JPS5810399B2 - 新規なエストラジオ−ル結合体とその製造方法及び抗腫瘍剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性ステロイドホルモン結合体に
関するものである。

詳しくは、エストラジオール誘導体と抗腫瘍剤とを化学
的に結合させたエストラジオール誘導体の結合体及び、
その製造方法及び、本結合体を主成分とする抗腫瘍剤に
関するものである。

周知の如く、既知抗腫瘍剤の多くは、癌細胞を破壊する
と同時に、正常細胞にも一部著しい影響を及ぼすものが
多く、副作用が強く、長期投与が困難なために、癌細胞
を根絶することが困難であると考えられている。

本発明者等は、従来の抗腫瘍剤の欠点を解決し、治療効
果の高い抗腫瘍剤を開発するための研究をおこなった結
果、ある種の癌細胞を著しく高選択的に消滅させうると
共に、副作用の著しく少ない新規な抗腫瘍性ステロイド
ホルモン結合体を得た。

本発明のエストラジオール誘導体−５−フルオロウラシ
ルの結合体は、癌細胞と特異的に結合する特定のステロ
イド系ホルモン物質と特定の抗腫瘍性物質の結合体であ
って、癌細胞に抗腫瘍性物質を選択的に作用させる特徴
がある。

上述の成る特定の癌細胞とは、本結合体の構成成分であ
るエストラジオール誘導体に対して、細胞内にレセプタ
ーを有しているものであって、これが本発明の結合体の
標的に利用される。

したがって、癌細胞内にエストラジオールに対するレセ
プターを有する癌が本結合体の使用対象となる。

この種の癌として、乳癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、
子宮内膜癌がある。

特に、乳癌、子宮内膜癌、前立腺癌が本結合体の重要な
適用対象となる。

本発明の新規なエストラジオール誘導体の結合体は、一
般式■で示されるものである。

該エストラジオール誘導体の結合体■は、エストラジオ
ールと抗腫瘍剤とを結合剤を用いて結合することによっ
て得られる。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合に際しては、エス
トラジオールの活性部位が阻害されないように結合させ
ることが重要であり、一方、エストラジオールと結合す
る抗腫瘍剤の部位は、該結合によって抗腫瘍活性を阻害
しない部位でなければならない。

かかる結合は、導入結合剤を用いておこないうる。

導入結合剤を用いる場合、これによって新たな毒性が生
じるようなものであってはならない。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合は、モノブロムア
セチルブロマイド、モノクロルアセチルクロライド、モ
ノクロル酢酸モノブロム酢酸等の導入結合剤を用い、エ
ストラジオールの非活性部位の水酸基と反応させて 一般式 （ここに、Ｂはエストラジオールから１個の水酸基がと
れた基を表わし、Ｘは、）・ロゲン原子を表わす） で示されるエステルとし、このハロゲンを抗腫瘍剤の所
望の基と反応させて、本発明のエストラジオール−抗腫
瘍剤の結合体を得る。

さらに具体的に反応条件を説明するならば、四塩化炭素
、クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（Ｄ■゛）
、ピリジン、アセトン等の溶剤中で、エストラジオール
の１７位のＯＨ基と上記の導入結合剤すなわち、モノブ
ロムアセチルブロマイド等とを反応させ、次に、該反応
生成物をジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド
、ピリジン、トルエン、四塩化炭素、クロロホルム、テ
トラヒドロフラン（ＴＨＦ） 等の溶媒中で、所定の
抗腫瘍剤と反応させる。

たとえば、反応温度は、通常Ｏ乃至１００℃好ましくは
、０乃至５０℃であり、反応時間は、２乃至７４時間で
ある。

得られた反応生成物を常法により精製することによって
、本発明のエストラジオール誘導体の結合体が得られる
。

この種の製造法の詳細は、下記の実施例より容易に理解
される。

勿論、該実施例は具体的−態様を示すものに過ぎず、上
述の反応において種々の反応条件を考慮しうる。

このようにして得られた本発明の結合体は、赤外ＩＮ収
スペクトル、紫外吸収スペクトル、核磁気共鳴、元素分
析、融点等の手段により構造を確認した結果、一般式■
で示されるエストラジオール誘導体の結合体であること
を確認した。

さらに、本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急
性毒性、エストロゲン感受性を有する細胞へのとりこみ
試験、制癌試験をおこなった結果、毒性が著しく低く、
かつエストロゲン感受性を有する細胞へのとりこみが著
しく、かつ、制癌作用が著しいことが明らかとなった。

本結合体を治療薬として使用する際には、既知制癌剤と
同様な任意慣用の方法で投与用に調製することが出来る
。

例えば、経口投与用の錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル等
は組成物中に結合剤、賦形剤、包含剤、潤滑剤、界面活
性剤、崩壊剤の如きものを含有してもよい。

又、経口用液体製剤は水性又は油性懸濁液、溶液、シロ
ップ、振と５合剤であってもよい。

座薬は親油性又は親水性基剤と安定剤、分解剤、着色剤
等を配合してもよい。

注射液は水性又は可溶化剤、栄養剤、安定剤、界面活性
剤、等が混入してもよい。

又、場合により薬剤活性を維持又は高めるため、許容範
囲内でアルカリ、酸、塩類等が添加されることもある。

このように目的に応じて製剤化された結合体は、経口、
経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、直腸内、局所等の諸経
路によって投与される。

其の投与量は投与方式及び治療の程度によって異なるも
のであるが、大略、次の通りである。

成人に対し、経口投与１日当り約０．１■／ｋｇ〜５０
〜／に９、成人に対し、静脈注射１日当り約０．Ｏ１〜
／ゆ〜２０１ｎ９／ｋｇ。

而して、係る結合体からなる本発明は、以下の如き優れ
た特徴によって集約される。

（１）レセプターを有する組織が癌化した場合に、その
部位に選択的に作用し癌細胞を攻撃、消滅せしめる。

したがって少量投与で効果がある。（２）既知制癌剤単
独投与に比し、副作用が少なく、長期投与が可能なので
癌細胞を根絶できる。

（３）結合体に使われるキャリヤとしてのエストラジオ
ールは明確な単一構造化合物で、且つ、生理作用も明ら
かなので安心して使用できる。

（４）結合体に使われる抗腫瘍剤は構造、活性共に既知
のものであるため安心して使用できる。

（５）癌細胞のレセプターを分析し、これに対応するス
テロイドホルモンを結合体のキャリヤに選ぶことにより
、目的をもって多種の癌を治療することができる。

（６）結合体は、経口、注射、座薬等の通常の手段で投
与し得る。

このように優れた特徴をもつ本発明は、今後、医学界は
もとより人類に大きく貢献できるものと思われる。

以下、実施例を以って、本発明を説明するが、特にこれ
によって本発明は限定されない。

実施例 １ エストラジオール−５−Ｆｕ結合体 反応 ５−フルオロウラシル（５−Ｆｕ）１００■を５ｍｌの
蒸留水に分散させＫＯＨ水溶液（水１０ｍ１、ＫＯＨ５
０，８〜）をゆっくり添加した。

添加後３０分攪拌を行なうとｐＨ８〜９程度の透明な液
となった。

次いで光のａ下で、ＡｇＮ０３２．６％水溶液を滴下１
時間反応させてから沈澱を１別し水洗後減圧乾燥して５
−Ｆｕの銀塩を得た（収率９３．４％）。

５−Ｆｕ−銀塩１３０７Ｑとニスチラシオール誘導体Ｉ
２１５ｍ９をＤＭＳＯ１０ｍｌに入れ光遮断にて２日間
反応させ沈澱物は除去後、１液を減圧濃縮し、更に水を
加えて沈澱を析出させた。

沈澱物は良く水洗してから乾燥し、更にシリカゲルカラ
ムを用い、酢酸エチル５０容とシクロヘキサン５０容よ
りなる混合溶媒を展開剤として精製分取した。

得られたものは赤外吸収スペクトル、元素分析、紫外吸
収スペクトル、融点、等により、結合体■であることを
確認した。

収率は、８９．４％ 元素分析は であった。

融点は ２８２〜２８６℃（熔融分解）であった。

赤外吸収スペクトルを第１図に示した。

実施例 ２ 製剤化例 上記組成物をよく混和し粉状にしたものを圧縮して直径
１０ｍｍの錠剤とした。

処方例２ 上記組成の混合物を作り混練したのちエックペレツター
により押出して顆粒状とする。

これを乾燥し、１０メツシユと２４メツシユの間で選別
して経口投与用顆粒剤とする。

処方例３ 処方例２で得られた顆粒剤を市販のカプセル容器に充て
んして０．５ＣＣのカプセルとする。

処方例４ を加温混今後、滅菌して注射剤とする。

本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急性毒性、
制癌性試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ ）を
おこなった結果を述べる。

（１）急性毒性 急性毒性はＩＣＲ−ＪＣＬ系マウス（４週令）を用い、
１群８匹を透明なポリケージに入れ、試料を生理食塩水
に溶解又は分散したものを注射筒を用いて所定の置版腔
内投与経路にて投与した。

投与後、中毒症状の観察を続け７日間までの経時的死亡
率を求めＬＤ５ｏ値をリッチフィールドーウイルコツク
ソン（Ｌ １ｔｃｈｆ ｉｅ ｌｄ −Ｗｉ １ｃｏｘ
ｏｎ ）図計算法により算出した。

５−フルオロウラシルはＬＤ５ｏ値が２４２■／ゆであ
るのに対しエストラジオール誘導体−５−フルオロウラ
シルとの結合体はＬＤ５ｏ値が６０５〜／ゆ以上であり
明らかにしＤ５ｏ値が太き（少なくとも約２．５倍以上
である。

即ち安全であることを示している。

（２）エストロゲン感受性を有する細胞への本発明のエ
ストラジオール誘導体の結合体のとりこみ試験 日本生化学編生化学実験講座「ホルモン（上）」２１７
〜２５２頁東京化学同人、１９７７年４月２５日発行、
に記載されている方法に従って試験をおこなった。

即ち、３Ｈ標識したエストラジオールホルモンを予め体
内より摘出したウサギの子宮細胞にインキュベートして
結合させた後、検体を添加し、添加量の増加と共に遊離
する標識エストラジオールホルモン量を測定した。

本発明の結合体は、エストラジオールとほぼ同程度に遊
離する標識エストラジオールが認められ、エストロゲン
感受性を有する細胞へのとりこみが証明された。

第３図に結果を示す。（３）制癌試験（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ ） 仔牛血清−ＲＰＭ１１６４０（１：９）２ｍｌを入れた
シャーレ（３５龍φ）に人の乳癌細胞２Ｘ１０’個を植
えつけ飽和水蒸気−炭酸ガス含有空気（ＣＯ２５％）中
で３７℃、２４〜２６時間培養してからジメチルスルホ
キシド （ＤＭＳＯ）又は他の有機溶媒にとかした本発明結合体
及び対照物質を培地中の濃度がｌｐｐｍになるように添
加し、更に５日間上記条件で培゛養を続けた。

培養終了後、浮遊細胞及びシャーレ底面に付着している
細胞を０．２５％トリプシン処理によってはがし、細胞
数を計算し、次式に従って増殖阻止率を算出した。

増殖阻止率の大きい程制癌効果は高い。

濃度ｌｐｐｍでエストラジオール誘導体−５−フルオロ
ウラシルとの結合体は、９３％であり５−フルオロウラ
シルの増殖阻止率６２％より大きい。

即ち同量でより抗腫瘍性がすぐれていることを示してい
る。

（４）制癌試験（ｉｎ ｖｉｖｏ ） ステロイドホルモンレセプターを有する人の乳癌細胞を
ヌードマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ／ｎｕ）（生後５週
令）の腹腔内に移植し増殖を行った。

７日後に、この細胞Ｉ Ｘ １０６個を前記検体ヌード
マウスの腋下部皮下に移植して固型腫瘍とした。

移植後２４時間目より、本発明の結合体と生理食塩水の
所定量と、場合によっては乳剤（ポリソルベート８０）
を用いて便利し、良く分散させたものを投与した。

腹腔内注射（ｉｐ） は所定の量で、隔日に１０回投
与し、移植後２５日目上腫瘍を摘出し、本発明の結合体
の投与群１０匹の平均腫瘍重量並びに対照群の１０匹の
平均腫瘍重量より、次の式から腫瘍増殖抑制率を求めた
。

５−フルオロウラシルはｉｐ投与で投与量１０〜／に９
１．２０〜／ゆで増殖抑制率は３０％、５０％であった
。

エストラジオール誘導体−５−フルオロウラシルとの結
合体は投与量１０〜／ゆ、２０す７ｋｇで同様に９０％
、１００％であった。

同投与量（１０ｒｎ９／ｋｇ）で約３倍の値を示した。

このことは本結合体が選択的に乳癌細胞に作用すること
な示唆している。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、エストラジオール誘導体−５−フ
ルオロウラシルの結合体の赤外吸収スペクトル図、第３
図はコンペテイテイブイム、アッセイ法によるエストラ
ジオール単体、エストラジオール誘導体−５−フルオロ
ウラシル結合体及び５−フルオロウラシル単体な夫々用
いてウサギの子宮細胞のエストラジオールレセプターに
対する結合能の測定結果な示したものである。 Ａ：エストラジオール単体 Ｂ：エストラジオール誘導体−５−フルオロウラシル結
合体 Ｃ：５−フルオロウラシル単体 横軸はＡ、Ｂ又はＣの変化量であり、縦軸はエストラジ
オールレセプターに結合している３Ｈ標識エストラジオ
ールの結合量（％）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−５−フルオロウ
   ラシル結合体。 ２ エストラジオール−１７−モツプロムアセテートに
   ５−フルオロウラシル銀塩を反応して得られる 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−５−フルオロウ
   ラシルとの結合体の製造方法。 ３ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−５−フルオロウ
   ラシルの結合体を主成分とすることを特徴とする抗腫瘍
   剤。 ４ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−５−フルオロウ
   ラシルの結合体を主成分とする、該結合体はレセプター
   を有する癌に選択的に作用することを特徴とする特許請
   求の範囲第３項記載の抗腫瘍剤。