SI7911981A8 - Derivati klorambucila - Google Patents

Description

Oblast tehnike u koju spada pronalazak

Oblast tehnike u koju spada pronalazak jeste sinteza konjugata estrogeni steroid-hlorambucil koji imaju antitumornu aktivnost. (Internacionalna klasifikacija patenata : A61K31/565).

t

Tehnički problem

Tehnički problem koji je rešen u sadašnjem pronalasku jeste razvoj novih antitumornih lekova koji imaju selektivno dejstvo pa tako uništavaju samo čelije raka dok im je efekat na normalne čelije slab. Ovaj tehnički problem rešen je tako što je obezbedjen postupak za dobivanje derivata konjugata estradiol-hlorambucil formule (I) ,kao što če biti detaljno objašnjena u daljeiti tekstu, koji imaju selektivnu antitumornu aktivnost. Ovakvo rešenje tehničkog problema je novo i originalno i Prijavioc nije našao nijednu referencu u ranijem stanju tehnike koja opisuje postupak koji se može direktno uporediti sa postupkom iz sadašnjeg pronalaska.

Stanje tehnike

Najsrodnija referenca iz ranijeg stanja tehnike jeste :

Von Hoff, D.D., Cancer Treat. Rep. 61 759-768, 1977, gde je klinički ispitana antitumorna aktivnost 27 komercijalno pristupačnih antitumornih lekova. Od svih antitumornih lekova iz ranijeg stanja tehnike, sa jedinjenjima koja se dobivaju postupkom iz sadašnjeg pronalaska, najsrodniji je derivat estradiola koji ima formulu :

ο

ClCHjCH,^

ClCHjCH,^

N

OCCH

>CH_xCHXl

CHjCH.Cl

Medjutim, gornji lek, kao i večina drugih postoječih antitumornih lekova, dejstvuje i na čelije raka i na normalne čelije i zato izaziva ozbiljne bočne efekte prilikom lečenja. Zato je teško da se daje tokom dovoljno dugog perioda da se potpuno unište sve čelije raka.

Opis rešenja tehničkog problema sa primerima izvodjenja

Sadašnji pronalazak obezbedjuje postupak za dobivanje novih derivata konjugata (parova) 4-/p-/bis-(2-hloroetil)-amino/-fenil/-buterne kiseline (u daljem tekstu Hlorambucila) sa estradiolom. Posebno obezbedjuje derivate hlorambucila koji se dobivaju hemijskim vezivanjem hlorambucila za hidroksilnu grupu u položaju 17 estradiola, iii njegovog derivata, u prisustvu sredstva za vezivanje.

Odredjeno, pronalazak obezbedjuje postupak za dobivanje konjugata derivata estradiol-hlorambucil kpji su pretstavljeni formulom (I) :

RO o

0C-(CH..) -O-C-(CKJ 2 n 2 (I) u kojoj iT piRrttoGhrrJji? jncutoMkov atom, benzoil grupu, acet.il grupu, propionil iii n-butiril grupu a n je je 1 iii 2.

Prema postupku iz pronalaska gornja jedinjenja formule (X) dobivaju se na sledeči način :

U prvoj fazi sredstvo za vezivanje koje je izabrano iz grupe koja sadrži jedinjenja pretstavljena formulom :

X(CHJ COOH; i z n

X(CH_of COX 2 n u kojoj je n 1 iii 2 a X pretstavlja halogenski atom, reaguje sa estradiolom iii sa acilovanim estradiolom.

Reakcija se vrši na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, poželjno od -10 do 80°C tokom 0.5 do 74 časova u nekom rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran, dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin i aceton. Na ovaj način dobiva se jedinjenje koje se može pretstaviti sledečom formulom :

u kojoj je X kao što je definisano ranije.

Zatim, u drugoj fazi sinteze, jedinjenje formule (II) reaguje sa hlorambucilom. Reakcija se vrši na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, poželjno od -10 do 80°C tokom 0.5 do 74 časa u reakcionom rastvaraču koji se bira iz grupe koja sadrži dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin, toluol, ugljentetrahlorid, hloroform i tetrahidrofuran. Na ovaj način se proizvodi željeni konjugat formule (I).

Prema varijanti gornjeg postupka najpre reaguje sredstvo za vezivanje izabrano iz grupe jedinjenja koja se mogu pretstaviti formulama :

3a

X(CH„) COOH; i z n

X(CH„) COX 2 n gde je n 1 iii 2 a X pretstavlja halogenski atom sa hlorambucilom.

Reakcija se vrši na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, poželjno od -10 do 80°C tokom vremenskog perioda od 0.5 do 74 časova u reakcionom rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran, dimetilsulfoksid, piridin i aceton. Na ovaj način dobiva se jedinjenje koje se može pretstaviti opštom formulom (III) :

o o

I' ¹¹ X

Χ-C-ICK-,) -O-C-ICH,) _2/3/A._N/^CH2^CH2^{CL 2 3} \_C3 .rs (III) ca₂cs₂ci u kojoj je X kao što je definisano ranije.

Posle toga, u drugoj fazi reakcije, reaguje dobiveno jedinjenje formule (III) sa estradiolom iii acilovanim estradiolom. Reakcija se vrši na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, poželjno od -10 do 80°C tokom 0.5 do 74 časova u rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin, toluol, ugljentetrahlorid, hloroform i tetrahidrofuran. Na ovaj način dobiva se takodje željeni konjugat formule (I).

Iz gornjeg je jasno da obe varijante postupka pretstavljaju, ustvari, isti postupak pošto se u obema koriste isti reaktanti koji se štaviše stavljaju u medjusovnu reakciju pod istim reakcionim uslovima. Jedino po čemu se gornje varijante postupka iz pronalaska razlikuju jeste redosled po kojem reaktanti medjusobno reaguju, dok su svi ostali parametri postupka (temperatura, reakciono vreme, rastvarači) identični.

Derivati hlorombucile dati ovia pronalaskom su parov! hlorambucila i eetrediola iii njegovog derivata so sredstvom sa vesIvanje. Derivati hlorambucila dati ovim pronalaskom imaju epeoifični afinitet prema čeliJama raka i imaju specijelan efekat za selektivno napadanje čelija raka.

Specifične čelije raka imaju receptore sa steroidne hormone, naročito sa derivate eetrediola kao komponente derivata hlorambucila datih ovim pronalaakoa·

Keoeptori aogu biti mete sa derivata hloraabuoila dete ovim pronalaakoa. Otuda derivati hloraabuoila dati ovim pronalaskom napadaju čelije raka koje imaju receptor sa eetradiol i njegove derivate.

Takvi rakovi obuhvataju rak grudi, karcinom prostate, rak hepatoaf,karcinom guče i karcinom endosetritiss. Produkti ovog pronalaska su naročito efikamni prema raku grudi, karcinomu endometritiaa i prostate·

Klorambuoilovi derivati dati ovim pronalaskom su selektivno raspored Jeni na čelije raka u organizmu tako da napadeju čelija raka bes sporednog efektta·

Naročita odlika ovog pronalaska je da vesuje eetradiol ill njegov derivat sa hloraobuoil a da sa na guba aktivni položaji eetrediola 111 njegovog derivata i da se na gubi antituaoreki aktiven položaj hlorambucila.

Pogodno je ds ee OH grupa u položaju 3 estradiola pretvori u aciloksi-grupu kao Sto je o

, -O-C-CH

O o

M * ϊ ^« —O—C—CgH^ i —O—O—CjHy

Aoiloksi-grupa se lako pretvara u OH grupu u neko® organizmu nekog tela tako da vozuJe receptor· u dalijama«

Derivati hloraabueile dati ovira pronalaskora mogu ae dobiti vezivenjera hloraabucila za hidrokallnu grupu u položaju 17 i a estradiola,iii njegovog derivate u prisustvu sredstva za vezivanje«

Sredstvo za vezivanja ne bi smelo izsevati toksičnost pri vesivsnju istih« »

Optimalna sredstva sa veziveaje koje vesuju estrediol iii njegov derivat ae hlorsmbucildo obubvataju raonobromeoetilbroaid« monohloreeetllhlorld« monoblorsirdetnu kiselinu« monobrorasirdetnu kiselinu« Itd·

Hlorembuoll 1 eatradiol iii njegov derivat nogu biti vezani aa agenaora za vezivanje poraodu za to pogodnih postupaks·

Na primer« u jednom postupku^ sredstvo za vezivanje prvo reaguje sa estradioloa iii aoilovania estradioloa o zatira ovako nodifikovan eatradiol lli njegov aciloven derivat

- 6 reaguje b& hlorarabuoilom. U drugom postupku, vezujuči agens prvo reaguje sa hlorembucilom a zatira modifikovan hlorsmbuoil reaguje sa eetradiolom lli eoilovanim estradlolom*

U rani j era postupku, vezujuči agens reaguje sa neaktiviranio položajera estradiola lli aoilovanog estradiola pri Čemu ae dobiva oster formulo

X(CH₂)_nCOOB u kojoj B označava deo estradiola iii epilovanog estradiola sa uklonjenom OH grupom u položaju 17 i X označava atom halogena*

Zatim, halogen ovog estra reaguje aa hlorambuollom pri čemu se dobiva derivat hlorambueila dat ovim pronalaskom·

Ove reakcije če biti dalje llustrovane·

Vezujuči agens, keo Sto je aonobroaaoetilbroaid reaguje aa OH-grupom u položaju 17 estradiola lli scilovanog estradiola koji ima ec il-grupu u položaju 5« u nekom restveroču kao Što je ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran, dimetilsulf oksid (DMSO), dimetilformamid (DMF), piridin i aceton* Heakoioni produkt dalje reaguje sa hlorsmbuoilom u rastvaraču kao Sto je dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin, toluol, ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran (THF). Hlorambueil ae može koristiti u obliku kiseline iii njene metalne soli kao Sto je srebrova ao ill alkalna ao·

Temperatura svake reakoije nslssi ae u intervalu od -30 do 100°C, prvenstveno od -10 do 80°C. Vreme trajanja reakoije je obično A greničarna od 0,5 do 74 Sasa· Reakcioni produkt ae prečlščsva pogodnom »etodora sa prečiščevanje do bi o« dobili derivati bloraabudla dati ovim pronaiaskom·

Π ovom poslednjem postupku, vesujuči agens reaguje ea karboksil nom grupoa hlorambuoila dajučl jedinjenje formule

ACOO(OH₂)_nCOX u kojoj A osnačsva deo hlorambuoila aa uklon j «10« COOH grupo» u položaju 1« Zeti® halogen (X) ovog jedinjenja reaguje aa OH grupoa u položaju 1? eatradiola iii eollovsnog eatradiola koji las <ell-grupu u položaju 3 dejuči derivate hloraabuoiln date ovim pronaiaskom.

Rastvarači primenjeni u ovim reakcij o ras au odgovarajuče lati kao oni koji se koriste sa reakoiju hlorambuoila ill eatradiola ill soilovanog eatradiola.

Reakcione temperature i vremena trajanja reakoije mogu ae odabrati u letim intervaliraa·

- 8 OH grupa u položaju 5 estrediolae komponente u derivatu hlorambuoila datog ovim pronalaskom može se acil ova ti pre lli posla ve e Ivanja hlorambuoila za eatrediol u prisustvu vezujučeg agens·, iako je pogodno da se aciluje eatradiol pre njihovog vosivanja·

Reakcije za acilovene produkta biča dalje ilustrovane.

Hidroksilnc grup· u položaju J estradiola reaguje ss alkalnometalnim hidroksidom u rastvaraču kao što je THF da bi sa pretvorilo u grupu ONa iii OK i zatim so reakcioni produkt t

dalje reaguje sa aollhloridem kao što je benzoilhlorid· •oetilhlorld i propionilhlcrid de bi se dšblo ecilovan estradiol« Zatim se vezujuči agens· kao što je aonobroaaoetllbrcmid· reaguje sa hidroksilnom grupom u položaju 17 acilovanog eatrediol· u rastvaraču kao što je DMF, piridin, aceton 1 THF« Zatim se modifikovan ecilovan eatradiol reaguje ss hlorambuollom u rastvaraču kao što je DM30, DKB, piridin· toluol, ugljentetrehlorid, hlorofora i THF.

Temperatura svake od ovih reakcijo se obično naloži u granioama od -JO do 100°G, prvenstveno od -10 do 80®C> Vreme trajanja reakcije je obično u intervalu od 0_t5 do 7* Časa« Doblveni produkt se prečiščava pomoču pogodne metode za prečiščavanje do bi se dobili derivati hlorambuoil doti ovim pronaloskom·

- 9 Neki od postupaka za dobivanje derivata hlorambucilfl datih ovim pronelsakoa bide opisani pomoču nekoliko primer« koji au samo ilustracija i iz'istih ae mogu odabrati uslovl izvodjenja reakcije ako ae to Želi«

Derivati hlorambuoila dati ovim pronalaskom imaju formulu (I) kao parovi hlorambuoila i eatradiola iii aoilovanog eatradiola. Ova činjenloa je potvrdjena IH-, UV-, NKfi-_epektrom, mesenim spektrom* elementarnem analizom i tačkom topljenja produkata·

Prema teatoviaa na akutnu toksičnost* uvodjenje ovog jedinjenja u čeli Je osetljive prema estrogenu i antitumoreki efekat, derivati hlorambuoila dati ovia pronalaskom imaju primetno malu toksičnost, i primetno vellku vezujuču sposobnost za čelije osetljive prema estrogenu 1 visok antitumoreki efekat·

Derivati hlorambuoila dati ovim pronalaskom su naročito efikasnl za napadanje kanoarogenih tkiva i čelija koje au osetljive prema estradiolu i prema torno, mogu se primeniti za lečenje rak« pluča, karcinome prostate, hepatorna, guže i karcinome ondomotritiaa· Derivati hlorambuoila dati ovim pronalaakom au takodje efikasnl za lečenje raka želuoe, rektuma, grla, karcinoma esofagusa, pluča, kože i leufioearkoma i imaju primetno niču toksičnost u poredjenju aa poznutiia lekovim« protiv reka iii antituaorskim lekovimo kao Sto je sam hloranbucil· Derivati hlorambuoila dati ovim pronalaskom nemaju speoiflčnu aekaualnu funkoiju eatradiola iako eu oni i derivati ©stradiola. Razlog za ovo nije shavečn na ozotn atupnju razvoja« Smatra ee da su ovi afekti . potpomognuti nekim neposnetim mehanizmom pored medicinskog •fakta baziranog na uobičajenom konceptu receptora«

Kada ae derivati hlcrambucile dati ovim pronalaskom korist· kao terapeutski 1okovi, medicinske smeSe sa davanje se mogu dobiti pomoču u običaj ©nih metoda koje su posnete za antitumorske lakov·«

Derivati hlorambuoils dati ovim pronalaskom mogu se formulisati u željen· oblike za injekcije, oralno davanje, supositorije iii paste«Kada se formuližu u čvrste oblike sa oralno davanje, kao čto su tableto, pilula, granule, prečak, kapsula, moguče je pomeSati sredstvo sa vesivanje, sredstvo za rzblažIvanje, punioc, maslvo, ulje, povrSinski sktivnu matari ju iii deslntegrator u formulaoiju· Kade se formuližu u tečne oblike sa oralno davanje, formulacija mož« biti vodena suspenzija, ulJne suspenzija, rastvor, sirup, i smeša za mučkanjo« Kade ae formuližu u obliku supozitorije, formulacija može biti dobivena uz primenu hidrofobne iii hidrofilne base i stabilisatora, desintegratora iii sredstva sa boju« Kada se formuližu u obliku Injekcija, vodeni rastvor, rastvarač, nutrient, stabilizator i površinski aktivna materija se mogu dodati« U oilju održavanja iii poboljšanja medioinskog efekta mogu se inkorporirati basa, kiseline iii so ako so to želi* Količina aktivnog aastojka koji ae sadrži u smeši (preparatu) obično je dd 0,001 do 90 tež« X e prvenstveno od 0,01 do 60 tež«

- 11 Derivati hloreabucilo deti ovim pronalaskom, koji se naleze u obiiku formulacija, mogu ae davati oralno, perkutanom adaorpoijom, intremuakularnom injekcijom, intrapetritonalnora Injekoijoa, potkožnom injekcijo«, intravenoznoa minjekoijom, intrarektalnon injekcijoa i lokalno·

Dos« derivata hlorambucila datog ovim pronalaskom nalazi se u intervalu od oko 0,01 do mg/kg/dan/odraali pri oralnom daveaju i u intervalu od oko 0,001 do 20 mg/kg/den/odrasli pri intravenoznoj injekciji· t

Derivati hlorambucila dati ovim pronalaskom iaaju alodede karakteristikex

1· Ako je rak obrezovan u tkivu koje ina receptor, produkt selektivno napada dalije raka u tkivu da bi rasorio samo dalije raka· Na ta j način je efikasen več u naloj dozi·

2· Ifodukt ime mali aporeden efekst u poredjenju ea onim koji se javlja pri davanju eemog hlorambucila· Tako ae može davati u toku dužeg perioda i otuda aa dalije rake nogu potpuno razoriti·

5· Estradiol ill aciloven eatradiol, koji ae koriste kao nosač ke komponenta u derivatu hloraabueila, iaaju prost strukturni aostav i njihovo fiziološko dejstvo je sasvim posneto Na taj način se produkt nože davati bes ikakve bojazni·

4. Strukture i aktivnost antitumorske komponente u derivatu hlorambueila več su poznati. Na taj način, ovoj produkt se može davati bes bojazni.

5· Receptor čelija raka se može proučevati. Na taj način ee mogu odebreti odgovarajuči steroidni hormon iii njegov dorivst sa nosaču komponentu u derivatu hlorambueila«

Na taj način se može razmetrati terapija za različita vrsto raka pri rasličitoo odabiranju noseče komponento«

6· Derivat hlorambueila se može davati primenom uobičajenog oblika formulacije kao Sto jeoblik so oralno davanje, injekcije iii supozitorije«

Produkti dati ovim pronalaskom imaju izvanredne karakteristike jer vrlo mnogo doprinose ljudskom rodu keo i razvoju medicine. Derivati hlorambueila dati ovim pronalaskom takodje se mogu kotittiti kao stabilizator! za visoke polimere naročito poliolefine.

Ovaj pronalazak če dalje biti ilustroven pomoču nekoliko primera i referenci koji su dati aamo u cilju ilustrovanja i nikako ae ne mogu sbvatiti kao ograničenja opsega ovog pronalaska.

- 13 Primer 1

Dobivanje 3-hldLrokei-l,3.'%lO)-efltratrlen-170-C4—^P-Ebia(2-hlorotlI)-amlao1 -f enil{ -butirilokai -acetata

J

I* noblY»n.1. 5-hj.<lrolcal-l.}.S(]d-aatratrl»a^l7B-«onot>r<?fl»<>·*»*» g l,3,5(10)-astratrien-3»17B-’diole je roctvOreno u 400 ol anhidrovanog tetrahidrofurana (TEP) i aatiai je do da to 8,8 g piridina« u dobiveni rastvor je, pri oko -5 do -7°0, ukazovanjem dodavan rastvor od 22,5 g ooncbromeoetilbroaida n 74 g ugljentetrehlorida« Smeša je ostevljena ds stoji preko noči»

Posle savršene reakcije dobiveni talog je odvojen filtriranjem«

Rastvarač je odestilovan is filtrata« Ostatak je roatvoren u ....... f · .......

etru i prekristslissn is etre pri čemu se dobiva 1»3,5(1O)“ eetretrien-3«17D-bis-(monobronaoetet)· 2 g okog produkta je rastvoreno u 900 ml metanola i rastvor je ohladjen na -5°G«

U dobiveni rastvor jo ukapavenjeia dodat rastvor od 0,24 g ^R2°0j u 20 al vode· Posle trajanja reakcije u toku 30 minuta dodato je 1000 ml vode i dobiveni talog je odvojen i osušen« Pomoču elementrane analize i IR-epektra je potvrdjeno da je dobiveni produkt 3-bidroksi-l_t3,5(10)*'astratriea-17D-monobromacetat«

II· Dobivanje 5-hldrokel-l_t5,5(10)-estratrien-17B-C4-^pCbia-(2-hloretll)-amino) fenil -butlrilokatj-acetata (pare hlorembuoil-estradiola)

200 mg erebr©-C4-$p-[bis-(2-hloretil)-an»ino) -fenil(-butirata i s (srebrove soli hlorambueila) dodate ja u 10 ml DMSO de bi sa negradlo koloidni rastvor· Zatim ja dodato 190,8 rag 3-hidroksil>3t5(10)-aatratrian-173-oonobromeoeteta i smeša je mešane 64 časova u mraka pri sobnoj temperaturi· Talog ja proaanio boju do žučkasto salone« Mala količina acetona ja tada dodato 1 talog je ©dvojen filtriranjem kros G-4 filter.

t

Talog ja prom eni o boju od žu&koato zelene do omkasto zelene pri ozračlvsnju svetloSču· Filtrat ja bio bezbojan i prosiran· DMSO ja odaatilovan pod aniženlm pritiskom na vodenom kupatilu pri temperaturi od 8d°C i dodato ja 100 al voda pri čemu so taloŽe beli kristali· Kristali du održavani još 1 Čas da bi sa udaljlo DMSO i zatim su odvojeni kroz 0-4 filter i pažljivo lspranl destllovsnem vodoa -a potoa osufianl pod eni ženim priti ekon u ekaikatoru, Prinos sirovog produkta je bio 330,5 mg· a· Prečiščevanje produkte

330,5 mg sirovih kristala je raatvoreno u smeši rastvarača koja se sastoji od 50 z e pr. delove oikloheksene i 10 zapr· delova etilacetata, Rastvor ja pol ako propuštan kroz kolonu napunjenu aa 40 g silikagela i produkt je postepeno odvajan pri Čemu ja dobiveno 188,2 ag (62,66 čistog produkta.

- 15 n'ezul ta ti elementarne analize, tačke topljenja i IR-spektre su sledeči·

Elementarna analize:

nadjeno: C 66,0 H 7,0 %, N 2,3 % Cl 11,0 %, izračunato: G ¢6,2 $, H 6,98$, H 2,2?%,C1 11,52 %.

tačka topljenje: polutopljenje pri 25°C.

IR-epektar (cm**¹·):

3420, 2920,2840, 1750» 17*0» 1612, 1582, 1516, 1450, 1380, 1350» 1280, 1250» 1210, 1175» 11*2, ‘1070» 1000, 960, 917, 967 , 810 , 800, 740,

655*

Primer 2

Dobivanje 3-benMloksi-1.5.5(10)-estratrien-178-i4-jp-Cbis(2-hl pretil )-emino] -denlli-butiriloksll-acetata

8 l,3»5(10)-eetretrien-3»179-diole je rastvoreno u 100 ml THE i dodato je 10 ml vodenog rastvora koji sadrži 1,47 g N a OH. Sraeča je mešana pri sobnoj temperaturi u toku 50 minute· Žetim je eme&a konoentrovana do suva pod sniienim pritiskom na vodenoa kupatilu pri 80°C de bi seudeljile voda· Oetetak je rastvoren u anhidrovanom fH? i u dobiveni rastvor je ukepevanjem dodat rastvor od 5,5 S benzoilhlorida u 50 ml etiletra i reakcije je isvodjena 16 časova pri sobnoj temperaturi. Posle zavržene reakcije izdvojen!

natrijuo-hlorid Je odvojen uobičajenim putem· Filtrat Je uperen do suva pod sniženim pritiskom. Radi udaljovonja noizreogovanog bemoilhlorida dodato je 200 ml 0,1 N vodenog rastvora NaOH i eaefis je mešana 15 minuta pri sobnoj temperaturi. Dobiveni beli kristali su isdvojeni pomoču G-4 filter« i pažljiko isprani destilovanom vodom a potom osušeni pod sniženim pritiskom u eksuketoru.

Produkt je anelisiran tenkoslojnoe kromatografijo« na silikagelu sa mešovitim restvarafiem sa razvijanje (etilacetat/ eiklohekesn, 50:JO,*sapr.) dajuči glsvnu mrlju pri Rf 0,J4. _ birovi kristali su prekrietalieani is etilacetata i dobiveno je 8,6 g belih kristale«

Odredjivanjem tačke topljenje, eleaentarnom analizom i IRspektrom je potvrdjeno da je dobiveni produkt 178-hidrokei1,3,5(10)-estrstrien-3-benzoat.

7,0 g dobivenog produkta je rastvoreno u THF i dodato je 2,0 g piridina nakon čega je smeša ohlsdjona na -5%· 0 dobivenu smeiu je postepeno ukapavan rastvor koji sadrži 15,5 K 30 >-nog monobromaoetilbromide u uglJentetrahloridu rastvorenog u 50 ral THF· Posle dodavanja, smeša je mešana 2 časa pri -5°C, a potom 4 šaša na kupatilu sa ledom i drŽana u frižideru u toku 16 Časova. Posle »evrčene reakoijo·

- 17 dobiveni beli telog je odvojen pomoču G-4 filtre i osušen pod eniženim pritiskom na vodenom kupatilu pri 20°C. Zatira je dodato 200 ral etil etre i suečs je mešana dajučl 5,3 6 belih kristale.

Rezultati elementarne analize i odredjivanja tačke topljenja su sledeči.

Elementarna analizat nadjeno; C 64,3 %, H 5,8 £, Br 15,7 izreč.: G 64*,23 ¢, K 5,78 Č, Br 15,8 fi.

tečka topljenja» 145-146°C.

Produkt je analiziran tenkoalojnom hromatografijom na sillkegelu aa mečovitira raatvarečem za razvijanje (etllaoetat/oikloheksen 5O»3O, zapr.) dajučl jednu mrlju se Rf 0,77·

U IR-epektru nije nedjena apaorpoija koja pripada OH grupu i otuda je potvrdjeno da je produkt 3~benzoiloksi-l,3,5(lO)eetratrien-173-»onobromacetat.

IR-apektar

2920, 1735, 1728, 1593, 1579, 1490,

1448, 1412, 1382, 1286,. 1280, 1260,

1210, 1200, 1170, 1145, 1095, 1075,

1019, 1004, 897» 780, 700, 680·

- 18 182,3 “S 3-benzoiloksi-l ,3,5(10)-eetratrian-rzp-aonobro®-aoetata i 148,5 ®g (0,6 aaol) 4-:p-Cbis-(2-hlo»etil)-eminoIk.

fenilj-butirata je dodatou 5 al DHSO i reakciona sraešo je drχena 3 dana u araku pri sobnoj temperaturi· Posle zavržene reakcije talog arebro-broaMa je odvojen filtriranjem i filtratu je dodeto 400 ol vode· Dobiven beo talog je odvojen centrifugalnim odvajanjem« Talog je rastvoren u 5° al acetona i neraatvorni aaterijal je odvojen filtriranjem kroz G-4 filter«

Filtrat je uparen do euva pod sniženla pritiskom dajuči 165 ®g uljastog produkta«

Produkt je analiziran tahkoalojnoa kromatografijom na silikagelu sa mešovitim rastvaračea sa razvijanje (etilacetet/cikloheksan, 10»5tt» sapr.) dajuci glavnu ariju pri Rf 0,44.

Pošto je saostald ne&to neizreegovanog materijela, reskeionlprodukt je brometografisan na silikagelu sa mešovitim rastvaradem (etileoetet/oiklohekaen, 10:5¼ zapr.) pri čemu je dobiven prečiščen produkt. Prečiščen produkt Je belo kristalno jedinjenje pri 2O°C. Rezultati elementarne .analize i IR-epektru su dole deti i potvrdjuju da je produkt 3-henzoilokBi-l,3,5(10)eatretrien-17p-(4-^-Cbis-(2-hloretil)-amino]-fenil<-butiriloksij -acetat.

- 19 Elementorne analizo:

Aedjcno: C 63,5 n 6,60 /, K 1,99 Cl 9»79 $, izrac.t C .68,33 £, K 6,53 %, N 1,9* #, Cl 9,86 % točko topljenja 110-lll°C

IR-spektar: (ca*^)

2920, 2860, 1755» 1735» 1612, 1582,

1516, 1491, 1450, 1420, 1380, 1355»

1260, 1224, 1210, 1174, 1145, 1079»

1022, 1005» 960, 915» 890» 800,

740,. 705.

t

Priaer 3

Dobivanje 3-propionilokci-1.3>5(10)-egtrotrien~17D-E4~^;-pu £bia-(2-hloretil)-aoino]-fenil:-butirilokali-acetata g l,3»5(10)-eatretrIoa-3»17P“<iiola rastvoreno je u 100 ml ΪΗΡ i u to je dodato 10 al vodenog nestvore koji sadrži 1,4? g HaOH u 10 al vode i smošo jo mažona pri sobnoj temperaturi u toku 30 ainuta. Eeokcioni produkt jo koncentrovon do suva pod sniženim pritiskom na vodenom kupatilu piri QO°C da bi se udaljila voda. Ostatak je raetvoreu u anhidrovanora TH? i u ovaj rastvor je ukapevsuje» dodat rastvor od 3»40 g propionilhlorida u 50 ral anhidrovanog Idil· i reekciona emeaa jo mešana pri sobnoj temperaturi u toku 16 časova* Jt-osle zavraebe reakcije odvojen je taiog natrijua-hlorida i filtrat je uparen do suva pod sniženim pritlekoa i oetatak je prekriatolisan iz etanola pri Čemu se dobiva 9 g belih kristala·

Pomoču elementarno analize i IR-spektre je potvrdjeno da je dobiveni produkt 170-hidroksi-l,3»$(lO)~eetretrien-3propionat.

7,0 g 'ovog produkte jo raetvoreno u 70 al anhidrovanog piriTHF, dodeto je 3,C g piridina i smeaa je ohladjena na -5%·

U dobivenu smešu je ukapavanjem dodat rastvor koji sadrži 17,3 g 30 %-nog monobromaoetilbromide u ugljentstrahloridu ά 50 ml Poale zavru«nog dodavanja, smeša je držana pri

-5°C u toku 2 Čaaa e zatiu u frižideru u toku 16 časova.

Posle zavržene reakcije dobiveni talog je odv.ojen filtriranjem Filtrat je uparen do suva pod eniženim pritiakoa na vodenom kupatilu pri 3θ% e zatiu je dodato 200 al etra i aneuo je mešena pri čemu ao dobiva 6,G g belih kristala· Filtrat je dalje koncentrovan dajuči još 3 »5 K belih kristala. kristali su prekriataiisani iz mešovitog rastvarača koji sadrži star i etanol·

Rezultat elementarno analize je sledeči·

Elementarna analiza:

nadjeno: C 61,5 S Π 6,5 Br 17»9 izreč·: G 61,43 H 6,45 %, Br 17,?8 λ.

'j IR-spektru nije nadjena apsorpcijo bazirane no prisustvu OH grupe čina jo potvrdjeno da je produkt 3-propioniloksi1 · 3,5 (10 ) - eet ra trien-170-aonobroicaoe t s t ·

- 21 1,0 g ovog produKta i 0,91 g srebro-4-jp-Cbia-(2-hloretil)aaino]-fenil?-butirata diapergovano je i rastvoreno u 5° ol ΰΚ80 i reakcijo je Izvodjena pri sobnoj temperaturi u toku 3 dana u mraku· Posle zavržene roekoije, talog arebrobromida je odrojen filtriranjem i dodato jo 4 litra vode·

Talog je odvojen centrifugiranjem i beli talog je raafcvorcn u 5θ al acetona e nerastvorni materijal je odvojen filtriranjem kroz G-4 filter· Filtrat je uporen do ouva pod aniženim pritiskom pri Čemu se dobiva 1,3 g uljastog produkta·

Produkt je bromatografiaan na ailikagelu aa gaošon rastvarača koje sadrži etilacetat i cikloheksan u odnosu 10x50, zapr·, pri Čemu je dobiven prečlščon produkt u obliku viakoznog uljastog produkta, pri 20°0·

Rezultati elementarne analize 1 IR-apektra su sledeči·

Elementarne analiza:

nadjeno: 0 67,1 %, H 7,0 j», N 2,1 Cl U»0 %, izreč·: C 66,0 H 6,99 K 2,08 %, Cl 10,56 >·

IR-apektar: (om”¹)

2916, 2840, 1750, 17*0, 1616, 1512, 1438, 1441,

1415, 1379, 1361» 1270♦ 1210, 1200, 1170, 114c,

1068, 1004, 956» 931, .. 885, 817, 795, 735 oo’¹·

|. Cvirn je potvrdjeno da je dobiveni produkt 5-propionilokail_<3,5(lO)-aetratrian-170-(4-{jp-Cbia-(2-liloratil2-aaino] -fanilJ i K butirilokel] -acetat·

- 22 -ft

Primer 4

Dobivan j e 3-acotokai~l.3·5(10)-estretrien- I7B-C4-lp-Cbls(2-hlonetil)-amino) -fenilj-butlrlloksll -acetate

1,0 g 3-ecetok6i-l,3,5(lO)~esti'atrien-170-E>onobrorjscotata, dobivenog pomoču ietog poetupke kso što je opisano u primeru

2, i 0,9 g erebro-4-^p-Cbie-(2-hloretil)-aaino] -fonil^·butirata dodato je u 5ΰ “i DMSO i reakcija je izvodjene u araku 3 dana pri 25°0. Posle zsvrčeno ronkcije odvojen • je talog srebro-bromida i filtratu Je dodato 4 litra vode· Dobiveni beli talog je odvojon centrifugiranjem· Talog je zatim rastvoren u 5θ »1 acetona· K«raatvoi'ni materijal fe odvojea kroz filter G-4 i filtrat Je uparen do suva pod sniženin pritiskom pri Čemu ae dobiva 1,2 g uljastog produkte· Ovajprodukt je bsro^atografisan ne silikagolu uz primenu smeše etilacetata/ciklohcksane (10:5$* zapr·) kao rastvarače· Prečiščen produkt je viskozno ulje pri 20°C.

Rezultat elementarne analize je sledeči.

elementarna analiza:

nadjeno: C 66,0 it, H 6,9 %, « 2,0 >, Čl 10,9 izreč.: C 65*64 H 6,84 X, N 2,13 01 10,79

t.

u I2-epektru nije nadjeno prieuatvo epaorpcije koja pripada OH grupi cine je potvrdjeno da je tej produkt 3-eoetokai1«3*5(1O) -estra trien-170- £4-,i p- Cbia- (2-hl ore til) -ominol·fenill-butirilokail -acetat.

- 23 lR-spoktar (en”¹)

2915, 2840, 1750, l?4O, 1610, 1512, ►

1488, 1442, 1415, 1378, 1360, 1270,

1210, 1200, ll?0, 1140, 1068, 1005,

956, 951, 885· 817· 793, 735,

2³riaor 5 g 3-aoetoksi-l,5,5(lO)-®8tratrlen-170-n!onobroiaocotata t 0,8 g n8trijura-4-’ p-(bis-(2-hloretil)-aminol—fenil'j-butirata dodato jeu >0 ml'TIIF i ustavljeno do reaguje 24 časa pri 60°G.

Posle zavržene reakcija talog je odvojen filtriranjem i filtrat je uparen i osušen· Produkt je odvojen i prečiščen pomoču kolone silikagela aa snešom rastvarača cikloheksan/ etilaoetat pri Čemu se dobiva 0,9 g prečiučenog produkta.

t

Produkt je bio 3-ecetoksi-l,3,5(10)-ectratrion-17P-i4-jp£bis-(2-Čloretil)-asinoJ -fenil? -butirlloksi] -ecetet.

Primer 6

Dobivanje 3-ec^!'toksi-l.3»5(10)-astrotrien-l7^-C4- Šp-Cbls(2~hloretil )-e;^.nol -fenil š-butiriloksil -acetata i

2,~C mg srebro-4- ;p-(bis~(?-hloretil)-asiinoj -fenil -butirata (srebrove so hlorambueila) dodato je u 10 ral DMSO pri Čemu se — 24 — nagradi beo koloidni rastvor. Zatim so u ovaj koloindni raatvor doda 19$,8 ag 3-hidrokei-l,3,5(lC)-oatratrien-170raonobroaaoetata i orcežaaa aešo u araku 64 Časova na sobnoj temperaturi. Posle 64 Časa talog menja boju od belo do čučkasto selena. To logu je dodata osla količina acetona i talog je odvojen filtriranjem kroz filter C-4. Filtrat je bio bezbojan i prezračen 0880 jc odeatilovan na vodenom kupatilu pri 80°C i zatira je dodato ICO ml vode pri čemu se telože beli kristali. Smeša je držana 1 čas i zatira je odestilovan OKSO. Beli kristali su odvojeni filtriranjem kroz filter G-4 i zatim isprani vodom i osušeni pod aniženia pritiskom u eksikatorni. Prinos sirovog produkta je bio 330,5 »8·

530,5 «S airovog produkta je rastvoreno u cmeši rasrvarača oiklobeksan/etilacetat (50:10, zapr·)· Rastvor je polageno propusten kroz kolonu od 40 g silikagela pri Čemu se produkt poetepeno razdvaja od nečistoča i na kraju dobive 188,2 mg (62,86 Čistog produkta. .

ezultati elementarne anlize i odredjivanja tačke topljenja produkta su dole dati.

'.leraentorne analiza:

nadjeno: v 66,v /., k 7,0 ix 61 lx,0 jo, izreč.j 8 66,22 '·>, H 6,98 h, li 2,27 /, Cl 11,52 tačka topljenje: polutopljenj· pri 25°0.

- 25 Ovim je potvrdjeno da je dobiveni produkt 5-hidrokei-l,5,5(10)eetr atrien-l?£i- C 4- < p- (bis- (2-hlor etil) -amino! -fenil (-butirilv.

oksij-acetat· produkta je rastvoreno u 1 ml anhidrovanog piridina i do dot k je 1 ml anhidrida sirčetne kiseline i o otavi j eno de reaguje u frižideru u toku 16 Časova« ioale zavraene reakcije reakoiona smeša je uparena i osušena pod sniženim pritiskom ne vodenom kup a tilu pri 30°C· Ostatak je pomešan ea destilovanom vodom i smeža je držana 1 čas pri čemu se taloži ulj es t produkt u obiiku koloidne pene bele boje. Z-atiia su piritin i sirčetna kiselina udaljeni sa destilovanora vodom i produkt je ispran vodom do uutralne reakcije· Uljest produkt je ©dvojen od vodeaog raatvora i uopren i osušen u eksikatoru pod sniŽeni® pritiskom pri Čemu se dobiva 45 mg uljastog produkta·

Produkt je analiziran tankoelojjaoa kromatografijo® naploči ailikegela uz primenu etilaoetata i cikloheksana (30»50, zapr·) kao eluensa pri čemu je dobivena jedna mrl j a aa Rf 0,?8·

Du bi no preoistio produkt ovaj je hromatogrefiaan na silikagelu uz primenu snešo rastvaračo etilacetat/oiklohaksan (10i50, zapr·). irečiščen produkt j* viskozno ulje pri 20°0·

Rezultat elementarne enalize 3 e sledeči — 26 Elementarne analiza:

nadjeno: C 66,0 '/», H 6,5 N 2,0 «5, Cl 10,9 izreč.: C 65,64 £, Π 6,84 %, N 2,15 01 10,79

U IR-epektru nijo nedjena apsorpeijo koja se pripisuje OH grupi no osnovu Šege je potvrdjeno de je produkt 5*~®ο®ζο1εβ11,3,5(10)-o8trotrieu-170-[4-<p-Lbic-(2-hloretil)-OKiinoJi fenilj-butiriloksij-acetat.

IR-spekter (cm~^)

2915·, 2840, 1750, 1740, 1610, 1512,

1488, 1442, 1415, 1378, 1360, 1270,

1210, 1200, 1170, 1140, 1068, 1005,

956, 931, 885, 317 , 793 , 735·

Primer 7

Dobivanje 3-propionilok3l~l_<5^5(10)-ostr3trien-173-L4-jp-.

Cbic-(2-hlorotil)-aminoJ -feni-l i-butiriloksll -acetata mg 3-hidroksi-l,3,5(lO)~O3tr0trien-173-C4—(p-£bie-(2-hloretil)-aoinol-fenilγ-butiriloksil-acetate je rastvoreno u i

ni anhidrovanog piridina i dole to je 1,5 ml enhidrida propioneke kiseline nekem čegn je smočc ostarijena da stoji u frižideru 1 dan. ienkcionc er.; e; 'o jo upe r na do suvo pod eniženici pritiskom ns vodenori kupotilu pri 30°C. Ostatak je pomešan e« destilovonom vodom i smeša je drlana 2 časa pri čemu je obrazovon koloidni uljest produkt· Piridin i sirčetne kiseline eu uklonjeni se destilovanom vodom i produkt jo ispran se vodom do neutralne reakcije. Vodena fazo je zatia odvojena 1 dljasta faza je osušena pod slišanim pritiskom i eksiketoru pri čemu se dobiva 40 mg uljastog produkta· Produkt je hromatografisan na silikagelu uz prinenu smeše raetverače etilecetat/oikloheksan (10:50« zepr·)· Prečiščen produkt je viskozno uljesto jedinjenje. u IH-opektru nije nadjene apsorpoija na 5600-3200 cm“^ čime je potvrdjeno de je dobiveni produkt 3-propioniloksi~l,3,5(10)~eetratrien176-(4- ip-Cbie-(2-hloretil)-amino] -fenil y-butiriloksi) -aootet·

Primer 8

Dobivanj e 3-benzolloksi-1_t3·5(10)-estretrien-l?g-[4-|p-£blsk (2-hloretll)-amino)-fenili-butirllokal) -acetata j .

mg 3-hidrok8i-l_>3«5(lO)-estretrien-170-[4-5p-Cbio-(2-hlori, etil)-amino)-fenilv-butiriloksi)-acetata je rastvoreno u 1 ml anhidrovanog piridina i dodato je ? g anhidrida bonzoevo ki sev line posle čega je smeša držana u irizideru 1 dan· &atis» je reeko ione smeša uparena do suva pod sniženim pritiskom na vodenoa kupetilu pri 30°C. Ostatak je pomešan sa deatilovenom vodom i smeše je držena u toku 1,5 Čas pri čemu se obrazovao koloidni uljast produkt. Piridin i sirčetna kiselina su udaljeni sa destilovanoia vodom i produkt je ispran vodom do neutralne reakcije. Vodena faza je odvojena i uljna faza je uparena do auva pod aniženlm pritiskom u eksikatoru pri čemu ae dobiva 45 mg uljastog produkta.

Produkt Je hroreetogrsfissn na sllikegelu uz primenu smeSe raetvareča otilacetata/ciklohekeane (10:50, zepr.) da bi e· prečistio ovoj produkt. Prečiščen produkt .je bilo viskosno uljaato jedinjenje.

—1

U lR-epaktru nije nadjena aprarrpciona traka na 3600-3200 ea čine Jo potvrdjeno da je dobiveni produkt 3~benzoiloksi-l_t3»5(18)' ΟβνΓ« trien-17P-[4- jp-Cbis-(2-hloretil)-ai»ino] -fenil? -butiriloksiacotot.

Tast 1

Akutne toksičnosti i ontitumoraka dajatve (in vivo) derivata hloranbuoiia datih ovia pronalaakom

1. frofceičnost (Li)^₀7 tri morenju 1D^q upotreblJeno je 8 JGK-JGL ženki raiuevs (starih 5 nedjelje) kao Jedna grupa da se gaje u prozračnoa vičestrukom kavezu. veki lek jo rastvoren u taaolinovom ulju i dat iutraporitonalnon injekoijom (i.p.)_t oralnin puteo (p.o.) i potkoznora injekoijora (n.c.) miau u jednoj dozi i zatin su njihove vrednosti dobivene pošlo 7 dana prinenoK: xitchfield-«ilooxon-ove metode graf ovo. Koaltati

- 29 eu sledeči» LD^_Q hlorembucile je i.p» 20 mg/kg» p·o* 80 mg/kg, i 8.0. 26 mg/kg» j uzorke br» 2 u tabeli 1» koji jedet ovim pronolaskora, bilo jo i»p» veča od 3000 mg/kg» ρ·ο· veča od 6000 ug/kg i s.c. veča od 30C0 mg/kg»

2» PhtltumorgRl test (in vivo)

Komadi čelije reka ec ljudskih grudi koje imeju receptor sa eteroidne hormone petkožno su usadjeni pod Sapu rniea (3ALB/C-nu/nu, (starog 5 nedelja) de ee nagrade Čvrsti tumqri» Posle 24 Časa nakon implantacije disperzija iii rastvor u maelinovom ulju aktivnog sastojka potkožno iii oralno je deta svaki drugi dan 10 pute. 24 Česa posle implantacije, tunori eu odačeni. Efikasnost inhibicije tumora je merena iz (A) svake srednje težine odrezanih tumor« za 10 ničeva (aktivni eastojak je bio det) i (B) iz svake srednje težine odrezanih tumora za 10 kontrolnih

Olševe» efikasnost inhibicije« _e(x _ .4 tumora (u ·/<) iri potko;.nom i orolnom doTanju hlor.r?buciio sa dozori od 15 mg/kg efikasnost inhibicije je bil?; oko do ·, dok eu pi*i dav aa j ima derivata hlorambucila do tih ovim pronalaskom efikasnost! inhibicije: bilo vede od 90 P. rada eu dati derivati hlorembucile deti ovi:>' pronalaskom evi aiiševi au preživeli»

- 30 Jo smet ren jom pri eutopsiji nedjone ou czbiljno prooone slezino, metorioe i timuso pošlo devenje hlorembucile, dok ninu nadjono itikckvG premene nekoč daven,1» uzoreko dntih ovim pronaleskora·

- 51 Vrednosti LD,

-M	§ R.	7 ό o o JM
	\S		v o o
		t
o
CM
	x/	*··» · -	— .... . v o 2
CM
	VO		o CM
r-4	2		Ό
	δ		CM
				z-x
				e
				•o
		o		a
	*	?		< >
	ί	« ►	s	io Ό
•		«	\
n		Ό	sp	O
jO	a		G	a
*'*	*»>	g	O
S O		S r4
&	ffl h	o	+J O
M		o	P	O.
3	.-}		4
			. . . ...·_	•.A. .

Tabela 2. Antituoorakl efekat

Friwedbe't uzorak br. li hlorssibuoil uzorsk br. 2i 3-benzoilok8i-l,3,5(lC)-®etratrien-17fl··· £4-*p-£bis-(2-hloretil)-e35ino] -fenila i butirilokeij-acetat uzorak br. 3: 3-acetoksi-l,3,5(lO)-eetretrien-170(4- p-£bia-(2-hloretil)-eraiaoJ-fenil|butiriloksil -acetat uzorak br. 4: 3-propioniloksi-l,3,5(10)-er,tratrien17P-r4-jp-Cbie-(2-hlcDBtil)-sminoJ -fenil) butiriloksij -acetat uzorak br. 5j snaslinovo ulje (kontrolna proba).

Te at 2

U ovom testu je radjeno kao Sto je opisano u testu 1, osla »

što je svoki aktivni sastojak dat u obliku disperzije u Polysolvat-u 80 (emulzifikator) sa intraperibonalnom injekcijo« u teatu ontitumorskog efekta. Rezultati su sledeči·

»	hioracbueil	3-hidroksi-l,3,5(10)-estra»trien-17i3-i4-}p-[bis-(2- > hloretil)-omirioj-fenill - 1 butirilokeij -acetat > š
doze (mg/kg)	5	o,5 s 5 ;
efikasnoat inhibioije (%)	30	91 97
akutna toksičnost test	2C	: 1000 C ί j—,-:- <

- 34 Test 3

Ispitivana je vezujuča funkcijo J-hidroksi-l,3,5510)-eotratrien-170-E4- ^p-Cbie-(?-hloretil)*eieino] -fenil_v -butiriloksil acetate za celijo osetljive preme estrogenu· hetrediol obeležen tricijumoa (¾) inkubiran je sa uterusoa zeco da bi ge vezao i zatim je uzorak dot sistemu da ae izmeri količina slobodnog ^ti-eatradiola kojo je z omenjena dodati» estredioloia. Hezultati au prikazani na al· 1« Nadjeno je da se količina slobodnog ^H-estradiola povečava isto kao > 4 i količina samog eatradiola. Ovo pokazuje da ispitivani uzorak ima oaobinu vezivenja za receptor estrogena·

Saeae

Formulacija I

aktivni safcojak dobiven u primeru 3	50	tež· delo ve
manitol	55	tež· delova
sorbitol	25	U M
kurbokeioetil-oeluloza	5	d M
augnezijum-steerat	c, S	»I H
talk	40	U ·«

Cve komponente su izmešane i sprešene a posle toge prosovane Uajuci tabletu koja $>no prečnik od 1 *'> ijGd· lormulocija 2

aktivni S3stojak dobiven u primeru 2	100	tož.	delova
laktoza	300	ir	rr
estar šečera i masno kiseline	10	»t	11
3krob	100	II	II
voda (1 /j-ni rastvor aatrijumkarboksi-metilceluloze)	100	tl	u

Komponente 3u izgnječene i. ekstrudirane kroz mašinu za pravljenj· pločastih tebleta pri če·.! su dobivene granule· Ova su zatim odučene i prosejane nakon oega su preostala cestic· veličine od 10 do 24 noša od ko jih su napravljene granule za oralno davenjo.

Formulacijo 3 i·

Granule iz formuslcijs 2 eu aapunjene u komercijelnu kapsulu pri Čemu je dobivene kapsula od 0,5 ec»

Formulacijo 4 aktivni oestojak dobiven u primeru 1 5 tež· delova maslinovo ulje 95 ” ”

Komponente su zagrajene« iznesene i sterilizirano pri čemu je dobiven rastvor zo injekcije·

-36Njbolji način za upotrebu pronalaska u privredi koji je poznat

Prijavlocu

Najbolje se pronalazak može primeniti za proizvodnju jedinjenja r

koje je opisano u Primeru 2 iz opisa. U medjuvremenu je Prijavioc znatno usavršio taj postupak pa sada preporučuje da se to jedinjenje pravi na sledeči način :

u 10 ml piridina rastvori se 380 mg /4-/p-/bis(2-hloroetil)amino/fenil/butiriloksiacetilhlorida i u rastvor se doda 130 mg 17-betahidroksi-1,3,5(10)-estratrien-3-benzoata na sobnoj temperaturi. Smeša se ostavi da stoji tako 24 časa, onda se piridin odestiluje iz smeše pod smanjenim pritiskom na 40°C i ostatak se rastvori u smeši cikloheksana i etanola (50:10 po zapremini). Rastvor se provodi kroz kolonu koja je pakovana sa 40 g silikagela (lagano) * i iz rastvora koji prodje kroz kolonu lagano se izdvajaju kristali

3-benziloksi-1,3,5(10)-estratrien-17-beta-/4-/p-/bis/2-hloroetil) amino/fenil/butiriloksi/acetata.

Claims (2)

1. PATENTNI ZAHTEVI

   1. Postupak za dobivanje derivata konjugata estradiol-hlorambucil opšte formule :

   u kojoj R pretstavlja vodonikov atom, benzoil grupu, acetil grupu, propionil grupu iii n-butiril grupu a n je 1 iii 2, naznačen time, što vezivno sredstvo izabrano iz grupe koja sadrži jedinjenja formula :

   X(CH„) COOH; i z n

   X(CH_O) COX 2 n gde je n 1 iii 2 a X je halogenski atom, reaguje sa estradiolom iii acilovanim estradiolom na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, u reakcionom rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran, dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin i aceton, tako da se dobiva jedinjenje opšte formule ;

   (II) u kojoj je X kao što je definisano ranije, koje onda re^juje sa hlorambucilom na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C u rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin, toluol, ugljentetrahlorid, hloroform i tetrahidrofuran.
2. 2. Postupak za dobivanje derivata konjugata estradiol-hlorambucil opšte formule :

   CH₂CK₂CL (I) u kojoj R pretstavlja vodonikov atom. benzoil grupu, acetil grupu, propionil iii n-butiril grupu i n je 1 iii 2, naznačen time, što vezivno sredstvo izabrano iz grupe koja sadrži jedinjenja formula :

   X(CH_O) COOH i 2 n

   X(CH~) COX 2 n gde je n 1 iii 2 a X je halogenski atom, reaguje sa hlorambucilom na temperaturi u intervalu od -30 do 100°C, u reakcionom rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži ugljentetrahlorid, hloroform, tetrahidrofuran,. dimetilsulfoksid, piridin i aceton, tako da se dobiva.jedinjenje opšte formule_κ o o ;

   II ll /^CH2^CH2^CL χ-c- (ca₂) -o-c- (cSj) \ ^CH₂CH₂C1 (III) u kojoj je X kao što je definisano ranije, i onda jedinjenje formule (III) reaguje sa estradiolom iii acilovanim estradiolom na temperaturi u intervalu od -30° do 100°C, u reakcionom rastvaraču koji je izabran iz grupe koja sadrži dimetilsulfoksid, dimetilformamid, piridin, toluol, ugljentetrahlorid, hloroform i tetrahidrofuran.