JPH0278623A - インターフェロン誘起剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はインターフェロン誘起剤に関する。特に、本発
明の有効成分は毒性が少なく、かつそのいくつかの有効
成分は構造式が明らかであり、実質的にを効な成分のみ
を投与することができるものである。

〔従来技術・発明が解決しようとする課題〕１９７８年
旧ｒｔ等線蝕葺朋畑立迫吐匹担■Ｊ〔ｈ塵す凪ｂａｃ迫
吐Ｕ鱈μ担（ｈ鱈μ狙）〕ノ加熱処理全死菌体をマウス
に投与すると、インターフェロンが誘起されることを示
した（Ｃｅ１１．　Ｉ−麟−ｕｎｏ１．．　、Ｉｌｌ、
　　１６８−１７５　（１９７８））　。

またＴａｋｅｙａｍａは抗酸菌であるＢＣＧの細胞壁骨
格をマウスに投与するとインターフェロンが誘起される
ことを示した（Ｇａｎｎ、　７ｊ４．４２１−４２８　
（１９７９））　。

さらに、ＢＣＧの生菌やＰ、　ａｃ立競の加熱処理全死
菌体を第一次インターフェロン誘起剤として投与し、さ
らに内毒素であるリボ多ｖａｎ　＜以下ＬＰＳと略する
）を第二次インターフェロン誘起剤として投与すると、
インターフェロンを誘起できるとされている（Ｉｎｆｅ
ｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍ＋＊ｕｎｉｔｙ、　Ｎｏｖ。

４４０−４４３　（１９８２））　。

上述のように、インターフェロンは一種類の誘起剤のみ
でも生体内中に誘起されるが、第一次インターフェロン
誘起剤にてマクロファージやリンーパ球等の免疫に関与
する細胞を活性化した後、第二次インターフェロン誘起
剤にてそれらの活性化細胞を刺激することによって多量
のインターフェロンが誘起される。

ところが、上記の公知例で使用される全菌体もしくは細
胞壁骨格のような物質の組成は非常に漠然としており、
その作用を発現する物質以外の物質をも含有し、その生
物学的活性に多様性、不均一性が見られ、また、作用を
発現する物質は明確な構造のものではないので、合成等
の手段にて当該物質を製造することができないという欠
点を有している。

また公知例において、第二次インターフェロン誘起剤と
して使用するＬＰＳについても、例えばＢＣＧで感作さ
れたマウスにＬＰＳを０．８μｇ／ｈｅａｄ以上投与す
ると、その多くは６時間以内に死亡するというように毒
性面で問題がある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、かかる実情をふまえ、鋭意研究を行った
結果、単糖類または二ｔＩ！ａの脂肪酸エステルおよび
抗酸菌から抽出されうる両親媒性物質が優れたインター
フェロン誘起活性を存することを見出した。特に、上記
脂肪酸エステルが第一次インターフェロン誘起活性を有
することを見出した。さらに、両親媒性物質が第二次イ
ンターフェロン誘起活性を持つことを見出し、本発明を
完成したものである。

即ち、本発明は単ＩＪ！類または二＄！類の脂肪酸エス
テルおよび抗酸菌から抽出されうる両親媒性物質から選
ばれる少なくとも一種を有効成分とするインターフェロ
ン誘起剤を提供するものである。

本明細書において、インターフェロンとは、インターフ
ェロンα、β、γの全てを包含する概念である。

本明細書において、脂肪酸エステルを構成する単Ｉ！類
とはグルコース、フルクトース、マンノースのようにＣ
＋＋　ＨｔｎＯｎ　　（ｎ　”＝　３〜７）で表される
アルドースまたはケトースを示し、鎖状、環状構造のい
ずれをも包含する概念である。また、二ｔＵｔとはシュ
クロースやトレハロースのように、単糖がグリコシド結
合によって脱水縮合したものを示し、構成する糖には特
に制限はない。

本発明の有効成分である脂肪酸エステルは、好ましくは
抗酸菌から有機溶媒（たとえば、クロロホルム／メタノ
ール、エーテル／エタノールなど）にて抽出されうるち
のであり、特に好ましくは、その脂肪酸残基がミコール
酸残基である脂肪酸エステルである。

ミコール酸残基とは式 （式中、Ｒ゛およびＲ”はそれぞれ不飽和結合を有して
いてもよいアルキル基を表す、即ち、本発明にいうアル
キル基は不飽和結合を有するものをも含む概念であり、
通常のアルキル基の概念より広範囲である。） で表されるものである。

式（１）に関して、アルキル基は直鎖状または分岐状の
いずれでもよく、また不飽和結合（好ましくは二重結合
）を有していてもよい０式（１）で表されるミコール酸
残基における総炭素数は好ましくは２０〜９０程度であ
る。

Ｒ′で表されるアルキル基は好ましくは次の如きもので
ある。即ち、炭素数が８〜２６の直鎖状または分岐状で
不飽和結合（好ましくは二重結合）をＯ〜２程度有する
ものである。また、Ｒ”で表されるアルキル基は好まし
くは次の如きものである。即ち、炭素数が２０〜６０の
直鎖状または分岐状で不飽和結合（好ましくは二重結合
）を１〜９程度有するものである。

なお、当該ミコール酸残基における炭素数はその由来す
る各抗酸菌によって異なり、たとえばミコバクテリウム
属では６０〜９０、ノカルデイア属およびロドコッカス
属では３０〜７０、ゴルドナ属では６０〜８０．コリネ
バクテリウム属では３０〜４０である。

本発明で用いられる単糖類または二＃Ｎ類の脂肪酸エス
テル、特にミコール酸エステルとしては、例えば次の化
合物が例示される： フルクトース＝ｌ−または６−モツミコレート、フルク
トース−１，６−シミコレート、グルコース−６−モツ
ミコレート、 シュクロース−６−モツミコレート、 シュクロース−６，６゛−シミコレート、トレハロース
−６−モツミコレート、 トレハロース−６，６°−または２．６°−シミコレー
ト、トレハロース−２，３，６’−または２．６．６’
　−）リミコレートおよび トレハロース−２，３，６，６°−テトラミコレート等
が例示される（にｅｋｋａｋｕ、　Ｖｏｌ、　６３．　
Ｎｏ、　３．１９１−２０４　（１９８Ｂ）　）　。

本発明において、特に好ましい脂肪酸エステルは式 （式中、Ｒ’−Ｒ’はそれぞれ水素原子またはミコール
酸残基を表し、かつＲ１〜Ｒ＠のうち３つがミコール酸
残基である。ただしそれらのミコール酸残基は同一であ
っても異なってもよい。）で表されるα、α−トレハロ
ーストリミコール酸であり、さらに好ましくは上記式（
ＩＩ）中、Ｒ１、ＲｚおよびＲ・がミコール酸残基であ
り、Ｒ３、Ｒ’、Ｒ８，Ｒ−およびＲ’ｌが水素原子で
ある化合物または上記式（ＩＩ）中、Ｒ’、Ｒ’および
Ｒ１１がミコール酸残基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ’、Ｒ
”およびＲ′が水素原子である化合物である。

本発明の有効成分である脂肪酸エステルは一般的には既
知の化合物であるが、ミコール酸エステルについてその
一般的製法を例示すれば次の通りである。

即ち、たとえばミコバクテリウム属、ノカルデイア属、
ロドコッカス属、ゴルドナ属、コリネバクテリウム属等
の抗酸菌に属する菌株より前記のごとき有機溶媒による
抽出後、薄層クロマトグラフィーにて精製することによ
り単離することができる。培養方法としては特公昭６２
−１３１号公報、特開昭５４−２８８３０号公報、ＷＯ
３７１０５６０６号公報に開示の方法などが挙げられる
。

前記ミコール酸エステルを含む脂肪酸エステルは合成に
よっても容易に製造することができるが、合成によって
製造された化合物は単一ないしは活性成分のみの組成で
あり、好ましい態様である。

本発明で使用される脂肪酸エステルは、インターフェロ
ンの誘起に関して、単独で使用することもできるが、好
ましくは第一次誘起剤として使用され、ＬＰＳや抗酸菌
から抽出され得る両親媒性物質等の第二次誘起剤と併用
することによって有為にインターフェロンを誘起するも
のである。

本発明で使用される脂肪酸エステルの毒性については種
々報告されており、毒性が極めて少ないことはすでに確
立されている。

また本発明の有効成分である両親媒性物質とは抗酸菌の
、たとえば全国または細胞エンベロープ画分から有機溶
媒（たとえば、クロロホルム／メタノール、エーテル／
エタノールなど）で遊離脂質を除去後、フェノール／水
（１：１、ｖ　／　ｖ％）混液、石油エーテル／水混液
、界面活性剤／水混液などで水層に抽出されうる物質で
あり、親水性、親油性の特性を有する。当該両親媒性物
質は公知であり、たとえばＷＯ３６１０５２０４公報に
記載の方法で製造することができる。また、フェノール
／水法は、Ｗｅｓ　ｔｐｈａ　ｌの方法（Ｎａｔｕｒｏ
ｆｏｒｓｃｈｇ。

１、１４８−１５５　（１９５２））で代表される公知
の手法である。

本発明における両親媒性物質は、グリセロール含量が検
出限界以下であり、また有機リン含量が格段に低い点で
リボタイコ酸と異なり、また３−ハイドロキシミリスチ
ン酸等のハイドロキシ酸を全く含まない点でＬＰＳとも
異なる０例えばその化学組成は（■／■；有機リンにつ
いてはｇｓｏｌｅ／■で示す）次に示す通りである。

ヘキソース　　：０．２５〜０．５５■／■ペントース
　　：０．１０〜０．１７■／■脂肪酸　　　　：ｏ、
ｏ３〜０．１６■／■アミノ酸　　　：ｏ、ｏ’ｒ〜Ｏ
，１７ＩＩ＋ｇ／■アミノ糖　　　：＜Ｏ，Ｏ３■／ｍ
ｇ 有機リン　　　：　　０．３〜１．７　μ５ｏｌｅ／＠
グリセロ、−ル　：　検出されず この化学組成中、ヘキソースとペントースはその大部分
がそれぞれマンノースとアラビノースであり、脂肪酸に
ついてはパルミチン酸とステアリン酸＋ツベルクロステ
アリン酸が主成分で、ハイドロキシ酸は全く検出されな
い、主なアミノ酸はグルタミン酸、アスパラギン酸、ロ
イシン、スレオニン、グリシン、アラニン、セリン、バ
リンであり、ジアミノピメリン酸は痕跡程度であり、ア
ミノ糖はグルコサミンを主とし、ムラミン酸はほとんど
含まれない。

本発明の有効成分を有する抗酸菌とは、抗酸染色性を示
し、細胞壁に多量の脂肪酸、特にα分枝、β−ハイドロ
キシ高級脂肪酸であるミコール酸を有する好気性菌であ
り、具体的には、ミコバクテリウム属、ノカルデイア属
、ロドコッカス属、ゴルドナ属およびコリネバクテリウ
ム属に属する菌種、菌株が挙げられる。

本発明の有効成分である両親媒性物質の製造に使用され
る抗酸菌株の具体例を挙げれば以下の通りであるが、本
発明でいう両親媒性物質はこれらの菌由来のものに限定
されるものではない。

Ｍ　ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｌｏｓｉｓ
　Ｈ３７Ｒｖ（ＡＴＣＣ２５６１８または２７２９４）
Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｒｕｂｒａ　　束材コレクシコンＭ
−１（ＡＴＣＣ２７８３６） Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｔｅｒｒａｅ　　束材コレク
ション７００１２（ＡＴＣＣ２５５９４） Ｇｏｒｄｏｎａ　ａｕｒａｎｔｉａｃａ　　束材コレク
ション８０００５（ＡＴＣＣ２５９３８） 本発明の有効成分である両親媒性物質は、各層間、およ
び各属内の菌種、菌株間で化学組成および化学構造が多
少異なる場合があるが、いづれも第二次インターフェロ
ン誘起活性を有している。

〔作用・効果〕

本発明の誘起剤の使用方法としては次の如き態様が例示
される。

■第二次誘起剤を使用することなく当該脂肪酸エステル
を投与する方法、 ■第一次誘起剤として当該脂肪酸エステルを投与した後
に任意の第二次誘起剤を投与する方法、および ■任意の第一次誘起剤を投与した後に第二次誘起剤とし
て両親媒性物質を投与する方法が例示され、好ましくは ■第一次誘起剤として当該脂肪酸エステルを投与した後
に、第二次誘起剤として当該両親媒性物質を投与する方
法が例示される。

■の方法は、脂肪酸エステルを有効成分として投与する
ことによって実施される。かくして約６時間後からイン
ターフェロンが誘起される。

■〜■の方法は、第一次誘起剤を投与した後、１日〜３
週間後に第二次誘起剤を投与することによって実施され
る。かくして第二次誘起剤投与後、約１〜８時間後から
より多量のインターフェロンが誘起される。誘起される
インターフェロンの誘起時間、誘起量はインターフェロ
ンのタイプ（α、β、Ｔ）、投与形態等によって異なる
。

第一次誘起剤としては、ＢＣＧの生菌、Ｐ、　ａｃｎ−
競の死菌体等が例示される。

第二次誘起剤としては、ＬＰＳ、コンカナバリンＡ等が
例示される。

本発明の有効成分である脂肪酸エステルは、それ自体単
独でまたは任意の所要の医薬上許容される添加剤（例え
ば、担体、賦形剤等）を使用して常套手段によって製剤
化されて、インターフェロン誘起剤、特に第一次インタ
ーフェロン誘起剤として投与される。具体的な製剤とし
ては、例えば経口剤（例えば、錠剤、カプセル剤、散剤
、リポソーム等）、注射剤〔リポソームあるいはその凍
結乾燥製剤、乳濁性注射剤（例えば有機酸、有機塩基、
界面活性剤、水溶性高分子、水溶性有ｊａ溶剤等を使用
する乳化剤）、生理食塩水等を使用した懸濁性注射剤〕
等が例示される。

本発明の有効成分である脂肪酸エステルのヒトへの投与
量は剤型、投与ルート、患者の重篤度、薬物に対する許
容度等により異なるが、通常成人１日あたり１０■〜２
０００■、好ましくは５００■ｇ〜１０００■の範囲で
、これを１回または数回に分けて、特に第一次インター
フェロン誘起剤として投与される。

本発明の有効成分である両親媒性物質は、任意の所要の
医薬上許容される添加剤（例えば、担体、賦形剤等）を
使用して通常の製剤化手段によって任意の含量の経口ま
たは非経口投与剤、例えば錠剤、カプセル剤、シロップ
剤、注射剤等の形で用いられる。

両親媒性物質のヒトへの投与量は剤型、投与ルート、患
者の重篤度、薬物に対する許容度等により異なるが、通
常成人１日あたり、１■〜２０００■、好ましくは１０
ｍｇ〜５００＋ｇの範囲で、これを１回または数回に分
けて、第二次インターフェロン誘起剤として投与される
。

本発明においては構造が明らかな脂肪酸エステルを使用
することで、低使用量でそのインターフェロン誘起活性
が高められたばかりでなく、両親媒性物質物質は内毒素
ではないので毒性が少ないという効果がある。

近年、インターフェロンは抗ウィルス活性と共に抗腫瘍
性が期待されているので、本発明のインターフェロン誘
起剤をヒト、哺乳類（牛、馬、豚等）、鳥類、魚類等の
各種を推動物のウィルス感染症の予防および治療に利用
することが期待できるだけでなく、抗腫瘍剤としても期
待できるものである。

〔実施例・参考例・試験例〕

次に実施例、参考例、試験例を挙げて本発明を更に具体
的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものでは
ない。

実施例１ 卵黄ホスファチジルコリン（１５μｍｏｌｅ）とトレハ
ロース　トリミコレート（１■）ヲクロロホルムに溶解
した溶液をナス型コルベンに入れ、２５〜３０°Ｃの水
浴中で減圧下にクロロホルムを留去し、コルベン内壁に
薄膜を形成させた。このコルベンにｐＨ７，０リン酸緩
衝生理食塩水（１ｍｌ”）を入れ、内壁の薄膜がはがれ
るまで振盪した０作製したリポソームをドライアイス・
メタノールで凍結し、凍結乾燥機で凍結乾燥を行い、ト
レハローストリミコレート含有リポソームの凍結乾燥粉
末を得た。

実施例２ 卵黄ホスファチジルコリンのかわりに、大豆ホスファチ
ジルコリンを使用して実施例１と同様に操作し、トレハ
ロース　トリミコレート含有リポソームの凍結乾燥粉末
を得た。

実施例３ 卵黄ホスファチジルコリンのかわりに、ジパルミトイル
ホスファチジルコリンを使用して実施例１と同様に操作
し、トレハロース　トリミコレート含有リポソームの凍
結乾燥粉末を得た。

実施例４ トレハロース　トリミコレートのかわりに、グルコース
　ミコレートを使用して実施例１と同様に操作し、グル
コース　ミコレート含有リポソー−ムの凍結乾燥粉末を
得た。

実施例５ トレハロース　トリミコレートのかわりに、マンノース
　ミコレートを使用して実施例１と同様に操作し、マン
ノース　ミコレート含有リポソームの凍結乾燥粉末を得
た。

実施例６ 卵黄ホスファチジルコリンとトレハロース　トリミコレ
ートの溶液にさらにコレステロール１■を加え、以下実
施例１と同様に操作し、トレハロース　トリミコレート
含有リポソームの凍結乾燥粉末を得た。

実施例７ 下記処方よりなるリポソームの懸濁性注射剤を常套手段
にて製造した。

トレハロース　トリミコレート　３００■卵黄ホスフア
チジルコリン　　　７２０ｍｇ全量　　　５＋＋１ 実施例日 下記処方よりなる非水性溶剤を用いた注射剤を常套手段
にて製造した。

トレハロース　ミコレート　　　　　１００■オ奪−゛ 全量　　　１ｍｌ 実施例９ 下記成分中、木取外の成分の規定量を取り、４０℃まで
加温しながら撹拌し、均一とする。このものに精製水を
加えて撹拌し、白濁した乳濁性注射液を製造した。

トレハロース　トリミコレート　３００■オリーブ油　
　　　　　　　　　　１００ｍｇｄｌ−α−トコフェロ
ール　　　　５０■ポリソルベート８０　　　　　　　
　８０　ｍｇセスキオレイン酸ソルビタン　　　６０ｍ
ｇ＋１ 全量　　　５ｍｌ 実施例１０ （１）　　トレハロース　トリミコレートのリポソーム
凍結乾燥粉末　　１００ｍｇ（２）　　乳１！　　　　
　　　　　　　　　　７５■結晶セルロース　　　　　
　　６０ｍｇコーンスターチ　　　　　　　ＩＯＩＩＩ
ｇ（３）　　ヒドロキシプロピルセルロース　１■（４
）　　ＥＣＧ５０５　（カルボキシメチルセルロースカ
ルシウム）　２■ （５）　　ステアリン酸マグネシウム　　　１■６　　
　ルク　　　　　　　　　　　　　　　　ｍ計　　　２
５０■ （１）および（２）を（３）の５％水溶液で練合乾燥後
、整粒し、（４）、（５）および（６）を加えて混合し
、１２０■で打錠（φ７ａ＋ｍ）して錠剤とする。

実施例１１ （１）トレハロース　トリミコレートのリポソーム凍結
乾燥粉末　　１００ｍｇ（２）乳糖　　　　　　　　　
　　　１２５■コーンスターチ　　　　　　　２０ｍｇ
（３）　　ヒドロキシプロピルセルロース　２■（４）
軽質無水ケイ酸　　　　　　　　１　ｆｆ１ｇ５　スー
ア１ン　マグネジ　ム　　　２ｍ計　　　２５０■ （１）、（２）および（３）を（４）の５％水溶液で練
合乾燥し、整粒し、（５）および（６）を加えて混合し
、３号硬カプセルに２５０　ｍｇを充填する。

実施例１２ 下記処方よりなる生理食塩水を溶剤として用いた注射剤
を常套手段にて製造した。

両親媒性物質　　　　　　　　１００ｍｇ声　　　　　
　　　　　　　′１ 全１１０＋ａｌ 実施例１３ 実ａ例ｉ〜１２のトレハロース　ミコレート、トレハロ
ース　トリミコレート、グルコース　ミコレートまたは
マンノース　ミコレートの代わりに、フルクトース　ミ
コレート、フルクトースシミコレート、シュクロース　
ミコレート、シュクロース　シミコレート、トレハロー
ス　シミコレート、トレハロース　テトラミコレートヲ
用いて、実施例１〜１２と同様に行い、同様の製剤を製
造する。

参考例Ｉ Ｍ　ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕ　ｔｕｂｅｒｃｌｏｓｉｓ　
１１３７ＲｖをＳａｕ　ｔｏｎ培地に８週間培養した菌
体をエタノール／エーテル（１：　ｌ、ｖ／ｖ）で処理
後、機械的に破壊した菌体から分離した細胞エンベロー
プ画分を出発材料とし、これをフェノール／水（ｌ：１
．ｖ／Ｖ）混液に懸濁して室温で１〜２時間撹拌抽出し
た。７０００Ｘｇで４５分間遠心し、水層部分を分取し
た。フェノール層には分取した水層と同量の水を加え、
再び１〜２時間室温で撹拌した。同じ抽出操作をさらに
１回行い、３回分の水層を集めて水に対して充分透析し
、減圧濃縮後、凍結乾燥し両親媒性物質を得た。収率は
出発材料の３．６％であった。この物質の化学組成は以
下に記す通りである。

ヘキソース　　：　　４０ｍｇ／１００■ペントース　
　：　　１６．８ｍｇ／　１００ｍｇ脂肪酸　　　　：
　　１５．２ｍｇ／１００ｍｇアミノ酸　　　：１６．
２ｍｇ／１００■アミノ１１８　　　　：　　０．３３
ｍｇ／ｌｏｏａｇグリセロール　：　検出されず 有機リン　　　：　　３４μ５ｏｌｅ７１００■参考例
２ Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｒｕｂｒａ　Ｍ−１、Ｒｈｏｄｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ｔｅｒｒａｅ　７００１２およびＧｏｒｄ
ｏｎａ　ａｕｒａｎｔｉａｃａ　８０００５は、０．５
％ペプトン、１％グルコースおよび０．２％イーストエ
キスを含む液体培地（ｐＨ７，０〜７．２）に３０°Ｃ
１約１週間振盪培養して得た菌体をクロロホルム／メタ
ノール（２：１、ｖ　／　ｖ　）で抽出した残渣を出発
材料とし、以下参考例１と同様のフェノール／水法によ
る抽出操作を行い、各菌体に由来する両親媒性物質を得
た。収率は出発材料の１〜２％であった。第１表に各菌
体より得られた両親媒性物質の化学組成を表示する。

第　　１　　表 菌体名　　　Ｎ、　ｒｕｂｒａ　　Ｇ、　ａｕｒａｎｔ
ｉａｃａ　　Ｒ，ｔｅｒｒａｅヘキソース　　５１　　
　　２９　　　　４７ペントース　　１６．２　　　１
７．０　　　１１．８脂肪酸　　　　３．２　　　　７
．７　　　　１５．３アミノ酸　　　７．９　　　　　
１２．２　　　８．０アミノ糖　　　０．１０　　　２
．６６　　　１．７９グリセロール　検出されず　検出
されず　検出されず有機リン　　　１６７　　　１００
　　　７２ヘキソース、ペントース、脂肪酸、アミノ酸
およびアミノ糖の各数値は両親媒性物質１００ｍｇ中の
含量（ｍ）を、有機リンは両親媒性物質１００ｍｇ中の
含量（μｍｏｌｅ）を示す。

試験例Ｉ ＴＣＰマウス（５週齢、雌、静岡実験動物材料）を１群
３〜５匹とし、Ｇｏｒｄｏｎａ　８０１８０１１８０画
由来のＩ・レバロース−２，３，６’　−トリミコレー
ト含有糖脂質（ＧａＧＭと略する）と卵由来ホスファチ
ジルコリン（ＰＣＢ、日本積比）とを９　：　ｌ　（ｍ
ｏｌ／ｍｏｌ）で調製したリポソームを所定量静脈内投
与した。投与２週間後、大腸菌（０１１１−８４）由来
の内毒素（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、　
Ｌ　Ｐ　Ｓ、シグマ）を静脈内投与で刺激して得た血清
中のインターフェロン（以下ＩＦＮと略する）を測定し
た。陰性対照として、Ｇ　ａ　Ｇ　Ｍを含まずＰＣＢの
みで調製したリポソームを上記に示す条件で投与し、血
清を得た。陽性対照はＢＣＧ生菌（日本結核予防会）お
よびＰ、　ａｃｎｅｓ（大阪重置大学医学部より分与）
を注射用生理食塩液に溶かし、静脈内および腹腔的投与
して、２週間後および１０日後にＬＰＳで刺激して得た
血清を用意した。

ＩＦＮの活性測定は間材らの方法（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　Ｎｏｖ、　４４０−４４
３．　（１９８２））に従って行った。即ち、１０％Ｆ
ＢＳ加ＭＥＭ培地に浮遊させたＬ−９２９細胞のｌ　Ｘ
　Ｉ　０５（０，１ｍ１）ずつを９６穴平底マイクロプ
レート上で３７　’Ｃ２４時間培養したものに、同じ培
地で段階希釈した上記テスト血清の０．１ｍｌを添加し
て２４時間培養した。

ついで、水痘性口内炎ウィルスを感染させて２４時間培
養後、ウィルス感染による細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａ
ｔｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　、　ＣＰ　Ｅ　）に基づくプ
ラーク数を５０％阻止するテスト血清の最高希釈倍数か
ら、　Ｎａｔｉｏｎａｌ　１ｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　
Ｈｅａｌｔｈ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅを標準として国際単
位を求め示した。

第２表にＧａＧＭをマウスの静脈内に投与し、２週間後
、ＬＰＳをマウス１回当たり２５μｇ静脈内投与してさ
らに２時間後に得られた血清中のＩＦＮ活性を示した。

ＢＣＧ生菌をマウス１回当たり０．５ｇおよびＬａｃμ
担をマウス１回当たり１０■（湿重量）投与したマウス
血清中のＩＦＮは６２５０単位／１ｍｌおよび３７５０
単位／１であるのに対して、ＧａＧＭをマウス１回当た
り１００μｇおよび３００μｇの低用量与えると、ＩＦ
Ｎは１２４８単位／ｍｌおよび６０００単位／ｍ＋誘起
された。

第２表 ＧａＧＭのリポソーム製剤を静脈内投与したＩｃＲマウ
スにＬＰＳで刺激した際のＩＦＮ産生第１次誘起剤　投
与量　投与経路　　　ＩＦＮ量１１ＧａＧＭ　　　１１
００ｐ　　静脈内投与　１２４８単位／　ｍ　ＩＧａＧ
Ｍ　　　３００μｇ　　静脈内投与　６０００単位／ｍ
１ＢＣＧ　　　　５００＋ｎｇ　　静脈内投与　６２５
０単位／ｍｌＰ、　ａｃｎｅｓ　　　１０　ｍｇ　　腹
腔的投与　３７５０単位／ｍ１５８単位／ｍｌ ”ＩＩＦＮとはα、β、Ｔを含む。

ｂ）リポソームのみを０．２Ｉｌｌ／マウスに投与した
。

第３表にはリポソーム剤型のＧａＧＭの投与経路を変え
てＩＦＮの誘起を調べた結果を示した。

ＩＦＮはマウス１回当たり３００μｇのＧａＧＭを静脈
内投与した場合に誘起されるほど強（はないが、腹腔的
投与した場合にも２４９７単位／ｍｌ誘起された。さら
にＧａＧＭを経口的投与した場合においても若干のＩＦ
Ｎ（６２３単位／ｍ＋）は誘起された。

第３表 ＧａＧＭのリポソーム製剤の 投与経路の違いによるＩＦＮの産生 Ｃ；ａＧＭの投与量　投与経路　　　　ＩＦＮ量３００
Ｐｇ／リポソーム／マウス　静脈内投与　７９８８単位
／ｍｌ□１６２単位／ｍ１ ３００ｐｇ／リポソーム／マウス　　腹腔内投与　　　
２４９７　単イ立／ｍｌ□３９単位／１ ３００Ｐｇ／リポソーム／マウス　　経口投与　　　　
　　６２３　単位／ｍｌ□３９単位／ｍｌ 試験例２ １群３〜５匹のＩＣＲマウスに実施例１で示したＧａＧ
Ｍのリポソーム製剤をマウス１匹当た９Ｓ００＃ｇ静脈
内投与した。投与２週間後にＬＰＳを１回当たり０．２
μｇ静脈内投与して刺激後、経時的に採血し、血清中に
誘起された）ＦＮを■ＦＮα、β、γの各クラス別に定
量した。ＩＦＮα、β、Ｔの定量は前述の間材らの方法
に従い抗ＩＦＮα、β、α＋βを用いて行った。

第１図にＬＰＳ投与１．２．３．４．６．８時間後のマ
ウス血清中に誘起されるＩＦＮを各クラス別に測定した
結果を示した。ＩＦＮβはＬＰＳで刺激１時間後より誘
起され、２時間後にピークに達し、４時間後に消えた。

ＩＦＮαは刺激３時間後にピークに達し、６時間後まｔ
誘起されていた。さらにＩＦＮγは刺激３時間後から誘
起され、６時間後にピークとなり、８時間後まで認めら
れたが、ＩＦＮγの活性はＩＦＮα、βに比べると　−
弱かった。

試験例３ Ｎｏｃａｒｄ　ｉａ■石１より抽出される脂肪酸エステ
ルであるトレハロース−６，６°−シミコレートおよび
フルクトース−６−ミコレートのリポソーム製剤を実施
例１に示した方法で作製し、１群３匹のマウスに静脈内
投与した。投与２週間後にＬＰＳを静脈内投与して刺激
し、刺激２時間後に採血し、血清中に誘起さたＩＦＮを
調べた。陽性対照としてＧａＧＭのリポソーム製剤を用
いた。

Ｎ、　ｒｕｂｒａ由来トレハロース−６，６゛−シミコ
レ−）（ＮｒＴＤＭ）をマウス１匹当た９Ｓ００μｇリ
ポソーム製剤として投与した場合、同用量ＧａＧＭを投
与した場合はど強くはないが、１６６７単位／ｍｌのＩ
ＦＮが誘起された。しかし、ＬＬ■−加１由来フルクト
ース−６−ミコレート（ＮｒＦＭ）はマウス１匹当た９
Ｓ００μｇ投与した場合、はとんどＩＦＮは誘起されな
かった。またこの実験系において、ＬＰＳで刺激し、採
血後のマウスより牌臓を摘出し、重量を測り、肉芽腫形
成能の指標として用いられるマウス体重光たりの牌重量
である牌インデックスを各々の脂肪酸エステル別に算出
すると、ＧａＧＭでは１．７６±０．０６、ＮｒＴＤＭ
では１．０１±０．２６、ＮｒＦＭでは０．５８±０．
０４でこの牌インデックスとＩＦＮの誘起値との相関性
があった（第４表参照）。一般に牌インデンクスが大き
い脂肪酸エステルはＩＦＮ誘起の第一次作用が強いと思
われる。

第４表 各脂肪酸ＸスＤの第一次ＩＦＮ誘起作用と牌インデック
ス第一次　　　　投与量　　［ＦＮ量烏）　　　　牌誘
起剤　（ｎ／リポソーム／マウス）（単位／ｍｌ）　　
　インデンクスＧａＧＭ　　　　３００　　　　４０９
５　　　　１．７６　＋　０．０６ＮｒＴＤＭ　　　３
００　　　　１６６７　　　　１．０１　　±０．２６
Ｎ　ｒ　Ｆ　Ｍ　　　　３００　　　　　６４　　　　
０．５Ｂ　±０．０４５１　　　　０．５６　±０．０
３ １）各脂肪酸エステルで第−次誘起後、１２日回定ＬＰ
Ｓをマウス１匹当た９Ｓ５μｇ静脈内投与し、２時間に
採血した血清中のＴＦＮを測定した。

試験例４ ＧａＧＭをマウス１匹当た９Ｓ００μｇリポソーム製剤
を静脈内投与して第一次誘起したマウスにＧａのクロロ
ホルム／メタノール混液で遊離脂質をとり除いた残渣か
ら９０％フェノールと水との混液（１：ｌ）で水層部分
に抽出された両親媒性物質を注射用生理食塩液に熔解し
、所定の用量を静脈内投与した。投与２時間に採血して
、血清中に誘起されるＩＦＮを測定し、その結果を第５
表に示した。

（以下余白） 第５表に示したように、ＧａＧＭを静脈内投与して第一
次誘起（Ｐｒｉｍｉｎｇ）　したマウスにＧａ由来の両
親媒性物質を静脈内投与し、第二次誘起（１１−ｃｉｔ
ｉｎｇ）　Ｌ／た場合ＬＰＳにそれほど劣らない強さの
ＩＦＮが誘起された。しかも、ＧａＧＭを第一次誘起し
た後、ＬＰＳを２５μｇ投与したマウスは、ＬＰＳを投
与後、運動量が低下し、９０分を過ぎると死亡するマウ
スがあり、２時間を経過すると半数は死亡し、３時間に
至るまでに全マウスは死亡したが、Ｇａ由来の両親媒性
物質では４００μｇ投与しても投与後４時間に到るまで
マウスの死亡は観察されなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図はＬＰＳ投与１．２．３．４．６．８時間後のマ
ウス血清中に誘起されるＩＦＮを各クラス別に測定した
結果を示すグラフである。 図中、・はＩＦＮαを、○はＴＦＮβを、ムはＩＦＮγ
を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 単糖類または二糖類の脂肪酸エステルおよび抗酸菌から
   抽出されうる両親媒性物質から選ばれる少なくとも一種
   を有効成分とするインターフェロン誘起剤。