JPS5810393B2 - 新規なエストラジオ−ル結合体とその製造方法及び抗腫瘍剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性ステロイドホルモン結合体に
関するものである。

詳しくは、エストラジオール誘導体と抗腫瘍剤とを化学
的に結合させたエストラジオール誘導体の結合体及び、
その製造方法及び、本結合体を主成分とする抗腫瘍剤に
関するものである。

周知の如く、既知抗腫瘍剤の多くは、癌細胞を破壊する
と同時に、正常細胞にも一部著しい影響を及ぼすものが
多く、副作用が強く、長期投与が困難なために、癌細胞
を根絶することが困難であると考えられている。

本発明者等は、従来の抗腫瘍剤の欠点を解決し、治療効
果の高い抗腫瘍剤を開発するための研究をおこなった結
果、ある種の癌細胞を著しく高選択的に消滅させうると
共に、副作用の著しく少ない新規な抗腫瘍性ステロイド
ホルモン結合体を得た。

本発明のエストラジオール誘導体−クロラムブチルの結
合体は、癌細胞と特異的に結合する特定のステロイド系
ホルモン物質と特定の抗腫瘍性物質の結合体であって、
癌細胞に抗腫瘍性物質を選択的に作用させる特徴がある
。

上述の成る特定の癌細胞とは、本結合体の構成成分であ
るエストラジオール誘導体に対して、細胞内にレセプタ
ーを有しているものであって、これが本発明の結合体の
標的に利用される。

したがって、癌細胞内にエストラジオールに対するレセ
プターを有する癌が本結合体の使用対象となる。

この種の癌として、乳癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、
子宮内膜癌がある。

特に、乳癌、子宮内膜癌、前立腺癌が本結合体の重要な
適用対象となる。

本発明の新規なエストラジオール誘導体の結合体は、一
般式■で示されるものである。

該エストラジオール誘導体の結合体■は、エストラジオ
ールと抗腫瘍剤とを結合剤を用いて結合することによっ
て得られる。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合に際しては、エス
トラジオールの活性部位が阻害されないように結合させ
ることが重要であり、一方、エストラジオールと結合す
る抗腫瘍剤の部位は、該結合によって抗腫瘍活性を阻害
しない部位でなけれ。

ばならない。

かかる結合は、導入結合剤を用いておこないうる。

導入結合剤を用いる場合、これによって新たな毒性が生
じるようなものであってはならない。

エストラジオールと抗腫瘍剤との結合は、モノブロムア
セチルブロマイド、モノクロルアセチルクロライド、モ
ノクロル酢酸、モノブロム酢酸等の導入結合剤を用い、
エストラジオールの非活性部位の水酸基と反応させて 一般式 （ここに、Ｂはエストラジオールから１個の水酸基がと
れた基を表わし、Ｘば、）・ロゲン原子を表。

わす） で示されるエステルとし、このハロゲンを抗腫瘍剤の所
望の基と反応させて、本発明のエストラジオール−抗腫
瘍剤の結合体を得る。

さらに具体的に反応条件を説明するならば、四塩化炭素
、クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
、ピリジン、アセトン等の溶剤中で、エストラジオー
ルの１７位のＣＨ基と上記の導入結合剤すなわち、モノ
ブロムアセチルブロマイド等とを反応させ、次に、該反
応生成物をジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ド、ピリジン、トルエン、四塩化炭素、クロロホルム、
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の溶剤中で、所定の抗
腫瘍剤と反応させた。

たとえば、反応温度は、通常Ｏ乃至１００℃好ましくは
、０乃至５０℃であり、反応時間は、２乃至７４時間で
ある。

得られた反応生成物を常法により精製することによって
、本発明のエストラジオール誘導体の結合体が得られる
。

この種の製造法の詳細は、下記の実施例より容易に理解
される。

勿論、該実施例は具体的−態様を示すものに過ぎず、上
述の反応において種々の反応条件を考慮しうる。

このようにして得られた本発明の結合体は、赤外吸収ス
ペクトル、紫外吸収スペクトル、核磁気共鳴、元素分析
、融点等の手段により構造を確認した結果、一般式■で
示されるエストラジオール誘導体の結合体であることを
確認した。

さらに、本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急
性毒性、エストロゲン感受性を有する細胞へのとりこみ
試験、制癌試験をおこなった結果、毒性が著しく低（、
かつ癌細胞へのとりこみが著しく、かつ、制癌作用が著
しいことが明らかとなった。

本結合体を治療薬として使用する際には、既知制癌剤と
同様な任意慣用の方法で投与用に調製することが出来る
。

例えば、経口投与用の錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル等
は組成物中に結合剤、賦形剤、包含剤、潤滑剤、界面活
性剤、崩壊剤の如きものを含有してもよい。

又、経口用液体製剤は水性又は油性懸濁液、溶液、シロ
ップ、振とう合剤であってもよい。

座薬は親油性又は親水性基剤と安定剤、分解剤、着色剤
等を配合してもよい。

注射液は水性又は可溶化剤、栄養剤、安定剤、界面活性
剤、等が混入してもよい。

又、場合により薬剤活性を維持又は高めるため、許容範
囲内でアルカリ、酸、塩類等が添加されることもある。

こ□のように目的に応じて製剤化された結合体は、経口
、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、直腸内、局所等の諸
経路によって投与される。

其の投与量は投与方式及び治療の程度によって異なるも
のであるが、大略、次の通りである。

成人に対し、経口投与１日当り約０．１■／に９〜５０
〜／ゆ成人に対し、静脈注射１日当り約０．０１を／に
９〜２０〜／に！９ 而して、係る結合体からなる本発明は、以下の如き優れ
た特徴によって集約される。

；（１）レセプターを有する組織が癌化した場合に、そ
の部位に選択的に作用し癌細胞を攻撃、消滅せしめる。

したがって少量投与で効果がある。（２）既知制癌剤単
独投与に比し、副作用が少なく、長期投与が可能なので
癌細胞を根絶できる。

（３）結合体に使われるキャリヤとしてのエストラジオ
ールは明確な単一構造化合物で、且つ、生理作用も明ら
かなので安心して使用できる。

（４）結合体に使われる抗腫瘍剤は構造、活性共に既知
のものであるため安心して使用できる。

（５）癌細胞のレセプターを分析し、これに対応するス
テロイドホルモンを結合体のキャリヤに選ぶことにより
、目的をもって多種の癌を治療することができる。

（６）結合体は、経口、注射、座薬等の通常の手段で投
与し得る。

このように優れた特徴をもつ本発明は、今後。

医学界はもとより人類に大きく貢献できるもの思われる
。

以下、実施例を以って、本発明を説明するが特にこれに
よって本発明は限定されない。

実施例 １ エストラジオール−クロラムブチル結合体反応 Ｉ （エストラジオール−１７−モツプロムアセテート
）の合成 エストラジオール１０ｆを脱水テトラヒドロフラン（Ｔ
ＨＦ）４００ｍｌに溶解し、次いで無水ピリジン８．８
１を添加した。

モノブロムアセチルブロマイド２２．５ｇを四塩化炭素
７４ｇに溶解した混合液をエストラジオール溶液に−５
〜−７℃で満願し、混合物は一夜放置した。

反応終了後沈殿物をろ別除去、ろ液より溶剤を蒸発した
。

蒸発残渣をエーテルに溶解後納晶化させ、エストラ−１
・３・５・（１０）−トリエン−３・１７−ビス（モノ
ブロムアセテート）を得た。

この生成物２ｇをメタノール９００ｍ１に溶解し、−５
℃に冷却しながらに２Ｃ０３０，２４ｇを水２０−に溶
解した溶液を滴下した。

３０分反応後、水１０００７７１１を加え、沈殿物を分
離し乾燥した。

元素分析及び赤外吸収スペクトルよりエストラジオール
−１７−モツプロムアセテートである事を確認した。

■ （エストラジオール−クロラムブチル結合体）の合
成 りロラムブチルー銀塩２００ｍｇを１ｏ、ｍｌのジメチ
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解分散させた。

完全には溶解せず、白色のコロイド状であった。

次いで、エストラジオール−１７−モツブロムアセテー
ト１９０．８ダを加え、６４時間光を遮断して攪拌を行
った。

（室温）６４時間後、沈殿は黄緑色に変化していた。

アセトンを少量加え、Ｇ−４フイルターでこの沈殿を分
離した。

光をうけて、黄緑色から黒縁色に沈殿は変色した。

ｒ液は、無色透明であった。８０℃の湯浴上で、すみや
かにＤＭＳＯを減圧除去し、ついで水１００ｍ１を加え
ると、白色結晶が析出した。

この物を１時間放置してＤＭＳＯを除去し、Ｇ−４フイ
ルターでこの結晶を分別し、蒸留水で充分洗浄後、デシ
ケータ−中で、減圧乾固した。

粗収量３３０．５〜であった。イ、結合体■の精製 粗結合体３３０．５〜をシクロヘキサン５０容：酢酸エ
チル１０容よりなる混合溶媒に溶かし、シリカゲル４０
Ｐをつめたカラムの中へ注ぎ込み、ゆっくり分離させた
。

高純度の結合体１８８．２〜（収量６２．８６％）が得
られた。

このものの元素分析、融点、赤外吸収スペクトルは以下
の如くである。

元素分析値 融点は 室温（２５℃）で半熔融状であった。

赤外吸収スペクトルを第１図に示した。

実施例 ２ 製剤化例 上記組成物をよく混和し、粉状にしたものを圧縮して直
径１０ｍｍの錠剤とした。

処方例２ 上記組成の混合物を作り混練したのちエツクペレツター
により押出して顆粒状とした。

これを乾燥し、１０メツシユと２４メツシユの間で選別
して経口投与用顆粒剤とした。

処方例３ 処方例２で得られた顆粒剤を市販のカプセル容器に充て
んして０．５ ｃｃカプセルとした。

本発明のエストラジオール誘導体の結合体の急性毒性、
制癌性試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、 ｉｎ ｖｉｖｏ
）をおこなった結果を述べる。

（１） 急性毒性 急性毒性はＪＣＲ−ＪＣＬ系マウス（４週令）を用い、
１群８匹を透明なポリケージに入れ、試料を生理食塩水
に溶解又は分散したものを注射筒を用いて所定の置版腔
内投与経路にて投与した。

投与後、中毒症状の観察を続け７日間までの経時的死亡
率を求めＬＤ５ｏ値をリッチフィールド−ウィルコツク
ン７ （Ｌ ｉ ｔｃｈｆ １ｅｌｄ −Ｗｉｌｃｏｘ
ｏｎ ）図計算法により算出した。

クロラムブチルはＬＤ、。

値が２０ｍｇ／ｋｇであるのに対しエストラジオール誘
導体−クロラムブチルとの結合体はＬＤ５ｏ値が５８１
ｒ１９／に９以上であり明らかにＬＤ５ｏ値が大きく少
なくとも約３倍以上である。

即ち安全であることを示している。

（２）エストロゲン感受性を有する細胞への本発明のエ
ストラジオール誘導体の結合体のとりこみ試験 日本生化学編生化学実験講座「ホルモン （上）Ｊ２１７〜２５２頁東京化学同人、１９７７年４
月２５日発行、に記載されている方法に従って試験をお
こなった。

即ち３Ｈ標識したエストラジオールホルモンを予め体内
より摘出したウサギの子宮細胞にインキュベートして結
合させた後、検体を添加し、添加量の増加と共に遊離す
る標識エストラジオールホルモン量を測定した。

本発明の結合体は、エストラジオールとほぼ同程度に遊
離する標識エストラジオールが認められ、エストロゲン
感受性を有する細胞へのとりこみが証明された。

第３図に結果を示す。（３）制癌試験（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ ） 仔牛血清−ＲＰＭＩ １６４０（１：９）２ｍｌを入れ
たシャーレ（３５龍φ）に人の乳癌細胞２Ｘ１０’個を
植えつげ飽和水蒸気−炭酸ガス含有空気（ＣＯ２５％）
中で３７℃、２４〜２６時間培養してからジメチルスル
ホキシド （ＤＭＳＯ）又は他の有機溶媒にとかした本発明結合体
及び対照物質を培地中の濃度が１ ｐｐｍになるように
添加し、更に５日間上記条件で培養を続けた。

培養終了後、浮遊細胞及びシャーレ底面に付着している
細胞を０．２５％トリプシン処理によってはがし、細胞
数を計算し、次式に従って増殖阻止率を算出した。

増殖阻止率の大きい程制癌効果は高い。

濃度ｌｐｐｍでエストラジオール誘導体−クロラムブチ
ルとの結合体は９９％でありクロラムブチルの増殖阻止
率６９％より大きい。

即ち同量でより抗腫瘍性がすぐれていることを示してい
る。

（４）制癌試験（ｉｎ ｖｉｖｏ ） ステロイドホルモンレセプターを有する人の乳癌細胞を
ヌードマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ ／ ｎｕ ） （
生後５週令）の腹腔内に移植し増殖を行った。

７日後に、この細胞１Ｘ１０’個を前記検体ヌードマウ
スの腋下部皮下に移植して固型腫瘍とした。

移植後２４時間目より、本発明の結合体と生理食塩水の
所定量と、場合によっては乳剤（ポリソルベート８０）
を用いて研和し、良く分散させたものを投与した。

腹腔内注射（ｉｐ） は所定の量で、隔日に１０回投
与し、移植後２５日目に腫瘍を摘出し、本発明の結合体
の投与群１０匹の平均腫瘍重量並びに対照群の１０匹の
平均腫瘍重量より、次の式から腫瘍増殖抑制率を求めた
。

クロラムブチルはｉｐ投与で投与量５Ｗ１ｇ／／ｋｇで
増殖抑制率は３０％であった。

エストラジオール誘導体−クロラムブチルとの結合体は
投与量ｏ、５ｍｙ／ｋｇ、５ｍ９７ｋｇで同様に９１％
、９７％であった。

同投与量（５１ｆｔｇ／ｋｇ）で約３．２倍の値を示し
た。

このことは本結合体が選択的に乳癌細胞に作用すること
を示唆している。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図はエストラジオール誘導体−クロラム
ブチルの結合体の赤外吸収スペクトル図、第３図はコン
ペテイテイブイム、アッセイ法によるエストラジオール
単体、エストラジオール誘導体−クロラムブチル結合体
及びクロラムブチル単体を夫々用いてウサギの子宮細胞
のエストラジオールレセプターに対する結合能の測定結
果を示したものである。 Ａ：エストラジオール単体、Ｂ：エストラジオール誘導
体−クロラムブチル結合体、Ｃ：クロラムブチル単体、
横軸はＡ 、Ｂ又はＣの変化量であり、縦軸はエストラ
ジオールレセプターに結合している３Ｈ標識エストラジ
オールの結合量（％）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−クロラムブチル
   の結合体。 ２ エストラジオール−１７−モツプロムアセテートに
   クロラムブチル銀塩を反応することを特徴とする 特許 で表わされるエストラジオール誘導体−クロラムブチル
   の結合体の製造方法。 ３ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−クロラムブチル
   の結合体を主成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤。 ；４ 一般式 で表わされるエストラジオール誘導体−クロラムブチル
   の結合体を主成分とする、該結合体はレセプターを有す
   る癌に選択的に作用する特性を有することを特徴とする
   特許請求の範囲第３項記載の抗腫瘍剤。