JPH11506740A

JPH11506740A - ヒト成長ホルモンの徐放性組成物

Info

Publication number: JPH11506740A
Application number: JP9500870A
Authority: JP
Inventors: リリージョンソン，オルファンミ; エム．ガンムキ，メダ; バーンスタイン，ハワード; オーアー，ヘンリー; カン，エム．アミン
Original assignee: アルカームズコントロールドセラピューティックス，インコーポレイテッド
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-03
Publication date: 1999-06-15
Also published as: DE69614685D1; CZ390797A3; PT831787E; SK167197A3; CA2223436A1; SK281571B6; CN1102854C; RU2161502C2; PL184531B1; EP0831787A2; ATE204468T1; WO1996040072A2; NO316104B1; NO975708D0; CN1187120A; PL323832A1; NZ310644A; DK0831787T3; DE69614685T2; BR9608542A

Abstract

(57)【要約】生理活性安定化ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の徐放性組成物ならびに該組成物の生成方法および使用方法。本発明の徐放性組成物は、生体適合性ポリマーのポリマーマトリックスおよび生理活性安定化ｈＧＨ粒子を含み、ここで、該粒子は、生体適合性ポリマー内に分散している。本発明の生理活性ｈＧＨの徐放性組成物の製造方法は、ポリマー溶媒に生体適合性ポリマーを溶解させてポリマー溶液を生成させ、ポリマー溶液に生理活性金属カチオン安定化ｈＧＨ粒子を分散させ、次いで、ポリマーを固化して該ｈＧＨ粒子の分散物を含有するポリマーマトリックスを生成させる工程を含む。本発明の組成物の使用方法は、ある持続期間患者に治療上有効な血中レベルの生理活性非凝集ｈＧＨを提供する方法である。本方法において、患者は、本発明の徐放性組成物の有効量を投与される。本発明の徐放性組成物の使用方法は、該徐放性組成物の投与量を患者に投与することにより、ある持続期間該患者において治療上有効な血中レベルの生理活性非凝集ヒト成長ホルモンを提供する工程を含む。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト成長ホルモンの徐放性組成物発明の背景ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、下垂体から分泌される蛋白質であり、組み換え遺伝子技術によって製造することができる。ｈＧＨは、成長可能なすべての体組織において成長を生じさせる。ｈＧＨは通常、下垂体機能低下性小人症を患う患者の治療に使用される。現在では、ｈＧＨ水溶液を皮下ボーラス注射剤として１週あたり３回または１日に１回の頻度で患者に投与し、適正な血清中ｈＧＨ値を維持する。ｈＧＨの長期投与を受けている患者の場合、このような頻回の注射は、患者のコンプライアンスの問題を生じる。ｈＧＨ水溶液の反復注射に伴う問題を解決するために、ポリマーマトリックス内にカプセル化したボーラス注射より高用量のｈＧＨを含む制御放出装置であって、ｈＧＨが約１週間以上の期間にわたりイン・ビボで放出される装置を処方するための試みがなされている。しかしながら、これらの制御放出装置はｈＧＨ放出の初期バーストが大きく、その後のｈＧＨ放出がほとんどなくなるのが普通であった。さらに、これらの制御放出装置内のｈＧＨ濃度が高いため、数日後にｈＧＨ分子が凝集し、イン・ビボで免疫原性を示す凝集ｈＧＨを形成する傾向があり、生理活性を減少させそうであった。そこで、ｈＧＨの放出期間中に免疫系応答を引き起こさないでイン・ビボの生理活性ｈＧＨ放出を維持する手段が求められている。発明の概要本発明は、生理活性安定化ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の徐放性組成物ならびに該組成物の生成および使用方法に関する。本発明の徐放性組成物は、生体適合性ポリマーのポリマーマトリックスおよびその生体適合性ポリマーに分散させた生理活性金属カチオン安定化ｈＧＨ粒子から成る。本発明のｈＧＨ徐放性組成物の生成方法は、生体適合性ポリマーをポリマー溶媒に溶解させてポリマー溶液を生成させ、そのポリマー溶液に生理活性安定化ｈＧＨ粒子を分散させ、次いで、そのポリマーを固化させて該ｈＧＨ粒子の分散物を含むポリマーマトリックスを生成させる工程を含む。本発明の徐放性組成物の使用方法は、１回分の投与量の該徐放性組成物を患者に投与することにより、ある持続期間該患者において治療上有効な血中レベルの生理活性非凝集ヒト成長ホルモンを提供する工程を含む。このｈＧＨ徐放処方の利点としては、イン・ビボ血中ｈＧＨ値がより長期的かつより安定的に持続すること、ｈＧＨの初期バーストが低いことおよび血清中ｈＧＨ値の変動が排除されることで治療効果が向上することなどが挙げられる。必要注射回数が減ることで、患者のコンプライアンスと受け入れが向上するという利点もある。さらに別の利点としては、血清中ｈＧＨ値が治療閾値により近い水準に維持されることによって、ボーラス注射方式よりもｈＧＨの使用量を減らすことができることなどが挙げられる。発明の詳細な説明本発明において使用するヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、分子（モノマーまたは非凝集）態の生理活性ｈＧＨである。分子ｈＧＨは免疫原性を示さないのが普通である。凝集ｈＧＨは、抗ｈＧＨ抗体を生じる免疫応答を誘導することがある。これが長期ｈＧＨ療法の有効性を低下させることがある。また、凝集ｈＧＨは内因性ｈＧＨに対する自己免疫応答を刺激することがある。生理活性非凝集ヒト成長ホルモンの徐放とは、ｈＧＨ水溶液の直接投与後に得られるものよりも長期にわたり測定可能な血清中生理活性モノマーｈＧＨ値をもたらす放出をいう。徐放は約１週間以上の期間にわたるｈＧＨの放出であることが好ましく、約２週間以上の期間にわたるものがさらに好ましい。生理活性非凝集ｈＧＨのポリマーマトリックスからの徐放は連続的放出であっても不連続的放出であってもよく、放出速度は比較的一定であってもよいし、変化してもよい。放出されるｈＧＨの連続性および放出されるｈＧＨのレベルは、１種類以上のポリマー組成物、ｈＧＨ負荷率、および／または目的の効果を得るために選ばれる添加剤をとくに使用することによって確立することができる。安定化（ｈＧＨ）は、金属カチオン成分由来の＋２以上の価数を有する少なくとも１つの種類の多価金属カチオンと複合体を形成している生理活性非凝集ｈＧＨを含む。本発明の徐放性組成物中の安定化ｈＧＨは、個々の微粒子からなる型で存在している。好適な多価金属カチオンは、生体適合性金属カチオン成分に含有された金属カチオンを含む。カチオン成分が用いた量でレシピエントに対して毒性を示さず、しかも注射部位における免疫反応などレシピエントの体に重大な悪影響または好ましくない影響を示さないものであれば、金属成分は生体適合性である。通常、金属カチオン成分のｈＧＨに対するモル比は、ｈＧＨの金属カチオン安定化にとって、約４：１ないし約１０：１である。ｈＧＨを安定化させるために使用される金属カチオンは、Ｚｎ⁺²であることが好ましい。より好ましい態様において、Ｚｎ⁺²カチオンを含有する金属カチオン成分のｈＧＨに対するモル比は、約６：１である。ｈＧＨの安定化に対する金属カチオンの適性は、金属カチオン含有リオフィライズｈＧＨ粒子におけるポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、逆相クロマトグラファー、ＨＰＬＣおよび力価試験等の様々な安定性指標技術を行なうことによって当業者により決定して、リオフィライズ後のｈＧＨの力価および微粒子からの放出時間を決定することができる。安定化ｈＧＨにおいて、ｈＧＨがインビボで水和中に微粒子内で凝集する傾向および／または水和により、徐放性組成物の生成工程によりもしくは徐放性組成物の化学的特性により生理活性もしくは力価を失う傾向を、ｈＧＨをポリマー溶液と接触させる前にｈＧＨと少なくとも１種類の金属カチオンとの複合体を形成させることにより低減させる。安定化ｈＧＨは、通常、徐放期間にわたってインビボで有意な凝集に対して安定化されている。有意な凝集とは、カプセル化ｈＧＨモノマーの初期量の約１５％以上を凝集させる凝集量をいう。凝集は、ｈＧＨモノマーの初期量の約５％未満に保つのが好ましい。凝集は、初期量の約２％未満に保つのがさらに好ましい。ｈＧＨ徐放性組成物中のｈＧＨは、増量剤またはリオフィライズ中にｈＧＨを安定化させる緩衝剤等の追加の安定化剤等の他の添加剤と混合することもできる。増量剤は通常、不活性物質から成る。好適な増量剤は、等業者にとって公知である。本発明の徐放性組成物に適したポリマーまたはポリマーマトリックスは、生体適合性でなければならない。ポリマーは、ポリマーおよびそのポリマーのいかなる分解産物もレシピエントに対して毒性を示さず、しかも注射部位における免疫反応などレシピエントの体に重大な悪影響または好ましくない影響を示さないものであれば生体適合性である。ｈＧＨ徐放性組成物のポリマーは、生分解性でもなければならない。本明細書で定義する生分解性とは、組成物がイン・ビボで分解または侵食されてより小型の化学種を生成することをいう。分解はたとえば酵素的、化学的、および物理的プロセスによって起こりうる。好適な生体適合性生分解性ポリマーとしては、たとえばポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（アルキレンオキサレート）、生分解性ポリウレタン、これらの混和物およびコポリマーなどが挙げられる。さらに、ポリマーの末端官能基を修飾することができる。たとえば、ポリエステルはブロックポリマーであっても非ブロックポリマーであってもよく、ブロックポリマーと非ブロックポリマーの混和物であってもよい。当該分野における従来の定義のように、ブロックポリマーは、具体的にはブロックされたカルボキシル末端基を有するポリマーである。一般に、ブロック基は重合開始剤に由来するものであって、通常はアルキル基である。非ブロックポリマーは当該分野における従来の定義のように、具体的には遊離のカルボキシル末端基を有するものである。本発明で使用するポリマーの許容分子量は、目標のポリマー分解速度、機械的強度などの物理的性質、および溶媒中のポリマーの溶解速度などの因子を考慮したうえで、当業者によって決定することができる。通常、分子量の許容範囲は約２，０００ダルトンないし約２，０００，０００ダルトンである。好ましい態様においては、ポリマーは生分解性のポリマーまたはコポリマーである。さらに好ましい態様においては、ポリマーは約１：１のラクチド：グリコリド比および約５，０００ダルトンないし約７０，０００ダルトンの分子量を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（以下「ＰＬＧＡ」という）である。なおさらに好ましい態様においては、本発明において使用するＰＬＧＡの分子量は約６，０００ないし約３１，０００ダルトンの分子量を有する。徐放性微粒子の１回投与量またはそれに替わる生理活性安定化ｈＧＨ粒子を含む徐放性装置に含まれるｈＧＨの量は、治療上または予防上有効な量であり、当該技術分野に熟練せる者であれば、体重、治療すべき病態、使用するポリマーのタイプ、およびポリマーからの放出速度などの因子を考慮してこれを決定することができる。１つの態様においては、ｈＧＨ徐放性組成物は、生理活性安定化ｈＧＨ粒子を約０．０１％（ｗ／ｗ）ないし約５０％（ｗ／ｗ）含む。かかるｈＧＨ粒子の使用量は、目的とするｈＧＨ効果、計画放出レベル、ｈＧＨ放出時点、およびｈＧＨ放出期間によって異なる。好ましいｈＧＨ粒子負荷率の範囲は、約０．１％（ｗ／ｗ）ないし約３０％（ｗ／ｗ）のｈＧＨ粒子である。より好ましいｈＧＨ粒子負荷率の範囲は、約０．１％（ｗ／ｗ）ないし約２０％（ｗ／ｗ）のｈＧＨ粒子である。最も好ましい生理活性安定化ｈＧＨ粒子の負荷率は、約１５％（ｗ／ｗ）である。さらに別の態様においては、ｈＧＨ徐放性組成物は、安定化ｈＧＨ粒子中には含まれないがポリマーに分散された状態で存在する第２の金属カチオン成分をさらに含む。第２の金属カチオン成分は、安定化ｈＧＨに含まれるものと同じ種類の金属カチオンを含むことが好ましい。第２の金属カチオン成分は、金属カチオンの貯蔵剤としてｈＧＨが金属カチオンにより安定化されて組成物中でｈＧＨの安定性を高める期間をさらに延長させるように作用すること等により、徐放性組成物のポリマーマトリックスからのｈＧＨの放出を調節するように作用する。放出の調節に用いる金属カチオン成分は通常、少なくとも１つのタイプの多価金属カチオンから成る。ｈＧＨ放出の調節に適した第２の金属カチオン成分の例としては、たとえばＭｇ（ＯＨ）₂、ＭｇＣＯ₃（４ＭｇＣＯ₃・Ｍｇ（ＯＨ）₂・５Ｈ₂０など）、ＺｎＣＯ₃（３Ｚｎ（ＯＨ）₂・２ＺｎＣＯ₃など）、ＣａＣＯ₃ 、Ｚｎ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇）₂、Ｍｇ（ＯＡｃ）₂、ＭｇＳＯ₄、Ｚｎ（ＯＡｃ）₂、ＺｎＳＯ₄、ＺｎＣｌ₂、ＭｇＣｌ₂、およびＭｇ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇）₂などが挙げられるが、これらを含むものであってもよい。ポリマーに対する第２の金属カチオン成分の比率としては、重量比で約１：９９ないし約１：２が適当である。最適比率は、使用するポリマーおよび第２の金属カチオン成分によって決まる。ポリマーマトリックスからの生理活性剤の放出を調節するための分散金属カチオン成分を含むポリマーマトリックスについては、１９９４年５月３日出願の同時係属米国特許出願第０８／２３７，０５７号明細書および同時係属ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０５５１１号パンフレットにさらに詳細に説明されているが、これら文献の開示内容はすべて参考により本願に合体される。本発明のｈＧＨ徐放性組成物は、フィルム、ペレット、シリンダー、ディスク、または微粒子など多くの形状に成型することができる。本明細書で定義する微粒子は、約１ミリメートル未満の直径を有するとともに、安定化ｈＧＨ粒子を分散状態で有するポリマー成分を含むものである。微粒子は、球状であっても非球状であってもよいし、不規則形状であってもよい。微粒子は微小球であることが好ましい。通常、微粒子は注射に適したサイズのものである。好ましい微粒子サイズ範囲は、直径約１ないし約１８０ミクロンである。本発明の生理活性非凝集ｈＧＨ徐放性組成物の生成方法においては、適当量の生理活性安定化ｈＧＨ粒子をポリマー溶液内に分散させる。適当なポリマー溶液は、適当な生体適合性ポリマーを約１％（ｗ／ｗ）ないし約３０％（ｗ／ｗ）含むが、その生体適合性ポリマーは通常、適当なポリマー溶媒に溶解させる。ポリマー溶液は約２％（ｗ／ｖ）ないし約２０％（ｗ／ｖ）のポリマーを含むことが好ましい。５％ないし約１０％（ｗ／ｗ）のポリマーを含むポリマー溶液が最も好ましい。本明細書で定義する適当なポリマー溶媒は、ポリマーが可溶であるが安定化ｈＧＨ粒子は実質的に不溶で反応性を示さない溶媒をいう。適当なポリマー溶媒の例としては、塩化メチレン、クロロホルム、酢酸エチルおよびアセトンなどの極性有機液体などが挙げられる。生理活性安定化ｈＧＨ粒子を調製するために、金属カチオンとｈＧＨとの複合体の形成に適するｐＨ条件下で、ｈＧＨを少なくとも１つの適当な金属カチオン成分とともに適当な水性溶媒中で混合する。通常、複合化ｈＧＨは、溶媒中に分散した状態の混濁沈殿物の型で存在する。しかしながら、複合化ｈＧＨは、溶液の状態でも存在することが可能である。さらにより好ましい態様において、ｈＧＨはＺｎ⁺²と複合体を形成する。ｈＧＨの複合体を形成するのに適したｐＨ条件とは、通常、約７．０ないし約７．４のｐＨ値が挙げられる。適したｐＨ条件は、通常、溶媒として重炭酸ナトリウム等の水性緩衝液の使用を通じて達成される。好適な溶媒とは、水性重炭酸ナトリウム緩衝液等、ｈＧＨおよび金属カチオン成分が、それぞれ、少なくともわずかに溶解するものである。水性溶媒の場合、使用する水は脱イオン水または注射用水（ＷＦＩ）のいずれかであることが好ましい。金属カチオン成分と接触させる前のｈＧＨは固体状でも溶液状でもよいものとする。また、ｈＧＨと接触させる前の金属カチオン成分は固体状でも溶液状でもよいものとする。好ましい態様においては、ｈＧＨの緩衝化水溶液を金属カチオン成分の水溶液と混合させる。通常、複合化ｈＧＨは、溶媒中に分散した状態の混濁沈殿物の型で存在する。しかしながら、複合化ｈＧＨは、溶液の状態でも存在することが可能である。さらにより好ましい態様において、ｈＧＨはＺｎ⁺²と複合体を形成する。次いで、リオフィライゼーションなどによって複合化ｈＧＨを乾燥させ、安定化ｈＧＨ粒子を生成させる。懸濁状または溶液状の複合化ｈＧＨは、全体をバルクでリオフィライズしてもよいし、小分け後にリオフィライズしてもよい。好ましい態様においては、超音波ノズルなどを用いて複合化ｈＧＨ懸濁物を微小化させ、次いでリオフィライゼーションに付して安定化ｈＧＨ粒子を生成させる。複合化ｈＧＨ混合物をリオフィライズさせる許容される方法としては、当該技術分野において公知のもの等が挙げられる。安定化ｈＧＨの粒子は、直径が約１ないし約６マイクロメートルであることが好ましい。ｈＧＨ粒子を、生理活性物質の小粒子製造方法について説明している１９９３年１月２１日出願の同時係属米国特許出願第０８／００６，６８２号明細書の説明に従い、独立的にフラグメント化することができるが、この文献の開示内容はすべて参考により本願に合体される。別法として、ｈＧＨ粒子を、超音波プローブや超音波ノズルなどによりポリマー溶液に添加した後でフラグメント化してもよい。さらに好ましい態様においては、安定化ｈＧＨ粒子に含まれない第２の金属カチオン成分もポリマー溶液に分散させる。第２の金属カチオン成分および安定化ｈＧＨを連続的、逆順的、間欠的、独立的、または同時的添加によってポリマー溶液に分散させることができるものとする。別法として、ポリマー、第２の金属カチオン成分および安定化ｈＧＨを連続的、逆順的、間欠的、独立的、または同時的添加によってポリマー溶媒に混合させることもできる。生分解性ポリマーからの生理活性物質の放出を調節するための組成物の生成方法については、同時係属米国特許出願第０８／２３７，０５７号明細書にさらに詳細に説明されている。本方法においては、次いで、ポリマー溶媒を固化して安定化ｈＧＨ粒子の分散物を含むポリマーマトリックスを生成させる。ポリマー溶液からｈＧＨ徐放性組成物を生成させるのに適した１つの方法は、シュノーリング（Schnoring）らに付与された米国特許第３，７３７，３３７号、ブランチェン（Vranchen）らに付与された米国特許第３，５２３，９０６号、キタジマ（Kitajima）らに付与された米国特許第３，６９１，０９０号、またはティセ（Tice）らに付与された米国特許第４，３８９，３３０号に説明されている溶媒蒸発法である。ｈＧＨ徐放性微粒子を生成させるための方法として、通常、溶媒蒸発を用いる。溶媒蒸発法においては、安定化ｈＧＨ粒子分散物を含むポリマー溶液を、ポリマー溶媒が一部相溶性を示す連続相に混合するか、その連続相とともに攪拌して、乳剤を生成させる。連続相は通常、水性溶媒である。連続相に乳化剤を添加して乳剤の安定化を図ることが多い。次いで、ポリマー溶媒を数時間以上かけて蒸発させることで、ポリマーを固化させ、安定化ｈＧＨ粒子の分散物を含むポリマーマトリックスを生成させる。ポリマー溶液からｈＧＨ徐放性微粒子を生成させる方法として好ましいものは、ゴムボッツ（Gombotz）らに付与された米国特許第５，０１９，４００号明細書および１９９５年５月１８日出願の同時係属米国特許出願第０８／４４３，７２６号明細書に説明されているが、これらの文献の開示内容はすべて参考により本願に合体される。相分離など他の方法と比べると、この微小球生成方法は、特定のｈＧＨ含有率を有する徐放性組成物の製造に必要なｈＧＨの量をさらに減らす。この方法においては、安定化ｈＧＨ粒子分散物を含むポリマー溶液を処理して、液滴を生成させるが、少なくとも有意比率の液滴がポリマー溶液および安定化ｈＧＨ粒子を含むものとする。次いで、これらの液滴を微粒子生成に適した手段によって凍結させる。ポリマー溶液分散物を処理して液滴を生成させる手段の例としては、分散物を超音波ノズル、圧力ノズル、レイリージェット（Rayleigh j et）に通過させる手段や、その他の公知の、溶液から液滴を生成させる手段などが挙げられる。液滴を凍結させて微粒子を生成させるのに適した手段としては、液体アルゴンや液体窒素などの液化ガス中またはその付近に液滴を通過させて凍結微小液滴を生成させた後、液化ガスから分離する方法などが挙げられる。次いで、凍結微小液滴をエタノール単独またはヘキサンもしくはペンタンと混合したエタノールなどの非溶媒液体と接触させる。凍結微小液滴中の溶媒を、固体および／または液体として非溶媒中に抽出し、微粒子含有安定化ｈＧＨを生成させる。エタノールをヘキサンまたはペンタンなどその他の非溶媒と混合すると、エタノール単独使用の場合より、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーなどのある種のポリマーからの溶媒抽出速度を高めることができる。たとえば超音波ノズルの直径を変えることによって液滴サイズを変化させることで、広いサイズ範囲のｈＧＨ徐放性微粒子を調製することができる。非常に大きな微粒子が所望される場合、微粒子をシリンジから冷液体中に直接押し出すことができる。ポリマー溶液の粘度を上げることによっても微粒子のサイズを増大させることができる。たとえばこのプロセスによって製造される微粒子のサイズは、直径約１マイクロメートル以下から約１０００マイクロメートル以上まで広範囲に変化しうる。ポリマー溶液からｈＧＨ徐放性組成物を生成させるさらに別の方法においては、型の中などでフィルム注型することによってフィルムまたは特定の形状を形成させる工程が含まれる。たとえば、安定化ｈＧＨ粒子の分散物を含むポリマー溶液を型に入れた後、一定の乾燥重量を有するフィルムまたは形状が得られるまで、当該分野において公知の手段によってポリマー溶媒を除去するか、ポリマー溶液の温度を低下させる。生理活性物質を含むポリマー溶液のフィルム注型については、同時係属米国特許出願第０８／２３７，０５７号明細書にさらに詳細に説明されており、この文献の開示内容はすべて参考により本願に合体される。ｈＧＨの放出は２種類の機構によって起こりうると考えられる。ｈＧＨは、その溶解によって、または徐放性組成物合成時のポリマー溶媒の除去に伴い生じるボイドによるなどして、ポリマーマトリックス中にできた水性飽和チャンネルを通過する拡散によって放出されうる。第２の機構は、ポリマーの分解によるｈＧＨの放出である。分解速度は、ポリマーの水和速度に影響を及ぼすポリマー物性を変えることによってこれを制御することができる。これらの物性としては、たとえば、ポリマーを構成するラクチドおよびグリコリドなどの異種モノマーの比率；ラセミ混合物の代替として使用するＬ−異性体モノマー；およびポリマーの分子量などが挙げられる。これらの物性は、ポリマーの水和速度を制御する親水性および結晶性に影響を及ぼしうる。塩、炭水化物、および界面活性剤などの親水性添加剤も水和性を増大させる目的に使用することができ、これによりポリマーの侵食速度を変えることができる。ポリマーの物性を変化させることによって、ｈＧＨ放出に対する拡散および／またはポリマー分解の影響を制御することができる。たとえば、ポリ（ラクチド −コ−グリコリド）ポリマーのグリコリド含有率を上げたり、ポリマーの分子量を低下させると、ポリマーの加水分解が増大し、ポリマー侵食によるｈＧＨ放出が増大する。また、ポリマーの加水分解の速度は、非中性ｐＨ値によって上昇することがある。したがって、微小球の生成に使用するポリマー溶液に酸性または塩基性添加剤を添加することで、ポリマー侵食速度を変えることができる。本発明の組成物は、様々な医学的状態のｈＧＨ治療を目的として、ヒトまたはヒト以外の動物に、注射剤、埋め込み剤（たとえば皮下、筋肉内、腹腔内、頭蓋内、膣内、および皮内）、粘膜投与剤（たとえば鼻腔内投与または座剤）、またはイン・サイチュ送達剤（たとえば浣腸剤やエアゾル噴霧剤）として投与することで、既知測定項目値に基づいて決定される目標用量のｈＧＨを提供することができる。以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。実施例１Ｚｎ⁺²安定化ｈＧＨの形成ゴエッデルら（Goeddel et al.）に付与された米国特許第４，８９８，８３０号にＤＮＡ配列が説明されているヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を本実施例で用いた。亜鉛と不溶性複合体を形成させることによって、そのヒト成長ホルモンを安定化させた。ｈＧＨを４ｍＭの重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）の複数サンプルに溶解して、０．１ないし０．５ｍＭのｈＧＨ濃度を有するｈＧＨ溶液を形成させた。０．９ｍＭのＺｎ⁺²溶液を脱イオン水および酢酸亜鉛二水物から調製した後、ｈＧＨ溶液に添加して、Ｚｎ⁺²−ｈＧＨ複合体を形成させた。次いで、１％の酢酸を加えることで、Ｚｎ⁺²−ｈＧＨ複合体のｐＨを７．０ないし７．４に調整した。Ｚｎ⁺²安定化ｈＧＨから成る混濁状懸濁沈殿物が生成した。次いで、超音波ノズル（タイプＶ１Ａ；Sonics and Materials、Danbury，CT ）を用いて、Ｚｎ⁺²安定化ｈＧＨの懸濁物を微小化させ、液体窒素入りのポリプロピレンタブ（直径１７ｃｍ、深さ８ｃｍ）中に噴霧して、凍結粒子を形成させた。次いで、液体窒素が蒸発するまで、ポリプロピレンタブを−８０℃のフリーザーに置いた。次いで、Ｚｎ⁺²安定化ｈＧＨを含む凍結粒子を凍結乾燥して、Ｚｎ⁺²安定化ｈＧＨ粒子を形成させた。実施例２生理活性凝集安定化ｈＧＨ含有ＰＬＧＡ微小球の調製Ｚｎ⁺²安定化ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を含む微小球を、遊離カルボキシル末端基を有する親水性ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーＲＧ５０２Ｈ（以下「非ブロックＰＬＧＡ」という）（５０：５０ＰＬＧＡ、９，３００ダルトン；Boehringer Ingelheim Chemicals，Inc.）またはブロックされたカルボキシル末端基を有する比較的疎水性が高いＰＬＧＡポリマー（以下「ブロックＰＬＧＡ」という）（５０：５０ＰＬＧＡ、１０，０００ダルトン；ロット♯１１５−５６−１、Birmingham Polymers，Inc．社、Birmingham，AL）から調製した。ポリマーを室温で塩化メチレンに溶解した。凍結乾燥させたｈＧＨ粒子をポリマー溶液に添加し、炭酸亜鉛も添加した。次いで、混合物を超音波処理して、均一懸濁物を得た。この懸濁物を、液体窒素を重層した凍結エタノール床上に超音波ノズルを通して霧化させた。微小球入りの容器を−８０℃で保存して、塩化メチレンを抽出した後、凍結乾燥させて、自由流動性粉末を得た。実施例３カプセル化ｈＧＨタンパク質の分析非水和微小球を塩化メチレンおよびアセトンに溶解し、タンパク質を回収し、凍結乾燥させ、１０ｍＭのＥＤＴＡを含むＨＥＰＥＳ緩衝液中で再構成することによって、カプセル化ｈＧＨの蓄積を測定した。適当な対照を測定して、抽出工程がタンパク質の蓄積に影響を及ぼすことがないことを確認した。カプセル化後に、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）でｈＧＨに含まれるｈＧＨモノマーの百分率を測定することによって、カプセル化ｈＧＨの蓄積を分析した。ｈＧＨ徐放性微小球のｈＧＨ蓄積のＳＥＣ分析の結果を以下に示す。結果から、カプセル化工程はタンパク質の凝集を引き起こさないことが示された。抽出操作によって回収されたタンパク質の収率（微小球の窒素含有率で測定した量に対する比率）は約４０ないし９８％の範囲であった。この変動は、操作における移し変え段階での物質のロスによるものと考えられ、タンパク質回収率を上げるように抽出操作を変更しつつある。実施例４イン・ビトロ放出キネティクスに及ぼす炭酸亜鉛の影響の測定微小球は、実施例２の説明に従い形成させ、１５％ｗ／ｗのｈＧＨ（Ｚｎ：ｈＧＨタンパク質複合体比６：１）、０％、１％、６％、１０％、または２０％ｗ／ｗの炭酸亜鉛、およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーを含んでいた。各タイプの微小球のアリコート（１０ｍｇ）を複数の１．５ｍｌのＨＥＰＥＳ緩衝液（５０ｍＭＨｅｐｅｓ、１０ｍＭＫＣ１、０．１％ＮａＮ₃）ｐＨ７．２のサンプルに懸濁させた後、３７℃でインキュベートすることによって、様々な濃度の炭酸亜鉛を含むｈＧＨ徐放性微小球処方のイン・ビトロ放出キネティクスを測定した。インキュベーション１、３、７、１０、１４、２１、２８日後に緩衝液をサンプリングし、各サンプリング後に新鮮緩衝液を補充することによって、タンパク質の放出量を定量した。累積放出率（当初量の微小球中の初期ｈＧＨ含有率に対する比率）の経時変化曲線をプロットした。各時点で採取した放出タンパク質サンプルにつき、サイズ排除クロマトグラフィーでｈＧＨモノマー含有率を測定した。炭酸亜鉛は、Ｚｎ−ｈＧＨ複合体の形成が促進され、可溶性ｈＧＨへの解離が阻害されるように、亜鉛イオンのリザーバーとして作用するものと考えられる。炭酸亜鉛の水溶性は低いため、リザーバーからの亜鉛イオンの放出は遅く、そのタンパク質の溶解度が調節される。分析で、炭酸亜鉛の非存在下では、カプセル化ｈＧＨの放出速度が非常に早くなり、そのタンパク質はすべて非常に短期間に放出されることがわかった。実施例５ブロックＰＬＧＡＺｎ⁺²安定化ｈＧＨ微小球のイン・ビボ分解後のｈＧＨの測定実施例２の方法により、１５％ｗ／ｗＺｎ⁺²安定化ｈＧＨおよび０％、６％、１０％、または２０％のＺｎＣＯ₃を含むブロックＰＬＧＡの微小球を生成させた。試験ラットの群に、様々なｈＧＨ微小球の５０ｍｇサンプルを皮下注射した。６０日後にラットを屠殺し、皮膚サンプルを注射部位から切除した。切除した皮膚サンプルを、少なくとも２４時間、１０％中性緩衝ホルマリンに入れた。次いで、これらのものをカミソリの刃でトリミングして、余分な皮膚を除去し、ＰＢＳに入れた。組織サンプルはPathology Associates，Inc.社（Frederic，MD）によって処理された。皮膚サンプルをグリコメタクリレートに包埋し、切片を作成し、メーカーの指示に従い、ヒストスキャン／リンホスキャン染色キット（HistoScan/Lymp hoScan Staining Kit）（製品♯２４−４０８Ｍ；Accurate Chemical & Scienti fic Corp.社、Westbury，NY）を用いて、ｈＧＨを検出する測定を行なった。組織サンプルは、サンプル中のｈＧＨの有無の指標となる染色の有無に関してスコア評価した。ｈＧＨ微小球注射に関連したすべての皮膚サンプルは、ｈＧＨの存在を示す陽性結果を示したことから、ブロックＰＬＧＡ微小球はイン・ビボで６０日後でもｈＧＨを含んでいることが示された。実施例２で説明した方法を用いて、Ｚｎ：ｈＧＨ複合体の形で０％または１５％ｗ／ｗのｈＧＨならびに０％、１％、または６％ｗ／ｗのＺｎＣＯ₃塩をブロックＰＬＧＡ内および非ブロックＰＬＧＡ内にカプセル化することによって、微小球を生成させた。微小球のサンプルをラットに注射した後、注射後の様々な時点で注射部位に残留する微小球を分析することによって、非ブロックＰＬＧＡ微小球とブロックＰＬＧＡ微小球のイン・ビボ分解を比較した。各微小球サンプルにつき、各時点で３頭のラットを測定した。微小球の投与当日、７５０μｌの賦形剤（食塩水溶液中３％カルボキシルメチルセルロース（低粘度）および１％のＴｗｅｅｎ−２０）を５０±１ｍｇの微小球を入れたバイアルに加えた。ただちにバイアルを激しく振とうさせて懸濁物を生成させた後、これを針を付けていない１．０ｃｃのシリンジ中に吸引した。ラット（スプラーグ−ドーレー雄）をハロセンと酸素の混合物で麻酔した。注射部位（肩甲骨間領域）を剃毛し、永久いれずみでマークして、サンプリング時点における精密な皮膚切除を可能にした。１８ないし２１ゲージの注射針を用いて、１バイアル分の微小球を各ラットに注射した。所定の日（ブロックＰＬＧＡ微小球投与を受けた動物の場合は、注射１５、３０、５９、および９０日後、または非ブロックＰＬＧＡ微小球投与を受けた動物の場合は、注射７、１４、２１、２８、および４５日後）、ラットをＣＯ₂ガスで窒息屠殺し、注射部位の皮膚（微小球を含む）を切除した。微小球は注射部位にかたまる傾向があったため、微小球の有無を肉眼で判定した。肉眼検査で、非ブロックＰＬＧＡ微小球はブロックＰＬＧＡ微小球よりかなり早く分解すること、およびブロックＰＬＧＡにＺｎＣＯ₃を加えると、ポリマー分解がかなり遅くなることがわかった。たとえば、０％のｈＧＨと０％または１％のＺｎＣＯ₃を含む非ブロックＰＬＧＡ微小球を注射したラットでは、２１日目に微小球は見られなかった。また、０％のｈＧＨと０％のＺｎＣＯ₃を含むブロックＰＬＧＡ微小球を注射したラットでは、６０日目に少数の微小球が見られ、９０日目には全く見られなかった。さらに、０％または１５％のｈＧＨと６％のＺｎＣＯ₃を含むブロックＰＬＧＡ微小球を注射したラットでは、９０日目でも微小球が見られた。実施例６ラットにおけるｈＧＨ徐放性微小球のイン・ビボ薬物キネティクス試験様々なｈＧＨ微小球処方をスクリーニングし、ｈＧＨの静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、およびＳＣ浸透圧ポンプ（アルゼット（Alzet））投与後の薬物キネティクスパラメーターを測定し、様々なｈＧＨ微小球処方の血清中プロフィルおよびイン・ビボ放出速度を評価するために、ラットにおける試験を実施した。スプラーグ−ドーレーラットを体重で無作為化した３頭づつの群に分け、各群に１つのｈＧＨ微小球処方を投与した。様々な微小球のうちの１つのタイプの５０ｍｇに含まれる約７．５ｍｇのｈＧＨを、０．７５ｍｌの水性注射賦形剤に懸濁させたものをラットに皮下注射した。賦形剤組成は、３％ＣＭＣ（低粘度）、１％ポリソルベート２０を０．９％ＮａＣｌに溶解したものである。送達した微小球用量は、注射バイアル内の残留量を秤量し、残留注射賦形剤を補正することによって間接的に求めた。次いで、窒素分析によって測定した微小球のタンパク質負荷率からｈＧＨ量を計算した。注射３０日後まで、あらかじめ決めておいた間隔で血液サンプルを採取した。２５０μｌの血液サンプルを最初の２４時間に採取し、２４時間以後の時点では少なくとも４００μｌを採取した。血液サンプルを凝固させ、放射免疫測定法を用いて血清中ｈＧＨ濃度を測定した。ＩＣＮ社製放射免疫測定（ＲＩＡ）キットの性能を確認したうえで、ラット血清中ｈＧＨ値の測定に使用した。薬物キネティクスパラメーターの測定のために、食塩水に溶解したｈＧＨを皮下ボーラス注射によってラットに静脈内投与するか、皮下埋入した浸透圧ポンプ（アルゼットモデル２ＭＬ４）を介して送達した。３群のラットに、投与量を１．０ｍｌ／ｋｇとし、０．５または７．５ｍｇ／ｋｇで０．９％ＮａＣｌ中のｈＧＨの単回皮下注射を行ない、２群には、投与量を１．０ｍｌ／ｋｇとして、ラット体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇおよび５．０ｍｇのｈＧＨで、０．９％ＮａＣｌ溶液中のｈＧＨの単回静脈内ボーラス注射を行なった。アルゼットポンプ試験の場合、ラットを体重で無作為化した３頭づつの４群に分け、ポンプ（アルゼットモデル２００２、２００μｌ、１４日放出）に負荷した０．９％食塩水溶液中約２０ｍｇ／ｍｌおよび４０ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ、およびポンプ（アルゼットモデル２ＭＬ４、２ｍｌ、２８日放出）に負荷した０．９％食塩水溶液中約４ｍｇ／ｍｌおよび１２ｍｇ／ｍｌのｈＧＨを投与した。予想されたポンプからの放出速度は、それぞれ１日あたりプロリース（ProL ease）ｈＧＨ用量（約１５ｍｇ／ｋｇ）の約２％および４ないし６％に相当した。アルゼットポンプは、無菌食塩水中で１〜２分間浸漬した後、肩甲骨間領域に皮下埋入した。実施例２の説明に従い合成したｈＧＨ徐放性微小球の処方は、６：１のＺｎ：ｈＧＨ比でＺｎと複合体化させた１５％ｗ／ｗのｈＧＨ、０％、１％、３％、または６％ｗ／ｗの炭酸亜鉛、および８Ｋ非ブロックＰＬＧＡ、１０ＫブロックＰＬＧＡ、または３１Ｋ非ブロックＰＬＧＡを含んでいた。様々なｈＧＨ徐放性処方を評価するために、Ｃｍａｘ、Ｃｄ５、およびＣｍａｘ／Ｃｄ５をイン・ビボ指標として使用した。ここで、Ｃｍａｘは見られた最高血清中濃度、Ｃｄ５は定常濃度に近いはずの５日目の血清中濃度である。結果は次のとおりであった。スクリーニングの結果から、２つの非ブロックポリマー（８Ｋおよび３１Ｋ）がブロック１０ＫＰＬＧＡおよび６％ｗ／ｗ炭酸亜鉛を使用した元の処方とは異なるイン・ビボ放出キネティクスを有していることが示された。全般にＣｍａｘ値は非ブロックポリマー処方の方が、リード（lead）処方より低かったことから、イン・ビボ「バースト」は非ブロックポリマー処方の方が低いことが示唆された。「バースト」は、注射後最初の２４時間以内に放出されたｈＧＨの百分率で定義した。イン・ビトロ「バースト」値は８〜２２％であった。処方の炭酸亜鉛含有率は「バースト」やイン・ビトロ放出プロフィルに影響を及ぼさないものと思われた。４〜６日目の血清中濃度は、非ブロックポリマー処方の場合は、基準（または放血前値）より高い値がかなり一定に保たれたのに対して、ブロック処方の場合の血清中濃度は同じ時点で基準値に近接していた。７日目までのイン・ビトロ放出データは、放出されたｈＧＨタンパク質がモノマー状であったことを示していた。ラット体内で抗ｈＧＨ抗体が生成したため、６日目以後は有用なデータは得られなかった。実施例７アカゲザルにおける薬物キネティクス試験この霊長類試験の目的は、複数のｈＧＨ徐放性処方の薬物キネティクスプロフィルを従来のｈＧＨ投与方法（たとえばボーラス皮下注射、連日皮下注射、および浸透圧ポンプを併用する皮下注射）と比較評価すること、および最適血中ｈＧＨ濃度プロフィルを示すｈＧＨ徐放性処方を決定することであった。試験したｈＧＨ徐放性微小球の処方は、１）１５％のｈＧＨ（６：１のＺｎ：ｈＧＨ比でＺｎと複合体化させたもの）、６％ｗ／ｗ炭酸亜鉛、および１０ＫブロックＰＬＧＡ、２）１５％のｈＧＨ（６：１のＺｎ：ｈＧＨ比でＺｎと複合体化させたもの）、１％ｗ／ｗ炭酸亜鉛、および８Ｋ非ブロックＰＬＧＡ（「ＲＧ５０２Ｈ」ＰＬＧＡポリマー）、および３）１５％のｈＧＨ（６：１のＺｎ：ｈＧＨ比でＺｎと複合体化させたもの）、１％ｗ／ｗ炭酸亜鉛、および３１Ｋ非ブロックＰＬＧＡ（「ＲＧ５０３Ｈ」ＰＬＧＡポリマー）であった。１群あたり４頭のサルを使用し、１日目に各動物の背頚部に単回皮下注射を行なった。２０ゲージ注射針を用いて、１．２ｍｌの注射賦形剤中の１６０ｍｇのｈＧＨ徐放性微小球（２４ｍｇのｈＧＨ）を各サルに投与した。注射賦形剤は３％ｗ／ｖのカルボキシメチルセルロース（ナトリウム塩）、１％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ２０（ポリソルベート２０）、および０．９％の塩化ナトリウムを含む水性賦形剤であった。ｈＧＨ用量は、薬物キネティクス分析のために測定可能な血清中ｈＧＨ濃度を得るためのものであった。薬物キネティクスパラメーターを得るために、各群４頭のサルから成る複数の試験群を追加した。すなわち、１）単回皮下注射（２４ｍｇｈＧＨ）、２）連日皮下注射（２４ｍｇ／２８日＝０．８６ｍｇｈＧＨ／日）、３）アルゼット浸透圧ポンプ（２０．４ｍｇｈＧＨ）と併用した皮下注射（３．６ｍｇｈＧＨ）（合計用量２４ｍｇｈＧＨ）、および４）対照として注射賦形剤の皮下注射（賦形剤対照群には３頭のサルのみを使用）である。下記時点で、ｈＧＨ、ＩＧＦ１、ＩＧＦＢＰ３、および抗ｈＧＨ抗体分析用の血液サンプルを採取した。投与−７、−５、−３時間前、ならびに０．５、１、２、３、５、８、１０、１２、２４、２８、３２、および４８時間後、５、４、６、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、２５、２８、４１、４４、４７、５０、５３、５６日後である。次いで、血清中のＩＧＦ−１およびｈＧＨの濃度を測定した。ＲＡＤＩＭ社製ＩＲＭＡキット（販売者：Wein Laboratories 社、P.O．Box 227，Succasunna， NJ）を用いてサル血清中のｈＧＨを定量した。ＩＲＭＡ測定は、ＰＢＳ緩衝液中の定量限界は０．１ｎｇ／ｍｌ、プールした幼若アカゲザル血清中の定量限界は１．５ｎｇ／ｍｌ、基礎ＧＨ値は約４ｎｇ／ｍｌである。プールした幼若アカゲザル血清の場合、１．５〜７５ｎｇ／ｍｌの濃度範囲でＩＲＭＡ測定の妥当性が証明された。測定精度および正確度は±１０％の範囲内であった。結果から、ｈＧＨ徐放性微小球は１カ月にわたり有意な持続値のｈＧＨを放出していることが示されたのに対し、皮下注射は同じ血清中値を維持することができなかった。血清中ＩＧＦ−１プロフィルから、血清中ＩＧＦ−１濃度は微粒子の投与２日目から２９日目の間に基準値を超えていることが示された。このことは、薬物動力学的作用を引き起こすのに十分なｈＧＨがｈＧＨ徐放性微小球から放出されていたことを示している。このことはまた、放出されたｈＧＨが生理活性であることを示すものであり、カプセル化工程がｈＧＨの生物力価に悪影響を及ぼさなかったことを示唆するものである。均等物当業者であれば、単なる日常的実験手法により、本明細書に記載された発明の具体的態様に対する多くの均等物を認識し、あるいは確認することができるであろう。かかる均等物は下記請求の範囲に記載されるような本発明の範疇に含まれるものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年６月２５日【補正内容】請求の範囲１．下記を含むヒト成長ホルモンの徐放性組成物：ａ）生体適合性ポリマー；およびｂ）金属カチオン複合化ヒト成長ホルモン粒子、ここで、金属カチオンの蛋白質に対するモル比は、４：１を超え、約１０：１未満である。２．該モル比が少なくとも約６：１である請求項１記載の組成物。３．金属カチオンがＺｎ（II）である請求項１または２記載の組成物。４．金属カチオンが水溶性塩としてヒト成長ホルモンに添加されている前記請求項いずれか記載の組成物。５．金属カチオンが酢酸亜鉛の形態でヒト成長ホルモンに添加されている請求項４記載の組成物。６．該金属カチオン複合化ヒト成長ホルモン粒子が、該生体適合性ポリマー内に分散している前記請求項いずれか記載の組成物。７．該ポリマーがポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ −グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンオキサレート）、ポリウレタン、それらの混和物およびそれらのコポリマーからなる群より選ばれたものである請求項６記載の組成物。８．該ポリマーがポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）およびポリ（ラクチド −コ−グリコリド）からなる群より選ばれたものである請求項７記載の組成物。９．金属カチオン複合化ヒト成長ホルモン粒子が、約０．１〜約３０重量％、好ましくは約０．１〜約２０重量％の濃度で該ポリマーに存在している前記請求項いずれか記載の組成物。１０．金属カチオン複合化ヒト成長ホルモン粒子が、約１５重量％の濃度で該ポリマーに存在している請求項９記載の組成物。１１．生体適合性ポリマーがさらに金属カチオン成分を含んでなる、前記請求項いずれか記載の組成物。１２．金属カチオン成分の金属カチオンがＺｎ（II）である請求項１１記載の組成物。１３．金属カチオン成分が、ＺｎＣＯ₃、Ｚｎ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇）₂、Ｚｎ（ＯＡｃ）₂ 、ＺｎＳＯ₄およびＺｎＣｌ₂からなる群より選ばれたものである請求項１２記載の組成物。１４．金属カチオン成分の金属カチオンがＭｇ（II）である請求項１１記載の組成物。１５．金属カチオン成分が、Ｍｇ（ＯＨ）₂、ＭｇＣＯ₃、Ｍｇ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇ ）₂、Ｍｇ（ＯＡｃ）₂、ＭｇＳＯ₄およびＭｇＣｌ₂からなる群より選ばれたものである請求項１２記載の組成物。１６．金属カチオン成分のポリマーに対する重量比が、約１：９９〜約１：２であり、好ましくは約１重量％である請求項１２〜１５いずれか記載の組成物。１７．下記を含むヒト成長ホルモンの徐放性放出のための請求項１記載の組成物ａ）分散したＺｎ（II）を有する生体適合性ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ここで、Ｚｎ（II）は、ＺｎＣＯ₃ として添加される；およびｂ）Ｚｎ（II）複合化ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）粒子、ここで、Ｚｎ（II）は、Ｚｎ：ｈＧＨが約６：１のモル比で、酢酸亜鉛の形態でヒト成長ホルモンに添加され、Ｚｎ（II）複合化ヒト成長ホルモン粒子は、約１５重量％の濃度で該ポリマーに存在している。１８．治療用医薬のための調製における使用のための前記請求項いずれか記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ガンムキ，メダエム. アメリカ合衆国ペンシルバニア 15090 ウェックスフォード，スタッグホーンドライブ 426 (72)発明者バーンスタイン，ハワードアメリカ合衆国マサチューセッツ 02139 ケンブリッジ，ナンバー．２ビー, マサチューセッツアベニュー 929 (72)発明者オーアー，ヘンリーアメリカ合衆国マサチューセッツ 02178 ベルモント，ナンバー．１，ウェイバリーストリート 130 (72)発明者カン，エム．アミンアメリカ合衆国ペンシルバニア 19335 ダウイントン，ツインパインズロード 29

Claims

【特許請求の範囲】１．下記を含むヒト成長ホルモンの徐放性組成物：ａ）生体適合性ポリマー；およびｂ）金属カチオン安定化ヒト成長ホルモン粒子、ここで、金属カチオンは、Ｚｎ（II）である。２．下記を含むヒト成長ホルモンの徐放性組成物：ａ）生体適合性ポリマー；およびｂ）金属カチオン安定化ヒト成長ホルモン粒子、ここで、金属カチオンの蛋白質に対するモル比は、約４：１〜１０：１であり、より好ましくは少なくとも約６：１である。３．金属カチオンがＺｎ（II）である請求項２記載の組成物。４．金属カチオンが水溶性塩としてヒト成長ホルモンに添加されている前記請求項いずれか記載の組成物。５．金属カチオンが酢酸亜鉛の形態でヒト成長ホルモンに添加されている請求項４記載の組成物。６．該金属カチオン安定化ヒト成長ホルモン粒子が、該生体適合性ポリマー内に分散している前記請求項いずれか記載の組成物。７．該ポリマーがポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ −グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンオキサレート）、ポリウレタン、それらの混和物およびそれらのコポリマーからなる群より選ばれたものである請求項６記載の組成物。８．該ポリマーがポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）およびポリ（ラクチド −コ−グリコリド）からなる群より選ばれたものである請求項７記載の組成物。９．金属カチオン安定化ヒト成長ホルモン粒子が、約０．１〜約３０重量％、好ましくは約０．１〜約２０重量％の濃度で該ポリマーに存在している前記請求項いずれか記載の組成物。１０．金属カチオン安定化ヒト成長ホルモン粒子が、約１５重量％の濃度で該ポリマーに存在している請求項９記載の組成物。１１．生体適合性ポリマーがさらに金属カチオン成分を含んでなる、前記請求項いずれか記載の組成物。１２．金属カチオン成分の金属カチオンがＺｎ（II）である請求項１１記載の組成物。１３．金属カチオン成分が、ＺｎＣＯ₃、Ｚｎ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇）₂、Ｚｎ（ＯＡｃ）₂ 、ＺｎＳＯ₄およびＺｎＣｌ₂からなる群より選ばれたものである請求項１２記載の組成物。１４．金属カチオン成分の金属カチオンがＭｇ（II）である請求項１１記載の組成物。１５．金属カチオン成分が、Ｍｇ（ＯＨ）₂、ＭｇＣＯ₃、Ｍｇ₃（Ｃ₆Ｈ₅Ｏ₇）₂ 、Ｍｇ（ＯＡｃ）₂、ＭｇＳＯ₄およびＭｇＣｌ₂からなる群より選ばれたものである請求項１２記載の組成物。１６．金属カチオン成分のポリマーに対する重量比が、約１：９９〜約１：２であり、好ましくは約１重量％である請求項１２〜１５いずれか記載の組成物。１７．下記を含むヒト成長ホルモンの徐放性放出のための請求項１記載の組成物：ａ）分散したＺｎ（II）を有する生体適合性ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ここで、Ｚｎ（II）は、ＺｎＣＯ₃として添加される；およびｂ）Ｚｎ（II）安定化ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）粒子、ここで、Ｚｎ（II）は、Ｚｎ：ｈＧＨが約６：１のモル比で、酢酸亜鉛の形態でヒト成長ホルモンに添加され、Ｚｎ（II）安定化ヒト成長ホルモン粒子は、約１５重量％の濃度で該ポリマーに存在している。１８．治療用医薬の調製における使用のための前記請求項いずれか記載の組成物。