JPH08511245A

JPH08511245A - 薬剤搬送ビヒクルとしての固体脂肪ナノエマルジョン体

Info

Publication number: JPH08511245A
Application number: JP6525716A
Authority: JP
Inventors: アムセレム，シモン; フリードマン，ドロン
Original assignee: ファーモスコーポレイション
Priority date: 1993-05-18
Filing date: 1994-05-16
Publication date: 1996-11-26
Anticipated expiration: 2020-03-02
Also published as: CA2162993C; JP3626184B2; EP0702552A1; DE69426418D1; EP0702552B1; EP0702552A4; AU6948094A; DE69426418T2; AU6916494A; ATE198040T1; SG106029A1; WO1994026255A1; US5576016A; IL109641A0; CA2162993A1; WO1994026252A1; US5716637A; IL109641A; AU676921B2; US5662932A

Abstract

(57)【要約】本発明は脂質に可溶性及び水に可溶性の両者の医薬の非経口、経口、鼻口内、直腸又は局所送達のための、少なくとも一種のリン脂質被膜により安定化された、25℃において固相又は液晶相である脂質コアを含んで成る粒子のエマルションを含んで成る医薬組成物を提供する。粒子は10〜250nmの範囲における平均直径を有する。多種多様な医薬及び酸素輸送用ペルフルオロカーボン類をこの粒子の中に封入することができうる。医薬送達ビヒクルの他に、本発明は酸素輸送用血液代替品および移植前の組織の体外維持のためのナノエマルション体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】薬剤搬送ビヒクルとしての固体脂肪ナノエマルション体１．発明の技術分野この発明は、医薬（薬剤）を送達（搬送）するため非経口などの経路で投与する方法およびこの投与に用いる組成物に関する。さらに詳しくは、この発明は、脂質に可溶性の医薬および水溶性医薬の両者に用いる送達媒体（搬送ビヒクル）として有用な小脂質粒子を含有する安定な水中脂質型エマルションに関する。２．発明の背景水不溶性の化合物を非経口投与するのに用いる媒体として入手できるものは、溶血、血栓静脈炎または血液凝固のような望ましくない副作用を起こすことが多い。リポソームおよび水中油型エマルションは、上記のような望ましくない副作用を最少にする、脂溶性物質用の有力な担体として振興されている。しかしこれらの送達系のいずれかを用いる場合、安定性と医薬負荷容量（drug loading cap acity）に多くの問題点があると報告されている。医薬送達系としてリポソームを使用することはかなり以前から知られており、その特性と臨床用途について包括的に概説している文献は入手できる（例えばBa renholzおよびAmselem，“Liposome Technology”，第２版、G.Gregoriadis編集、CRC Press社、1992年；LichtenbergおよびBarenholz，“Methods for Biochem ical Analysis”，33，D.Glick編集、1988年；G.Gregoriadis編集、“Liposomes as Drug Carriers：Recent Trends and Progress”，John Wiley & Sons社，英国，1988年参照）。リポソームは、水または水性緩衝のコンパートメントによって分けられた一つ以上の同心円状脂質二重層で構成されている構造体と定義される。これら中空構造体は、内部水性コンパートメントを備えているが、20nm〜100μｍの範囲の直径で製造することができる。リポソームは、その最終の大きさと製造法によって分類され、SUV：小さな単ラメラ小胞（0.5〜50nm）；LUV：大きな単ラメラ小胞（100nm）；REV：逆相蒸発小胞（0.5μｍ）；およびMLV：大きな多重ラメラ小胞（2〜10μｍ）がある。医薬分子は、封入された水性空間内に包みこまれるかまたは脂質二重層中に挿入される。しかし医薬のリポソーム中の正確な位置は医薬の物理化学的特性とその脂質の組成によって決まる。リポソームは、医薬を徐放し組織に局在させるには有効であるが、含有させることができる医薬の量に制限があるという欠点がある。さらに、医薬として許容されるリポソーム配合物で長期間安定で医薬包括（drug entrapment）の比率が高いものを製造することは困難である。単ラメラ小胞すなわち単一二重層リポソームのすべてのタイプの主な限界は、脂質分子の含有量が比較的低いため、親油性化合物に対する医薬負荷容量が小さいことである。したがってこのリポソームは水溶性の物質を包括するのに一層適している。多重ラメラリポソーム中に多量の疎水性医薬を封入すことは実施できるが、このリポソームは大きさが大きいため静脈投与には不適である。エマルションは、通常直径が１μｍを超える小滴の形態で一方の液体がもう一つの液体中に分散されている不均一系と定義される。これら２種の液体は混和せずそして化学的に反応しないか徐々に反応する。エマルションは熱力学的に不安定な分散系である。この系が不安定なのは、分散された小滴を二つの液相に分離することによってその遊離エネルギーを減少させようとする傾向があるからである。貯蔵中のエマルションが不安定なことは、クリーミング、フロキュレーション（可逆的凝集）、および／または合着（coalescence）（不可逆的凝集）によって明らかである。医薬送達系として非経口用エマルションを使用することは比較的まれである。というのは、血管中に塞栓が生成するのを防止するため１μｍより小さい安定な微小滴を達成する必要があるからである。エマルションの安定性と有効期間を増大するためには、分散される脂質の小滴は、乳化剤または“安定剤”でコートするかまた処理しなければならない。これらの薬剤は界面における遊離エネルギーを低下させて小滴が合着する傾向を減少させる。しかし多くの乳化剤は、身体に注射すると有害な副作用を起こす。これら乳化剤はデダージェントの特性を有しているので、これらの大部分は、膜可溶化剤として作用する溶血剤である。配合の選択は、非経口注射用に承認されて安全な安定剤と乳化剤を選択することは非常に限定されるので厳しく制限される。例えばアムホテリシンＢ、フェニトイン、ミコナゾール、シクロスポリン、ジアゼパムおよびエトポシドのような重要ないくつかの医薬は水に溶解しないので、静脈投与用に配合することは困難である。これらの医薬は現在、ポリエチレングリコールまたはプロピレングリコール−エタノール−ベンジアルコールの混合物のような共溶媒（sosolvent）系を用いて市販されている。しかし、共溶媒に溶解された医薬の注射用配合品には、血栓静脈炎のような強い毒性の問題が起こっている。共溶媒系の代わりに、ミセル溶液またはエマルションがあるが、前記のように、系内に毒性の界面活性剤が存在しているので、静脈投与用には望ましくない。３．発明の要約この発明は、25℃で固相または液晶相である脂質で構成されそして少なくとも一つのリン脂質包膜（envelope）によって安定化された脂質コアを有する粒子のナノエマルションを含有する医薬組成物であって、脂溶性医薬と水溶性医薬の両者を、非経口、経口、直腸、鼻腔内または局所の送達を行うのに用いる医薬組成物を提供するものである。この新しい構成要素は、この発明では固体脂肪ナノエマルションまたは“エマルソーム（emulsome）”と呼称される微粒子の医薬媒体である。これらの組成物は、リポソームと水中油型エマルションの間の中間の特徴をもっている。粒子は標準の水中油型エマルションと同様の疎水性のコアを有し、そしてそのコアは、リポソームと同様にリン脂質分子の一つ以上の層または包膜によって囲まれて安定化されている。これら粒子の重要な特徴は、そのコアが、液相中の油と異なり、バルク形態（ bulk form）で固相または液晶相ある脂質で構成されていることである。このコアの脂質組成物は、バルク形態で測定したとき25℃で固相または液晶相であることを特徴とするものである。エマルソームは、リポソームとエマルションの両者の特徴を有し、内部の固体脂質のコアにおける高い疎水性医薬負荷能の利点、及び周囲のリン脂質の層の水性コンパートメント中に水溶性医薬を封入する性能を供する。エマルソームは、非経口投与を行うことができないか、または非経口投与を行うと望ましくない副作用を起こす、水溶性に劣る親油性の医薬を投与するのに特に有用である。この発明の医薬として安定な固体脂肪ナノエマルションすなわちエマルソームは、ポリオキサマー類、デオキシコレート、ポリソルベート類、チロキサポールまたはエマルフォー（emulphor）のような、非天然合成のイオン界面活性剤もしくは非イオン界面活性剤または共界面活性剤（cosurfactant）なしで配合できる。この発明のエマルソームは、比較的高い含有量のレシチンと、コアとして固体脂質組成物の使用を組合わせて安定化される。エマルソームの粒径分布は10〜250nmの範囲内にあるので、静脈投与に適している。またこの発明はこのような組成物の製造方法に関する。エマルソームを医薬送達系として使用すると、従来、共溶媒または毒性界面活性剤なしでは静脈に投与できなかった問題のある医薬を多量に負荷できることを含めて明らかな利点がある。この発明の固体脂質ナノエマルションは、局所または全身の毒性が最小で、水溶性医薬と水に不溶性の医薬の両者の多種類を有効に医薬として送達させる。エマルソーム中に配合するのに成功し、かつ動物実験で有害な副作用なしで血漿中濃度を増大することができた医薬と生物学的化合物の例としては、抗真菌剤類、AZT誘導体類、β−遮断剤類、抗てんかん薬類、抗生物質類、抗新生物化合物類、抗原類、神経保護剤類（neuroprotectant）、抗炎症薬などがある。またペルフルオロカーボン類を含有するエマルソームは、酸素担体または代用血液として成功したことが分かった。またこのエマルソームは、移植する前の臓器のような生きている組織を体外で保存するのに適している。非経口医薬送達媒体に加えて、この発明は、眼の中への点滴、エアロゾルまたは噴霧剤としての肺への局所送達、外皮用軟膏剤としての皮膚への局所送達、小滴としての鼻腔内投与および経口もしくは直腸の投与に用いるナノエマルションを提供するものである。４．図面の簡単な説明図１は、アムホテリシンＢを含有する実施例12のエマルソームの粒径分布を示すグラフである。図２は、アムホテリシンＢを含有する実施例12のエマルソームの時間の経過と安定性の関係を、サブミクロンの水中油型エマルション（SME）と比較して示すグラフである。図３は、0.4％のアダプロロールマレエートを含有する実施例16のエマルソームを投与されているウサギの眼圧の減少を示すグラフである。エマルソーム中0. 4％のアダプロロールマレエートをアルビノウサギ（各群ｎ＝８）に投与した後、投与された眼（TE）と反対側の眼（CE）について眼圧（IOP）を測定した（^*P0 .05，^**P0.01）。各値は平均値±SEMとして示す。５．発明の詳細な説明この発明は、脂溶性医薬および水溶性医薬を送達するのに用いる医薬組成物、およびその医薬組成物の製造方法と使用方法に関する。 “脂質”という用語は、この明細書で用いる場合、炭化水素の溶媒に可溶性でかつ脂肪酸とそのエステル、コレステロールとコレステリルエステル、およびリン脂質を含有する構造タイプの化合物を意味する。 5.1. 脂質コアの組成エマルソームの必須成分は、バルクで測定したとき室温（25℃）で固相もしくは液晶相または固相と液晶相の混合相を示す脂質を含有する、内部の、疎水性コアまたは脂質コアである。この脂質は単一の化合物または混合物である。この明細書で脂質コアに用いられる用語“脂質”は単一の純品の脂質化合物またはコア中に存在する脂質化合物の混合物を意味する。エマルソームのコア成分として用いるのに適している脂質組成物は、エマルソームに組込まれずにバルク形態で測定したとき、25℃で固相または液晶相であることが特徴である。脂質の混合物が全体としてバルクで25℃にて固体または液晶であるならば、その混合物中に任意に存在しているいくつかの脂質化合物が、純品の場合25℃で流体であってもよい。好ましい組成物では、コア中に存在する個々の脂質化合物の少なくとも90％は、純品のバルク形態で測定したとき25℃で固体または液晶である。相の測定は、バルクの脂質、すなわちエマルソームコアに組込む前の同じ組成物の巨視的試料について実施してよい。バルク試料についての巨視による相の測定は、溶融装置上で行うか、またはIR，NMRまたは蛍光強度または異方性のような分光分析的手段によって行われる。既存のエマルソーム製剤のバルク相の測定は、まずコア脂質を抽出し次いで測定することによって行ってよい。脂質コアを形成する脂質は、脂質−水の界面を好まない非極性部分で大部分構成されている。この発明のナノエマルションの脂質コアを製造するのに用いられる最も普通のタイプの脂肪酸エステルはトリグリセリド類である。 5.1.1. トリグリセリド類トリグリセリド類は、脂質コアを製造するのに好ましい原料である。トリグリセリドのコアは、合成のトリグリセリドとして通常入手できる単一の純品のトリグリセリドで構成されているか、またはいくつかのトリグリセリドの混合物である。天然起源から単離される脂肪はトリグリセリドの混合物としてしか利用できない。このような天然の混合物は、その混合物の溶融特性が25℃で固相または液晶相を示すような特性であるならば、エマルソームを製造するのに適している。各種の純品および混合物のトリグリセリドの相挙動の詳細な要約は入手できる〔“The Physical Chemistry of Lipids from Alkanes to Phospholipids”，Plenum Press社（米国，ニューヨーク）、1985年の10年のD.Sma1lの論文“Glycerides”；F.D.Gustone，An Introduction to the Chemi stry and Biochemistry of Fatty acids and their Glycerides，Chapman and H all Ltd.，ロンドン，1967年；“Fatty acids and Glycerides”Handbook of Li pid Research，１巻、A.Kuksis編集、Plenum Prss社，ニューヨーク，1978年；F orm and function of phospholipids，G.E.Ansell，J.N.HawthorneおよびM.Daws on編集、BBA Library，３巻、Elsevier Scientific Publishing Co.，アムステルダム，1973年；ならびにM.Kates，Techniques of Lipidology，North Holland ，Amsterdam／American Elsevier Publ.Co.，Inc.，ニューヨーク，1972年参照〕。これらのおよびその外の標準の文献で入手できる情報から、当該技術分野の当業者は、バルクで測定した場合、25℃で固相もしくは液晶相または混合相を提供する必要な特性を有する特定の脂肪を選択することができる。脂肪の特定の混合物の溶融特性は簡単な試験で容易に測定することができる。 25℃で固体である多数のトリグリセリド類は、充分に飽和した脂肪酸連鎖を持っている。飽和脂肪酸は、水中油型エマルションの許容できる貯蔵寿命を短くする過酸化反応を受けないので有利である。エマルソームを製造するのに適切な固体脂肪の例は、天然で偶数の非分枝鎖で連鎖長がＣ₁₀〜Ｃ₁₈の範囲内の脂肪酸で構成されたトリグリセリド類；または天然起源で飽和の偶数の非分枝鎖脂肪酸で構成された微結晶質のグリセロールトリエステル類例えばトリカプリン、トリラウリン、トリミリスチン、トリパルミチンおよびトリステアリンである。一般に、バルクで測定したとき室温（25℃）で固相を与える脂質成分または脂質成分の混合物は該脂質コアに適している。他の好ましい脂質コアの成分は、モノ不飽和脂肪酸のエステルである。モノ不飽和脂肪酸は過酸化されるが、典型的なポリ不飽和脂肪酸より反応性が低い。天然のモノ不飽和脂肪酸はシス立体配置を有している。一般にこれらの脂肪酸は完全に飽和した脂肪酸エステルより融点が低い。したがって、通常、モノ不飽和脂肪酸エステルは、高融点の飽和脂肪酸エステルとの混合物が最も有用であろう。 25℃で固体である他のトリグリセリド類としては、部分的に水素化された植物油がある。天然産の不飽和脂肪酸と異なり、水素化された油はトランス立体配置の不飽和結合をもっている。そしてこのトランス立体配置はシス立体配置より融点が高い。部分的に水素化された植物油は固体の植物性ショートニング（例えば CRISCO）を生成し、これは、コレステロールまたはコレステリルエステルを含有しないエマルソームを製造するのに使用できる。ポリ不飽和脂肪酸を含有するトリグリセリド類は、得られたトリグリセリドの混合物がバルクで測定したとき25℃で固相または液晶相であるならば、エマルソームの脂質コア中に少量存在していてもよい。いくつかの実施態様では、疎水性コアの脂質は、バルクで測定した場合、25℃ と生理的温度（37℃）の間に固相から流体相への転移（溶融）温度をもっている。例えばトリカプリンは35〜37℃で溶融し、生理的温度では全体が流体相であるかまたは流体相が支配的である。トリカプリンはナノエマルション用の優れた脂質コアを製造するのに使用できる。あるいは脂質コアは、バルクで測定したとき37℃で固相である脂質、例えばトリパルミチンまたはトリステアリンのような高級飽和トリグリセリド類で構成されていてもよい。また37℃で流体相と固相の混合物のコアも、特にコアが脂質の混合物を含有している場合可能である。 5.1.2. モノエステル類エマルソームの脂質の又は疎水性のコアは、ワックスのような脂肪酸のモノエステルで構成されているかまたは該エステルを含有している。一般にワックスは脂肪酸の長連鎖脂肪アルコールエステルである。多くのワックスは、25℃で固体であるから、エマルソームに用いるのに適切な溶融特性をもっている。その例としては、パルミチン酸セチルのような、蜜ろうおよび鯨ろう由来のエステルがある。好ましいワックスは、飽和またはモノ不飽和の脂肪酸と、飽和または不飽和の脂肪アルコールとで製造される。後者の例としてはオレイン酸アラキジルが挙げられる。他の満足すべきモノエステルとしては、グリセリルモノステアレートのような固体のモノグリセリド類、およびステアリン酸エチルのような短連鎖アルコールの脂肪酸エステルがある。 5.1.3. コレステリルエステル類とコレステロールコレステロールとコレステリルエステル類は、脂質コアまたはこれを囲むリン脂質包膜中に任意に組込んでもよい。コレステロールとそのエステル類は、脂質の充填構造を変化させ、高濃度の場合、液晶相の形成を誘発する。液晶相は条件によっては固相と共存する。好ましいコレステリルエステルは、飽和またはモノ不飽和の長連鎖脂肪酸のコレステリルエステルであり、それぞれ例えばパルミトイルまたはオレオイルがある。コレステリルエステル類は、トリグリセリドまたは他の固体脂質コアの成分に対して50モル％までのレベルで存在している。コレステロールは極性のアルコール基をもっているので、脂質コア自体中よりむしろ包膜の単分子層または二重層中に組込まれる傾向がある。 5.1.4. 抗酸化剤類この発明のエマルション粒子の脂質コアは一種以上の抗酸化剤を任意に含有していてもよい。好ましい抗酸化剤はα−トコフェロールまたはその誘導体であり、これらはビタミンＥファミリーのメンバーである。その外の抗酸化剤としてはブチル化ヒドロキシトルエン（BHT）がある。抗酸化剤は、不飽和脂質の酸化分解分解生成物例えば過酸化物が生成するのを少なくする。脂質コアを飽和脂肪酸から製造することによって、抗酸化剤の必要性は少なくなる。 5.1.5. タンパク質成分この発明の脂質粒子は、アポＢ、アポＡＩ，アポＡIIまたはアポＥのような血清アポリポタンパク質を含有しない方が好ましい。アポＢタンパク質には、静脈に投与された脂質粒子を、肝細胞などの特定の細胞上のLDL受容体のような特定の細胞受容体を標的として向かわせる作用がある。この発明の脂質粒子は、例えば細胞内の細胞骨格と関連する細胞内標識タンパク質（例えばアクチン、ミオシン、トロポニン、チューブリン、ビメンチン、スペクトリン）を実質的に含有していない方が好ましい。細胞内標識タンパク質または血清アポリポタンパク質を含有していない脂質粒子は、細胞起源中に存在しているかまたは細胞起源から誘導される脂質粒子の特徴的な指標を欠いているので、この明細書では“非細胞性（noncellular）”粒子と記載する。さらに、エマルソームの好ましい製剤は、リパーゼおよびホスホリパーゼの酵素活性を実質的に含有していない。エマルションの脂質またはリン脂質が室温で貯蔵されている場合に、１日当り0.1％未満の速度で酵素によって切断されるとき、エマルションはリパーゼまたはホスホリパーゼを “実質的に含有していない”とこの明細書では定義する。他のタンパク質とペプチドが任意にエマルソーム中に存在していてもよい。このようなペプチドとタンパク質の例は、シクロスポリン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）とその類似体、カルシトニン、インスリンおよび他の合成もしくは組換えペプチド類である。天然タンパク質の例はコラーゲンであるが、これは放出を制御するかもしくは徐々に行う特性を有するエマルソームを製造するのに用いられる。これについては後記の5.5の章で詳細に述べる。 5.2. 表面活性分子類この発明の脂質粒子内で、脂質コアは、リン脂質分子を含有する少なくとも一つの包膜または層で囲まれている。そのリン脂質の包膜は、脂質−水の界面で安定剤または表面活性剤として働いて表面張力を低下させる。好ましい実施態様で、リン脂質分子は、脂質コアを覆う表面活性分子を少なくとも90％、好ましくは95％、さらに好ましくは少なくとも99％含有している。しかし、例えば非天然の界面活性剤TWEENのような他の界面活性剤は少量用いることができる。ナノエマルション粒子の脂質コアは表面活性分子を含有するリン脂質の二つ以上の層または包膜で覆われているかまたは囲まれていてもよい。一般に、この表面活性リン脂質分子は該粒子の脂質コアのまわりに単分子層を形成すると考えられ、水との界面に極性のリン脂質のヘッド基（head group）がある。しかし特にリン脂質のコア脂質に対するモル比が高い場合、過剰のリン脂質は、その関連するリン脂質単分子層で脂質コアを封入する一つ以上のほぼ同心の二重層を形成するのに利用できる。二重層の包膜の数は可変であるが、一つ、二つまたは多数の二重層がある。これらの二重層の包膜は一つ以上の水性コンパートメントを包括し、このコンパートメントは、医薬の水溶液の存在下で脂質粒子を形成することによって水溶性医薬を含有するように製造することができる。エマルソームの構造の多重同心二重層のモデルは、脂質粒子が脂溶性医薬と水溶性医薬の両者の高負荷量を保有することが観察されたことを説明しているので、提案されているが、この発明はこのモデルに厳密には依存せずかつこれによって限定されない。この発明のエマルソームの医薬保有容量を説明できる、脂質コアとリン脂質分子間の他の幾何学的関係もありうる。 5.2.1 リン脂質類エマルソームの囲んでいる包膜を構成する好ましいリン脂質は、天然リン脂質の例えば大豆レシチン、卵レシチン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、カルジオリピンなど；合成のリン脂質の例えばジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルコリンなど；および水素化もしくは部分水素化がなされたレシチン類とリン脂質である。好ましい実施態様で、生理的条件のpHとイオン強度のもとで“順”相（“norm al”phase）〔すなわち、外部の水性相に対面するイオン性“ヘッド”基と、内側に対面する親油性の“トレイル（trail）”基〕を形成するリン脂質が、モルベースで、全リン脂質の少なくとも50％、一層好ましくは少なくとも75％、最も好ましくは少なくとも90％を構成している。リン脂質を形成する順相の例は、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジルイノシトールである。これとは対照的に、ホスファチジルエタノールアミンは逆相（revers e phase）（極性ヘッド基が内側に配向され、親油性トレイル基が外側に配向されている）を形成ず傾向がある。また逆相は、Ca⁺²イオンの存在下カルジオリピンもしくはホスファチジン酸によって；3.0未満のpH下でホスファチジン酸によって；および4.0未満のpH下でホスファチジルセリンによって形成される。そのリン脂質成分は飽和または不飽和でもよく、そしてゲルから流体相への転移温度は25℃前後である。卵または大豆のホスファチジルコリン（卵または大豆のPC）は、転移温度が室温より充分低いリン脂質の例である。ジミリストイルホスファチジルコリン（DMPC）は転移温度が室温よりわずかに低い。ジパルミトイルホスファチジルコリンとジステアロイルホスファチジルコリン（DPPCとDSPC）は、転移温度が室温より充分に高く、実際に生理的温度（37℃）より高いリン脂質の例である。これらおよび他の多くのリン脂質で許容できるエマルソームを製造することができる。一般に、37℃においてゲル相であるリン脂質で製造されたエマルソームは、一層剛性の二重層包膜を有し血漿中での循環時間が長いと考えられる。エマルソームは、リン脂質の全脂質に対するモル比が0.1〜0.75（10〜75mol％）、一層一般的には0.1〜0.5（10〜50mol％）の範囲内で製造される。リン脂質のコア脂質に対するモル比は、一般に0.1：１〜２：１）通常の0.1：１〜１：１、0.2：１〜0.9：１のことが多く、しばしば0.2：１〜0.8：１であり、そして普通は0.25：１〜0.6：１の範囲内である。リン脂質のコア脂質に対する比率は、重量基準で通常0.5：１〜1.5：１の範囲内で0.6：１〜1.2：１の範囲内のことが多い。 5.2.2. 非天然の界面活性剤類非天然界面活性剤とデタージェントは任意に、エマルソーム中に少量組込んでもよい。“非天然界面活性剤”または“デタージェント”という用語は、この明細書で用いる場合、水溶液中でミセルを形成し、親油性領域と親水性領域の両者を含有する広範囲の種類の人造分子を含むが、天然の構造形に属するリン脂質は、特定のリン脂質が合成によって得られるかまたは天然起源から単離することによって得られるかにかかわらず、この定義から除外する。非天然界面活性剤の例としては、ポリソルベート類（“TWEEN”）、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）、ポリエトキシル化ひまし油（“EMULPHOR”）、NP-40およびその外の多数の合成分子がある。好ましい実施態様で、非天然界面活性剤は、全界面活性剤の10％（ mol／mol）未満、一層好ましくは５％未満、さらに一層好ましくは１％未満、最も好ましくは0.1％未満を占めている。エマルソームの重要な利点は、非天然の界面活性剤がほとんど存在しなくても安定なエマルションとして製造することができることである。非経口投与用に承認されている非天然界面活性剤でさえ毒性のまたは望ましくない副作用を起こす傾向があるが、エマルソームに用いられるリン脂質の界面活性剤は生理的に適合している。エマルソームの構造に対する非天然界面活性剤の作用を測定する実験を行うため、ポリソルベート（TWEEN-80）を最終濃度0.1，0.5および１％（ｗ／ｖ）でエマルソーム製剤に添加した。得られたエマルソーム粒子の平均粒径は、ポリソルベートが存在しない場合の225nmからそれぞれ120，40および35nmまで低下した。したがって合成の界面活性剤の濃度が増大するにつれて粒径は低下し、使用されているこれらの濃度より高い濃度では、ミセル（直径１〜10nm）が形成されると考えられる。 5.2.3. 陰電荷の脂質類陰電荷の脂質分子例えばオレイン酸、または陰電荷のリン脂質例えばホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールおよびホスファチジルセリンは、エマルソームの脂質相に添加してその組成物のゼータ電位を増大せしたがって粒子を安定化することができる。その上、これらの陰電荷の脂質化合物をエマルソームに組込むと、反対の電荷を有するリン脂質二重層が生成し、脂質コアを囲むリン脂質二重層で形成される水性コンパートメント内の水溶性分子の負荷量が増大する。この作用は、二重層間の静電反発によって生じる二重層間の大きな水性空間によって起こる。陰電荷の脂質分子がエマルソーム中に含有されていることの他の有利な役割は、粒子が凝集する可能性を減らすことであり、その結果合着、フロキュレーションまたは融合のような不安定化のプロセスが最少になる。凝集は接近する粒子間の反発力で防止される。ホスファチジルグリセロールのような陰電荷のリン脂質はヒトの臨床試験に用いられるリポソームの配合物中に混合されている（例えばS.Amselemら、J.Pharm .Sci.，79巻、1045〜1052頁、1990年；S.Amselemら、J.Liposome Res.，２巻、9 3〜123頁、1992年参照）。リン脂質二重層の特性を分析し予測する際にゼータ電位が重要なことは、G.Gregoriadis編集“Liposome Technology”第２版第１巻、第19章331〜342頁、1993年（CRC Press社，米国，フロリダ州，ボカ・ラトン）のL.Sai-lungの論文で考察されている。リポイドの粒径と粒子の安定性の両者はゼータ電位の関数として変化する。リポソームの場合は、ゼータ電位と粒径は、陰電荷リン脂質の50重量％までは、陰電荷リン脂質の含有量に比例する。エマルソーム粒子中の陰電荷脂質の好ましい範囲は、リン脂質と荷電脂質の合計に対して０〜30mol％であり、一層好ましくは５〜20mol％で、さらに一層好ましくは７〜15mol％である。 5.3. 医薬の組込み水に不溶性の化合物は次のようにして固体脂質のナノエマルションに組込むことができる。すなわち、これら化合物を、組成物の脂質成分例えばリン脂質類と固体の脂肪酸エステル類とともに適切な有機溶媒に溶解し、溶媒を蒸発させて完全に乾固し、得られた医薬−脂質混合物を、機械で振盪して水性相で水和し、得られた分散液を高剪断力のホモジェナイザーでホモジェナイズして最終粒径を10 〜250nmの範囲にすることによって行う。水溶性医薬または活性成分は次のようにしてエマルソーム中に封入もしくは包括することができる。すなわち、上記の医薬または成分を水性媒体に溶解し、その医薬を含有する水性相で、機械による振盪を利用して、乾燥した脂肪−リン脂質混合物を水和し、得られた分散液を、高剪断力のホモジェナイゼーションによって所望の最終粒径範囲に粒径を調整する。エマルソーム中に組込む重要な医薬としては、とりわけ、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん薬類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、グリコサミノグリカン類、催眠薬類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強力トランキライザー類、抗うつ剤類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エストロゲン類およびプロゲステロン類がある。“グリコサミノグリカン”という用語には、この明細書で使用する場合、ヘパリン類、ヘパラン類および低分子量のヘパリン類とヘパラン類が含まれる。他の治療範躊に含まれる特定の医薬は、例えばGilmanの“Pharmacological Basis of Therapeutics”第８版、1990年に記載されている。 5.3.1. 抗真菌医薬類アムホテリシンＢは30年間以上にわたって臨床用に用いられており、いぜんとして入手しうる最も有効な抗真菌医薬である。この医薬はFungizone（登録商標）という名称で市販されており、天然界面活性剤のナトリウムデオキシコレートで医薬を可溶化した配合物で構成されている。しかしこれを静脈に投与すると、尿細管機能不全、中枢神経系毒性、硬直および悪寒のような重篤な急性および慢性の副作用をもたらす。いくつもの新しい抗真菌剤が開発されているが、アムホテリシンＢほどに有効性を示すものはない。アムホテリシンＢを含有する水中油型エマルションが製造されているが、不安定なので迅速に破壊され、これに付随して医薬が沈澱することが分かっている。アムホテリシンＢは油−水の界面には挿入されないことは明らかである。ミコナゾールは、重症の全身性真菌感染症の治療に用いられるもう一つの抗真菌剤である。これはアムホテリシンＢに比べて毒性の程度が低いが、ミコナゾールを静脈投与すると、アナフィラキシー反応と心肺停止が起こることがいくつもの特許に報告されている。報告されている上記抗真菌剤による副作用は、この医薬を可溶化するために利用可能な剤形中に存在する界面活性物質が原因であると考えられた。アムホテリシンＢ（Fungizone）の場合はナトリウムデオキシコレートであり、そしてミコナゾールの場合はポリオキソール35ひまし油〔CremophorまたはEmulphor EL（登録商標）〕である。またこれらの界面活性化合物は注射部位の痛みと血栓静脈炎を起こすことも知られている。アムホテリシンＢとミコナゾールはこの発明のエマルソームに配合して成功した。 5.3.2. 抗てんかん薬と抗けいれん薬フェニトイン（ジフェニルヒダントイン）またはジランチン（Dilantin）は、水性緩衝剤に対する溶解性が非常に劣る医薬のもう一つの例である。フェニトインは、大発作型のてんかん状態を治療するのに有用な抗けいれん薬である。大発作の緊張相に関与する脳幹中枢の最大活性を減少させる。フェニトインは現在、水中40％のプロピレングリコールおよび10％エタノールの共溶媒混合物を含有する剤形で非常に高いpHでの注射用に市販されている。ジランチンを非経口で投与する場合、大ゲージの針または静脈カテーテルを通じて大静脈中に直接ゆっくりと注射しなければならない（成人で50mg／minを超えてはならない）。ジランチン溶液を注射する毎に、その溶液の高いアルカリ性（pH12）に起因する局部的な静脈の剌激を回避するため、続いて、同じ針を通じて滅菌食塩水を注射しなければならない。ジランチンを静脈注入剤に添加することは、ジランチンは溶解性がないので沈澱するため推せんできない。軟組織の剌激と炎症が、ジランチンを非経口投与した後に起こることが報告されている。この発明によって製造されたエマルソームの配合物は、臨床上有用な医薬負荷量でフェトインなどの抗けいれん化合物および抗てんかん化合物を混和させ、長期間安定であることを示し、かつ静脈に投与したとき局所または全身の副作用はほとんどないかまたは全くないことが見出された。 5.3.3. β−アドレナリン作動性遮断剤類 1970年代の後期に、緑内障を治療するのにチモロール（Timolol）が導入されて以来、β−遮断剤がこ症状に対して用いる重要なクラスの医薬になった。β− 遮断剤は大部分の患者に対して有効であり、そして重篤な副作用を通常起こさない。しかし全身副作用が起こると、特にうっ血性心不全または喘息の患者の場合、重症のときがある。アダプロロール〔アダマンタンエチル−４（２−ヒドロキシ−３−イソプロピルアミノ）−プロポキシフェニルアセテートのマレイン酸塩〕は、眼に局所投与したときに眼圧を下げるが全身副作用を起こさないように設計されたアドレナリン作動性β−遮断薬である。アダプロロールマレエートはこの発明の発明者が“ソフトβ−遮断薬”と呼称したのである（米国特許第4,829,086号および同第5,135,926号）。ソフトβ−遮断剤の背景になっている仮説は、これらの遮断剤が、局所投与に続いて眼の虹彩／毛様体に到達するが、全身のアドレナリンβ−受容体の遮断は最少であるという性能である。アダプロロールマレエートは血液中で迅速に代謝され、予測可能な不活性代謝物になる。したがって、血液中で活性部分が迅速に分解されるので眼圧の低下が長期間続き全身副作用が最少になるという利点がある。アダプロロールの投与に伴う重大な臨床上の欠点は、眼を著しく剌激し、直ちに灼熱感と不快感をもたらすことである。したがって、眼に点滴するときの不快感を回避するため、アダプロロールマレエート用の適正な媒体を見つける努力がなされている。エマルソームは、アダプロロールマレエートの包括に優れ、その結果、局所投与を行った後ウサギの眼圧を有効に下げることが実証された。溶解状態のアダプロロールマレエートと比較するとエマルソームはモルモットの場合低いまばたき指数を示したがこれはエマルソームの方が被刺激性と不快感が少ないことを示している。 5.3.4 エイズ医薬ジドブジンすなわちアミドチミジン（AZT）はエイズを治療するのに用いる承認された医薬である。AZTはエイズのエンセファロパシーの神経精神病学的経路を改善するのに有用であることが分かっているが、この改善を引き出すのに必要な投与量は重篤の貧血を起こすので通常治療が中断される。この好中球減少症に対応してこの医薬の投与を中止すると、軽減された症状がすべて急速に元に戻る。興味深いことであるが、AZTは経口または静脈内の投与の後、脳脊髄液中に入ってかなりの濃度になるが、あいにくAZTは血液脳関門を透過する性能が劣っている。エイズのエンセファロパシーの予後を改善するために、ピリジニウム−ジヒドロピリジンレドックスに基いたChemical Delivery System〔化学的配送達〕（CDS）法（米国特許第4,479,932号；同第4,829,070号；同第5,002,9 35号）がAZTに適用された。 AZT-CDS（ジドブジン−Chemical Delivery System）は、室温で安定な結晶性固体であり、AZTを一層有効に脳と中枢神経系に送達し、同時にこの医薬の全身濃度を減らすように設計されている、可能性がある有用な抗エイズプロドラッグである。その増大した脳／血液比から、この抗レトロウイルス剤の治療指数が著しく増大すると考えられる。実験動物による静脈試験でこれらの主張は確認され、いくつもの大学および政府の研究所で追試されている（“Handbook of Experi mental Pharmacology”，100巻、231-284頁、Springer−Verlag社ベルリン、1 991年のN.B.BodorとM.E.Brewsterの論文“Targeted Drug Delivery”）。 AZT-CDSは親油性であるため水性緩衝液に対する溶解性に限界があるので、親油性の送達媒体が必要である。すなわちDMSO−ポリエチレングリコール混合物のような有機共溶媒を使用するとか、シクロデキストリンのような巨大分子の複合体中に入れるとかまたはリポイド担体中に組込まれる。AZT-CDSをエマルソーム中に組込むことに成功し、ラットに静脈注射した後、ラットのAZT脳内濃度が著しく増大した。 5.4. エマルソームの医薬製剤この発明のエマルソームは大きさの範囲が10〜250nmなので非経口送達用に適している。この10〜250nmの範囲には、好ましいエマルソーム製剤の重量基準の平均の大きさが含まれている。一層好ましい製剤では、10〜250nmの大きさの範囲には、重量基準で測定してナノエマルション中の粒子の少なくとも99％が含まれている。こゝで“重量基準”の測定とは、大きさを測定するのに、提示した直径の範囲内に入っている脂質粒子の数ではなくて重量％を用いていることを意味する。特定の製剤では、平均粒径±標準偏差は、20〜180nm，40〜160nmまたは50 〜150nmの範囲内にある。他の製剤では、平均値＋標準偏差は10〜120nmの範囲内にある。さらに一層好ましい製剤の場合、重量基準で測定して、そのナノエマルション中の粒子の99％が上記の大きさの範囲のうちの一つ範囲内にある。上記エマルションはすべて濾過で滅菌することができる。エマルソームは、経口、局所、直腸、鼻腔内、非経口またはエアロゾルの吸入によって投与することができる。非経口投与は連続的に静脈に注入するか、または静脈内、筋肉内もしくは皮下の注射を行うことによって実施することができる。局所投与用の特種タイプの製剤は、眼に点滴するのに用いるナノエマルションである。一般にそのナノエマルションは、液滴として眼の角膜にまたは眼のすみに加えて投与される。このような点眼剤は、角膜が剌激および感染に敏感であるため、局所塗布用の一般的な製剤よりもむしろ非経口用の液剤に一層類似している。眼に点滴するのに用いる好ましいエマルションは、非経口用エマルションと同様に、滅菌される。ナノエマルションの粒子は粒径が小さいので、ナノエマルションは濾過によって滅菌できる。眼に点滴するエマルションは通常、緩衝されてpHは中性に近く維持されそのpH の通常の範囲は約６〜８である。その上に、該エマルションの浸透圧モル濃度は、生理的値の20％以内に、より好ましくは10％以内に、最も好ましくは50％以内に維持される。 5.5 エマルソームのポリマーコーティング生分解性ポリマーを組込んで、エマルソームの疎水性コアを囲ませるかまたは該コアの一部を形成させてもよい。ポリマーエマルソームは、次のような生分解性の、非天然のポリマー例えば乳酸とグリコール酸のポリエステル類、ポリ無水物類、ポリカプロラクトン類、ポリホスファゼン類およびポリオルトエステル類；または天然ポリマー例えばゼラチン、アルブミンおよびコラーゲンを含有していてもよい。ポリマーエマルソームの利点は、徐放剤形で医薬および生物学的化合物を非経口で送達するのに放出を制御することである。医薬送達媒体内で分解しうるポリマーの構造、選択および使用については最近の刊行物に概説されている（A.Domb外、Polymers forAdvanced Technologies，３巻、279〜292頁、1992年）。ポリマー類の選択についての別の案内は標準のテキストで入手できる（“Drugs and the Pharmaceutical Sciences”，M.DeKKer ，ニューヨーク、1990年の45巻、M.ChasinとR.Langer編集“Biodegradable Poly mers as Drug Delivery Systems”）。一般に、脂質コア（例えばトリグリセリド）に対するポリマーの比率は、50％（ｗ／ｗ）までである。ゼラチンのような天然タンパク質のポリマーの場合、水溶液中では大きく膨潤するが、有用なレベルの封入は非常に少ない量、例えば１％〜10％（ｗ／ｗ）のポリマーで達成できる。大部分の非天然ポリマーの場合、有機溶媒に可溶性であるが、このポリマーはトリグリセリドおよびリン脂質とともに同時に溶解してから蒸発させる。水溶液に可溶性の天然ポリマーの場合、このポリマーは使用される溶液に溶解させる。 5.6. ペルフルオロカーボン類を含有するエマルソーム類代用血液または酸素担体を製造する方法では、ペルフルオロカーボンが使用される。ペルフルオロカーボン（PFC）のエマルションは、過去20年間、医学的に非常に有望であった。しかし、医薬産業界は、高比率のPFCを含有する安全でかつ安定なエマルションを製造できなかったのでその有望な予想は実現されなかった。入手しうる唯一の承認されたPFCエマルションのFluosol DA-20（登録商標）（日本の緑十字（株）が製造し、米国，カリフォルニア州のAlpha The rapeutic Corporation社が販売している）は室温で安定ではなく、凍結して輸送しかつ貯蔵しなければならず、したがって臨床で使用することは著しく制限される。その上に、Fluosol DA-20エマルションは10容量％しかペルフルオロカーボンを含有していないので、その酸素輸送容量が制限され、結局、蘇生液（resuscitative fluid）というよりも血液希釈剤になっている。Fluosol DA-20中の主要界面活性剤のFluronic F-68（またはポロキサマー188）は、補体の活性化に関与し、これは、先に述べたようなこの界面活性剤の追加の溶血作用と毒作用の外に、注入された患者の５％に認められる副作用である。ペルフルオロカーボンを含有するエマルソームは、ペルフルオロカーボンを、乾燥薄膜の固体脂質コアとリン脂質と混合し、水溶液を加えて分散液を製造し、次いでその分散液をホモジェネートして所望の粒径範囲にすることによって製造される。ペルフルオロカーボンは、コア脂質の量に対して重量基準で多量にエマルソームに加えることができる。得られるエマルソームは、25℃より高い温度で溶融する脂質または脂質混合物とペルフルオロカーボンとを含有し、リン脂質の少なくとも一つの層で囲まれた疎水性コアを備えている。このエマルソームは他のエマルソームと同様に直径は10〜250nmである。ペルフルオロカーボンのエマルソームは生きている組織に酸素を運ぶのに有用である。このエマルソームは代用血液または静脈投与用の増量剤として配合される。このエマルソームは、凝固因子類、フィブリノーゲン、アルブミン、抗体類または補体系の成分のような各種の血漿タンパク質を任意に含有していてもよい。ペルフルオロカーボンエマルソームは任意に血漿または血清中に製造されるかまたは血漿または血清で希釈される。またペルフルオロカーボンエマルソームは、特に、収集と移植の間の輸送と貯蔵の期間中、移植もしくは再移植用の臓器および組織に酸素を供給するため体外溶液として用いることができる。肝臓、心臓および腎臓のように広大な脈管構造を有する臓器の場合、このエマルソーム溶液は任意に、小型のぜん動ポンプによって血管を通じてポンプ輸送して内部組織に酸素を供給することができる。体外エマルションは通常、pHを、0.5単位の生理学的単位以内に例えば6.9〜7. 9の範囲のpHに、好ましくは0.2単位以内に例えば7.2〜7.6の範囲内に保持するよう緩衝させる。また、通常塩類を添加して生理的浸透圧を維持し、血漿中に通常みられる塩平衡に類似させる。 5.7. 凍結乾燥されたエマルソームエマルソームは、糖類またはアミノ酸類のような凍結保護剤を添加して凍結乾燥し、そして使用する前に水性媒体で再構成することができる凍結乾燥固体物質として貯蔵できる。好ましい凍結保護剤としては、グルコース、スクロース、ラクトース、マルトースおよびトレハロースのような糖類；デキストロース、デキストリン類およびシクロデキストリン類のような多糖類；ポリビニルピロリドン（PVP）のような非天然ポリマー類；ならびにアミノ酸類がある。エマルソームリン脂質に対する凍結保護剤の好ましい範囲は0.1〜10％（ｗ／ｗ）である。エマルソームナノエマルションを脱水すると、長期間にわたって貯蔵し、次いで再水和して元のナノエマルションと類似の平均粒径を有するエマルソームのナノエマルションを得ることができる固体残留物が得られる。またこの再水和されたエマルソームは、最初に組込まれた医薬のかなりの量を保持している。脱水されたエマルソーム製剤に残存している水の量は、利用される脱水法のタイプと程度によって広範囲に変化する。一般に、脱水されたエマルソームは、特に凍結乾燥で脱水したとき１重量％より低い水を含有している。しかし安定な脱水された製剤は５％までの水分を含有していてもよい。 5.8. エマルソーム特有の特徴この発明のエマルソームは、標準の水中油型のエマルションとは全く異なっている。この発明ではリン脂質の含有量が高いため、リン脂質の単分子層が水性界面において脂質コアを囲んでエマルションを安定化している。その上、リン脂質分子の一つ以上の二重層もしくは包膜が、多くの実施態様で、粒子のまわりに生成していると考えられる。他の大きな差異は、標準の水中油型エマルションは一方の液体が他方の液体中に分散したものであるのに対して、エマルソームは固体が液体中に分散したものであるということである。水中油型エマルションとエマルソームの間の主な差異は表１に要約してある。標準の水中油型エマルションの一つの大きな欠点は、医薬負荷量が制限されないことである。１％以上の医薬封入量が必要な場合は、医薬を溶解するため、対応して一層大きな油相（10〜20％）が必要である。しかし油の含有量が高くなるとエマルションの安定性が低下するので界面活性剤または共界面活性剤を添加する必要がある。大部分の界面活性化合物はデタージェンの特性（detergent property）があるので、非経口投与に使用することは非常に制限される。静脈内投与配合物用にすでに承認されている界面活性剤でさえも多くの中毒反応が報告されている。例えばナトリウムデオキシコレートを含有しているFu ngizone；ポロキサマー188（Pluronic F-68）を含有するFluosol；ポリソルベート80（TWEEN80）を含有するVepesid（Etopaside）；および界面活性剤のEmulpho r EL-620もしくはポリエトキシル化ひまし油を含有するMonist at（登録商標）（ミコナゾール）の場合がある。この明細書で述べる医薬として安定なナノエマルションには、水溶性医薬と水に不溶性の医薬を、非天然のイオン性もしくは非イオン性の界面活性剤なしで、高い医薬負荷量にて、別個にまたは同時に封入できるという点で、標準の油中水型エマルションを超える多くの利点がある。この発明のエマルソームは、米国特許第4,725,442号および同第4,622,219号のミクロドロップレット（microdroplet）とは異なっている。ミクロドロップレットは最初、単分子層小胞と呼ばれていたが、リン脂質の一つの一分子層で覆われた有機液体の球体で構成されており、一方エマルソームの内部コアは固体の脂質で構成されている。ミクロドロップレットのリン脂質含有量は、低く（約1.2％）一つの一分子層しか形成しておらず、これに対してエマルソームの場合は、リン脂質の含有量が高く（５〜10％）、特定の実施態様では、脂肪のコアを囲むいくつもの二重層を形成していると考えられる。ミクロドロップレットとエマルソームの他の大きな差は、ミクロドロップレットが水不溶性化合物にのみ有用であるのに対して、エマルソームの場合はレシチン含有量が高いので水に不溶性の化合物のみならず水溶性化合物も組込むことができることである。６．エマルソームの製造方法エマルソームは、多重ラメラ小胞に類似している必要な脂質組成の大きな粒子の水性懸濁液または水性分散液を製造し、次にこの脂質粒子をナノエマルションに必要な直径にすなわち約10〜250nm、通常は20〜180nmの範囲内に、そしてしばしば50〜150nmの範囲内に小さくする粒径調整ステップ（sizing step）にかけることによって製造される。これらの粒径の範囲は、粒子数基準より重量％基準で決定する方が好ましい。上記の範囲は平均粒径を含んでいる。特定の実施態様では、引用される範囲は平均値±標準誤差を含み、他の実施態様では引用される範囲は重量基準で測定して少なくとも99％の粒子を含んでいる。脂質成分は揮発性で化学的に非反応性の有機溶媒例えばジクロロメタンまたはジエチルエーテルに溶解することが好都合である。組込まれる医薬は、通常上記有機溶液に含有させる。溶媒は、一般にロータリーエバポレーター中または不活性ガスの気流下、減圧で除去する。得られた脂質の薄膜を、水溶液で覆って振盪することによって水和し分散させる。医薬または他の成分が有機溶液中に含有されていなかったならば、これらの成分は上記の水性水和溶液に添加する。その脂質の懸濁液または分散液は、一般に800バールまでの圧力下、Gaulin型ホモジェナイザーを用い高剪断力ホモジェナイゼーションによって粒径を調整する。高圧ガウリンホモジェナイゼーションについては、G.Gregoriadis編集“Lip osome Technology”第２版、１巻、３章49-65頁、米国，フロリダ州ボカ・ラトン所在のCRC Press社，1993年のBrandlらの文献に詳細に記載されている。またエマルソームはポリカーボネートの膜を通じて高圧押出を行うことによって製造することもできる。この方法では、脂質分散液に対する粒径調整ステップは、高剪断力ホモジェナイザーではなくて、ステンレス鋼製GH76-400押出機またはPrssure Cell（Nucleopore，米国）のような圧力押出機を用いて行われる。リポソーム製造に用いる圧力押出機と押出方法は、G.Gregoriadis編集“LiposomeT echnology”第２版、１巻、28章501〜525頁、米国，フロリダ州ボカ・ラトン所在のCRC Press社 1993年中のS.Amselemらの報告に詳しく記載されている。エマルソームの粒径は小さいので、200ナノメートルのフィルターメンブランで最終的に滅菌濾過することによって滅菌することができる。 6.1. 実施例１：高剪断力ホモジェナイザーを用いて製造したエマルソーム 0.5Ｌ丸底フラスコに、2.5ｇの卵レシチン、2.5ｇのトリカプリン、0.1ｇのコレステロールおよび0.1ｇのオレイン酸を入れ、次に0.01ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。この脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用い、有機溶媒を、減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に50mlの食塩水を加え、脂質がすべて水性相に均一に分散されるまで振盪することによって、脂質混合物を水和させた。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kinematica，AG）を用いて15,0 00rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homo genizerを用いて800バール下で高剪断力ホモジェナイゼーションを10〜15サイクル行った。得られた配合物の粒径分布は、N4MD Coulter Particle Size Analyze r（Coulter Electronics，英国）を用いて測定した。この測定器のデファレンシャル重量％モードは、平均粒径が84±32nmのエマルソームの単一の均一な集団が存在していることを示した。この配合物は、室温下で数箇月間、粒子の平均粒径が変化することなく安定であることを示した。７．水不溶性医薬の包括 7.1. 実施例２：神経保護医薬の組込み 0.5Ｌ丸底フラスコに、0.5ｇのHU-211（米国特許第4,876,276号）すなわち精神向的に不活性の合成カンナビノイド、2.5ｇの卵レシチン、3.75ｇのトリカプリン、0.1ｇのコレステロールおよび0.1ｇのオレイン酸を入れ、次に0.01ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。この脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用いて、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に50mlの食塩水を加え、その混合物を、脂質がすべて水性相に均一に分散するまで振盪することによって水和した。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kinematica，AG）を用いて15 ,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Ho mogenizerを用いて800バールで高剪断力ホモジナイゼーションを15サイクル行った。得られた配合物を、0.2μｍ滅菌フィルターメンブランで濾過し次いで配合物の粒径分布をN4MD Coulter Particle Size Analyzer（Coulter Electronics，英国）を用いて測定した。平均粒径が153±24nmのエマルソームの均一集団が得られた。利用された、トリカプリンのレシチンに対するモル比によって、40〜90 ％の医薬負荷量が達成された。 7.2. 実施例３：エマルソームに組込まれたHU-211によるNMDAマウス神経モデルでの神経保護対照群の６頭のBALB／Ｃ雄マウス（18〜25ｇ）に、50mg／Kg投与量のNMDA（PB S中25mg／ml）を皮下注射して、これらマウスの神経病学的採点を記録した。第二群のマウスに30mg／kg投与量のエマルソーム中HU-211（６mg／ml）を、NMDAを注射（50〜6Omg／Kg皮下注射）する５時間前に腹腔内に投与し、次いでNMDA投与後の精神病学的な臨床外観を記録した。表３に示した試験結果は、エマルソームのHU-211が神経保護を誘発し、対照マウスに比べて、死亡率が50％減少し神経病学的な採点が33％減少したことを示している。 7.3. 実施例４：エマルソーム中への精神向的に活性の薬剤の組込み 0.25Ｌの丸底フラスコに、20mgのHU-210（精神向的に活性な合成のカンナビノイド）、0.4ｇの卵レシチン、0.4ｇのトリカプリン、0.32ｇのコレステロールおよび0.35ｇのオレイン酸を入れ次いで36mgのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を25mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を使用して、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に50mlの食塩水を加え、脂質がすべて水性相中に均一に分散されるまで振盪することによって脂質混合物を水和した。得られた製剤に対し、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用い、800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを13サイクル行った。得られたエマルソームは、平均粒径が150nmの粒子の均一な集団を示した。 7.4. 実施例５：エマルソームに組込まれたカンナビノイドHU-2 10の鎮静作用２頭の雄SDラット（200〜250ｇ）に、エマルソームに組込まれたHU-210を0.08 mg／Kgの投与量で静脈投与を行った。この医薬の鎮静作用は、動物が静止したまゝで立ち直り反射がなくかつ深部痛覚がないことで現れ、投与してから５分後に始まり１時間続いた。エマルソームHU-210を0.4mg／Kg投与することによって、この鎮静作用が20時間続いた。 7.5. 実施例６：眼科に用いる、エマルソーム中１％インドメタシンの製造 0.5Ｌの丸底フラスコに、0.5ｇのインドメタシン、2.5ｇの卵レシチン、2.5ｇのトリカプリン、0.1ｇのコレステロールおよび0.1ｇのオレイン酸を入れ、次いで0.01ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。この脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用いて、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に 50mlの食塩水を加え、次に脂質がすべて水性相に均一に分散されるまで振盪することによって脂質混合物を水和した。得られた分散液を、PolytronPT3000（Kine matica，AG）を用いて15,000rpmで２分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用いて800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを10サイクル行った。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は111 ±32nmであった。この配合物は、室温で数箇月間、粒子の平均粒径が変化することなく安定であることを示した。 7.6. 実施例７：局所用途に用いる、１％インドメタシンエマルソーム−クリーム剤の製造実施例６のエマルソーム配合物18mlが入っている100mlフラスコに、0.05％のプロピルパラベン、0.1メチルパラベン、0.1％EDTA、および５％Carbopol 940 水溶液５ｇを加えた。得られた混合物を、Polytron PT 3000を用いて60秒間ホモジェナイズし、次にトリエタノールアミンを徐々に添加して、生成したエマルソーム−クリーム剤のpHを6.0にした。 7.7. 実施例８：エマルソームへのAZT-CDS（ジドブジン−化学的送達系）の組込み 0.5Ｌの丸底フラスコに、180mgのAZT-CDS、3.5ｇの卵レシチン、3.5ｇのトリカプリン、0.14ｇのコレステロールおよび0.14ｇのオレイン酸を入れ、次いで0. 02ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用いて、溶媒を減圧下完全に乾固するまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に70mlの食塩水を添加し、次いで脂質がすべて水性相に均一に分散されるまで振盪することによって、該脂質混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kine matica，AG）を用い、17,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用い、800バールで高剪断力ホモジェナイゼーシンを10サイクル行った。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は48.5± 33nmであった。最終的な医薬の包括率は最初に添加した量の約70％であった。 7.8. 実施例９：エマルソーム−AZT-CDSによって脳で増大されたAZT-Qの送達経口投与剤形が利用できるならば、AZT-CDSプロドラッグの受容とその可能性のある用途が改善されるであろう。したがって、AZT-CDSに用いるのに適した経口投与剤形を見つける努力がなされている。各種の配合物が空腸からのAZT-CDS の生体内利用度を改善する可能性を評価するため、DMSO、２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（HPCD）、ジメチルβ−シクロデキストリン（DMCD）、リポソーム類またはエマルソーム中に配合したAZT-CDSをいくつかの投与量でラットに投与した。絶食させた（18時間）雄のSprague Dowleyラット（体重150 〜175ｇ）のケタミン：キシラジン（50：５mg／Kg、腹腔内投与）で麻酔をかけた。胃に単一の正中切開を行い、空腸を外部に露出させ、単一の結紮糸（３−０絹）をトライツ靭体から２cm遠位に配置した。DMCD，HPDC、リポソーム類またはエマルソーム類中に配合したAZT-CDSをそれぞれ、1.32，2.12，6.0および6.0ml／Kgの注射容積が27ゲージの注射針（リポソームとエマルソームについては25ゲージ）を通じて投与した。注射後、筋肉層を２−３結紮糸で縫合し、次いで皮膚のひだ（skin fold）を、１−２のステンレス鋼（11mm）を巻いたクリップで閉じた。空腸に投与してから１時間後に動物を殺した。血液、脳および肝臓を取り出し、直ちに凍結させ、そしてこれらの組織を１〜２日以内にホモジェナイズした。臓器のホモジェネートを、AZT，AZT-Q（電荷を有する第四級ピリジニウム塩、AZT-CDSの代謝産物）およびAZT-CDSについてHPLCで分析した。得られた試験結果を表２に示す。エマルソーム中のAZT-CDS配合物は、50mg／K g AZT-CDSを空腸に投与してから１時間後に、AZT-QとAZTの最高脳内濃度をもたらした。試験されたすべての媒体の中でエマルソームが脳内AZT-Qの最高濃度をもたらした。また、エマルソーム中AZT-CDSを空腸に投与した後に得られたAZT-Q の脳内濃度（2.5μｇ／ｇ）がDMSO中AZT-CDSを静脈投与した後得られたAZT-Qの脳内濃度（2.26μｇ／ｇ）より高かったこと（表２）は注目に値する。 7.9. 実施例10：エマルソーム中ペルフルオロデカリン配合物の安定な代用血液 0.5Ｌの丸底フラスコに、20ｇのペルフルオロデカリン、５ｇの卵レシチン、５ｇのトリカプリン、0.2ｇのコレステロール、0.2ｇのオレイン酸および0.02のコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を100mlのジエチルエーテルに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用い、有機溶媒を、減圧下で完全に乾固されるまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に、10 0mlの食塩水を添加し、次にその脂質混合物を、脂質がすべて水相中に均一に分散されるまで振盪することによって水和させた。得られた分散液を、Polytron P T 3000（Kinematica，AG）を用いて17,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab70 Gaulin Homogenizerを用い800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを10サイクル行った。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は102 ±16nmであった。最終のペルフルオロデカリン代用血液の包括率は約100％であった。この配合物の粒径分布を時間の経過ととも追跡したが、４℃にて３箇月間にわたって平均直径の変化は全くみとめられなかった。 7.10．実施例11：エマルソーム中ペルフルオロトリブチルアミンの配合物 0.5Ｌの丸底フラスコに、20ｇのペルフルオロトリブチルアミン、５ｇの卵レシチン、５ｇのトリカプリン、0.2ｇのコレステロール、0.2ｇのオレイン酸および0.02ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を350mlのジエチルエーテルに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用い、有機溶媒を減圧下完全に乾固するまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に、100mlの食塩水を添加し、次に脂質がすべて水性相に均一に分散するまで振盪することによって該脂質混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 30 00（Kinematica，AG）を用い17,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用い800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを10サイクル行った。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は、83.7±43nmであった。ペルフルオロトリブチルアミンの最終の包括率は約100 ％であった。 7.11．実施例12：抗真菌剤のアムホテリシンＢを含有するSMEおよびサブミクロンエマルソームの製剤の比較安定性 0.5Ｌの丸底フラスコ中で、浴超音波処理（bath sonication）によって82mgのアムホテリシンＢを100mlのメタノールに溶解した。別のビーカー内で、５ｇのの卵レシチン、５ｇのトリカプリン、0.2ｇのコレステロール、0.2ｇのオレイン酸および0.02ｇのコハク酸トコフェロールをクロロホルムに同時に溶解した。両方の有機溶液を混合し、ガラスビーズ（直径５mm）を添加し、次にロータリーエバポレーター（Heidolph ，ドイツ）を用い、有機溶媒を減圧下完全に乾固するまで蒸発させた。得られた乾燥脂質の薄膜に100mlの食塩水を添加し、次に脂質がすべて水性相中に均一に分散されるまで振盪することによって、該脂質混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kinematica，AG）を用い18,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用い800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを10サイクル行った。得られたエマルソームを、0.45μｍメンブランで濾過することによって滅菌して、窒素雰囲気下、黄褐色バイアルびん中に貯蔵した。得られたアムホテリシンＢエマルソーム製剤の粒径分布を測定した。このナノエマルションは107±27nmの平均粒径を示した。指示された直径範囲内の粒子のディファレンシャル重量分布（differential wei ght distribution）を表４と図１に示す。アムホテリシンＢのサブミクロンエマルション（SME）を以下の方法で製造した。250mLのフラスコ内で82mgのアムホテリシンＢを浴超音波処理によって100ml のメタノールに溶解した。レシチン（1.5ｇ）を別個に25mlのクロロホルムに溶解した。アムホテリシンＢの溶液とレシチンの溶液を混合し、次にロータリーエバポレーターを用い有機溶媒が完全に乾固されるまで蒸発した。２％Pluronic F 68、0.25％ナトリウムデオキシコレートおよび2.25％グリセリンを含有する水性相を製造した。さきに溶媒を蒸発させて得た乾燥脂質混合物を、100mlの上記水性相で水和し、次に浴音波処理器で数分間音波処理を行った。20ｇのMCT油と0.0 2ｇのコハク酸トコフェロールを含有する油相を調製し、70℃まで加熱し、45℃ まで予め加熱した上記水性分散液に添加した。水性相と油相の乳化をPolytronを使用して実施した。得られたエマルションを冷却させ次にMicrolab70 Gaulin Ho mogenizerを用いてホモジェナイズした（10サイクル）。得られたSME−アムホテリシンＢ配合物を、0.45μｍのメンブランで濾過して滅菌し、窒素雰囲気下、黄褐色のバイアルびん内に貯蔵した。 SMEおよびエマルソームのアムホテリシンＢ製剤のの両方を各種の温度で貯蔵し、その安定性と粒径分布を、時間をおって監視した。得られた結果は（図２参照）、エマルソーム配合物は、４℃で貯蔵したとき、３箇月間にわたって平均粒径が変化せず安定であったことを示している。しかし SMEの場合は、同じ条件下で貯蔵して最初の１箇月が経過した後、粒径の著しい増大が認められ、その結果40日後にはエマルションが破壊し相分離が起こった。 7.12．実施例13：ミコナゾールを含有するエマルソームの製造 0.5Ｌの丸底フラスコに、0.7ｇのミコナゾール、3.5ｇの卵レシチン、5.25ｇのトリカプリン、0.14ｇのコレステロール、0.14ｇのオレイン酸および0.014ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。この脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を使用し、有機溶媒を減圧下完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に70mlの食塩水を添加し、次にすべての脂質が水性相に均一に分散されるまで振盪することによって該混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 30 00（Kinematica，AG）を用い15,000rpmで２分間ホモジネートした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用い800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを11サイクル実施した。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は 165±90nmであった。 7.13．実施例14：ジアゼパムを含有するエマルソームの製造 0.25ｌの丸底フラスコに、0.25ｇのジアゼパム、0.5ｇの卵レシチン、0.43ｇのトリカプリン、0.32ｇのトリミリスチン、0.02ｇのコレステロール、0.014ｇのオレイン酸および0.008ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を100mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph ，ドイツ）を用い、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に50mlの食塩水を添加し、次にすべての脂質が水性相に均一に分散するまで振盪することによって、該混合物を水和した。得られた分散液を、 Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用いてホモジェナイズし（800バールで11サイクル）、3,000rpmで10分間遠心分離し、次いで上澄み液を0.2μｍフィルターで濾過した。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は91±30nmであった。 7.14．実施例15：フェニトインを含有するエマルソームの製造 0.5ｌの丸底フラスコに、0.7ｇのナトリウムジフェニルヒダントイン（フェニトイン）、3.5ｇの卵レシチン、5.25ｇのトリカプリン、0.14ｇのコレステロールおよび0.14ｇのオレイン酸を入れ、次に0.014ｇのコハク酸トコフェロールを添加した。その脂質混合物を150mlのメタノールに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用いて有機溶媒を、減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に70mlの食塩水を添加し、次いですべての脂質が水性相中に均一に分散するまで振盪することによって、該混合物を水和した。得られた分散液を、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用いてホモジェナイズした（800バールで11サイクル）。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は94±36nmであった。８．水溶性医薬と生物学的薬剤の注入 8.1. 実施例16：アダプロロールマレエートを含有するエマルソームの製造 0.5ｌの丸底フラスコに、0.8ｇの卵レシチン、0.8ｇのトリカプリン、33mgのコレステロール、４mgのオレイン酸および２mgのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を100mlのクロロホルムに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を用い、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に、0.4ｇのアダプロロールマレエートと0.1％％のEDTAを含有するリン酸緩衝食塩水100mlを添加し、次にすべての脂質が水性相に均一に分散されるまで振盪することによって、該混合物を水和した。得られた分散液を、Microlab 70 Gaulin Homogenizerを用いてホモジェナイズした（80 0バールで13サイクル）。pHを6.5に調節した。得られたエマルソーム配合物の粒径分布は89±69nmであった。 8.2. 実施例17：ウサギモデルの眼圧に対する、アダプロロールマレエートを含有するエマルソームの薬理作用実施例16のエマルソーム配合物中のアダプロロールマレエート（0.4％）の眼圧（IOP）に対する作用をウサギで試験した。８頭のニュージーランド成熟雄アルビノウサギ（2.5〜3.0kg）に一回投与量を投与し、その日の予め決めた時間にウサギのIOPを測定した。個々の各ウサギのIOP値を記録してその時点のベースラインと定義した。IOPの変化は各時点とベースラインとのIOPの差で示した。IOP は呼吸圧計（Digilab，モデル30Ｒ）を用いて測定した。IOP読取り値は、Digila b Calibration Verifierを用いて得た圧力読取り値と一致した。図３に示すように、エマルソーム中のアダプロロールマレエートで局所処置を行った結果、眼圧は著しく低下した。得られた眼の低血圧効果は５時間続いた。 8.3. 実施例18：アダプロロール含有エマルソームに対するモルモットのまばたき指数とアダプロロール溶液に対する該指数の比較アダプロロールマレエートの主な副作用は、眼に局所的に使用したとき剌激と不快感を起こすことである。剌激が少ない可能性がある配合物を選別するため、各種の眼科製剤中のアダプロロールマレエートの刺激反応を試験した。急性の刺激反応をモルモットのまばたき試験を利用して定量した。この試験では、試験溶液25μｌの液滴を用いた後、５分間まばたきの回数を計数した。各眼についてまず通常の食塩水で試験し、次に試験配合物で試験し、これら二つの試験間には少なくとも30分間の間隔を置いた。まばたき指数は、まばたき回数（医薬）をまばたき回数（食塩水）で割り算して得られる比率と定義して医薬の剌激性の指標として用いる。表４に示すように、0.4％アダプロロールマレエート溶液のまばたき指数は3.48である。配合物の剌激表示を反映するこの値は、この医薬をエマルソーム送達系に組込むと2.00まで著しく低下した。このことは、エマルソーム配合物が、溶液中の遊離医薬より不快感が少ないのでウサギが一層耐えることができることを示している。 8.4. 実施例20：エマルソームの安全性 HU-211配合物の可能性がある臨床毒性を試験するため、安全性の動物実験を行った。非精神向性カンナビノイドHU-211を含有するエマルソームを実施例２に記載されているようにして調製した。３頭の雄のスプレーグ・ドーリーラット（20 0〜300ｇ）に、エーテルで軽く麻酔をかけて、上記エマルソーム配合物を５ml／ kgの投与量で大腿静脈を利用して１ml／minの速度で静脈注射を行った。エマルソーム−HU-211の投与に続いて４〜５時間、臨床追跡を行った。試験動物はこの配合物に充分耐えることができ、局所のまたは全身的な異常は全く検出されなかった。 8.5. 実施例21：エマルソームの凍結乾燥 0.5Ｌの丸底フラスコに、180mgのAZT-CDS、3.5ｇの卵レシチン、3.5ｇのトリカプリン、0.14ｇのコレステロール、0.14ｇのオレイン酸および0.02ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を使用し、有機溶媒を減圧下で完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質の薄膜に、70mlの0.25Ｍラクトース溶液を添加して、次にすべての脂質が水性相に均一に分散されるまで振盪することによって該混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kinema tica，AG）を用いて17,000rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、M icrolab 70Gaulin Homogenizerを使って800バールで高剪断力ホモジナイゼーションを10サイクル行った。得られた配合物を10mlづつに分割し、そのバイアルびんを、Christ Beta Freeze Dryer（ドイツ）を用いて凍結乾燥した。これらの試料は注射するため水で再構成し、その再構成されたエマルソーム配合物の粒径分布を測定した。平均粒径の測定値は60±47nmであった。この値は凍結乾燥する前に得た平均粒径値に非常によく類似していた。 8.6. 実施例22：医薬の放出を制御するのに用いるポリマーエマルソームの製造 0.5Ｌの丸底フラスコに、0.5ｇのポリラクチド（“Resomer L104”，MW＝2,00 0Da，Boehringer Ingelheim，ドイツ）、0.5ｇの卵レシチン、0.5ｇのトリカプリン、0.2ｇのコレステロール、0.2ｇのオレイン酸および0.02ｇのコハク酸トコフェロールを入れた。その脂質混合物を50mlのジクロロメタンに溶解した。ロータリーエバポレーター（Heidolph，ドイツ）を使い、有機溶媒を、減圧下完全に乾固するまで蒸発させた。生成した乾燥脂質に、50mlの食塩水を添加し、次に脂質がすべて水性相に均一に分散されるまで振盪することによって上記混合物を水和した。得られた分散液を、Polytron PT 3000（Kinematica，AG）を用い17,000 rpmで５分間ホモジェナイズした。得られた製剤に、Microlab 70 Gaulin Homoge nizerを使って800バールで高剪断力ホモジェナイゼーションを10サイクル実施した。 8.7. 実施例23：エマルソームの規模拡大 Molton Gaulin型の工業規模の高剪断力ホモジェナイザーで、実施１〜22にしたがって大量（リットル単位）のエマルソームを製造した。得られたバッチは、最終の粒径と粒径分布が、実験室規模のMicrolab 70 Gaulinを使用して得たエマルソームと同じであることを示した。９．引用文献の援用この発明の開示を理解しまたは完全にするのに必要な程度に、この明細書に挙げたすべての刊行物、特許および特許願は、個々に援用されているのと同程度に、この明細書に明確に援用するものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年５月９日【補正内容】請求の範囲１．重量ベースで測定したとき平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、医薬として許容される担体溶液中のナノエマルションを含有する医薬投与用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアがリン脂質二重層を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれている医薬組成物。２．前記脂質粒子の平均粒径が、重量ベースで測定したとき、約２〜180nmの範囲内にある請求の範囲１記載の組成物。３．前記脂質粒子の少なくとも99％の粒径が、重量ベースで測定したとき、約 50〜150nmの範囲内にある請求の範囲２記載の組成物。４．脂質コアが脂肪酸エステルを含有している請求の範囲２記載の医薬組成物。５．脂質コアが、固相から流体相への転移温度が37℃より低い請求の範囲４記載の医薬組成物。６．脂質コアが、固相から流体相への転移温度が37℃より高い請求の範囲４記載の医薬組成物。７．脂質コアがトリグリセリドを含有する請求の範囲４記載の医薬組成物。８．前記トリグリセリドがＣ₁₀〜Ｃ₁₈の脂肪酸部分を含有している請求項７記載の医薬組成物。９．前記トリグリセリドが完全に飽和されている請求の範囲７記載の医薬組成物。 10．前記トリグリセリドが、トリカプリン、トリラウリン、トリミリスチン、トリパルミチンおよびトリステアリンからなる群から選択される請求の範囲７記載の医薬組成物。 11．リン脂質：全脂質のモル比が0.1：１〜0.5：１の範囲内にある請求の範囲７記載の組成物。 12．リン脂質：トリグリセリドの重量比が0.5：１〜1.5：１の範囲内にある請求の範囲７記載の組成物。 13．前記リン脂質がホスファチジルコリンを含有している請求の範囲４記載の医薬組成物。 14．前記ホスファチジルコリンが卵PCである請求の範囲13記載の医薬組成物。 15．前記ホスファチジルコリンが25℃より低い転移温度を有する請求の範囲13 記載の医薬組成物。 16．前記ホスファチジルコリンが飽和されている請求の範囲13記載の医薬組成物。 17．前記脂質粒子がコレステロールまたはコレステリルエステルを含有している請求の範囲１の医薬組成物。 18．前記脂質粒子が医薬を含有している請求の範囲１記載の医薬組成物。 19．前記医薬が脂質に溶解性の医薬である請求の範囲18記載の医薬組成物。 20．前記医薬が水溶性医薬である請求の範囲18記載の医薬組成物。 21．前記医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強カトランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エストロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲18記載の医薬組成物。 22．前記医薬が抗ウイルス剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 23．前記抗ウイルス剤がAZTまたはAZT-CDSである請求の範囲22記載の医薬組成物。 24．前記医薬が高ウイルス剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 25．前記抗真菌剤がミコナゾールである請求の範囲24記載の医薬組成物。 26．前記抗真菌剤がアムホテリシンＢである請求の範囲24記載の医薬組成物。 27．前記医薬が抗てんかん化合物である請求の範囲21記載の医薬組成物。 28．前記抗てんかん化合物がジランチンである請求の範囲27記載の医薬組成物。 29．前記医薬がβ−アドレナリン作動性拮抗剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 30．前記のβ−アドレナリン作動性拮抗剤がアダプロロールである請求の範囲 21記載の医薬組成物。 31．前記医薬がタンパク質またはペプチドである請求の範囲18記載の医薬組成物。 32．前記タンパク質またはペプチドが、カルシトニン、インスリン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）またはシクロスポリンである請求の範囲31記載の医薬組成物。 33．前記投与が非経口経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 34．前記投与が経口経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 35．前記投与が直腸経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 36．前記投与が鼻腔内経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 37．前記投与が、皮膚への局所塗布によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 38．前記投与が、眼に対する点滴によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 39．前記投与がエアロゾルの吸入によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 40．前記脂質粒子が、リパーゼおよびホスホリパーゼの活性を実質的に含有していない請求の範囲１記載の組成物 41．前記脂質粒子がポリマーでコートされている請求の範囲１記載の組成物。 42．前記ポリマーが、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ゼラチン、アルブミンおよびコラーゲンからなる群から選択される請求の範囲41 記載の組成物。 43．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性粒子の、医薬として許容される担体溶液中のナノエマルションを含有する、酸素輸送ペルフルオロカーボンの非経口投与用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアが、酸素輸送ペルフルオロカーボンを含有しかつリン脂質二重層を含有する少なくとも一つの表面層で囲まれている医薬組成物。 44．前記ペルフルオロカーボンが、ペルフルオロデカリンまたはペルフルオロトリブチルアミンである請求の範囲43記載の医薬組成物。 45．ナノエマルションとして投与する医薬を含有する脱水脂質粒子を含有する医薬組成物であって；前記脂質粒子が、少なくとも一つのリン脂質二重層によって囲まれた脂質コアを含有し、前記脂質コアが、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成されており、そして前記脂質粒子が、再水和されたとき平均直径が約10〜250nmである医薬組成物。 46．さらに凍結保護剤を含有している請求の範囲45記載の組成物。 47．前記凍結保護剤が、グルコース、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、デキストラン、デキストリン、シクロデキストリン、ポリビニルピロリドンおよびアミノ酸類からなる群から選択される請求の範囲46記載の組成物。 48．前記凍結保護剤が、脂質に対して0.1〜10重量％の範囲内で存在している請求の範囲46記載の組成物。 49．前記脂質粒子が医薬を含有している請求の範囲45記載の組成物。 50．前記医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強力トランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エステロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲49記載の組成物。 51．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、眼に適合している担体溶液中のナノエマルションを含有する、眼に対する点滴用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアがリン脂質二重層を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれている医薬組成物。 52．前記脂質粒子が眼の中で活性な医薬を含有している請求の範囲51記載の組成物。 53．前記医薬がβ−遮断剤である請求の範囲52記載の組成物。 54．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、生理的に適合している担体溶液中のナノエマルションを含有する、生きている組織の生存力を維持する代用血液であって；前記の各脂質粒子が、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成されたコアを含有し、前記脂質コアが、リン脂質二重層を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれた酸素輸送ペルフルオロカーボンを含有している代用血液。 55．前記ペルフルオロカーボンがペルフルオロデカリンまたはペルフルオロトリブチルアミンである請求の範囲54記載の組成物。 56．下記ステップ： 0.5：１〜1.5：１の重量比の範囲内でリン脂質とトリグリセリドを含有する混合物を製造し、そして前記トリグリセリドが25℃より高い固相から液相への転移温度を有し；前記混合物を、トリグリセリドの固相から液相への転移温度より低い温度で、水溶液中に懸濁させ；次いで生成した懸濁液をホモジェナイズして、平均粒径が約10nm〜250nmである脂質粒子のナノエマルションを得る；ステップを含んでなる、医薬投与用ナノエマルションの製造方法。 57．重量ベースで測定したとき平均直径が50〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子を、医薬として許容される担体溶液中に含有するナノエマルションを、動物に投与することからなる動物の治療方法であって；前記の各脂質粒子が、少なくとも約25℃の温度で固相である脂質で構成されかつリン脂質二重層を含有する少なくとも一つの表面層で囲まれた脂質コアを含有し、そして前記脂質粒子が医薬を含有している治療法。 58．前記脂質粒子の平均直径が20〜180nmの範囲内にある請求の範囲57記載の方法。 59．医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強力トランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エステロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲57記載の方法。 60．前記ナノエマルションが非経口で投与される請求の範囲57記載の方法。 61．前記ナノエマルションが眼に点滴することによって投与される請求の範囲 57記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＵＡ，ＵＺ

Claims

【特許請求の範囲】１．重量ベースで測定したとき、平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、医薬として許容される担体溶液中のナノエマルションを含有する医薬投与用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき、 25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアが、リン脂質を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれている医薬組成物。２．前記脂質粒子の平均粒径が、重量ベースで測定したとき、約20〜180nmの範囲内にある請求の範囲１記載の組成物。３．前記脂質粒子の少なくとも99％の粒径が、重量ベースで測定したとき、約 50〜150nmの範囲内にある請求の範囲２記載の組成物。４．脂質コアが脂肪酸エステルを含有している請求の範囲２記載の医薬組成物。５．脂質コアが、バルクで測定したとき、固相から流体相への転移温度が37℃ より低い請求の範囲４記載の医薬組成物。６．脂質コアが、バルクで測定したとき、固相から流体相への転移温度が37℃ より高い請求の範囲４記載の医薬組成物。７．脂質コアがトリグリセリドを含有する請求の範囲４記載の医薬組成物。８．前記トリグリセリドがＣ₁₀〜Ｃ₁₈の脂肪酸部分を含有している請求項７記載の医薬組成物。９．前記トリグリセリドが完全に飽和されている請求の範囲７記載の医薬組成物。 10．前記トリグリセリドが、トリカプリン、トリラウリン、トリミリスチン、トリパルミチンおよびトリステアリンからなる群から選択される請求の範囲７記載の医薬組成物。 11．リン脂質：全脂質のモル比が0.1：１〜0.5：１の範囲内にある請求の範囲７記載の組成物。 12．リン脂質：トリグリセリドの重量比が0.5：１〜1.5：１の範囲内にある請求の範囲７記載の組成物。 13．前記リン脂質がホスファチジルコリンを含有している請求の範囲４記載の医薬組成物。 14．前記ホスファチジルコリンが卵PCである請求の範囲13記載の医薬組成物。 15．前記ホスファチジルコリンが25℃より低い転移温度を有する請求の範囲13 記載の医薬組成物。 16．前記ホスファチジルコリンが飽和されている請求の範囲13記載の医薬組成物。 17．前記脂質粒子がコレステロールまたはコレステリルエステルを含有している請求の範囲１の医薬組成物。 18．前記脂質粒子が医薬を含有している請求の範囲１記載の医薬組成物。 19．前記医薬が脂質に溶解性の医薬である請求の範囲18記載の医薬組成物。 20．前記医薬が水溶性医薬である請求の範囲18記載の医薬組成物。 21．前記医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強カトランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エストロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲18記載の医薬組成物。 22．前記医薬が抗ウイルス剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 23．前記抗ウイルス剤がAZTまたはAZT-CDSである請求の範囲22記載の医薬組成物。 24．前記医薬が高ウイルス剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 25．前記抗真菌剤がミコナゾールである請求の範囲24記載の医薬組成物。 26．前記抗真菌剤がアムホテリシンＢである請求の範囲24記載の医薬組成物。 27．前記医薬が抗てんかん化合物である請求の範囲21記載の医薬組成物。 28．前記抗てんかん化合物がジランチンである請求の範囲27記載の医薬組成物。 29．前記医薬がβ−アドレナリン作動性拮抗剤である請求の範囲21記載の医薬組成物。 30．前記のβ−アドレナリン作動性拮抗剤がアダプロロールである請求の範囲 21記載の医薬組成物。 31．前記医薬がタンパク質またはペプチドである請求の範囲18記載の医薬組成物。 32．前記タンパク質またはペプチドが、カルシトニン、インスリン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）またはシクロスポリンである請求の範囲31記載の医薬組成物。 33．前記投与が非経口経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 34．前記投与が経口経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 35．前記投与が直腸経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 36．前記投与が鼻腔内経路によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 37．前記投与が、皮膚への局所塗布によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 38．前記投与が、眼に対する点滴によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 39．前記投与がエアロゾルの吸入によって行われる請求の範囲１記載の医薬組成物。 40．前記脂質粒子が、リパーゼおよびホスホリパーゼの活性を実質的に含有していない請求の範囲１記載の組成物 41．前記脂質粒子がポリマーでコートされている請求の範囲１記載の組成物。 42．前記ポリマーが、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ゼラチン、アルブミンおよびコラーゲンからなる群から選択される請求の範囲41 記載の組成物。 43．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、医薬として許容される担体溶液中のナノエマルションを含有する、酸素輸送ペルフルオロカーボンの非経口投与用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアが、酸素輸送ペルフルオロカーボンを含有しかつリン脂質を含有する少なくとも一つの表面層で囲まれている医薬組成物。 44．前記ペルフルオロカーボンが、ペルフルオロデカリンまたはペルフルオロトリブチルアミンである請求の範囲43記載の医薬組成物。 45．ナノエマルションとして投与する医薬を含有する脱水脂質粒子を含有する医薬組成物であって；前記脂質粒子が、少なくとも一つのリン脂質層によって囲まれた脂質コアを含有し、前記脂質コアが、バルクで測定したとき25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成されており、そして前記脂質粒子が、再水和されたとき平均直径が約10〜250nmである医薬組成物。 46．さらに凍結保護剤を含有している請求の範囲45記載の組成物。 47．前記凍結保護剤が、グルコース、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、デキストラン、デキストリン、シクロデキストリン、ポリビニルピロリドンおよびアミノ酸類からなる群から選択される請求の範囲46記載の組成物。 48．前記凍結保護剤が、脂質に対して0.1〜10重量％の範囲内で存在している請求の範囲46記載の組成物。 49．前記脂質粒子が医薬を含有している請求の範囲45記載の組成物。 50．前記医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強力トランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エステロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲49記載の組成物。 51．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、眼に適合している担体溶液中のナノエマルションを含有する、眼に対する点滴用医薬組成物であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき、25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成された脂質コアを含有し、前記脂質コアがリン脂質を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれている医薬組成物。 52．前記脂質粒子が眼の中で活性な医薬を含有している請求の範囲51記載の組成物。 53．前記医薬がβ−遮断剤である請求の範囲52記載の組成物。 54．平均直径が約10〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子の、生理的に適合している担体溶液中のナノエマルションを含有する、生きている組織の生存力を維持する代用血液であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成されたコアを含有し、前記脂質コアが、リン脂質を含有する少なくとも一つの表面層によって囲まれた酸素輸送ペルフルオロカーボンを含有してる代用血液。 55．前記ペルフルオロカーボンがペルフルオロデカリンまたはペルフルオロトリブチルアミンである請求の範囲54記載の組成物。 56．下記ステップ： 0.5：１−1.5：１の重量比の範囲内でリン脂質とトリグリセリドを含有する混合物を製造し、そして前記トリグリセリドが25℃より高い固相から液相への転移温度を有し；前記混合物を、トリグリセリドの固相から液相への転移温度より低い温度で、水溶液中に懸濁させ；次いで生成した懸濁液をホモジェナイズして、平均粒径が約10nm〜250nmである脂質粒子のナノエマルションを得る；ステップを含んでなる、医薬投与用ナノエマルションの製造方法。 57．重量ベースで測定したとき平均直径が50〜250nmである複数の非細胞性脂質粒子を、医薬として許容される担体溶液中に含有するナノエマルションを、動物に投与することからなる動物の治療方法であって；前記の各脂質粒子が、バルクで測定したとき25℃で固相もしくは液晶相である脂質で構成されかつリン脂質を含有する少なくとも一つの表面層で囲まれた脂質コアを含有し、そして前記脂質粒子が医薬を含有している治療方法。 58．前記脂質粒子の平均直径が20〜180nmの範囲内にある請求の範囲57記載の方法。 59．医薬が、非ステロイドの抗炎症化合物類、抗新生物化合物類、抗生物質類、抗けいれん剤類、抗てんかん剤類、抗真菌剤類、抗ウイルス剤類、グリコサミノグリカン類、催眠剤類、β−アドレナリン作動性拮抗剤類、抗不安剤類、強カトランキライザー類、抗うつ剤類、ペプチドホルモン類、コルチコールステロイド類、タンパク同化ステロイド類、エステロゲン類およびプロゲステロン類からなる群から選択される請求の範囲57記載の方法。 60．前記ナノエマルションが非経口で投与される請求の範囲57記載の方法。 61．前記ナノエマルションが眼に点滴することによって投与される請求の範囲 57記載の方法。