CN101765423B - 核酸纳米粒子和其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供包含一种或一种以上核酸的纳米粒子组合物。本发明无需进行核酸修饰，或无需使用对皮肤的化学或机械研磨或破坏，即可实现所述核酸的传递(尤其经皮传递)。

Description

核酸纳米粒子和其用途

相关申请案的交叉引用

本申请案主张2007年5月31日申请的美国临时专利申请案U.S.S.N.60/941,187(“′187申请案”)在35U.S.C.§119(e)下的优先权。′187申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。

背景技术

已显示核酸对皮肤具有有益的美容效果和治疗效应。在实验模型中，已显示核酸(诸如编码角质细胞生长因子-1(KGF-1)的cDNA)可改善创伤愈合(林(Lin)等人，2006，创伤修复和再生(Wound Repair Regen.)，14：618)。类似地，已显示编码干扰素γ的核酸可刺激干扰素产生，所述干扰素产生可抑制皮肤中胶原蛋白的合成且具有治疗硬皮病(一种结缔组织病)的潜能(巴迪亚(Badea)等人，2005，基因医学杂志(J.Gene Med.)，7：1200)。在实验模型中，已显示靶向编码皮肤中角蛋白产生的基因的siRNA可抑制这些基因且具有用于治疗皮肤病先天性厚甲症的潜能(希克森(Hickerson)等人，2006，纽约科学院院报(Ann.N.Y.Acad.Sci.)，1082：56)。

然而，在人类中实现这些核酸的潜在美容效果和治疗效应的难题在于经皮传递这些分子穿过皮肤外皮层(即，角质层)到达生物作用位点(诸如表皮和真皮、深部下方组织(deeper underlying tissue)和/或体内的远端位点)(蔡(Choi)等人，透皮吸收(Percutaneous Absorption)，第4版，博纳夫(Bronaugh)和麦巴奇(Maibach)编，泰格弗朗西斯出版集团(Taylor & Francis)，佛罗里达博卡拉顿(Boca Raton，FL)，2005)。角质层是阻止分子(诸如核酸)经皮渗透的有效物理屏障。皮肤酶也会通过酶促降解而损坏核酸(蔡(Choi)等人，同上)。

虽然已尝试通过化学修饰核酸来阻止这类降解，但这类修饰通常削弱药剂的生物活性和/或诱导不利的免疫系统反应。化学修饰还因其昂贵和耗时而不适宜。

已使用一些方法来尝试改善核酸的经皮渗透，包括胶带剥离皮肤外层、皮肤电穿孔或离子电渗、使用半固体调配物(例如乳膏等)、降解角质层的化学渗透增强剂、和/或非离子脂质体(蔡(Choi)等人，同上)。每种方法都具有一个或一个以上缺点，诸如损伤皮肤外层(对患者来说可能很痛并有刺激性)、处理较为复杂而阻碍医师和/或患者使用、增加制造复杂性和相关成本和/或可能削弱核酸的生物活性。

因此，所属领域中需要具有以下优点的经皮传递核酸(例如多核苷酸和核酸残基)的方法：使用简便、低本高效、不损伤皮肤外层、防止酶促降解且不诱导免疫反应、不削弱欲传递的核酸的生物活性和/或可增强向靶组织生物作用位点的传递。

发明内容

本发明描述纳米粒子组合物。在一些实施例中，纳米粒子组合物合并有一种或一种以上未经修饰和/或经修饰的多核苷酸(长达50个核苷酸)和/或核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)，这些物质在皮肤(例如表皮和/或真皮)、皮下组织(例如脂肪组织)、邻近肌肉和/或远端组织(例如器官，诸如肺、肝等)中是生物活性剂。

根据本发明的纳米粒子(例如合并有未经修饰和/或经修饰的多核苷酸的纳米粒子)可施用于个体的皮肤。在一些实施例中，纳米粒子实现向个体传递(具体来说，经皮传递)所合并的核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基)。

根据本发明的纳米粒子可呈简单的悬浮液或分散液形式施用于皮肤或与一种或一种以上赋形剂混合而制备成调配物形式，所述调配物诸如(但不限于)柔肤水、营养液、洁肤液、洁面霜、乳液、润肤乳、按摩膏、润肤霜、底妆液、唇膏、面膜或面胶、清洁剂调配物(例如香波、漂洗剂、沐浴露、护发素、肥皂等)和/或皮肤科用组合物(例如洗剂、软膏、凝胶、乳膏、贴片、喷雾等)。

因此，本发明提供传递(例如经皮传递)核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)的系统和组合物。本发明的许多优点之一在于能够在不注射且也不需要机械或化学研磨或改造皮肤的情况下传递核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基)。其它优点包括能够利用未经修饰的核酸，从而简化美容品和/或医药制剂的生产并降低其生产成本，而且保留(或可能增强)核酸的生物活性。

定义

研磨：如本文中所使用，术语“研磨”是指改造、破坏、除去或损坏皮肤表层的任何方法。在一些实施例中，研磨是指改造、破坏、除去或损坏皮肤表层的机械方法。在一些实施例中，研磨是指改造、破坏、除去或损坏皮肤表层的化学方法。仅举数例，诸如磨砂膏(exfoliant)、细粒(例如镁或铝粒子)、酸(例如α-羟基酸或β-羟基酸)和/或醇类等试剂可能引起研磨。一般来说，预期诸如那些(例如)由多诺万(Donovan)(参见例如美国专利公开案2004/009180和2005/175636和PCT公开案WO 04/06954)和格雷厄姆(Graham)(参见例如美国专利6,939,852和美国专利公开案2006/093624)等所描述的渗透增强剂可引起研磨。当然，所属领域的技术人员应了解，特定试剂在以一种浓度存在或结合一种或一种以上其它试剂时可能引起研磨，但在不同情况下可能不引起研磨。因此，特定材料是否是“研磨剂”需视情况而定。研磨可由所属领域的技术人员容易地加以评定，例如通过对皮肤的泛红或刺激的观察和/或对显示角质层的改造、破坏、除去或糜烂的皮肤的组织学检查。

氨基酸：如本文中所使用，术语“氨基酸”在其最广义上是指可并入多肽链中的任何化合物和/或物质。在一些实施例中，氨基酸具有通式结构H₂N-C(H)(R)-COOH。在一些实施例中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是合成氨基酸；在一些实施例中，氨基酸是D-氨基酸；在一些实施例中，氨基酸是L-氨基酸。“标准氨基酸”是指天然存在的肽中常见的二十种标准L-氨基酸中的任一种。“非标准氨基酸”是指除标准氨基酸外的任何氨基酸，不考虑其是以合成方式制备还是从天然来源获得。肽中包括羧基和/或氨基末端氨基酸在内的氨基酸可通过甲基化、酰胺化、乙酰化和/或以其它化学基团取代来修饰，所述作用可改变肽的循环半衰期而不对其活性产生不利影响。氨基酸可参与二硫键。术语“氨基酸”可与“氨基酸残基”互换使用且可以指游离氨基酸和/或肽的氨基酸残基。从使用这一术语的上下文中将很清楚它是指游离氨基酸，还是指肽的残基。

动物：如本文中所使用，术语“动物”是指动物界的任何成员。在一些实施例中，“动物”是指处于任何发育阶段的人类。在一些实施例中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人类动物。在某些实施例中，所述非人类动物是哺乳动物(例如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔子、猴子、狗、猫、绵羊、牛、灵长类动物和/或猪)。在一些实施例中，动物包括(但不限于)哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类和/或蠕虫。在一些实施例中，动物可以是转基因动物、遗传工程动物和/或克隆动物(clone)。

约：如本文中所使用，术语“约”在提及数字时除非另有规定或由上下文显而易见(除了所述数字将小于可能值的0％或超过可能值的100％)，否则一般包括落在这一数字任一方向(大于或小于)5％、10％、15％或20％范围内的数字。

生物活性剂：如本文中所使用，短语“生物活性剂”是指在生物系统和/或生物体中具有活性的任何物质。举例来说，当向生物体投与时对所述生物体具有生物效应的物质被视为具有生物活性。在特定实施例中，当多核苷酸具有生物活性时，所述多核苷酸中共有多核苷酸的至少一种生物活性的一部分通常被称为“生物活性”部分。

特征部分：如本文中所使用，短语物质的“特征部分”在最广义上是与相关完整物质共有一定程度的序列和/或结构一致性和/或至少一种功能特征的部分。举例来说，多核苷酸的“特征部分”是含有共同成为多核苷酸特征的连续核酸残基段或一组连续核酸残基段的部分。在一些实施例中，每一所述连续段通常将含有至少2个、至少5个、至少10个、至少15个、至少20个或20个以上的核酸残基。一般来说，特征部分是除以上所指定的序列一致性外还与相关完整多核苷酸共有至少一种功能特征的部分。在一些实施例中，特征部分可具有生物活性。

同源性：如本文中所使用，术语“同源性”是指聚合分子之间、例如多核苷酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。在一些实施例中，如果聚合分子的序列彼此间的一致性为至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％，那么认为聚合分子彼此“同源”。在一些实施例中，如果聚合分子的序列彼此间的相似性为至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％，那么认为聚合分子彼此“同源”。

亲水性：如本文中所使用，“亲水性”物质是可溶于极性溶剂中的物质。在一些实施例中，亲水性物质可暂时与极性溶剂键结。在一些实施例中，亲水性物质通过氢键暂时与极性溶剂键结。在一些实施例中，极性溶剂为水。在一些实施例中，亲水性物质可以是离子型。在一些实施例中，亲水性物质可以是非离子型。在一些实施例中，与在油、非极性溶剂或疏水性溶剂中相比，亲水性物质可更易溶解于水、极性溶剂或亲水性溶剂中。在一些实施例中，与在水、极性溶剂或亲水性溶剂中相比，亲水性物质可更不易溶解于油、非极性溶剂或疏水性溶剂中。在一些实施例中，一种物质相对于另一物质是亲水性的，因为其比另一物质更易溶于水、极性溶剂或亲水性溶剂中。在一些实施例中，一种物质相对于另一物质是亲水性的，因为其比另一物质更不易溶于油、非极性溶剂或疏水性溶剂中。

疏水性：如本文中所使用，“疏水性”物质是可溶于非极性溶剂中的物质。在一些实施例中，疏水性物质受到极性溶剂排斥。在一些实施例中，极性溶剂为水。在一些实施例中，疏水性物质为非极性的。在一些实施例中，与在水、极性溶剂或亲水性溶剂中相比，疏水性物质可更易溶解于油、非极性溶剂或疏水性溶剂中。在一些实施例中，与在油、非极性溶剂或疏水性溶剂中相比，疏水性物质可更不易溶解于水、极性溶剂或亲水性溶剂中。在一些实施例中，一种物质相对于另一物质是疏水性的，因为其比另一物质更易溶于油、非极性溶剂或疏水性溶剂中。在一些实施例中，一种物质相对于另一物质是疏水性的，因为其比另一物质更不易溶于水、极性溶剂或亲水性溶剂中。

一致性：如本文中所使用，术语“一致性”是指聚合分子之间、例如多核苷酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。出于最佳比较的目的，例如可通过比对两个序列来执行两个核酸序列一致性百分比的计算(例如，为最佳比对，可在第一和第二核酸序列的一个或两个中引入空位，且出于比较的目的，可忽略非一致序列)。在某些实施例中，出于比较的目的所比对的序列长度为参考序列长度的至少30％，至少40％，至少50％，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。然后比较相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中某一位置被与第二序列中相应位置相同的核苷酸占据时，那么在这一位置处所述分子是一致的。两个序列之间的一致性百分比是序列所共享的一致性位置的数目的函数，其中将为最佳比对两个序列而需引入的空位的数目和各空位的长度考虑在内。序列的比较和两个序列之间一致性百分比的确定可使用数学算法实现。举例来说，可使用迈尔(Meyers)和米勒(Miller)(CABIOS，1989，4：11-17)的算法确定两个核苷酸序列之间的一致性百分比，所述算法已并入使用PAM120权重残基表(weight residue table)，空位长度罚分12和空位罚分4的ALIGN程序(2.0版)中。或者，可使用GCG软件包中的使用NWSgapdna.CMP矩阵的GAP程序确定两个核苷酸序列之间的一致性百分比。

与……结合：如本文中所使用，短语“结合传递”是指两种或两种以上物质或试剂的共同传递。具体来说，根据本发明，所述短语在本文中提及生物活性剂与根据本发明的纳米粒子和/或纳米粒子组合物一起传递时使用。当一种物质或试剂与纳米粒子和/或纳米粒子组合物组合时；由纳米粒子囊封或完全包围时；包埋在纳米粒子胶束膜中时；和/或与纳米粒子胶束膜的外表面缔合时，所述物质或试剂结合纳米粒子传递。欲结合纳米粒子和/或纳米粒子组合物传递的物质或试剂可能与或可能不与纳米粒子和/或纳米粒子组合物共价键联。欲结合纳米粒子和/或纳米粒子组合物传递的物质或试剂可能通过或可能不通过吸附力附着至纳米粒子和/或纳米粒子组合物。

经分离：如本文中所使用，术语“经分离”是指如下物质和/或实体：(1)已与最初产生时与其相关的至少一些组分分离(无论在自然界中和/或在实验环境中)；和/或(2)通过人工产生、制备和/或制造。经分离的物质和/或实体可与至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或更多与其最初相关的其它组分分离。在一些实施例中，经分离的物质和/或实体的纯度大于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。

微流体化：如本文中所使用，术语“微流体化”意指暴露于高剪切力下。在一些实施例中，所述暴露于高剪切力下是通过暴露于高压下来实现；在一些实施例中，所述高压在约15,000psi到约26,000psi的范围内。在一些实施例中，所述暴露于高剪切力下是通过空化(cavitation)来实现。在一些实施例中，所述暴露于高剪切力下是通过使样品通过诸如微流体化仪(微流控公司(Microfluidics Corporation)/MFIC公司(MFIC Corporation))等仪器或可适用于形成均一纳米粒子组合物的其它类似仪器来实现。在本发明的一些实施例中，通过暴露于高剪切力下少于约10分钟的时间来使样品微流体化。在一些实施例中，所述时间少于约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2或约1分钟。在一些实施例中，时间在约1-约2分钟的范围内。在一些实施例中，时间为约30秒。在一些实施例中，通过单次暴露于高剪切力下来使样品“微流体化”；所述实施例被称为“单程”微流体化。

纳米粒子：如本文中所使用，术语“纳米粒子”是指具有小于1000纳米(nm)直径的任何粒子。在一些实施例中，纳米粒子如美国国家科学基金会(National ScienceFoundation)所定义，具有小于300nm的直径。在一些实施例中，纳米粒子如美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)所定义，具有小于100nm的直径。在一些实施例中，纳米粒子为胶束，因为其包含由胶束膜与本体溶液隔开的封闭隔室。“胶束膜”包含已聚集起来而包围并封闭一个空间或隔室(例如，以界定内腔)的两亲实体。

纳米粒子组合物：如本文中所使用，术语“纳米粒子组合物”是指含有至少一种纳米粒子的任何物质。在一些实施例中，纳米粒子组合物是均一的一组纳米粒子。在一些实施例中，纳米粒子组合物是分散液或乳液。一般来说，当组合至少两种不混溶的物质时，形成分散液或乳液。“水包油”分散液是油性粒子(或疏水性或非极性)分散于水性分散介质中的分散液。“油包水”分散液是水性(或亲水性或极性)粒子分散于油性分散介质中的分散液。所属领域的技术人员应了解分散液可由任何两种不混溶的介质形成且并不严格限于水性介质与油性介质的组合。因此，术语“分散介质”广泛适用于任何分散介质，尽管通常提及“水性”和“油性”种类。在一些实施例中，纳米粒子组合物是纳米乳液。在一些实施例中，纳米粒子组合物包含胶束。在一些特定实施例中，纳米粒子组合物包含如题为“两亲实体纳米粒子(Amphiphilic Entity Nanoparticles)”且于2007年11月30日申请的同在申请中的PCT申请案第PCT/US07/86018号中所述的两亲实体。在一些特定实施例中，纳米粒子组合物包含如题为“肉毒纳米粒子(BotulinumNanoemulsions)”且于2006年12月1日申请的同在申请中的美国专利申请案第11/607,436号中所述的纳米乳液。在一些实施例中，纳米粒子组合物是稳定的。在一些实施例中，纳米粒子组合物包括一种或一种以上欲结合纳米粒子传递的生物活性剂。

核酸：如本文中所使用，术语“核酸”在其最广义上是指为寡核苷酸链或可并入寡核苷酸链中的任何化合物和/或物质。在一些实施例中，核酸是为寡核苷酸链或可经由磷酸二酯键联并入寡核苷酸链中的化合物和/或物质。在一些实施例中，“核酸”是指个别核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)。在一些实施例中，“核酸”是指包含个别核酸残基的寡核苷酸链。如本文所使用，术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”可互换使用。在一些实施例中，“核酸”涵盖RNA以及单链和/或双链DNA和/或cDNA。此外，术语“核酸”、“DNA”、“RNA”和/或类似术语包括核酸类似物，例如，不具有磷酸二酯骨架的类似物。举例来说，所属领域中已知的骨架中具有肽键而代替磷酸二酯键的所谓“肽核酸”被视为在本发明的范围内。术语“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括为彼此的简并形式且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和/或RNA的核苷酸序列可包括内含子。核酸可从天然源纯化，使用重组表达系统产生和任选地纯化、化学合成等。适当时，例如在化学合成的分子的情况下，核酸可包含核苷类似物，诸如具有经化学修饰的碱基或糖、主链修饰等的类似物。除非另外指出，否则核酸序列按5′到3′的方向呈现。术语“核酸区段”在本文用于指为较长核酸序列的一部分的核酸序列。在许多实施例中，核酸区段包含至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或10个以上残基。在一些实施例中，核酸是或包含天然核苷(例如腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)；核苷类似物(例如2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫代胞苷)；经化学修饰的碱基；经生物修饰的碱基(例如甲基化碱基)；插入的碱基；经修饰的糖(例如2′-氟核糖、核糖、2′-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或经修饰的磷酸基(例如硫代磷酸酯键联和5′-N-亚磷酰胺键联)。在一些实施例中，本发明具体针对“未经修饰的核酸”，意指为促进或实现传递(例如经皮传递)而尚未经化学修饰的核酸(例如多核苷酸和残基，包括核苷酸和/或核苷)。

营养保健品(Nutraceutical)：如本文中所使用，术语“营养保健品”是指提供医学、健康或生物学益处的任何物质。在一些实施例中，营养保健品可以防病。在一些实施例中，营养保健品可以提供基本营养价值。在一些实施例中，营养保健品是食品或食品的一部分。在一些实施例中，营养保健剂可以是一类经分离的营养物、膳食补充剂、维生素、矿物质、草药、强化食品、医疗食品(healing food)、遗传工程食品和加工食品。营养保健品也可称为“植物化学食品”或“功能性食品”。

患者：如本文中所使用，术语“患者”或“个体”是指可被投与根据本发明的组合物(例如)用于实验、诊断、预防和/或治疗目的的任何生物体。典型患者包括动物(例如，哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、兔子、非人类灵长类动物和人类)。在一些实施例中，患者为人类。

预混物：如本文中所使用，术语“预混物”是指随后用于产生根据本发明的纳米粒子组合物的组分的任何组合。举例来说，预混物是当经受高剪切力时产生根据本发明的纳米粒子的任何一组成分。在一些实施例中，预混物含有两种或两种以上不混溶的溶剂。在一些实施例中，预混物含有自组装成纳米粒子的组分。在一些实施例中，预混物含有自组装成胶束的组分。在一些实施例中，预混物含有一种或一种以上如题为“两亲实体纳米粒子(Amphiphilic Entity Nanoparticles)”且于2007年11月30日申请的同在申请中的PCT申请案第PCT/US07/86018号中所述的两亲实体。在一些实施例中，预混物含有一种或一种以上核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)；在一些实施例中，预混物含有至少一种其它生物活性剂。在一些实施例中，将预混物搅动、混合和/或搅拌；在一些实施例中，在经受高剪切力之前将预混物搅动、混合和/或搅拌。在一些实施例中，预混物包含至少一种溶解的组分(即，至少一种呈溶液形式的组分)；在一些所述实施例中，在实现所述溶解后使预混物经受高剪切力。

纯：如本文中所使用，如果一种物质和/或实体实质上不含其它组分，那么其是“纯”的。举例来说，含有大于约90％特定物质和/或实体的制剂通常被视为纯制剂。在一些实施例中，物质和/或实体的纯度为至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。

剪切力：如本文中所使用，术语“剪切力”是指与垂直于材料面的力相对而言，平行于材料面的力。在一些实施例中，使组合物暴露于高剪切力以便产生均一纳米粒子组合物。所属领域中已知的任何方法可用于产生高剪切力。在一些实施例中，使用空化产生高剪切力。在一些实施例中，使用高压均化产生高剪切力。另一选择或另外，可通过暴露于高压(例如约15,000psi)下来施与高剪切力。在一些实施例中，所述高压在约18,000psi到约26,000psi的范围内；在一些实施例中，其在约20,000psi到约25,000psi的范围内。在一些实施例中，使用微流体化仪处理器(微流控公司/MFIC公司(Microfluidics Corporation/MFIC Corportation))或其它类似装置产生高剪切力。微流体化仪处理器通过使组合物以高速度(通常范围为50m/s-300m/s)加速通过微通道(通常具有约75微米的尺寸)以将尺寸减小到纳米级范围来提供高压和所得高剪切速率。当流体离开微通道时，其形成射流，与来自相对微通道的射流碰撞。在通道中，流体经历比常规技术高几个数量级的高剪切(高达10⁷l/s)。射流碰撞使得在亚微米水平上混合。因此，在所述装置中，高剪切和/或冲击可实现粒径减小和多相混合。在本发明的一些实施例中，使样品暴露于高剪切力下历时少于约10分钟的时间。在一些实施例中，所述时间少于约9分钟、约8分钟、约7分钟、约6分钟、约5分钟、约4分钟、约3分钟、约2分钟或约1分钟。在一些实施例中，时间在约1分钟-约2分钟的范围内；在一些实施例中，时间少于约1分钟；在一些实施例中，时间为约30秒。在一些实施例中，通过单次暴露于高剪切力下来使样品“微流体化”；所述实施例在本文中被称为“单程”微流体化。

相似性：如本文中所使用，术语“相似性”是指聚合分子之间、例如多核苷酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。聚合分子彼此间的相似性百分比计算可以按与一致性百分比的计算相同的方式进行，但如所属领域所了解，相似性百分比的计算要考虑保守性取代。

小分子：一般来说，“小分子”为尺寸小于约5千道尔顿(Kd)的有机分子。在一些实施例中，小分子小于约4Kd、3Kd、约2Kd或约1Kd。在一些实施例中，小分子小于约800道尔顿(D)、约600D、约500D、约400D、约300D、约200D或约100D。在一些实施例中，小分子小于约2000g/mol，小于约1500g/mol，小于约1000g/mol，小于约800g/mol或小于约500g/mol。在一些实施例中，小分子是非聚合性。根据本发明，小分子通常不为蛋白质、多肽、寡肽、肽、多核苷酸、寡核苷酸、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖(proteoglycan)等。小分子的衍生物是指与最初小分子共享相同的结构核心但可从最初小分子通过一系列化学反应制备的分子。作为一个实例，小分子的前药是这一小分子的衍生物。小分子的类似物是指与最初小分子共享相同或相似的结构核心且经由与最初小分子相似或相关途径或所属领域认可的变化形式合成的分子。

稳定：术语“稳定”在应用于本文中的纳米粒子组合物时，意指在一段时间内所述组合物维持其物理结构的一个或一个以上方面(例如尺寸范围和/或粒子分布)。在一些实施例中，稳定的纳米粒子组合物是使平均粒径、最大粒径、粒径范围和/或粒径分布(即，超过指定尺寸和/或超出指定尺寸范围的粒子百分比)维持一段时间的纳米粒子组合物。在一些实施例中，所述时间为至少约1小时；在一些实施例中，时间为约5小时、10小时、一(1)天、一(1)周、两(2)周、一(1)个月、两(2)个月、三(3)个月、四(4)个月、五(5)个月、六(6)个月、八(8)个月、十(10)个月、十二(12)个月、二十四(24)个月或更长时间。在一些实施例中，时间在约一(1)天到二十四(24)个月、两(2)周到十二(12)个月、两(2)个月到五(5)个月等的范围内。举例来说，如果使纳米粒子组合物经受长期储存、温度变化和/或pH值变化且组合物中的大部分纳米粒子维持在规定范围内(例如在约10nm-120nm之间)的直径，那么纳米粒子组合物是稳定的。对于一些所述群体来说，大部分是大于约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％、约99.9％或更多。在一些实施例中，当纳米粒子组合物包含至少一种生物活性剂时，如果在指定的一组条件下经过指定时间，纳米粒子组合物中生物活性剂(例如核酸)的浓度得到维持，那么组合物被视为稳定的。

实质上：如本文中所使用，术语“实质上”是指展现全部或接近全部范围或程度的所关注特征或特性的定性条件。生物学领域的技术人员应理解生物学和化学现象很少(如果存在)达到完全和/或进行到完全或者实现或避免绝对结果。因此，术语“实质上”在本文中用于捕捉许多生物学和化学现象中所固有的潜在完全性缺乏。

实质上不含：当纳米粒子组合物中不超过约50％的粒子具有超出规定范围的直径时，所述组合物被称为“实质上不含”直径超出所述范围的粒子。在一些实施例中，不超过25％的粒子超出范围。在一些实施例中，不超过20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或更少的粒子具有超出规定范围的直径。

罹患：“罹患”疾病、病症或病状(例如创伤、皮肤细胞异常增殖、结缔组织疾病(诸如硬皮病)、先天性厚甲症、皮肤炎症、银屑病、晒伤或其它类型的皮肤损伤、皮肤癌等)的个体已诊断出或展现所述疾病、病症或病状的症状。

治疗有效量：如本文中所使用，术语“治疗有效量”意指当向罹患或易患疾病、病症和/或病状的患者投与时足以治疗所述疾病、病症和/或病状的纳米粒子组合物的量。

治疗剂：如本文中所使用，短语“治疗剂”是指当向个体投与时具有治疗效应和/或引起所需生物效应和/或药理效应的任何试剂。

治疗：如本文中所使用，术语“治疗”是指生物活性剂的任何投与，所述生物活性剂部分或完全减轻、改善、缓解、抑制特定疾病、病症和/或病状的一种或一种以上症状或特征、延迟所述症状或特征的发作、降低所述症状或特征的严重性和/或降低所述症状或特征的发生率。所述治疗可针对未展现相关疾病、病症和/或病状的病征的个体和/或仅展现所述疾病、病症和/或病状的早期病征的个体。替代地或另外，所述治疗可针对展现相关疾病、病症和/或病状的一种或一种以上确定病征的个体。

有毒溶剂：如本文中所使用，术语“有毒溶剂”是指可改造、破坏、除去或损坏动物组织的任何物质。如所属领域的技术人员应理解，动物组织可包括活细胞、死细胞、细胞外基质、细胞连接(cellular junction)、生物分子等。仅举数例，有毒溶剂包括二甲亚砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、氯仿、四甲基甲酰胺、丙酮、乙酸酯和烷烃。

均一：术语“均一”在本文中提及纳米粒子组合物使用时，是指个别纳米粒子具有指定的粒径尺寸范围的纳米粒子组合物。举例来说，在一些实施例中，均一纳米粒子组合物是最小直径与最大直径之间的差不超过约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约400nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约90nm、约80nm、约70nm、约60nm、约50nm或更少的纳米粒子组合物。在一些实施例中，根据本发明的均一纳米粒子组合物中的粒子(例如含核酸粒子)具有小于约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约400nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约130nm、约120nm、约115nm、约110nm、约100nm、约90nm、约80nm或更小的直径。在一些实施例中，根据本发明的均一纳米粒子组合物中的粒子(例如含核酸粒子)具有在约10纳米与约600纳米范围内的直径。在一些实施例中，根据本发明的均一纳米粒子组合物中的粒子(例如含核酸粒子)具有在约10nm-约300nm、约10nm-约200nm、约10nm-约150nm、约10nm-约130nm、约10nm-约120nm、约10nm-约115nm、约10nm-约110nm、约10nm-约100nm或约10nm-约90nm范围内的直径。在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物中的粒子(例如含核酸粒子)具有小于约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约130nm、约120nm、约115nm、约110nm、约100nm或约90nm的平均粒径。在一些实施例中，平均粒径在约10nm-约300nm、约50nm-约250nm、约60nm-约200nm、约65nm-约150nm、约70nm-约130nm的范围内。在一些实施例中，平均粒径为约80nm-约110nm。在一些实施例中，平均粒径为约90nm-约100nm。在一些实施例中，根据本发明的均一纳米粒子组合物中的大部分粒子(例如含核酸粒子)具有指定尺寸以下或在指定范围内的直径。在一些实施例中，所述大部分是大于组合物中50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更多的粒子。在一些实施例中，均一纳米粒子组合物是通过样品的微流体化来实现。在一些实施例中，均一纳米粒子组合物是通过暴露于高剪切力下(例如通过微流体化)来制备。

未经修饰的核酸：如本文所使用的术语“未经修饰的核酸”是指希望实现多核苷酸、核苷酸和/或核苷的传递(例如经皮传递)而尚未通过添加其它共价键结的官能团进行化学修饰的核酸(例如多核苷酸、核苷酸、核苷等)。在一些实施例中，核酸尚未经修饰而添加磷酸基。在一些实施例中，核酸尚未经化学修饰而添加任何官能磷酸基。

具体实施方式

纳米粒子

如本文所论述，本发明描述纳米粒子组合物。在一些实施例中，纳米粒子组合物合并有一种或一种以上未经修饰或经修饰的核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)。在一些实施例中，除核酸外，这类纳米粒子组合物更包括一种或一种以上其它生物活性剂。在一些实施例中，纳米粒子组合物与一种或一种以上其它组分调配，例如调配成医药制剂或美容用制剂。在一些实施例中，调配这类医药制剂或美容用制剂以实现传递(具体来说，经皮传递)核酸(和/或一种或一种以上其它生物活性剂)。在一些实施例中，调配这类医药制剂或美容用制剂以实现传递(具体来说，经皮传递)已就在生物作用位点处的活性加以选择的核酸。在一些实施例中，修饰核酸以增强其在生物作用位点处的活性。

在一些实施例中，纳米粒子组合物包含一群纳米粒子。在一些实施例中，纳米粒子合并有一种或一种以上未经修饰或经修饰的核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)。在一些实施例中，除核酸外，这类纳米粒子更包括一种或一种以上其它生物活性剂。

纳米粒子的特征

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物是稳定的。在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物是均一的。

在一些实施例中，均一纳米粒子组合物包含最小直径与最大直径之间的差不超过约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约400nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm或约100nm的一群粒子。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子具有小于约1000nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约400nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约130nm、约120nm、约115nm、约110nm、约100nm、约90nm、约80nm、约50nm或50nm以下的直径。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子具有1nm到1000nm、1nm到600nm、1nm到500nm、1nm到400nm、1nm到300nm、1nm到200nm、1nm到150nm、1nm到120nm、1nm到100nm、1nm到75nm、1nm到50nm或1nm到25nm的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物具有1nm到15nm、15nm到200nm、25nm到200nm、50nm到200nm或75nm到200nm的直径。

在一些实施例中，总粒子分布涵盖在指定的粒径尺寸范围内。在一些实施例中，少于50％、25％、10％、5％或1％的总粒子分布超出指定的粒径尺寸范围。在一些实施例中，小于1％的总粒子分布超出指定的粒径尺寸范围。在某些实施例中，纳米粒子组合物实质上不含直径大于300nm、250nm、200nm、150nm、120nm、100nm、75nm、50nm或25nm的粒子。

在一些实施例中，纳米粒子组合物中的纳米粒子具有小于约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约130nm、约120nm、约115nm、约110nm、约100nm、约90nm或约50nm的平均粒径。在一些实施例中，平均粒径在约10nm-约300nm、约50nm-约250nm、约60nm-约200nm、约65nm-约150nm或约70nm-约130nm的范围内。在一些实施例中，平均粒径为约80nm-约110nm。在一些实施例中，平均粒径为约90nm-约100nm。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物实质上不含直径超过300nm的粒子。具体来说，在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物中少于50％的纳米粒子具有超过300nm的直径。在一些实施例中，少于25％的粒子具有超过300nm的直径。在一些实施例中，少于20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.5％以下的粒子具有超过300nm的直径。此外，在一些实施例中，纳米组合物中的纳米粒子具有10nm-300nm范围内的直径。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物实质上不含直径超过200nm的粒子。具体来说，在一些实施例中，纳米粒子组合物中少于50％的纳米粒子具有超过200nm的直径。在一些实施例中，少于25％的粒子具有超过200nm的直径。在一些实施例中，少于20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.5％以下的粒子具有超过200nm的直径。此外，在一些实施例中，纳米粒子组合物中的纳米粒子具有在10nm-200nm范围内的直径。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物实质上不含直径超过120nm的粒子。具体来说，在一些实施例中，纳米粒子组合物中少于50％的纳米粒子具有超过120nm的直径。在一些实施例中，少于25％的粒子具有超过120nm的直径。在一些实施例中，少于20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.5％以下的粒子具有超过120nm的直径。

在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有指定尺寸以下或在指定范围内的直径。在一些实施例中，所述大部分是大于组合物中50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或99.9％以上的粒子。

在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有10nm与120nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与120nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与110nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与100nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与90nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与80nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与70nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与60nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与50nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与40nm之间的直径。在一些实施例中，纳米粒子组合物中的大部分纳米粒子具有20nm与30nm之间的直径。

在某些实施例中，纳米粒子组合物中约50％的纳米粒子具有10nm与40nm之间的直径。在某些实施例中，纳米粒子组合物中约90％的纳米粒子具有10nm与80nm之间的直径。在某些实施例中，纳米粒子组合物中约90％的纳米粒子具有10nm与90nm之间的直径。在某些实施例中，纳米粒子组合物中约95％的纳米粒子具有10nm与110nm之间的直径。在某些实施例中，纳米粒子组合物中约95％的纳米粒子具有10nm与120nm之间的直径。

在某些实施例中，纳米粒子组合物中所有纳米粒子的集料体积的约50％包含直径在10nm与40nm之间的纳米粒子或由这类纳米粒子组成。在某些实施例中，纳米粒子组合物中所有纳米粒子的集料体积的约90％包含直径在10nm与80nm之间的纳米粒子或由这类纳米粒子组成。在某些实施例中，纳米粒子组合物中所有纳米粒子的集料体积的约95％包含直径在10nm与110nm之间的纳米粒子或由这类纳米粒子组成。在某些实施例中，纳米粒子组合物中所有纳米粒子的集料体积的约95％包含直径在10nm与120nm之间的纳米粒子或由这类纳米粒子组成。

ζ电势是剪切面处电势的量度。剪切面是将与固体表面(例如纳米粒子的表面)结合且展示弹性行为的一薄层液体与展示正常粘性行为的其余液体(例如液体分散介质)隔开的虚表面(imaginary surface)。在一些实施例中，纳米粒子具有在-80mV与+80mV之间范围内的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有在-50mV与+50mV之间范围内的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有在-25mV与+25mV之间范围内的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有在-10mV与+10mV之间范围内的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-80mV、约-70mV、约-60mV、约-50mV、约-40mV、约-30mV、约-25mV、约-20mV、约-15mV、约-10mV或约-5mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约+50mV、约+40mV、约+30mV、约+25mV、约+20mV、约+15mV、约+10mV或约+5mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约0mV的ζ电势。

在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-80mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-70mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-60mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-50mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-40mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-30mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV到约-20mV的ζ电势。

在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-15mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-80mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-70mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-60mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-50mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-40mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-30mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约-20mV的ζ电势。

在一些实施例中，纳米粒子具有约-80mV到约-70mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-70mV到约-60mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-60mV到约-50mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-50mV到约-40mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-40mV到约-30mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-30mV到约-20mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-20mV到约-10mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-10mV到约0mV的ζ电势。

在一些实施例中，纳米粒子具有约-15mV到约-20mV的ζ电势。在一些实施例中，纳米粒子具有约-5mV、约-6mV、约-7mV、约-8mV、约-9mV、-10mV、约-11mV、约-12mV、约-13mV、约-14mV、约-15mV、约16mV、约-17mV、约-18mV、约-19mV或约-20mV的ζ电势。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物为乳液或分散液。一般来说，乳液或分散液由至少两种不混溶的物质形成，其中一种将构成分散介质(即，构成“被分散的介质”的粒子(例如纳米粒子)分散于其中的液体介质)。“水包油”分散液是油性粒子分散于水性分散介质中的分散液。“油包水”分散液是水性粒子分散于油性分散介质中的分散液。下文更详细地论述水包油和油包水分散液。所属领域的一般技术人员应了解分散液可由任何两种不混溶性介质形成且并不严格限于水性介质与油性介质的组合。因此，术语“分散介质”广泛适用于任何分散介质，尽管通常提及“水性”和“油性”类别。举例来说，乳液或分散液可由疏水性/亲水性物质、极性/非极性物质等不混溶的组制备，而不管所述物质严格来说是否是“水性”或“油性”。

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物包含胶束结构(例如所述纳米粒子为胶束)。在一些实施例中，所述胶束结构是交联的。在一些实施例中，所述胶束结构不是交联的。

纳米粒子的制造

在一些实施例中，根据本发明的纳米粒子组合物由组合组分的集合自组装。在一些实施例中，纳米粒子组合物是通过使组分组合(即，“预混物”)经受高剪切力来制备。在一些实施例中，高剪切力是通过高压、通过空化、通过均化和/或通过微流体化来施加。在一些实施例中，将组合的纳米粒子形成组分搅动、搅拌或以其它方式混合。在一些所述实施例中，在混合过之后使所述组分经受高剪切力。在一些特定实施例中，混合可执行一段时间，诸如小于1小时或大于5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15小时。在一些实施例中，达到溶解。

在一些实施例中，纳米粒子组合物的制造包括透析组分的集合，例如以除去任何有机溶剂，和/或冷冻干燥以产生组合物。

在本发明的利用预混物的一些实施例中，应了解预混物组分可在施加高剪切力之前组装成粒子。至少一些所述粒子可以是微米粒子或甚至纳米粒子。在一些实施例中，纳米粒子组合物由预混物制备，其中预混物选自包含悬浮液或微乳液的群组。然而，在一些实施例中，在施加高剪切力之前，预混物中并不形成粒子结构。

在本发明的一些实施例中，最终纳米粒子组合物中所存在的组分在预混物中全部存在且经受高剪切力以产生纳米粒子组合物。在本发明的一些实施例中，最终纳米粒子组合物中所存在的一种或一种以上组分在预混物中不存在或者以小于最终纳米粒子组合物中的量存在于预混物中。也就是说，在本发明的一些实施例中，在使预混物经受高剪切力后，向纳米粒子组合物中加入一种或一种以上物质。

在某些实施例中，在施加高剪切力之前将预混物制备为溶液。尤其，对于包括至少一种生物活性剂(例如核酸)的纳米粒子组合物，常常需要先将生物活性剂溶解于预混物中，随后再施加高剪切力。因此，在许多实施例中，生物活性剂可溶于至少一种介质(或预混物中所用介质的组合)。在一些实施例中，所述溶解需要加热；在其它实施例中，其不需要加热。

纳米粒子的组成

在一些实施例中，纳米粒子组合物由多种组分制备，包括一种或一种以上水性、极性或亲水性介质、一种或一种以上油性、非极性或疏水性介质、一种或一种以上胶束组分、一种或一种以上表面活性剂或乳化剂、一种或一种以上生物活性剂和/或一种或一种以上释放延迟剂等。

所属领域的一般技术人员将充分了解可用作分散介质或根据本发明欲分散的介质的合适水性介质。代表性的所述水性介质例如包括水、生理盐水溶液(包括磷酸盐缓冲生理盐水)、注射用水、短链醇、5％葡萄糖、林格氏溶液(乳酸林格氏注射液、乳酸林格氏液加5％葡萄糖注射液、酰化林格氏注射液)、诺莫索M、艾索里特E(ISOLYTE E)等和其组合。

所属领域的一般技术人员还将充分了解可用作分散介质或根据本发明欲分散的介质的合适油性介质。在一些实施例中，油可包含一种或一种以上脂肪酸基团或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可包含可消化的、长链(例如C₈-C₅₀)、经取代或未经取代的烃。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₀-C₂₀脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₅-C₂₀脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₅-C₂₅脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为不饱和的。在一些实施例中，脂肪酸基团可为单不饱和的。在一些实施例中，脂肪酸基团可为多不饱和的。在一些实施例中，不饱和脂肪酸基团的双键可呈顺式构象。在一些实施例中，不饱和脂肪酸的双键可呈反式构象。

在一些实施例中，脂肪酸基团可为丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸或木蜡酸中的一种或一种以上。在一些实施例中，脂肪酸基团可为棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一种或一种以上。

在一些实施例中，油为液态甘油三酯。在一些实施例中，油为中链甘油三酯。中链甘油三酯一般是含有6-12个碳原子的脂肪酸(例如羊脂酸、辛酸、羊蜡酸、癸酸、月桂酸等)且可从椰子油或棕榈仁油获得。在一些实施例中，1349油是可根据本发明利用的中链甘油三酯。

供本发明使用的合适油包括(但不限于)杏仁油(almond oil)、杏核仁油(apricotkernel oil)、鳄梨油、巴巴苏油、香柠檬油、黑加仑籽油、琉璃苣油、杜松油、甘菊油、芥花籽油、葛缕子油、巴西棕榈油、蓖麻油、肉桂油、可可油、椰子油、鳕肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鸸鹋油、桉树油、月见草油、鱼油、亚麻籽油、香叶醇油、葫芦油、葡萄籽油、榛果油、海索油、肉豆蔻酸异丙酯、荷荷巴油、夏威夷核油(kukui nut oil)、杂薰衣草油、熏衣草油、柠檬油、山苍子油(litsea cubeba oil)、澳洲坚果油(macademianut oil)、锦葵油、芒果籽油、白芒花籽油、矿物油、貂油、肉豆蔻油(nutmeg oil)、橄榄油、甜橙油、深海鱼油(orange roughy oil)、棕榈油、棕榈仁油、桃仁油、花生油、罂粟籽油、南瓜籽油、油菜籽油、米糠油、迷迭香油、红花油、檀香油、山茶花油(sasquanaoil)、香薄荷油、沙棘油、芝麻油、乳木果油、硅油、大豆油、向日葵油、茶树油、蓟油、茶花油(tsubaki oil)、香根草油、胡桃油、小麦胚芽油和其混合物。供本发明使用的合适合成油包括(但不限于)辛酸甘油三酯/癸酸甘油三酯、环聚二甲基硅氧烷(cyclomethicone)、癸二酸二乙酯、二甲硅油360(dimethicone 360)、肉豆蔻酸异丙酯、辛基十二烷醇、油醇、1349油和其组合。

适当的胶束组分可包括例如一种或一种以上两亲实体。适用的两亲实体包括天然实体、合成实体和含有天然与合成组分的实体。在一些实施例中，两亲实体可包含一种或一种以上聚合物和/或一种或一种以上具有聚合物特征的化合物。

一般而言，两亲实体是同时具有疏水性与亲水性的实体。如所属领域的技术人员应了解，两亲实体可呈许多不同方式包含在内。在一些实施例中，两亲实体可包含一种或一种以上自身具有两亲性的个别化合物或分子。仅举数例，所述化合物或分子包括聚乙二醇(PEG)、磷脂、胆固醇、糖脂脂肪酸、胆汁酸和皂苷。根据美国食品与药品管理局(US Food and Drug Administration)，通常认为PEG用于食品、美容品和药物是安全的。PEG可溶于水、无毒、无臭、润滑、不挥发且无刺激性。

在一些实施例中，两亲实体可包含一种或一种以上自身不具有两亲性但具有某种亲水或疏水特性的个别组分。在所述实施例中，两种或两种以上所述非两亲组分通常将相互缔合使得个别组分的组装物具有两亲性。所述缔合可能包括或可能不包括共价键联；所述缔合可包括非共价键结(例如通过疏水性相互作用、氢键结、范德华(Van der Waals)相互作用、离子相互作用、偶极-偶极相互作用等)。一般来说，所述缔合可包括任何相关力、键或粘着方式。

在一些实施例中，根据本发明使用的两亲实体可由两种或两种以上具有不同亲水性或疏水性程度的个别组分构成。在某些实施例中，两亲实体可包含至少一种亲水性组分和至少一种疏水性组分。在某些实施例中，“亲水性”和“疏水性”组分相对于彼此为亲水性或疏水性。

在一些实施例中，两种或两种以上具有不同亲水性或疏水性程度的组分可通过共价键而键结在一起形成均聚物或共聚物。在一些实施例中，共聚物可为嵌段共聚物。在一些实施例中，共聚物可为接枝共聚物。

在一些实施例中，两亲实体可包含两亲嵌段共聚物或由两亲嵌段共聚物组成。在一些实施例中，两亲嵌段共聚物可为二嵌段共聚物。在某些实施例中，两亲二嵌段共聚物可包含在链端共价连接的第一聚合物嵌段和第二聚合物嵌段。在特定实施例中，第一聚合物嵌段可包含亲水性组分的重复单元，而第二聚合物嵌段可包含疏水性组分的重复单元。在特定实施例中，第一聚合物嵌段可包含疏水性组分的重复单元，而第二聚合物嵌段可包含亲水性组分的重复单元。在一些实施例中，两亲嵌段共聚物可为多嵌段共聚物。在某些实施例中，两亲嵌段共聚物可包含在链端共价连接的两种或两种以上聚合物的多个交替嵌段。在特定实施例中，两亲嵌段共聚物可包含在链端共价连接的多个交替的亲水性嵌段和疏水性嵌段。在特定实施例中，交替嵌段的每一嵌段可包含亲水性组分或疏水性组分的重复单元。

在一些实施例中，两亲实体可包含两亲接枝共聚物或由两亲接枝共聚物组成。在一些实施例中，两亲接枝共聚物可包含共价连接于其它聚合物嵌段的侧链的聚合物嵌段，或由共价连接于其它聚合物嵌段的侧链的聚合物嵌段组成。在特定实施例中，每一聚合物嵌段可包含亲水性组分或疏水性组分的重复单元，或由亲水性组分或疏水性组分的重复单元组成。在某些实施例中，两亲接枝共聚物可包含第一聚合物嵌段和共价连接于第一聚合物嵌段的侧链的第二聚合物嵌段，或由第一聚合物嵌段和共价连接于第一聚合物嵌段的侧链的第二聚合物嵌段组成。在某些实施例中，第一聚合物嵌段可包含亲水性组分的重复单元或由亲水性组分的重复单元组成，而第二嵌段可包含疏水性组分的重复单元。在某些实施例中，第一聚合物嵌段可包含疏水性组分的重复单元或由疏水性组分的重复单元组成，而第二嵌段可包含亲水性组分的重复单元。

在一些实施例中，两亲嵌段或接枝共聚物可包括包含多糖的重复单元的亲水性聚合物嵌段和包含聚酯或多糖的重复单元的疏水性聚合物嵌段。替代地或另外，两亲嵌段或接枝共聚物可包括包含多糖的重复单元的疏水性聚合物嵌段和包含聚酯或多糖的重复单元的亲水性聚合物嵌段。所述亲水性聚合物嵌段可含有任何类型的亲水性聚合物的重复单元，诸如多糖(例如普鲁兰(pullulan))或聚氧化烯烃(例如聚氧化乙烯)。疏水性聚合物嵌段可含有任何类型的疏水性聚合物的重复单元，诸如聚己内酯或聚酰胺(例如聚己内酰胺)。

在一些实施例中，两亲实体的亲水性部分可为非离子型。在一些实施例中，两亲实体的亲水性组分包含一个或一个以上离子基团。一般来说，所述离子基团为亲水性的且可对两亲实体赋予亲水性质。

在一些实施例中，离子基团可为阳离子。在一些实施例中，阳离子基团可为铵离子(NH₄ ⁺)、硝鎓离子(NO₂ ⁺)、亚硝鎓离子(NO⁺)、水合氢离子(H₃O⁺)、亚汞离子(Hg₂ ²⁺)、磷鎓离子(PH₄ ⁺)、氧钒根离子(VO²⁺)或其盐。

在一些实施例中，离子基团可为阴离子。在一些实施例中，阴离子基团可为脂肪酸根、砷离子(As^3-)、叠氮根(N₃ ^-)、溴离子(Br^-)、氯离子(Cl^-)、氟离子(F^-)、氢阴离子(H^-)、碘离子(I^-)、氮离子(N^3-)、氧离子(O^2-)、磷离子(P^3-)、硒离子(Se^2-)、硫离子(S^2-)、过氧离子(O₂ ^2-)、砷酸根(AsO₄ ^3-)、亚砷酸根(AsO₃ ^3-)、硼酸根(BO₃ ^3-)、高溴酸根(BrO₄ ^-)、溴酸根(BrO₃ ^-)、亚溴酸根(BrO₂ ^-)、次溴酸根(BrO^-)、碳酸根(CO₃ ^2-)、碳酸氢根(HCO₃ ^-)、氯酸根(ClO₃ ^-)、高氯酸根(ClO₄ ^-)、亚氯酸根(ClO₂ ^-)、次氯酸根(ClO^-)、铬酸根(CrO₄ ^2-)、重铬酸根(Cr₂O₇ ^2-)、高氟酸根(BrO₄ ^-)、氟酸根(BrO₃ ^-)、亚氟酸根(BrO₂ ^-)、次氟酸根(BrO^-)、高碘酸根(IO₄ ^-)、碘酸根(IO₃ ^-)、亚碘酸根(IO₂ ^-)、次碘酸根(IO^-)、硝酸根(NO₃ ^-)、亚硝酸根(NO₂ ^-)、磷酸根(PO₄ ^3-)、磷酸氢根(HPO₄ ^2-)、磷酸二氢根(H₂PO₄ ^-)、亚磷酸根(PO₃ ^3-)、硅酸根(SiO₃ ^2-)、硫酸根(SO₄ ^2-)、硫代硫酸根(S₂O₃ ^2-)、硫酸氢根(HSO₄ ^-)、亚硫酸根(SO₃ ^2-)、亚硫酸氢根(HSO₃ ^-)、磺酸根(-S(＝O)₂-O^-)、乙酸根(C₂H₃O₂ ^-)、甲酸根(HCO₂ ^-)、草酸根(C₂O₄ ^2-)、草酸氢根(HC₂O₄ ^-)、柠檬酸根(C₆H₅O₇ ^3-)、琥珀酸根(C₄H₄O₄ ^2-)、富马酸根(C₄H₂O₄ ^2-)、苹果酸根(C₄H₅O₅ ^2-)、硫氢根(HS^-)、碲离子(Te^2-)、氨基负离子(NH₂ ^-)、氰酸根(OCN^-)、硫氰酸根(SCN^-)、氰根(CN^-)、氢氧根(OH^-)、高锰酸根(MnO₄ ^-)或其盐。

在一些实施例中，两亲实体的亲水性组分可包含核酸或由核酸组成。举例来说，核酸可包括DNA、RNA或其组合。在一些实施例中，核酸可为寡核苷酸和/或多核苷酸。在一些实施例中，核酸可为寡核苷酸和/或经修饰的寡核苷酸；RNAi诱导剂；小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)和/或微RNA(miRNA)；反义寡核苷酸和/或经修饰的反义寡核苷酸；cDNA；基因组DNA；病毒DNA和/或RNA；DNA和/或RNA嵌合体；质粒；粘粒；基因片段；人工和/或天然染色体(例如酵母人工染色体)和/或其一部分；RNA(例如mRNA、tRNA、rRNA和/或核酶)；肽核酸(PNA)；包含核酸的合成类似物的多核苷酸，其可经修饰或未经修饰；DNA的各种结构形式，包括单链DNA、双链DNA、超螺旋DNA和/或三螺旋DNA；Z-DNA；和/或其组合。

在一些实施例中，两亲实体的亲水性组分可包含碳水化合物或由碳水化合物组成。在一些实施例中，碳水化合物可为如所属领域中已知，由通过糖苷键连接的单糖(或其衍生物)组成的多糖。所述单糖可包括(但不限于)葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神经氨酸。在一些实施例中，聚合物可为亲水性碳水化合物，包括胺化、羧化和硫酸化多糖。在一些实施例中，亲水性碳水化合物可为以下一种或一种以上：普鲁兰、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟基纤维素、甲基纤维素、葡聚糖、环葡聚糖、糖原、淀粉、羟乙基淀粉、角叉菜胶、糖基(glycon)、直链淀粉、壳聚糖、N，O-羧甲基壳聚糖、海藻胶和海藻酸、淀粉、甲壳素、肝素、魔芋(konjac)、葡甘聚糖、石脐素、肝素、透明质酸、可得然胶(curdlan)和黄原胶(xanthan)。在一些实施例中，亲水性多糖可通过引入许多侧链疏水基来加以修饰而变成疏水性。在一些实施例中，疏水性碳水化合物可包括乙酸纤维素、普鲁兰乙酸酯、魔芋乙酸酯、直链淀粉乙酸酯和葡聚糖乙酸酯。

在一些实施例中，两亲实体的亲水性组分可包含树胶或由树胶组成，所述树胶包括(但不限于)黄原胶、海藻酸、刺梧桐胶、海藻酸钠和/或刺槐豆胶。

在一些实施例中，两亲实体的一种组分可包含蛋白质或由蛋白质组成。在一些实施例中，蛋白质是两亲实体的亲水性组分。在其它实施例中，蛋白质是两亲实体的疏水性组分。可根据本发明使用的示范性蛋白质包括(但不限于)白蛋白、胶原蛋白或聚(氨基酸)(例如聚赖氨酸)。

在一些实施例中，两亲实体的疏水性组分可包含一种或一种以上脂肪酸基团或其盐，或由一种或一种以上脂肪酸基团或其盐组成。一般来说，所述基团通常具有疏水性且可对两亲实体赋予疏水性质。在一些实施例中，脂肪酸基团可包含可消化的、长链(例如C₈-C₅₀)、经取代或未经取代的烃。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₀-C₂₀脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₅-C₂₀脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为C₁₅-C₂₅脂肪酸或其盐。在一些实施例中，脂肪酸基团可为不饱和的。在一些实施例中，脂肪酸基团可为单不饱和的。在一些实施例中，脂肪酸基团可为多不饱和的。在一些实施例中，不饱和脂肪酸基团的双键可呈顺式构象。在一些实施例中，不饱和脂肪酸的双键可呈反式构象。

在一些实施例中，脂肪酸基团可为丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸或木蜡酸中的一种或一种以上。在一些实施例中，脂肪酸基团可为棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、α-亚油酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一种或一种以上。

在一些实施例中，两亲实体的疏水性组分可包含一种或一种以上生物相容性和/或可生物降解的合成聚合物，或由一种或一种以上生物相容性和/或可生物降解的合成聚合物组成，所述合成聚合物包括(例如)聚碳酸酯(例如聚(1，3-二氧杂环己烷-2-酮))、聚酸酐(例如聚(癸二酸酐))、聚羟基酸(例如聚(β-羟基烷酸酯))、聚富马酸丙酯、聚己内酯、聚酰胺(例如聚己内酰胺)、聚缩醛、聚醚、聚酯(例如聚丙交酯和聚乙交酯)、可生物降解的聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇和可生物降解的聚氨酯。举例来说，两亲实体可包含以下一种或一种以上可生物降解聚合物：聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(己内酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(丙交酯-共-己内酯)、聚(乙交酯-共-己内酯)和聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)。

在一些实施例中，两亲实体的疏水性组分可包含一种或一种以上丙烯酸系聚合物或由一种或一种以上丙烯酸系聚合物组成。在某些实施例中，丙烯酸系聚合物包括(例如)丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物和包含一种或一种以上上述聚合物的组合。所述丙烯酸系聚合物可包含具有低含量季铵基团的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的全聚合共聚物。

在一些实施例中，两亲实体的疏水性组分可包含聚酯或由聚酯组成。示范性所述聚酯包括(例如)聚亚烷基二醇、聚(乙交酯-共-丙交酯)、聚(乳酸-共-乙醇酸)-PEG共聚物、聚(乳酸)、聚(乳酸)-PEG共聚物、聚(乙醇酸)、聚(乙醇酸)-PEG共聚物、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物和其衍生物。在一些实施例中，聚酯包括(例如)聚酸酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物、聚(亚乙基亚胺)、聚(亚乙基亚胺)-PEG共聚物和其衍生物。在一些实施例中，聚酯可包括(例如)聚己内酯、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]和其衍生物。

合适表面活性剂或乳化剂包括(但不限于)磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油酰氧基丙基三乙铵(DOTMA)；二油酰磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六烷醇；诸如聚乙二醇(PEG)等脂肪醇；聚氧乙烯-9-月桂基醚；诸如棕榈酸或油酸等表面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯(斯潘85)甘胆酸盐；脱水山梨糖醇单月桂酸酯(斯潘20)；聚山梨酸酯20(吐温20)；聚山梨酸酯60(吐温60)；聚山梨酸酯65(吐温65)；聚山梨酸酯80(吐温80)；聚山梨酸酯85(吐温85)；聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性素(surfactin)；泊洛沙姆(poloxomer)；诸如脱水山梨糖醇三油酸酯等脱水山梨糖醇脂肪酸酯；卵磷脂；大豆卵磷脂；溶血卵磷脂；类脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；磷酸二鲸蜡酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；硬脂胺；十二烷胺；十六烷胺；乙酰基棕榈酸酯；甘油蓖麻醇酸酯；硬脂酸十六烷酯；泰洛沙伯(tyloxapol)；聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-单硬脂酸酯；及磷脂。表面活性剂组分可为不同表面活性剂的混合物。这些表面活性剂可从天然来源提取或纯化或可在实验室合成制得。在一个优选实施例中，表面活性剂可从市面上购得。

在某些实施例中，选择或调节用于制备纳米粒子组合物的组分的相对量来产生具有期望特征的纳米粒子。在一些实施例中，纳米粒子组合物(例如包含合并有未经修饰和/或经修饰的多核苷酸的纳米粒子)包含指定比率的表面活性剂、油和/或水性介质(例如水)。在一些实施例中，所使用的油与表面活性剂的比率在0.5-10之间的范围内。在一些实施例中，油与表面活性剂的比率为约0.5∶1、约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约6∶1、约7∶1、约8∶1、约9∶1或约10∶1。在一些实施例中，表面活性剂与油的比率为约0.5∶1、约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约6∶1、约7∶1、约8∶1、约9∶1或约10∶1。

在一些实施例中，所使用的油与表面活性剂的比率在0.5-2之间的范围内。在某些实施例中，油与表面活性剂的比率为约0.5∶1、约1∶1或约2∶1。在某些实施例中，表面活性剂与油的比率为约0.5∶1、约1∶1或约2∶1。在某些具体实施例中，油与表面活性剂的比率为约1∶1。

在一些实施例中，使用这些比率的油与表面活性剂的组合物包含水包油乳液。在一些实施例中，使用这些比率的油与表面活性剂的组合物包含合并有未经修饰和/或经修饰的多核苷酸的纳米粒子。

在一些实施例中，所使用的水与表面活性剂的比率在0.5-10之间的范围内。在一些实施例中，水与表面活性剂的比率为约0.5∶1、约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约6∶1、约7∶1、约8∶1、约9∶1或约10∶1。在一些实施例中，表面活性剂与水的比率为约0.5∶1、约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约6∶1、约7∶1、约8∶1、约9∶1或约10∶1。在一些实施例中，所使用的水与表面活性剂的比率在0.5-2之间的范围内。在某些实施例中，水与表面活性剂的比率为约0.5∶1、约1∶1或约2∶1。在某些实施例中，表面活性剂与水的比率为约0.5∶1、约1∶1或约2∶1。在某些具体实施例中，水与表面活性剂的比率为约1∶1。在一些实施例中，使用这些比率的水与表面活性剂的组合物包含油包水乳液。

在一些实施例中，制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)油的百分比在0％与30％之间的范围内。在一些实施例中，制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)油的百分比为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％或约30％。在一些实施例中，油的百分比为约9％。在一些实施例中，油的百分比为约5％。

预混物中水的百分比可在0％到99％、10％到99％、25％到99％、50％到99％或75％到99％的范围内。在一些实施例中，预混物中水的百分比可在0％到75％、0％到50％、0％到25％或0％到10％的范围内。在一些实施例中，制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)水的百分比在0％与30％之间的范围内。在一些实施例中，水的百分比为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％或约30％。在一些实施例中，水的百分比为约9％。在一些实施例中，水的百分比为约5％。

在一些实施例中，当使用一种或一种以上两亲实体时，制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)两亲实体的百分比可在40％到99％、50％到99％、60％到99％、70％到99％、80％到99％、80％到90％或90％到99％的范围内。在一些实施例中，制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)两亲实体的百分比为约75％、约76％o、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％。

预混物中具有表面活性剂活性的物质的百分比可在0％到99％、10％到99％、25％到99％、50％到99％或75％到99％的范围内。在一些实施例中，预混物中具有表面活性剂活性的物质的百分比可在0％到75％、0％到50％、0％到25％或0％到10％的范围内。在一些实施例中，制备纳米粒子的组合物中(例如在预混物中)具有表面活性剂活性的物质的百分比在0％与30％之间的范围内。在一些实施例中，具有表面活性剂活性的物质的百分比为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％或约30％。在一些实施例中，具有表面活性剂活性的物质的百分比为约9％。在一些实施例中，具有表面活性剂活性的物质的百分比为约5％。

在一些实施例中，纳米粒子组合物不含有多于一种油。在一些实施例中，纳米粒子组合物可包含两种或两种以上油。在一些实施例中，纳米粒子组合物不含有多于一种表面活性剂。在一些实施例中，纳米粒子组合物可包含两种或两种以上表面活性剂。在一些实施例中，纳米粒子组合物完全不含或实质上不含有毒组分。

在一些实施例中，纳米粒子组合物基本上由水、油、表面活性剂和至少一种生物活性剂(例如核酸)组成。在一些实施例中，纳米粒子组合物基本上由水、油、表面活性剂、至少一种生物活性剂和至少一种用于产生和/或防腐保存纳米粒子组合物的物质组成。

在一些实施例中，纳米粒子组合物由水、油、表面活性剂和核酸组成。在一些实施例中，纳米粒子组合物由水、油、表面活性剂、核酸和至少一种用于产生和/或防腐保存纳米粒子的物质组成。

核酸

多种核酸中的任一种均可并入根据本发明的纳米粒子组合物中。在一些实施例中，欲并入纳米粒子组合物中的核酸是多核苷酸。在一些实施例中，欲并入纳米粒子组合物中的核酸是核苷酸。在一些实施例中，欲并入纳米粒子组合物中的核酸是核苷。

在一些实施例中，核酸的长度小于约50个核苷酸。在一些实施例中，核酸的长度小于约90、约80、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约15、约13、约12、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个核苷酸。在一些特定实施例中，核酸是单个核酸残基(例如单个核苷酸或单个核苷)。在一些实施例中，欲并入纳米粒子组合物中的核酸仅包含天然存在的核酸残基(例如核苷酸、核苷)。在一些实施例中，核酸包含一个或一个以上非天然存在的核酸残基。

核苷一般包含经由糖苷键共价连接的戊糖(例如核糖或脱氧核糖)和杂环含氮碱基(例如嘌呤：胞嘧啶、胸苷和尿嘧啶；和嘧啶：鸟嘌呤和腺嘌呤；参见表1)。核苷酸一般包含核苷和1到3个5′磷酸基。

表1：杂环含氮碱基

在一些实施例中，核酸可为DNA、RNA或其组合。在一些实施例中，核酸可为寡核苷酸和/或多核苷酸。如本文所使用，术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”可互换使用。在一些实施例中，核酸可为寡核苷酸和/或经修饰的寡核苷酸(包括但不限于通过磷酸化修饰)；反义寡核苷酸和/或经修饰的反义寡核苷酸(包括但不限于通过磷酸化修饰)。在一些实施例中，核酸可包含cDNA和/或基因组DNA。在一些实施例中，核酸可包含非人类DNA和/或RNA(例如病毒、细菌或真菌核酸序列)。在一些实施例中，核酸可为质粒、粘粒、基因片段、人工和/或天然染色体(例如酵母人工染色体)和/或其一部分。在一些实施例中，核酸可为功能性RNA(例如mRNA、tRNA、rRNA和/或核酶)。在一些实施例中，核酸可为RNAi诱导剂、小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)和/或微RNA(miRNA)。在一些实施例中，核酸可为肽核酸(PNA)。在一些实施例中，核酸可为包含核酸的合成类似物的多核苷酸，其可经修饰或未经修饰。在一些实施例中，核酸可包含DNA的各种结构形式，包括单链DNA、双链DNA、超螺旋DNA和/或三螺旋DNA；Z-DNA；和/或其组合。

根据本发明使用的核酸可根据任何可利用的技术制备，所述技术包括(但不限于)化学合成、酶促合成、较长前体的酶促或化学裂解等。合成核酸聚合物(例如多核苷酸)的方法在所属领域中是已知的(参见例如盖特(Gait，M.J.)(编)寡核苷酸合成实用方法(Oligonucleotide synthesis：a practical approach)，牛津郡牛津市/华盛顿特区：IRL出版社(Oxford[Oxfordshire]，Washington，DC：IRL Press)，1984；和赫德维金(Herdewijn，P.)(编)寡核苷酸合成方法和应用(Oligonucleotide synthesis.methods and applications)，分子生物学方法(Methods in molecular biology)，第288卷新泽西州托托瓦(新泽西州克里夫顿)：胡玛纳出版社((Clifton，N.J.)Totowa，N.J.：Humana Press)，2005)。

根据本发明使用的核酸可包含天然存在的核酸残基。在一些实施例中，天然存在的核酸残基包括核苷、经修饰的核苷、一个或一个以上核苷之间插有烃连接体(例如亚烷基)或聚醚连接体(例如PEG连接体)的天然存在核苷、一个或一个以上核苷之间插有烃或PEG连接体的经修饰核苷、或其组合。在一些实施例中，核酸残基或经修饰的核酸残基可用烃连接体或聚醚连接体置换，限制条件是核酸残基的结合亲和力、选择性和/或其它功能特征不因取代而实质上减小。

所属领域的一般技术人员应了解，根据本发明的核酸可包含完全为天然存在核酸中可见的类型的核酸残基，或可代之以包括一个或一个以上核酸残基类似物或具有与天然存在核酸的结构另有不同的结构。美国专利6,403,779、6,399,754、6,225,460、6,127,533、6,031,086、6,005,087、5,977,089和其中的参考文献揭示多种可使用的特定核酸残基类似物和修饰。参见克鲁克(Crooke，S.)(编)反义药物技术原理、策略和应用(Antisense DrugTechnology：Principles，Strategies，and Applications)(第1版)，马塞尔·德克尔(MarcelDekker)；ISBN：0824705661；第1版(2001)和其中的参考文献。举例来说，2′-修饰包括卤基、烷氧基和烯丙氧基。在一些实施例中，2′-OH基团经选自以下的基团置换：H、OR、R、卤基、SH、SR₁、NH₂、NH_R、NR₂或CN，其中R为C₁-C₆烷基、烯基或炔基，且卤基为F、Cl、Br或I。经修饰的键联的实例包括硫代磷酸酯键联和5′-N-亚磷酰胺键联。

可根据本发明利用包含多种不同核酸残基(例如核苷酸、核苷)类似物、经修饰的主链或非天然存在的核苷间键联的核酸。本发明的核酸可包括天然核苷(即腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)或经修饰的核苷。经修饰的核苷酸的实例包括碱基经修饰的核苷(例如阿扎胞苷(aracytidine)、肌苷、异鸟苷、水粉蕈素(nebularine)、假尿苷、2，6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2-硫代胸苷、3-脱氮-5-氮杂胞苷、2′-脱氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫代尿苷、4-硫代胸苷、2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、2-硫代尿苷、5-溴胞苷、5-碘尿苷、肌苷、6-氮杂尿苷、6-氯嘌呤、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氮杂腺苷、8-叠氮基腺苷、苯并咪唑、M1-甲基腺苷、吡咯并嘧啶、2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴尿苷、5-氟尿苷、5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫代胞苷)、经化学或生物修饰的碱基(例如甲基化碱基)、经修饰的糖(例如2′-氟核糖、2′-氨基核糖、2′-叠氮基核糖、2′-O-甲基核糖，L-对映异构核苷阿拉伯糖和己糖)、经修饰的磷酸基(例如硫代磷酸酯键联和5′-N-亚磷酰胺键联)和其组合。用于核酸化学合成的天然和经修饰核酸残基单体可容易地获得。在一些情况下，包含具有这类修饰的残基的核酸相对于仅由天然存在残基组成的核酸显示出改进的性质。在一些实施例中，利用本文所述的核酸修饰来降低和/或阻止被核酸酶消化(例如核酸外切酶、核酸内切酶等)。举例来说，多核苷酸的结构可通过在一条链或两条链的3′端纳入核苷酸类似物以降低消化来加以稳定。

经修饰的核酸(例如经修饰的多核苷酸)不需要沿整个多核苷酸长度均一地加以修饰。不同的核酸残基修饰和/或主链结构可存在于多核苷酸的各个位置。所属领域的一般技术人员应了解，残基类似物或其它修饰可位于多核苷酸的任何位置以致多核苷酸的功能实质上不受影响。经修饰的区可位于一条链或两条链的5′端和/或3′端。举例来说，在已使用过的经修饰多核苷酸中，两条链中任一条的5′端和/或3′端的约1个到约5个残基是残基类似物和/或具有主链修饰。修饰可以是5′或3′末端修饰。一条或两条核酸链可包含至少50％未经修饰的残基、至少80％未经修饰的残基、至少90％未经修饰的残基或100％未经修饰的残基。

根据本发明的核酸可例如包含对糖、残基或核苷间键联的修饰，诸如美国专利公开案2003/0175950、2004/0192626、2004/0092470、2005/0020525和2005/0032733中所述的修饰。本发明涵盖使用具有其中所述的任何一个或一个以上修饰的任何核酸。举例来说，已报导若干末端结合物(例如脂质(诸如胆固醇)、石胆酸、月桂酸(aluric acid)或长烷基分支链)可改善细胞摄取。可例如使用所属领域中已知的任何适当检定来测试类似物和修饰。在一些实施例中，根据本发明的核酸可包含一个或一个以上非天然核苷键联。在一些实施例中，核酸的3′端、5′端或3′端与5′端两处的一个或一个以上内部核苷酸逆转产生键联(诸如3′-3′键联或5′-5键联)。

在一些实施例中，根据本发明的核酸不是合成的，而是已从自然环境中分离的天然存在的实体。

在某些具体实施例中，根据本发明的核酸仅包含天然存在的核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)。在某些具体实施例中，根据本发明的核酸仅包含未经修饰的残基。本发明的纳米粒子组合物能够传递(例如经皮传递)经修饰与未经修饰的核酸。

根据本发明使用的核酸一般是在皮肤(例如表皮和真皮)、皮下组织(例如脂肪组织)、邻近肌肉和/或远端组织(例如器官，诸如肺、肝等)中具有生物活性的核酸。

在一些实施例中，核酸是或包含功能性RNA(例如反义寡核苷酸、核酶、参与形成三螺旋结构的RNA等)。在某些实施例中，核酸是或包含结合翻译起始位点、转录起始位点和/或拼接结合点的反义分子。在一些实施例中，反义寡核苷酸阻止RNA的翻译或转录后加工。替代地或另外，反义寡核苷酸可通过结合靶基因(诸如调控元件)的DNA来改变靶基因的转录。

反义RNA通常展现与靶转录物的足够互补性从而允许反义RNA与靶转录物杂交。错配可以容忍，只要仍可发生与靶的杂交。反义RNA一般可具有任何长度，只要仍可发生杂交。在一些实施例中，反义RNA为约20个核苷酸(nt)、约30个nt、约40个nt、约50个nt、约75个nt、约100个nt、约150个nt、约200个nt、约250个nt、约500个nt或更长。在一些实施例中，反义RNA包含与约20个nt、约30个nt、约40个nt、约50个nt、约75个nt、约100个nt、约150个nt、约200个nt、约250个nt、约500个nt或更长的靶转录物杂交的抑制区(inhibitory region)。

在一些实施例中，核酸是或包含介导RNA干扰(RNAi)的试剂。RNAi是抑制特异性基因的表达的机制。虽然RNAi通常在翻译层面抑制基因表达，但也可通过在转录层面抑制基因表达而起作用。RNAi靶包括可能存在于细胞中的任何RNA，包括(但不限于)细胞转录物、病原体转录物(例如来自病毒、细菌、真菌等)、转座子、载体等。

根据本发明的RNAi试剂可靶向转录物的任一部分。在一些实施例中，靶转录物位于基因的编码序列内。在一些实施例中，靶转录物位于非编码序列内。在一些实施例中，靶转录物位于外显子内。在一些实施例中，靶转录物位于内含子内。在一些实施例中，靶转录物位于基因的5′非翻译区(UTR)或3′UTR内。在一些实施例中，靶转录物位于强化子区内。在一些实施例中，靶转录物位于启动子内。

对于任何特定基因靶，RNAi试剂和/或RNAi诱导剂的设计通常遵循某些指南。一般需要避开靶转录物中可能与不期望降解的其它转录物共享的部分。在一些实施例中，RNAi试剂和/或RNAi诱导实体靶向转录物和/或其高度保守的部分。在一些实施例中，RNAi试剂和/或RNAi诱导实体靶向转录物和/或其不高度保守的部分。

如本文所使用的“小干扰RNA”或“siRNA”是指包含长度为约19个碱基对(bp)且任选地进一步包含一个或两个单链悬端(overhang)的RNA双螺旋(本文称为“双螺旋区”)的RNAi试剂。在一些实施例中，siRNA包含长度在15个bp到29个bp范围内且任选地进一步包含一个或两个单链悬端的双螺旋区。siRNA通常由两个杂交在一起的RNA分子(即，两个链)形成。siRNA的一条链包括与靶转录物杂交的部分。在一些实施例中，siRNA通过引起靶转录物降解而介导对基因表达的抑制。

如本文所使用的“短发夹RNA”或“shRNA”是指包含具有至少两个互补部分(已杂交或能够杂交形成长度足以介导RNAi的双链(双螺旋)结构(长度通常为至少约19个bp))和至少一个形成环的单链部分(长度通常在约1个核苷酸(nt)与约10个nt之间范围内)的RNA的RNAi试剂。在一些实施例中，shRNA包含一个长度在15个bp到29个bp范围内的双螺旋部分和至少一个形成环的长度通常在约1个nt与约10个nt之间范围内的单链部分。在一些实施例中，单链部分的长度为约1个nt、约2个nt、约3个nt、约4个nt、约5个nt、约6个nt、约7个nt、约8个nt、约9个nt或约10个nt。在一些实施例中，通过细胞RNAi机器(例如Dicer)将shRNA加工为siRNA。因此，在一些实施例中，shRNA可为siRNA的前体。无论如何，siRNA一般能够类似于siRNA抑制靶RNA的表达。如本文所用的术语“短RNAi试剂”用于统指siRNA和shRNA。

短RNAi试剂通常包括一个长度在约15个nt与约29个nt之间(例如长度为约19个nt)的碱基对区(“双螺旋区”)且可任选地具有一个或一个以上自由端或环端(loopedend)。RNAi诱导剂和/或短RNAi试剂通常包括一个以下区(“双螺旋区”)：其中一条链含有长度在15个nt与29个nt之间的抑制区，其足以与靶转录物的一部分(“靶部分”)互补，以致在体内在这条链与靶转录物之间可形成杂交体(“核心区”)。应了解，核心区不包括悬端。

在一些实施例中，siRNA在双螺旋区的一端或两端包含3′悬端。在一些实施例中，shRNA在其自由端包含3′悬端。在一些实施例中，siRNA包含单个核苷酸的3′悬端。在一些实施例中，siRNA包含具有2个nt的3′悬端。在一些实施例中，siRNA包含具有1个nt的3′悬端。悬端如果存在，则可(但不必要)与靶转录物互补。在3′端具有2个nt到3个nt悬端的siRNA在降低靶转录物含量方面，通常比具有平端(blunt end)的siRNA有效。

在一些实施例中，短RNAi试剂的抑制区与靶转录物的一个区100％互补。而在一些实施例中，短RNAi试剂的抑制区与靶转录物的一个区小于100％互补。抑制区与靶转录物的互补性仅需足以使杂交发生，例如在生理条件下在细胞中发生和/或在支持RNAi的体外系统(例如果蝇提取系统(Drosophila extract system))中发生。

所属领域的一般技术人员应了解，短RNAi试剂双螺旋可容忍错配和/或突起(bulge)(尤其双螺旋中央区内的错配)，同时仍产生有效沉默。所属领域的技术人员还应认识到可能需要避开短RNAi试剂/靶转录物核心区中央部分的错配(参见例如巴希尔(Elbashir)等人，欧洲分子生物学组织杂志(EMBOJ).20：6877，2001)。举例来说，siRNA反义链的3′核苷酸通常对靶识别的特异性无重大贡献且可能对靶裂解不太重要。

微RNA(miRNA)是长度为约21-23个核苷酸的基因组编码的非编码RNA，其帮助调控基因表达，尤其在发育期间(参见例如巴特尔(Bartel)，2004，细胞(Cell)，116：281；诺维纳(Novina)和夏普(Sharp)，2004，自然(Nature)，430：161；和美国专利公开案2005/0059005；还综述于王(Wang)和李(Li)，2007，生命科学前沿(Front.Biosci.)，12：3975；和赵(Zhao)，2007，生物化学科学趋势(Trends Biochem.Sci.)，32：189中；各以引用的方式并入本文中)。所广泛定义的RNA干扰的现象包括miRNA的内源性诱导的基因沉默效应和外来dsRNA引发的沉默。虽然成熟miRNA在结构上类似于由外源dsRNA产生的siRNA，但在达到成熟之前，miRNA首先经历大范围的转录后修饰。miRNA通常从长得多的RNA编码基因表达为初级转录物(称为pri-miRNA)，而初级转录物在细胞核中通过微处理器复合体(microprocessor complex)加工成70个核苷酸的茎-环结构(称为pre-miRNA)。这一复合体由叫做Drosha的RNase III酶和dsRNA结合蛋白Pasha组成。这一pre-miRNA的dsRNA部分由dicer结合且裂解，产生可整合于RISC复合体中的成熟miRNA分子；因此miRNA和siRNA在最初加工的下游共享相同的细胞机器(乔治(Gregory)等人，2006，分子生物学方法(Meth.Mol.Biol.)，342：33；以引用方式并入本文中)。miRNA一般不与其靶转录物完全互补。

在一些实施例中，miRNA的长度可在18个nt-26个nt的范围内。miRNA通常为单链。而在一些实施例中，miRNA可能至少部分为双链。在某些实施例中，miRNA可包含一个RNA双螺旋(本文称为“双螺旋区”)且可任选地进一步包含一个或两个单链悬端。在一些实施例中，RNAi试剂包含一个长度在15个bp到29个bp范围内且任选地进一步包含一个到三个单链悬端的双螺旋区。miRNA可由两个杂交在一起的RNA分子形成，或者可从包括自杂交部分的单个RNA分子产生。miRNA的双螺旋部分通常(但不必要)包含一个或一个以上突起，所述突起由一个或一个以上不成对核苷酸组成。miRNA的一条链包括与靶RNA杂交的部分。在某些实施例中，miRNA的一条链不与靶RNA的一个区精确互补，表示miRNA与靶RNA的杂交中存在一个或一个以上错配。在一些实施例中，miRNA的一条链与靶RNA的一个区精确互补，表示miRNA与靶RNA的杂交不存在错配。通常认为miRNA通过抑制靶转录物的翻译来介导对基因表达的抑制。而在一些实施例中，miRNA可通过引起靶转录物降解来介导对基因表达的抑制。

在某些实施例中，核酸是或包含设计用于催化裂解靶mRNA转录物的核酶，这一核酶可用于阻止靶mRNA翻译和/或靶表达(参见例如PCT公开案WO 90/11364；和沙维尔(Sarver)等人，1990，科学(Science)247：1222)。

在某些实施例中，核酸是或包含参与形成三螺旋结构的核酸。内源性靶基因表达可通过靶向与靶基因调控区(例如靶基因的启动子和/或强化子)互补的脱氧核塘核苷酸序列从而形成可阻止靶基因在身体靶肌细胞中转录的三螺旋结构来降低(一般参见海伦(Helene)，1991，抗癌药物设计(Anticancer Drug Des.)6：569；海伦(Helene)等人，1992，纽约科学院年报(Ann，N.Y.Acad.Sci.)660：27；和马厄(Maher)，1992，生物测定法(Bioassays)14：807)。

在一些情况下，特定核酸发挥治疗效应和/或影响生物活性的机制尚未知。本发明涵盖使用这类核酸。在一些实施例中，可使用本发明方法传递(例如经皮传递)尚未鉴别或表征的生物活性核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸改善创伤愈合。这类核酸包括编码角质细胞生长因子-1(KGF-1)的DNA(林(Lin)等人，2006，创伤修复与再生(WoundRepairRegen.)，14：618)。在一些实施例中，编码KGF-1的核酸的特征在于基因库(GenBank)序列NC 000015所述的整个序列或其一部分。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可促进皮肤创伤愈合。这类核酸包括连接蛋白43(Connexin43，Cx43)反义寡核苷酸、RNAi试剂、siRNA、shRNA和/或miRNA(莫里(Mori)等人，2006，细胞科学杂志(J.Cell Sci.)，119：5193)。在一些实施例中，反义寡核苷酸、RNAi试剂、siRNA、shRNA和/或miRNA可靶向具有诸如基因库序列AK312324所述序列的核酸的一个或一个以上区和/或特征部分。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可抑制皮肤细胞异常增殖且增进皮肤创伤愈合。这类核苷酸可包括核苷酸和单磷酸核苷、二磷酸核苷和三磷酸核苷。在一些实施例中，这类核酸包括腺嘌呤核苷酸和腺苷和腺苷三磷酸核苷(布朗(Brown)等人，2000，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，115：849；和王(Wang)等人，1990，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，166：251)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸刺激干扰素产生，所述干扰素产生可抑制皮肤中胶原蛋白合成且具有治疗硬皮病(一种结缔组织疾病)的潜能。这类核酸包括编码干扰素γ(IFNγ)的核酸(巴迪亚(Badea)等人，2005，基因医学杂志(J.Gene Med.)，7：1200；和格雷(Gray)和葛德(Goeddel)，1983，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA)，80：5842)。在一些实施例中，编码IFNγ的核酸的特征在于基因库序列NM_001127598、NM_000612、NM_001007139或NC_000076所述的整个序列或其一部分。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸治疗皮肤病先天性厚甲症。这类核酸包括靶向编码皮肤中角蛋白的基因的siRNA(希克森(Hickerson)等人，2006，纽约科学院年报(Ann.N.Y.Acad.Sci.)，1082：56)。在具体实施例中，这类siRNA可包含一个或一个以上任一以下反义序列：

AAACUUGUUUUUGAGGGUCU(SEQ ID NO.：1)；UUUUUGAGGGUCUUGAUCU(SEQ ID NO.：2)；UUUUGAGGGUCUUGAUCUGU(SEQ ID NO.：3)；UUUGAGGGUCUUGAUCUGUU(SEQ ID NO.：4)；AAGGAGGCAAACUUGUUUUU(SEQ ID NO.：5)；AACUUGUUGAGGGUCUUGAU(SEQ ID NO.：6)；AAACUUGUUGAGGGUCUUGU(SEQ ID NO.：7)；和

CAAACUUGUUGAGGGUCUUU(SEQ ID NO.：8)(希克森(Hickerson)等人，2006，纽约科学院年报(Ann.N.Y.Acad.Sci.)，1082：56)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸抑制引起皮肤炎症的分子路径。这类核酸包括胞苷-磷酸-鸟苷寡脱氧核苷酸，其包括两个胞苷-磷酸-鸟苷(CpG)基元(CpG-1-硫代磷酸酯(PTO))和一个多聚胞苷基元(非CpG-5-PTO)(皮瓦克斯(Pivarcsi)，2007，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，127：846；和多恩(Dorn)等人，2007，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，127：746)。在一些实施例中，这类核酸可包含硫代磷酸酯键联。在一些实施例中，这类核酸可包含磷酸二酯键联。在具体实施例中，这类核酸可包含一个或一个以上任一以下核苷酸序列：TCCATGACGTTCCTGACGTT(SEQ ID NO.：9)；TCCATGACGTTCCTGACGTT(SEQ ID NO.：10)；TCCATGACGTTCCTGACGT(SEQID NO.：11)；TCCATGACGTTCCTGACG(SEQ ID NO.：12)；TCCTCGACGTCCCTGA(SEQ ID NO.：13)；CATGACGTTCCT(SEQ ID NO.：14)；GACGTT(SEQ ID NO.：15)；和AACGTCAGGAACGTCATGGA(SEQ ID NO.：16)(皮瓦克斯(Pivarcsi)，2007，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，127：846；和多恩(Dorn)等人，2007，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，127：746)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可减少皮肤中的VEGF产生，这可能对诸如银屑病等病状具有抗血管生成治疗效应。这类核酸包括19-mer反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(相对于VEGF/VPF mRNA的翻译起始位点，与碱基6-24互补)(史麦丝(Smyth)等人，1997，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，108：523)。在具体实施例中，这类核酸可包含一个或一个以上任一以下反义核苷酸序列：

CACCCAAGACAGCAGAAAG(SEQ ID NO.：17)；CTCCCAAGACAGCAGAAAG(SEQ ID NO.：18)；CTGCCAAGACAGCAGAAAG(SEQ ID NO.：19)；CACCCAACTCTCCAGAAAG(SEQ ID NO.：20)；CACCCAAGACAGCAGAATG(SEQID NO.：21)；和CACCCAAGACAGCAGATTG(SEQ ID NO.：22)(史麦丝(Smyth)等人，1997，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol)，108：523)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可提高因紫外线辐射(例如来自日暴晒和/或日晒伤的紫外线辐射)而损伤的皮肤的DNA修复率。在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可防止或延迟皮肤癌发作。在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可刺激黑素细胞产生而引起皮肤变古铜色。在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可实现皮肤的古铜色外观。这类核酸可包括二嘧啶(dipyrimidine)序列(例如TT、TC、CT、CC)。在一些实施例中，这类核酸包括胸苷二核苷酸(pTT)、与端粒3′悬端序列实质上同源的DNA寡核苷酸和5′-磷酸化9碱基寡核苷酸(p9mer)。在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可治疗各种癌症(例如乳房癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、胶质瘤等)。这类核酸包括与端粒3′悬端序列实质上同源的寡核苷酸。在具体实施例中，端粒3′悬端序列包含一个或一个以上的下列序列：TTAGGG(SEQ ID NO.：23)；GTTAGGGTTAG(SEQID NO.：24)；GGTTAGGTGTAGGTTT(SEQ ID NO.：25)；GTTAGGGTT(SEQ ID NO.：26)；TTAGGGTTA(SEQ ID NO.：27)；GTTAGGTTTAAGGTT(SEQ ID NO.：28)；GGTAGGTGTAGGGTG(SEQ ID NO.：29)；GGTCGGTGTCGGGTG(SEQ ID NO.：30)；GGCAGGCGCAGGGCG(SEQ ID NO.：31)；GTTAGGGTTAGGGTT(SEQ ID NO.：32)；GATAAGGGATTGGGAT(SEQ ID NO.：33)；GAGTATGAG(SEQ ID NO.：34)；GGGTTAGGG(SEQ ID NO.：35)；GTTAGGGTTAG(SEQ ID NO.：36)；GGTAGGTGTAGGATT(SEQ ID NO.：37)；GGTAGGTGTAGGATTT(SEQ ID NO.：38)；GGTTAGGTGTAGGTTT(SEQ ID NO.：39)；GGTTAGGTGGAGGTTT(SEQ ID NO.：40)；GGTTAGGTTTAGGTTT(SEQ ID NO.：41)；GGTTAGGTTAAGGTTA(SEQ ID NO.：42)；GGTAGGTGTAGGGTG(SEQ ID NO.：43)；GTTAGGGTTAGGGTTA(SEQ ID NO.：44)；GGTTGGTTGGTTGGTT(SEQ ID NO.：45)；CCTTGGTTGGTTGGTTGGTT(SEQ ID NO.：46)；和GGTTGGTTGGTTGGTTGGTT(SEQ ID NO.：47)。在具体实施例中，p9mer包含以下核苷酸序列：pGAGTATGAG(SEQ ID NO.：34)(高卡斯安(Goukassian)等人，2004，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA)，101：3933；阿拉德(Arad)等人，2006，美国实验生物学学会联合会杂志(FASEB J.)，20：1895；亚尔(Yaar)等人，2007，乳房癌研究(Breast Cancer Res.)，9：R13；高卡斯安(Goukassian)等人，2002，美国实验生物学学会联合会杂志(FASEB J.)，16：754；和大桥(Ohashi)等人，2007，细胞生理学杂志(J.Cell.Physiol)，210：582)。

在一些实施例中，根据本发明使用的核酸可治疗黑素瘤皮肤癌(例如转移性黑素瘤皮肤癌)。这类核酸包括钟声蛋白样受体9(toll-like receptor 9)活化寡核苷酸(帕舍科夫(Pashenkov)等人，2006，临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol)，24：5716)。在具体实施例中，这类核酸可包含以下核苷酸序列：TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT(SEQ IDNO.：48)(帕舍科夫(Pashenkov)等人，2006，临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol)，24：5716)。

在一些实施例中，可根据本发明使用与本文所述的任何核酸同源的核酸序列。在一些实施例中，如果核酸序列相对于彼此包含少于30个、25个、20个、15个、10个、5个、4个、3个、2个或1个核酸取代，那么这些核酸序列被视为彼此“同源”。在一些实施例中，如果核酸序列彼此间的一致性为至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％，那么这些核酸序列被视为彼此“同源”。在一些实施例中，如果核酸序列彼此间的相似性为至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％，那么这些核酸序列被视为彼此“同源”。

其它组分

如本文所指出，根据本发明的纳米粒子组合物可含有一种或一种以上其它组分或与一种或一种以上其它组分组合。此处论述所述其它组分的某些实例。

生物活性剂

应了解，本发明的纳米粒子组合物可在组合疗法中使用。以组合方案使用的疗法(治疗剂或程序)的特定组合将考虑到期望的治疗剂和/或程序的相容性和欲实现的期望治疗效果。应了解，所使用的各疗法可就相同目的实现期望的效果(例如，适用于治疗肿瘤的纳米粒子组合物可与另一适用于治疗肿瘤的药剂同时投与)，或者它们可实现不同的效果(例如，控制任何副作用)。

“组合”并不旨在暗示所述药剂必须同时投与和/或经调配一起传递，虽然这些传递方法是在本发明的范围内。组合物可与一种或一种以上其它期望的治疗剂或医学程序同时投与、在后者之前或之后投与。一般来说，各药剂将按为这一药剂所确定的剂量和/或时程进行投与。另外，本发明涵盖医药组合物的传递组合可提高其生物利用率、降低和/或改进其代谢、抑制其排泄和/或改进其在体内的分布的药剂。

以组合方案使用的疗法(治疗剂或程序)的特定组合将考虑到期望的治疗剂和/或程序的相容性和/或欲实现的期望治疗效果。应了解，所使用的各疗法可对相同病症实现期望的效果(例如，纳米粒子组合物可与另一用于治疗相同病症的治疗剂同时投与)，和/或它们可实现不同效果(例如，控制任何副作用)。在一些实施例中，本发明的纳米粒子组合物与经美国食品与药品管理局批准的第二治疗剂一起投与。

更应了解，“组合”中所使用的治疗活性剂可在单一组合物中一起投与或在不同组合物中分开投与。举例来说，本发明提供包含含有欲传递的核酸和第二生物活性剂的纳米粒子的组合物。本发明还提供包含一群含有欲传递的核酸的纳米粒子和第二群含有欲传递的额外生物活性剂的纳米粒子的组合物。本发明还提供一种包含含有欲传递的核酸的纳米粒子的组合物和第二种包含含有欲传递的额外生物活性剂的纳米粒子的组合物。

一般预期组合使用的药剂的使用含量不超过其个别使用时的含量。在一些实施例中，组合使用时的含量将低于个别使用时的含量。

包括(例如)治疗、诊断、预防、营养、美容用和/或皮肤科用药剂在内的任何生物活性剂都可与根据本发明的核酸组合传递。仅举数例，所述生物活性剂可为小分子、有机金属化合物、核酸、蛋白质(包括多聚体蛋白质、蛋白质复合体等)、肽、脂质、碳水化合物、草药、激素、金属、放射性元素和化合物、药物、疫苗、免疫药剂等和/或其组合。所述生物药剂可囊封于一个或一个以上纳米粒子中、吸附于一个或一个以上纳米粒子的表面上、存在于一个或一个以上纳米粒子的界面处和/或存在于一个或一个以上纳米粒子的胶束膜中。

在一些实施例中，用于制备纳米粒子的组合物中(例如预混物中)和/或纳米粒子中生物活性剂的百分比在0.1％-25％的范围内。在一些实施例中，生物活性剂的百分比在0.1％-20％、0.1％-15％、0.1％-10％、0.1％-5％或0.1％-1％的范围内。在一些实施例中，生物活性剂的百分比在1％-20％、5％-20％、10％-20％、15％-20％或15％-25％的范围内。在一些实施例中，生物活性剂的百分比小于0.1％。在一些实施例中，生物活性剂的百分比大于25％。在一些实施例中，生物活性剂的百分比为约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约18％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％或25％以上。

相关生物活性剂可根据任何可利用的方法或途径产生或获得。生物活性剂可含有或可经修饰而含有一种或一种以上旨在促进其结合根据本发明的纳米粒子使用或传递的部分。所述修饰应不干扰药剂的生物活性。在一些实施例中，修饰可任选地在体内被除去。举例来说，生物活性剂可标记有可检测的标记和/或可呈“前”形式提供，所述“前”形式在传递后转化或修饰为活性形式。

在一些实施例中，生物活性剂是具有医药活性的小分子和/或有机化合物。在一些实施例中，生物活性剂是临床使用的药物。在一些实施例中，所述药物是抗生素、抗病毒剂、麻醉剂、抗凝剂、抗癌剂、酶抑制剂、类固醇药剂、消炎剂、抗赘生剂、抗原、疫苗、抗体、解充血剂、抗高血压剂、镇静剂、节育剂、促孕剂、抗胆碱剂、止痛剂、抗抑郁药、抗精神病药、β-肾上腺素阻断剂、利尿剂、心血管活性剂、血管活性剂、非类固醇消炎剂等。特别关注的是适合经皮投药的生物活性剂。

所传递的生物活性剂可为医药活性剂的混合物。举例来说，局部麻醉剂可与诸如类固醇等消炎剂组合传递。局部麻醉剂也可与诸如肾上腺素等血管活性剂一起投与。再举一例，抗生素可与通常由细菌产生使所述抗生素失活的酶的抑制剂(例如青霉素和克拉维酸(clavulanic acid))组合。

在一些实施例中，生物活性剂是诊断剂。在一些实施例中，诊断剂包括气体；用于正电子发射断层摄影术(positron emissions tomography，PET)、计算机辅助断层摄影术(computer assisted tomography，CAT)、单光子发射计算机断层摄影术、x射线、荧光检查和磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)的市面上可购得的造影剂；和对比剂。适合用作MRI中对比剂的材料的实例包括钆螯合物以及铁、镁、锰、铜和铬。适用于CAT和x射线成像的材料的实例包括以碘为主的材料。

在一些实施例中，生物活性剂是预防剂。在一些实施例中，预防剂包括疫苗。疫苗可包含经分离的蛋白质或肽、失活的生物体和病毒、死生物体和病毒、遗传改造的生物体或病毒，和细胞提取物。预防剂可与白细胞介素、干扰素、细胞因子和诸如霍乱毒素、明矾、弗氏佐剂(Freund′s adjuvant)等佐剂组合。预防剂可包括：细菌生物体的抗原，所述细菌生物体诸如：肺炎链球菌(Streptococccus pnuemoniae)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、化脓性链球菌(Streptococcus pyrogenes)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)、变异链球菌(Streptococcus mutans)、绿脓假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、副流感嗜血杆菌(Haemophilusparainfluenzae)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、问号钩端螺旋体(Leptospirosis interrogans)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、空肠弯曲菌(Camphylobacter jejuni)等；病毒的抗原，所述病毒诸如天花、A型和B型流感、呼吸道合胞病毒、副流感、麻疹、HIV、水痘-带状疱疹病毒、1型和2型单纯疱疹、巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(Epstein-Barr virus)、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头状瘤病毒、脊髓灰质炎病毒、腮腺炎、狂犬病、风疹、柯萨奇病毒(coxsackievirus)、马脑炎、日本脑炎(Japanese encephalitis)、黄热病、裂谷热(Rift Valley fever)、A型、B型、C型、D型和E型肝炎病毒等；真菌、原生和寄生生物体的抗原，所述真菌、原生和寄生生物体诸如：新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、白色念珠菌(Candida albicans)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)、星形诺卡氏菌(Nocardia asteroides)、立氏立克次体(Rickettsia ricketsii)、斑疹伤寒立克次体(Rickettsia typhi)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydial psittaci)、沙眼衣原体(Chlamydial trachomatis)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、痢疾内变形虫(Entamoebahistolytica)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)等。这些抗原可呈完全杀死的生物体、肽、蛋白质、糖蛋白、碳水化合物或其组合的形式。

在一些实施例中，生物活性剂可为蛋白质。如本文中所使用，术语“蛋白质”和“肽”可互换使用。在某些实施例中，肽的尺寸在约5个到约100个、约10个到约75个、约10个到约50个、约10个到约40个、约10个到约35个、约15个到约30个或约20个到约25个氨基酸的范围内。可使用来自多组肽的肽，这些组中的肽包含随机序列和/或序列已进行一致改变而提供最大多样化的一组肽。

在一些实施例中，生物活性剂可为抗体。在一些实施例中，抗体可包括(但不限于)多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合(例如“人源”)抗体、单链(重组)抗体。在一些实施例中，抗体可具有减少的效应功能和/或双特异性分子。在一些实施例中，抗体可包括Fab片段和/或由Fab表达文库产生的片段。

在一些实施例中，生物活性剂是营养保健剂。在一些实施例中，营养保健剂提供基本营养价值。在一些实施例中，营养保健剂提供健康或医学益处。在一些实施例中，营养保健剂是膳食补充剂。

在一些实施例中，营养保健剂是维生素。在一些实施例中，维生素是以下一种或一种以上：维生素A(类视色素)、维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆辛)、维生素B7(生物素)、维生素B9(叶酸)、维生素B12(氰钴胺素)、维生素C(抗坏血酸)、维生素D、维生素E或维生素K。

在一些实施例中，营养保健剂是矿物质。在一些实施例中，矿物质是以下一种或一种以上：铋、硼、钙、氯、铬、钴、铜、氟、碘、铁、镁、锰、钼、镍、磷、钾、铷、硒、硅、钠、锶、硫、碲、钛、钨、钒或锌。

在一些实施例中，营养保健剂是必需氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是以下一种或一种以上：精氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸或缬氨酸。

在一些实施例中，营养保健剂可包括脂肪酸和/或ω-3脂肪酸(例如DHA或ARA)、水果和蔬菜提取物、叶黄素、磷脂酰丝氨酸、硫辛酸、褪黑素、葡萄糖胺、软骨素、真芦荟(aloe vera)、印度古蒿(guggul)、绿茶、番茄红素、有机食品(whole food)、食品添加剂、草药、植物营养素、抗氧化剂、水果的类黄酮成分、月见草油、亚麻籽油、鱼油和海洋动物油(例如鳕肝油)以及益生菌。在一些实施例中，营养保健剂可包括经遗传工程改造而具有所需性质的生物工程食品(也称为“医药食品(pharmafood)”)。

示范性营养保健剂和膳食补充剂例如在罗伯茨(Roberts)等人(营养保健品：补充剂、草药、维生素和医疗食品的百科全书(Nutriceuticals：The Complete Encyclopedia ofSupplements，Herbs，Vitamins，and Healing Foods)，美国营养协会(American NutriceuticalAssociation)，2001)中有所揭示。营养保健剂和膳食补充剂在医生桌上参考手册-营养补充剂(Physicians′Desk Reference for Nutritional Supplements)，第1版，(2001)和医生桌上参考手册-中药(The Physicians′Desk Reference for Herbal Medicines)，第1版，(2001)中也有所揭示。

在一些实施例中，可将装载有营养保健剂的根据本发明的纳米粒子并入食物中。举例来说，可将装载有营养保健剂的纳米粒子溶解于诸如饮料等液体中。

在一些实施例中，生物活性剂是美容用和/或皮肤科用药剂。在一些实施例中，所述美容用和/或皮肤科用药剂可包括维生素和其衍生物(例如维生素E和其酯、维生素C和其酯、维生素B、维生素A醇或视黄醇和其酯)、维生素原(例如泛醇、烟酰胺或麦角钙化醇)、抗氧化剂、酚系化合物(例如过氧化苯甲酰)、精油、保湿剂、防晒剂、增湿剂、蛋白质、神经酰胺和假神经酰胺。

在一些实施例中，与根据本发明的核酸一起传递的生物活性剂可为一种或一种以上肉毒毒素肽或蛋白质复合体。一般来说，肉毒毒素是指由肉毒杆菌(Clostridiumbotulinum)产生的任何神经毒素(neurotoxin)。在一些实施例中，肉毒毒素可为肉毒毒素血清型A、B、C₁、C₂、D、E、F或G中的一种或一种以上。在一些实施例中，肉毒毒素可指肉毒毒素复合体(例如300kD、600kD和900kD复合体)与纯(例如分离)肉毒毒素(例如约150kD)。在一些实施例中，肉毒毒素可为经分离和/或经纯化的肉毒毒素。在一些实施例中，肉毒毒素可为经部分分离和/或经部分纯化的肉毒毒素。在一些实施例中，肉毒毒素可为天然肉毒复合体。在一些实施例中，肉毒毒素可与非毒素蛋白质缔合。在一些实施例中，肉毒毒素可为重组制得的肉毒毒素。

在一些实施例中，生物活性剂可为一种或一种以上用于治疗癌症的治疗剂(例如化学治疗剂)。在具体实施例中，与根据本发明的核酸一起传递的生物活性抗癌剂可为细胞毒性剂。大部分抗癌剂可划分成以下类别：烷化剂、抗代谢物、天然产物和激素和拮抗剂。任何本文所论述的抗癌剂都可与根据本发明的核酸组合传递。这类组合疗法可用于治疗任何类型的癌症。

抗癌剂通常影响细胞分裂和/或DNA合成。而一些化学治疗剂不直接干扰DNA。仅举一例，酪氨酸激酶抑制剂(甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)/格列卫)在某些类型的癌症(慢性骨髓性白血病、胃肠基质肿瘤等)中直接靶向分子异常。

烷化剂因能在细胞中存在的条件下给许多电负性基团添加烷基而得名。烷化剂通常通过化学修饰细胞DNA而起作用。示范性烷化剂包括氮芥类(例如氮芥(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、美法仑(melphalan)(1-沙可来新(1-sarcolysin))、苯丁酸氮芥(chlorambucil))；乙烯亚胺类和甲基三聚氰胺类(例如六甲密胺(altretamine)(六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)；HMM)、塞替派(thiotepa)(三乙烯硫代磷酰胺(triethylene thiophosphoramide))、三亚乙基密胺(triethylenemelamine，TEM))；烷基磺酸盐类(例如白消安(busulfan))；硝基脲类(例如卡莫司汀(carmustine，BCNU)、洛莫司汀(lomustine，CCMU)、司莫司汀(semustine，甲基-CCNU)、链佐星(streptozocin)(链脲佐菌素(streptozotocin)))；和三氮烯类(例如达卡巴嗪(dacarbazine；DTIC；二甲基三氮烯基咪唑甲酰胺(dimethyltriazenoimidazolecarboxamide)))。

抗代谢物通过模仿小分子代谢产物(例如叶酸、嘧啶和嘌呤)从而并入新合成的细胞DNA中起作用。这类试剂还影响RNA合成。示范性叶酸类似物是甲氨蝶呤(methotrexate)(氨甲蝶呤(amethopterin))。示范性嘧啶类似物包括氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脱氧尿苷；FUdR)和阿糖胞苷(cytarabine/cytosine arabinoside)。示范性嘌呤类似物包括巯基嘌呤(6-巯基嘌呤；6-MP)、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤(6-硫代鸟嘌呤；TG)、磷酸氟达拉宾(fludarabine phosphate)、喷司他丁(pentostatin)(2′-脱氧助间型霉素(2′-deoxycoformycin))、克拉屈滨(cladribine)(2-氯脱氧腺苷；2-CdA)和红羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine，EHNA)。

可用作抗癌剂的天然小分子产物包括植物生物碱和抗生素。植物生物碱和萜类(例如长春花生物碱、鬼臼毒素、紫杉烷等)通常通过阻止微管功能而阻断细胞分裂。长春花生物碱(例如长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine，VLB)、长春瑞宾(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)等)结合微管蛋白且抑制微管蛋白组装于微管中。长春花生物碱来源于长春花(Madagascar periwinkle；Catharanthus roseus，先前称为Vincarosea)。鬼臼毒素是源自植物的化合物，其用于产生两种其它细胞抑制性治疗剂依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)，这两者可阻止细胞进入细胞周期的G1期和S期。鬼臼毒素主要从美洲鬼臼(American Mayapple/Podophyllum peltatum)和桃儿七(Himalayan Mayapple/Podophyllum hexandrum)获得。紫杉烷(例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)等)来源于紫杉树(Yew Tree)。紫杉烷增强微管的稳定性，从而防止染色体在后期(anaphase)期间分离。

可用作抗癌剂的抗生素包括放线菌素D(dactinomycin/actinomycin D)、佐柔比星(daunorubicin)(道诺霉素(daunomycin)；红比霉素(rubidomycin))、多柔比星(doxorubicin)、伊达比星(idarubicin)、博莱霉素(bleomycin)、普卡霉素(plicamycin)(光神霉素(mithramycin))和自力霉素(mitomycin)(丝裂霉素C(mytomycin C))。

可用作抗癌剂的其它小分子包括铂配位络合物(例如顺铂(cisplatin)(顺-DDP)、卡铂(carboplatin))、蒽二酮(例如米托蒽醌(mitoxantrone))、经取代脲(例如羟基脲)、甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼(procarbazine)(N-甲基肼，MIH))和肾上腺皮质抑制剂(例如米托坦(mitotane)(o，p′-DDD)、氨鲁米特(aminoglutethimide))。

可用作抗癌剂的激素包括肾上腺类固醇类(例如强的松(prednisone))、氨鲁米特、孕酮类(例如己酸羟孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、雌激素类(例如己烯雌酚(diethylstilbestrol)、炔雌醇(ethinyl estradiol))、抗雌激素类(例如他莫昔芬(tamoxifen))、雄激素类(例如丙酸睾酮(testosterone propionate)、氟甲睾酮(fluoxymesterone))、抗雄激素类(例如氟他胺(flutamide))和促性腺激素释放激素类似物(例如亮丙瑞林(leuprolide))。

拓扑异构酶抑制剂通过抑制拓扑异构酶的功能而起作用，拓扑异构酶是维持DNA拓扑学的酶。对I型或II型拓扑异构酶的抑制通过扰乱正确的DNA超螺旋化来干扰DNA的转录与复制。一些示范性I型拓扑异构酶抑制剂包括喜树碱(例如伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)等)。一些示范性II型拓扑异构酶抑制剂包括安吖啶(amsacrine)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷等，这些是本文所论述的表鬼臼毒素的半合成衍生物。

在具体实施例中，生物活性抗癌剂可为免疫治疗剂。免疫疗法使用针对肿瘤的免疫机理，可用于各种形式的癌症(诸如乳房癌)(例如曲妥珠单抗/赫赛汀白血病(例如吉妥珠单抗奥唑米星/麦罗塔)和非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)(例如利妥昔单抗/美罗华)。在一些实施例中，免疫治疗剂是针对所讨论癌症的细胞所特有蛋白质的单克隆抗体。在一些实施例中，免疫治疗剂是调节免疫系统反应的细胞因子。在一些实施例中，免疫治疗剂可以是疫苗(例如用于预防子宫颈癌的HPV疫苗)。

所属领域的技术人员应认识到这是可与根据本发明的核酸组合传递的生物活性剂的示范性而非全面的清单。任何生物活性剂都可囊封于根据本发明的纳米粒子内或结合于所述纳米粒子的表面。适合用于本发明的类别和具体药物的更完整清单可见于医药：合成、专利、应用(Pharmaceutical Drugs：Syntheses，Patents，Applications)，阿克塞尔·克里曼(Axel Kleemann)和约尔根·恩格尔(Jurgen Engel)，蒂姆医学出版社(ThiemeMedical Publishing)，1999；和默克索引：化合物、药物和生物制品百科全书(Merck Index：An Encyclopedia of Chemical，Drugs andBiologicals)，布达瓦里(Budavari)等人编，美国学术出版社(CRC Press)，1996，两者都以引用的方式并入本文中。

释放延迟剂

在一些实施例中，尤其那些含有一种或一种以上生物活性剂(例如核酸)的实施例中，纳米粒子组合物更包括一种或一种以上释放延迟成分或用一种或一种以上释放延迟成分调配以便达到所述药剂的控制释放。所属领域中已知的任何释放延迟成分都适合用于制备纳米粒子。在一些实施例中，释放延迟成分是亲水性和/或疏水性聚合物。释放延迟成分包括(例如)纤维素或其衍生物、丙烯酸系聚合物、酯聚合物、以乙烯基吡咯烷酮为主的聚合物、树胶、其它天然聚合物和/或这些物质的组合。

在一些实施例中，释放延迟成分是纤维素或其衍生物。在某些实施例中，纤维素或其衍生物包含羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基乙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素中的一种或一种以上。在某些实施例中，纤维素或其衍生物是甲基纤维素或其衍生物。在某些实施例中，纤维素或其衍生物是羟丙基甲基纤维素(HPMC)。所属领域的技术人员应了解可利用其它纤维素类聚合物，包括其它烷基纤维素类聚合物。

在一些实施例中，释放延迟成分是丙烯酸系聚合物。在某些实施例中，丙烯酸系聚合物例如包括丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物和包含一种或一种以上上述聚合物的组合。丙烯酸系聚合物可包含具有低含量季铵基团的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的全聚合共聚物。

在一些实施例中，释放延迟成分是聚酯。在一些实施例中，聚酯包括聚亚烷基二醇、聚(乙交酯-共-丙交酯)、聚(乳酸-共-乙醇酸)-PEG共聚物、聚(乳酸)、聚(乳酸)-PEG共聚物、聚(乙醇酸)、聚(乙醇酸)-PEG共聚物、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物和其衍生物。在一些实施例中，聚酯例如包括聚酸酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物、聚(亚乙基亚胺)、聚(亚乙基亚胺)-PEG共聚物和其衍生物。在一些实施例中，聚酯例如包括聚己内酯、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]和其衍生物。

在一些实施例中，释放延迟成分是聚(乙烯基吡咯烷酮)的交联聚合物。在一些实施例中，聚合物是交联聚维酮。在一些实施例中，聚合物是未交联的聚(乙烯基吡咯烷酮)。在一些实施例中，聚合物是聚维酮。

在一些实施例中，释放延迟成分可为天然聚合物。在一些实施例中，天然聚合物是树胶，例如包括黄原胶、海藻酸、刺梧桐树胶、海藻酸钠和/或刺槐豆胶。在一些实施例中，天然聚合物可为蛋白质(例如白蛋白)、脂质、核酸或碳水化合物，且释放延迟成分可为聚酯。

在一些实施例中，释放延迟成分是聚(乙烯基吡咯烷酮)的交联聚合物。在一些实施例中，聚合物是交联聚维酮。在一些实施例中，聚合物是未交联的聚(乙烯基吡咯烷酮)。在一些实施例中，聚合物是聚维酮。

在一些实施例中，释放延迟成分可为天然聚合物。在一些实施例中，天然聚合物是树胶，例如包括黄原胶、海藻酸、刺梧桐胶、海藻酸钠和/或刺槐豆胶。在一些实施例中，天然聚合物可为蛋白质(例如白蛋白)、脂质、核酸或碳水化合物。

调配剂

根据本发明的纳米粒子组合物可经调配用于向个体投药。在某些实施例中，纳米粒子组合物经调配用于施用于皮肤上来实现向所述个体的传递(例如经皮传递)传递。举例来说，纳米粒子组合物可调配于旨在局部施用的美容用制剂或其它制剂中。

人类皮肤包含真皮和表皮。表皮具有数层组织，即角质层、透明层、颗粒层、棘层和基底层(按照从皮肤外表面向内的顺序鉴别)。角质层呈现为一般经皮传递药物且可能为经皮传递核酸(例如经修饰或未经修饰的多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)的最显著障碍。角质层通常为约10μm到约15μm厚，且其由排列成数层的扁平、角质化细胞(角质细胞)组成。角质细胞之间的细胞间隙中填满了脂质结构，且可能在物质透过皮肤方面起重要作用(保罗伐(Bauerova)等人，2001，欧洲药物代谢与药物代谢动力学杂志(European Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics)，26：85)。

角质层下面的表皮其余部分为约150μm厚。真皮为约1mm-约2mm厚且位于表皮下面。真皮受各种毛细管以及神经元过程所支配。

传统上，对经皮投与药物的尝试过去一直集中于增加角质层的渗透性。一些尝试包括使用增加分子穿过皮肤的渗透性的化学增强剂。一些尝试包括使用机械设备绕过角质层或切除角质层的部分。一些尝试包括使用增加皮肤渗透性的化学或机械研磨剂。另外，尝试还包括使用超声波或离子电渗来促进药物透过皮肤。在大多数情况下，目标是药剂(通常是小分子)穿过皮肤，通常使得药剂可传到真皮中的毛细管床，在那里药剂可全身性地并入个体体内从而实现治疗效应。

本发明尤其提供经皮投与未经修饰或经修饰的核酸(例如多核苷酸和/或核酸残基，诸如核苷酸和/或核苷)的方法，所述方法不需要使用研磨剂或其它破坏剂(无论是化学、机械、电、磁等)。更确切地说，本发明者已意外地发现，即使是并入纳米粒子组合物中的大分子(例如肉毒毒素)也可以得到有效的经皮传递而无需其它使角质层可渗透或破坏角质层的步骤。

因此，本发明提供通过局部施用根据本发明的纳米粒子组合物来投与核酸的方法。在一些实施例中，纳米粒子组合物直接施用于皮肤上而穿过表皮层吸收。在一些实施例中，所述纳米粒子组合物可渗透皮肤的表层，包括角质层、皮肤小孔和/或皮腺，而不使用化学或机械皮肤渗透增强剂或其它引起研磨的药剂。

所属领域的技术人员应了解用于局部投药的纳米粒子组合物可制备为美容用调配物，诸如柔肤水、营养液型乳液、洁肤液、洁面霜、乳液、润肤乳、按摩膏、润肤霜、底妆液、唇膏、面膜或面胶、清洁剂调配物(例如香波、漂洗剂、沐浴露、护发素或肥皂)或皮肤科用组合物(例如洗剂、软膏、凝胶、乳膏、贴片或喷雾)。

纳米粒子组合物的所述调配物通常包括与一种或一种以上诸如填充剂、螯合剂、软化剂、着色材料(例如颜料和染料)和芳香剂等赋形剂的组合。

在一些实施例中，纳米粒子组合物调配为乳膏。术语“乳膏”是指可涂开的组合物，其通常经调配用于施用于皮肤上。乳膏通常含有基于油和/或脂肪酸的基质。根据本发明调配的乳膏可含有纳米粒子且能够在局部投药后(例如所述纳米粒子)实质上完全透过皮肤。所述乳膏也可充当所并入物质(例如核酸)的载剂。

所属领域的技术人员应了解纳米粒子组合物可并入诸如贴片等装置中。

各种经皮贴片结构在所属领域中是已知的；所属领域的技术人员应了解纳米粒子组合物可以容易地并入各种所述结构的任一种中。在一些实施例中，经皮贴片可进一步包含多个从贴片贴于皮肤的一面伸出的针，其中针从贴片伸出来穿过皮肤的角质层。在一些实施例中，针不刺破血管。

在本发明的一些实施例中，纳米粒子组合物可提供于贴片中的储槽中以致施加于贴片的压力引起核酸从贴片(任选地通过针)导出并穿过角质层。

在本发明的一些实施例中，经皮贴片包括粘着剂。粘性贴片的一些实例众所周知(例如参见美国设计专利296,006；和美国专利6,010,715、5,591,767、5,008,110、5,683,712、5,948,433和5,965,154)。粘性贴片通常描述为具有将贴于个人皮肤上的粘着层、用于容纳药剂的储槽或储库，和防止药物从储槽中漏出的外表面。贴片的外表面通常无粘性。

所属领域的技术人员应了解，经皮贴片只是可用来投与纳米粒子组合物的一个装置实例。仅举几个其它的实例，可使用不先将组合物施用于人的手指上(此举可能对手指产生不期望的生物效应)就可施用组合物的装置。合适的装置包括刮勺、药签、无针注射器和粘性贴片。使用刮勺或药签等可能需要将装置插入含有组合物的容器中。使用注射器可通过用组合物填充注射器来实现。接着组合物可由刮勺或药签局部涂开，或者可从注射器喷涂于患者皮肤上。

在一些实施例中，可能需要限制核酸仅传递到预期传递区域。在一些实施例中，所述限制传递可通过使用处于施用装置中的纳米粒子组合物来实现，所述装置允许将组合物施用于皮肤上的靶位点而不将组合物施用于皮肤的非靶位点区域。显然，为此目的可使用经皮贴片。替代地或另外，如果仅欲将核酸局部施用于所选区域，那么可对其它区域进行覆盖或预处理或者进行其它保护以免暴露。

替代地或另外，本发明的纳米粒子组合物可利用任何其它合适的方法投与，这些方法包括(但不限于)静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射、腹膜内注射或输注。在一些实施例中，本发明的纳米粒子组合物可通过动脉内注射、心室内注射或鞘内注射投与。在一些实施例中，本发明的纳米粒子组合物可经口、皮内、经直肠、经阴道、经粘膜、经鼻、经颊、肠内或舌下投与。在一些实施例中，本发明的纳米粒子组合物可通过气管内滴注、支气管滴注和/或吸入投与、和/或以口腔喷雾、鼻喷雾和/或气雾剂形式投与。

例证

以下实例仅旨在对本发明涵盖的具体实施例进行说明。这些实例无论如何并不旨在限制本发明。

实例1：腺苷纳米粒子调配物

腺苷是已知对皮肤结构具有生物活性的核苷酸(布朗(Brown)等人，2000，皮肤学研究杂志(J.Investig.Dermatol)，115：849)。通过形成纳米乳液制备腺苷纳米粒子组合物。简单来说，在无菌小瓶中搅拌800gm 1349中链甘油三酯油和800gm吐温80(80)5分钟。向油-吐温混合物中加入14毫克腺苷(于84毫升水中)并搅拌20分钟。样品均质化1分钟，然后搅拌20分钟。在23,000psi下将样品微流体化1次。

使用能够分析粒度在约0.6nm-6μm之间粒子的马尔文粒度分析仪(Malvern Nano Sparticle sizer)评估所得腺苷纳米乳液的粒度。所形成纳米粒子的平均直径大小是75.9nm。纳米粒子的平均ζ电势为-12.9mV。

所得纳米乳液包含一群粒子，且测量粒子群和群内单个粒子的特征。群中所有纳米粒子的集料体积的50％在10nm与39.7nm之间；群中所有纳米粒子的90％在10nm与82.9nm之间；而群中所有纳米粒子的95％在10nm与113.0nm之间。因此，群中大部分粒子属于10nm与85nm之间的范围。

实例2：磷酸化胸苷二核苷酸(pTT)纳米粒子调配物

已知磷酸化胸苷二核苷酸(pTT)对皮肤结构具有生物活性(高卡斯安(Goukassian)等人，2004，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA)，101：3933；阿拉德(Arad)等人，2006，美国实验生物学学会联合会杂志(FASEB J.)，20：1895；亚尔(Yaar)等人，2007，乳房癌研究(Breast Cancer Res.)，9：R13；和高卡斯安(Goukassian)等人，2002，美国实验生物学学会联合会杂志(FASEB J.)，16：754)。举例来说，pTT刺激黑素细胞产生，从而使皮肤呈古铜色或实现皮肤的古铜色外观，这是一种可在视觉上分析并测量的生物效应。

通过形成纳米乳液制备pTT纳米粒子组合物。简单来说，在无菌小瓶中搅拌800mg大豆油和/或1349油和800mg吐温805分钟。向油-吐温混合物中加入1mg pTT(于8.4ml水中)并搅拌20分钟。样品均质化1分钟，然后搅拌20分钟。在23,000psi下将样品微流体化1次。

使用马尔文粒度分析仪(Malvern Nano S particle sizer)评估所得pTT纳米乳液的粒度。所形成大部分纳米粒子的直径在50nm与150nm之间。

实例3：对小鼠经由经皮施用核苷酸纳米粒子的皮肤变黑效应

本实例证明经皮施用核苷酸纳米粒子组合物对皮肤的生物功效。

方法

混合根据实例2制备的核苷酸纳米乳液与等体积的护肤霜(即轻盈型基础PCCA粉底霜(Base PCCA Vanishing Cream Light))，然后涡旋成均一乳膏以产生“处理乳膏(Treatment Cream)”。

通过在与实例2相同量的水中混合与实例2相同量的核苷酸，然后与用于制备处理乳膏相同量的护肤霜涡旋而制备“非纳米处理乳膏”。非纳米处理乳膏包含与处理乳膏相同的所有组分，但制剂不经受高剪切力且因此不形成纳米乳液。与呈包含一组特定成分的纳米乳液的处理乳膏相反，非纳米处理乳膏仅是一组相同成分的组合且不调配成纳米乳液。

通过涡旋与实例2相同量的水和与用于制备处理乳膏相同量的护肤霜制备“对照乳膏”。对照乳膏不是纳米乳液且不含pTT活性成分。

购买30只瑞士韦氏(Swiss Webster)小鼠，每只重约20克。到达后，使所有动物适应其笼一周(如下所述分组圈养，每组每笼10只小鼠)并提供标准笼垫料和普瑞纳(Purina)5001食物。一周后，应用以下处理范例：

处理范例

第1组(对照组)：每天用戴手套的手指在10只小鼠每一只的背部涂覆100μl对照乳膏直到看不见乳膏，历时三周。在第一次处理之前和后续每一周开始时用电动剃刀给小鼠剃毛。

第2组(非纳米处理组)：每天用戴手套的手指在10只小鼠每一只的背部涂覆100μl非纳米处理乳膏直到看不见乳膏，历时三周。在第一次处理之前和后续每一周开始时用电动剃刀给小鼠剃毛。

第3组(处理组)：每天用戴手套的手指在10只小鼠每一只的背部涂覆100μl处理乳膏直到看不见乳膏，历时三周。在第一次处理之前和后续每一周开始时用电动剃刀给小鼠剃毛。

评估

在最初治疗之前和此后每一周之前，对小鼠处理状况不知情的观察者从非古铜色(0)到极古铜色(5)对小鼠背部处理区域的肤色进行评级。

三周后，处死动物，并通过比较各组从各小鼠背部相同区域解剖的皮肤的平均测量结果来研究其背部皮肤，从而确定潜在处理效果。将小鼠背部皮肤切片，放在载玻片上，进行组织学染色，来检查组织学横截面，从而评估黑素细胞刺激。由对小鼠处理状况不知情的病理学家评估黑素细胞的数目和黑度。

结果与结论

预期结果显示，平均来说，处理组的皮肤在统计学上比对照组和非纳米处理组更具古铜色。预期结果显示，平均来说，如病理学家对组织学染色载玻片的评估所衡量，处理组的黑素细胞刺激在统计学上比对照组和非纳米处理组多。

总而言之，预期这些对照数据显示，局部用核苷酸纳米乳液制剂与无这类核苷酸的对照乳膏相比时，对皮肤具有可测量的生物效应。预期数据显示，核苷酸纳米乳液的生物效应显著高于具有不在纳米粒子调配物中的相同核苷酸的简单乳膏。

等价物和范围

所属领域的技术人员应认识到或能够仅使用常规实验确定本文中描述的本发明具体实施例的许多等价物。本发明的范围并不旨在限于以上“具体实施方式”，而是如随附权利要求书中所述。

所属领域的技术人员应认识到或能够仅使用常规实验确定本文中描述的本发明具体实施例的许多等价物。本发明的范围并不旨在限于以上“具体实施方式”，而是如随附权利要求书中所述。

在权利要求书中，除非相反地指出或从上下文中显而易见，否则诸如“一”和“所述”等词可意指一或大于一。因此，举例来说，提及“一纳米粒子”包括多个所述纳米粒子，而提及“细胞”包括提及一个或一个以上所属领域的技术人员已知的细胞，等等。除非相反地指出或从上下文中显而易见，否则在一群组中的一个或一个以上成员之间包括“或”的权利要求或描述，视为满足给定产物或方法中存在、采用一个、一个以上或全部群组成员，或者一个、一个以上或全部群组成员与给定产物或方法有关。本发明包括给定产物或方法中存在、采用正好一个群组成员，或者正好一个群组成员与给定产物或方法有关的实施例。本发明包括给定产物或方法中存在、采用一个以上或全部群组成员，或者一个以上或全部群组成员与给定产物或方法有关的实施例。此外，应了解，本发明涵盖一个或一个以上所列权利要求的一个或一个以上限制、要素、条款、描述性术语等引入另一权利要求中的所有变化、组合和排列。举例来说，任何附属于另一权利要求的权利要求可经修改而包括附属于同一基本权利要求的任何其它权利要求中可见的一个或一个以上限制。此外，当权利要求描述组合物时，应了解，除非另外指出或除非所属领域的一般技术人员显而易见将出现矛盾或不一致，否则包括出于本文所揭示的任何目的而使用所述组合物的方法，且包括根据任何本文所揭示的制备方法或所属领域中已知的其它方法制备所述组合物的方法。

当以列举形式，例如以马库西群组(Markush group)格式提供要素时，应了解也揭示所述要素的每个子群组，且可从群组中除去任何要素。应了解，一般来说，当本发明或本发明的方面提及为包含特定要素、特征等时，本发明或本发明方面的某些实施例由所述要素、特征等组成或基本上由所述要素、特征等组成。为简单起见，本文中未立刻具体陈述那些实施例。应注意术语“包含”旨在为开放式且允许包括其它要素或步骤。

当给出范围时，端点包括在内。此外，应了解除非另外指出或由上下文和所属领域技术人员的了解中显而易见，否则表示为范围的值在本发明不同实施例中可假定为规定范围内的任何具体值或子范围，除非本文另外明确规定，否则达范围下限的十分之一。

另外，应了解属于现有技术的本发明任何特定实施例可明确地从任一个或一个以上权利要求中排除。因为认为所属领域的一般技术人员了解这类实施例，所以即使本文中未明确阐述排除这类实施例，其也被排除在外。本发明组合物的任何特定实施例(例如任何核酸、任何多核苷酸、任何核酸残基、任何核苷酸修饰、任何油、任何表面活性剂、任何两亲实体、任何生物活性剂、任何治疗方法、任何治疗应用等)均可出于任何原因(无论是否与存在现有技术相关)从任一个或一个以上权利要求中排除。

以上和全文中所论述的公开案仅因其在本申请提交日之前的揭示而提供。不应解释为本文承认本发明者无权根据先前揭示而优先于这些揭示。

Claims (45)

1.一种包含一群粒子的纳米粒子悬浮液或分散液，其中所述纳米粒子悬浮液或分散液是纳米乳液，其中大部分粒子具有介于10纳米与300纳米之间的直径，且其中所述纳米粒子包含至少一种在皮肤、皮下组织、邻近肌肉或远端组织中具有生物活性的长度至多30个核苷酸的核酸，其中所述核酸由胸苷二核苷酸、磷酸化胸苷二核苷酸(pTT)或两者的组合组成；

其中所述纳米乳液包含油、表面活性剂、水和所述核酸的预混物；以及

其中所述油是中链甘油三酯或大豆油，所述表面活性剂是吐温。

2.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与250纳米之间的直径范围。

3.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与200纳米之间的直径范围。

4.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与150纳米之间的直径范围。

5.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与120纳米之间的直径范围。

6.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与100纳米之间的直径范围。

7.根据权利要求l所述的悬浮液或分散液，其中大部分粒子具有介于10纳米与50纳米之间的直径范围。

8.一种包含一群粒子的纳米粒子悬浮液或分散液，其中所述纳米粒子悬浮液或分散液是纳米乳液，其中大部分粒子具有介于10纳米与300纳米之间的直径，且其中所述纳米粒子包含由胸苷二核苷酸、磷酸化胸苷二核苷酸(pTT)或两者的组合组成的核酸；

其中所述纳米乳液包含油、表面活性剂、水和所述核酸的预混物；以及

其中所述油是中链甘油三酯或大豆油，所述表面活性剂是吐温。

9.根据权利要求l到8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液通过暴露于高剪切力而产生。

10.根据权利要求9所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液是稳定的。

11.根据权利要求10所述的悬浮液或分散液，其中所述核酸囊封于所述纳米粒子内。

12.根据权利要求10所述的悬浮液或分散液，其中所述核酸或核苷酸位居于纳米粒子膜内。

13.根据权利要求10所述的悬浮液或分散液，其中所述核酸或核苷酸与粒子表面缔合。

14.根据权利要求13所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液可渗透皮肤而不改造或改变所述皮肤。

15.根据权利要求13所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液可渗透皮肤而无需使用皮肤渗透增强剂或研磨剂。

16.根据权利要求13所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液可渗透皮肤的表层而无需使用皮肤渗透增强剂或研磨剂。

17.根据权利要求16所述的悬浮液或分散液，其中所述皮肤的表层是角质层的表面。

18.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述油和所述表面活性剂以0.5-2.0范围内的重量比率存在。

19.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述油和所述表面活性剂以0.5-1.5范围内的重量比率存在。

20.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述油和所述表面活性剂以1.0的重量比率存在。

21.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液中油的重量百分比在l％-30％范围内。

22.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液中油的重量百分比在5％到9％的范围内。

23.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液中表面活性剂的重量百分比在l％-30％范围内。

24.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液中表面活性剂的重量百分比在5％到9％的范围内。

25.根据权利要求l-8中任一权利要求所述的悬浮液或分散液，其中所述悬浮液或分散液实质上不含有毒溶剂。

26.一种医药组合物，其包含根据权利要求l到25中任一权利要求所述的悬浮液或分散液和医药学上可接受的赋形剂。

27.根据权利要求26所述的医药组合物，其中所述组合物选自由乳膏、洗剂、凝胶、软膏、喷雾、粉剂、润肤剂、唇膏、防晒剂和其组合组成的群组。

28.根据权利要求l到25中任一权利要求所述的悬浮液、分散液或医药组合物在制备用于实现所述皮肤的古铜色外观的药物中的用途。

29.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用粘性贴片经皮投与。

30.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用刮勺经皮投与。

31.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用药签经皮投与。

32.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用无针注射器经皮投与。

33.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用戴手套的手指经皮投与。

34.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用无防护的手指经皮投与。

35.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物使用装置经皮投与，所述装置允许将所述组合物涂覆于所述皮肤的靶位而不会将所述组合物涂覆于所述皮肤的非靶位。

36.根据权利要求28所述的用途，其中所述核酸全部渗透所述皮肤。

37.根据权利要求28所述的用途，其中至少99％的所述核酸渗透所述皮肤。

38.根据权利要求28所述的用途，其中至少95％的所述核酸渗透所述皮肤。

39.根据权利要求28所述的用途，其中至少90％的所述核酸渗透所述皮肤。

40.根据权利要求28所述的用途，其中至少75％的所述核酸渗透所述皮肤。

41.根据权利要求28所述的用途，其中至少50％的所述核酸渗透所述皮肤。

42.根据权利要求28所述的用途，其中至少25％的所述核酸渗透所述皮肤。

43.根据权利要求28所述的用途，其中至少10％的所述核酸渗透所述皮肤。

44.根据权利要求28所述的用途，其中至少l％的所述核酸渗透所述皮肤。

45.根据权利要求28所述的用途，其中所述悬浮液、分散液或组合物通过静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射、腹膜内注射或输注投与。