JPH09271382A - エクトインを用いるｌ−アミノ酸の発酵法による製造方法 - Google Patents
エクトインを用いるｌ−アミノ酸の発酵法による製造方法Info
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- JPH09271382A JPH09271382A JP8355996A JP8355996A JPH09271382A JP H09271382 A JPH09271382 A JP H09271382A JP 8355996 A JP8355996 A JP 8355996A JP 8355996 A JP8355996 A JP 8355996A JP H09271382 A JPH09271382 A JP H09271382A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 Ｌ−アミノ酸の発酵工程の改良は、Ｌ−
アミノ酸生産の効率化に寄与してきた。今回、発酵条件
の改良法として、添加法によるＬ−アミノ酸生産の効率
化を検討する。 【解決手段】 Ｌ−アミノ酸の発酵生産をするに当た
り、エクトインの存在下で培養することにより、Ｌ−ア
ミノ酸生産量を増大させる。
アミノ酸生産の効率化に寄与してきた。今回、発酵条件
の改良法として、添加法によるＬ−アミノ酸生産の効率
化を検討する。 【解決手段】 Ｌ−アミノ酸の発酵生産をするに当た
り、エクトインの存在下で培養することにより、Ｌ−ア
ミノ酸生産量を増大させる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エクトインを用い
るＬ−アミノ酸の製造法に関する。さらに詳しくは、エ
クトインをＬ−アミノ酸生産能を有する微生物源を用い
る工程に存在せしめてＬ−アミノ酸を高濃度化、高速度
蓄積化、高収率化させ、Ｌ−アミノ酸生産を効率化せし
める方法に関する。
るＬ−アミノ酸の製造法に関する。さらに詳しくは、エ
クトインをＬ−アミノ酸生産能を有する微生物源を用い
る工程に存在せしめてＬ−アミノ酸を高濃度化、高速度
蓄積化、高収率化させ、Ｌ−アミノ酸生産を効率化せし
める方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】微生物を用いたＬ−アミノ酸の生産方法
に於いて、発酵工程の改善によるＬ−アミノ酸の生産効
率を高める方法は従来より種々研究されている。例え
ば、抗生物質、界面活性剤又は抗酸化剤を添加する方法
（特開昭５０−５５９２、特開昭５０−６４４８６、特
開昭５０−１２２９２、特開昭６２−４８３９３、特開
平５−３７９３）、酸素を富化させる方法(特開昭６１
−２１６６９７)、通電する方法(特開昭６２−５８９８
６)、炭素源濃度制御法（特開昭５７−２９２８９、特
開平５−７６３４６）、栄養素量の制御法（特開平５−
３０９８５）、ビチオンを過剰に添加する方法（特開昭
６２−６１５９３）、アスパラギン酸を添加する方法
（特開昭５９−１５４９９４）、キノリン類の添加法
（特開昭５３−８６０９１）、Ｎ−メチルグリシン類を
添加する方法（特開昭６２−１８１７９１）などが知ら
れている。
に於いて、発酵工程の改善によるＬ−アミノ酸の生産効
率を高める方法は従来より種々研究されている。例え
ば、抗生物質、界面活性剤又は抗酸化剤を添加する方法
（特開昭５０−５５９２、特開昭５０−６４４８６、特
開昭５０−１２２９２、特開昭６２−４８３９３、特開
平５−３７９３）、酸素を富化させる方法(特開昭６１
−２１６６９７)、通電する方法(特開昭６２−５８９８
６)、炭素源濃度制御法（特開昭５７−２９２８９、特
開平５−７６３４６）、栄養素量の制御法（特開平５−
３０９８５）、ビチオンを過剰に添加する方法（特開昭
６２−６１５９３）、アスパラギン酸を添加する方法
（特開昭５９−１５４９９４）、キノリン類の添加法
（特開昭５３−８６０９１）、Ｎ−メチルグリシン類を
添加する方法（特開昭６２−１８１７９１）などが知ら
れている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述の個々のＬ−アミ
ノ酸の発酵生産技術及びそれらの組合せ技術は、Ｌ−ア
ミノ酸生産の効率化に寄与してきた。しかし、産業界に
おいては、更に、安価で高生産できるＬ−アミノ酸の工
業的製造方法が求められており、この点において従来の
技術でははなはだ不充分である。本発明はこのような課
題を解決すべく多種のＬ−アミノ酸の発酵法に対して、
それらによる生産の効率化を可能にする新規で汎用性の
高い方法を提供する。
ノ酸の発酵生産技術及びそれらの組合せ技術は、Ｌ−ア
ミノ酸生産の効率化に寄与してきた。しかし、産業界に
おいては、更に、安価で高生産できるＬ−アミノ酸の工
業的製造方法が求められており、この点において従来の
技術でははなはだ不充分である。本発明はこのような課
題を解決すべく多種のＬ−アミノ酸の発酵法に対して、
それらによる生産の効率化を可能にする新規で汎用性の
高い方法を提供する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らはＬ−アミノ
酸の新規で効率的生産方法について鋭意研究を積み重ね
た。その結果、エクトインの存在により、微生物のＬ−
アミノ酸生産量が顕著に促進することを発見し、これに
基づき、本発明を完成した。
酸の新規で効率的生産方法について鋭意研究を積み重ね
た。その結果、エクトインの存在により、微生物のＬ−
アミノ酸生産量が顕著に促進することを発見し、これに
基づき、本発明を完成した。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明について具体的に説
明する。
明する。
【０００６】エクトインは、１，４，５，６−テトラヒ
ドロ−２−メチル−４−ピリミジン−カルボン酸または
３，４，５，６−テトラヒドロ−２−メチル−４−ピリ
ミジン−カルボン酸で示される環状アミノ酸であり、好
塩性細菌Ｅｃｔｏｔｈｉｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ ｈａ
ｌｏｃｈｌｏｒｉｓが生産する補償溶質として発見さ
れ、その高浸透圧に対する耐性作用（すなわち、高浸透
圧耐性）が報告されている（Ｇａｌｉｎｓｋｉ，Ｂ．
Ａ．ら、Ｅｕｒ，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１４
９，ｐｐ１３５−１３９(１９８５)；高野光男ら、日本
発酵工学会大会プログラム第１９３頁１９８８年)。ま
た、エクトインの生合成経路(Ｐｅｔｅｒｓ，Ｐ.ら、Ｆ
ＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ.７
１，ｐｐ１５７−１６２（１９９０））や物性（Ｋｈｕ
ｎａｊａｋｒ，Ｎ．ら、ＡｎｎｕａｌＲｅｐｏｒｔｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏ
ｆ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．
１２，ｐｐ１５７−１６７（１９８９））についても報
告されている。さらに、エクトインを微生物から抽出単
離する方法（Ｋｈｕｎａｊａｋｒ，Ｎ．ら、Ａｎｎｕａ
ｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．１２，ｐｐ１５７−１６７（１９
８９））や化学的に合成する方法（特開平３−３１２６
５号）が知られている。
ドロ−２−メチル−４−ピリミジン−カルボン酸または
３，４，５，６−テトラヒドロ−２−メチル−４−ピリ
ミジン−カルボン酸で示される環状アミノ酸であり、好
塩性細菌Ｅｃｔｏｔｈｉｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ ｈａ
ｌｏｃｈｌｏｒｉｓが生産する補償溶質として発見さ
れ、その高浸透圧に対する耐性作用（すなわち、高浸透
圧耐性）が報告されている（Ｇａｌｉｎｓｋｉ，Ｂ．
Ａ．ら、Ｅｕｒ，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１４
９，ｐｐ１３５−１３９(１９８５)；高野光男ら、日本
発酵工学会大会プログラム第１９３頁１９８８年)。ま
た、エクトインの生合成経路(Ｐｅｔｅｒｓ，Ｐ.ら、Ｆ
ＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ.７
１，ｐｐ１５７−１６２（１９９０））や物性（Ｋｈｕ
ｎａｊａｋｒ，Ｎ．ら、ＡｎｎｕａｌＲｅｐｏｒｔｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏ
ｆ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．
１２，ｐｐ１５７−１６７（１９８９））についても報
告されている。さらに、エクトインを微生物から抽出単
離する方法（Ｋｈｕｎａｊａｋｒ，Ｎ．ら、Ａｎｎｕａ
ｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．１２，ｐｐ１５７−１６７（１９
８９））や化学的に合成する方法（特開平３−３１２６
５号）が知られている。
【０００７】エクトインは、Ｌ−アスパルテート−β−
セミアルデヒドから生合成され、その合成過程にエクト
イン合成酵素群と呼ばれる、Ｌ−ジアミノ酪酸トランス
アミナーゼ、Ｌ−ジアミノ酪酸アセチルトランスフェラ
ーゼ及びエクトイン合成酵素が関与している。エクトイ
ン合成酵素は、α−Ｎ−アセチル−ジアミノ酪酸からエ
クトインを合成する酵素であり、好塩性細菌からの精製
方法やその性質について報告されている（高野光男ら、
日本生物工学会講演要旨集第２０３頁１９９２年）。さ
らに、エクトイン合成酵素の遺伝子構造および塩基配列
について明らかにされ、エクトイン合成酵素をコードす
る遺伝子ＤＮＡを宿主細胞に導入し、宿主細胞にエクト
イン合成能を付与して、高塩濃度環境下で培養効率を上
げる方法が報告されている（高野光男ら、日本生物工学
会講演要旨集第１６６頁１９９３年）。
セミアルデヒドから生合成され、その合成過程にエクト
イン合成酵素群と呼ばれる、Ｌ−ジアミノ酪酸トランス
アミナーゼ、Ｌ−ジアミノ酪酸アセチルトランスフェラ
ーゼ及びエクトイン合成酵素が関与している。エクトイ
ン合成酵素は、α−Ｎ−アセチル−ジアミノ酪酸からエ
クトインを合成する酵素であり、好塩性細菌からの精製
方法やその性質について報告されている（高野光男ら、
日本生物工学会講演要旨集第２０３頁１９９２年）。さ
らに、エクトイン合成酵素の遺伝子構造および塩基配列
について明らかにされ、エクトイン合成酵素をコードす
る遺伝子ＤＮＡを宿主細胞に導入し、宿主細胞にエクト
イン合成能を付与して、高塩濃度環境下で培養効率を上
げる方法が報告されている（高野光男ら、日本生物工学
会講演要旨集第１６６頁１９９３年）。
【０００８】また、高塩濃度環境下でエクトインの添加
により、大腸菌の発育を促進させる方法(Ｊｅｂｂａｒ
Ｍ.ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７４，ｐｐ５０２７−５０３５（１
９９２））や根粒菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属菌）の発育
を促進させる方法（Ｔａｌｉｂａｒｄ Ｒ．ら、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．
１７６，ｐｐ５２１０−５２１７（１９９４））が知ら
れている。
により、大腸菌の発育を促進させる方法(Ｊｅｂｂａｒ
Ｍ.ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７４，ｐｐ５０２７−５０３５（１
９９２））や根粒菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属菌）の発育
を促進させる方法（Ｔａｌｉｂａｒｄ Ｒ．ら、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．
１７６，ｐｐ５２１０−５２１７（１９９４））が知ら
れている。
【０００９】しかしながら、微生物の増殖はむしろアミ
ノ酸の収率を阻害することも事実であり、その例は枚挙
にいとまがない程、一般的である。そして、エクトイン
についても、Ｌ−アミノ酸の生産を促進する事実は知ら
れていないのである。
ノ酸の収率を阻害することも事実であり、その例は枚挙
にいとまがない程、一般的である。そして、エクトイン
についても、Ｌ−アミノ酸の生産を促進する事実は知ら
れていないのである。
【００１０】本発明の目的は、Ｌ−アミノ酸生産の新規
な効率化の方法を提供することにある。 （参考例）エクトインの調製：ハロモナス属ＫＳ−３株
〔工業技術院生命工学技術研究所；寄託番号ＦＥＲＭＰ
−１３９５２(平成５年１１月５日受託)〕を、塩化ナト
リウムを含んだＭ６３培地（組成：０．１ＭＫＨ2Ｐ
Ｏ4，７５ｍＭＫＯＨ，１５ｍＭ(ＮＨ4)2ＳＯ4，１ｍＭ
ＭｇＳＯ4，３．９μＭＦｅＳＯ4，２２ｍＭｇｌｕｃｏ
ｓｅ，０．５１ＭＮａＣｌ）に０．２５％（ｗ／ｖ）酵
母エキスを加え（濃度はすべて終濃度）、通気攪拌条件
下３７℃で一夜前培養した。この前培養液を１１０ｍＭ
のグルコースを含んだＭ６３培地に２％濃度で接種し、
３０℃で通気条件(０．５ｖｖｍ)下に攪拌し、培養し
た。約７時間培養し、培養菌液の濁度（波長６６０ｎｍ
の吸光度）が約１.５に達した時に、塩化ナトリウムを
最終濃度２.５６Ｍとなるように添加し、更に１０時間
培養した。遠心分離にて菌体を採取し洗浄、菌体(ｗｅ
ｔ)を得た。この菌体を１０倍量の７０％エタノールで
８０℃にて１０分間攪拌し、ガラスフィルターによる濾
過にて粗抽出液を得た。その粗抽出液中のエタノールを
減圧濃縮（３５℃）にて除去した濃縮液に、同量のクロ
ロホルムを添加混合した後、遠心分離（８，０００ｒｐ
ｍ、３０分間）した。次いで、その遠心上層液（水層）
を回収し、減圧下に濃縮乾固した。残留物にクロロホル
ム処理時と同量のエタノールを加え、不溶物を遠心分離
(８，０００ｒｐｍ、３０分間)で除去した。遠心上清液
を減圧下に濃縮乾固した後、残留物を適量の蒸留水に溶
解させ、陰イオン交換カラム（ＤＩＡＩＯＮ ＳＡ１０
Ａ、三菱化成株式会社製）を用いて精製分離させる。洗
浄画分にエクトインが溶出し、これを回収後凍結乾燥
し、粉末精製のエクトインを得た。エクトインの分析
は、ピータースらの方法（Ｐｅｔｅｒｓ，Ｐ.ら、ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ.７
１，ｐｐ１５７−１６２（１９９０））にしたがって、
高速液体クロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフ
ィーを用いて行った。上記の培養・精製を１０００Ｌタ
ンクで行ったとき、湿重量６．２ｋｇの菌体から約４０
ｇの粉末精製のエクトインを得た。
な効率化の方法を提供することにある。 （参考例）エクトインの調製：ハロモナス属ＫＳ−３株
〔工業技術院生命工学技術研究所；寄託番号ＦＥＲＭＰ
−１３９５２(平成５年１１月５日受託)〕を、塩化ナト
リウムを含んだＭ６３培地（組成：０．１ＭＫＨ2Ｐ
Ｏ4，７５ｍＭＫＯＨ，１５ｍＭ(ＮＨ4)2ＳＯ4，１ｍＭ
ＭｇＳＯ4，３．９μＭＦｅＳＯ4，２２ｍＭｇｌｕｃｏ
ｓｅ，０．５１ＭＮａＣｌ）に０．２５％（ｗ／ｖ）酵
母エキスを加え（濃度はすべて終濃度）、通気攪拌条件
下３７℃で一夜前培養した。この前培養液を１１０ｍＭ
のグルコースを含んだＭ６３培地に２％濃度で接種し、
３０℃で通気条件(０．５ｖｖｍ)下に攪拌し、培養し
た。約７時間培養し、培養菌液の濁度（波長６６０ｎｍ
の吸光度）が約１.５に達した時に、塩化ナトリウムを
最終濃度２.５６Ｍとなるように添加し、更に１０時間
培養した。遠心分離にて菌体を採取し洗浄、菌体(ｗｅ
ｔ)を得た。この菌体を１０倍量の７０％エタノールで
８０℃にて１０分間攪拌し、ガラスフィルターによる濾
過にて粗抽出液を得た。その粗抽出液中のエタノールを
減圧濃縮（３５℃）にて除去した濃縮液に、同量のクロ
ロホルムを添加混合した後、遠心分離（８，０００ｒｐ
ｍ、３０分間）した。次いで、その遠心上層液（水層）
を回収し、減圧下に濃縮乾固した。残留物にクロロホル
ム処理時と同量のエタノールを加え、不溶物を遠心分離
(８，０００ｒｐｍ、３０分間)で除去した。遠心上清液
を減圧下に濃縮乾固した後、残留物を適量の蒸留水に溶
解させ、陰イオン交換カラム（ＤＩＡＩＯＮ ＳＡ１０
Ａ、三菱化成株式会社製）を用いて精製分離させる。洗
浄画分にエクトインが溶出し、これを回収後凍結乾燥
し、粉末精製のエクトインを得た。エクトインの分析
は、ピータースらの方法（Ｐｅｔｅｒｓ，Ｐ.ら、ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ.７
１，ｐｐ１５７−１６２（１９９０））にしたがって、
高速液体クロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフ
ィーを用いて行った。上記の培養・精製を１０００Ｌタ
ンクで行ったとき、湿重量６．２ｋｇの菌体から約４０
ｇの粉末精製のエクトインを得た。
【００１１】本発明で用いるＬ−アミノ酸とはＬ−グル
タミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニ
ン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソ
ロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリ
ン、Ｌ−セリン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトルリン、Ｌ
−チロシン、Ｌ−トリプトファンおよびＬ−ロイシンな
どのＬ−アミノ酸であり、ここに例示したＬ−アミノ酸
以外でも発酵法により生産されるＬ−アミノ酸であれば
本発明の方法は使用可能である。
タミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニ
ン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソ
ロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリ
ン、Ｌ−セリン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトルリン、Ｌ
−チロシン、Ｌ−トリプトファンおよびＬ−ロイシンな
どのＬ−アミノ酸であり、ここに例示したＬ−アミノ酸
以外でも発酵法により生産されるＬ−アミノ酸であれば
本発明の方法は使用可能である。
【００１２】本発明で用いるＬ−アミノ酸生産菌は上記
のＬ−アミノ酸を生産する微生物であればどのような微
生物を用いてもよい。
のＬ−アミノ酸を生産する微生物であればどのような微
生物を用いてもよい。
【００１３】具体的には、例えば下記に示すような生産
菌を用いることができる。
菌を用いることができる。
【００１４】 １ Ｌ−グルタミン酸生産菌 コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１４０２０ （ブレビバクテリウム・ディバリカタム） コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１４０６７（ＡＪ１５１０） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ１３８６９（ＡＪ１５１１） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−５０１２（ＡＪ１１３６０） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム ＡＴＣＣ１３８７０（ＡＪ１５５０） コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ１３０３２ コリネバクテリウム・サーモアミノゲネス ＦＥＲＭ ＢＰ−１５３９ ＦＥＲＭ ＢＰー１５４０
【００１５】 ２ Ｌ−リジン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−１７０８（ＡＪ３４１９） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−１７０９（ＡＪ３４２０） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１７１２（ＡＪ３４２５） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ ＢＰ−９９６（ＡＪ１２２２０）
【００１６】 ３ Ｌ−グルタミン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−５５０２（ＡＪ１１５７６） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム ＡＴＣＣ１３８７０（ＡＪ１５５０）
【００１７】 ４ Ｌ−アルギニン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−７６４２（ＡＪ１２１４４） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−７２７４（ＡＪ１２０９３）
【００１８】 ５ Ｌ−フェニルアラニン生産菌 コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ−Ｐ １８４４（ＡＪ３４３２） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ−Ｐ １９１６（ＡＪ３４３９） コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ２１６７０
【００１９】 ６ Ｌ−スレオニン生産菌 エセリヒア・コリ ＦＥＲＭ ＢＰ−１４８３（ＡＪ１１３３４） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−５８３５（ＡＪ１１６５４） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−４１６４（ＡＪ１１１７２） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−４１８０（ＡＪ１１１７８）
【００２０】 ７ Ｌ−イソロイシン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−８０５（ＡＪ３２７１） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−４１９２（ＡＪ１１１９０）
【００２１】 ８ Ｌ−ヒスチジン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ−Ｐ ２３１６（ＡＪ３６２０） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１５６５（ＡＪ３３８６） コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ１４２９７
【００２２】 ９ Ｌ−プロリン生産菌 コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−５３３２（ＡＪ１１５１２） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ ＢＰ−１２１９（ＡＪ１１２２５） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−４３７２（ＡＪ１１２２７）
【００２３】 １０ Ｌ−バリン生産菌 コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１９４５（ＡＪ３４４６） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−５１２（ＡＪ３２７６） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１９６８（ＡＪ３４５５）
【００２４】 １１ Ｌ−セリン生産菌 コリネバクテリウム・クリシノフイラム ＦＥＲＭ Ｐ−１６８８（ＡＪ３４１４） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１３７１（ＡＪ３３６０） シュードモナス・メガルブエッセンス ＦＥＲＭ Ｐ−４５３２（ＡＪ１１２６２）
【００２５】 １２ Ｌ−オルニチン生産菌 コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ− ５９３６（ＡＪ１１６７８） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−５６４４（ＡＪ１１５８９）
【００２６】 １３ Ｌ−シトルリン生産菌 コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−５６４３（ＡＪ１１５８８） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−１６４５（ＡＪ３４０８）
【００２７】 １４ Ｌ−チロシン生産菌 コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−５８３６（ＡＪ１１６５５） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−７９１４（ＡＪ１２１８０） パチルス・ズブチリス ＦＥＲＭ Ｐ−６７５８（ＡＪ１１９６８）
【００２８】 １５ Ｌ−トリプトファン生産菌 パチルス・ズブチリス ＦＥＲＭ Ｐ−５２８６（ＡＪ１１４８３） コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−７１２７（ＡＪ１２０４４） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ ＢＰ−４７５（ＡＪ１２０２２） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ Ｐ−７１２８（ＡＪ１２０５２）
【００２９】 １６ Ｌ−ロイシン生産菌 コリネバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＦＥＲＭ Ｐ−１７６９（ＡＪ３４２７） コリネバクテリウム・フラバム ＦＥＲＭ Ｐ−４２０（ＡＪ３２２６） コリネバクテリウム・グルタミクム ＦＥＲＭ ＢＰ−５３６０（ＡＪ３４５３）
【００３０】本発明で使用するＬ−アミノ酸生産基本培
地としては、従来より知られているＬ−アミノ酸生産菌
に適したＬ−アミノ酸生産培地が使用可能である。さら
に詳しくは、主炭素源にはグルコース、シュークロー
ス、フラクトース、マルトースや甘蔗糖蜜、甘蔗廃糖
蜜、てん菜糖蜜、てん菜廃糖蜜、粗糖、澱粉糖化液、セ
ルロース糖化液、パルプ糖化液、乳糖などの糖質類、酢
酸、プロピオン酸、安息香酸などの脂肪酸類、ピルビン
酸、クエン酸、コハク酸、フマール酸、リンゴ酸などの
有機酸類、エチルアルコール、ブチルアルコールなどの
アルコール類等を単独に又は混合して使用できる。更に
は目的のＬ−アミノ酸の生合成系路の前駆物質等用いる
こともできる。
地としては、従来より知られているＬ−アミノ酸生産菌
に適したＬ−アミノ酸生産培地が使用可能である。さら
に詳しくは、主炭素源にはグルコース、シュークロー
ス、フラクトース、マルトースや甘蔗糖蜜、甘蔗廃糖
蜜、てん菜糖蜜、てん菜廃糖蜜、粗糖、澱粉糖化液、セ
ルロース糖化液、パルプ糖化液、乳糖などの糖質類、酢
酸、プロピオン酸、安息香酸などの脂肪酸類、ピルビン
酸、クエン酸、コハク酸、フマール酸、リンゴ酸などの
有機酸類、エチルアルコール、ブチルアルコールなどの
アルコール類等を単独に又は混合して使用できる。更に
は目的のＬ−アミノ酸の生合成系路の前駆物質等用いる
こともできる。
【００３１】窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのよ
うなアンモニウム塩、尿素、液体アンモニア、アンモニ
ア水、更には有機窒素化合物であるアミノ酸混合物、コ
ーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母エキス、大豆加
水分解物、ペプトン、肉エキス等を使用することができ
る。無機塩としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、カリ塩、ナトリウム塩、鉄塩、マンガン塩、亜
鉛塩、銅塩その他の微量金属を必要に応じて使用する。
又、必要に応じ、ビオチン、サイアミン等のビタミン類
を使用する。
ンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのよ
うなアンモニウム塩、尿素、液体アンモニア、アンモニ
ア水、更には有機窒素化合物であるアミノ酸混合物、コ
ーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母エキス、大豆加
水分解物、ペプトン、肉エキス等を使用することができ
る。無機塩としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、カリ塩、ナトリウム塩、鉄塩、マンガン塩、亜
鉛塩、銅塩その他の微量金属を必要に応じて使用する。
又、必要に応じ、ビオチン、サイアミン等のビタミン類
を使用する。
【００３２】本発明における培養条件は通常のＬ−アミ
ノ酸発酵における条件と同じであり、目的とするＬ−ア
ミノ酸や使用する菌株間で多少異なるが培養温度は２０
〜５０℃が良く、特に２８〜３７℃が好適である。ｐＨ
は培養中、中性付近にコントロールする方が良好な結果
を得る。通気、攪拌、振とう培養などの好気的条件で培
養する培養期間は通常１〜７日間であるが、さらに連続
培養等により期間を延長することができる。各Ｌ−アミ
ノ酸発酵液からの各々のＬ−アミノ酸の単離方法はイオ
ン交換樹脂処理法、その他の既知の方法により回収され
る。
ノ酸発酵における条件と同じであり、目的とするＬ−ア
ミノ酸や使用する菌株間で多少異なるが培養温度は２０
〜５０℃が良く、特に２８〜３７℃が好適である。ｐＨ
は培養中、中性付近にコントロールする方が良好な結果
を得る。通気、攪拌、振とう培養などの好気的条件で培
養する培養期間は通常１〜７日間であるが、さらに連続
培養等により期間を延長することができる。各Ｌ−アミ
ノ酸発酵液からの各々のＬ−アミノ酸の単離方法はイオ
ン交換樹脂処理法、その他の既知の方法により回収され
る。
【００３３】本発明で用いられるエクトインは、塩類の
形態であっても良い。また、エクトインを含有する天然
物やエクトイン生産能を有する微生物、更には、エクト
インと目的アミノ酸の生産能を同時に有する微生物を用
いても、もちろん良い。
形態であっても良い。また、エクトインを含有する天然
物やエクトイン生産能を有する微生物、更には、エクト
インと目的アミノ酸の生産能を同時に有する微生物を用
いても、もちろん良い。
【００３４】本発明でのエクトインの使用方法はこれら
を単独にあるいは二種以上組合せて発酵培地中に０．０
１〜５％の濃度、好ましくは０．０５〜１．０％の濃度
になるように存在せしめれば良い。エクトインを発酵培
地中へ添加方法する場合は、あらかじめ発酵培地に加え
て培養を開始しても良いし、培養中に１回あるいは数回
にわけてあるいは連続的に途中添加しても良い。又種母
培養に加えておいて主発酵へ持ち込ませても良い。
を単独にあるいは二種以上組合せて発酵培地中に０．０
１〜５％の濃度、好ましくは０．０５〜１．０％の濃度
になるように存在せしめれば良い。エクトインを発酵培
地中へ添加方法する場合は、あらかじめ発酵培地に加え
て培養を開始しても良いし、培養中に１回あるいは数回
にわけてあるいは連続的に途中添加しても良い。又種母
培養に加えておいて主発酵へ持ち込ませても良い。
【００３５】又、本発明は、従来知られているアミノ酸
の生産を効率化する公知の技術、例えば、本願明細書の
従来の技術に記載したような抗生物質、界面活性剤又は
抗酸化剤添加方法、酸素富化方法、炭素源濃度制御法、
栄養素量の制御法、ビチオン添加方法、アスパラギン酸
添加方法、キノリン類添加法、Ｎ−メチルグリシン類添
加方法等、と組み合わせてももちろん良い。
の生産を効率化する公知の技術、例えば、本願明細書の
従来の技術に記載したような抗生物質、界面活性剤又は
抗酸化剤添加方法、酸素富化方法、炭素源濃度制御法、
栄養素量の制御法、ビチオン添加方法、アスパラギン酸
添加方法、キノリン類添加法、Ｎ−メチルグリシン類添
加方法等、と組み合わせてももちろん良い。
【００３６】
実施例１（Ｌ−グルタミン酸） グルコース５ｇ／ｄｌ、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ／ｄｌ、
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０.００
１ｇ／ｄｌ、(ＮＨ4)2ＳＯ4 ０.１５ｇ／ｄｌ、ビオチ
ン２０μｇ／ｄｌ、チアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ、大
豆蛋白加水分解物（窒素として）０．１５ｇ／ｄｌ、消
泡剤０．００５ｇ／ｄｌからなる種培養培地(種母培地)
３００ｍｌを１０００ｍｌ容ガラスジャーに張り込み、
１２０℃、３０分間オートクレーブ殺菌した。これにＬ
−グルタミン酸生産菌コリネバクテリウム・ラクトフェ
ルメンタムＡＴＣＣ１３８６９を接種し、温度を３１
℃、通気を１５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎
分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節しつつ２０
時間培養した。これを、種培養液とする。
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０.００
１ｇ／ｄｌ、(ＮＨ4)2ＳＯ4 ０.１５ｇ／ｄｌ、ビオチ
ン２０μｇ／ｄｌ、チアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ、大
豆蛋白加水分解物（窒素として）０．１５ｇ／ｄｌ、消
泡剤０．００５ｇ／ｄｌからなる種培養培地(種母培地)
３００ｍｌを１０００ｍｌ容ガラスジャーに張り込み、
１２０℃、３０分間オートクレーブ殺菌した。これにＬ
−グルタミン酸生産菌コリネバクテリウム・ラクトフェ
ルメンタムＡＴＣＣ１３８６９を接種し、温度を３１
℃、通気を１５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎
分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節しつつ２０
時間培養した。これを、種培養液とする。
【００３７】主培養培地Ａとして、甘蔗廃糖蜜糖５ｇ／
ｄｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０.２ｇ／ｄｌ（ａ）、ＭｇＳ
Ｏ4・４Ｈ2Ｏ ０.０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、大豆蛋白加水分
解物（窒素として）０．１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ビオチン３
０μｇ／ｄｌ（ｂ）、サイアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ
（ｂ）、消泡剤０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）を調製する。一
方、主培養培地Ａにエクトインを各々０．０５，０．
２，０．５ｇ／ｄｌの濃度になる様に加えて調製し、こ
れを主培養培地Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３とする。主培養培地
Ａ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の各々３００ｍｌ分（（ａ）組成
区分と（ｂ）組成区分を別々に１２０℃、３０分間オー
トクレーブした後に混合する）を、１０００ｍｌ容ガラ
スジャーに加え、これに上記種培養液３０ｍｌを接種
し、温度を３１℃、通気を３００ｍｌ／毎分、撹拌を１
４００回転／毎分、ｐＨを７.５（ＮＨ3ガス）に調節し
つつ培養を開始した。培養５時間目にポリオキシエチレ
ンソルビタンモノパルミテート０．４ｇ／ｄｌを添加
し、温度を３７℃にて培養を続けた。培養開始時の糖が
消費された時点で１２０℃、３０分間オートクレーブし
た甘蔗廃糖蜜糖４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地の消費に応
じて主培養培地に流加し、培地の総糖濃度が約２０ｇ／
ｄｌ相当に達する迄培養を続けた。
ｄｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０.２ｇ／ｄｌ（ａ）、ＭｇＳ
Ｏ4・４Ｈ2Ｏ ０.０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、大豆蛋白加水分
解物（窒素として）０．１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ビオチン３
０μｇ／ｄｌ（ｂ）、サイアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ
（ｂ）、消泡剤０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）を調製する。一
方、主培養培地Ａにエクトインを各々０．０５，０．
２，０．５ｇ／ｄｌの濃度になる様に加えて調製し、こ
れを主培養培地Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３とする。主培養培地
Ａ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の各々３００ｍｌ分（（ａ）組成
区分と（ｂ）組成区分を別々に１２０℃、３０分間オー
トクレーブした後に混合する）を、１０００ｍｌ容ガラ
スジャーに加え、これに上記種培養液３０ｍｌを接種
し、温度を３１℃、通気を３００ｍｌ／毎分、撹拌を１
４００回転／毎分、ｐＨを７.５（ＮＨ3ガス）に調節し
つつ培養を開始した。培養５時間目にポリオキシエチレ
ンソルビタンモノパルミテート０．４ｇ／ｄｌを添加
し、温度を３７℃にて培養を続けた。培養開始時の糖が
消費された時点で１２０℃、３０分間オートクレーブし
た甘蔗廃糖蜜糖４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地の消費に応
じて主培養培地に流加し、培地の総糖濃度が約２０ｇ／
ｄｌ相当に達する迄培養を続けた。
【００３８】その結果、次の第１表の発酵成績が得られ
た。
た。
【００３９】
【表１】
【００４０】実施例２（Ｌ−リジン） グルコース５ｇ／ｄｌ、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ／ｄｌ、
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．００
１ｇ／ｄｌ、ビオチン１０μｇ／ｄｌ、チアミン塩酸塩
５０μｇ／ｄｌ、大豆蛋白加水分解物(窒素として)０.
２ｇ／ｄｌ、消泡剤０.００５ｇ／ｄｌからなる種培養
培地３００ｍｌを１０００ｍｌ容ガラスジャーに張り込
み、１２０℃、３０分間オートクレーブ殺菌した。これ
にＬ−リジン生産菌コリネバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＦＥＲＭ ＢＰ−９９６を接種し、温度を３１
℃、通気を１５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎
分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節しつつ３０
時間培養した。これを種培養液とした。
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．００
１ｇ／ｄｌ、ビオチン１０μｇ／ｄｌ、チアミン塩酸塩
５０μｇ／ｄｌ、大豆蛋白加水分解物(窒素として)０.
２ｇ／ｄｌ、消泡剤０.００５ｇ／ｄｌからなる種培養
培地３００ｍｌを１０００ｍｌ容ガラスジャーに張り込
み、１２０℃、３０分間オートクレーブ殺菌した。これ
にＬ−リジン生産菌コリネバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＦＥＲＭ ＢＰ−９９６を接種し、温度を３１
℃、通気を１５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎
分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節しつつ３０
時間培養した。これを種培養液とした。
【００４１】主培養培地Ａとして、グルコース５ｇ／ｄ
ｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ／ｄｌ（ａ）、ＭｇＳ
Ｏ4・４Ｈ2Ｏ ０.０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、ＦｅＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ０．００１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ
０．００１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ビオチン１０もしくは３０
μｇ／ｄｌ（ｂ）、サイアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ
（ｂ）、大豆蛋白加水分解物（窒素として）０．２０ｇ
／ｄｌ（ｂ）、(ＮＨ4)2ＳＯ4 ４ｇ／ｄｌ(ｃ)、消泡剤
０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）として調製する。一方、主培養
培地Ａにエクトインを０．２ｇ／ｄｌの濃度になる様に
加え調製したものを主培養培地Ｂとする。主培養培地
Ａ、Ｂの各３００ｍｌ分（（ａ）組成区分、（ｂ）組成
区分、（ｃ）組成区分を別々に１２０℃、３０分間オー
トクレーブした後に混合する）を、１０００ｍｌ容ガラ
スジャーに加え、これに上記種培養液３０ｍｌを接種
し、温度を３１℃、通気を３００ｍｌ／毎分、撹拌を１
２００回転／毎分、ｐＨを７.０(ＮＨ3ガス)に調節しつ
つ培養を開始した。培養開始時の糖が消費された時点
で、１２０℃、３０分間オートクレーブしたグルコース
４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地の糖の消費に応じて主培養
培地に流加し、培地の総糖濃度が約２０ｇ／ｄｌ相当に
達する迄培養を続けた。
ｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ／ｄｌ（ａ）、ＭｇＳ
Ｏ4・４Ｈ2Ｏ ０.０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、ＦｅＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ０．００１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ
０．００１ｇ／ｄｌ（ｂ）、ビオチン１０もしくは３０
μｇ／ｄｌ（ｂ）、サイアミン塩酸塩５０μｇ／ｄｌ
（ｂ）、大豆蛋白加水分解物（窒素として）０．２０ｇ
／ｄｌ（ｂ）、(ＮＨ4)2ＳＯ4 ４ｇ／ｄｌ(ｃ)、消泡剤
０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）として調製する。一方、主培養
培地Ａにエクトインを０．２ｇ／ｄｌの濃度になる様に
加え調製したものを主培養培地Ｂとする。主培養培地
Ａ、Ｂの各３００ｍｌ分（（ａ）組成区分、（ｂ）組成
区分、（ｃ）組成区分を別々に１２０℃、３０分間オー
トクレーブした後に混合する）を、１０００ｍｌ容ガラ
スジャーに加え、これに上記種培養液３０ｍｌを接種
し、温度を３１℃、通気を３００ｍｌ／毎分、撹拌を１
２００回転／毎分、ｐＨを７.０(ＮＨ3ガス)に調節しつ
つ培養を開始した。培養開始時の糖が消費された時点
で、１２０℃、３０分間オートクレーブしたグルコース
４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地の糖の消費に応じて主培養
培地に流加し、培地の総糖濃度が約２０ｇ／ｄｌ相当に
達する迄培養を続けた。
【００４２】その結果、次の第２表の発酵成績が得られ
た。
た。
【００４３】
【表２】
【００４４】実施例３（Ｌ−トリプトファン） グルコース３ｇ／ｄｌ、ＫＨ2ＰＯ4 ０．１ｇ／ｄｌ、
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ ０.００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．０
０１ｇ／ｄｌ、大豆蛋白加水分解物（窒素として）０．
０５ｇ／ｄｌ、ＮＨ4Ｃｌ ０.３ｇ／ｄｌ、消泡剤０.０
０５ｇ／ｄｌからなる種培養培地３００ｍｌを１０００
ｍｌ容ガラスジャーに張り込み、１２０℃、３０分間オ
ートクレーブ殺菌した。これにＬ−トリプトファン生産
菌パチルス・ズブチリスＦＥＲＭＰ−５２８６を接種
し、温度を３３℃、通気を７５ｍｌ／毎分、撹拌を８０
０回転／毎分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節
しつつ４０時間培養した。これを種培養液とした。
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５ｇ／ｄｌ、ＦｅＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ ０.００１ｇ／ｄｌ、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．０
０１ｇ／ｄｌ、大豆蛋白加水分解物（窒素として）０．
０５ｇ／ｄｌ、ＮＨ4Ｃｌ ０.３ｇ／ｄｌ、消泡剤０.０
０５ｇ／ｄｌからなる種培養培地３００ｍｌを１０００
ｍｌ容ガラスジャーに張り込み、１２０℃、３０分間オ
ートクレーブ殺菌した。これにＬ−トリプトファン生産
菌パチルス・ズブチリスＦＥＲＭＰ−５２８６を接種
し、温度を３３℃、通気を７５ｍｌ／毎分、撹拌を８０
０回転／毎分、ｐＨを７.０（ＮＨ3ガスによる）に調節
しつつ４０時間培養した。これを種培養液とした。
【００４５】主培養培地Ａとして、グルコース２０ｇ／
ｄｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０.１５ｇ／ｄｌ（ａ）、Ｍｇ
ＳＯ4・４Ｈ2Ｏ ０.４ｇ／ｄｌ（ｂ）、大豆蛋白加水分
解物（窒素として）０．０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、消泡剤
０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）を調製する。一方、主培養培地
Ａにエクトインを０．２ｇ／ｄｌの濃度になる様に加え
調製したものを主培養培地Ｂとする。主培養培地Ａ、Ｂ
の各３００ｍｌ分（(ａ)組成区分、(ｂ)組成区分を別々
に１２０℃、３０分間オートクレーブした後に混合す
る）を、１０００ｍｌ容ガラスジャーに加え、これに上
記種培養液３０ｍｌを接種し、温度を３１℃、通気を２
５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎分、ｐＨを
６.７(ＮＨ3ガス)に調節しつつ培養を開始した。培養開
始時の糖が消費された時点で、１２０℃、３０分間オー
トクレーブしたグルコース４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地
の糖の消費に応じて主培養培地に流加し、培地の総糖濃
度が約２５ｇ／ｄｌ相当に達する迄培養を続けた。
ｄｌ（ａ）、ＫＨ2ＰＯ4 ０.１５ｇ／ｄｌ（ａ）、Ｍｇ
ＳＯ4・４Ｈ2Ｏ ０.４ｇ／ｄｌ（ｂ）、大豆蛋白加水分
解物（窒素として）０．０５ｇ／ｄｌ（ｂ）、消泡剤
０．０１ｇ／ｄｌ（ａ）を調製する。一方、主培養培地
Ａにエクトインを０．２ｇ／ｄｌの濃度になる様に加え
調製したものを主培養培地Ｂとする。主培養培地Ａ、Ｂ
の各３００ｍｌ分（(ａ)組成区分、(ｂ)組成区分を別々
に１２０℃、３０分間オートクレーブした後に混合す
る）を、１０００ｍｌ容ガラスジャーに加え、これに上
記種培養液３０ｍｌを接種し、温度を３１℃、通気を２
５０ｍｌ／毎分、撹拌を１０００回転／毎分、ｐＨを
６.７(ＮＨ3ガス)に調節しつつ培養を開始した。培養開
始時の糖が消費された時点で、１２０℃、３０分間オー
トクレーブしたグルコース４０ｇ／ｄｌ液を主培養培地
の糖の消費に応じて主培養培地に流加し、培地の総糖濃
度が約２５ｇ／ｄｌ相当に達する迄培養を続けた。
【００４６】その結果、次の第３表の発酵成績が得られ
た。
た。
【００４７】
【表３】
【００４８】
【発明の効果】このように、エクトインは、Ｌ−アミノ
酸の発酵液中の蓄積濃度を高めること、培養時間を短縮
すること、また主原料に対する収率を高めることを可能
にする。即ち、エクトインはＬ−アミノ酸の単位バッチ
当りの収量を高め、単位設備単位期間当りのバッチ数を
増加させ、かつ単位Ｌ−アミノ酸当りの主原料を低下さ
せることを可能にする。また、Ｌ−アミノ酸の蓄積濃度
を高めることはＬ−アミノ酸の分離回収・精製工程を簡
略化させることも可能にする。このように、エクトイン
はＬ−アミノ酸の工業的生産に於いて主副原料コスト、
エネルギーコスト、生産設備コストを低下させ、かつ生
産供給能力を高めることを可能にする極めて産業上有用
性の高い方法である。
酸の発酵液中の蓄積濃度を高めること、培養時間を短縮
すること、また主原料に対する収率を高めることを可能
にする。即ち、エクトインはＬ−アミノ酸の単位バッチ
当りの収量を高め、単位設備単位期間当りのバッチ数を
増加させ、かつ単位Ｌ−アミノ酸当りの主原料を低下さ
せることを可能にする。また、Ｌ−アミノ酸の蓄積濃度
を高めることはＬ−アミノ酸の分離回収・精製工程を簡
略化させることも可能にする。このように、エクトイン
はＬ−アミノ酸の工業的生産に於いて主副原料コスト、
エネルギーコスト、生産設備コストを低下させ、かつ生
産供給能力を高めることを可能にする極めて産業上有用
性の高い方法である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 13/14 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 13/22 Ｃ１２Ｒ 1:125） (72)発明者 木村 英一郎 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社生産技術研究所内 (72)発明者 豊田 康裕 大阪府松原市天美南３−14−７ (72)発明者 柴田 征一 大阪府富田林市新青葉丘町７−５
Claims (1)
- 【請求項１】 Ｌ−アミノ酸生産能を有する微生物をエ
クトイン存在下で培養し、Ｌ−アミノ酸を培養液中に生
成せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法によ
るＬ−アミノ酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8355996A JPH09271382A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | エクトインを用いるｌ−アミノ酸の発酵法による製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8355996A JPH09271382A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | エクトインを用いるｌ−アミノ酸の発酵法による製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09271382A true JPH09271382A (ja) | 1997-10-21 |
Family
ID=13805880
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8355996A Pending JPH09271382A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | エクトインを用いるｌ−アミノ酸の発酵法による製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09271382A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001072701A (ja) * | 1999-06-29 | 2001-03-21 | Ajinomoto Co Inc | タピオカ澱粉の製造方法及びアミノ酸の発酵生産方法 |
| JP2006061039A (ja) * | 2004-08-25 | 2006-03-09 | Chisso Corp | ジピコリン酸の製造法 |
| CN109589275A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-04-09 | 山东天晟生物科技有限公司 | 依克多因在维持皮肤微生态平衡中的用途 |
-
1996
- 1996-04-05 JP JP8355996A patent/JPH09271382A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001072701A (ja) * | 1999-06-29 | 2001-03-21 | Ajinomoto Co Inc | タピオカ澱粉の製造方法及びアミノ酸の発酵生産方法 |
| JP2006061039A (ja) * | 2004-08-25 | 2006-03-09 | Chisso Corp | ジピコリン酸の製造法 |
| CN109589275A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-04-09 | 山东天晟生物科技有限公司 | 依克多因在维持皮肤微生态平衡中的用途 |
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