JPH08143604A - 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 非常に低いＤＳで光架橋基を導入した光架橋
性の高いヒアルロン酸誘導体、有効なスペーサーを有し
た構造の光二量化性架橋基を有したヒアルロン酸誘導
体、およびそれらの製造方法、種々の形態のヒアルロン
酸誘導体およびその光架橋体を提供すること。 【構成】ヒアルロン酸の構成２糖単位当たりに光二量
化性架橋基、好ましくは、スペーサー及びベンゼン環に
置換基もしくは官能基を有することもあるシンナモイル
基により構成されている基が平均０．０００５〜０．０
５個導入された光架橋性誘導体、 に記載の光二量
化性架橋基同志が架橋シクロブタン環を形成してなる架
橋体、誘導体に紫外線を照射する該架橋体の製法、
ヒアルロン酸を水単独または水混和性有機溶媒を含んだ
水溶液に溶解し、水溶性カルボジイミドと縮合補助剤の
存在下、の光二量化性架橋基を導入する光架橋性誘導
体の製造法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、光架橋性ヒアルロン酸
誘導体及びその光架橋体及びそれらの製造方法に関する
ものである。ヒアルロン酸は動物組織等に存在し、生体
再吸収性、非毒性、非抗原性を有しそれ自体が薬剤、化
粧品等として利用されている。さらに光二量化性を有す
る架橋基をヒアルロン酸に結合させ、紫外線を照射させ
れば分子間架橋反応により三次元網目構造をとり不溶性
の架橋ヒアルロン酸誘導体が得られ、より広い用途への
適応が期待できる。これら架橋ヒアルロン酸誘導体は生
体分解性を有し、優れた医療用材料になるばかりでな
く、医薬品等を含有させることによりドラッグデリバリ
ーシステム（ＤＤＳ）の薬剤ともなり得る。

【０００２】

【従来の技術】ヒアルロン酸は、人体中にも存在し、生
体適合性および生分解性を有するヒアルロン酸にはさま
ざまな用途が考えられるが医薬品、医療用材料としての
用途が特に好ましいものである。しかしながら、水溶性
のヒアルロン酸を架橋する事でゲル化あるいは不溶化す
る試みはほとんどが人体に有害な架橋剤、有機溶媒を使
用するものであり（特開平５−１４０２０１、他）架橋
後の有害物の除去を完全に行う事が困難な点で医薬品や
医療用材料には適さない。

【０００３】光による架橋法はその点クリーンな方法で
ある。例えば、シンナモイル化ヒアルロン酸およびその
光架橋法に関してはヨーロッパ特許条約出願公開，ＥＰ
０５５４８９８，Ａ２に記載されている。その中では、
シンナモイル化ヒアルロン酸をヒアルロン酸トリ−ｎ−
ブチルアミン塩と桂皮酸クロリドとをピリジンの存在下
にてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で数時
間加熱する事で得ている。これにより得られたシンナモ
イル化ヒアルロン酸は２糖単位当たりの桂皮酸導入率
（以降、ＤＳ（degree of substitution））が０．１か
ら４であった。さらにこの方法で得られたＤＳ＝０．５
０のシンナモイル化ヒアルロン酸を３０分間の光照射で
架橋化している。このようにシンナモイル基のような光
反応性基（光二量化性架橋基）を導入したヒアルロン酸
は、光架橋反応を起こすために必要なＤＳがいずれもか
なり高く（０．１以上）ヒアルロン酸本来の生分解性、
生体適合性、無毒性、非抗原性、高膨潤率といった性質
を失っている場合が多かった。

【０００４】また、低いＤＳで架橋反応を起こすにはヒ
アルロン酸の分子量が大きいほど好都合であるが、ヒア
ルロン酸は加熱、攪拌、ｐＨ変化等により容易に低分子
化を起こし、その傾向は分子量の増加と共に高まる事が
よく知られている。

【０００５】即ち、従来技術はヒアルロン酸の低分子化
等の副反応を伴い、また高いＤＳ（０．１以上）では生
体内で刺激性を生じ易くなるなど、ヒアルロン酸本来の
持つ優れた性質を損ねる可能性がある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の第１の目的
は、非常に低いＤＳで光二量化性架橋基を導入した高感
度の光架橋性ヒアルロン酸誘導体およびその製造方法を
提供することであり、第２に第１の目的を達成するため
に有効なスペーサーを有した構造の光二量化性架橋基を
有した光架橋性ヒアルロン酸誘導体を提供することにあ
り、第３に上記光架橋性ヒアルロン酸誘導体を光架橋し
た架橋ヒアルロン酸誘導体およびその製造方法を提供す
ることであり、第４に種々の形態の光架橋性ヒアルロン
酸誘導体およびその光架橋体を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本願発明者らは鋭意研究
の結果、上記課題を以下の構成によって達成する事に成
功した。 （１） ヒアルロン酸の構成２糖単位当たりに光二量化
性架橋基が平均０．０００５〜０．０５個導入されたこ
とを特徴とする光架橋性ヒアルロン酸誘導体。 （２） 該ヒアルロン酸の数平均分子量が１０万〜５０
０万であることを特徴とする（１）記載の光架橋性ヒア
ルロン酸誘導体。 （３） 該光二量化性架橋基がヒアルロン酸のカルボキ
シル基とアミド結合を形成することにより導入されてい
ることを特徴とする（１）または（２）記載の光架橋性
ヒアルロン酸誘導体。 （４） 該光二量化性架橋基がスペーサー及びベンゼン
環に置換基もしくは官能基を有することもあるシンナモ
イル基により構成されていることを特徴とする（１）〜
（３）いずれか１項に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導
体。 （５） 該スペーサーがアミノ酸またはその誘導体、ペ
プチド、アミノアルコール類およびジアミン類からなる
群から選択されることを特徴とする（４）記載の光架橋
性ヒアルロン酸誘導体。 （６） 該光二量化性架橋基が下記一般式（１）または
（２）で表されることを特徴とする（４）または（５）
に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体。 −ＮＨ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ （１） （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ はそれぞれ独立に水素原子また
は低級アルキル基、Ｐｈはフェニル基、ｎは２〜１８の
整数を表す。） −Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ₃ （２） （式中、Ｒ₃ はアルキル基、Ａは−（ＮＨＣＲ₄ Ｒ₅ Ｃ
Ｏ）_m −または−ＮＨ（ＣＲ₄Ｒ₅）_hＣＯ−を表し、該
Ｒ₄ およびＲ₅ はそれぞれ独立に水素原子または低級ア
ルキル基を表す。−Ｐｈ−はパラフェニレン基、ｍは１
〜６の整数を、ｈは１〜１８の整数を表す。） （７） 溶液、フィルム、ゲルまたは微粒子であること
を特徴とする（１）〜（６）のいずれか１項に記載の光
架橋性ヒアルロン酸誘導体。 （８） 前記溶液が、（１）〜（６）のいずれか１項に
記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体を該誘導体を溶解し
うる溶媒に溶解したものである（７）記載の光架橋性ヒ
アルロン酸誘導体。 （９） 前記フィルム、ゲルまたは微粒子が、（８）の
溶液から溶媒を除去し、必要に応じて粉砕したものであ
る（７）記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体。 （１０） （１）〜（９）のいずれか１項に記載の光架
橋性ヒアルロン酸誘導体の光二量化性架橋基同志が架橋
シクロブタン環を形成してなることを特徴とする架橋ヒ
アルロン酸誘導体。 （１１） 水不溶性であって、フィルム、ゲルまたは微
粒子であること特徴とする（１０）記載の架橋ヒアルロ
ン酸誘導体。 （１２） ヒアルロン酸を水単独または水混和性有機溶
媒を含んだ水溶液に溶解し、水溶性カルボジイミドと縮
合補助剤の存在下、（１）〜（６）のいずれか１項に記
載の光二量化性架橋基を導入することを特徴とする
（１）〜（８）のいずれか１項に記載の光架橋性ヒアル
ロン酸誘導体の製造法。 （１３） （１）〜（９）のいずれか１項に記載の光架
橋性ヒアルロン酸誘導体に紫外線を照射することを特徴
とする（１０）または（１１）記載の架橋ヒアルロン酸
誘導体の製造法。 （１４） （１２）の製造法によって（１）〜（８）の
いずれか１項に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体を製
造し、該誘導体を水または水混和性有機溶媒の溶液と
し、水または水混和性有機溶媒を除去して光架橋性ヒア
ルロン酸誘導体を所望の形状に成形し、次いでこの成形
したものに紫外線を照射することを特徴とする（１０）
または（１１）記載の架橋ヒアルロン酸誘導体の製造
法。

【０００８】本発明はヒアルロン酸に対し、ヒアルロン
酸の構成２糖単位当たりに光二量化性架橋基を平均０．
０００５〜０．０５個導入してなる光架橋性ヒアルロン
酸誘導体を提供する。ここで、ヒアルロン酸の構成２糖
単位当たりの光二量化性架橋基の平均導入数０．０００
５〜０．０５個である光架橋性ヒアルロン酸誘導体のＤ
Ｓは、０．０００５〜０．０５である。

【０００９】本発明は、分子量１０〜５００万の高分子
ヒアルロン酸を低分子化を起こさないで光二量化性架橋
基の導入が可能な反応条件を見出したと共にＤＳが０．
０００５〜０．０５、すなわちヒアルロン酸１分子中平
均４０００単糖につき１〜１００個の光二量化性架橋基
の導入したヒアルロン酸誘導体でも数分間の紫外線照射
により架橋、不溶化することを見いだした。

【００１０】本発明は、ＤＳを上記のように極めて低い
値に設定しても従来に比べて短時間の光照射で水不溶性
の架橋ヒアルロン酸誘導体を得ることができる。本発明
に使用される光二量化性架橋基としては、光によりシク
ロブタン環を形成可能なビニレン基を有したものであれ
ば、その構造は特に制限はない。本発明に使用される好
ましい光二量化性架橋基としては、スペーサー及びベン
ゼン環に置換基もしくは官能基を有することもあるシン
ナモイル基により構成されたものが挙げられる。

【００１１】該スペーサーとしては特に制限はないが、
炭素骨格を有し、２個以上の官能基を有する構造特徴を
もつ有機基が挙げられる。具体的には、アミノ酸または
その誘導体、ペプチド、アミノアルコール類、ジアミン
類、オリゴ糖、ジオール類、ヒドロキシ酸等、好ましく
は、アミノ酸またはその誘導体、ペプチド、アミノアル
コール類、ジアミン類が挙げられる。

【００１２】該光二量化性架橋基はヒアルロン酸の水酸
基またはカルボキシル基とのエステル結合によって導入
されるか、またはヒアルロン酸のカルボキシル基とのア
ミド結合によって導入されるが、特にアミド結合が好ま
しい。スペーサーがアミノアルコール類、アミノ酸もし
くはその誘導体またはペプチドでヒアルロン酸のカルボ
キシル基とアミド結合を行う光二量化性架橋基の例とし
ては、下記一般式（１）または（２）で表される基を挙
げることができる。

【００１３】 −ＮＨ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ （１） 式（１）中、Ｒ₁ およびＲ₂ はそれぞれ独立に水素原子
または低級アルキル基（好ましくは、炭素数１〜４）を
表す。Ｐｈはフェニル基を示すが、炭素数１〜４程度の
低級アルキル基もしくはアルコキシ基、アミノ基または
水酸基等の置換基を有していてもよい。ｎは２〜１８、
好ましくは、２〜１２の整数を表す。

【００１４】式（１）において、Ｒ₁ およびＲ₂ が水素
原子で、ｎが６の場合の光二量化性架橋基は以下のよう
にヒアルロン酸のカルボキシル基と結合して、光架橋性
ヒアルロン酸誘導体を形成する。

【００１５】

【化１】

【００１６】 −Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ₃ （２） 式（２）中、Ｒ₃ はアルキル基、好ましくは、炭素数１
〜８のアルキル基を表わす。Ａは−（ＮＨＣＲ₄ Ｒ₅ Ｃ
Ｏ）_m −または−ＮＨ（ＣＲ₄Ｒ₅）_hＣＯ−を表す。該
Ｒ₄ およびＲ₅ はそれぞれ独立に水素原子または低級ア
ルキル基（好ましくは、炭素数１〜４）を表す。−Ｐｈ
−はパラフェニレン基を示すが、炭素数１〜４程度の低
級アルキル基もしくはアルコキシ基、または水酸基等の
置換基を有していてもよい。ｍは１〜６、好ましくは、
１〜３の整数を、ｈは１〜１８、好ましくは１〜１２の
整数を表す。

【００１７】本発明の光架橋性ヒアルロン酸誘導体は、
ヒアルロン酸を水単独または水混和性有機溶媒を含んだ
水溶液に溶解し、水溶性カルボジイミドと縮合補助剤の
存在下、光二量化性架橋基を導入することにより製造す
ることができる。光二量化性架橋基の導入は、具体的に
はヒアルロン酸を水単独または水混和性有機溶媒を含ん
だ水溶液に溶解し、そのものにゆっくりと攪拌しながら
０℃から室温（通常、０℃〜３５℃）にて、水溶性カル
ボジイミド、縮合補助剤、ならびに光二量化性架橋化合
物を順次加えることにより行うことができる。

【００１８】ここで、水混和性有機溶媒を含んだ水溶液
の水混和性有機溶媒の割合（有機溶媒混和率＝ΔＯ）
は、次式で表せる。 ΔＯ（％）＝１００×水混和性有機溶媒容量／水混和性
有機溶媒を含んだ水溶液の容量 本発明においては、ΔＯは、約０〜５０％、好ましく
は、３０〜５０％である。

【００１９】反応後の精製はエタノール沈澱法、透析と
いった常法にて行われ、乾燥後プロトンＮＭＲの積分強
度または２８０ｎｍの吸光度を測定する事によりＤＳを
求める事が出来る。

【００２０】これら架橋ヒアルロン酸誘導体の調製にあ
たり、使用する試薬、水、容器に注意を払うことで無菌
でしかも実質的にエンドトキシンフリーの化合物を得る
ことが出来る。

【００２１】光二量化性架橋基の具体的導入に使用され
る光二量化性架橋化合物としては、例えば、次式（１−
１）または（２−１）が挙げられる。 Ｈ₂ Ｎ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ （１−１） 式（１−１）中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｐｈ、ｎは前記と同義で
ある。 Ｈ−Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ₃ （２−１） 式（２−１）中、Ａ、−Ｐｈ−、Ｒ₃ は前記と同義であ
る。また、化合物（１−１）および（２−１）は塩の形
態、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩またはフッ化水素酸
塩が好ましく、特に塩酸塩が好ましい。

【００２２】化合物（１−１）の塩酸塩（１−２）は、
具体的には以下の反応により合成することができる。 Ｒ₆ ＨＮ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＨ（３） ＋ ＸＣＯＣＨ＝
ＣＨ−Ｐｈ（４）→Ｒ₆ ＨＮ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯＣＨ
＝ＣＨ−Ｐｈ（５） （５）＋ＨＣｌ→ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯ
ＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ（１−２） ここで、Ｒ₆ は酸で切断可能なアミノ保護基、例えば、
ｔ−ブトキシカルボニル基等、Ｘは塩素原子等のハロゲ
ン原子である。

【００２３】ここで、化合物（１−２）は、具体的には
以下のように合成される。化合物（３）にクロロホルム
等の有機溶媒を加え、氷冷下、トリエチルアミン等の有
機塩基を加え、化合物（４）、４−ジメチルアミノピリ
ジン等の塩基触媒を順次加える。室温で攪拌した後、こ
の反応液に酢酸エチル等の有機溶媒を加え、弱酸性水溶
液等で数回、水、弱アルカリ水溶液で数回、水、飽和食
塩水等で分液洗浄した後、無水硫酸ナトリウム等で乾燥
する。無水硫酸ナトリウム等を濾取し、濾液を減圧濃縮
して化合物（５）を得る。

【００２４】化合物（５）に１〜５Ｍ塩化水素／ジオキ
サン等の有機溶媒溶液等を氷冷下加え攪拌する。エーテ
ル等の有機溶媒を加え、析出した結晶を濾取し、更に有
機溶媒で洗浄し、減圧乾燥し、化合物（１−２）を得
る。

【００２５】化合物（２−１）の塩酸塩（２−２）は、
具体的には以下の反応により合成することができる。 Ｒ₇ −Ａ−ＯＨ（６） ＋ Ｈ₂ Ｎ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ
ＣＯＯＲ₃（７）→Ｒ₇ −Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ
ＣＯＯＲ₃ （８） （８）＋ＨＣｌ→ＨＣｌ・Ｈ−Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝
ＣＨＣＯＯＲ₃（２−２） ここで、Ｒ₇ は酸で切断可能なアミノ保護基、例えば、
ｔ−ブトキシカルボニル基等である。

【００２６】化合物（２−２）の具体的合成法は、以下
の通りである。化合物（６）をクロロホルム等の有機溶
媒に溶解し、氷冷下トリエチルアミン等の有機塩基、塩
化ジメチルホスフィノチオイルあるいは塩化ピバロイル
等の化合物（６）のカルボキシル基を酸無水物化するた
めの試薬を順次加え、室温で攪拌する。この溶液に化合
物（７）（好ましくは塩酸塩）、トリエチルアミン等の
塩基を氷冷下加え、室温で数十分〜数時間攪拌する。反
応終了後、有機溶媒を減圧留去し、酢酸エチル等の有機
溶媒を加え、弱酸性水溶液等で数回、水、弱アルカリ水
溶液で数回、水、飽和食塩水等で分液洗浄した後、無水
硫酸ナトリウム等で乾燥する。無水硫酸ナトリウム等を
濾取し、濾液を減圧濃縮して化合物（８）を得る。化合
物（８）に１〜５Ｍ塩化水素／ジオキサン等の有機溶媒
溶液等を氷冷下加え攪拌する。エーテル等の有機溶媒を
加え、析出した結晶を濾取し、更に有機溶媒で洗浄し、
減圧乾燥し、化合物（２−２）を得る。

【００２７】本発明に使用されるヒアルロン酸として
は、特に制限はないが通常、数平均分子量１０万〜５０
０万のものが使用され、目的に応じて種々の分子量のも
のが選定される。以下の合成法においては、ナトリウム
塩、カリウム塩、カルシウム塩等のヒアルロン酸の水溶
性の塩が好適に使用されるが、用いる反応溶媒に溶解
し、反応を阻害しない限り、他の塩であっても遊離型で
あってもよい。

【００２８】水混和性有機溶媒としては、ジオキサン、
ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセト
アミド、アルコール（メタノール、エタノール等）また
はピリジン等が例示される。縮合補助剤としては、Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等が挙げられる。こ
の縮合補助剤の機能は、少なくともヒアルロン酸のカル
ボキシル基を活性化するものである。

【００２９】水溶性カルボジイミド（ＷＳＣ）として
は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドメチオ
シド、１−シクロヘキシル−３−（２−モルフォリノエ
チル）カルボジイミド塩酸塩等が挙げられる。本発明の
光架橋性ヒアルロン酸誘導体は、種々の形態として調製
することができる。具体的には、溶液、フィルム、ゲ
ル、微粒子等の形態が例示される。本発明の光架橋性ヒ
アルロン酸誘導体をこれら種々の形態に加工するために
任意の公知技術が適用できる。これらの加工は光架橋性
ヒアルロン酸誘導体溶液または固形状の該誘導体に含ま
れる水あるいは水混和性有機溶媒量、温度、加圧力等を
選定することにより行われ得る。

【００３０】具体的には、溶液の場合、光架橋性ヒアル
ロン酸誘導体を生成した反応系のまま利用すること、光
架橋性ヒアルロン酸誘導体を反応系から一度分離、精製
し、水等に溶解すること等により調製することができ
る。フィルムの場合は、光架橋性ヒアルロン酸誘導体溶
液（例えば、水溶液）を例えば、キャスト法により溶液
から溶媒を除去することによって調製することができ
る。ゲルの場合は、該フィルムのものを水に浸漬する等
の方法によって調製することができ、微粒子の場合は、
フィルムまたはゲルのものを物理的に粉砕することによ
って調製することができる。

【００３１】本発明の架橋ヒアルロン酸誘導体は、光架
橋性ヒアルロン酸誘導体の光二量化性架橋基同志が架橋
シクロブタン環を形成してなるものであり、光架橋性ヒ
アルロン酸誘導体に紫外線を照射することにより得られ
る。ここで、紫外線照射手段としては、高圧水銀灯また
はメタルハライドランプを光源とする方法が挙げられ、
通常、上記の光架橋性ヒアルロン酸誘導体のフィルム、
ゲル、微粒子等に数分間の照射を行う。これは、従来の
高ＤＳの光架橋性ヒアルロン酸誘導体を光二量化するた
めには通常、３０分の照射が必要であったことからする
と格段に照射時間が短縮されたことになるが、この効果
は特に光二量化性架橋基にスペーサーが導入されたもの
を使用することにより高められるものと考えられる。

【００３２】なお、紫外線の種類は特に制限されない
が、通常、２００〜６００ｎｍ、好ましくは、２００〜
４５０ｎｍの波長の光源を使用し、紫外線フィルター
（例、パイレックスガラス（商品名）、フィルター等）
等を通過させることによって架橋には不要な波長をカッ
トしたものが使用される。本発明において、種々形状の
光架橋性ヒアルロン酸誘導体に紫外線を照射することに
より、その対応した形状でかつ水不溶性の架橋ヒアルロ
ン酸誘導体を得ることができる。また、ある形状の例え
ば、フィルム状の水不溶性の架橋ヒアルロン酸誘導体を
他の形状、例えば、微粒子、ゲルに成形することもでき
る。

【００３３】微粒子の架橋ヒアルロン酸誘導体は、フィ
ルムあるいは塊状の光架橋性ヒアルロン酸誘導体を粉砕
することにより調製できる。また、ゲル状の架橋ヒアル
ロン酸誘導体は、ＤＳ、紫外線照射時間を変え、水を包
含させることにより調製できる。例えば、本発明の架橋
ヒアルロン酸誘導体のフィルムは、水中での面積膨張率
〔面積膨張率（％）＝１００×フィルム湿潤面積／フィ
ルム乾燥面積〕が（２．０〜１２．０）×１００（％）
であり吸水率〔吸水率（％）＝１００×（フィルム湿潤
重量−フィルム乾燥重量）／フィルム乾燥重量〕が（５
０〜５００）×１００（％）であり、湿潤時の引っ張り
強度（定義は後述）が２５〜５００ｇ／ｍｍ²である。
また、架橋率の指標となるゲル化率（定義は後述）は、
通常、７０〜１００％、好ましくは、９０〜１００％で
ある。なお、上記において、フィルム湿潤面積、フィル
ム乾燥面積、フィルム湿潤重量およびフィルム乾燥重量
の定義はそれぞれ以下のとおりである。

【００３４】フィルム湿潤面積＝架橋フィルム（通常、
１０×１０ｍｍ² ）を１時間水に浸したときの面積 フィルム乾燥面積＝水に浸す前の乾燥時の架橋フィルム
の面積（通常、１０×１０ｍｍ² ） フィルム湿潤重量＝架橋フィルムを１時間水に浸した
後、表面水分をペーパータオルで拭き取った後の重量 フィルム乾燥重量＝水に浸す前の乾燥時の架橋フィルム
の重量 これら架橋体の物性は、ＤＳ、ＵＶ照射時間などを選定
することにより調整できる。

【００３５】このように本発明のフィルムは高いＤＳの
フィルムに比べ非常に高い膨潤率、吸水率を有する。ま
た高いＤＳの架橋ヒアルロン酸フィルムにしばしばみら
れる細胞接着性も示さない点で癒着防止剤等の用途に適
している。さらにフィルム内にヘパリン等の高分子物
質、種々の低分子化合物の薬剤を埋伏した場合には、こ
の埋伏したフィルムはこれら埋伏したものを架橋ヒアル
ロン酸誘導体から徐放させる性質（徐放性）を示しＤＤ
Ｓの素材ともなり得る。

【００３６】

【実施例】以下、本発明の具体的実施例を説明するが、
本発明は、これに限定されるものではない。尚、−ＮＨ
−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＣＨ₃ を−ＭＡＣ、−ＣＯＣ
Ｈ＝ＣＨ−Ｐｈを−Ｃｉｎと、ｔ−ブトキシカルボニル
をＢｏｃと記す。

【００３７】実施例１ １−１：ｔ−ブトキシカルボニルグリシルアミノ桂皮酸
メチルエステル〔化合物（１−ａ）：Ｂｏｃ−ＮＨＣＨ
₂ ＣＯ−ＭＡＣ〕の合成 ｔ−ブトキシカルボニルグリシン５．２５ｇ（３０ｍｍ
ｏｌ）をクロロホルム３０ｍｌに溶解し、氷冷下トリエ
チルアミン４．１７ｍｌ（３０ｍｍｏｌ）、塩化ジメチ
ルホスフィノチオイル３．８７ｇ（３０ｍｍｏｌ）を順
次加え、室温で１０分間攪拌した。この溶液にｐ−アミ
ノ桂皮酸メチルエステル塩酸塩２．１４ｇ（１０ｍｍｏ
ｌ）、トリエチルアミン１．３９ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）
のクロロホルム溶液１０ｍｌを氷冷下加え、再びトリエ
チルアミン１．３９ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）を加え、室温
で一昼夜攪拌した。反応終了後クロロホルムを減圧留去
し、酢酸エチルを加えた後、５％クエン酸水溶液２回、
水、５％炭酸水素ナトリウム２回、水、飽和食塩水の順
で分液洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナ
トリウムを濾取した後、濾液を減圧乾燥し化合物（１−
ａ）を収量２．４５ｇ（収率７３％）で得た。

【００３８】１−２：グリシルアミノ桂皮酸メチルエス
テル塩酸塩〔化合物（１−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ ＮＣＨ₂
ＣＯ−ＭＡＣ〕の合成 化合物（１−ａ）２．３４ｇ（７．０ｍｍｏｌ）に氷冷
下、４Ｎ塩化水素／ジオキサン１４ｍｌ加え、３０分室
温で攪拌した。反応終了後、無水エーテル１００ｍｌを
加え、析出した沈澱物をガラスフィルターで濾取し、エ
ーテルで２、３度洗浄した。得られた固体を減圧乾燥
し、白色固体として化合物（１−ｂ）を１．８６ｇ（収
率９８％）得た。

【００３９】実施例２ ２−１：ｔ−ブトキシカルボニルグリシルグリシルアミ
ノ桂皮酸メチルエステル〔化合物（２−ａ）：Ｂｏｃ−
（ＮＨＣＨ₂ ＣＯ）₂ −ＭＡＣ〕の合成 ｔ−ブトキシカルボニルグリシン５２６ｍｇ（３ｍｍｏ
ｌ）をクロロホルム３ｍｌに溶解し、トリエチルアミン
４１６μｌ（３ｍｍｏｌ）、塩化ジメチルホスフィノチ
オイル３８６ｍｇ（３ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液１
ｍｌを氷冷下、順次加えた。室温で１５分攪拌した後、
トリエチルアミン４１６μｌ（３ｍｍｏｌ）と予め調製
した化合物（１−ｂ）８１２ｍｇ（３ｍｍｏｌ）、トリ
エチルアミン４１６μｌ（３ｍｍｏｌ）のクロロホルム
溶液１０ｍｌを氷冷下加え、室温で２０分攪拌した。反
応液を減圧濃縮し、酢酸エチルを加え、５％クエン酸水
溶液で２回、水、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２
回、水、飽和食塩水で分液洗浄した後、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。無水硫酸ナトリウムを濾取し、濾液を
減圧濃縮し、析出した白色結晶をエーテルで洗浄した。
得られた化合物（２−ａ）を減圧乾燥し９８６ｍｇ（収
率８４％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ（ｐｐｍ）＝１．４５ ９Ｈ ｓ （Ｂｏｃ−） ３．８０ ３Ｈ ｓ （−ＣＯＯＣＨ₃） ３．８５ ２Ｈ ｓ （ＢｏｃＧｌｙ α−Ｈ） ４．１５ ２Ｈ ｓ （−ＧｌｙＧｌｙ− α−Ｈ） ５．１５ １Ｈ ｂｒ（ＢｏｃＮＨ−） ６．４０ １Ｈ ｄ （−ＣＨ：ＣＨＣＯ−） ７．５５ ４Ｈ ｄｄ（Aromatic H） ７．６５ １Ｈ ｄ （−ＣＨ：ＣＨＣＯ−） ８．５５ １Ｈ ｂｒ（ＧｌｙＮＨＡｒ−）

【００４０】２−２：グリシルグリシルアミノ桂皮酸メ
チルエステル塩酸塩〔化合物（２−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ−
（ＮＨＣＨ₂ ＣＯ）₂ −ＭＡＣ〕の合成 化合物（２−ａ）５４３ｍｇ（１．４ｍｍｏｌ）に４Ｍ
塩化水素／ジオキサン溶液４ｍｌを氷冷下加え、４０分
攪拌した。エーテルを加え、析出した結晶を濾取しエー
テルで洗浄した。減圧乾燥し、白色結晶として化合物
（２−ｂ）を１９９ｍｇ（収率６１％）得た。

【００４１】実施例３ ３−１：ｔ−ブトキシカルボニルトリグリシルアミノ桂
皮酸メチルエステル〔化合物（３−ａ）：Ｂｏｃ−（Ｎ
ＨＣＨ₂ ＣＯ）₃ −ＭＡＣ〕の合成 ｔ−ブトキシカルボニルグリシン８８ｍｇ（０．５ｍｍ
ｏｌ）をジオキサン１ｍｌに溶解し、トリエチルアミン
６９．５μｌ（０．５ｍｍｏｌ）、塩化ジメチルホスフ
ィノチオイル６４ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のジオキサン
溶液１ｍｌを氷冷下、順次加えた。室温で２５分攪拌し
た後、トリエチルアミン６９．５μｌ（０．５ｍｍｏ
ｌ）と予め調製した化合物（２−ｂ）１６３ｍｇ（０．
５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン６９．５μｌ（０．５
ｍｍｏｌ）のジオキサン溶液１ｍｌを氷冷下加え、室温
で１時間攪拌した。この反応液にアンモニア水１ｍｌ加
え２０分攪拌した。この溶液を減圧濃縮し、酢酸エチル
を加え、５％クエン酸水溶液で２回、水、５％炭酸水素
ナトリウム水溶液で２回、水、飽和食塩水で分液洗浄し
た後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。無水硫酸ナトリ
ウムを濾取し、濾液を減圧濃縮し、析出した白色結晶を
エーテルで洗浄した。得られた化合物（３−ａ）を減圧
乾燥し１５３ｍｇ（収率８９％）を得た。

【００４２】３−２：トリグリシルアミノ桂皮酸メチル
エステル塩酸塩〔化合物（３−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ−（Ｎ
ＨＣＨ₂ ＣＯ）₃ −ＭＡＣ〕の合成 化合物（３−ａ）１３７ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）に４Ｍ
塩化水素／ジオキサン溶液３ｍｌを氷冷下加え、２時間
攪拌した。エーテルを加え、析出した結晶を濾取しエー
テルで洗浄した。減圧乾燥し、白色結晶として化合物
（３−ｂ）を１１０ｍｇ（収率９８％）得た。

【００４３】実施例４ ４−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₃ ＣＯ−ＭＡＣ〔化合
物（４−ａ）〕の合成 実施例１−１において、ＢｏｃグリシンをＢｏｃＮＨ
（ＣＨ₂ ）₃ ＣＯＯＨに代えた他は実施例１−１に準じ
て標記化合物を合成した。収率４４％。 ４−２：４−（４−アミノブタンアミド）桂皮酸メチル
エステル塩酸塩〔化合物（４−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ
（ＣＨ₂ ）₃ ＣＯ−ＭＡＣ〕の合成 実施例１−２において、化合物（１−ａ）を化合物（４
−ａ）に代えた他は実施例１−２に準じて標記化合物を
合成した。収率９２％。

【００４４】実施例５ ５−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₅ ＣＯ−ＭＡＣ〔化合
物（５−ａ）〕の合成 実施例４−１に準じて標記化合物を合成した。収率４０
％。 ５−２：４−（６−アミノヘキサンアミド）桂皮酸メチ
ルエステル塩酸塩〔化合物（５−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ
（ＣＨ₂ ）₅ ＣＯ−ＭＡＣ〕の合成 実施例４−２に準じて標記化合物を合成した。収率９７
％。

【００４５】実施例６ ６−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₁₁ＣＯ−ＭＡＣ〔化合
物（６−ａ）〕の合成 実施例４−１に準じて標記化合物を合成した。収率７２
％。 ６−２：４−（１２−アミノドデカンアミド）桂皮酸メ
チルエステル塩酸塩〔化合物（６−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂
Ｎ（ＣＨ₂ ）₁₁ＣＯ−ＭＡＣ〕の合成 実施例４−２に準じて標記化合物を合成した。収率９４
％。

【００４６】実施例７ ７−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合物
（７−ａ）〕の合成 ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエタノール４６４
μｌ（３ｍｍｏｌ）にクロロホルム３ｍｌを加え、氷冷
下、トリエチルアミン４１７μｌ（３ｍｍｏｌ）、桂皮
酸クロリド４３１μｌ（３ｍｍｏｌ）、４−ジメチルア
ミノピリジン１８３ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を順次加え
た。室温で２０分攪拌した後、この反応液に酢酸エチル
を加え、５％クエン酸水溶液で２回、水、５％炭酸水素
ナトリウム水溶液で２回、水、飽和食塩水で分液洗浄し
た後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。無水硫酸ナトリ
ウムを濾取し、濾液を減圧濃縮し、析出した白色固体を
ヘキサンで洗浄した。減圧乾燥し、化合物（７−ａ）５
２７ｍｇ（収率６０％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ（ｐｐｍ）＝１．４５ ９Ｈ ｓ （Ｂｏｃ−） ３．５５ ２Ｈ ｍ （−ＮＨＣＨ₂ ＣＨ₂Ｏ−） ４．２５ ２Ｈ ｍ （−ＮＨＣＨ ₂ＣＨ₂ Ｏ−） ４．８５ １Ｈ ｂｒ（ＣＯＮＨ−） ６．４５ １Ｈ ｄ （−ＣＨ：ＣＨＣＯ−） ７．４５ ４Ｈ ｄｄ（Aromatic H） ７．７５ １Ｈ ｄ （−ＣＨ：ＣＨＣＯ−）

【００４７】７−２：桂皮酸２−アミノエチルエステル
塩酸塩〔化合物（７−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（ＣＨ₂ ）
₂ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 化合物（７−ａ）２９１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）に４Ｍ塩化
水素／ジオキサン溶液２ｍｌを氷冷下加え３５分攪拌し
た。エーテルを加え、析出した結晶を濾取しエーテルで
洗浄した。減圧乾燥し、白色結晶として化合物（７−
ｂ）を１７３ｍｇ（収率７６％）得た。

【００４８】実施例８ ８−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₃ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合物
（８−ａ）〕の合成 実施例７−１においてＢｏｃＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＯＨに代
えてＢｏｃＮＨ（ＣＨ₂ ）₃ ＯＨを用いる他は実施例７
−１に準じて化合物（８−ａ）を合成した。収率６５
％。

【００４９】８−２：桂皮酸３−アミノプロピルエステ
ル塩酸塩〔化合物（８−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（Ｃ
Ｈ₂ ）₃ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 実施例７−２において化合物（７−ａ）に代えて化合物
（８−ａ）を用いる他は実施例７−２に準じて化合物
（８−ｂ）を合成した。収率７６％。 実施例９ ９−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₄ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合物
（９−ａ）〕の合成 実施例８−１に準じて化合物（９−ａ）を合成した。収
率９３％。

【００５０】９−２：桂皮酸４−アミノブチルエステル
塩酸塩〔化合物（９−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（ＣＨ₂ ）
₄ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 実施例８−２に準じて化合物（９−ｂ）を合成した。収
率８８％。 実施例１０ １０−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₅ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合
物（１０−ａ）〕の合成 実施例８−１に準じて化合物（１０−ａ）を合成した。
収率約１００％。

【００５１】１０−２：桂皮酸５−アミノペンチルエス
テル塩酸塩〔化合物（１０−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（Ｃ
Ｈ₂ ）₅ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 実施例８−２に準じて化合物（１０−ｂ）を合成した。
収率８８％。 実施例１１ １１−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₆ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合
物（１１−ａ）〕の合成 実施例８−１に準じて化合物（１１−ａ）を合成した。
収率９９％。

【００５２】１１−２：桂皮酸６−アミノヘキシルエス
テル塩酸塩〔化合物（１１−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（Ｃ
Ｈ₂ ）₆ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 実施例８−２に準じて化合物（１１−ｂ）を合成した。
収率８６％。 実施例１２ １２−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₈ Ｏ−Ｃｉｎ〔化合
物（１２−ａ）〕の合成 実施例８−１に準じて化合物（１２−ａ）を合成した。
収率８７％。

【００５３】１２−２：桂皮酸８−アミノオクチルエス
テル塩酸塩〔化合物（１２−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（Ｃ
Ｈ₂ ）₈ Ｏ−Ｃｉｎ〕の合成 実施例８−２に準じて化合物（１２−ｂ）を合成した。
収率８８％。 実施例１３ １３−１：Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ₂ ）₁₂Ｏ−Ｃｉｎ〔化合
物（１３−ａ）〕の合成 実施例８−１に準じて化合物（１３−ａ）を合成した。
収率約１００％ １３−２：桂皮酸１２−アミノドデシルエステル塩酸塩
〔化合物（１３−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ₂ Ｎ（ＣＨ₂ ）₁₂Ｏ
−Ｃｉｎ〕の合成 実施例８−２に準じて化合物（１３−ｂ）を合成した。
収率８２％。

【００５４】実施例１４ １４−１：Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｃｉｎ）−ＯＣＨ₃ 〔化合
物（１４−ａ）〕の合成 ｔ−ブトキシカルボニルセリンメチルエステル（Ｂｏｃ
−Ｓｅｒ−ＯＣＨ₃ ）１．９３ｇ（８．８ｍｍｏｌ）を
クロロホルム９ｍｌに溶解させ氷冷下、桂皮酸無水物
２．９４ｇ（１０．６ｍｍｏｌ）のクロロホルム１０ｍ
ｌ溶液、トリエチルアミン１．４６ｍｌ（１０．６ｍｍ
ｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン６４５ｍｇ（４．
４ｍｍｏｌ）のクロロホルム２ｍｌ溶液を順次加えた。
室温で３５分攪拌後、減圧濃縮により液量を減少させた
後、酢酸エチルを加えた。この溶液を５％クエン酸溶液
で２回、水で１回、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２
回、水で１回、飽和食塩水で２回洗浄した後、無水硫酸
ナトリウムにより１時間脱水した。硫酸ナトリウムを濾
過した後濾液を減圧濃縮した。エーテルを加え結晶化し
た後、酢酸エチル−石油エーテルにより再結晶し、白色
結晶として化合物（１４−ａ）を２．１０ｇ（収率６８
％）で得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ）＝１．４５ ９Ｈ ｓ （Ｂｏｃ−） ３．８０ ３Ｈ ｓ （−ＣＯＯＣＨ₃） ４．５１ ２Ｈ ｄｄ（β−ＣＨ₂） ４．６５ １Ｈ ｂｒ（α−ＣＨ） ５．３８ １Ｈ ｂｒ（ＣＯＮＨ） ６．４０ １Ｈ ｄ （ＰｈＣＨ：ＣＨ−） ７．４５ ５Ｈ ｍ （Ｐｈ−） ７．７０ １Ｈ ｓ （ＰｈＣＨ：ＣＨ−）

【００５５】１４−２：Ｏ−シンナモイルセリンメチル
エステル塩酸塩〔化合物（１４−ｂ）：ＨＣｌ・Ｈ−Ｓ
ｅｒ（Ｃｉｎ）−ＯＣＨ₃ 〕の合成 化合物（１４−ａ）１．４８ｇ（４．２ｍｍｏｌ）に氷
冷下でトリフルオロ酢酸を結晶が浸るまで加え３０分放
置する。さらに４Ｍ塩化水素／ジオキサン溶液を１．１
ｍｌを加え、ついでヘキサンを加え結晶化した後、結晶
を濾取しガラスフィルター上でエーテル−ヘキサンで洗
浄し白色結晶として化合物（１４−ｂ）を収率９１％で
得た。

【００５６】実施例１５〜３２ 光架橋性ヒアルロン酸誘導体フィルム及び架橋ヒアルロ
ン酸誘導体フィルムの調製 本発明の光架橋性ヒアルロン酸誘導体及び架橋ヒアルロ
ン酸誘導体の各フィルムを以下の実施例により調製し
た。尚、光架橋性ヒアルロン酸誘導体フィルムを光架橋
性フィルムと架橋ヒアルロン酸誘導体フィルムを架橋フ
ィルムともいう。

【００５７】実施例１５ 化合物（１−ｂ）を使用した光架橋性フィルム（化
合物１５）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム２００ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ／モノマー）を水５０ｍｌに溶解さ
せた後、１，４−ジオキサンを１０ｍｌ加えた。氷冷
下、０．５Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／ジオキ
サン溶液２００μｌ、０．２５Ｍ １−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
（ＥＤＣ）水溶液２００μｌを順次加え、２分間攪拌し
た後、化合物（１−ｂ）１２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）
水溶液１ｍｌを加えた。室温で３時間４０分攪拌した
後、飽和酢酸ナトリウム／エタノール溶液３５０ｍｌを
加え、目的物を沈澱させ、遠心分離した（2500R.P.M.×
5min）。水−エタノール混合液洗浄を３回した後、得ら
れた沈澱を水４０ｍｌに溶解させた後、９０ｍｍ×６２
ｍｍの角型シャーレにキャストした。４５℃のオーブン
で乾燥、フィルム化し、収量１８２ｍｇ、吸光度による
ＤＳ０．０１７の化合物１５の光架橋性フィルムを得
た。

【００５８】 化合物１５の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成した光架橋性フィルムを厚さ２．４ｍｍのパイ
レックスガラス（商品名）板に挟み込みコンベアに固定
し、片面２分ずつ合計４分間紫外線照射装置（ウシオ電
機（株），Ｔｙｐｅ ＵＶＣ−２５３１；光源：メタル
ハライドランプ（長さ１ｍ） ３ｋＷ，照射距離：１２
５ｍｍ，コンベア速度：１ｍ／分）にて紫外線を照射
し、架橋フィルムを得た。ゲル化率９９％ 実施例１６ 実施例１５において、光二量化性架橋化合物を化合物
（２−ｂ）に変更した以外は、実施例１５に準じて光架
橋性フィルムおよび架橋フィルムを得た。

【００５９】実施例１７ 化合物（３−ｂ）を使用した光架橋性フィルム（化
合物１７）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム３２０ｍ
ｇ（０．８ｍｍｏｌ／モノマー）を水５０ｍｌに溶解さ
せた後、１，４−ジオキサンを２５ｍｌ加えた。氷冷
下、０．５Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／ジオキ
サン溶液３２０μｌ、０．２５Ｍ ＥＤＣ水溶液３２０
μｌを順次加え、１０分間攪拌した後、化合物（３−
ｂ）３０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを加え
た。室温で２時間攪拌した後、飽和酢酸ナトリウム／エ
タノール溶液２５０ｍｌを加え、目的物を沈澱させ、遠
心分離した（2500R.P.M.×5min）。水−エタノール洗浄
を３回した後、得られた沈澱を水３００ｍｌに溶解さ
せ、減圧濃縮し液量を約５０ｍｌにし、９０ｍｍ×６２
ｍｍの角型シャーレにキャストした。４５℃のオーブン
で乾燥、フィルム化し、収量２５８ｍｇ、ＵＶによるＤ
Ｓ０．００９の光架橋性フィルムを得た。

【００６０】 化合物１７の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成した光架橋性フィルムを厚さ２．４ｍｍのパイ
レックスガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫
外線を照射し、架橋フィルムを作成した。ゲル化率 １
１３％ 実施例１８ 実施例１７に準じて化合物（３−ｂ）を使用した光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。

【００６１】実施例１９ 化合物（４−ｂ）を使用した光架橋性フィルム（化
合物１９）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム３２０ｍ
ｇ（０．８ｍｍｏｌ／モノマー）および化合物（４−
ｂ）２４ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを用い
実施例１７と同様の操作でフィルム化し、収量２７２
ｍｇ、ＮＭＲによるＤＳ０．０２５の光架橋性フィルム
を得た。

【００６２】 化合物１９の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成した光架橋性フィルムを厚さ２．４ｍｍのパイ
レックスガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫
外線を照射し、架橋フィルムを得た。ゲル化率１０８％

【００６３】実施例２０ 実施例１９に準じて化合物（４−ｂ）を使用した光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。 実施例２１ 実施例２０において、光二量化性架橋化合物を化合物
（５−ｂ）に変更した以外は実施例２０に準じて光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。

【００６４】実施例２２ 化合物（６−ｂ）を使用した光架橋性フィルム（化
合物２２）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム３２０ｍ
ｇ（０．８ｍｍｏｌ／モノマー）を水８０ｍｌに溶解さ
せた後、１，４−ジオキサンを４０ｍｌ加えた。氷冷
下、０．５Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／ジオキ
サン溶液１６０μｌ、０．２５Ｍ ＥＤＣ水溶液１６０
μｌを順次加え、２分間攪拌した後、化合物（６−ｂ）
１７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを加えた。
室温で５時間攪拌した後、飽和酢酸ナトリウム／エタノ
ール溶液２５０ｍｌを加え、目的物を沈澱させ、遠心分
離した（2500R.P.M.×5min）。水−エタノール混合液洗
浄を３回した後、得られた沈澱を水７５ｍｌに溶解させ
た後、９０ｍｍ×６２ｍｍの角型シャーレにキャストし
た。４５℃のオーブンで乾燥、フィルム化し、収量３７
０ｍｇ、吸光度によるＤＳ０．００６の光架橋性フィル
ムを得た。

【００６５】 化合物２２の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成したフィルムを厚さ２．４ｍｍのパイレックス
ガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫外線を照
射し、架橋フィルムを得た。ゲル化率 ８７％ 実施例２３ 実施例２２に準じて化合物（６−ｂ）を使用した光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。

【００６６】実施例２４ 化合物（７−ｂ）を使用した光架橋性フィルム（化
合物２４）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム２００ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ／モノマー）を水５０ｍｌに溶解さ
せた後、１，４−ジオキサンを１０ｍｌ加えた。氷冷
下、０．５Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／ジオキ
サン溶液２００μｌ、０．２５Ｍ ＥＤＣ水溶液２００
μｌを順次加え、５分間攪拌した後、化合物（７−ｂ）
１１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを加えた。
室温で７時間攪拌した後、飽和酢酸ナトリウム／エタノ
ール溶液３５０ｍｌを加え、目的物を沈澱させ、遠心分
離した（2500R.P.M.×5min）。水−エタノール混合液洗
浄を３回した後、得られた沈澱を水８０ｍｌに溶解させ
た後、９０ｍｍ×６２ｍｍの角型シャーレにキャストし
た。 ４５℃のオーブンで乾燥、フィルム化し、収量１
９２ｍｇ、吸光度によるＤＳ０．００９８の光架橋性フ
ィルムを得た。

【００６７】 化合物２４の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成したフィルムを厚さ２．４ｍｍのパイレックス
ガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫外線を照
射した。ゲル化率 ９１％ 実施例２５〜２７ 実施例２４において、光二量化性架橋化合物を化合物
（８−ｂ）、（９−ｂ）、（１０−ｂ）に変更した以外
は、実施例１５に準じて光架橋性フィルムおよび架橋フ
ィルムを得た。

【００６８】実施例２８ 化合物（１１−ｂ）を使用した光架橋性フィルム
（化合物２８）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム２００ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ／モノマー）を水５０ｍｌに溶解さ
せた後、１，４−ジオキサンを１０ｍｌ加えた。氷冷
下、０．５Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／ジオキ
サン溶液２００μｌ、０．２５Ｍ ＥＤＣ水溶液２００
μｌを順次加え、５分間攪拌した後、化合物（１１−
ｂ）１４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを加え
た。室温で７時間攪拌した後、飽和酢酸ナトリウム／エ
タノール溶液３５０ｍｌを加え、目的物を沈澱させ、遠
心分離した（2500R.P.M.×5min）。水−エタノール混合
液洗浄を３回した後、得られた沈澱を水８０ｍｌに溶解
させた後、９０ｍｍ×６２ｍｍの角型シャーレにキャス
トした。４５℃のオーブンで乾燥、フィルム化し、収量
１９６ｍｇ、吸光度によるＤＳ０．００５７の光架橋性
フィルムを得た。

【００６９】 化合物２８の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成したフィルムを厚さ２．４ｍｍのパイレックス
ガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫外線を照
射した。ゲル化率 ９２％ 上記のヒアルロン酸ナトリウムの代わりに分子量１０
万、３０万、５０万および８０万のヒアルロン酸ナトリ
ウムを用いておよびの操作を行い、架橋フィルムを
得た。

【００７０】実施例２９ 実施例２８において、光二量化性架橋化合物を化合物
（１２−ｂ）に代えた以外は実施例２８に準じて光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。 実施例３０ 化合物（１３−ｂ）を使用した光架橋性フィルム
（化合物３０）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム２００ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ／モノマー）および化合物（１３−
ｂ）１８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）水溶液１ｍｌを用い
実施例２４と同様の操作でフィルム化し、収量１９４
ｍｇ、吸光度によるＤＳ０．００５８の光架橋性フィル
ムを得た。

【００７１】 化合物３０の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 で作成したフィルムを厚さ２．４ｍｍのパイレックス
ガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫外線を照
射し、架橋フィルムを得た。ゲル化率 ９６％ 実施例３１ 実施例３０において、光二量化性架橋化合物を化合物
（１４−ｂ）に代えた以外は実施例３０に準じて光架橋
性フィルムおよび架橋フィルムを得た。

【００７２】実施例３２ 桂皮酸無水物を使用した光架橋性フィルム（化合物
３２）の作成 平均分子量１００万のヒアルロン酸ナトリウム４００ｍ
ｇ（１．０ｍｍｏｌ／モノマー）を２５０ｍｌの水に溶
解した後、１，４−ジオキサン１２５ｍｌを加えた。こ
の溶液に桂皮酸無水物１３９ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）と
トリエチルアミン７０μｌ（０．５ｍｍｏｌ）と４−ジ
メチルアミノピリジン６１ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）の１
５ｍｌジオキサン溶液を氷冷下にて４０分間で滴下した
後、室温で１時間攪拌を続けた。得られた溶液を１．０
ｌの酢酸ナトリウム飽和エタノールに注ぎ、生じた沈澱
を遠心分離した。得られた沈澱をさらに３回水−エタノ
ール洗浄により精製後減圧乾燥することによりシンナモ
イル化ヒアルロン酸を白色粉末として３８０ｍｇ得た。
ＮＭＲによるＤＳは０．０２０を示した。又、ジアゾ化
カップリング法を用いた比色法によるエンドトキシン含
量は乾燥重量当たり４６．８ｐｇ／ｍｇであった。光架
橋性粉末３８０ｍｇを水２００ｍｌに均一になるように
溶解させた後、水量が５０ｍｌ程度になるように減圧濃
縮した。この溶液を６５ｍｍ×９５ｍｍの角型シャーレ
に流し込んだ後、４０度の乾燥機中で２日間乾燥させ、
フィルム化させ光架橋性フィルムを得た。

【００７３】 化合物３２の光架橋性フィルムの紫外
線による架橋フィルムの作成 の光架橋性フィルムを厚さ２．４ｍｍのパイレックス
ガラス板に挟み込み、実施例１５と同様に紫外線を照
射し、架橋フィルムを得た。ゲル化率 ８５％ 実施例１５〜３２で作成した光架橋性フィルムのＤＳ、
紫外線照射時間（分）、架橋フィルムのゲル化率、架橋
フィルムの湿潤引張強度を表１に示す。

【００７４】ゲル化率（％）＝（フィルム再乾燥重量／
フィルム乾燥重量）×１００ フィルム再乾燥重量＝フィルム重量に対して１万倍量の
水に室温、２４時間浸した後、フィルムを濾取、減圧乾
燥して得られる重量 フィルム乾燥重量＝フィルムを湿潤させる前に減圧乾燥
して得られる重量 又、湿潤引張強度とは、フィルムを１時間水に浸した
後、レオメーターにより測定されるフィルムが切断され
るまでの最大引っ張り強度で表される。

【００７５】

【表１】

【００７６】実施例３３〜３６ 酵素分解性 実施例２８に準じて光架橋性フィルムを作成し、表２記
載の条件で紫外線照射し、架橋フィルムの面積膨張率、
ゲル化率、および経時的酵素分解性（分解率）を評価し
た。酵素分解性の反応条件は、以下の通りである。

【００７７】緩衝液：０．２Ｍ 酢酸−水酸化ナトリウ
ム（ｐＨ６） 酵素：ヒアルロニダーゼ（羊睾丸由来）１００単位／ｍ
ｇ 温度：３７℃ 分析法：酵素分解によって架橋フィルムから溶出する低
分子化ヒアルロン酸の量をカルバゾール法で測定し、初
期重量と比較して分解率を算出した。

【００７８】分解率（％）＝（緩衝液中に溶出したヒア
ルロン酸の重量／架橋フィルムの初期重量）×１００

【００７９】

【表２】

【００８０】

【発明の効果】以上説明したように、本発明は光二量化
性架橋基の導入率の低い光架橋性ヒアルロン酸誘導体を
容易に製造することができ、しかも機械的に強度のある
不溶性の架橋ヒアルロン酸誘導体を短時間の光照射で提
供することができる。また、本発明の架橋ヒアルロン酸
誘導体は、ヒアルロン酸本来の生分解性、生体適合性、
無毒性、非抗原性、高膨潤性、高保水性といった優れた
性質を保持しているので、極めて安全性の高い医用材
料、例えば、薬剤の徐放性担体、癒着防止材等として種
々の分野に適用が期待できる。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒアルロン酸の構成２糖単位当たりに光
   二量化性架橋基が平均０．０００５〜０．０５個導入さ
   れたことを特徴とする光架橋性ヒアルロン酸誘導体。
2. 【請求項２】 該ヒアルロン酸の数平均分子量が１０万
   〜５００万であることを特徴とする請求項１記載の光架
   橋性ヒアルロン酸誘導体。
3. 【請求項３】 該光二量化性架橋基がヒアルロン酸のカ
   ルボキシル基とアミド結合を形成することにより導入さ
   れていることを特徴とする請求項１または２記載の光架
   橋性ヒアルロン酸誘導体。
4. 【請求項４】 該光二量化性架橋基がスペーサー及びベ
   ンゼン環に置換基もしくは官能基を有することもあるシ
   ンナモイル基により構成されていることを特徴とする請
   求項１〜３いずれか１項記載の光架橋性ヒアルロン酸誘
   導体。
5. 【請求項５】 該スペーサーがアミノ酸またはその誘導
   体、ペプチド、アミノアルコール類およびジアミン類か
   らなる群から選択されることを特徴とする請求項４記載
   の光架橋性ヒアルロン酸誘導体。
6. 【請求項６】 該光二量化性架橋基が下記一般式（１）
   または（２）で表されることを特徴とする請求項４また
   は５に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体。 −ＮＨ（ＣＲ₁Ｒ ₂）_nＯＣＯＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ （１） （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ はそれぞれ独立に水素原子また
   は低級アルキル基、Ｐｈはフェニル基、ｎは２〜１８の
   整数を表す。） −Ａ−ＮＨ−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ₃ （２） （式中、Ｒ₃ はアルキル基、Ａは−（ＮＨＣＲ₄ Ｒ₅ Ｃ
   Ｏ）_m −または−ＮＨ（ＣＲ₄Ｒ₅）_hＣＯ−を表し、該
   Ｒ₄ およびＲ₅ はそれぞれ独立に水素原子または低級ア
   ルキル基を表す。−Ｐｈ−はパラフェニレン基、ｍは１
   〜６の整数を、ｈは１〜１８の整数を表す。）
7. 【請求項７】 溶液、フィルム、ゲルまたは微粒子であ
   ることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載
   の光架橋性ヒアルロン酸誘導体。
8. 【請求項８】 前記溶液が、請求項１〜６のいずれか１
   項に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導体を該誘導体を溶
   解しうる溶媒に溶解したものである請求項７記載の光架
   橋性ヒアルロン酸誘導体。
9. 【請求項９】 前記フィルム、ゲルまたは微粒子が、請
   求項８の溶液から溶媒を除去し、必要に応じて粉砕した
   ものである請求項７記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導
   体。
10. 【請求項１０】 請求項１〜９のいずれか１項に記載の
    光架橋性ヒアルロン酸誘導体の光二量化性架橋基同志が
    架橋シクロブタン環を形成してなることを特徴とする架
    橋ヒアルロン酸誘導体。
11. 【請求項１１】 水不溶性であって、フィルム、ゲルま
    たは微粒子であること特徴とする請求項１０記載の架橋
    ヒアルロン酸誘導体。
12. 【請求項１２】 ヒアルロン酸を水単独または水混和性
    有機溶媒を含んだ水溶液に溶解し、水溶性カルボジイミ
    ドと縮合補助剤の存在下、請求項１〜６のいずれか１項
    に記載の光二量化性架橋基を導入することを特徴とする
    請求項１〜８のいずれか１項に記載の光架橋性ヒアルロ
    ン酸誘導体の製造法。
13. 【請求項１３】 請求項１〜９のいずれか１項に記載の
    光架橋性ヒアルロン酸誘導体に紫外線を照射することを
    特徴とする請求項１０または１１記載の架橋ヒアルロン
    酸誘導体の製造法。
14. 【請求項１４】 請求項１２の製造法によって請求項１
    〜８のいずれか１項に記載の光架橋性ヒアルロン酸誘導
    体を製造し、該誘導体を水または水混和性有機溶媒の溶
    液とし、水または水混和性有機溶媒を除去して光架橋性
    ヒアルロン酸誘導体を所望の形状に成形し、次いでこの
    成形したものに紫外線を照射することを特徴とする請求
    項１０または１１記載の架橋ヒアルロン酸誘導体の製造
    法。