JP2006006344A - 有機酸の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 反応液に炭酸ガスを供給しながら、好気性コリネ型細菌又はその処理物を、反応液中で嫌気的に有機原料に作用させる。
【選択図】 なし
Description
好気性コリネ型細菌を利用して有用物質を製造する場合、例えば発酵法によるグルタミン酸の生産等のように、発酵槽内に、空気又は酸素を供給しながら、即ち、いわゆる好気的条件下で反応が行われている。
本発明は、好気性コリネ型細菌を用いて乳酸及びコハク酸より成る群から選ばれた有機酸を効率よく且つ高収率で製造する方法を提供することを目的とする。
その具体例としては、例えば、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、アースロバクター属等のコリネ型細菌又はその処理物が挙げられる。これらの中、特にブレビバクテリウム フラバム(Brevibacterium flavum)MJ−233(FERM BP−1497)、同MJ−233AB−41(FERM BP−1498)、ブレビバクテリウム アンモニアゲネス(Brevibacterium ammoniagenes)ATCC6872、コリネバクテリウム グリタミカム(Corynebacterium glutamicum)ATCC31831、ブレビバクテリウム ラクトファーメンタム(Brevibacterium lactofermentum)ATCC13869等のコリネ型細菌又はその処理物が好適に用いられる。
なお、好気性コリネ型細菌を本発明の方法に用いるためには、先ず菌体を通常の好気的な条件で培養した後用いることが好ましい。培養に用いる培地は、通常微生物の培養に用いられる培地を用いることができる。例えば、硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム等の無機塩からなる組成に、肉エキス、酵母エキス、ペプトン等の天然栄養源を添加した一般的な培地を用いることができる。
培養後の菌体は、遠心分離、膜分離等によって回収し、次に示す反応に用いられる。
反応の温度は、通常15〜45℃、好ましくは25〜37℃で行う。pHは、5〜9、好ましくは6〜8の範囲で行う。反応は、通常5時間から120時間行う。反応に用いる菌体の量は、特に規定されないが、1〜700g/l、好ましくは10〜500g/l、さらに好ましくは20〜400g/lが用いられる。
旨を超えない限りこれらの実施例に限定されるものではない。
尿素:4g、(NH4)2SO4:14g、KH2PO4:0.5g、K2HPO4:0.5g、MgSO4・7H2O:0.5g、FeSO4・7H2O:20mg、MnSO4・nH2O:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:100μg、酵母エキス1g、カザミノ酸1g及び蒸留水:1000ml(pH6.6)の培地を100mlずつ500ml容の三角フラスコに分注し、120℃、15分間滅菌処理したものに滅菌済み50%グルコース水溶液4mlを加え、ブレビバクテリウム フラバム AB−41菌株を植菌し、33℃にて24時間振盪培養した(好気的培養)。培養終了後、遠心分離(8000g、20分)により菌体を回収した。得られた菌体全量を以下の反応に供試した。
(NH4)2SO4:23g、KH2PO4:0.5g、K2HPO4:0.5g、MgSO4・7H2O:0.5g、FeSO4・7H2O:20mg、MnSO4・nH2O:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:100μg、蒸留水:1000mlの培地を2L容のジャーファーメンターに入れ、上記菌体とグルコース50%液120mlを添加し、ここに10%CO2 ガス(90%窒素ガス)を0.1vvmの速度で供給しながら(溶存酸素濃度0.1ppm)30℃にて24時間ゆるく(200rpm)攪拌し、反応させた。得られた培養液を遠心分離(8000rpm、15分、4℃)して得られた上清液を分析したところ、乳酸が32g/lと酢酸が4g/l、コハク酸が11g/l、リンゴ酸が0.6g/l生成していた。
炭酸ガスを供給しない以外は実施例1と同様に反応を行った。
即ち、実施例1と同様に培養した菌体を、以下の反応に供試した。
(NH4)2SO4:23g、KH2PO4:0.5g、K2HPO4 0.5g、MgSO4・7H2O:0.5g、FeSO4・7H2O:20mg、MnSO4 nH2O:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:100μg、蒸留水:1000mlの培地を2L容のジャーファーメンターに入れ、上記菌体とグルコース50%液120mlを添加し、密閉した状態で(溶存酸素濃度0.1ppm)、30℃で24時間ゆるく(200rpm)攪拌し、反応させた。得られた培養液を遠心分離(8000rpm、15分、4℃)して得られた上清液を分析したところ、乳酸が15g/lと酢酸が3g/l、コハク酸が2g/l生成していた。
反応液に炭酸ナトリウムを含有させ、かつ好気的条件で反応させた以外は実施例1と同様に反応を行った。
即ち、実施例1と同様に培養した菌体を、以下の反応に供試した。
(NH4)2SO4:23g、KH2PO4:0.5g、K2HPO4:0.5g、MgSO4・7H2O:0.5g、FeSO4・7H2O:20mg、MnSO4・nH2O:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:100μg、炭酸ナトリウム20g、蒸留水:1000mlの培地を2L容のジャーファーメンターに入れ、上記菌体とグルコース50%液120mlを添加し、30℃で24時間ゆるく(1000rpm)攪拌し、空気を0.1vvmの速度で供給しながら(溶存酸素濃度3.0ppm)反応させた。得られた培養液を遠心分離(8000rpm、15分、4℃)して得られた上清液を分析したところ、乳酸が5g/lと酢酸が1g/l、コハク酸が0.5g/l生成していた。
Claims (4)
- 反応液に外部から炭酸ガスを供給しながら、反応液中でコリネ型細菌又はその処理物を嫌気的に有機原料に作用させることを特徴とする乳酸及びコハク酸より成る群から選ばれた有機酸の製造方法。
- 反応液中の炭酸ガス濃度が、反応液1リットル当り50mg〜25gとなるように反応液に炭酸ガスを供給することを特徴とする請求項1記載の有機酸の製造方法。
- 好気性コリネ型細菌が、ブレビハクテリウム属、コリネバクテリウム属又はアースロバクター属のものであることを特徴とする請求項1又は2記載の有機酸の製造方法。
- 有機原料がグルコースであることを特徴とする請求項1ないし3のいずれかに記載の有機酸の製造方法。
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