JPS5810398B2 - 新規なエストラジオ−ル結合体とその製造方法及び抗腫瘍剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性ステロイドホルモン結合体に
関するものである。

詳しくは、エストラジオール誘導体と抗腫瘍剤とを化学
的に結合させたエストラジオール誘導体の結合体及び、
その製造方法及び、本結合体を主成分とする抗腫瘍剤に
関するものである。

周知の如く、既知抗腫瘍剤の多くは、癌細胞を破壊する
と同時に、正常細胞にも一部著しい影響を及ぼすものが
多く、副作用が強く、長期投与が困難なために、癌細胞
を根絶することが困難であると考えられている。

本発明者等は、従来の抗腫瘍剤の欠点を解決し、治療効
果の高い抗腫瘍剤を開発するための研究をおこなった結
果、ある種の癌細胞を著しく高選択的に消滅させうると
共に、副作用の著しく少ない新規な抗腫瘍性ステロイド
ホルモン結合体を得た。

本発明のエストラジオール誘導体−メソトレキセートの
結合体は、癌細胞と特異的に結合する特定のステロイド
系ホルモン物質と特定の抗腫瘍性物質の結合体であって
、癌細胞に抗腫瘍性物質を選択的に作用させる特徴があ
る。

上述の成る特定の癌細胞とは、本結合体の構成成分であ
るエストラジオール誘導体に対して、細胞内にレセプタ
ーを有しているものであって、これが本発明の結合体の
標的に利用される。

したがって、癌細胞内にエストラジオールに対するレセ
プターを有する癌が本結合体の使用対象となる。

この種の癌として、乳癌、前立腺癌、胃癌、甲状腺癌、
子宮内膜癌がある。

特に、乳癌、子宮内膜癌、前立腺癌が本結合体の重要な
適用対象となる。

本発明の新規なエストラジオール誘導体の結合体は、一
般式■で示されるものである。

該エストラジオール誘導体の結合体■は、エストラジオ
ールと抗腫瘍剤とを結合剤を用いて結合することによっ
て得られる。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合に際しては、エス
トラジオールの活性部位が阻害されないように結合させ
ることが重要であり、一方、エストラジオールと結合す
る抗腫瘍剤の部位は、該結合によって抗腫瘍活性を阻害
しない部位でなければならない。

かかる結合は、導入結合剤を用いておこないうる。

導入結合剤を用いる場合、これによって新たな毒性が生
じるようなものであってはならない。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合は、モノブロムア
セチルブロマイド、モノクロルアセチルクロライド、モ
ノクロル酢酸、モノブロム酢酸等の導入結合剤を用い、
エストラジオールの非活性部位の水酸基と反応させて 一般式 （ここに、Ｂはエストラジオールから１個の水酸。

基がとれた基を表わし、Ｘは、ハロゲン原子を表わす） で示されるエステルとし、このハロゲンを抗腫瘍剤の所
望の基と反応させて、本発明のエストラジオール−抗腫
瘍剤の結合体を得る。

さらに具体的に反応条件を説明するならば、四塩化炭素
、クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
、ピリジン、アセトン等の溶剤中で、エストラジオー
ルの１７位のＯＨ基と上記の導入結合剤すなわち、モノ
ブロムアセチルブロマイド等とを反応させ、次に、該反
応生成物をジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ド、ピリジン、トルエン、四塩化炭素、クロロホルム、
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の溶剤中で、所定の抗
腫瘍剤と反応させる。

たとえば、反応温度は、通常０乃至１００℃好ましくは
、０乃至５０℃であり、反応時間は、２乃至７４時間で
ある。

得られた反応生成物を常法により精製することによって
、本発明のエストラジオール誘導体の結合体が得られる
。

この種の製造法の詳細は、下記の実施例より容易に理解
される。

勿論、該実施例は具体的−態様を示すものに過ぎず、上
述の反応において種々の反応条件を考慮しうる。

このようにして得られた本発明の結合体は、赤外吸収ス
ペクトル、紫外吸収スペクトル、該磁気共鳴、元素分析
、融点等の手段により構造を確認した結果、一般式■で
示されるエストラジオール誘導体の結合体であることを
確認した。

さらに、本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急
性毒性、エストロゲン感受性を有する癌細胞へのとりこ
み試験、制癌試験をおこなった結果、毒性が著しく低く
、かつエストロゲン感受性を有する癌細胞へのとりこみ
が著しく、かつ、制癌作用が著しいことが明らかとなっ
た。

本結合体を治療薬として使用する際には、既知制癌剤と
同様な任意慣用の方法で投与用に調製することが出来る
。

例えば、経口投与用の錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル等
は組成物中に結合剤、賦形剤、包含剤、潤滑剤、界面活
性剤、崩壊剤の如きものを含有してもよい。

又、経口用液体製剤は水性又は油性懸濁液、溶液、シロ
ップ、振とう合剤であってもよい。

座薬は親油性又は親水性基剤と安定剤、分解剤、着色剤
等を配合してもよい。

注射液は水性又は可溶化剤、栄養剤、安定剤、界面活性
剤、等が混入してもよい。

又、場合により薬剤活性を維持又は高めるため、許容範
囲内でアルカリ、酸、塩類等が添加されることもある。

このように目的に応じて製剤化された結合体は、経口、
経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、直腸内、局所等の諸経
路によって投与される。

其の投与量は投与方式及び治療の程度によって異なるも
のであるが、大略、次の通りである。

成人に対し、経口投与１日当り約０．１〜／ゆ〜５０〜
／ゆ。

成人に対し、静脈注射１日当り約０．０１１ｎ９／に９
〜２０ダ／ｋｇ 而して、係る結合体からなる本発明は、以下の如き優れ
た特徴によって集約される。

（１）レセプターを有する組織が癌化した場合に、その
部位に選択的に作用し癌細胞を攻撃、消滅せしめる。

したがって少量投与で効果がある。（２）既知制癌剤単
独投与に比し、副作用が少な（、長期投与が可能なので
癌細胞を根絶できる。

（３）結合体に使われるキャリヤとしてのエストラジオ
ールは明確な単一構造化合物で、且つ、生理作用も明ら
、かなので安心して使用できる。

（４）結合体に使われる抗腫瘍剤は構造、活性共に既知
のものであるため安心して使用できる。

（５）癌細胞のレセプターを分析し、これに対応するス
テロイドホルモンを結合体のキャリヤに選ぶことにより
、目的をもって多種の癌を治療することができる。

（６）結合体は、経口、注射、座薬等の通常の手段で投
与し得る。

このように優れた特徴をもつ本発明は、今後、医学界は
もとより人類に大きく貢献できるものと思われる。

以下、実施例を以って、本発明を説明するが、特にこれ
によって本発明は限定されない。

実施例 １ エストラジオールーメソトレキセート結合体反応 メソトレキセート銀塩２００〜を５ｍｌのジメチルスル
ホキシド（ＤＭＳＯ）に分散溶解させ、エストラジオー
ル−１７−モツプロムアセテ−ＨＩ）２３５１ｖを加え
た。

光を遮断上室温で２日間攪拌を行った。

反応終了後、生じたＡｇＢｒをＧ−４フイルターで分離
し、沢液は８０℃ですみやかに減圧濃縮した。

次いで油状の物質に、蒸留水を加えると、すみやかに黄
色沈澱が析出した。

さらに１時間攪拌すると、ＤＭＳＯは、はぼ完全に水層
に移行した。

Ｇ−４フイルターで分離後、沈澱を蒸留水で良く洗浄し
、デシケータ−中で減圧乾固を行なった。

粗収量２５８．５〜、理論値３２２−２〜、粗収率８０
．２３％であった。

精製 粗結晶２００〜を２５１ｒＬｌのテラヒドロフラン（Ｔ
ＨＦ）に溶解させ、蒸留水１０ｍ１を加え、イオン交換
樹脂ダイアイオンＷＡ−２０（交換容量２．５ｍｅｑ／
７１１： ｄ Ｏ，６Ｏｆ／ｃｃ） １．２Ｓ’ （５
０ｘ１０ ’ｍｏｌｅ）を加え、約１時間室温で攪拌
を行なった。

溶液のｐＨは６〜７から７〜８に変化した。

Ｇ−４フイルターで樹脂を分離し、水浴上で減圧濃縮し
、ＴＨＦを除去した。

次いで、残っている水分を、凍結乾燥により乾燥した。

乾燥物は、黄色粉末状で２００１ｎ９得られた。

このものは、赤外吸収スペクトル、元素分析、ニンヒド
リン反応、融点等により結合体■であることを確認した
。

元素分析値 であった。

融点は １８３〜１９４℃であった。

赤外吸収スペクトルは第１図の通りであった。

実施例 ２ 製剤化例 処方例１ 上記組放物をよ（混和し粉状にしたものを圧縮して直径
１０１１１の錠剤とした。

処方例２ 上記組成の混合物を作り混練したのちエックペレツター
により押出して顆粒状とする。

これを乾燥し、ｌＯメツシュと２４メツシユの間で選別
して経口投与用顆粒剤とする。

処方例３ 処方例２で得られた顆粒剤を市販のカプセル容器に充て
んして９．５ ｃｃのカプセルとする。

処方例４ を加温混合後、滅菌して注射剤とする。

本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急性毒性、
制癌性試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ 、 ｉｎ ｖｉｖｏ
）をおこなった結果を述べる。

（１）急性毒性 急性毒性はＩＣＲ−ＪＣＬ系マウス（４週令）を用い、
１群８匹を透明なポリケージに入れ、試料を生理食塩水
に溶解又は分散したものを注射筒を用いて所定の置版腔
内投与経路にて投与した。

投与後、中毒症状の観察を続け７日間までの経時的死亡
率を求めＬＤ、ｏ値をリッチフィールドーウイルコツク
ソン（Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄ −Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ）
図計算法により算出した。

メントレキセートはＬＤ、ｏ値が９４ｍ９７に９である
のに対しエストラジオール誘導体−メソトレキセートと
の結合体はＬＤ５ｏ値が２３５ｍｙ／ｋｇ以上であり明
らかにしＤ５ｏ値が太き（少なくとも約２．５倍以上で
ある。

即ち安全であることを示している。

（２）エストロゲン感受性を有する細胞への本発明のエ
ストラジオール誘導体の結合体のとりこみ試験 日本生化学編生化学実験講座「ホルモン（上）」２１７
〜２５２頁東京化学同人、１９７７年４月２５日発行、
に記載されている方法に従って試験をおこなった。

即ち３Ｈ標識したエストラジオールホルモンを予め体内
より摘出したウサギの子宮細胞にインキュベートして結
合させた後、検体を添加し、添加量の増加と共に遊離す
る標識エストラジオールホルモン量を測定した。

本発明の結合体は、エストラジオールとほぼ同程度に遊
離する標識エストラジオールが認められ、エストロゲン
感受性を有する癌細胞へのとりこみが証明された。

第２図に結果を示す。（３）制癌試験（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ ） 仔牛血清−ＲＰＭＩ １６４０ （１： ９）２ｍｌを
入れたシャーレ（３５龍φ）に人の乳癌細胞２Ｘ１０’
個を植えつけ飽和水蒸気−炭酸ガス含有空気（ＣＯ２５
％）中で３７℃、２４〜２６時間培養してからジメチル
スルホキシド （ＤＭＳＯ）又は他の有機溶媒にとかした本発明結合体
及び対照物質を培地中の濃度がｌ ｐｐｍになるように
添加し、更に５日間上記条件で培養を続けた。

培養終了後、浮遊細胞及びシャーレ底面に付着している
細胞を０．２５％トリプシン処理によってはがし、細胞
数を計算し、次式に従って増殖阻止率を算出した。

増殖阻止率の大きい程制癌効果は高い。

濃度１ ｐｐｍでエストラジオール誘導体−メソトレキ
セートとの結合体は９０％でありメントレキセートの増
殖阻止率６０％より大きい。

即ち同量でより抗腫瘍性がすぐれていることを示してい
る。

（４）制癌試験（ｉｎ ｖｉｖｏ ） ステロイドホルモンレセプターを有する人の乳癌細胞を
ヌードマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ／ｎｕ ） （生後
５週令）の腹腔内に移植し増殖を行った。

７日後に、この細胞１Ｘ１０６個を前記検体ヌードマウ
スの腋下部皮下に移植して固型腫瘍とした。

移植後２４時時間上り、本発明の結合体と生理食塩水の
所定量と、場合によっては乳剤（ポリソルベート８０）
を用いて研究し、良く分散させたものを投与した。

腹腔的注射（ｉｐ）は所定の量で、隔日に１０回投与し
、移植後２５日目に腫瘍を摘出し、本発明の結合体の投
与群１０匹の平均腫瘍重量並びに対照群の１０匹の平均
腫瘍重量より、次の式から腫瘍増植抑制率を求めた。

メソトレキセートはｉｐ投与で投与量５ 〜／ｋｇ、２０〜／ｋｙで増殖抑制率は４８％、６５％
であった。

エストラジオール誘導体−メソトレキセートとの結合体
は投与量５〜／ゆで同様に９８％であった。

同投与量（５〜／に！９）で約２倍の値を示した。

このことは本結合体が選択的に乳癌細胞に作用すること
を示唆している。

【図面の簡単な説明】

第１図は、エストラジオール誘導体−メソトレキセート
との結合体の赤外吸収スペクトル図、第２図はコンペテ
イテイブイム、アッセイ法によるエストラジオール単体
、エストラジオール誘導体−メソトレキセート結合体及
びメントレキセート単体を夫々用いてウサギの子宮細胞
のエストラジオールレセプターに対する結合能の測定結
果を示したものである。 Ａ：エストラジオール単体、Ｂ：エストラジオール誘導
体−メソトレキセート結合体、Ｃ：クロラムブチル単体
、横軸はＡ、Ｂ又はＣの変化量であり、縦軸はエストラ
ジオールレセプターに結合している３Ｈ標識エストラジ
オールの結合量（％）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−メノドレキセー
   ドとの結合体。 ２ エストラジオール−１７−モツプロムアセテートに
   メソトレキセート銀塩を作用して得られる。 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−メソトレキセー
   トとの結合体の製造方法。 ３ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−メソトレキセー
   トとの結合体を主成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤
   。 ４ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−メソトレキセー
   トとの結合体を主成分とする。 該結合体はレセプターを有する癌に選択的に作用するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の抗腫瘍剤。