JPH09164323A - 発酵液の膜除菌方法 - Google Patents
発酵液の膜除菌方法Info
- Publication number
- JPH09164323A JPH09164323A JP26701696A JP26701696A JPH09164323A JP H09164323 A JPH09164323 A JP H09164323A JP 26701696 A JP26701696 A JP 26701696A JP 26701696 A JP26701696 A JP 26701696A JP H09164323 A JPH09164323 A JP H09164323A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- membrane
- fermented liquid
- fermentation broth
- added
- fungus body
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
(57)【要約】
【課題】 エシェリヒア属に属する微生物を培養して得
られた発酵液から、菌体を膜を用いて分離する方法にお
いて、より緩和な前処理条件で膜透過速度を向上させる
方法を開発する。 【解決手段】 本発明は、上記発酵液から菌体を膜を用
いて分離する方法において、発酵液にポリエチレンイミ
ンを添加した後、菌体を膜分離することを特徴とする膜
除菌方法に関するものである。
られた発酵液から、菌体を膜を用いて分離する方法にお
いて、より緩和な前処理条件で膜透過速度を向上させる
方法を開発する。 【解決手段】 本発明は、上記発酵液から菌体を膜を用
いて分離する方法において、発酵液にポリエチレンイミ
ンを添加した後、菌体を膜分離することを特徴とする膜
除菌方法に関するものである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エシェリヒア属に
属する微生物を培養して得られた発酵液の処理において
菌体、菌体破砕物等の懸濁物質、または溶存高分子不純
物を膜で除去するに際し、緩和な条件での前処理で膜透
過流束を向上させる方法に関する。すなわち、膜閉塞物
質を前処理し、膜除菌時の透過速度を著しく向上させ、
処理時間の短縮、設備を極小化する方法に関する。
属する微生物を培養して得られた発酵液の処理において
菌体、菌体破砕物等の懸濁物質、または溶存高分子不純
物を膜で除去するに際し、緩和な条件での前処理で膜透
過流束を向上させる方法に関する。すなわち、膜閉塞物
質を前処理し、膜除菌時の透過速度を著しく向上させ、
処理時間の短縮、設備を極小化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、遺伝子組変え菌体による発酵生産
技術が進歩しており、遺伝子操作の容易な、エシェリヒ
ア属に属するエシェリヒア・コリ（以下E. coliと略
す。）がこの目的のためにしばしば利用されている。発
酵終了時、目的生産物が菌体外にある場合は殺菌後、膜
分離または遠心分離による除菌を行ない、得られた菌体
除去液を次の処理工程に供するのが通常である。また、
目的生産物が菌体内に存在する場合、凍結、ホモジナイ
ザー、ミル等を用いて菌体を破砕してから膜分離または
遠心分離による菌体、菌体破砕物の除去を実施する。
技術が進歩しており、遺伝子操作の容易な、エシェリヒ
ア属に属するエシェリヒア・コリ（以下E. coliと略
す。）がこの目的のためにしばしば利用されている。発
酵終了時、目的生産物が菌体外にある場合は殺菌後、膜
分離または遠心分離による除菌を行ない、得られた菌体
除去液を次の処理工程に供するのが通常である。また、
目的生産物が菌体内に存在する場合、凍結、ホモジナイ
ザー、ミル等を用いて菌体を破砕してから膜分離または
遠心分離による菌体、菌体破砕物の除去を実施する。
【０００３】一般に膜分離の方が完全に菌体を除去で
き、遠心分離に比べて清澄な除菌液を取得できるが、そ
の透過速度が低いことから装置が大きくなるという欠点
を持つ。除菌用の膜としては精密濾過膜（以下ＭＦと略
す。）、限外濾過膜（以下ＵＦと略す。）等が一般的で
あるが、E. coliを培養して得られた発酵液（以下、E.c
oli発酵液と略す。）の場合、菌体の破砕の有無によら
ずその透過速度が低いことが問題となる。
き、遠心分離に比べて清澄な除菌液を取得できるが、そ
の透過速度が低いことから装置が大きくなるという欠点
を持つ。除菌用の膜としては精密濾過膜（以下ＭＦと略
す。）、限外濾過膜（以下ＵＦと略す。）等が一般的で
あるが、E. coliを培養して得られた発酵液（以下、E.c
oli発酵液と略す。）の場合、菌体の破砕の有無によら
ずその透過速度が低いことが問題となる。
【０００４】従来、発酵液の膜除菌における透過流束の
向上法としては、前処理法として発酵液の加熱処理が有
効であることが知られている。例えば、日本特許公開公
報特開昭57-91196には、イノシンまたはグアノシン発酵
液をpH5.5〜9.0で90〜110℃に加熱処理することによ
り、限外濾過膜で菌体および高分子物質を分離する際の
膜透過速度が向上することが記載されている。また、日
本特許公開公報特開昭60-78588には、アミノ酸発酵液を
50〜100℃で加熱処理することにより、限外濾過膜透過
速度が向上することが記載されている。
向上法としては、前処理法として発酵液の加熱処理が有
効であることが知られている。例えば、日本特許公開公
報特開昭57-91196には、イノシンまたはグアノシン発酵
液をpH5.5〜9.0で90〜110℃に加熱処理することによ
り、限外濾過膜で菌体および高分子物質を分離する際の
膜透過速度が向上することが記載されている。また、日
本特許公開公報特開昭60-78588には、アミノ酸発酵液を
50〜100℃で加熱処理することにより、限外濾過膜透過
速度が向上することが記載されている。
【０００５】しかしながら、前述したように、E. coli
発酵液から膜を用いて除菌する場合、極めて低い透過速
度のため過大な膜処理設備を要してしまう。また、pH調
整と加熱操作の組み合わせによる前処理で透過速度を向
上させることも可能ではあるが、E. coli発酵液に関し
ては、それほど効果的ではない。また、加熱処理はしば
しば発酵液の着色や反応による微量不純物の副生を生じ
やすく、また目的物が熱的に不安定な場合には使用する
ことができない。
発酵液から膜を用いて除菌する場合、極めて低い透過速
度のため過大な膜処理設備を要してしまう。また、pH調
整と加熱操作の組み合わせによる前処理で透過速度を向
上させることも可能ではあるが、E. coli発酵液に関し
ては、それほど効果的ではない。また、加熱処理はしば
しば発酵液の着色や反応による微量不純物の副生を生じ
やすく、また目的物が熱的に不安定な場合には使用する
ことができない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】従って、エシェリヒア
属に属する微生物を培養して得られた発酵液から菌体を
膜を用いて分離する方法において、より緩和な前処理条
件で膜透過速度を向上させる方法の開発が求められてい
る。
属に属する微生物を培養して得られた発酵液から菌体を
膜を用いて分離する方法において、より緩和な前処理条
件で膜透過速度を向上させる方法の開発が求められてい
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、エシェリヒア
属に属する微生物を培養して得られた発酵液を膜濾過
し、菌体、菌体破砕物等の懸濁物質または溶存高分子不
純物を分離する方法において、発酵液にポリエチレンイ
ミン（以下、ＰＥＩと略す。）を添加した後、膜濾過
し、菌体を分離することを特徴とする膜除菌方法に関す
るものである。
属に属する微生物を培養して得られた発酵液を膜濾過
し、菌体、菌体破砕物等の懸濁物質または溶存高分子不
純物を分離する方法において、発酵液にポリエチレンイ
ミン（以下、ＰＥＩと略す。）を添加した後、膜濾過
し、菌体を分離することを特徴とする膜除菌方法に関す
るものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明に用いられるエシェリヒア
属に属する微生物は、野生株または変異株のいずれでも
よいし、細胞融合もしくは遺伝子操作などの遺伝学的手
法により誘導される組み替え株等も用いることができ
る。エシェリヒア属に属する微生物としては、エシェリ
ヒア・コリが挙げられる。これらの微生物の目的生産物
は、本発明に用いられるＵＦ膜、ＭＦ膜を透過する物質
であれば良く、例えば、リジン、グルタミン酸、イソロ
イシン、バリン、ロイシン等のアミノ酸、イノシン、グ
アノシン等の核酸、乳酸、リンゴ酸等の有機酸、ビタミ
ン等を挙げることができる。
属に属する微生物は、野生株または変異株のいずれでも
よいし、細胞融合もしくは遺伝子操作などの遺伝学的手
法により誘導される組み替え株等も用いることができ
る。エシェリヒア属に属する微生物としては、エシェリ
ヒア・コリが挙げられる。これらの微生物の目的生産物
は、本発明に用いられるＵＦ膜、ＭＦ膜を透過する物質
であれば良く、例えば、リジン、グルタミン酸、イソロ
イシン、バリン、ロイシン等のアミノ酸、イノシン、グ
アノシン等の核酸、乳酸、リンゴ酸等の有機酸、ビタミ
ン等を挙げることができる。
【０００９】本発明に用いられる発酵液は、上記微生物
を適当な培地で培養増殖せしめることにより、得ること
ができる。そのような培地には格別の制限はなく、通常
の炭素源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機栄
養源を含む通常の培地でよい。培養は、特許国際出願公
開WO95/16042、欧州特許公開685555号、日本特許公開公
報特開平08-047397等に記載の方法で、上記微生物の生
育に適した条件下、実施すればよい。
を適当な培地で培養増殖せしめることにより、得ること
ができる。そのような培地には格別の制限はなく、通常
の炭素源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機栄
養源を含む通常の培地でよい。培養は、特許国際出願公
開WO95/16042、欧州特許公開685555号、日本特許公開公
報特開平08-047397等に記載の方法で、上記微生物の生
育に適した条件下、実施すればよい。
【００１０】炭素源としては、上記微生物が利用可能で
あればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、フ
ルクトース、シュークロース、マルトース等の糖類、フ
マール酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類
及びこれらの塩類等を使用することができる。
あればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、フ
ルクトース、シュークロース、マルトース等の糖類、フ
マール酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類
及びこれらの塩類等を使用することができる。
【００１１】窒素源としては上記微生物が利用可能であ
ればいずれも使用でき、具体的には、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機塩のアンモニウム塩、フ
マル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム等の有機酸
のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の
硝酸塩、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーンステ
ィープリカー等の有機窒素化合物、あるいはこれらの混
合物を使用することができる。
ればいずれも使用でき、具体的には、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機塩のアンモニウム塩、フ
マル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム等の有機酸
のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の
硝酸塩、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーンステ
ィープリカー等の有機窒素化合物、あるいはこれらの混
合物を使用することができる。
【００１２】他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類等、
通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して用いる
ことができる。
通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して用いる
ことができる。
【００１３】ＰＥＩは、一般に水溶液として入手するこ
とが可能であるが、E. coli発酵液に添加または混入さ
せる場合には、1〜50％水溶液として添加することがＰ
ＥＩ水溶液の粘度上昇を押さえ取り扱い上、また添加に
よる発酵液の希釈防止上有効である。添加方法としては
例えば発酵終了時点で発酵液を攪拌しながら、10％ＰＥ
Ｉ溶液を所定量添加混合する方法等が挙げられるが、均
一に混合できれば特に方法は問わない。ＰＥＩ添加量
は、E. coli発酵液に対し0.0005〜0.5重量％であり、好
ましくは0.001〜0.05重量％である。添加されるＰＥＩ
は水溶性であれば良く、その平均分子量は特に問わない
が、10,000〜100,000程度のものが入手も容易で扱い易
い。
とが可能であるが、E. coli発酵液に添加または混入さ
せる場合には、1〜50％水溶液として添加することがＰ
ＥＩ水溶液の粘度上昇を押さえ取り扱い上、また添加に
よる発酵液の希釈防止上有効である。添加方法としては
例えば発酵終了時点で発酵液を攪拌しながら、10％ＰＥ
Ｉ溶液を所定量添加混合する方法等が挙げられるが、均
一に混合できれば特に方法は問わない。ＰＥＩ添加量
は、E. coli発酵液に対し0.0005〜0.5重量％であり、好
ましくは0.001〜0.05重量％である。添加されるＰＥＩ
は水溶性であれば良く、その平均分子量は特に問わない
が、10,000〜100,000程度のものが入手も容易で扱い易
い。
【００１４】ＰＥＩ添加後、膜分離処理を行えば、膜透
過速度向上の効果を得ることができるが、更にＰＥＩ添
加後のE. coli発酵液のpHを3〜9、好ましくは4〜7の範
囲に調整することで、膜透過速度向上のより高い効果を
得ることができる。ＰＥＩ添加後の発酵液のpHが中性付
近の場合にはあらためてpH調整を実施する必要はない
が、上記範囲でpH調整を実施することでより高い効果を
得ることができる場合もあり必要に応じて実施すること
ができる。pH調整には、通常使用される塩酸、硫酸、燐
酸等の酸、苛性ソーダ、苛性カリ、アンモニア等のアル
カリを用いることができる。
過速度向上の効果を得ることができるが、更にＰＥＩ添
加後のE. coli発酵液のpHを3〜9、好ましくは4〜7の範
囲に調整することで、膜透過速度向上のより高い効果を
得ることができる。ＰＥＩ添加後の発酵液のpHが中性付
近の場合にはあらためてpH調整を実施する必要はない
が、上記範囲でpH調整を実施することでより高い効果を
得ることができる場合もあり必要に応じて実施すること
ができる。pH調整には、通常使用される塩酸、硫酸、燐
酸等の酸、苛性ソーダ、苛性カリ、アンモニア等のアル
カリを用いることができる。
【００１５】また、ＰＥＩの添加前及び／または添加後
に発酵液を加熱処理することも可能である。加熱条件と
しては、50〜130℃の温度、10〜20分の時間が適当であ
る。加熱処理することにより、ＰＥＩの混合効率の向
上、透過速度の向上が得られる。
に発酵液を加熱処理することも可能である。加熱条件と
しては、50〜130℃の温度、10〜20分の時間が適当であ
る。加熱処理することにより、ＰＥＩの混合効率の向
上、透過速度の向上が得られる。
【００１６】使用する膜はＭＦでもＵＦでも構わない。
膜装置としては平膜、ホローファイバー、管状膜、スパ
イラルいずれの形式でも用いることができる。また、膜
材質もポリスルフォン、ポリオレフィン、ポリビニリデ
ンジフルオライド、テフロン等の有機膜でも良いし、セ
ラミック等の無機材質の膜でも良い。ＵＦの場合は、分
画分子量1,000〜500,000程度の膜が実用的には便利であ
るし、ＭＦの場合には細孔径0.05〜1μm程度のものが適
当である。
膜装置としては平膜、ホローファイバー、管状膜、スパ
イラルいずれの形式でも用いることができる。また、膜
材質もポリスルフォン、ポリオレフィン、ポリビニリデ
ンジフルオライド、テフロン等の有機膜でも良いし、セ
ラミック等の無機材質の膜でも良い。ＵＦの場合は、分
画分子量1,000〜500,000程度の膜が実用的には便利であ
るし、ＭＦの場合には細孔径0.05〜1μm程度のものが適
当である。
【００１７】
【実施例】以下に、本発明の方法を実施例に基づいて詳
細に説明する。実施例１および実施例２の膜透過実験は
米国Millipore社製Minitan moduleに同社製PTTK膜２枚
（ＵＦ膜、分画分子量30,000）を設置して実施した。ま
た、ＰＥＩはSIGMA社より購入した平均分子量50,000の5
0％ＰＥＩ溶液を純水で希釈して得られた10％溶液を使
用した。
細に説明する。実施例１および実施例２の膜透過実験は
米国Millipore社製Minitan moduleに同社製PTTK膜２枚
（ＵＦ膜、分画分子量30,000）を設置して実施した。ま
た、ＰＥＩはSIGMA社より購入した平均分子量50,000の5
0％ＰＥＩ溶液を純水で希釈して得られた10％溶液を使
用した。
【００１８】実施例１ 国際特許出願公開WO95/16042の実施例に記載の方法に従
い、エシェリヒア・コリB-399株にプラスミドRSFD80を
導入したB-399/RSFD80株を用い、Ｌ−リジンを生産し
た。培養は以下の生産培地を用い、培養時間48時間、温
度37゜Cの条件下、撹拌114〜116ｒｐｍで行った。
い、エシェリヒア・コリB-399株にプラスミドRSFD80を
導入したB-399/RSFD80株を用い、Ｌ−リジンを生産し
た。培養は以下の生産培地を用い、培養時間48時間、温
度37゜Cの条件下、撹拌114〜116ｒｐｍで行った。
【００１９】（Ｌ−リジン生産培地） Ａ：(NH4)2SO4 16g/L KH2PO4 1g/L MgSO4・7H2O 1g/L FeSO4・7H2O 0.01g/L MnSO4・5H20 0.01g/L Yeast Ext.(Difco) 2g/L Ｌ−メチオニン 0.5g/L KOHでpH7.0に調整し、115゜Cで10分オートクレーブ(16/2
0容) Ｂ：20% Glucose（115゜Cで10分オートクレーブ）(4/20
容) Ｃ：局方CaCO3（180゜Cで２日間乾熱滅菌） (30g/L) （Ａ：Ｂを４：１で混合し、1Ｌに対してＣを30g加えて
溶解し、抗生物質（ストレプトマイシン 100μg/ml、カ
ナマイシン5μg/ml）を加え、生産培地とした。） 培
養終了時のＬ−リジンの生産量は、リジン塩酸塩として
9.2g/Lであった。
0容) Ｂ：20% Glucose（115゜Cで10分オートクレーブ）(4/20
容) Ｃ：局方CaCO3（180゜Cで２日間乾熱滅菌） (30g/L) （Ａ：Ｂを４：１で混合し、1Ｌに対してＣを30g加えて
溶解し、抗生物質（ストレプトマイシン 100μg/ml、カ
ナマイシン5μg/ml）を加え、生産培地とした。） 培
養終了時のＬ−リジンの生産量は、リジン塩酸塩として
9.2g/Lであった。
【００２０】このようにして得られたリジン発酵液各30
0mlに前記10％ＰＥＩ溶液をそれぞれ0.32g、0.91g、1.6
g添加後、98％硫酸でpH4.0に調整し、60℃で20分撹拌し
ながら加熱した。各ＰＥＩ溶液添加後の発酵液中のＰＥ
Ｉ濃度は、それぞれ約100、300、500ppmである。
0mlに前記10％ＰＥＩ溶液をそれぞれ0.32g、0.91g、1.6
g添加後、98％硫酸でpH4.0に調整し、60℃で20分撹拌し
ながら加熱した。各ＰＥＩ溶液添加後の発酵液中のＰＥ
Ｉ濃度は、それぞれ約100、300、500ppmである。
【００２１】上記処理後の各発酵液を膜透過実験に使用
した。膜透過実験は、処理後の各発酵液を50℃に保持し
たまま、1000ml/分の速度で上記のＵＦ除菌設備に給液
し、平均圧力0.9kg-f/cm2で実施した。透過時間30分経
過までの透過速度の経時変化を測定したところ、図１に
示す結果が得られた。
した。膜透過実験は、処理後の各発酵液を50℃に保持し
たまま、1000ml/分の速度で上記のＵＦ除菌設備に給液
し、平均圧力0.9kg-f/cm2で実施した。透過時間30分経
過までの透過速度の経時変化を測定したところ、図１に
示す結果が得られた。
【００２２】図１より明らかなようにE. coli発酵液に
おいては膜除菌初期（開始後5分以内）の段階で急激な
膜透過速度の低下が起こり以後次第に安定化する。30分
経過時点での膜透過速度を比較すると、ＰＥＩ添加によ
り無添加の場合に比べ最大４倍程度にまで向上すること
が分かる。また透過速度の向上は100ppm程度のＰＥＩ添
加でも顕著であり、２倍程度に向上した。
おいては膜除菌初期（開始後5分以内）の段階で急激な
膜透過速度の低下が起こり以後次第に安定化する。30分
経過時点での膜透過速度を比較すると、ＰＥＩ添加によ
り無添加の場合に比べ最大４倍程度にまで向上すること
が分かる。また透過速度の向上は100ppm程度のＰＥＩ添
加でも顕著であり、２倍程度に向上した。
【００２３】実施例２ 欧州特許公開685555号もしくは日本特許公開公報特開平
08-047397の実施例に記載のエシェリヒア・コリAJ12919
株をＬ−イソロイシン生産に用いた。バクトトリプトン
1%、酵母エキス0.5%、NaCl0.5%、寒天1.5%、ストレプト
マイシン100μg/ml、アンピシリン100μg/mlからなる培
地にAJ12919株を塗布し、37゜Cで18ないし24時間培養
後、その一部を白金耳で300mlの発酵培地（グルコース4
%、硫酸アンモニウム1.6%、リン酸二水素カリウム0.1
%、硫酸マグネシウム７水塩0.1%、硫酸第一鉄７水塩0.0
01%、硫酸マンガン５水塩0.001%、酵母エキス0.2%、炭
酸カルシウム3%、pH7.0）に接種し、撹拌数400rpm、通
気量300ml/minにて37゜Cで16時間培養して種培養液を得
た。得られた種培養液をグルコース6%、硫酸アンモニウ
ム1.6%、リン酸二水素カリウム0.1%、硫酸マグネシウム
７水塩0.1%、硫酸第一鉄７水塩0.001%、硫酸マンガン５
水塩0.001%、酵母エキス0.2%、pH7.0の組成の発酵培地
に接種して、37゜C、通気量300ml/minにて、培地中の溶
存酸素濃度が5％以上となるように撹拌数を制御しなが
ら、グルコースを適宜供給し、アンモニアガスにてpH7.
0付近に維持しつつ23時間培養を行った。培養終了時の
Ｌ−イソロイシン蓄積量は37g/Lであった。
08-047397の実施例に記載のエシェリヒア・コリAJ12919
株をＬ−イソロイシン生産に用いた。バクトトリプトン
1%、酵母エキス0.5%、NaCl0.5%、寒天1.5%、ストレプト
マイシン100μg/ml、アンピシリン100μg/mlからなる培
地にAJ12919株を塗布し、37゜Cで18ないし24時間培養
後、その一部を白金耳で300mlの発酵培地（グルコース4
%、硫酸アンモニウム1.6%、リン酸二水素カリウム0.1
%、硫酸マグネシウム７水塩0.1%、硫酸第一鉄７水塩0.0
01%、硫酸マンガン５水塩0.001%、酵母エキス0.2%、炭
酸カルシウム3%、pH7.0）に接種し、撹拌数400rpm、通
気量300ml/minにて37゜Cで16時間培養して種培養液を得
た。得られた種培養液をグルコース6%、硫酸アンモニウ
ム1.6%、リン酸二水素カリウム0.1%、硫酸マグネシウム
７水塩0.1%、硫酸第一鉄７水塩0.001%、硫酸マンガン５
水塩0.001%、酵母エキス0.2%、pH7.0の組成の発酵培地
に接種して、37゜C、通気量300ml/minにて、培地中の溶
存酸素濃度が5％以上となるように撹拌数を制御しなが
ら、グルコースを適宜供給し、アンモニアガスにてpH7.
0付近に維持しつつ23時間培養を行った。培養終了時の
Ｌ−イソロイシン蓄積量は37g/Lであった。
【００２４】このようにして得られたＬ−イソロイシン
発酵液を発酵終了時点で120℃で10分加熱後、塩酸でpH
4.0に調整した。この処理済み発酵液300mlに10%ＰＥＩ
溶液0.3gを添加後、再度60℃で20分間加熱した。対照と
して、ＰＥＩ無添加のまま60℃で20分間加熱した発酵液
を用いた。膜透過実験は実施例１と同じ装置および条件
で実施し、表１の結果が得られた。
発酵液を発酵終了時点で120℃で10分加熱後、塩酸でpH
4.0に調整した。この処理済み発酵液300mlに10%ＰＥＩ
溶液0.3gを添加後、再度60℃で20分間加熱した。対照と
して、ＰＥＩ無添加のまま60℃で20分間加熱した発酵液
を用いた。膜透過実験は実施例１と同じ装置および条件
で実施し、表１の結果が得られた。
【００２５】
【表１】
【００２６】表１から明らかなようにイソロシン発酵液
においても100ppmのＰＥＩ添加量で膜透過速度の向上が
確認された。
においても100ppmのＰＥＩ添加量で膜透過速度の向上が
確認された。
【００２７】実施例３ エシェリヒア属に属し、β−２−チエニルアラニン耐性
を有し、Ｌ−ロイシンを生産する能力を持つ、日本特許
公報特公昭62-34397に記載のエシェリヒア・コリ株（FE
RM-P 5274)に日本特許公開公報特開平8-70879の実施例
１の方法に従って、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンによる変異処理を施した後、４−アザ
ロイシンに耐性を有する菌株を釣菌分離し、Ｌ−ロイシ
ン生産能力の向上した菌株を得た。
を有し、Ｌ−ロイシンを生産する能力を持つ、日本特許
公報特公昭62-34397に記載のエシェリヒア・コリ株（FE
RM-P 5274)に日本特許公開公報特開平8-70879の実施例
１の方法に従って、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンによる変異処理を施した後、４−アザ
ロイシンに耐性を有する菌株を釣菌分離し、Ｌ−ロイシ
ン生産能力の向上した菌株を得た。
【００２８】このようにして得られた菌株をグルコース
5g/dL、(NH4)2SO4 2.5g/dL、KH2PO40.2 g/dL、MgSO4・7H
2O 0.1g/dL、酵母エキス 0.05g/dL、サイアミン塩酸塩
1mg/L、FeSO4・7H2O 1mg/dL、MnSO4・4H2O 1mg/dL、炭酸
カルシウム 2.5g/dLの組成を持つ、pH 7.0の水溶液培地
を用い、31℃で72時間攪拌培養した。培養終了時のＬ−
ロイシンの生産量は3.1g/Lであった。
5g/dL、(NH4)2SO4 2.5g/dL、KH2PO40.2 g/dL、MgSO4・7H
2O 0.1g/dL、酵母エキス 0.05g/dL、サイアミン塩酸塩
1mg/L、FeSO4・7H2O 1mg/dL、MnSO4・4H2O 1mg/dL、炭酸
カルシウム 2.5g/dLの組成を持つ、pH 7.0の水溶液培地
を用い、31℃で72時間攪拌培養した。培養終了時のＬ−
ロイシンの生産量は3.1g/Lであった。
【００２９】発酵終了後、発酵液を300mlずつに分け、
上述のSIGMA社製１０％PEI水溶液を添加しそれぞれPEI
濃度が0, 200, 1000ppmになるように調整した。PEI濃度
調整後、発酵液のpHを硫酸で4.0に調整し撹拌しながら6
0℃で30分間加熱処理した。
上述のSIGMA社製１０％PEI水溶液を添加しそれぞれPEI
濃度が0, 200, 1000ppmになるように調整した。PEI濃度
調整後、発酵液のpHを硫酸で4.0に調整し撹拌しながら6
0℃で30分間加熱処理した。
【００３０】膜透過実験には旭化成社製ペンシル型モジ
ュール（PSP-003、細孔径0.3μm、膜面積150cm2）を使
用した。膜透過実験は循環流量約600ml/分、入口圧力1k
g/cm2で実施し、60分の透過実験を行って図２の結果を
得た。Ｌ−ロイシン発酵液においても本発明の方法によ
り膜除菌時の大幅な透過速度の向上が達成された。
ュール（PSP-003、細孔径0.3μm、膜面積150cm2）を使
用した。膜透過実験は循環流量約600ml/分、入口圧力1k
g/cm2で実施し、60分の透過実験を行って図２の結果を
得た。Ｌ−ロイシン発酵液においても本発明の方法によ
り膜除菌時の大幅な透過速度の向上が達成された。
【００３１】
【発明の効果】本文で明らかになったように、本発明の
方法を用いれば、過大な付帯設備を要することなく容易
に発酵液の膜透過速度を向上することが可能となり、膜
除菌工程の効率を高めること及び除菌用膜分離設備の小
型化が可能となる。
方法を用いれば、過大な付帯設備を要することなく容易
に発酵液の膜透過速度を向上することが可能となり、膜
除菌工程の効率を高めること及び除菌用膜分離設備の小
型化が可能となる。
【図１】リジン発酵液のＵＦ濾過における透過速度の経
時変化とＰＥＩ添加量との関係を示したものである。
時変化とＰＥＩ添加量との関係を示したものである。
【図２】ロイシン発酵液のＭＦ濾過における透過速度の
経時変化とＰＥＩ添加量との関係を示したものである。
経時変化とＰＥＩ添加量との関係を示したものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (5)
- 【請求項１】エシェリヒア（Escherichia）属に属する
微生物を培養して得られた発酵液を膜濾過し、菌体を分
離する方法において、発酵液にポリエチレンイミンを添
加した後、膜濾過し、菌体を分離することを特徴とする
膜除菌方法。 - 【請求項２】エシェリヒア属に属する微生物を培養して
得られた発酵液を膜濾過し、菌体を分離する方法におい
て、発酵液にポリエチレンイミンを添加し、さらに発酵
液のｐＨを３〜７に調整した後、菌体を膜分離すること
を特徴とする膜除菌方法。 - 【請求項３】使用する膜が限外濾過膜または精密濾過膜
であることを特徴とする請求項１または請求項２に記載
の膜除菌方法。 - 【請求項４】ポリエチレンイミンの添加量が、発酵液に
対し、0.0005〜0.5重量％であることを特徴とする請求
項１〜３のいずれか１請求項に記載の膜除菌方法。 - 【請求項５】ポリエチレンイミン添加前及び／または添
加後に発酵液を５０〜１３０℃に加熱することを特徴と
する請求項１〜４のいずれか１請求項に記載の膜除菌方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26701696A JP3861341B2 (ja) | 1995-10-13 | 1996-10-08 | 発酵液の膜除菌方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26527595 | 1995-10-13 | ||
| JP7-265275 | 1995-10-13 | ||
| JP26701696A JP3861341B2 (ja) | 1995-10-13 | 1996-10-08 | 発酵液の膜除菌方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09164323A true JPH09164323A (ja) | 1997-06-24 |
| JP3861341B2 JP3861341B2 (ja) | 2006-12-20 |
Family
ID=26546910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26701696A Expired - Fee Related JP3861341B2 (ja) | 1995-10-13 | 1996-10-08 | 発酵液の膜除菌方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3861341B2 (ja) |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009088049A1 (ja) | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2010084995A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid |
| JP2010538823A (ja) * | 2007-09-12 | 2010-12-16 | ダニスコ・ユーエス・インク | 内部汚れ付着が制御された濾過 |
| WO2011016301A1 (ja) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | 味の素株式会社 | ビブリオ属細菌を用いたｌ－リジンの製造法 |
| WO2011024555A1 (ja) | 2009-08-28 | 2011-03-03 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2011055710A1 (ja) | 2009-11-06 | 2011-05-12 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2345667A2 (en) | 2010-01-15 | 2011-07-20 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an L-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family |
| WO2011096554A1 (ja) | 2010-02-08 | 2011-08-11 | 味の素株式会社 | 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012077739A1 (ja) | 2010-12-10 | 2012-06-14 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012137689A1 (ja) | 2011-04-01 | 2012-10-11 | 味の素株式会社 | Ｌ－システインの製造法 |
| WO2012144472A1 (ja) | 2011-04-18 | 2012-10-26 | 味の素株式会社 | Ｌ－システインの製造法 |
| WO2013069634A1 (ja) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | 味の素株式会社 | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP3165608A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid of glutamate family |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
| WO2022092018A1 (ja) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2023013655A1 (ja) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | 味の素株式会社 | 食品の風味を改善する方法 |
| EP4345166A2 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid |
-
1996
- 1996-10-08 JP JP26701696A patent/JP3861341B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010538823A (ja) * | 2007-09-12 | 2010-12-16 | ダニスコ・ユーエス・インク | 内部汚れ付着が制御された濾過 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2009088049A1 (ja) | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2010084995A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid |
| WO2011016301A1 (ja) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | 味の素株式会社 | ビブリオ属細菌を用いたｌ－リジンの製造法 |
| WO2011024555A1 (ja) | 2009-08-28 | 2011-03-03 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2011055710A1 (ja) | 2009-11-06 | 2011-05-12 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2345667A2 (en) | 2010-01-15 | 2011-07-20 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an L-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family |
| WO2011096554A1 (ja) | 2010-02-08 | 2011-08-11 | 味の素株式会社 | 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012077739A1 (ja) | 2010-12-10 | 2012-06-14 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012137689A1 (ja) | 2011-04-01 | 2012-10-11 | 味の素株式会社 | Ｌ－システインの製造法 |
| WO2012144472A1 (ja) | 2011-04-18 | 2012-10-26 | 味の素株式会社 | Ｌ－システインの製造法 |
| WO2013069634A1 (ja) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | 味の素株式会社 | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP3165608A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid of glutamate family |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
| WO2022092018A1 (ja) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2023013655A1 (ja) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | 味の素株式会社 | 食品の風味を改善する方法 |
| EP4345166A2 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3861341B2 (ja) | 2006-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3861341B2 (ja) | 発酵液の膜除菌方法 | |
| RU2148642C1 (ru) | Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты | |
| RU2144564C1 (ru) | ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ | |
| JPH09173792A (ja) | 発酵液の処理方法 | |
| CN103088080B (zh) | 生产碱性物质的方法 | |
| DE3139397A1 (de) | Verfahren zur herstellung von aminosaeuren auf fermentativem wege | |
| CN108841758B (zh) | 谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-亮氨酸生产中的应用 | |
| JP4197754B2 (ja) | 乳酸又はコハク酸の製造方法 | |
| JP2005027533A (ja) | 有機酸の製造方法 | |
| MXPA03009345A (es) | El microoganismo del cual el gen fadr tuvo expresion bloqueada en el cromosoma y un procedimiento para producir l-treonina mediante fermentacion con el mismo mutante. | |
| JP2008029272A (ja) | ５−アミノレブリン酸の製造方法 | |
| US5814513A (en) | Method of removing cells from fermentation broth through membrane | |
| EP3922727A1 (en) | Method for separating biomass from a solution comprising biomass and at least one aroma compound | |
| EP0770676A2 (en) | Method for treating fermentation broth | |
| KR100452172B1 (ko) | 막을 통해 발효 브로쓰로부터 세포를 제거하는 방법 | |
| CN1155580A (zh) | 通过膜从发酵肉汤中去除细胞的方法 | |
| JP3021562B2 (ja) | ナイシンの製造方法 | |
| EP0421477B1 (en) | Enzymatic process for the preparation of L-serine | |
| JPS62289192A (ja) | アミノ酸の連続発酵生産方法 | |
| US4326030A (en) | Process for the production of pyruvic acid and citric acid | |
| JPH0634728B2 (ja) | 酢酸の製造方法 | |
| JP2006006344A (ja) | 有機酸の製造方法 | |
| JPS6324896A (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| JP2801689B2 (ja) | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 | |
| JPS60120983A (ja) | ブレビバクテリウム属に属する菌体の培養法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20050420 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050607 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Effective date: 20060905 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Effective date: 20060918 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 3 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091006 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091006 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101006 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 4 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101006 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |