JPH07108166A - リポソーム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 トレハロースの脂肪酸エステルからなる壁膜
を有することを特徴とするリポソーム。 【効果】 長期保存下でも安定であり、医薬品、医薬部
外品、化粧品等に好適なリポソームを提供し得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬品、医薬部外品、
化粧品等に適用されるリポソームに関する。さらに詳し
くは、トレハロースの脂肪酸エステルによって形成され
る壁膜を有することを特徴とするリポソームに関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】リポソ
ームはその壁膜が脂質２分子膜からなる閉鎖小胞体であ
る。天然の生体膜は、脂質の２分子膜構造をとっている
といわれており、このリポソームは生体膜類似の構造を
とっていることから細胞膜との高い親和性を有し、ドラ
ッグキャリヤーとしての高いポテンシャルが期待されて
いる。近年、薬物送達システム（ドラッグデリバリーシ
ステム、ＤＤＳ）を目指したリポソーム製剤の開発は医
薬品分野だけでなく化粧品分野においてもますます盛ん
である。

【０００３】従来よりリポソーム形成剤として用いられ
ているリン脂質（レシチン）は安全性には優れているも
のの、化学的・物理的安定性が乏しいため、実用的な応
用を考えた場合に困難である。すなわち、リン脂質を用
いてリポソームを調製した場合、長期保存によって変
色、変臭等の化学的変質を生じ、また長期保存や凍結乾
燥後の再水和によって凝集、沈澱等の物理的変質を生ず
る。リポソームの実用化はこれらの問題点によって妨げ
られている。

【０００４】これらの問題点を克服するため、リン脂質
以外のリポソーム形成能を有する材料の探索が行われて
いる。例えば、ジ長鎖アルキルジメチルアンモニウムク
ロリドのようなジアルキル型カチオン界面活性剤（国武
ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、９９巻、３８６０
ページ、１９７７年）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ
油のようなＰＯＥ系非イオン界面活性剤（特開昭５２−
６３７５号公報、特開昭５９−１６５３４号公報）など
が報告されている。また、親水基に糖類を用いたものと
して、ショ糖脂肪酸エステル（特開昭６１−２０７３２
４号公報）、グルコース脂肪酸エステル（特開平４−３
００８２０号公報）、グルコースアルキルエーテル（特
開昭５９−１０６４２３号公報）などが報告されてい
る。

【０００５】さらに、リポソームの安定性を向上させる
ため、リポソームに対してトレハロース等の糖類を添加
する方法（特表昭６２−５００１０２号公報、特表昭６
２−５０１６３１号公報）も報告されている。

【０００６】しかしながら、リポソーム形成剤としてト
レハロースの脂肪酸エステルを用いた例はまだ報告され
ていない。また、トレハロースジ脂肪酸エステルについ
ては、界面活性剤として用いることを目的とした報告
（特開昭６０−２５８１９５号公報、特開昭６２−９１
２３６号公報）あるいは抗腫瘍剤としての報告（特開昭
６１−２８９０３８号公報）もあるが、リポソーム形成
能に関する知見は見あたらない。

【０００７】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、先
のリン脂質を用いたリポソームの問題点を解決すべく鋭
意検討を加えた結果、トレハロースの脂肪酸エステルに
よってリポソームを形成させることができ、形成された
リポソームが優れた安定性を有していることを見いだ
し、本発明を完成させたのである。すなわち、本発明は
トレハロースの脂肪酸エステルからなる壁膜を有してな
ることを特徴とするリポソームを提供するものである。

【０００８】以下、本発明の構成の詳細について説明す
る。本発明に用いるトレハロース脂肪酸エステルは公知
の化合物であり、公知の合成方法にて合成される。例え
ば、トレハロースと脂肪酸の低級アルキルエステルとを
縮合することにより得ることができる。

【０００９】すなわち、通常のショ糖脂肪酸エステルを
製造する方法を用いることにより得ることができる（Ｕ
ＳＰ２８９３９９０号公報、特開昭３６−２１７１７号
公報、ＵＳＰ３４８０６１６号公報、特開昭５３−６１
３０号公報、ＵＳＰ３９６３６９９号公報）。これらの
方法により反応物としてトレハロースモノ脂肪酸エステ
ル、ジエステル、トリ以上のエステルの混合物が得られ
るが、これらは通常の精製方法によりそれぞれを単離す
ることができる。また、未反応原料としてトレハロース
及び脂肪酸低級アルキルエステルが残存している場合で
も本発明の目的を達成する範囲内であれば問題とはなら
ない。

【００１０】トレハロース脂肪酸エステルとしてはトレ
ハロースポリ脂肪酸エステル、特にジエステル体が好ま
しい。トレハロース脂肪酸エステルを構成する脂肪酸と
しては通常炭素数８〜２２のものが用いられ、好ましく
は炭素原子数１０〜１８の飽和もしくは不飽和の高級脂
肪酸が用いられる。この場合、ジエステルとしては必ず
しも高純度品である必要はなく、トレハロースのモノも
しくはトリエステルとの混合物も使用可能である。ジエ
ステル含量が３０重量％以上であれば良い。またジ脂肪
酸エステルの場合、脂肪酸結合部位はトレハロースの
６，６’位が好ましい。

【００１１】トレハロース脂肪酸エステルに膜安定化剤
としてコレステロール、コレスタノール等のステロール
類を、荷電物質としてジセチルホスフェート、ホスファ
チジン酸、ガングリオシド、ステアリルアミン等を、さ
らに酸化防止剤としてα−トコフェロール等を加えても
良い。これらの配合比率は何等限定されるものべきもの
ではないが、好ましくはトレハロース脂肪酸エステル１
重量部に対し、０．０１〜２．０重量部程度加えるのが
適している。

【００１２】本発明のリポソームを調製する方法として
は、リポソームの一般的な製法が適用できる。例えば、
ボルテクスィング法、ソニケーション法、プレベシクル
法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注
入法、アニーリング法、Ｗ／Ｏ／Ｗエマルション法、逆
相蒸発法等多くの方法が挙げられるが、これらのいずれ
の調製法を用いてもよく、またこれらに限定されるもの
ではない。

【００１３】この中でボルテクスィング法、ソニケーシ
ョン法を用いた調製法を以下に説明する。トレハロース
脂肪酸エステル及び膜安定化剤等を有機溶媒（好ましく
はクロロホルム）に溶解した後、有機溶媒を留去し、ト
レハロース脂肪酸エステルからなる薄膜を形成させる。
そこへ水溶性成分等を溶解した緩衝液を添加し、相転移
温度以上にてボルテックスミキサー等により振とう（ボ
ルテクスィング）して薄膜をはがす。この時点で多重層
リポソーム（ＭＬＶ）が形成され、所望によって超音波
処理（ソニケーション）により一枚膜リポソーム（ＳＵ
Ｖ）とする。

【００１４】本発明のリポソームには、例えば一般的に
汎用される製剤構成成分として水溶性高分子、多価アル
コール、防腐剤、キレート剤等が添加され得る。

【００１５】

【実施例】以下、本発明を実施例を挙げて詳細に説明す
るが、本発明はこれに限定されない。

【００１６】実施例１ トレハロースジラウリン酸エステル１００mgを５０mlナ
ス型フラスコに取り、クロロホルム５mlを加えて溶解さ
せた。つぎに、このナス型フラスコをロータリーエバポ
レーターによって溶剤をゆっくり蒸発させることにより
フラスコの内壁にトレハロースジラウリン酸エステルの
薄膜を形成させた後、真空ポンプにより更に３時間乾燥
させた。これに蒸留水４mlを加え、６０℃に加温しなが
ら振とうし、薄膜を剥した。この時点で白濁した水溶液
となり、これを偏光顕微鏡下で観察（４００倍）する
と、直径１〜１０μm の粒子が観察されるとともにＭＬ
Ｖに特有の「閉じたラメラ構造」が確認できた。この液
をリンタングステン酸染色し、透過型電子顕微鏡にて観
察（１０万倍）したところ、５〜９枚程度の多層膜構造
を持った閉鎖小包体（ベシクル）、すなわちリポソーム
が観察された。この水溶液をさらに６０℃に加温しなが
らプローブ型ソニケーターにより１０分間超音波照射し
た。同様に透過型電子顕微鏡にて観察したところ、粒子
径５０〜８０μm のＳＵＶが観察された。

【００１７】実施例２ 実施例１において、蒸留水の代わりにカルボキシフルオ
レセイン（ＣＦ）１００mM水溶液を用い、調製した。Ｍ
ＬＶが形成された時点で、リポソーム溶液をゲル濾過
し、外相のＣＦを取り除いた後、ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０水溶液添加前後の蛍光強度を測定することにより、内
相にＣＦがトラップされていることが確認できた。尚、
保持効率は１５．５％であった。

【００１８】実施例３ 実施例１においてトレハロースジラウリン酸エステルの
代わりにトレハロースジパルミチン酸エステルを用い、
調製した。電子顕微鏡観察により、同様にＭＬＶ、ＳＵ
Ｖが観察された。

【００１９】実施例４ トレハロースモノミリスチン酸エステル２０mg、トレハ
ロースジステアリン酸エステル６０mg、トリ以上のエス
テル２０mgからなる混合物をエタノール８mlに５０℃に
て加熱溶解し、これを６０℃に加熱した蒸留水中にシリ
ンジを用いて加圧注入した。半透明の水溶液が得られ、
これを実施例１と同様、電子顕微鏡観察したところ、Ｓ
ＵＶが観察された。

【００２０】以上、実施例１〜４によりトレハロース脂
肪酸エステルがリポソームを形成することは明かであ
る。

【００２１】次に、本発明のリポソームの安定性を従来
のリポソームと比較し、説明する。調製された各リポソ
ームは４０℃にて３ヶ月間保存した後、変色・変臭の程
度、粒子径の変化を比較した。また、各リポソームを凍
結乾燥し、再水和した後の粒子径を比較した。

【００２２】実施例５ トレハロースジウンデシレン酸エステル１．０ｇ、コレ
ステロール０．５ｇ、ジセチルホスフェート０．２ｇを
２００mlナス型フラスコに取り、クロロホルム１０mlを
加えて溶解させた。次に、このナス型フラスコをロータ
リーエバポレーターによって溶剤をゆっくり蒸発させる
ことによりフラスコの内壁に薄膜を形成させた後、真空
ポンプにより更に３時間乾燥させた。これに蒸留水１０
０mlを加え、６０℃に加温しながら振とうし、薄膜をは
がした。さらに、６０℃にて超音波照射し、ＳＵＶを調
製した。動的光散乱法により粒子径を測定したところ、
６２nmであった。

【００２３】実施例６ トレハロースモノミリスチン酸エステル０．２ｇ、トレ
ハロースジステアリン酸エステル０．６ｇ、トリ以上の
エステル０．２ｇを１０mlのエタノールに５０℃にて加
温溶解し、これを６０℃の蒸留水１００ml中にシリンジ
を用いて、加圧注入し、ＳＵＶを調製した。動的光散乱
法により粒子径を測定したところ、７３nmであった。

【００２４】比較例１ 実施例５においてトレハロースジウンデシレン酸エステ
ルの代わりに水添大豆レシチンを用い、同様にＳＵＶを
調製した。動的光散乱法により粒子径を測定したとこ
ろ、５９nmであった。

【００２５】実施例５〜６および比較例１に関して、安
定性試験を実施した。

【００２６】（１）４０℃、３ヶ月保存後の比較

【００２７】

【表１】

【００２８】（２）凍結乾燥、再水和後の粒子径

【００２９】

【表２】

【００３０】表１および表２の結果から明かなように、
本発明のリポソームは従来のリポソームに比べ、優れた
安定性を示した。

【００３１】

【発明の効果】以上述べた通り、トレハロースの脂肪酸
エステルによってリポソームを形成させることができ、
形成されたリポソームが優れた安定性を有していること
は明かである。このリポソームにおいては適宜に水溶
性、油溶性の薬物を封入でき、保存期間中にリポソーム
の化学的、物理的変質を伴わず、使用時にリポソームと
しての効果を発揮し得る。すなわち、医薬品においては
注射剤、内服用液剤、外用剤等に、医薬部外品、化粧品
においてはローション、乳液、クリーム、美容液、育毛
剤等に好適なリポソーム製剤を提供し得る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 トレハロースの脂肪酸エステルからなる
   壁膜を有することを特徴とするリポソーム。
2. 【請求項２】 トレハロースの脂肪酸エステルがトレハ
   ロースジ脂肪酸エステルである請求項１記載のリポソー
   ム。