に１６時間静置して反応さ
せた。

反応終了後、３０℃の浴上で減圧下に蒸発乾固した。

残留物に蒸溜水を加え、１時間静置すると、白濁状の油
状物質が析出した。

再度蒸溜水でピリジン、酢酸を抽出し、液のｐＨが中性
になるまで洗浄した。

水層と分離後、デシケータ−中で減圧下に蒸発乾固し、
４５〜の油状物質を得た。

シリカゲルを用いた薄層クロマトグラフィー分析によれ
ば、エチルアセテート：シクロヘキサン３０ ：５０容
量比の混合溶媒を展開溶媒として用いたところ、ＲｆＯ
，７８のシングルスポラトラ示した。

生成物をエチルアセテート：シクロヘキサン１０：５０
容量比の混合溶媒を用いて、シリカゲルによるカラム
クロマトグラフィーにより精製したところ、２０℃にお
いて高粘度の油状物質を得た。

この元素分析値は下記の通りであった。元素分析値 実測値（％） Ｃ：６６．０；Ｈ：６．９；Ｎ ：２
．Ｏ；Ｃ１：１０．９ 計算値（％） Ｃ：６５．６４；Ｈ：６．８４；Ｎ：
２．１３ ；Ｃ１：１０．７９ 赤外吸収スペクトルにおいて、水酸基の特性バンドが完
全に消失しており、生成物が３−アセトキシート３・５
（１０）−エストラトリエン−１７β−〔４−（ｐ−（
ビス（２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブタノイ
ルオキシタアセテートであることを確認した。

赤外吸収スペクトル（ｃｒｒＬ’） ＩＲバンド２９
１５．２８４０．１７５０．１７４０゜１６１０．１５
１２．１４８８．１４４２゜１４１５．１３７８．１３
６０．１２７０゜１２１Ｏ１１２００，１１７０，１１
４０゜１０６８．１００５，９５６，９３１，８８５゜
８１７．７９３，７３５、 実施例 ５ ３−プロピオニルオキシ−１・３・５（１０）−エスト
ラトリエン−１７β−（４−（ｐ−（ヒス（２−クロロ
エチル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテ
ートの合成 ３−ヒドロキシ−１・３・５（１０）−エストラトリエ
ン−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチル）
アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテート５０
〜を無水ピリジン１ ｍｌに溶解し、更に無水プロピオ
ン酸１．５ｍｌを加え、冷蔵庫内に１日放置した。

次いで、３０℃の浴上で減圧下に蒸発乾固した。

残留物に蒸留水を加えて２時間放置したところ白濁状の
油状物質が析出した。

再度蒸留水でピリジン、酢酸を抽出し、液のｐＨが中性
になるまで洗浄した。

水層を分離後、デシケータ−中で減圧下に蒸発乾固し、
油状物質４０ダを得た。

この物質をエチルアセテート：シクロヘキサン１０：５
０容量比の混合溶媒を用いシリカゲルによるカラムクロ
マトグラフィーにより精製を行った。

精製物は高粘度の油状物質であり、赤外吸収スペクトル
において、３６００〜３２００１１ｍ’のバンドが消失
していた。

この結果より生成物が３−プロピオニルオキシ−１・３
・５（１０）−エストラトリエン−１７β−（４−（ｐ
−（ビス（２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブタ
ノイルオキシタアセテートであることを確認した。

実施例 ６ ３−ベンゾイルオキシ−１・３・５（１０）−エストラ
トリエン−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロロエ
チル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテー
トの合成 ３−ヒドロキシ−１・３・５（１０）−エストラトリエ
ン−１７β−〔４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチル）
アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテート５０
〜を無水ピリジン１ ｍｌに溶解し、更に無水安息香酸
２グを加え、冷蔵庫内に１日放置した。

次いで３０℃の浴上で減圧下に蒸発乾固した。

残留物に蒸留水を加え１．５時間放置したところ白濁状
の油状物質が析出した。

再度蒸留水でピリジン、酢酸を抽出し液のｐＨが中性に
なるまで洗浄した。

水層と分離後、デシケータ−中で減圧下に蒸発乾固し、
油状物質４５ヤを得た。

この物質をエチルアセテート：シクロヘキサン１０ ：
５０容量比の混合溶媒を用いシリカゲルによるカラムク
ロマトグラフィーにより精製を行った。

精製物は高粘度の油状物質であり赤外吸収スペクトルに
おいて３６００〜３２００ｃｒｒＬ−１のバンドが消失
していた。

この結果より、生成物が、３−ベンゾイルオキシ−１・
３・５（１０）−エストラトリエン−１７β−Ｃ４−（
ｐ−（ビス（２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブ
タノイルオキシタアセテートであることを確認した。

得られた油状物質をエーテル：酢酸エチル８５：１５容
量比の混合溶媒を用いて再結晶を繰返したところ融点１
１０．５〜１１１．５℃の結晶が得られた。

実施例 ７ 本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急性毒性、
制癌性試験（ｉｎ ｖｉｖｏ ）をおこなった結果を述
べる。

（１）急性毒性 急性毒性はＩＣＲ−ＪＣＬ系マウス（４週令を用い、１
群８匹を透明なポリケージに入れ、試料を生理食塩水に
溶解又は分散したものを注射筒を用いて所定の置版腔内
投与経路にて投与した。

投与後、中毒症状の観察を続け７日間までの経時的死亡
率を求めＬＤ５ｏ値をリッチフィールド−ウィルコツク
ツ：／ （Ｌ １ｔｃｈｆｉｅｌｄ −Ｗ ｉ ｌ ｃ
ｏｘｏｎ ）図計算法により算出した。

クロラムブチルはＬＤ５ｏ値が２０〜／ｋｇであるのに
対し本発明の結合体はいずれもＬＤ、。

値が８０■／ｋｇ以上であり明らかにＬＤ５ｏ値が大き
く少な（とも約４倍以上である。

即ち安全であることを示している。

（２）制癌試験（ｉｎ ｖｉｖｏ ） ステロイドホルモンレセプターを有する人の乳癌細胞を
ヌードマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ／ｎｕ）（生後５週
令）の腹腔内に移植し増殖を行った。

７日後に、この細胞１Ｘ１０’個を前記検体ヌードマウ
スの腋下部皮下に移植して固型腫瘍とした。

移植後２４時間目より、本発明の結合体とオリーブ油の
所定量を、良く分散又は溶解させたものを皮下、経口に
より投与した。

投与は所定の量で、隔日に１０回投与し、移植後２５日
目に腫瘍を摘出し、本発明の結合体の投与群１０匹の平
均腫瘍重量並びに対照群の１０匹の平均腫瘍重量より、
次の式から腫瘍増殖抑制率を求めた。

クロラムブチルは経口、皮下両方とも１０〜１５〜／ｋ
ｇ投与で増殖抑制率は５０〜７０％であった。

これに対し本発明の結合体はいずれも９０％以上であっ
た。

又本発明の結合体は生存率も１００％であった。

生存率は分子は生存数、分母は検体数 サンプルＡ１ クロラムブチル ２３−ベンゾイルオキシ−１・３・５（１０）−エスト
ラトリエンー１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロロ
エチル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテ
ートサンプルＡ３３−アセトキシート３・５（１０）−
エストラトリエン−１７β−Ｃ４−（ｐ−（ビス（２−
クロロエチル）アミノ）フェニル）ブタノイルオキシタ
アセテート〃 ４３−グロビオニルオキシ−１・３
・５（１０）−エストラトリエン−１７β−（４−（ｐ
−（ビス（２−クロロエチル）アミン）フェニル）ブタ
ノイルオキシタアセテート〃 ５ オリーブ油（コ
ントロール）実施例 ８ 上記組成物をよ（混和し、粉状にしたものを圧縮して直
径１０ｍｍの錠剤とした。

処方例２ 上記組成の混合物を作り混練したのちエツクペレツター
により押出して顆粒状とした。

これを乾燥し、１０メツシユと２４メツシユの間で選別
して経口投与用顆粒剤とした。

処方例３ 処方例２で得られた顆粒剤を市販のカプセル容器に充て
んして０．５ＣＣカプセルとした。

処方例４ を加温混今後滅菌して注射液とした。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １３−アシルオキシ−１・３・５（１０）−エストラト
   リエン−１７β−Ｃ４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチ
   ル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテート
   であるエストラジオール誘導体。 ２ アシルオキシ基はベンゾイルオキシ、アセトキシ、
   プロピオニルオキシ基より選択されたものである特許請
   求の範囲第１項記載のエストラジオール誘導体。 ３３−ヒドロキシ−１・３・５（１０）−エストラトリ
   エン−１７β−Ｃ４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチル
   ）アミノ）フェニル）フタノイルオキシタアセテートの
   ３位のヒドロキシ基をアシルオキシ基で置換することを
   特徴とする３−アシルオキシート３・５（１０）−エス
   トラトリエン−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロ
   ロエチル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセ
   テートの製造方法。 ４ アシルオキシ基はベンゾイルオキシ、アセトキシ、
   プロピオニルオキシ基より選択されたものである特許請
   求の範囲第３項記載のエストラジオール誘導体の製造方
   法。 ５３−アシルオキシ−１・３・５（１０）−エストラト
   リエン−１７β−（４−（ｐ−（ビス（２−クロロエチ
   ル）アミン）フェニル）ブタノイルオキシタアセテート
   を主成分とする抗腫瘍剤。 ６ アシルオキシ基はベンゾイルオキシ、アセトキシ、
   プロピオニルオキシ基より選択されたものである特許請
   求の範囲第５項記載の抗腫瘍剤。