JPS62289192A

JPS62289192A - アミノ酸の連続発酵生産方法

Info

Publication number: JPS62289192A
Application number: JP13430086A
Authority: JP
Inventors: Toshihide Nakanishi; 中西　俊秀; Toshihiko Hirao; 平尾　俊彦; Tomoki Azuma; 東　朋樹; Masahiro Sugimoto; 杉本　正裕
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1986-06-10
Filing date: 1986-06-10
Publication date: 1987-12-16
Anticipated expiration: 2009-08-10
Also published as: JPH0659228B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】３、発明の詳細な説明る。

アミノ酸は、医薬品、食品、飼料への添加物など種々の
用途を有し、広い分野で利用されている。

従来の技術従来、微生物を用いるアミノ酸の製造法に関しては、種
々の変異株や細胞融合株を用いる回分法による製造法が
知られている。

連続培養法に関しては、Ｌ−リジン、ついては、ブレビ
バクテリウム・フラバムを用いる方法〔フォリア・ミク
ロバイオロジカ（Ｆｏｌｉａ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　
）２７．３１５−３１８（１９８２）　）　、ミクロコ
ツカス・グルタミン酸を用いる方法（昭和４８年度日本
醗酵工学会大会講演要旨集ｐ、　１７０）が知られてい
る。また、Ｌ−アルギニンについては、セラチア属細菌
の固定化菌体による純酸素を用いる方法［アプライド・
ミクロバイオロジイ・アンド・バイオチクノロシイ　（
Ａｐｐｌ、！Ｊｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ、）　−月し、７９−８４、（１９８４）］が知られ
ている。Ｌ−フェニルアラニンについては、エシェリヒ
ア・コリを用いる方法〔バイオチクノロシイ・レターズ
（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙしｅｔｔｅｒｓ）　Ｖｏ
ｌ、　４　、２２３−２２８（１９８２）　〕、Ｌ−グ
ルタミン酸については、コリネバクテリウム・グルタミ
クムを用いる方法（バイオチクノロシイ・アンド・バイ
オエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎ
ｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）　Ｖｏｌ、　２４
．２１６７−２１７４（１９８２Ｌ）、Ｌ−）リブトフ
ァンについては、エシェリヒア・コリを用いる方法〔バ
イオチクノロシイ・アンド＋バイオエンジニアリング（
Ｂｉｏｔ、ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄＢｉｏｅｎｇｉ
ｎｅｅｒｉｎｇ）　Ｖｏｌ、２４．１４６５−１４６８
（１９８２）、同書Ｖｏｗ、　２５．１０１３−１０２
５　（１９８３）　）などが知られている。

発明が解決しようとする問題点近年アミノ酸の医薬品、食品、飼料その他への需要の増
大により、工業的により有利なアミノ酸の製造法の開発
が望まれている。

問題点を解決するための手段アミノ酸の発酵生産において、主たる生産性の指標とし
て、対炭素源収率の改善と生産速度の改善があげられる
。生産性の高い連続発酵法によるアミノ酸の製造法に関
し生産速度の改善について検討を行った結果、炭素源基
質濃度が１０％以上の連続流加液を用い、培養液への酸
素供給速度を高めて培養することにより、従来の回分培
養法に比べて生産速度の向上が図れることが見出された
。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明は、アミノ酸生産能を有する微生物によるアミノ
酸の連続発酵生産方法において、炭素源基質濃度が１０
％以上の連続流加液を用い、かつ連続培養中の培養液の
酸化還元電位を一２００ｍＶ（飽和カロメル電極）以上
になるようにして連続培養を行い、培養物中にアミノ酸
を生成蓄積させ、該培養物よりアミノ酸を採取すること
を特徴とするアミノ酸の連続発酵生産方法を提供する。

本発明方法で製造できるアミノ酸としては、Ｌ−リジン
、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミン
、Ｌ−プロリン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−オルニチン、Ｌ
−スレオニン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−
バリン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−）リブトファンが
あげられる。

本発明に使用する微生物は、アミノ酸生産能を有するも
のであれば、野生株、変異株などいずれも使用できる。

　しかし、連続培養に耐えろる菌株、つまり少なくとも
平均滞留時間〔発酵液容積（１）／培地供給速度（ｎ／
ｈ））の２倍以上の間、力価、生育に変化のない安定な
菌株が好ましい。好適な例として、下記のような菌株が
あげられる。

エシェリヒア・コリ　Ｈ−４２５８（ＦＥＲＭ　ＢＰ−
９８５）コリネバクテリウム・グルタミクム＾ＴＣＣ２
１８８５コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ２
１６７４連続培養法の形態としては、一槽法と多槽法が
知られている。本発明方法は、一槽法で充分であるが、
抜取液中に多量の原料が残留する場合には、多槽法で行
うことにより、対炭素源収率の向上を図ることも可能で
ある。

本発明に用いられる培地としては、使用菌株の利用しう
る炭素源、窒素源、無機物など必要な栄養素を程よく含
有するものであれば、合成培地、天然培地のいずれも使
用できる。

炭素源としては、グルコース、シュクロース、廃糖蜜、
果汁、デンプン分解物、セルロース分解物などの炭水化
物、酢酸などの有機酸類、エタノールなどのアルコール
頚などが利用できる。窒素源としては、アンモニア、塩
化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム
などのアンモニウム塩、尿素、アミン類、その他の含窒
素化合物、ならびにペプトン、肉エキス、酵母エキス、
コーン・スチーブ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆
粕加水分解物、各種発酵菌体およびその加水分解物など
が利用できる。

無機物としては、リン酸−カリウム、リン酸二カリウム
、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシ
ウムなどが利用できる。本発明に使用する微生物が生育
のために特定の栄養素を必要とする場合には、その栄養
物を標品もくしはそれを含有する天然物として添加する
ことができる。また消泡剤も必要に応じて使用する。

また、培地中に各種の添加物、例えばアスパラギン酸、
グルタミン酸、ロイシンあるいはロイシン発酵液、スト
レプトマイシン、カナマイシンなどを添加することによ
り、アミノ酸の生産速度を向上させうる場合がある。

連続培養に用いる連続流加液の炭素源基質濃度は、１０
％以上にするのが好ましい。１０％以下の炭素源基質濃
度でも、生産速度の向上はみられるが、アミノ酸蓄積濃
度、対炭素源収率が著しく低下し、さらに排液量の増加
などの問題も多く、工業的実用性は少ない。

連続流加液の炭素源は、糖蜜、グルコース、ンニクロー
ス、酢酸または酢酸塩、またはこれらの混合物を用いる
。窒素源、無機物などは初発培地に用いることができる
ものはすべて流加液成分として用いることができる。

培養は、深部通気攪拌槽、気泡塔、ドラフト付き気泡塔
などを用いて行う。培養温度は、２０〜４０℃の範囲で
行う。培地のｐＨは４〜９の範囲、好ましくは中性付近
に維持することが望ましい。

培地のｐＨ調節は、炭酸カルシウム、酸またはアルカリ
溶液、アンモニアなどを用いる。

連続培養に先立って通常回分もしくは半回分式培養を行
い、途中から連続培養に切替えられるが、かかる方法自
体は公知であって、本発明の方法に右いても公知の手段
を適用することができる。

即ち、回分培養を開始し、対数増殖期の適当な時期から
流加液を加える一方同量の培養液を抜き出せばよい。流
加液の供給速度は槽内の培養液ｌと温習時間から定めら
れる。

連続培養開始に伴って酸化還元電位を一２００ｍＶ以上
になるように酸素を供給する。酸化還元電位を一２００
ｍＶに保つためには酸素の供給速度を上げる必要があり
、２１％以上の酸素濃度の気体例えば空気に酸素を加え
て供給する、培養を加圧例えば１．５〜３．０ｋｇ／ｃ
ｊに保つ、攪拌速度、通気量を上げるなどの手段を単独
もしくは組合せて適用することにより目的を達成できる
。

培養過程において、発酵槽の中に雑菌の混入を防ぐよう
、装置、操作に通常の回分または半回分培養以上に注意
する必要がある。連続培養の期間は長い程、工程管理を
省力化でき、生産性も向上する。通常、無菌性の維持、
生産菌株の劣化などの防止のため２００〜１０００時間
程度で行うが、問題がなければそれ以上続行することが
できる。

生産速度は、次の式で計算する。

上記式より、生産速度の向上は、希釈率〔流加液の流速
（／／ｈ）／運転液量（ｊり］を上げることができれば
よい。つまり、連続培養時に単位運転液量、単位時間当
り、より多くの炭素源、窒素源などの基質およびその他
の栄養素を流加することにより、アミノ酸生産菌がそれ
らを利用してアミノ酸を生産し、かつ生育することがで
きればよい。

連続的に抜取った培養液および培養終了後の培養液から
、菌体などの沈澱物を除去し、公知のイオン交換処理法
、ａ縮法、吸着法、塩析法、等電点沈澱法などの方法に
より、培養液から生成したアミノ酸を回収することがで
きる。

以下、実施例をあげて本発明を具体的に示す。

特に限定しないかぎり、培養液の酸化還元電位は一２０
０ｍＶ（飽和カロメル電極）以上になるようにして培養
を実施している。

実施例１連続発酵法によるＬ−ＩＪリジン生産；（１）コリネバ
クテリウム・グルタミクムＨ−３１４９（ＦＥＲＭ　Ｂ
Ｐ−１５８）を２１２容三角フラスコに入れた２　５３
ｍｌの下記種培地を用いて、３０℃で３０時間培養した
。一方、下記主発酵培地１．４１を５１容ジャーファー
メンタ−に入れ、上記の種培養液１００ｍｌをこれに接
種した。培養温度は３４℃、ｐＨは７．０に調節し、通
気１２．５１　／ｍｉｎ。

攪拌回転数６０　Ｏｒ四で培養した。１５時間培養後、
下記の流加液を流加し、１β添加し終わった段階で培養
液の抜き取りを開始し、運転液量を常に２．５１に制御
した。流加液の炭素源としては糖蜜を用い、第１表に示
すグルコース換算濃度で用いた。流加速度は平均滞留時
間の３倍以上の時間を一定速度で行った時点で、その流
加速度での定常状態に達したものとみなし、次いで段階
的に流加速度を上げていき、各炭素源濃度での最高のリ
ジン生産速度を示すときの結果を第１表に示した。リジ
ンは全て、Ｌ−ＩＪリジン塩酸塩で表示した。

〔種　培　地〕

グルコース　　　　　４％酵母エキス　　　　　０．５％ペ　　ブ　　ト　　ン　　　　　　　　　　　　２　％
尿　　　　　素　　　　　　　　０．３％１１ｇ５Ｏｓ
・７Ｈ２００，０５％ＫＨ２Ｐｏ４０．２％ビオチン　　　　１００眉／１ｐＨ７，０（ＮａＯＨ）殺　　菌　　　１２０℃　　１５分〔主発酵培地〕初発培地廃　　　Ｆｌ　　　　蜜　　　　　　　　　　３．５　
　％　（グルコース　換算）硫酸アンモニウム　　　２
．５％ＫＨ，Ｐｏ４　　　　　０．０５％Ｍｇ５Ｏ＜　　　　　　　　０．０５％コーン・スチー
ブ・リカー　　　　　　　　　　　１　％消　　泡　　
剤　　　　　　　２ｍｌ／βｐ　Ｈ７，０（Ｎ　Ｈ４０
Ｈ）殺　　菌　　　１２０℃　　１５分流加液廃　　　糖　　　審　　　　　　２８〜１０　％　（グ
ルコース　換算）硫酸アンモニウム　　　４％ＫＨ，Ｐｏ、　　　　　　　０．０５％コーン・スチー
ブ・リカー　　　　　　　　　　０．５　　％消　　泡
　　剤　　　　　　　　１ｍｌ／Ａ殺　　菌　　　１２
０℃　　１５分第　　　１　　　表２０　０．０５７　７６　４．３　３８１３　０．１２
６　４２　５．３　３２．３１０　０．１９６　２８　
５．５　２８第１表に示したように、流加液の糖濃度が
低いほど生産速度は向上するが、リジン蓄積量は減少す
るので、工業的に有利に使用できるのは、糖濃度１０％
以上の流加液である。

（２）実施例１の（１）に示す方法のうち、微生物とし
てＨ−３１４９およびＨ−３０５７（ＦＥＲＭＢＰ−１
４８）を用い、２４％の炭素源濃度の流加液を用い５１
容ジャーファーメンタ−にて攪拌回転数を第２表に示す
範囲で、（１）と同様に培養して、それぞれのＬ−ＩＪ
リジン最大生産速度を求め第２表に示した。なおＨ−３
０５７株の使用時にはＬ−ロイシン０．５　ｇ　／βを
培地に添加した。

第　　　２　　　表４００　　１．８　１．８４５０　　２．６　２．４５００　　３．０　２．９６００　　４．２　４．０７００　　４．５　４．２（３）実施例１の（１）に示す方法のうち炭素源濃度２
４％を用い、攪拌回転数５００ｒｐｍで第３表に示す希
釈率で連続培養を行った。各希釈率でのしＩＪリジン蓄
積量生産速度および酸化還元電位（飽和カロメル電極）
を第３表に示した。

また、同様に炭素源濃度２４％の流加液を用い第４表に
示すような攪拌回転数にかえながら０．０３４ｈ−’の
希釈率で連続培養を行った。各攪拌回転数でのＬ−ＩＪ
リジ蓄積Ｊ１生産速度および酸化還元電位（飽和カロメ
ル電極）を第４表に示した。

第　　　３　　　表０．０２８　９３　２．６　　−７００．０３４　９０　３．０　−１９００．０４０　５７　２．３　−２１０第　　　４　　　表６００　９１　３．１　　−６．０５００　９０　３．１　−１８５４５０　’　６３　２．３　−２０５（４）実施例１の（１）に示す方法のうち、微生物とし
て第５表に示した菌株を用い、炭素源濃度２４％の流加
液を用い、攪拌回転数４５Ｏｒｐｍ、通気衛２．５β／
ｍｉｎで、かつ通気用の空気として３０％の酸素を含む
空気を用いて連続培養を行い、生産速度の最大値を、通
常空気（酸素濃度２１％）を用いたときと比較した。流
加液中の炭素源は糖蜜でグルコースとして１９％の濃度
で用いた。

ただし、Ｈ−３２９１株の使用時には培地にＬ−ロイシ
ン０．６ｇ／ｌ添加した。各条件での最大生産速度を示
した時のデータを第５表に示した。

第　　　５　　　表３０４．３　０．０６１　７０Ｈ−３２９１２１２，４０，０３３７２（ＦＥＲｌ、ｌ
　ＢＰ−１５５）第５表に示したように、酸素濃度３０％を含む空気を用
いた方が、Ｌ−’Ｊリジン積量は少々低下するが、生産
速度が著しく向上するので、工業的実用性が高い。

〔５〕　　実施例１の（１）に示す方法のうち微生物と
してＨ−３１４９を用い、炭素源濃度２４％の流加液を
用い、攪拌回転数４５０ｒｐｍで、発酵槽内圧を１．５
および１．９ｋｇ／ｃ＋＋ｆ圧まで上げて通気を行ない
、Ｌ−リジンの最大生産速度を求めた。

また、槽内圧を常圧（１ｋｇ／ｃｕｔ）で通気量を増加
したときの最大生産速度も求めた。各条件での最大生産
速度を第６表に示した。

第　　　６　　　表常圧（１ｋｇ／ｃｄ）　　２．５　　　　　　　２．４
１．５　２．５　　３．５１．９　２．５　　４．３常　　圧　　　　４．５　　　　　　　　　３．５（６
）実施例１の（１）に示す方法のうち、主発酵培地とし
て下記のものを用い、微生物はＨ−３０５５（ＦＥＲＭ
　ＢＰ−１４７）を用いて連続培養を行った。

〔主発酵培地〕

初発培地グルコース　　　　　　６％ＮＨ，Ｃｊ！　　　　　　　２．５％Ｋｌ−（、Ｐｏ、　　　　　　０．２％ＭｇＳＯ４０，
０５％尿　　　素　　　　　　　　０．１％コーン・スチーブ・リカー　　　　　　　　２　％ペプ
トン　　　　　　０．５％ビオチン　　　　　　　３’００１ｔｇ／βサイアミン
塩酸塩　　　　　　　　　１００μｇ／ｌＦｅ５Ｏａ　
　・７Ｈ２０，１０ｍｇ／　βＪｎＳＯ４・４）１２０
　　　　　　１０　ｍｇ／　ＲＣａＣβ２　　　　　　
　１０ｍｇ／４２ＣｏＣβ２１３ＬＯｌ　ｍｇ／　ｌＣｕ１２　・２Ｈ２０１０ｍｇ／　ｌＮ１Ｃβ２　　・６Ｈ２０１ｍｇ／　ＥＺｎＣＬ　　　
　　　　　１ｍｇ／ｎモリブデン酸アンモニウム　　　　　　　　１ｍｇ／　
β（（ＮＨ＜）６ＭｏｔＯ□４・４Ｈ２０）消泡剤　　
２ｍｌ／６ｐ　Ｈ７，Ｏ（ＮＨ４０Ｈ）殺菌　１２０℃１５分流加液グルコースを２０％とする以外は初発培地と同様の組成
。

攪拌回転数４５０ｒｐｍで運転した際の最大生産速度２
．３ｇ＃−ｈに対して６００ｒｐｍでは３．８ｇ／Ａ−
ｈに向上した。

（７）実施例１の（１）の示す方法のうち、攪拌回転数
４５Ｏｒｐｍ、流加液として、第７表に示す混合比率で
混合した炭素源濃度２４％の混合糖液を用いた。各条件
でのＬ−’Ｊリジン最大生産速度を第７表に示した。

第　　　７　　　表糖流加液組成　　　　Ｌ−Ｕジン最大生産速度廃糖蜜（
％）　その他　　　　　（ｇ／！・ｈ）２４　　　　　
０　　　　　　　　２、６２０　　　　グルコース　　
　　　　２．８４％２２　　　　酢酸アンモニウム　　　２．６２％実施例２連続発酵法によるＬ−アルギニンの生産：（１）　　コ
リネバクテリウム・アセトアシドフィルムＨ−４３１４
（ＦＥＲｌ、ｌ　ＢＰ−１０１８）　を２１容フラスコ
に入れた２　５　Ｑｍｌの下記種培地を用いて３０℃で
４８時間培養した。一方、下記主発酵培地１．６１を５
ρ容ジャーファーメンタ−に入れ上記種培養液２５　Ｑ
ｍｌをこれに植菌した。培養温度は３０℃、ｐ　Ｈ６，
６に調節し通気量３ｊ！／ｍｉｎ。

攪拌数６０ＯｒｌｌｌＴｌで培養した。培地の炭素源と
しては廃糖蜜を用いた。初発培地中の廃糖蜜が消費され
た時点（１８時間後）から回分培養の場合は下記の流加
培地（Ａ）を、連続培養の場合は流加培地（Ｂ）を各々
１．４１流加した。この時点で後者の場合は連続培養に
移行した。連続培養中の培養液量は３！に保たれるよう
に種々の濃度の流加培地（Ｂ）を添加しつつ、培養液を
抜き取った。流加速度は平均滞留時間の３倍以上の時間
一定速度で流加した時点でその流加速度での定常状態に
達したものとみなしその時点での値を生産速度の算出に
用いた。このようにして求めた連続培養時のし一アルギ
ニン生産速度と対糖収率、通常の回分培養時の生産速度
と対糖収率を第８表に示した。

種培地グルコース　　　　　５０ｇ／Ｒペプトン　　　　１０ｇ／β 酵母エキス　　　　　１０　ｇ／ｊ！ＮａＣｊ！　　　　　　　２．５ｇ／ｆｆビオチン　　
　　　　５０ｇ／β 尿　　　素　　　　　　　　３ｇ＃！コーン・スチーブ・リカー　　　　　　　　　５ｇ／　
βｐＨ７，２主発酵培地廃糖蜜　　７０ｇ／β に＋−１，Ｐｏ、　　　０．５ｇ／ｌ硫酸アンモニウム　　３８　ｇ／１Ｍｇ５Ｏ，・７ＨＪ　　　　　　　Ｏ，５ｇ　／βＦｅ
５０．４Ｈｚ０　　　　　　１０　ｍｇ／　Ｉ２チアミ
ン塩酸塩　　　１００眉／β ｐＨ７，２流加培地（Ａ）廃糖蜜　　４００ｇ／ｌ硫酸アンモニウム　３０　ｇ／１（Ｂ）廃糖蜜　８０〜２５０ｇ／ｆ硫酸アンモニウム　３０　ｇ／ｊ！廃糖蜜濃度はいずれもグルコース換算濃度殺菌は１２０
℃で３０分実施した。

第　　　８　　　表回分　４０　　　−　　５３　　　−　　０．７　　　
２４連続　２５　　０，０１３　　−　　　６３　　０
．８　　　２５．２２００．０１８−　５５１．０２７
．５１５０．０２６−　４２．５１．１２８．３１００
．０６２−　１８．９１．２　１８．９８０．０８３−
　１２１．４　１５第８表に示したように、流加液の炭素源濃度が低いほど
、生産速度は向上するが、アルギニン蓄積量、対糖収率
は減少するので、工業的に有利に使用できるのは、炭素
源濃度１０％以上の流加液である。

（２）実施例２の（１）に示す方法のうち微生物として
Ｈ−４３１４を用い炭素源濃度２０％の流加液を用いて
、５Ｎ容ジャーファーメンタ−にて第９表に示したよう
な攪拌数に変えて培養を行った。Ｌ−アルギニンの生産
速度と対糖収率、その時の酸化還元電位（飽和カロメル
電極）を第９表に示した。

第　　　９　　　表４５０　４７　０．８６　−１９０　２３．５５００　
５２　０．９５　−１５０　２６．０（３）実施例２の
（１）に示す方法のうち微生物としてＨ−４３１４を用
い炭素源濃度２０％の流加液を用い攪拌数４ｓｏｒｐｍ
で通気用の空気として通常空気（２１％酸素濃度）と３
０％酸素濃度を含む空気を用いて連続培養を行い生産速
度を比較した。結果を第１０表に示した。

第　　　１０　　　表２１　０．８６　２３．５〔４）実施例２の（１〕に示す方法のうち、微生物とし
てＨ−４３１４を用い、炭素源濃度２０％の流加液を用
いて、攪拌数４５０ｒｐｍで発酵槽内圧を１．５および
１．９ｋｇ／ｃ＋＋！圧まで上げて通気を行い、Ｌ−ア
ルギニンの最大生産速度を求めた。

また、槽内圧を常圧（１ｋｇ／ｃ＋＋ｆ）で通気量を増
加したときの最大生産速度も求めた。各条件での最大生
産速度を第１１表に示した。

第　　　１１　　　表（５）実施例２の（１）に示す方法のうち、攪拌数４５
゜ｒｐｍ　、流加液として第１２表に示す混合比率で混
合した総炭素源濃度２０％の混合糖液を用い連続培養を
行った。このときのし−アルギニンの生産速度を第１２
表に示す。

第　　　１２　　　表２０　０　　０．８５本発明により、高い生産速度で工業的に有利にアミノ酸
を得ることができる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アミノ酸生産能を有する微生物によるアミノ酸の
連続発酵生産方法において、炭素源基質濃度が１０％以
上の連続流加液を用い、かつ連続培養中の培養液の酸化
還元電位を−２００ｍＶ（飽和カロメル電極）以上にな
るようにして連続培養を行い、培養物中にアミノ酸を生
成蓄積させ、該培養物よりアミノ酸を採取することを特
徴とするアミノ酸の連続発酵生産方法。
（２）該アミノ酸が、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、Ｌ
−グルタミン酸、Ｌ−グルタミン、Ｌ−プロリン、Ｌ−
ヒスチジン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イ
ソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−フェニル
アラニンまたはＬ−トリプトファンであることを特徴と
する特許請求の範囲第１項記載の方法。
（３）該炭素源として、糖蜜、グルコース、シュクロー
ス、酢酸または酢酸塩、またはそれらの混合物を使用す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。