JPH10504716A

JPH10504716A - 酵素飼料添加剤およびそれを含有する動物飼料

Info

Publication number: JPH10504716A
Application number: JP8507779A
Authority: JP
Inventors: ベッドフォード，マイケル・リチャード; モーガン，アンドリュー・ジョン; クラークソン，キャスリーン; シュルツ，ヘイゲン・クラウス
Original assignee: Finnfeeds International Ltd; Genencor International Inc
Current assignee: Danisco UK Ltd; Danisco US Inc
Priority date: 1994-08-19
Filing date: 1995-08-17
Publication date: 1998-05-12
Also published as: CN1159145A; FI970676A; EP0704167A1; NO970745D0; NO970745L; AU3394495A; AU692596B2; GB9416841D0; US5612055A; WO1996005739A1; NZ292148A; CA2196760A1; FI970676A0

Abstract

(57)【要約】キシラナーゼ、プロテアーゼ、および場合によりβ−グルカナーゼを含む酵素飼料添加剤が提供される。単位量の飼料添加剤当たりのキシラナーゼ活性の単位対同じ単位量の飼料添加剤当たりのβ−グルカナーゼ活性の比は１：０−０.２５である。好適には、キシラナーゼはトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる低ｐＩキシラナーゼおよび／または高ｐＩキシラナーゼである。好適には、プロテアーゼはバシラス・アミロリクエファシエンスから得られるサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置におけるロイシンによる置換を含む変異体サブチリシンである。

Description

【発明の詳細な説明】酵素飼料添加剤およびそれを含有する動物飼料本発明は酵素飼料添加剤に関し、そして特に穀類をベースとした動物飼料の飼料転換比を減少できる添加剤に関する。動物が飼料をさらに効率的に消化できるようにするための動物飼料における改良は絶えず探求されている。主な関心事の１つは、単位体重当たりのその価格を上昇させることなく飼料の飼料転換比（ＦＣＲ）を改良することである。ＦＣＲは消費される飼料の量対動物の体重の比である。低いＦＣＲはある量の飼料が見合ったさらに多い体重を有する成長中の動物を生ずることを示している。これは動物が飼料をより効率的に利用できることを意味する。飼料のＦＣＲを改良することができる１つの方法はその消化性を増加させることである。飼料の栄養成分、例えばその澱粉、脂肪、蛋白質およびアミノ酸内容物、の消化性には種々の制限がある。これらの制限には下記のものが含まれる：（ｉ）動物の腸内に存在する物質の粘度。そのような粘度は、少なくとも一部は、可溶性の非−澱粉性多糖類、例えば混合され結合されたβ−グルカン類およびアラビノキシラン類、による。（ii）飼料の細胞壁、特に穀類中の糊粉層、内での栄養分の捕獲。そのような捕獲は動物の消化系による破壊に対して比較的耐性がある穀類の細胞壁中の高水準の非−澱粉性多糖類により引き起こされる。これが動物が細胞内に捕獲された栄養分を利用するのを妨害している。（iii）特に若い動物における動物および腸微生物数の両者の、内因性酵素活性における不足。消化性を妨害する上記の問題は穀類をベースとした餌、例えば高い小麦含有量を有するもの、の場合に特に顕著である。飼料からの栄養分の劣悪な消化性問題のために、動物の栄養需要に合わせるためにかなりの量のエネルギー供給物質を含有するように飼料を調合することが一般的に必要である。そのようなエネルギー供給物質は従来は澱粉、脂肪、糖類、繊維などを含んでいる。これらのエネルギー供給物質、またはそのような物質の原料を飼料中に含むという要求はかなりの追加費用を増やすこととなり、それは経済的な観点から不利である。穀類をベースとした飼料の劣悪な消化性問題を解決する試みにおいては、酵素補充剤、例えばβ−グルカナーゼ類またはキシラナーゼ類を動物飼料中に含むことが知られている。例えば、ＷＯ９１／０４６７３は消化減少を引き起こす家禽類におけるメラブソープション症候群を緩和するための飼料添加剤を開示している。この添加剤はセルラーゼおよびキシラナーゼを含む。ＪＰ−Ａ−６０−７５２３８は、プロテアーゼ−、セルラーゼ−、アミラーゼ−およびリパーゼ−活性を含む酵素カクテルを含有する室内動物用の飼料を開示している。この参考文献はこれらの種々の酵素活性により発酵微生物が成長可能になりそしてこれらが飼料の有用な栄養成分になると推測している。セルラーゼ類（すなわちセルラーゼ系）はセルロース（β−１，４−Ｄ−グルカン結合）および／またはその誘導体（例えば燐酸膨潤セルロース）を加水分解しそして主生成物としてグルコース、セロビオース、セロオリゴ糖類などを与える酵素組成物である。特定の微生物により製造されたセルラーゼ系はエキソ−セロビオヒドロラーゼ類（ＥＣ３.２.１.９１）（「ＣＢＨ」）、エンドグルカナーゼ類（ＥＣ３.２.１.４）（「ＥＧ」）、およびβ−グルコシダーゼ類（ＥＣ３.２.１.２１）（「ＢＧ」）と同定されたものを含む数種の酵素分類からなっている（Schulein,M.，1988）。さらに、これらの分類は個別成分にさらに分けることができる。例えば複数のＣＢＨ成分およびＥＧ成分が種々の細菌および真菌原料、例えば２種のエキソ−セロビオヒドロラーゼ類であるＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ、少なくとも３種のエンドグルカナーゼ類であるＥＧＩ、ＥＧＩＩおよびＥＧＩＩＩ、並びに少なくとも１種のβ−グルコシダーゼからなるトリコデルマ・ロンギブラキアタム(trichoderma longibrachiatum)のセルラーゼ酵素複合体、から単離されている。エンドグルカナーゼ類およびエキソ−セロビオヒドロラーゼ類はセルロースから小さいセロ−オリゴ糖類（主としてセロビオース）への加水分解において相乗的に作用すると考えられており、該糖類は引き続きβ−グルコシダーゼの作用によりグルコースに加水分解される。セルロース中のβ−１,４−結合を加水分解することの他に、エンド−１,４−グルカナーゼ（ＥＣ３.２.１.４）は１,３−結合も含有するβ−グルカン類中の１,４結合も加水分解する。エンドグルカナーゼ類は内部の結合に作用してセロビオース、グルコースおよびセロ−オリゴ糖類を製造する。エキソ−セロビオヒドロラーゼ類はセルロース重合体の非−還元性端部に作用して主生成物としてセロビオースを製造する。セルロース酵素複合体を製造または発現する有機体はしばしばキシラナーゼ活性も発現する。例えば、Ｔ.ロンギブラキアタムにより製造された２種のキシラナーゼ酵素が同定されている。これらの２種のキシラナーゼ類、すなわち高ｐＩキシラナーゼ（約９.０のｐＩを有する）と称されるものおよび低ｐＩキシラナーゼ（約５.２のｐＩを有する）と称されるもの、の精製並びに各々のキシラナーゼに関する遺伝子のクローニングおよび塩基配列はＷＯ９２／０６２０９に詳細に記載されている。この文献の図１６は低ｐＩおよび高ｐＩ遺伝子生成物の両者に関する推測アミノ酸配列を示している。実施例２２は低ｐＩおよび高ｐＩキシラナーゼ遺伝子を過剰発現しそして通常はＴ.ロンギブラキアタムに関連する非 −キシラナーゼ性のセルラーゼ成分、例えばＣＢＨＩ、ＣＢＨＩＩ、ＥＧＩ、ＥＧＩＩ、ＥＧＩＩＩおよびＢＧ、の一部または全部を製造不能であるＴ.ロンギブラキアタム菌株の作成方法も教示している。上記の如く、動物飼料中でのセルラーゼ類およびキシラナーゼ類の使用はプロテアーゼ類の使用と同様に知られている。しかしながら、キシラナーゼの多くの天然産出原料はβ−グルコシダーゼのかなり大量の相対的活性を含有することが見いだされている。例えばＴ.ロンギブラキアタムの天然菌株では、キシラナーゼ活性対β−グルコシダーゼ活性の比は１：５程度である。最も驚くべきことに、キシラナーゼが穀類をベースとした飼料中にその最適投与水準またはその付近で含まれる時にはβ−グルカナーゼ活性を有する酵素の同時存在が飼料のＦＣＲを増加させることが見いだされており、それはもちろん不利である。この驚異的な発見を考慮すると、β−グルカナーゼ活性を有する酵素はキシラナーゼが補充された飼料中では不必要であるだけでなくそれらの存在は実際にキシラナーゼおよび／またはプロテアーゼの存在から得られる利益にとって有害であると結論された。以下の記載および請求の範囲では、キシラナーゼ活性の単位、プロテアーゼ活性の単位およびβ−グルカナーゼ活性の単位が言及されている。本発明で使用されるこれらの３種の添加剤は下記の３種の評価方法により測定される。キシラナーゼ活性に関する評価方法１単位のキシラナーゼ活性は基質から１マイクロモルの還元性糖類（キシロース当量として表示される）を１分間で記載された条件下で遊離する酵素の量である。試薬１.１％（重量／容量）キシラン基質１０ｍｌの０.５Ｍ水酸化ナトリウムを１.０ｇのキシラン（Fluka 95590）に加える。磁気スタラーを用いて３０分間混合する。約４０ｍｌの０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３を加える。１Ｍ酢酸を用いてｐＨを５.３に調節する。０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３を１００ｍｌとなるまで充填する。基質は使用時には全ての時間にわたり混合されていなければならない。２.１Ｍ酢酸５.７ｍｌの氷酢酸をメスフラスコ中にピペットで加えそして蒸留水を１００ｍｌとなるまで充填する。３.０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３Ａ.４.１ｇの酢酸ナトリウムを蒸留水中に溶解させそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。Ｂ.３.０ｇの氷酢酸を蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。溶液ＡのｐＨを溶液Ｂを用いてｐＨ５.３に調節する。４.ジニトロサリチル酸（ＤＮＳ）試薬２０.０ｇの３,５−ジニトロサリチル酸を約８００ｍｌの蒸留水中に懸濁させる。３００ｍｌの水酸化ナトリウム溶液（３００ｍｌの蒸留水中の３２.０ｇのＮａＯＨ）を絶えず撹拌しながら徐々に加える。懸濁液を水浴中で（温度は＋４８℃越えてはならない）撹拌しながら溶液が透明になるまで暖める。６００ｇの酒石酸ナトリウムカリウムを徐々に加える。必要なら溶液が透明になるまで溶液を暖める（温度は＋４８℃を越えてはならない）。蒸留水を２０００ｍｌとなるまで充填しそして粗いガラス濾過器を通して濾過する。濃色瓶中に室温で貯蔵する。試薬は最大６ヶ月間安定である。工程１.酵素サンプル１ｍｌの酵素希釈物（０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３中）を＋５０℃において平衡化する。１ｍｌのキシラン基質を加え、撹拌しそして＋５０℃ において正確に３０分間培養する。３ｍｌのＤＮＳ−試薬を加え、撹拌しそして反応混合物を正確に５分間沸騰させる。反応混合物を冷たい水浴中で室温に冷却しそして蒸留水に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。２.酵素空試験１ｍｌのキシラン基質を＋５０℃において３０分間培養する。３ｍｌのＤＮＳ −溶液を加えそして撹拌する。１ｍｌの酵素希釈物（０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３中）を加えそして撹拌する。混合物を正確に５分間沸騰させる。反応混合物を冷たい水浴中で室温に冷却しそして蒸留水に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。３.標準曲線０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３中の無水キシロースから標準曲線を作成する。標準におけるキシロース濃度は０.０５−０.５ｍｇ／ｍｌであるべきである。１ｍｌの標準溶液、１ｍｌのキシラン基質および３ｍｌのＤＮＳ−試薬を試験管中にピペットで加える。撹拌しそして正確に５分間沸騰させる。反応混合物を冷たい水浴中で室温に冷却しそして標準空試験に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。標準空試験では、キシロース溶液は１ｍｌの０.０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.３により置換されている。その他は、標準空試験はキシロース標準と同様に処理される。キシロース濃度を吸光度の関数としてプロットする。新しい標準曲線を新しいＤＮＳ−試薬毎に作成する。計算サンプルのキシラナーゼ活性は下記の式に従い計算される。［式中、Ａ（Ｘ）＝酵素サンプルの吸光度Ａ（Ｏ）＝酵素空試験の吸光度ｋ＝標準曲線の傾斜Ｃ₀ ＝キシロース標準曲線の切片１０００＝係数、ミリモル→マイクロモルＤｆ＝拡散係数（ｍｌ／ｇ）ＭＷ_xy1 ＝キシロースの分子量（１５０.１３ｍｇ／ミリモル）ｔ＝反応時間（３０分間）］プロテアーゼ活性に関する評価方法１単位のプロテアーゼは基質から１マイクログラムのフェノール系化合物（チロシン当量として表示される）を１分間で記載された条件下で遊離する酵素の量である。試薬１.０.６％（重量／容量）カゼイン基質０.６ｇの乾燥ハンマルステンカゼイン(Hammarsten Casein)（メルク(Merck) ２２４２）を２００ｍｌのビーカー中に重量測定して加える。少量（約５ｍｌ）の蒸留水で湿らせる。カゼインが十分に湿ったら、２０ｍｌの０.２Ｍ燐酸水素二ナトリウムを加える。カゼインが溶解しそして乳白色溶液が得られるまで混合物を撹拌しながら＋６０℃に暖める。６０ｍｌの蒸留水および必要なら１−２滴のアルコール（発泡防止剤、同様な生成物も使用できる）を加える。室温に冷却した後に、ｐＨを０.５Ｍ水酸化ナトリウムおよび１Ｍ乳酸を用いて７.５に調節する。溶液をメスフラスコ中に移しそして蒸留水を１００ｍｌとなるまで充填する。基質溶液は冷たい部屋に貯蔵するなら１週間使用可能である。２.０.２ＭＮａ₂ＨＰＯ₄溶液１７.８０ｇの燐酸水素二ナトリウム二水和物を蒸留水中に溶解しそして蒸留水を５００ｍｌとなるまで充填する。３.０.０２ＭＮａＣｌ溶液１.１６８ｇの塩化ナトリウムを蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。４.沈澱試薬（ＴＣＡ）１８.８０ｇのトリクロロ酢酸（ＣＣｌ₃ＣＯＯＨ）、１８.１０ｇの無水酢酸ナトリウム（ＣＨ₃ＣＯＯＮａ）および１８.８０ｇの酢酸（ＣＨ₃ＣＯＯＨ）を蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。５.フェノール試薬１部のフォリン−シオカルシュー(Folin-Ciocalteau)フェノール試薬を１部の蒸留水と評価直前に混合する。６.０.５５ＭＮａ₂ＣＯ₃溶液５８.２９５ｇの炭酸二ナトリウムを蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。工程１.酵素サンプル１ｍｌの酵素希釈物（０.０２ＭＮａＣｌ溶液）を＋４０℃において（約５分間）平衡化する。５ｍｌの平衡化させたカゼイン基質を加え、撹拌しそして＋４０℃において正確に３０分間培養する。５ｍｌの沈澱試薬を加えそして撹拌する。＋４０℃において正確に３０分間培養しそして直ちに濾紙（ワットマン(Whatm an)１またはマチェレイ・ナゲル(Machery Nagel)６４０ｗｅ）を用いて濾過する。２ｍｌの濾液、５ｍｌの０.５５ＭＮａ₂ＣＯ₃溶液および１ｍｌのフェノール試薬をピペットで加える。撹拌しそして＋４０℃において３０分間撹拌する。室温に冷却しそして蒸留水に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。２.酵素空試験１ｍｌの酵素希釈物（０.０２ＭＮａＣｌ溶液中）を＋４０℃において（約５分間）平衡化する。５ｍｌの沈澱試薬を加え、撹拌しそして＋４０℃において正確に３０分間培養する。５ｍｌのカゼイン基質を加え、撹拌しそして＋４０℃において正確に３０分間培養する。直ちに濾紙（ワットマン(Whatman)１またはマチェレイ・ナゲル(Machery Nagel)６４０ｗｅ）を用いて濾過する。濾液を酵素サンプルと同様に処理する。酵素サンプルと酵素空試験との間の吸光度の差は０.２−０.５であるべきである。３.標準曲線１０ｍｇのＬ−チロシンをメスフラスコ中に重量測定して加え、０.０２ＭＮａＣｌ溶液中に溶解しそして０.０２ＭＮａＣｌ溶液を１００ｍｌとなるまで充填する。０.０２ＭＮａＣｌ溶液中のチロシン貯蔵溶液から下記の如く希釈物を製造する。１：５０＝２μｇ／ｍｌ１：２０＝５μｇ／ｍｌ１：１０＝１０μｇ／ｍｌ１：５＝２０μｇ／ｍｌ１：３＝３３μｇ／ｍｌ１：２＝５０μｇ／ｍｌ２ｍｌの各チロシン希釈物、５ｍｌの０.５５ＭＮａ₂ＣＯ₃溶液および１ｍｌのフェノール試薬をピペットで加える。撹拌しそして＋４０℃で３０分間培養する。室温に冷却しそして標準空試験に対する６６０ｎｍにおける吸光度を測定する。チロシン濃度を吸光度の関数としてプロットする。計算サンプルのプロテアーゼ活性は下記の式に従い計算される。［式中、Ａ（Ｘ）＝酵素サンプルの吸光度Ａ（Ｏ）＝酵素空試験の吸光度ｋ＝標準曲線の傾斜Ｆ＝反応希釈係数（＝１１）Ｄｆ＝拡散係数（ｍｌ／ｇ）ｔ＝反応時間（３０分間）］β−グルカナーゼ活性に関する評価方法１単位のβ−グルカナーゼは基質から１マイクロモルの還元性糖類（グルコース当量として表示される）を１分間で記載された条件下で遊離する酵素の量である。試薬１.１.０％（重量／容量）β−グルカン基質１.０ｇの混合−結合されたβ−（１,３）（１,４）−グルカン（バイオコン・バイオケミカルズ・リミテッド）を１０ｍｌのエタノールで湿らせる。約８０ｍｌの蒸留水を加えそして沸騰するまで暖める。β−グルカンが溶解しそして濁った溶液が得られるまで激しく撹拌しながら沸騰を続ける。濁った溶液を絶えず撹拌しながら室温に冷却しそして蒸留水を加えることによりβ−グルカン濃度を１.０％（重量／重量）に調節する。ガラス繊維濾紙を通して濾過する。基質は直ちに使用することができる。基質は冷たい部屋で貯蔵するなら２日間使用可能である。２.０.１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.０Ａ.８.２ｇの無水酢酸ナトリウムを蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。Ｂ.６.０ｇの氷酢酸を蒸留水中に溶解しそして蒸留水を１０００ｍｌとなるまで充填する。溶液ＡのｐＨを溶液Ｂを用いてｐＨ５.０に調節する。３.ジニトロサリチル酸（ＤＮＳ）試薬２０.０ｇの３,５−ジニトロサリチル酸を約８００ｍｌの蒸留水中に懸濁させる。３００ｍｌの水酸化ナトリウム溶液（３００ｍｌの蒸留水中の３２.０ｇのＮａＯＨ）を絶えず撹拌しながら徐々に加える。懸濁液を水浴中で（温度は＋４８℃を越えてはならない）撹拌しながら溶液が透明になるまで暖める。６００ｇの酒石酸ナトリウムカリウムを徐々に加える。必要なら溶液が透明になるまで溶液を暖める（温度は＋４８℃を越えてはならない）。蒸留水を２０００ｍｌとなるまで充填しそして粗いガラス濾過器を通して濾過する。濃色瓶中に室温で貯蔵する。試薬は最大６ヶ月間安定である。工程１.酵素サンプル１ｍｌの酵素希釈物（０.１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.０中）を＋３０ ℃において平衡化する。１ｍｌのβ−グルカン基質を加え、撹拌しそして＋３０ ℃において正確に１０分間培養する。３ｍｌのＤＮＳ−試薬を加え、撹拌しそして反応混合物を正確に５分間沸騰させる。反応混合物を冷たい水浴中で室温に冷却しそして蒸留水に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。２.酵素空試験１ｍｌのβ−グルカン基質を＋３０℃において１０分間培養する。３ｍｌのＤＮＳ−溶液を加えそして撹拌する。１ｍｌの酵素希釈物（０.１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５.０中）を加えそして撹拌する。混合物を正確に５分間沸騰させる。反応混合物を冷たい水浴中で室温に冷却しそして蒸留水に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。酵素サンプルと酵素空試験との間の吸光度差は０.３−０５でなければならない。３.標準曲線蒸留水中の無水グルコースから標準溶液を製造する。標準中のグルコース濃度は０.１−０.６ｍｇ／ｍｌであるべきである。１ｍｌのグルコース標準溶液、１ｍｌの蒸留水および３ｍｌのＤＮＳ−試薬を試験管中にピペットで加える。撹拌しそして正確に５分間沸騰させる。冷水中で室温に冷却しそして標準空試験に対する５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。標準空試験では、グルコース溶液が１ｍｌの蒸留水により置換されている。その他は、標準空試験はキシロース標準と同様に処理される。グルコース濃度を吸光度の関数としてプロットする。新しい標準曲線を新しいＤＮＳ−試薬毎に作成する。計算サンプルのβ−グルカナーゼ活性は下記の式に従い計算される。［式中、Ａ（Ｘ）＝酵素サンプルの吸光度Ａ（Ｏ）＝酵素空試験の吸光度ｋ＝標準曲線の傾斜Ｃ₀ ＝グルコース標準曲線の切片１０００＝係数、ミリモル→マイクロモルＤｆ＝拡散係数（ｍｌ／ｇ）ＭＷ_glu ＝グルコースの分子量（１８０.１６ｍｇ／ミリモル）ｔ＝反応時間（１０分間）］上記の考察に基づくと、本発明の目的は穀類をベースとした飼料のＦＣＲを改良しおよび／または消化性を増すための酵素飼料添加剤を提供することである。従って、本発明は（ｉ）キシラナーゼ、（ii）プロテアーゼ、および場合により（iii）β−グルカナーゼを含み、ここで１ｇの飼料添加剤当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの飼料添加剤当たりのβ−グルカナーゼ活性の比は１：０−０.２５である酵素飼料添加剤を提供する。動物の飼料中への上記の酵素飼料添加剤の含有により動物が飼料をより効率的に消化可能になることが見いだされた。ここで、添加剤の飼料への添加は動物が飼料から得ることができる飼料蛋白質およびエネルギーの割合を増す。これはまた飼料のＦＣＲを改良して使用時にそれをさらに経済的なものにする。動物が利用できるエネルギー、蛋白質、およびアミノ酸の同じ栄養水準を同時に保ちながら、栄養、および／または蛋白質、および／またはアミノ酸含有量を減少させることにより、従来の飼料を改変することにより本発明のこの面を使用することもできる。このことは動物飼料に従来含まれている高価なエネルギーおよび蛋白質補充剤の量を従来の飼料と比べて減少しうることを意味する。蛋白質補充剤は魚ひきわり、肉ひきわり、大豆、菜種またはカノーラを含む。これはその栄養価値を減じることなく単位重量の動物飼料当たりの価格における十分な減少をもたらす。代わりとして、またはそれに加えて、アミノ酸補充剤の量を従来の飼料と比べて減少させることができ、それもかなりの価格節約をもたらす。本発明に従う酵素飼料添加剤は多くの方法で製造することができる。例えば、それは適当な活性を有する種々の酵素を混合して酵素混合物を製造することにより簡単に製造できる。この酵素混合物を飼料と直接混合することもでき、またはさらに簡便には例えば粉砕された小麦、トウモロコシもしくは大豆粉末の如き穀類をベースとした担体物質に含浸させることもできる。そのような含浸させた担体も本発明に従う酵素飼料添加剤を構成するものである。代わりとして、例えば粉砕された小麦またはトウモロコシから製造された穀類をベースとした担体に適当な活性を有する酵素を同時にまたは連続的に含浸させることもできる。例えば、粉砕された小麦担体に最初にキシラナーゼを、第二にプロテアーゼを、そして場合により最後にβ−グルカナーゼを噴霧してもよい。これらの酵素を含浸させた担体物質も本発明に従う酵素飼料添加剤を構成するものである。本発明の飼料添加剤を動物飼料と直接混合してもよく、または１種もしくはそれ以上の飼料添加剤、例えばビタミン飼料添加剤、ミネラル飼料添加剤およびアミノ酸飼料添加剤、と混合してもよい。生じた数種のタイプの化合物を含む飼料添加剤を次に適当な量で飼料と混合することができる。穀類をベースとした担体を含む本発明の飼料添加剤は通常は１キロの飼料当たり０.０１−５０ｇ、より好適には０.１−１０ｇ／キロそして最も好適には約１ｇ／キロの量で混合される。本発明の酵素飼料添加剤を製造する別の方法は所望する酵素を生成する微生物を所望する相対的な量で組み換えＤＮＡ技術により構成することである。これは、例えばキシラナーゼをコードづけする遺伝子の複写数を増加することによりおよび／またはキシラナーゼ遺伝子の前で適当な強いプロモーターを使用することにより行うことができる。代わりとしてまたはそれに加えて、微生物菌株をある種のセルラーゼ遺伝子、特にエンドグルカナーゼ類、に関して欠失させることができる。本発明により提供される酵素飼料添加剤は他の酵素、例えば１種もしくはそれ以上のα−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ、マンナンナーゼ、α −ガラクトシダーゼ、フィターゼおよびリパーゼ、を含んでいてもよい。所望する活性を有する酵素を例えばキシラナーゼおよびプロテアーゼとこれらを穀類をベースとした担体上に含浸させる前に混合してもよく、またはそのような酵素をそのような穀類をベースとした担体上に同時にまたは連続的に含浸させてもよい。担体を次に穀類をベースとした飼料と混合して最終的な飼料を製造する。酵素飼料添加剤を個別の酵素活性の溶液として調合しそして次にこの溶液をペレットまたはひきわり状に予め製造された飼料物質と混合することもできる。酵素飼料添加剤を動物が摂取する第二の（そして異なる）飼料または飲料水の中に加えることによりそれを動物の餌に含有させることもできる。従って、本発明により提供される酵素混合物を穀類をベースとした飼料自体の中に加えるということは必須ではないが、そのような加入が本発明の特に好適な面を形成する。本発明により提供される酵素混合物はキシラナーゼを必須成分として含む。このキシラナーゼは細菌、例えばバシラス(Bacillus)、ストレプトマイセス(Strep tomyces)、クロストリジウム(Clostridium)、サーモノスポラ(Thermonospora)、マイクロテトラ−スポラ(Microtetra-spora)、またはルミノコッカス(Ruminococ cus)から得られる。しかしながら、キシラナーゼが真菌、例えばトリコデルマ(T richoderma)、アスペルギルス(Aspergillus)、フミコラ(Humicola)またはネオカリマスチックス(Neocallimastix)から得られることがさらに好ましい。キシラナーゼがＷＯ９２／０６２０９の実施例２２の方法により得られるトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる低ｐＩキシラナーゼ（ｐＩ＝５.２）および／または高ｐＩキシラナーゼ（ｐＩ＝９.０）であることが特に好ましい。キシラナーゼが高ｐＩキシラナーゼであることが特に好ましい。そのようなキシラナーゼ組成物は約１：０.００５の１単位量当たりのキシラナーゼ活性対同じ単位量当たりのβ−グルカナーゼ活性の比を有する。キシラナーゼは自然界で見られないアミノ酸配列、例えば天然産出キシラナーゼ中の１つもしくはそれ以上のアミノ酸基を挿入、欠失または置換することにより改変された天然産出キシラナーゼのものに相当する配列、を有する変異体キシラナーゼであってもよい。例えばここに記載したもののような酵素組成物が数種の方法により製造できることは酵素製造技術の専門家には容易に理解される。例えば、キシラナーゼを含みそして限られた量だけのβ−グルカナーゼ活性を有する酵素組成物は、そのようなキシラナーゼを発現する宿主を遺伝子的に操作して望まない遺伝子を欠失または改変してその遺伝子またはそこからの発現生成物を不活性化することにより、製造できる。さらに、酵素組成物は精製方法、例えばセルラーゼ複合体全体から特に所望する活性（キシラナーゼ）を精製することにより、により製造することもできる。米国特許第５,３２８,８４１号に記載されている他の精製方法はポリエチレングリコールなどを使用する精製を含んでいる。同様に、そのような酵素組成物を発酵最適化工程により製造することができ、それによると発酵工程中のｐＨ、温度、炭素原料、またはこれらの組み合わせの変化により酵素成分活性の比を変えることができる。本発明の最も好適な面に従うと、キシラナーゼは１つもしくはそれ以上の機能性エンドグルカナーゼＩ（ＥＧＩ）、機能性エンドグルカナーゼＩＩ（ＥＧＩＩ）、機能性セロビオヒドロラーゼＩ（ＣＢＨＩ）および機能性セロビオヒドロラーゼＩＩ（ＣＢＨＩＩ）を欠失している形質転換された宿主から製造された高ｐＩまたは低ｐＩキシラナーゼを過剰発現するＴ.ロンギブラキアタムからのものである。そのような形質転換された宿主の製造並びに高および低ｐＩキシラナーゼ類の製造は上記のＷＯ９２／０６２０９に記載されている。そのような宿主から生ずるキシラナーゼは天然産出原料から得られるキシラナーゼ類と比べてかなり低い水準のβ（１,４）−グルカナーゼを有する酵素である。そのような宿主を使用することにより、同じ単位量中の１単位のキシラナーゼ活性に比べて単位量当たり０.００５単位のβ−グルカナーゼしか含まない酵素組成物が得られる。本発明の好適な面では、酵素飼料添加剤は１：０−０.０１そしてより好適には１：０−０.００５のキシラナーゼ活性対β −グルカナーゼ活性の比を含む。１ｇの飼料添加剤当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの飼料添加剤当たりのプロテアーゼ活性の比は好適には１：０.００１−１,０００、より好適には１：０.０１−１００そして最も好適には１：０.１−１０である。本発明により提供される酵素混合物は必須成分としてプロテアーゼも含む。プロテアーゼはバシラス属、例えばバシラス・アミノリクエファシエンス(Bacillu s amyloliquefaciens)、バシラス・レンタス(Bacillus lentus)、バシラス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バシラス・サブチリス(Bacillussub tilis)、またはバシラス・アルカロフィルス(Bacillusalcalophilus)を含むがそれらに限定されない菌株、から誘導できるサブチリシンである。適当なプロテアーゼ類は下記の市販のプロテアーゼ類を含むがそれらに限定されるものではない：ノボ・ニュートラーゼ(NovoNEUTRASE）（商標）（ノボ・ノルディスクから市販されている）、プラフェクト(PURAFECT)（商標）（ゲネンコル・インターナショナルから市販されている）、サビナーゼ(SAVINASE)（商標）（ノボ・ノルディスクから市販されている）、マキサカル(MAXACAL)（商標）（ジスト−ブロカデスから市販されている）、デュラジム(DURAZYM)（商標）（ノボ・ノルディスクから市販されている）、およびマキサペム(MAXAPEM)（ジスト −ブロカデスから市販されている）。サブチリシンは自然界では見られないアミノ酸配列、例えば天然産出サブチリシン中の１つもしくはそれ以上のアミノ酸基を挿入、欠失または置換することにより改変された天然産出サブチリシンのものに相当する配列、を有する変異体サブチリシンであってもよい。適当な変異体サブチリシン類はＥＰ−Ａ−０１３０７５６（ＵＳ−Ｒｅ−３４６０６に相当する）（位置＋１５５、＋１０４、＋２２２、＋１６６、＋３３、＋１６９、＋１８９、＋２１７、＋１５６、＋１５２における変異を含む）、ＥＰ−Ａ −０２５１４４６、ＷＯ９１／０６６３７などに記載されている。最も好適なサブチリシンはバシラス・アミロリクエファシエンスから得られるサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置におけるロイシンによる置換を含む変異体サブチリシンである。そのような変異体サブチリシンを製造する方法はＵＳ−Ｒｅ−３４６０６およびＥＰ−Ａ−０２５１４４６の公報に詳細に記載されている。本発明の酵素混合物中に含まれるプロテアーゼはβ−グルカナーゼ活性を含むべきでなくまたは相対的に含むべきでない。これにより、上記のようにしてプロテアーゼをキシラナーゼと混合することにより製造された生じた酵素飼料添加剤が低いまたは０水準の所望するβ−グルカナーゼ活性を有することが確実になる。天然にプロテアーゼ類を製造する微生物は必ずしも高水準のβ−グルカナーゼ類を製造しないため、これは飼料添加剤のキシラナーゼ成分に関するものより問題は少ない。本発明の酵素飼料添加剤として提供されるキシラナーゼとプロテアーゼとの組み合わせが互いの効果を増加させるそれらの能力に関して補充および相乗効果を有しており、穀類をベースとした動物飼料のＦＣＲを減じるという本発明により得られる利点を与える。上記の如く、本発明により提供される酵素混合物は穀類をベースとした飼料の製造における飼料添加剤としての使用に好適である。本発明の別の面に従うと、この穀類をベースとした飼料は少なくとも２５重量％、より好適には少なくとも３５重量％、の小麦もしくはトウモロコシまたはこれらの穀類の両者の組み合わせを含んでいる。飼料はさらにキシラナーゼを飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のキシラナーゼ活性を含むような量で、プロテアーゼを飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のプロテアーゼ活性を含むような量で、そして場合によりβ−グルカナーゼを含んでいる。１ｋｇの飼料当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｋｇの飼料当たりのβ−グルカナーゼ活性の単位の比は１：０−０.２５の範囲内である。好適には、飼料に加えられる飼料添加剤の量は生ずる飼料が１ｋｇ当たりそれぞれ１,０００−１０,０００単位のキシラナーゼ活性およびプロテアーゼ活性の両者を含むようなものである。本発明の別の面では、少なくとも２５重量％の小麦および／またはトウモロコシ並びに１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のバシラス・アミロリクエファシエンスから得られるサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置におけるロイシンによる置換を含む変異体サブチリシンを含む穀類をベースとした飼料が提供される。本発明に従う穀類をベースとした飼料は動物、例えば七面鳥、ガチョウ、カモ、豚、羊および牛、に適する。しかし飼料は特に家禽類および豚、そして特にブロイラー鶏、に適する。本発明はさらに、１ｇの組成物当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの組成物当たりのβ−グルカナーゼ活性の単位の比が１：０−０.２５であることを特徴とするトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる低ｐＩキシラナーゼおよび／または高ｐＩキシラナーゼ並びに場合によりβ−グルカナーゼを含む組成物の飼料添加剤としての使用も提供する。飼料添加剤としてのこの組成物の上記の使用は改良されたＦＣＲを有する穀類をベースとした飼料を製造する。本発明の別の面に従うと、そのような飼料は（ｉ）少なくとも２５重量％の小麦および／またはトウモロコシ、並びに（ii）飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のキシラナーゼを含むような量のトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる高ｐＩキシラナーゼおよび／または低ｐＩキシラナーゼを含む。上記の使用並びに高および／または低ｐＩキシラナーゼを加えた穀類をベースとした飼料により、動物がその飼料をより効率的に消化可能になる。それ故、そのようなキシラナーゼ含有飼料添加剤の飼料への添加は動物が飼料から栄養的に得られる飼料蛋白質およびエネルギーの割合を増加させる。これはまた飼料のＦＣＲを改良してそれを使用時にさらに経済的なものにする。そのようなキシラナーゼを含む飼料添加剤はもちろん上記の飼料添加剤と同じ方法で製造することができる。本発明を下記の実施例によりさらに説明する。実施例１コッブ雄ブロイラー鶏に表１に示された小麦をベースとした初期飼料を生後２１日まで与えた。鶏の上記の初期餌には種々の量のトリコデルマ・ビリデから得られたキシラナーゼおよび／またはトリゴデルマ・ロンギブラキアタムから得られたβ−グルカナーゼが補充されていた。Ｔ.ビリデは１,０００単位のキシラナーゼ活性に対して５５単位のβ−グルカナーゼ活性を生成するような１単位量当たりの相対的に高いキシラナーゼ活性のために選択された変異した菌株であった。鶏を各グループ当たり３０羽の鳥が含まれるような２４の別々のグループに分けた。２４のグループの餌には０、５００、１ ,０００、２,０００、４,０００および８,０００単位／ｋｇのキシラナーゼ、並びに０、２５０、５００および１,０００単位／ｋｇのβ−グルカナーゼの組み合わせの１種が補充されていた。これらの試験の各々に関する飼料転換比が得られ、そしてこの値は下記の表２に示されている。上記の表２に示されたデータから、β−グルカナーゼ活性の存在は特に約１, ０００−３,０００単位／ｋｇの最適キシラナーゼ水準においてはＦＣＲ値を不利に増加させることが明らかである。上記の表２に示された結果から、ＦＣＲ値の改良を得るためには、飼料中に存在するキシラナーゼ活性の単位はβ−グルカナーゼ活性の単位より少なくとも４倍は多くなくてはならないと結論された。好適にはキシラナーゼ活性の単位はβ−グルカナーゼ活性の単位より少なくとも１００倍、そしてより好適には少なくとも１,０００倍であるべきである。実施例２ロス１ブロイラー鶏（雌雄混合）の数個のグループに下記の表３に示された初期飼料および仕上げ飼料を生後０−２１日および２２−４２日に与えた。これらのグループの各々は９０羽の鳥を含んでいた。ブロイラー鶏の対照グループには酵素が補充されたそれらの餌は与えられなかった。第２グループＺには３,０００単位／ｋｇのＷＯ９２／０６２０９に記載されているような機能性ＥＧＩ、ＥＧＩＩ、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを欠失しているＴ.ロンギブラキアタムの形質転換菌株から製造された高ｐＩキシラナーゼが補充されたそれらの餌が与えられた。グループＡ、Ｃ、Ｅには同じキシラナーゼ、並びにその他にそれぞれ２,０００、４,０００および６,０００単位／ｋｇのノボ・ノルディスクから得られるノボ・ニュートラーゼ(Novo Neutrase)（商標）が補充されたそれらの餌が与えられた。グループＢ、ＤおよびＦには同じ高ｐＩキシラナーゼ、並びにその他にそれぞれ２,０００、４,０００および６,０００単位／ｋｇのＵＳ−Ｒｅ.−３４６０６に記載されているようなバシラス・アミロリクエファシエンスサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置においてロイシンにより置換された変異体サブチリシンが補充されたそれらの餌が与えられた。これらの試験の結果は下記の表４に示されている。上記のデータから、キシラナーゼおよびプロテアーゼであるノボ・ニュートラーゼを使用する時には平均ＦＣＲが１.８４であることを計算できる。他方では、本発明のキシラナーゼおよび変異体サブチリシンを使用する時には平均ＦＣＲは１.８２である。グループＺおよびＡ−Ｆの各々は対照グループから得られるものと等しいかまたはそれより優れたＦＣＲ値を生ずる。実施例３ロス１雄ブロイラー鶏の２グループに各々実施例１の表１に示された小麦をベースとした初期飼料を０−７日に与えた。初期飼料には抗生物質、抗球菌剤または酵素は補充されていなかった。７−２１日には、各々のグループに下記の表５に示されている基本的な小麦をベースとした飼料をひきわりの形状で与えた。第１対照グループの鶏には酵素が補充されたそれらの餌は与えられなかった。第２試験グループに与えられた上記の小麦をベースとした飼料にはＷＯ９２／０６２０９に記載されているような機能性ＥＧＩ、ＥＧＩＩ、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを欠失しているＴ.ロンギブラキアタム菌株から得られた強化低ｐＩキシラナーゼが補充されていた。小麦餌中のキシラナーゼ含有水準は１８４単位／ｋｇであった。対照グループは２.００の平均ＦＣＲを有していた。対照的に、低ｐＩキシラナーゼが補充された飼料が与えられた試験グループは１.８９のＦＣＲを有していた。キシラナーゼの添加による飼料のＦＣＲにおけるそのような減少は飼料の栄養性能が改良されることを示している。実施例４各々がＰＩＣ商業用遺伝子型の１２匹の去勢された雄豚を含む６グループにそれぞれ６種の餌をペレット形で随時与えてトリコデルマ・ロンギブラキアタムにより得られた強化ｐＩキシラナーゼの効果を評価した。試験の開始時に、豚は生後約１０週であった。そこで、異なるトウモロコシ／小麦比を有する３種の基本的な飼料を下記の表６に従い調合したが、ここでは種々の成分の量はｋｇ／ｔの飼料により表示されている。各々の飼料を対照（酵素補充なし）として、または１ｋｇの飼料当たり６,２７０単位のキシラナーゼを補充して試験した。試験したキシラナーゼはＷＯ９２／０６２０９に記載されているように機能性ＥＧＩ、ＥＧＩＩ、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを欠失しているトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られた強化高ｐＩキシラナーゼである。これらの種々の試験の結果を下記の表７に示す。表７に示された結果からキシラナーゼの添加がトウモロコシおよび小麦の異なる割合から製造された６０重量％の穀類を含有する餌が与えられた最終的な豚では１日の体重増加を平均９％とかなり改良したことがわかる。全体としては、飼料摂取およびＦＣＲの両者もかなり改良された。実施例５ニコラス雄七面鳥の４つのグループに表８に記載されているトウモロコシをベースとした初期飼料をひきわりの形状で生後２１日まで与えた。第１対照グループには補充されていない表８の飼料が与えられた。３つの他の試験グループの飼料にはそれぞれ２,０００単位／ｋｇ、４,０００単位／ｋｇおよび６,０００単位／ｋｇのＵＳ−Ｒｅ.−３４６０６に記載されているようなバシラス・アミロリクエファシエンスサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置においてロイシンにより置換された変異体サブチリシンが補充された。これらの試験の結果は下記の表９に示されている。上記のデータから、飼料に加えられる時のプロテアーゼの含有量の増加が飼料のＦＣＲの減少という有利な結果を有することがわかる。本発明に従い製造される飼料を動物、例えばガチョウ、カモ、羊および牛、並びに鶏、七面鳥および豚に与える時にＦＣＲ値の改良という以上で示された効果が得られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ベッドフォード，マイケル・リチャードイギリス国ウイルシャイア・エス・エヌ８１エー・エー、マールボロウ、ハイ・ストリート、アイルスベリー・コート、マーケット・ハウス（番地なし）、フィンフィーズ・インターナショナル・リミテッド (72)発明者モーガン，アンドリュー・ジョンイギリス国ウイルシャイア・エス・エヌ８１エー・エー、マールボロウ、ハイ・ストリート、アイルスベリー・コート、マーケット・ハウス（番地なし）、フィンフィーズ・インターナショナル・リミテッド (72)発明者クラークソン，キャスリーンアメリカ合衆国カリファルニア 94080、サウス・サン・フランシスコ、キンボール・ウエイ 180、ジェネンコー・インターナショナル・インク (72)発明者シュルツ，ヘイゲン・クラウスイギリス国ウイルシャイア・エス・エヌ８１エー・エー、マールボロウ、ハイ・ストリート、アイルスベリー・コート、マーケット・ハウス（番地なし）、フィンフィーズ・インターナショナル・リミテッド

Claims

【特許請求の範囲】１.（ｉ）キシラナーゼ、（ii）プロテアーゼ、および場合により（iii）β−グルカナーゼを含み、１ｇの飼料添加剤当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの飼料添加剤当たりのβ−グルカナーゼ活性の単位の比が１：０−０.２５である酵素飼料添加剤。２.キシラナーゼが細菌から得られる、請求の範囲第１項記載の酵素飼料添加剤。３.細菌がバシラス、ストレプトマイセス、クロストリジウムまたはルミノコッカスである、請求の範囲第２項記載の酵素飼料添加剤。４.キシラナーゼが真菌から得られる、請求の範囲第１項記載の酵素飼料添加剤。５.真菌がトリコデルマ、アスペルギルス、フミコラまたはネオカリマスチックスである、請求の範囲第４項記載の酵素飼料添加剤。６.キシラナーゼがトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる低ｐＩキシラナーゼおよび／または高ｐＩキシラナーゼである、請求の範囲第５項記載の酵素飼料添加剤。７.高ｐＩキシラナーゼを含む、請求の範囲第６項記載の酵素飼料添加剤。８.キシラナーゼが自然界で見られないアミノ酸配列、例えば天然産出キシラナーゼ中の１つもしくはそれ以上のアミノ酸基を挿入、欠失または置換することにより改変された天然産出キシラナーゼのものに相当する配列、を有する変異体キシラナーゼである、請求の範囲第１項記載の酵素飼料添加剤。９.プロテアーゼがサブチリシンである、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤。１０.サブチリシンがバシラス・アミロリクエファシエンス、バシラス・レンタス、バシラス・リケニフォルミス、バシラス・サブチリス、またはバシラス・アルカロフィラスから誘導される、請求の範囲第１０項記載の酵素飼料添加剤。１１.サブチリシンが自然界で見られないアミノ酸配列、例えば天然産出サブチリシン中の１つもしくはそれ以上のアミノ酸基を挿入、欠失または置換することにより改変された天然産出サブチリシンのものに相当する配列、を有する変異体サブチリシンである、請求の範囲第９項記載の酵素飼料添加剤。１３.変異体サブチリシンがバシラス・アミロリクエファシエンスサブチリシンのａｓｎ＋１５５、ｔｙｒ＋１０４、ｍｅｔ＋２２２、ｇｌｙ＋１６６、ｓｅｒ＋３３、ｇｌｙ＋１６９、ｐｈｅ＋１８９、ｔｙｒ＋２１７、ｇｌｕ＋１５６、またはａｌａ＋１５２に相当するアミノ酸基位置における他の１９種の天然産出アミノ酸の１種による置換を含む、請求の範囲第１２項記載の酵素飼料添加剤。１４.変異体サブチリシンがバシラス・アミロリクエファシエンスサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置におけるロイシンでの置換を含む、請求の範囲第１２項記載の酵素飼料添加剤。１５.キシラナーゼ活性対プロテアーゼ活性の単位の比が１：０−０．０１である、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤。１６.キシラナーゼ活性対β−グルカナーゼ活性の単位の比が１：０−０.００５である、請求の範囲第１５項記載の酵素飼料添加剤。１７.１ｇの飼料添加剤当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの飼料添加剤当たりのプロテアーゼ活性の単位の比が１：０.００１−１.０００である、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤。１８.さらにα−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ、マンナンナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼおよびリバーゼの少なくとも１種も含む、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤。１９.さらに担体も含む、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤。２０.担体が粉砕された小麦、トウモロコシ、大豆またはこれらの物質のいずれかの副生物である、請求の範囲第１９項記載の酵素飼料添加剤。２１.飼料転換比を改良しおよび／または穀類をベースとした飼料の消化性を増すための、前記請求の範囲のいずれかに記載の酵素飼料添加剤の使用。２２.（ｉ）少なくとも２５重量％の小麦および／またはトウモロコシ、（ii）飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のキシラナーゼ活性を含むような量のキシラナーゼ、（iii）飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のプロテアーゼ活性を含むような量のプロテアーゼ、および場合により（iv）β− グルカナーゼを含み、飼料の１ｋｇ当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｋｇの飼料当たりのβ−グルカナーゼ活性の単位の比が１：０−０.２５である、穀類をベースとした飼料。２３.１ｋｇ当たり１,０００−１０,０００単位のキシラナーゼ活性および１ｋｇ当たり１,０００−１０,０００単位のプロテアーゼ活性を含む、請求の範囲第２２項記載の穀類をベースとした飼料。２４.少なくとも３５重量％の小麦および／またはトウモロコシを含む、請求の範囲第２２項または第２３項記載の穀類をベースとした飼料。２５.少なくとも２５重量％の小麦および／またはトウモロコシ並びに１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のバシラス・アミロリクエファシエンスから得られるサブチリシンのｔｙｒ＋２１７に相当するアミノ酸基位置におけるロイシンによる置換を含む変異体サブチリシンを含む穀類をベースとした飼料。２６.（ｉ）少なくとも２５重量％の小麦および／またはトウモロコシ、並びに（ii）飼料が１ｋｇ当たり１００−１００,０００単位のキシラナーゼ活性を含むような量のトリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる高ｐＩキシラナーゼおよび／または低ｐＩキシラナーゼを含む穀類をベースとした飼料。２７.家禽類飼料としてまたは豚飼料としての請求の範囲第２２項−第２６項のいずれかに記載の穀類をベースとした飼料の使用。２８.１ｇの組成物当たりのキシラナーゼ活性の単位対１ｇの組成物当たりのβ −グルカナーゼ活性の単位の比が１：０−０.２５であることを特徴とする、トリコデルマ・ロンギブラキアタムから得られる低ｐＩキシラナーゼおよび／または高ｐＩキシラナーゼ並びに場合によりβ−グルカナーゼを含む組成物の使用。