JPS61207324A - リポソ−ム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はショ糖脂肪酸エステルから成る生体膜類似の脂
質二分子膜構造と機能を有するリポソームに関する。

（従来の技術） 従来、卵黄レシチンや大豆油レシチンとそれらの構成成
分であるリン脂質、さらに合成レシチンが水中で２５０
λ〜ｌ０ＪＬの大きさの閉鎖小胞体（ベシクル）、すな
わち生体膜類似の脂質二分子膜構造と機能を有する構造
体であるリポソームを形成することが知られている。こ
うしたリポソームは、超マイクロカプセル材料、膜素材
（センサー等）及び反応場（光化学反応や酵素反応等）
などとして多方面にわたって応用が試みられている０例
えば薬剤や酵素を封入した超マイクロカプセル材料とし
ては、インシュリン、ヘパリン、ビタミンＫ、コルコス
テロイド及び各種の抗がん割等、水溶性及び油溶性の薬
剤等をこれらリポソームに封入し、徐放性の新剤型等と
して応用すべく研究が進められている。

ところで、レシチンから成るリポソームは肝臓、肺臓及
びリンパ節などに集積する傾向があるが、スルファチド
の添加により血液脳関門透過性のリポソームが得られ、
これにＤ−グルコースオキシダーゼを封入すれば先天的
酵素欠陥症の治療に有効であることが知られている。さ
らにヘモグロビンや鉄（ＩＩ）ポルフィリンをリポソー
ムに封入した人工赤血球なども提案されている。また、
がん細胞と反応するモノクロナール抗体をレシチンリボ
ソームの表面に結合させるとともに抗がん剤を保持させ
てがん細胞への指向性を持つ新剤型の開発が行われてい
る。また、リポソームの免疫学への応用も進められ血清
中の抗体価測定や診断薬などとして使用することが試み
られている。

（発明が解決しようとする問題点） リポソーム形成能を有する新材料として、リン脂質以外
にもジ長鎖アルキルジメチルアンモニウムクロリドのよ
うなジアルキル型カチオン界面活性剤の他、ジまたはポ
リアルキル型の各種カチオン、アニオン、非イオン及び
両性界面活性剤が開発されている。

しかし、これらのリポソームは化学合成薬品なので薬剤
のキャリアー（Ｄｒｕｇ　Ｃａｒｒｉｅｒ）等の生体に
関わる用途には使用できない。

一方、レシチンは生物の生体！！成分なので安全性には
ほぼ問題がないが、リポソーム等の微粒子製剤とした場
合の酸化安定性などの化学的安定性や生物的安定性、さ
らにコロイド化学的安定性に欠け、また臭気を有すると
いう欠点がある。また前記のように微粒子製剤化した場
合肝臓、肺臓及びリンパ節などに集積するなど特定の臓
器集積性を示す、それ故、組織指向性等レシチンと全く
異なる性向を有するリポソーム新材料の開発が待たれて
いた。

（問題点を解決するための手段） このような事情に鑑み、本発明者らは従来の欠点を克服
した新規なリポソーム材料を開発するため鋭意研究を行
った結果、意外にもショ糖のポリ脂肪酸エステルを壁膜
として安定なリポソームを形成、させることができ、該
リポソームに薬剤を封入することが可能であり、しかも
毒性を示さないなど極めて安全性が高いのでドラッグキ
ャリア用の超マイクロカプセル材料として好適であるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、ショ糖の脂肪酸エステルからなる壁
膜を有して成ることを特徴とするリボ。

ソームを提供するものである。

本発明においてショ糖脂肪酸エステルとしてはショ糖ポ
リ脂肪酸エステル、特にジエステルが好ましい、ショ糖
ジ脂肪酸エステルを構成する脂肪酸としては通常炭素原
子数８〜２２のものが用いられ、好ましくは炭素原子数
ｌＯ〜１８の飽和もしくは不飽和の高級脂肪酸が用いら
れる。この場合ジエステルとしては必ずしも高純度品で
ある必要はなく、ショ糖脂肪酸のモノもしくはトリエス
テルとの混合物も使用可能である。ジエステル含量が２
０重量％以上であればよい。

本発明のリポソームの形成方法は、特に制限はなく、従
来公知の方法を採用できる。このような方法の詳細は例
えば、菊池寛、井上圭三、細胞工学、ヱ、１１３６　（
１９８３）に記載されている。

このリポソームの形成方法を述べると、水中でラメラ液
晶を形成するような二鎖型界面活性剤の中には、条件に
より水中で二分子膜構造を有する閉鎖小胞体が安定系と
なるものがある。このようなものの代表例がリン脂質で
ある。したがって、水中でリン脂質分子（本発明の場合
はショ糖脂肪酸エステル）が並びやすいような条件を整
えてやると速やかにもつれやほつれのない整然とした構
造の閉鎖小胞体を形成する。このような閉鎖小胞体の調
製法には、ポルチックスイング法や超音波法の他、プレ
ベシクル法、エタノール注入法。

フレンチプレス法及びコール酸除去法などがある。

リポソームの調製において、まずショ糖脂肪酸エステル
の薄膜を形成するが、有機溶媒としては、低沸点の良溶
媒ならば何でも使用できるが、通常クロロホルム・メタ
ノール混合溶媒が好都合である。

次いで、リポソーム形成に際し使用されるショ糖脂肪酸
エステルの濃度は、水に対し５〜１００ｍ　Ｍ　／皇が
よい。

その他の製造条件としては当該糖エステルは非イオン性
なのでｐＨや共存する無機塩などの影響を受けないが、
調製時に緩衝液を用いた時、その後はすべてこの緩衝液
と等張の溶液を用いる必要がある。またポルテックスや
超音波処理に際しては相転移温度以上の温度で行わねば
ならない。

（発明の効果） 本発明のリポソームは天然物由来の物質から成る壁膜を
有し生体安全性が高く、臭味がなく、化学的安定性、生
物的安定性さらにはコロイド化学的安定性に優れる。ま
た、このリポソームにおいては適宜に封入物の徐放性を
制御でき、水溶性、油溶性の薬剤等を封入した徐放性新
剤型として。

また超マイクロカプセル材料や生体膜類似の反応場など
として好適である０本発明のリポソームは消化液によっ
ては破壊されず薬剤等の体内における安定保護に好適で
あり、薬剤による副作用の軽減を図ることができる。さ
らに本発明のリポソームはレシチンからなるものとは異
なり、肝臓集積性を示さない。

（実施例） 次に本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明する。な
お、以下の例中特にことわらない限り組成を表す％は重
量％を意味する。

実施例１ 純シヨ糖ジラウリン酸エステル１０．８ｍｇを５０ｍｊ
ｌ容ナス型フラスコに取り、クロロホルム・メタノール
混合溶媒（容積比４対１）５ｍ文を加えて溶解させた。

つぎに、このナス型フラスコをロータリーエバポレータ
ーに接続して溶剤をゆっくり蒸発させることによりフラ
スコの内壁にシヨ糖ジラウリン酸エステルの薄膜を張っ
た後、ナス型フラスコをデシケータ−に入れ減圧下１時
間乾燥した。この後、蒸留水３ｍＪ１を加え、６５℃に
加温しながら２０分間ポルテックスミキサーにて振盪し
てやや濁った水懸濁液を得た。フラスコ底部には凝集物
が見られた。この原液を親木化処理したカーボングリッ
ド上に付着させた後、２％酢酸ウラニル水溶液中にグリ
ッドを２分間浸漬することによりネガティブ染色したも
のを日立ＨＵ−１２Ａ型透過型電子顕微鏡を用いて３〜
１５万倍で観察するとおよそ０．１〜３ＪＬの多数の閉
鎖小胞体（ベシクル）すなわち、リポソームが観察され
た。コールタ−Ｎ−４サブミクロンパーチクルアナライ
ザーによる測定法では平均粒子径は、Ｃｕｍｕｌａｎｔ
法で４３４ｎｍ、ヒストグラム法（ＳＤＰ法）で４５３
　ｎｍテあツタ。

なお、高圧セルを用いてＤＳＣ測定を行うと６６．０℃
に強い吸熱ピークが見出された。

なお、純シヨ糖ジラウリン酸ジエステル１１．３ｍｇを
熱水循環ジャケット付の保温容器に入れ前記のクロロホ
ルム・メタノール５ｍｌに溶解し、水３ｍｌを加えて６
０℃に加温しながら３分間超音波処理し、溶媒を蒸発さ
せた後、ポルテックスをかける方法（逆相蒸発法）によ
っても同様のリポソームの形成が認められた。この時も
やはりフラスコ底部に凝集塊が認められた。

実施例２ ショ糖ラウリン酸モノエステル３０．２％、ジエステル
３９．３％、トリ以上のエステル３０．５％（脂肪酸純
度はラウリン酸として９９．４％）から成るショ糖ラウ
リン酸混合エステル１００１００ｍｇＱ１００容ナス型
フラスコに入れ、クロロホルム・メタノール混合溶媒１
０ｍ１を加えて溶解し、水１０ｍ１を加えて超音波処理
するなど実施例１の後段と同様にして逆相蒸発法により
リポソームを形成させた。酢酸ウラニルによりネガティ
ブ染色して電子顕微鏡で観察したところ、直径Ｏ０１〜
３牌のリポソームの生成を認めた。また、生成したリポ
ソーム懸濁液には沈殿を生じないので実施例１の純ショ
糖ジエステルよりもコロイド化学的に安定であることが
分る。なお、本例で使用したショ糖ラウリン酸混合エス
テルの粉末はＤＳＣ［定により４４．１”０に明瞭な吸
熱ピークが見出された。これに対して上記の懸濁液を高
圧セルに入れてＤＳ（Ｊｌ定を行うと７６．３℃に吸熱
ピークが見出された。

実施例３ ショ糖ラウリン酸モノエステル３０．２％、ジエステル
３９．３％、トリ以上のエステル３０．５％（脂肪酸純
度はラウリン酸として９９．４％）から成るショ糖ラウ
リン酸混合エステル４０　ｍ　ｇを１００＋ｎＱ容ナス
型フラスコに取り、実施例１と同様にしてフラスコ内壁
に膜を張った。この後、ＰＢＳ緩衝液（Ｎａ　Ｈ２Ｐ　
Ｏ４・１２Ｈ２０２，９ｇ、ＫＨ２ＰＯ４０，２ｇ、Ｍ
ＣＩ　　０．２ｇ、ＮａＣＪｌ　　８．Ｏｇを１文の蒸
留水に溶解して調蜘した。ｐＨ７，２）５ｍｇとＯ，１
Ｍ５．６−ジカルポキシフルオレツセン（以下ＣＦとい
う）１ｍｇを入れて６０℃に加温しながらポルチックス
イングに付した。

生成した水懸濁液を冷凍遠心機を用いて４℃にて１５０
００ｒｐ■で２θ分間遠心分離にかけた。上澄を除き、
沈殿物をＰＢＳ緩衝液で洗い流し、さらにＰＢＳ緩衝液
を加えてかきまぜた後再び遠心した。この操作を４回く
り返してリポソーム外水相のＣＦを除き、沈殿物にＰＢ
Ｓ緩衝液を加えて２℃見の原液を得た。

つぎに、リポソーム内水□相にＣＦが封入されたことを
確認するためにこの中から１００ｐｌを取ってＰＢＳｌ
ｓ衝液を加えて３ｍｇとしたもの（対照）と、原液１０
０ｇ１に１０％トリトンＸ−１００（ポリオキシエチレ
ンイソオクチルフェニルエーテル）水溶液５００ＩＬｉ
を加え、さらにＰＢＳｐ衝液を加えて３ｍｊｌとしたも
の（内水相から流出したＣＦの検定試料）とを調製し、
蛍光強度の測定を行ったところ（励起光４９０ｎｍとし
、５２０ｎｍのＣＦの極大吸収波長での蛍光強度を測定
した０両者の蛍光強度に差があればリポソームの内水相
中にＣＦが封入されたことを示す。）、木実験によって
内水相にＣＦのｏ、１９ＪＬＩｌｏｌが封入されている
ことが確認できた。この測定の原理はリポソーム内水相
に封入されている場合はＣＦ’が内水相内に濃厚に存在
するために５２０ｎｍのＣＦの特性吸収が観察されない
のに対して、リポソームが破壊されることにより洩れ出
したＣＦが希薄であるため５２０ｎｍでの蛍光が観察さ
れることを利用したものである。

さらに、前記のリポソーム懸濁液を１日放置した後、同
様に蛍光強度の測定を行って同様の結果を得たが、経時
的にリポソーム内水相のＣＦが外部へ洩れ出すことが認
められた。

実施例４ 実施例２と同じ組成の混合ショ糖ラウリン酸エステル４
０ｍｇとコレステロール１１　、４ｍｇを１００ｍＪＬ
容ナス型フラスコに取り（モル比２対ｌ）、クロロホル
ム・メタノール混合溶媒を加えて溶−させた後、ＰＢＳ
緩衝液５ｍＪｌと０．１Ｍ　　ＣＦｌＭを加えてポルテ
ックス法によりリポソーム懸濁液を得た。実施例３と同
様に遠心した後沈殿物の２ｍＪｌ懸濁液を調製した。実
施例３と同様にして、リポソーム内水相に封入されたＣ
Ｆ量を求めたところ、ＣＦの保持量は０．３２１ＬＭで
あった。また、６日間経過後も封入されたＣＦはリポソ
ーム外に洩れ出されなかった。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ショ糖の脂肪酸エステルからなる壁膜を有するこ
   とを特徴とするリポソーム。
2. （２）ショ糖の脂肪酸エステルがジ脂肪酸エステルを含
   有する特許請求の範囲第１項記載のリポソーム。