JPS59173090A - Ｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
Ｌ−グルタミン酸の製造法Info
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- JPS59173090A JPS59173090A JP58046712A JP4671283A JPS59173090A JP S59173090 A JPS59173090 A JP S59173090A JP 58046712 A JP58046712 A JP 58046712A JP 4671283 A JP4671283 A JP 4671283A JP S59173090 A JPS59173090 A JP S59173090A
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、Ｌ−グルタミン酸の製造法に関する。
Ｌ−グルタミン酸を醗酵法により工業的に生産する方法
としては、種々の方法が提案され、なかでも、生育にオ
レイン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタ
ミン酸生産菌を用いて醗酵法によｐＬ−グルタミン酸を
工業的に有利に製造する方法が提案されているが、本発
明者らは、さらに収率の高いＬ−グルタミン酸の生産方
法を確立する目的で鋭意研究したところ、生育にオレイ
ン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタミン
酸生産菌を用い、培地にオレイン酸および過剰量のビオ
チンを含有せしめ、さらに炭素源として糖質と酢酸とを
特定の割合で培地に含有せしめ、該生産菌を培養するｌ
ことによシ、炭素源からのＬ−グルタミン酸への変換収
率が顕著に高いことを見い出し、これに基づいてさらに
研究した結果、本発明を完成した。
としては、種々の方法が提案され、なかでも、生育にオ
レイン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタ
ミン酸生産菌を用いて醗酵法によｐＬ−グルタミン酸を
工業的に有利に製造する方法が提案されているが、本発
明者らは、さらに収率の高いＬ−グルタミン酸の生産方
法を確立する目的で鋭意研究したところ、生育にオレイ
ン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタミン
酸生産菌を用い、培地にオレイン酸および過剰量のビオ
チンを含有せしめ、さらに炭素源として糖質と酢酸とを
特定の割合で培地に含有せしめ、該生産菌を培養するｌ
ことによシ、炭素源からのＬ−グルタミン酸への変換収
率が顕著に高いことを見い出し、これに基づいてさらに
研究した結果、本発明を完成した。
本発明は、生育にオレイン酸を要求するがビオチンを要
求しないＬ−グルタミン酸生産菌を、オレイン酸および
１００μｇ／１ｉｔｅｒ以上のビオチンを含む培地で炭
素源として糖質と酢酸とを重量比で約８０：２０ないし
４０：６０の範囲に保ちつつ培養することを特徴とする
Ｌ−グルタミン酸の製造法である。
求しないＬ−グルタミン酸生産菌を、オレイン酸および
１００μｇ／１ｉｔｅｒ以上のビオチンを含む培地で炭
素源として糖質と酢酸とを重量比で約８０：２０ないし
４０：６０の範囲に保ちつつ培養することを特徴とする
Ｌ−グルタミン酸の製造法である。
本発明の方法に用いられる微生物は、その生育にオレイ
ン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタミン
酸生産菌（以下、本発明のＬ−グルタミン酸生産菌と称
することもある。）であり、その分類学上の位置はいか
なるものであってもよい。
ン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ−グルタミン
酸生産菌（以下、本発明のＬ−グルタミン酸生産菌と称
することもある。）であり、その分類学上の位置はいか
なるものであってもよい。
本発明者らはそのような微生物の中でもブレビバクテリ
ウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属およびコリネ
バクテリウム（ＣｏｒｙｎｅｂＥＬｃｔｅｒｉｕｍ ）
属に属する微生物が本発明の目的に照らしてとシわけ有
利に用いられることを明らかにした。さらに具体的には
、ブレビバクテリウム・チオゲニタリス（Ｂ ｒｅｖ。
ウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属およびコリネ
バクテリウム（ＣｏｒｙｎｅｂＥＬｃｔｅｒｉｕｍ ）
属に属する微生物が本発明の目的に照らしてとシわけ有
利に用いられることを明らかにした。さらに具体的には
、ブレビバクテリウム・チオゲニタリス（Ｂ ｒｅｖ。
ｔｈｉｏｇｅｎｉｔａｌｉｓ ） Ｄ −２４８、ブレ
ビバクテリウム・フラブム（Ｂｒｅｖ、 ｆｌａｖｕｍ
） ＢＮ −１１，コリネバクテリウム・グルタミン
酸（Ｃｏｒｙ、 ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ）、Ｊｏ、？
ｊ ’ｉ Ｗａなどが本発明のＬ−グルタミン酸生産菌の代表的な
ものとして挙げられる。
ビバクテリウム・フラブム（Ｂｒｅｖ、 ｆｌａｖｕｍ
） ＢＮ −１１，コリネバクテリウム・グルタミン
酸（Ｃｏｒｙ、 ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ）、Ｊｏ、？
ｊ ’ｉ Ｗａなどが本発明のＬ−グルタミン酸生産菌の代表的な
ものとして挙げられる。
上記微生物は、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）および通
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＢＩ ）
にそれぞれ寄託されている。それらの受託番号および受
託臼を第１表に示す。
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＢＩ ）
にそれぞれ寄託されている。それらの受託番号および受
託臼を第１表に示す。
第１表
上記微生物において、ブレビバクテリウム・チオゲニタ
リスの菌学的性質は、生育にオレイン酸を要求しビオチ
ンを要求しない点を除き、特公昭４５−９４２号公報に
記載のそれと同じである。
リスの菌学的性質は、生育にオレイン酸を要求しビオチ
ンを要求しない点を除き、特公昭４５−９４２号公報に
記載のそれと同じである。
ブレビバクテリウム・フラブムの菌学的性質は、生育に
オレイン酸を要求しビオチンを要求しない点を除き、特
公昭３９−１７３４８号公報に記載のそれと同じである
。コリネバクテリウム・グルタミクムの菌学的性質は、
生育にオレイン酸を要求しビオチンを要求しない点を除
き、日本農芸化学会誌第３９巻３２８頁（１９６５年）
に記載のそれと同じである。
オレイン酸を要求しビオチンを要求しない点を除き、特
公昭３９−１７３４８号公報に記載のそれと同じである
。コリネバクテリウム・グルタミクムの菌学的性質は、
生育にオレイン酸を要求しビオチンを要求しない点を除
き、日本農芸化学会誌第３９巻３２８頁（１９６５年）
に記載のそれと同じである。
一般に、ブレビバクテリウム属菌およびコリネバクテリ
ウム属菌は、その性状が変化しやすく、たとえば、自然
的にあるいはＸ線照射、紫外線照射、放射線照射２人工
変異剤を用いる人工変異手段などで容易に変異し得る。
ウム属菌は、その性状が変化しやすく、たとえば、自然
的にあるいはＸ線照射、紫外線照射、放射線照射２人工
変異剤を用いる人工変異手段などで容易に変異し得る。
このような変異株であっても、生育にオレイン酸を要求
するがビオチンを要求せず、Ｌ−グルタミン酸生産能を
有するものはいずれも本発明の方法に使用し得る。
するがビオチンを要求せず、Ｌ−グルタミン酸生産能を
有するものはいずれも本発明の方法に使用し得る。
本発明方法においては、培地にオレイン酸が添加される
が、その量は、オレイン酸として約６０Ｗ／ｌ培地以上
、さらに好ましくは約６０〜Ｂ００ｔｌｆ／／ｌ培地で
ある。オレイン酸は、初発培地に添加されるだけで充分
であるが、培養途中でも上記濃度になるように添加して
もよい。
が、その量は、オレイン酸として約６０Ｗ／ｌ培地以上
、さらに好ましくは約６０〜Ｂ００ｔｌｆ／／ｌ培地で
ある。オレイン酸は、初発培地に添加されるだけで充分
であるが、培養途中でも上記濃度になるように添加して
もよい。
本発明方法において用いられるオレイン酸としては、オ
レイン酸それ自体でもよいが、その塩類。
レイン酸それ自体でもよいが、その塩類。
そのエステル類、オレイン酸含有物でもよい。オレイン
酸の塩類としては、たとえばナトリウム塩。
酸の塩類としては、たとえばナトリウム塩。
カリウム塩、マグネシウム塩などが挙げられる。
オレイン酸のエステル類としてはたとえばソルビタンモ
ノオレエート、ホリオキシエチレンソ／Ｌ／？”タンモ
ノオレエート、ポリオキシエチレングツイコールモノオ
レエート、あるいはこれらのセスキオレエート、トリオ
レエートなどが挙げられる。
ノオレエート、ホリオキシエチレンソ／Ｌ／？”タンモ
ノオレエート、ポリオキシエチレングツイコールモノオ
レエート、あるいはこれらのセスキオレエート、トリオ
レエートなどが挙げられる。
該オレイン酸含有物としてはたとえばラードオイル、油
脂などが挙げられる。
脂などが挙げられる。
本発明方法において、ビオチンおよび（または）ビオチ
ン作用物質がビオチンとして培地中に約１００μｐ／Ａ
ｉｔｅｒ以上、さらに好ましくは約２００〜５００ ｉ
ｌｌ／ ｔｉｔｅｒとなるように含有される。ビオチン
は、初発培地に添加されるだけで充分であるが、培養途
中でも上記濃度になるように添加してもよい一 本発明においては、培地中の炭素源として糖質と酢酸と
が使用され、その使用方法としては、初ニジ の範囲、好ましくぼＹ’ｏ：ａｏから５０：５０の範囲
に保つ方法が採用される。
ン作用物質がビオチンとして培地中に約１００μｐ／Ａ
ｉｔｅｒ以上、さらに好ましくは約２００〜５００ ｉ
ｌｌ／ ｔｉｔｅｒとなるように含有される。ビオチン
は、初発培地に添加されるだけで充分であるが、培養途
中でも上記濃度になるように添加してもよい一 本発明においては、培地中の炭素源として糖質と酢酸と
が使用され、その使用方法としては、初ニジ の範囲、好ましくぼＹ’ｏ：ａｏから５０：５０の範囲
に保つ方法が採用される。
糖質と酢酸との添加方法としては、培地中に存在する両
者が上記範囲と々るようにすればよい。
者が上記範囲と々るようにすればよい。
したがって、両者を同時に培地に添加してもよいし、一
方が消費されたとき、上記範囲となるように該一方の物
質を添加してもよい。要は、培地中に糖質と酢酸とが上
記範囲で存在していればよい。
方が消費されたとき、上記範囲となるように該一方の物
質を添加してもよい。要は、培地中に糖質と酢酸とが上
記範囲で存在していればよい。
本発明方法に使用される糖質としては、本発明のＬ−グ
ルタミン酸生産蘭が該糖質を資化してＬ−グルタミン酸
を生成するものであればいずれでもよい。該糖質の例と
しては、たとえばグルコース、フフフトース、シューク
ロース、 粗糖、ｌｆｌ。
ルタミン酸生産蘭が該糖質を資化してＬ−グルタミン酸
を生成するものであればいずれでもよい。該糖質の例と
しては、たとえばグルコース、フフフトース、シューク
ロース、 粗糖、ｌｆｌ。
各種殿粉（例、タピオカ、サゴヤシ、甘蔗）の糖化液な
どが挙げられ１．−トシのシ炙、谷、均τｆ、ｊ・・。
どが挙げられ１．−トシのシ炙、谷、均τｆ、ｊ・・。
本発明方法において添加される酢酸の量は、初発培地に
約２％（Ｗ／Ｖ ）以下の濃度となる量であシ、さらに
好ましくは約１％（Ｗ／Ｖ ）以下の濃度となる量であ
る。培養途中では、培地中の残存酢酸量が約１％（Ｗ／
Ｖ ）を越えないように酢酸を培地に添加する。本発明
方法において用いられる酢酸としては、酢酸自体でもよ
いが、その塩類（例、ナトリウム塩、カリウム塩、アン
モニウム塩など）でもよく、またこれらの混合物でもよ
い。
約２％（Ｗ／Ｖ ）以下の濃度となる量であシ、さらに
好ましくは約１％（Ｗ／Ｖ ）以下の濃度となる量であ
る。培養途中では、培地中の残存酢酸量が約１％（Ｗ／
Ｖ ）を越えないように酢酸を培地に添加する。本発明
方法において用いられる酢酸としては、酢酸自体でもよ
いが、その塩類（例、ナトリウム塩、カリウム塩、アン
モニウム塩など）でもよく、またこれらの混合物でもよ
い。
本発明の方法に用いられる培地には、上記特定の炭素源
、オレイン酸およびビオチン以外に、Ｌ−グルタミン酸
発酵において通常使用される培地成分、すなわち各種の
有機および無機窒素化合物。
、オレイン酸およびビオチン以外に、Ｌ−グルタミン酸
発酵において通常使用される培地成分、すなわち各種の
有機および無機窒素化合物。
熊機塩金属類、ビタミン類などが必要に応じ添加される
。さらに消泡剤を培地に添加してもよい。
。さらに消泡剤を培地に添加してもよい。
また、培養方法においても、従来の方法と格別具なる方
法を採用する必要はなく、培養温度約２５〜３７℃の範
囲で通気攪拌培養を行う。培養中に培養液のｐＨは、ア
ンモニアガス、アンモニア水、尿素、水酸化ナトリウム
、水酸化カリウムなどのアルカリをそれぞれ単独または
併用して約７〜８．５の範囲に保てばよい。
法を採用する必要はなく、培養温度約２５〜３７℃の範
囲で通気攪拌培養を行う。培養中に培養液のｐＨは、ア
ンモニアガス、アンモニア水、尿素、水酸化ナトリウム
、水酸化カリウムなどのアルカリをそれぞれ単独または
併用して約７〜８．５の範囲に保てばよい。
培養物からＬ−グルタミン酸を採取する方法は、従来か
ら公知の方法を採用することができる。
ら公知の方法を採用することができる。
本発明の方法によると、炭素源からのＬ−グルタミン酸
への変換率が高いので、収率良くＬ−グルタミン酸を製
造することができる。したがって、分離採取工程が容易
であり、また生産コストを下げることができる。
への変換率が高いので、収率良くＬ−グルタミン酸を製
造することができる。したがって、分離採取工程が容易
であり、また生産コストを下げることができる。
以下に参考例および実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
参考例１
１ ｔｉｔｅｒあた９、グ７レコース２０ｇ、尿素２ｆ
。
。
ＫＨ２ＰＯ４１ｇ、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４１１
、コーンステイープリカー２０ ！ｉ’ 、 ＣａＣＯ
３１ｙ、 ＣｕＳＯ４・５ａ２０４ Ｍｆ 、 ＦｅＳ
Ｏ４’ ７Ｈ２０１５０”ｌｆｌおよびオレイン酸ナト
リウム３００ダを含有する種培地２０ｍ１を２００１１
１１容三角フラスコに分注、滅菌し、これにプレビバク
テリウムチオゲニタリス］） −２４８（工Ｆｏ−１２
３３１，ｒＥｐｕ ｐ７（７２７）の斜面培養物１白金
耳を接種して、２８℃、２０Ｏｒｐｍのロータリーシェ
カーで１８時間培養し、種培養とした。
、コーンステイープリカー２０ ！ｉ’ 、 ＣａＣＯ
３１ｙ、 ＣｕＳＯ４・５ａ２０４ Ｍｆ 、 ＦｅＳ
Ｏ４’ ７Ｈ２０１５０”ｌｆｌおよびオレイン酸ナト
リウム３００ダを含有する種培地２０ｍ１を２００１１
１１容三角フラスコに分注、滅菌し、これにプレビバク
テリウムチオゲニタリス］） −２４８（工Ｆｏ−１２
３３１，ｒＥｐｕ ｐ７（７２７）の斜面培養物１白金
耳を接種して、２８℃、２０Ｏｒｐｍのロータリーシェ
カーで１８時間培養し、種培養とした。
別に１ ｔｉｔｅｒあたり第２表に示す組成の炭素源１
％、 ＫＨ２ＰＯ４１，５ｆ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
００，４！ 。
％、 ＫＨ２ＰＯ４１，５ｆ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
００，４！ 。
コーンステイープリカー２９ 、 Ｍｎ５Ｏ４ａ４〜６
Ｈ６Ｈ２Ｏ５，ビオチン２００μｆ、オレイン酸ナトリ
ウム２００１１ｙおよびフェノールレッド１０岬を含有
する主培地（ｐＨ７，２） ５０屑ｌずつを２００ｔｌ
容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し、これらに上記種
培養の２．５ｍｌずつをそれぞれ移植して、３２℃。
Ｈ６Ｈ２Ｏ５，ビオチン２００μｆ、オレイン酸ナトリ
ウム２００１１ｙおよびフェノールレッド１０岬を含有
する主培地（ｐＨ７，２） ５０屑ｌずつを２００ｔｌ
容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し、これらに上記種
培養の２．５ｍｌずつをそれぞれ移植して、３２℃。
２０ Ｏｒｐｍのロータリーシェーカーで培養を開始し
た。培養開始後８時間目より、１時間に１回の割合で初
発炭素源に対応する組成の炭素源を初発培地に対し０．
４％（Ｗ／Ｖ ）になるように計３５液の５０倍希釈液
の５９０ ｎｍ における吸光度で表示した。また、Ｌ
−グルタミン酸はグルタミン酸脱炭酸酵素を用いるワー
ルプルグ検圧法で測定した。
た。培養開始後８時間目より、１時間に１回の割合で初
発炭素源に対応する組成の炭素源を初発培地に対し０．
４％（Ｗ／Ｖ ）になるように計３５液の５０倍希釈液
の５９０ ｎｍ における吸光度で表示した。また、Ｌ
−グルタミン酸はグルタミン酸脱炭酸酵素を用いるワー
ルプルグ検圧法で測定した。
第２表
＊ 重量比
＊＊ 培養液の５０倍希釈液の５９０ ｎｍでの吸光度
上記の第２表から明らかなごとく、グ７レコースまたは
酢酸を単独で用いた場合に比べ、両者を重量比で８０：
２０から４０：６０の範囲、とシわけ７０：３０から５
０：５０の範囲で併用するととにより、Ｌ−グルタミン
酸収率は著しく向上する。
酢酸を単独で用いた場合に比べ、両者を重量比で８０：
２０から４０：６０の範囲、とシわけ７０：３０から５
０：５０の範囲で併用するととにより、Ｌ−グルタミン
酸収率は著しく向上する。
参考例２
１ ｔｉｔｅｒあたシ、グルコース６ｆ、酢酸アンモニ
ウム５．８１（酢酸として４ ｆ ） 、 ＫＨ２ＰＯ
４１，５ｙ。
ウム５．８１（酢酸として４ ｆ ） 、 ＫＨ２ＰＯ
４１，５ｙ。
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４ｆ 、コーンステイープリ
カー２ ｆ 、 Ｍｌ−１８０４・４〜６Ｈ２０５１Ｗ
、第３表に示す量のビオチン、オレイン酸ナトリウム
２００ダおよびフェノ−！レレッド１０岬を含有する主
培地（ｐＨ７，２）５０ｇ／ずつを２００ｇ／容ヒダ付
三角フラスコに分注、滅菌し、これらに参考例１と同様
にして調整した種培養の２．５ ｗｅずつをそれぞれ移
植して、３２℃、２０Ｏｒｐｍのロータリーシェーカー
で培養を開始した。培養開始後８時間目より、１時間に
１回の割合で計３５回、２４％（Ｗ／ｖ）グルコース溶
液０．５ ｍｌ （グルコースとして０．１２ｙ）と、
あらかじめアンモニア水でｐＨ５，５に調整した１６％
（Ｗ／Ｖ）酢酸溶液０．５ ｍｌ （酢酸として０．０
８ｙ）とを同時にフィードした。この間ｐＨはフェノ−
μレッドの色調を目安として３０９６苛性ソーダ溶液を
添加することによ、！ｌ） ７．２〜８．０の範囲に修
正した。培養の結果を第３表に示す。
カー２ ｆ 、 Ｍｌ−１８０４・４〜６Ｈ２０５１Ｗ
、第３表に示す量のビオチン、オレイン酸ナトリウム
２００ダおよびフェノ−！レレッド１０岬を含有する主
培地（ｐＨ７，２）５０ｇ／ずつを２００ｇ／容ヒダ付
三角フラスコに分注、滅菌し、これらに参考例１と同様
にして調整した種培養の２．５ ｗｅずつをそれぞれ移
植して、３２℃、２０Ｏｒｐｍのロータリーシェーカー
で培養を開始した。培養開始後８時間目より、１時間に
１回の割合で計３５回、２４％（Ｗ／ｖ）グルコース溶
液０．５ ｍｌ （グルコースとして０．１２ｙ）と、
あらかじめアンモニア水でｐＨ５，５に調整した１６％
（Ｗ／Ｖ）酢酸溶液０．５ ｍｌ （酢酸として０．０
８ｙ）とを同時にフィードした。この間ｐＨはフェノ−
μレッドの色調を目安として３０９６苛性ソーダ溶液を
添加することによ、！ｌ） ７．２〜８．０の範囲に修
正した。培養の結果を第３表に示す。
第３表
度
第３表から明らかなごとく、菌の生育はビオチンの影響
をほとんど受けず、むしろビオチン濃度が低いほど若干
良好になるが、Ｌ−グルタミン酸収率はビオチン濃度が
高くなるほど良好である。
をほとんど受けず、むしろビオチン濃度が低いほど若干
良好になるが、Ｌ−グルタミン酸収率はビオチン濃度が
高くなるほど良好である。
すなわち、高収率でＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ
るには、培地中に約１００μｆ ／ｌ ｉ ｔ ｅ ｒ
以上のビオチンを含有せしめることが必要であることが
分かる。
るには、培地中に約１００μｆ ／ｌ ｉ ｔ ｅ ｒ
以上のビオチンを含有せしめることが必要であることが
分かる。
実施例１
１ ｔｉｔｅｒあたシ、グルコース２０ｇ、尿素２１゜
ＫＨ２ＰＯ４１ｔ 、 ＭｇＳＯ４・７ Ｈ２Ｏ０，４
ｇ 、コーンステイープリカー２ Ｏｆ 、 ＣａＣＯ
３１ｆ 、 Ｃｕ５Ｏ＋ ・５Ｈ２０４Ｗ 、 ＦｅＳ
Ｏ４−’７Ｈ２０１５０Ｍｙおよびオレイン酸ナトリウ
ム３００ｑを含有する種培地２０ｇ／ずつを２０１）ｇ
ｌ容三角フラスコに分注、滅菌し、これらに第４表に示
す３種の菌を接種して、２８℃。
ＫＨ２ＰＯ４１ｔ 、 ＭｇＳＯ４・７ Ｈ２Ｏ０，４
ｇ 、コーンステイープリカー２ Ｏｆ 、 ＣａＣＯ
３１ｆ 、 Ｃｕ５Ｏ＋ ・５Ｈ２０４Ｗ 、 ＦｅＳ
Ｏ４−’７Ｈ２０１５０Ｍｙおよびオレイン酸ナトリウ
ム３００ｑを含有する種培地２０ｇ／ずつを２０１）ｇ
ｌ容三角フラスコに分注、滅菌し、これらに第４表に示
す３種の菌を接種して、２８℃。
２０ Ｏｒｐｍのロータリーシェカーで１８時間培養し
、種培養とした。
、種培養とした。
別に１ ｔｉｔｅｒあたす、グμコース６ｇ、酢酸アン
モ＝つＡ ５．８ ｆ （酢酸としテ４ ｆ ） 、
ＫＨ２Ｐ０゜１、５１ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，
４ｆ 、コーンステイープリカー２１ 、 Ｍｎ３Ｏ４
”４〜６ Ｈ２Ｏ５１１ｙ、ビオチン２００μｇ、オレ
イン酸ナトリウム２００１ｑおよびフェノールレッド１
０ｑを含有する主培地（ｐＨ７，２）５０℃ｇｌずつを
２００ｇ／容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し、これ
らに上記種培養の２．５ ｍｌずつをそれぞれ移植して
、３２℃、 ２０ Ｏｒｐｍのロータリーシェーカーで
培養を開始した。培養開始後８時間目より、１時間に１
回の割合で計３５回、２４％（ｗ／ｖ）グｌレコース溶
液０．５露ｌ（グルコースとして０．１２ｙ）と、あら
かじめアンモニア水でｐＨ５，５に調整した１６％（Ｗ
／Ｖ ）酢酸溶液０、５ ｔｎｌ （酢酸として０．０
８ｉを同時にフィードした。この間ｐＨはフェノールレ
ッドの色調を目安として３０％苛性ソーダ溶液を添加す
ることによシフ、２〜８．０の範囲に修正した。これら
の培養の結果は第４表に示すとおりである。
モ＝つＡ ５．８ ｆ （酢酸としテ４ ｆ ） 、
ＫＨ２Ｐ０゜１、５１ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，
４ｆ 、コーンステイープリカー２１ 、 Ｍｎ３Ｏ４
”４〜６ Ｈ２Ｏ５１１ｙ、ビオチン２００μｇ、オレ
イン酸ナトリウム２００１ｑおよびフェノールレッド１
０ｑを含有する主培地（ｐＨ７，２）５０℃ｇｌずつを
２００ｇ／容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し、これ
らに上記種培養の２．５ ｍｌずつをそれぞれ移植して
、３２℃、 ２０ Ｏｒｐｍのロータリーシェーカーで
培養を開始した。培養開始後８時間目より、１時間に１
回の割合で計３５回、２４％（ｗ／ｖ）グｌレコース溶
液０．５露ｌ（グルコースとして０．１２ｙ）と、あら
かじめアンモニア水でｐＨ５，５に調整した１６％（Ｗ
／Ｖ ）酢酸溶液０、５ ｔｎｌ （酢酸として０．０
８ｉを同時にフィードした。この間ｐＨはフェノールレ
ッドの色調を目安として３０％苛性ソーダ溶液を添加す
ることによシフ、２〜８．０の範囲に修正した。これら
の培養の結果は第４表に示すとおりである。
第４表
実施例２
ブレビバクテリウム・チオゲニタリスＤ−２４８（工Ｆ
Ｏ１，２３３１、ＦＥＲＭ Ｐ−〆り２／ ）を、主培
養に用いた炭素源のうち糖質原料をシュクロースとした
以外は実施例１と同様に培養した。使用した炭素源に対
するＬ−グルタミン酸敗率は７０．８％であった。
Ｏ１，２３３１、ＦＥＲＭ Ｐ−〆り２／ ）を、主培
養に用いた炭素源のうち糖質原料をシュクロースとした
以外は実施例１と同様に培養した。使用した炭素源に対
するＬ−グルタミン酸敗率は７０．８％であった。
実施例３
１ ｔｉｔｅｒあたシ、甘蔗殿粉酵素糖化液１２Ｆ（グ
ルコースとして）、酢酸アンモニウム１１．６１（酢酸
として８ ＩＩ ） 、 ＫＨ２ＰＯ４１，５ｆ 、
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４ｆ 、コーンステイープリ
カー２ｆ。
ルコースとして）、酢酸アンモニウム１１．６１（酢酸
として８ ＩＩ ） 、 ＫＨ２ＰＯ４１，５ｆ 、
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４ｆ 、コーンステイープリ
カー２ｆ。
ＭｎＳＯ４・４〜６ Ｈ２ｏ５１１ｆ、ビオチン２００
μＦ、オレイン酸ナトリウム１７５岬およびフェノール
レッド１０岬を含有する主培地（ｐＨ７，２） ５０ｘ
ｔｌを２００譚ｌ容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し
たものに、実施例１と同様にして得たブレビバクテリウ
ム・チオゲニタリスＤ−２４８（工ＦＯ１２ａ ａ １
、 ＦＥＲＮ Ｐ−〆２２／）の種培養２．５ ｔｅ
ｌを移植して培養を開始した。培養開始後１０時間目よ
り、１時間に１回の割合で計２６回、グルコース含量３
０９６（ｗ／ｖ ）の糖化液０．５ ｍｌ （グルコー
スとして０．１５ｙ）と、あらかじめアンモニア水でｐ
Ｈ５，５に調整した２０％（Ｗ／Ｖ ）酢酸溶液０．５
ｎｔｌ （酢酸として０．１ｇ）とを同時にフィード
した。この間ｐＨは３０％苛性ソーダ溶液を添加するこ
とにより、７．２〜８．０の範囲に修正した。
μＦ、オレイン酸ナトリウム１７５岬およびフェノール
レッド１０岬を含有する主培地（ｐＨ７，２） ５０ｘ
ｔｌを２００譚ｌ容ヒダ付三角フラスコに分注、滅菌し
たものに、実施例１と同様にして得たブレビバクテリウ
ム・チオゲニタリスＤ−２４８（工ＦＯ１２ａ ａ １
、 ＦＥＲＮ Ｐ−〆２２／）の種培養２．５ ｔｅ
ｌを移植して培養を開始した。培養開始後１０時間目よ
り、１時間に１回の割合で計２６回、グルコース含量３
０９６（ｗ／ｖ ）の糖化液０．５ ｍｌ （グルコー
スとして０．１５ｙ）と、あらかじめアンモニア水でｐ
Ｈ５，５に調整した２０％（Ｗ／Ｖ ）酢酸溶液０．５
ｎｔｌ （酢酸として０．１ｇ）とを同時にフィード
した。この間ｐＨは３０％苛性ソーダ溶液を添加するこ
とにより、７．２〜８．０の範囲に修正した。
使用した炭素源に対するＬ−グルタミン酸収率は６９．
２９６であった。
２９６であった。
実施例４
１ｔｉｌ、ｅｒあたシ、糖蜜１４ｙ（全糖として）。
酢酸アンモニウム８．’ｌｆＣ酢酸として６ｙ）。
ＫＨ２ＰＯ４１，５ｆ 、 ＭｇＳＯ４・７ Ｈ２Ｏ０
，４ｆ 、コーンステイープリカー１１１ 、 ＭｎＳ
Ｏ４−４〜ｅＨ２０５９，ビオチン１５０μｇおよびオ
レイン酸ナトリウム１５０りを含有する主培地（ｐＨ７
，２） ４ ｔｉｔｅｒを１０１容ジャーファーメンタ
−に仕込、滅菌し、これに実施例１と同様にして得たブ
レビバクテリウム・チオゲニタリスＤ−２４８（工ＦＯ
１２３３１゜ＦＥＲＭＰ−、（〕？ノ）の種培養２００
πｌを移植して、３２６Ｃ、５００ｒｐｍ 、通気ｉ！
、２ ｔｉｔｅｒ ／ ｍｉｎ、で培養を開始した。初
発炭素源がほぼ消費しつくされた時点より、初発液量に
対し全糖として０．１０５％（Ｗ／Ｖ）に相当する糖蜜
と、０．０４５％（Ｗ／Ｖ）に相当する酢酸とを、溶存
酸素濃度が上昇するたびに同時に添加しつつ炭素源の総
使用量が初発液量に対して１５％（Ｗ／Ｖ）になるまで
培養を続けた。この間ｐＨは７．３〜７．７の範囲に入
るように自動的にアンモニア水で調製した。培養は約３
０時間で終了し、このとき発酵液（６，１ｔｉｔｅｒ
）中に６２．５ Ｗ／ＭｌのＬ−グルタミン酸が蓄積し
ていた。したがって対使用炭素源収率は６８．５％であ
った。発酵液を常法にしたがって処理したところ、Ｌ−
グルタミン酸の粗結晶３２８ｇが得られた。
，４ｆ 、コーンステイープリカー１１１ 、 ＭｎＳ
Ｏ４−４〜ｅＨ２０５９，ビオチン１５０μｇおよびオ
レイン酸ナトリウム１５０りを含有する主培地（ｐＨ７
，２） ４ ｔｉｔｅｒを１０１容ジャーファーメンタ
−に仕込、滅菌し、これに実施例１と同様にして得たブ
レビバクテリウム・チオゲニタリスＤ−２４８（工ＦＯ
１２３３１゜ＦＥＲＭＰ−、（〕？ノ）の種培養２００
πｌを移植して、３２６Ｃ、５００ｒｐｍ 、通気ｉ！
、２ ｔｉｔｅｒ ／ ｍｉｎ、で培養を開始した。初
発炭素源がほぼ消費しつくされた時点より、初発液量に
対し全糖として０．１０５％（Ｗ／Ｖ）に相当する糖蜜
と、０．０４５％（Ｗ／Ｖ）に相当する酢酸とを、溶存
酸素濃度が上昇するたびに同時に添加しつつ炭素源の総
使用量が初発液量に対して１５％（Ｗ／Ｖ）になるまで
培養を続けた。この間ｐＨは７．３〜７．７の範囲に入
るように自動的にアンモニア水で調製した。培養は約３
０時間で終了し、このとき発酵液（６，１ｔｉｔｅｒ
）中に６２．５ Ｗ／ＭｌのＬ−グルタミン酸が蓄積し
ていた。したがって対使用炭素源収率は６８．５％であ
った。発酵液を常法にしたがって処理したところ、Ｌ−
グルタミン酸の粗結晶３２８ｇが得られた。
実施例５
１ ｔｉｔｅｒあたり、グルコース１２ｆ、酢酸アンモ
ニウム１１．６ｇ（酢酸として８ ｆ ） 、 ＫＨ２
ＰＯ４１、５ｆ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４ｆ
、コーンステイープリカー２ ｆ 、 ＭｎＳＯ４−４
〜６ Ｈ２Ｏ５Ｎ 、ビオチン２００μｆおよびオレイ
ン酸ナトリウム２００ｑを含有する主培地（ｐＨ７，２
） ４ ｔｉｔｅｒを１０１容ジャーファーメンタ−に
仕込、滅菌し、これに実施例１と同様にして得たブレビ
バクテリウム・チオゲニタリスＤ−２４８（ＩＦＯ１２
３３１，ＦＥＲＭＰ−１；？’？） ）ｏ種培養２０
０ｇ／を移植シテ、３２°Ｃ、５００ｒｐｍ 、通気量
２ ｔｉｔｅｒ ／ ｍｉｎで培養を開始した。以下、
実施例４の場合と同じ混合割合で糖蜜と酢酸（あらかじ
めアンモニア水でｐＨ５，５に調整した）とを、炭素源
の総使用量が１６％（Ｗ／Ｖ）になるまでフィードした
。但し、ｐＨ修正は３０％苛性ソーダを添加する方法に
よった。培養は約３６時間で終了し、このとき発酵液（
６，２ｔｉｔｅｒ ）中には６７．１ Ｍｌ／ｌｅｌの
Ｌ−グルタミン酸が蓄積していた。したがって対使用炭
素源収率は６５％であった。この発酵液から常法にした
がってＬ−グルタミン酸を回収したところ、粗結晶３７
０ｇが得られた。
ニウム１１．６ｇ（酢酸として８ ｆ ） 、 ＫＨ２
ＰＯ４１、５ｆ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４ｆ
、コーンステイープリカー２ ｆ 、 ＭｎＳＯ４−４
〜６ Ｈ２Ｏ５Ｎ 、ビオチン２００μｆおよびオレイ
ン酸ナトリウム２００ｑを含有する主培地（ｐＨ７，２
） ４ ｔｉｔｅｒを１０１容ジャーファーメンタ−に
仕込、滅菌し、これに実施例１と同様にして得たブレビ
バクテリウム・チオゲニタリスＤ−２４８（ＩＦＯ１２
３３１，ＦＥＲＭＰ−１；？’？） ）ｏ種培養２０
０ｇ／を移植シテ、３２°Ｃ、５００ｒｐｍ 、通気量
２ ｔｉｔｅｒ ／ ｍｉｎで培養を開始した。以下、
実施例４の場合と同じ混合割合で糖蜜と酢酸（あらかじ
めアンモニア水でｐＨ５，５に調整した）とを、炭素源
の総使用量が１６％（Ｗ／Ｖ）になるまでフィードした
。但し、ｐＨ修正は３０％苛性ソーダを添加する方法に
よった。培養は約３６時間で終了し、このとき発酵液（
６，２ｔｉｔｅｒ ）中には６７．１ Ｍｌ／ｌｅｌの
Ｌ−グルタミン酸が蓄積していた。したがって対使用炭
素源収率は６５％であった。この発酵液から常法にした
がってＬ−グルタミン酸を回収したところ、粗結晶３７
０ｇが得られた。
１９−
手 続 補 正 書（自発）
、１
昭和５９年３ 月 ６日
特許庁長官 殿
■、小事件表示
昭和５８ 年特許願第４６’Ｎ２ 号２、発明の名称
名 称（２９３）武田薬品工業株式会社代表者 倉
林 育 四 部４、代理人 住 所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号
武田薬品工業株式会社大阪工場内 ６、補正の内容 （１）明到書第４頁の第１表と第１１行との間に、以下
の記載を挿入する。
林 育 四 部４、代理人 住 所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号
武田薬品工業株式会社大阪工場内 ６、補正の内容 （１）明到書第４頁の第１表と第１１行との間に、以下
の記載を挿入する。
ｒＦＲ工への寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切換
えられて、下記の受託番号でＦ’Ｒ工に保管されている
。
えられて、下記の受託番号でＦ’Ｒ工に保管されている
。
（２）同書第９頁第１５行、第１５頁第４表、第１６頁
第３行、第１６頁第１９行、第１７頁第２０行、第１９
頁貯ｇ宕の「Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−６９８９」をｌ’−Ｆ
’ＥＲＭ ＢＰ−４３３Ｊにそれぞれ訂正する。
第３行、第１６頁第１９行、第１７頁第２０行、第１９
頁貯ｇ宕の「Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−６９８９」をｌ’−Ｆ
’ＥＲＭ ＢＰ−４３３Ｊにそれぞれ訂正する。
（３）同書第１５頁第４表の［Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−６９
９１」を「ＦＥＲＭ ＢＰ−４３５」に訂正する。
９１」を「ＦＥＲＭ ＢＰ−４３５」に訂正する。
（４）同書第１５頁第４表の［Ｆ’ｌｉ：ＲＭ Ｐ−
６９９０」を［ｒｇＲＭ ＢＰ−４３４Ｊに訂正する。
６９９０」を［ｒｇＲＭ ＢＰ−４３４Ｊに訂正する。
以上
受託番号変更届
１．事件の表示
昭和５８年特許願第４６７１２号
２、発明の名称
Ｌ−グルタミン酸の製造法
３、手続をした者
事件との関係 特許出願人
住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名 称 （２
９３） 武田薬品工業株式会社代表者 倉 林
育 四 部 ４、代理人 住 所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号５
、旧寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 １− ６、 旧受託番号 別紙のとおり ７、新寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ８、新受託番号 別紙のとおシ ９、添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面 ３通（２）別紙
１通以上 別紙 ＝２−
９３） 武田薬品工業株式会社代表者 倉 林
育 四 部 ４、代理人 住 所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号５
、旧寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 １− ６、 旧受託番号 別紙のとおり ７、新寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ８、新受託番号 別紙のとおシ ９、添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面 ３通（２）別紙
１通以上 別紙 ＝２−
Claims (1)
- 生育にオレイン酸を要求するがビオチンを要求しないＬ
−グルタミン酸生産菌を、オレイン酸および１００μｆ
／１ｉｔｅｒ以上のビオチンを含む培地で炭素源として
糖質と酢酸とを重量比で約８０：２０ないし４０：６０
の範囲に保ちつつ培養することを特徴とするＬ−グルタ
ミン酸の製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58046712A JPS59173090A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
| PH30382A PH21011A (en) | 1983-03-18 | 1984-03-12 | Method for producing l-glutamic acid |
| GB08406833A GB2136432B (en) | 1983-03-18 | 1984-03-15 | Fermentation method for producing l-glutamic acid |
| FR8404157A FR2542758B1 (fr) | 1983-03-18 | 1984-03-16 | Procede de preparation de l'acide l-glutamique |
| KR1019840001358A KR900005771B1 (ko) | 1983-03-18 | 1984-03-16 | L-글루탐산의 제조방법 |
| US06/924,141 US4728610A (en) | 1983-03-18 | 1986-10-27 | Method for producing L-glutamic acid |
| MY651/87A MY8700651A (en) | 1983-03-18 | 1987-12-30 | Fermentation method for producing l-glutamic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58046712A JPS59173090A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59173090A true JPS59173090A (ja) | 1984-09-29 |
| JPH0158955B2 JPH0158955B2 (ja) | 1989-12-14 |
Family
ID=12754961
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58046712A Granted JPS59173090A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4728610A (ja) |
| JP (1) | JPS59173090A (ja) |
| KR (1) | KR900005771B1 (ja) |
| FR (1) | FR2542758B1 (ja) |
| GB (1) | GB2136432B (ja) |
| MY (1) | MY8700651A (ja) |
| PH (1) | PH21011A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62289192A (ja) * | 1986-06-10 | 1987-12-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | アミノ酸の連続発酵生産方法 |
| WO1999054438A1 (fr) * | 1998-04-16 | 1999-10-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture microbienne avec activite de la glutaminase amelioree et son utilisation |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030124646A1 (en) * | 1998-04-16 | 2003-07-03 | Ajinomoto Co. Inc. | Microbial culture with enhanced glutaminase activity and utilization thereof |
| US8133714B2 (en) | 2007-09-27 | 2012-03-13 | Evonik Degussa Gmbh | Process for the fermentative preparation of organic chemical compounds using coryneform bacteria in which the SugR gene is present in attenuated form |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3326775A (en) * | 1961-04-24 | 1967-06-20 | Commercial Solvents Corp | Method for the production of l-glutamic acid |
| GB1132855A (en) * | 1964-11-24 | 1968-11-06 | Ajinomoto Kk | Process for producing l-glutamic acid by fermentation |
| NL157656B (nl) * | 1967-04-13 | 1978-08-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Werkwijze voor het bereiden van l-glutaminezuur met behulp van een micro-organisme. |
| JPS536234A (en) * | 1976-07-08 | 1978-01-20 | Osame Kogyo Kk | Heating device |
| US4368266A (en) * | 1979-12-27 | 1983-01-11 | Ajinomoto Company Incorporated | Method for producing L-glutamic acid by fermentation |
| JPH114393A (ja) * | 1997-06-13 | 1999-01-06 | Nec Home Electron Ltd | 通気孔を備えた筐体及びこの筐体を有する電子機器 |
-
1983
- 1983-03-18 JP JP58046712A patent/JPS59173090A/ja active Granted
-
1984
- 1984-03-12 PH PH30382A patent/PH21011A/en unknown
- 1984-03-15 GB GB08406833A patent/GB2136432B/en not_active Expired
- 1984-03-16 KR KR1019840001358A patent/KR900005771B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-03-16 FR FR8404157A patent/FR2542758B1/fr not_active Expired
-
1986
- 1986-10-27 US US06/924,141 patent/US4728610A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-12-30 MY MY651/87A patent/MY8700651A/xx unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62289192A (ja) * | 1986-06-10 | 1987-12-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | アミノ酸の連続発酵生産方法 |
| WO1999054438A1 (fr) * | 1998-04-16 | 1999-10-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture microbienne avec activite de la glutaminase amelioree et son utilisation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8406833D0 (en) | 1984-04-18 |
| US4728610A (en) | 1988-03-01 |
| MY8700651A (en) | 1987-12-31 |
| PH21011A (en) | 1987-06-23 |
| FR2542758B1 (fr) | 1988-01-08 |
| GB2136432B (en) | 1986-08-28 |
| KR840008166A (ko) | 1984-12-13 |
| JPH0158955B2 (ja) | 1989-12-14 |
| FR2542758A1 (fr) | 1984-09-21 |
| GB2136432A (en) | 1984-09-19 |
| KR900005771B1 (ko) | 1990-08-11 |
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