JPH0342080B2

JPH0342080B2 -

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Publication number: JPH0342080B2
Application number: JP62083140A
Authority: JP
Priority date: 1987-04-04
Filing date: 1987-04-04
Publication date: 1991-06-26
Also published as: JPS62259594A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、α−グリコシルグリチルリチンの製
造方法に関し、更に詳細には、グリチルリチンと
澱粉質とを含有する水溶液にシクロデキストリン
グルカノトランスフエラーゼ（EC2.4.1.19）を作
用させてα−グリコシルグリチルリチンを生成せ
しめ、これを採取することを特徴とするα−グリ
コシルグリチルリチンの製造方法に関する。グリチルリチン（Glycyrrhizin）は、豆科の多
年生植物甘草（Licorice）、（Glycyrrhizaglabra
Linne´ var.glandulifera Regal et Herder，
Glycyrrhiza uralensis Fishey）の根およびスト
ロン（stolon）を水抽出して製造される甘味物質
で、古来より甘味料、医薬品などとして広く利用
され、その構造は、次式に示すグリチルリチン酸
（Glycyrrhizic acid）又はその塩である。グリチルリチンは、砂糖などの糖類甘味料と比
較して一般に次の欠点を有している。 (1) 甘味以外に苦味、渋味、えぐ味などの嫌味
や、薬品臭を有しており、そのままでは到底甘
味を楽しめるものではない。 (2) 甘味が砂糖よりもはるかに遅れて現われ、そ
の甘味が前記の嫌味とともに後味として長く尾
を引き、不快感を与える。 (3) 水溶液を酸性側にすると、沈澱を生じたり、
ゲル化したりして、低PH食品に使用しにくく、
調味料として用途が制限されている。 (4) グリチルリチン水溶液は、攪拌、濃縮、煮つ
めなどにより発泡しやすく、必要に応じて消泡
剤を使用するなどその取り扱いに苦心してい
る。グリチルリチンのこれら欠点を改良するため
に、例えば特公昭49−7227号公報では、クエン酸
ナトリウムをグリチルリチンの30％乃至500％添
加して混合使用することによりグリチルリチンの
呈味を改善することを提案し、また、特公昭43−
17721号公報では、甘草の水抽出物にアルカリ金
属塩類および澱粉分解物を加えて加熱することに
より、酸性下での沈澱やゲル形成を防止すること
を提案し、更に、特開昭50−29777号公報では、
酸性下でのグリチルリチンの使用に際し、グルコ
ノデルタラクトンとアルカリ金属塩類とを併用す
ることによりグリチルリチンの沈澱やゲル形成を
防止することを提案している。しかしながら、こ
れら提案においてもその改良はなお不充分である
ことが判明した。本発明者等は、グリチルリチンの前記欠点を解
消することを目的に鋭意研究した。その結果、グリチルリチン分子にα−グルコシ
ル残基が等モル以上結合したα−グリコシルグリ
チルリチンが、従来のグリチルリチン製品とは全
く違つて、 (1) 嫌味、薬品臭がなく、まろやかな甘味を呈す
る。 (2) 甘味が早く現われ、後味として長く尾を引か
ない。 (3) 酸性下においても沈澱形成、ゲル形成が極度
に抑えられる。 (4) 泡立ちが抑制され、取り扱いが容易となる。などの極めて優れた性質を有していることを見い
だし、これが飲食物等の甘味付け、呈味改良に好
適であることを確認して、本発明を完成した。本発明でいう飲食物等とは単に飲料および食品
だけでなく、味覚刺激を味わうことのできる物品
全般を意味し、例えば酒類、清涼飲料などの飲料
類、甘味料などの調味料、菓子、漬物などの食品
類、飼料、餌料類、リツプクリーム、歯磨などの
化粧品類、うがい薬、内服薬などの医薬品類など
を意味する。本発明でいうα−グリコシルグリチルリチン
は、グリチルリチン分子にα−グリコシル残基が
等モル以上結合したα−グリコシルグリチルリチ
ンを含有しておればよい。本発明のα−グリコシルグリチルリチンを製造
する方法としては、グリチルリチンと澱粉質とを
含有する水溶液にシクロデキストリングルカノト
ランスフエラーゼ（EC2.4.1.19）を作用させる方
法が、安価に大量生産できるので好都合である。以下、この製造方法をより詳細に説明する。シクロデキストリングルカノトランスフエラー
ゼの反応に使用するグリチルリチンは、グリチル
リチン酸又はその塩を含有し、α−グリコシルグ
リチルリチンを生成するものであればよい。従つ
て、高度に精製されたグリチルリチン製品だけで
なく、甘草からのグリチルリチンを含有する粗抽
出物であつてもよい。本発明に用いる澱粉質としては、シクロデキス
トリングルカノトランスフエラーゼの基質とな
り、そのα−グリコシル残基の１又は２分子以上
がグリチルリチン分子に転移されα−グリコシル
グリチルリチンを生成しうるものであればよく、
通常、アミロース、アミロペクチン、澱粉だけで
なく、例えばシクロデキストリン、DE1〜50程度
の澱粉液化物、澱粉糖化物などの澱粉部分加水分
解も好んで用いられる。また、原料の澱粉は、甘
藷、馬鈴薯などの地下系澱粉であつても、米、小
麦、コーンなどの地上系澱粉であつてもよく、更
に粗グリチルリチンなどに共存している甘草由来
の澱粉であつてもよい。シクロデキストリングルカノトランスフエラー
ゼは、例えば、特開昭47−20373号公報、特開昭
50−63189号公報、特開昭50−88290号公報、
Hans Bender，Arch.Microbiol.Vol.111，271−
282（1977）などに示されているように、バチル
ス・マセランス、バチルス・メガテリウム、バチ
ルス・サーキユランス、バチルス・ポリミキサ、
バチルス・ステアロサーモフイラスなどのバチル
ス属、クレブシーラ・ニユーモニアエなどのクレ
ブシ−ラ属などの細菌によつて生産されることが
知られており、何れも本発明に自由に用いること
ができる。また、シクロデキスリングルカノトラ
ンスフエラーゼは、必ずしも精製して使用する必
要はなく、通常は粗酵素で目的を達成することが
できる。また、シクロデキストリングルカノトランスフ
エラーゼを固定化してバツチ式で反応に繰返し利
用することも、連続式で反応に利用することも自
由にできる。シクロデキストリングルカノトランスフエラー
ゼの反応条件は、グリチルリチンと澱粉質とを含
有する水溶液にシクロデキストリングルカノトラ
ンスフエラーゼを反応させることができればよ
い。通常、グリチルリチンを水に溶解して反応液中
の濃度を約0.1〜25w／ｗ％とし、澱粉質の濃度
を約１〜50w／ｗ％とすればよく、グリチルリチ
ンに対する澱粉質の比率は固形物当り約0.5〜500
倍の範囲が好ましい。反応液のPHと温度はシクロデキストリングルカ
ノトランスフエラーゼが作用してα−グリコシル
グリチルリチンを生成できればよく、通常PH３〜
10、温度20〜80℃の範囲から選ばれる。また、甘草からグリチルリチンを抽出する際
に、澱粉質を含有する水溶液で抽出すれば、夾雑
物の混入が比較的少ない状態で高収率に抽出で
き、次いで、この抽出液に直接または濃縮した後
にシクロデキストリングルカノトランスフエラー
ゼを作用させてα−グリコシルグリチルリチンを
生成させてもよい。この際、抽出時にシクロデキストリングルカノ
トランスフエラーゼを共存させ、抽出と酵素反応
とを並行して行ない抽出の促進と、抽出、反応に
要する時間の短縮を計ることもできる。これらの方法によれば、比較的夾雑物の混入の
少ない状態でα−グリコシルグリチルリチンを含
有する製品が甘草から直接製造することができる
ので極めて有利である。また、シクロデキストリングルカノトランスフ
エラーゼの作用によつて高分子のα−グリコシル
残基を有するグリチルリチンを生じる場合には、
必要ならば、さらにα−アミラーゼ、β−アミラ
ーゼなどを作用させ低分子のα−グリコシル残基
を有するグリチルリチンに変換し、その粘度、呈
味などを改善して利用することも自由である。本発明は、目的によつては、反応液そのままで
もα−グリコシルグリチルリチン製品として使用
できるが、必要に応じて反応後に酵素を加熱失活
させた後、ケイ酸アルミン酸マグネシウム（例え
ば、富士化学工業株式会社製、商品名ノイシリ
ン）、マグネシア系吸着剤（例えば、北海道曹達
株式会社、商品名Ｍ−511）などで有色夾雑物を
吸着除去し、その非吸着部分を採取してα−グリ
コシルグリチルリチン製品とするか、更に、これ
を濃縮してシラツプ状のα−グリコシルグリチル
リチン製品、或いは、乾燥粉末状のα−グリコシ
ルグリチルリチン製品とすることもできる。必要
ならば、Ｈ型イオン交換樹脂を用いて脱塩精製し
たα−グリコシルグリチルリチン製品にすること
もできる。これらのα−グリコシルグリチルリチル製品に
含まれるα−グリコシルグリチルリチンなどのグ
リチルリチン化合物と遊離の糖類とを分離する必
要がある場合には、合成吸着剤（例えば、三菱化
成工業株式会社製造、商品名HP−10、HP−20
又は、ローム＆ハース社製造、商品名アンバーラ
イトXAD−２、アンバーライトXAD−７など）
を充填したカラムに通液すれば、α−グリコシル
グリチルリチン、未反応のグリチルリチンなどの
グリチルリチン化合物は吸着され、多量に共存す
る水溶性糖類は吸着されることなくそのまま流出
する。次いで、この多孔性合成吸着剤を希アルカ
リ水、水などで洗浄した後、比較的少量の有機溶
媒と水との混合液、例えばメタノール水、エタノ
ール水などを通液すれば、まず遊離の糖類を含ま
ないα−グリコシルグリチルリチンが溶出され、
次いで通液量を増すか有機溶媒濃度を高めるかす
れば、未反応のグリチルリチンが溶出してくる。
このα−グリコシルグリチルリチン高含有溶出液
を蒸溜して、まず有機溶媒を除去し、これを適当
な濃度まで濃縮してシラツプ状高純度α−グリコ
シルグリチルリチン製品とするか、更には乾燥粉
末化して粉末状高純度α−グリコシルグリチルリ
チン製品とすることができる。このようにして得られるα−グリコシルグリチ
ルリチン製品は、従来きわめて遅かつた甘味の発
現がいちじるしく早まるため甘味度の比較は困難
であるが、最大発現時で比較すれば、使用したグ
リチルリチン固形物重量に見合う甘味度とほぼ同
程度乃至やや弱い程度である。また、その甘味の
質は、粉末状のものをそのまま口に含んでも苦
味、渋味、えぐ味などの媒味をほとんど呈するこ
となく、まろやかな甘味を呈し、残り味の切れも
よい。また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
を含有するシラツプ状製品は、酸性下においても
沈澱形成、ゲル形成が極度に抑えられ、低PH飲
料、低PH食品の甘味付け、調味などに自由に利用
できることが判明した。また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
を含有するシラツプ状製品は、グリチルリチンの
場合と比較して泡立ちがきわめて少なく、その取
り扱いの容易であることが判明した。また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
を含有する粉末状製品は、それに含まれる各α−
グリコシル化合物が互いに溶け合つたいわゆる固
溶体の粉末である。従つて、この粉末の水に対す
る溶解速度は、瞬時に溶解できる程大きく、しか
もその溶解度には際限がないので、シラツプ状か
らペースト状になる程の高濃度にも自由に溶解す
ることができる。また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
製品は、そのままで甘味付け、呈味改良などのた
めに調味料として使用できる。必要ならば、例え
ば水飴、グルコース、マルトース、異性化糖、カ
ツプリングシユガー（林原株式会社の登録商標）、
砂糖、蜂蜜、メープルシユガー、ソルビツト、マ
ルチトール、ラクチトール、ジヒドロカルコン、
Ｌ−アスパラチルフエニルアラニンメチルエステ
ル、サツカリン、グリシン、アラニン、グリチル
リチン、ステビオシド、α−グリコシルステビオ
シド、レバウデイオシドＡ等のような他の甘味料
と、またクエン酸、リンゴ酸などの有機酸又はそ
の塩、グルタミン酸、アスパラギン酸などのアミ
ノ酸又はその塩、またデキストリン、澱粉、乳糖
等のような増量剤、更には着香料、着色料等と混
合して使用することも自由である。また、α−グリコシルグリチルリチン製品の粉
末品は、そのまま又は必要に応じて増量剤、賦型
剤と混合して顆粒状、球状、タブレツト状等に成
型して使用することもでき、液状品は使用上便利
なように、その濃度を調節することもできる。 α−グリコシルグリチルリチン製品の甘味度
は、前記したように反応に用いた固形物重量に見
合う甘味度とほぼ同程度乃至やや弱い程度である
ことから、反応に用いるグリチルリチンと澱粉質
との固形物重量当りの比率によつて変つてくる。グリチルリチンに対する澱粉質の比率が約100
倍程度である場合に得られる製品の重量当りの甘
味度は一般に砂糖と同程度である。この比率が約100倍を越える場合に得られる製
品は、重量当りの甘味度が一般に砂糖よりも低く
なる。従つて、この種のα−グリコシルグリチル
リチン製品は濃厚味、粘稠性、重量感等のテクス
チヤーを飲食物、嗜好物、医薬品等に与えること
ができる減甘効果を持つ甘味料として利用でき
る。これとは逆に、この比率が約100倍未満の場合
に得られる製品は、重量当りの甘味度が一般に砂
糖よりも高くなる。そして、この比率が低くなれ
ばなる程、その甘味度はより高くなり、α−グリ
コシルグリチルリチン製品から遊離の糖類を分離
除去するときには、砂糖の甘味度の約50〜100倍
にも高められる。このような高い甘味度の製品で
甘味付けする場合には、必要甘味に対する製品の
使用量が砂糖よりも大幅に低下することから、甘
味付けされた飲食物、嗜好物等のカロリーを低下
させることができる。換言すれば、本発明のα−
グリコシルグリチルリチン製品は、糖尿病者、肥
満者等のカロリーを制限している人等のための低
カロリー製品として、また低カロリー飲食物、低
カロリー嗜好物等いわゆる美容食、健康食、ダイ
エツト食への甘味付に利用できるのである。また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
製品は、虫歯原因菌等によつて醗酵されにくいこ
と等より虫歯を起しにくい甘味料としても利用で
きる。例えば、チユーインガム、チヨコレート、
ビスケツト、クツキー、キヤラメル、キヤンデー
等の菓子類、コーラ、サイダー、ジユース、コー
ヒー、乳酸飲料等の飲料水類等における虫歯を起
しにくい飲食物、嗜好物等への甘味付けに好適で
ある。また、うがい水や練り歯みがき等、化粧
品、医薬品等へも虫歯を懸念することなく甘味付
けできるので好都合である。更に、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
製品は酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味等の他
の呈味を有する各種の物質とよく調和し、耐酸
性、耐熱性も大きいので今まで述べたような特殊
な場合だけでなく、普通一般の飲食物、嗜好物等
への甘味付けに、また呈味改良等に自由に利用で
きる。例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味
噌、もろみ、ひしお、マヨネーズ、ドレツシン
グ、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つ
ゆ、麺つゆ、ソース、ケチヤツプ、焼肉のタレ、
カレールウー、シチユーの素、スープの素、ダシ
の素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブル
シラツプ等の各種の調味料に使用できる。また、
せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゆう、
ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリ
ー、カステラ、飴玉等の各種和菓子、パン、ビス
ケツト、クラツカー、クツキー、パイ、プリン、
バタークリーム、カスタードクリーム、シユーク
リーム、ワツフル、スポンジケーキ、ドーナツ、
チヨコレート、チユーインガム、キヤラメル、キ
ヤンデー等の各種洋菓子、アイスクリーム、シヤ
ーベツトの氷菓、果実のシロツプ漬、氷蜜等のシ
ロツプ類、フラワーペースト、ピーナツツペース
ト、フルーツペースト等のペースト類、ジヤム、
マーマレード、シロツプ漬、糖果等の果実、野菜
の加工食品類、福神漬、べつたら漬、千枚漬、ら
つきよう漬等の漬物類、ハム、ソーセージ等の畜
肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボ
コ、チクワ、天ぷら等の魚肉製品、ウニ、イカの
塩辛、さきするめ、ふぐのみりん干し等の各種珍
味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝等で製造さ
れるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、コンブ巻
等のそう菜食品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビン
詰、缶詰類、合成酒、果実酒、洋酒等の酒類、コ
ーヒー、ココア、ジユース、炭酸飲料、乳酸飲
料、乳酸菌飲料等の清涼飲料水、プリンミツク
ス、ホツトケーキミツクス、即席ジユース、即席
コーヒー、即席しるこ等即席飲食品等の各種飲食
物、嗜好物の甘味付け、呈味改良などに自由に使
用できる。また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚等の飼
育動物のために、餌料、飼料、ペツトフード等の
嗜好性を向上させる目的で使用することもでき
る。その他、タバコ、練歯みがき、口紅、リツプク
リーム、内服薬、トローチ、肝油ドロツプ、口中
清涼剤、口中香錠、うがい薬等各種固形状、ペー
スト状、液状嗜好物、化粧品、医薬品等への甘味
剤として、又は呈味改良剤、矯味剤として自由に
利用できる。さらに、α−グリコシルグリチルリチン製品を
生薬甘草と同じ薬効用途、すなわち消炎、整腸、
痰、咳止め、抗ウイルス剤などの用途にも使用
することができ、例えば咳止めシロツプ、ぜんそ
くの発作をおさえる錠剤などとして使用できる。以上述べたような飲食物、嗜好物、餌料、飼
料、化粧品、医薬品等にα−グリコシルグリチル
リチンを使用するには、その製品が完成するまで
の工程に、例えば、混和、混捏、溶解、浸漬、滲
透、散布、塗布、噴霧、注入等の公知の方法で含
有せしめることにより行なわれる。次に、本発明のα−グリコシルグリチルリチン
を実験に基づいて説明する。実験１ α−グリコシルグリチルリチンの調製１−１グリコシル転移酵素の調製バチルスステアロサーモフイラス
（Bacillusstearothermophilus）FERM−ＰNo.
2222をソリユブルスターチ2w／ｖ％、硝酸アン
モニウム1w／ｖ％、リン酸２カリウム0.1w／ｖ
％、硫酸マグネシウム・７水塩0.05w／ｖ％、コ
ーンステイープリカー0.5w／ｖ％、炭酸カルシ
ウム1w／ｖ％および水からなる殺菌した液体培
地10に植菌し、50℃で３日間通気攪拌培養し
た。得られた培養液を遠心分離して、その上清を
硫安0.7飽和で塩析し、シクロデキストリングル
カノトランスフエラーゼ（EC2.4.1.19）の活性約
80，000単位を有する粗酵素標品を得た。ここで
いう活性１単位とは、PH5.5，0.02Mの酢酸緩衝
液及び２×10^-3Mの塩化カルシウムを含む0.3w／
ｗ％のソリユブルスターチ溶液５mlに、適当に希
釈した酵素液0.2mlを加え、40℃で10分間反応さ
せた後、その反応液0.5mlをとり、0.02N−硫酸水
溶液15mlに混合して反応を停止させ、さらにこの
反応停止液に0.1Nヨウ素ヨウ化カリウム溶液0.2
mlを加えて発色させ、ついで660nmにおける吸光
度を測定して、40℃で10分間反応させることによ
りソリユブルスターチ15mgのヨウ素の呈色を完全
に消失させる酵素量をいう。１−２酵素反応精製グリチルリチン（丸善化成株式会社製造、
商品名純グリチミン）100ｇと、マルトデキスト
リン（DE30）500ｇとを水５に加熱溶解した
後、60℃に冷却すると共に、PH6.0に調整し、こ
れに前述の粗シクロデキストリングルカノトラン
スフエラーゼ標品の5000単位を加え、PH6.0、60
℃に維持しつつ24時間反応させた。この反応液を
95℃に10分間保つて酵素を加熱失活させた（この
標品は第１表の試料No.３に相当する。）後、濾過
して得た濾液を70℃以下で減圧濃縮すると共に、
乾燥して粉末品（この標品は第１表の試料No.４に
相当する。）を得た。対照品は同様に加熱溶解後、
反応工程、加熱失活工程まで経たものでその配合
組成は第１表に示す。

【表】実験２甘味の質の比較テスト予備テストから求めた甘味度から算出して、各
試料を10％砂糖水溶液に相当する甘味度の水溶液
に調製した。そして、最も劣つているものと、最
も優れているものを各１つずつ選出させ、かつ味
質について意見を求めた。 20名のパネル員で25℃の室温で行なつた。その
結果は、第２表に示す通りであつた。

【表】

【表】第２表の結果から、試料No.１、No.２の対照品
は、甘味の質が劣つており、これに対し、試料No.
３、No.４の本発明品は、甘味の質が砂糖のそれぞ
れに近く優れている。従つて、本発明のα−グリコシルグリチルリチ
ンは、従来のグリチルリチン、またはグリチルリ
チンと他の糖類との単なる混合物などとは違つ
て、嫌味がなく、まろやかな砂糖に近い甘味を有
しており、しかも残り味の切れもよいことから、
そのまま口にふくんで甘味を味わうことのできる
極めて優れた甘味料である。実験３ α−グリコシルグリチルリチンの確認実験１−２で調製した試料No.４の15ｇを水100
mlに溶解して得られる溶液を、合成吸着剤（商品
名HP−20、三菱化成工業株式会社製造）100ml
のカラムに通液した後、充分水洗いして遊離の糖
類を除去した。次いで、このカラムに50v／ｖ％
メタノール300mlを通してα−グリコシルグリチ
ルリチンなどのグリチルリチン化合物を溶出し、
濃縮、乾燥、粉砕して約2.5ｇの粉末（試料No.５）
を得た。この試料No.５は、水に極めてよく溶け、まろや
かな甘味を有する無臭、無色でほぼ中性の物質で
ある。また、酸性下においては、グリチルリチン
と比較すれば、いちじるしくゲル形成を起しにく
い物質である。また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノー
ルなどの低級アルコールには一部溶け、クロロホ
ルムやエチルエーテルには難溶性の物質である。試料No.５のKBr錠剤法による赤外線吸収スペ
クトルを図に示した。この図で840cm^-1附近の吸
収はα−結合に特有な吸収であつて、原料のグリ
チルリチンの場合には見られない吸収である。試
料No.５の一部を少量の水に溶解した溶液に市販の
結晶グルコアミラーゼ（EC3.2.1.3）を0.02M酢酸
塩緩衝溶液（PH5.0）の存在下のもとに50℃で作
用させて、経済時的にサンプリングし、薄層板
（メルク社製造、商品名Kieselgel F254）にスポ
ツトし、展開溶媒、酢酸エチル：メタノール：水
＝2.5：１：１の混合溶媒を使用して上昇法で展
開させた。これを乾燥した後、グリチルリチン化
合物を紫外線照射で確認し、更に5w／ｖ％バニ
リン、50v／ｖ％硫酸メタノール溶液からなる発
色剤を噴霧して発色させた。また、試料No.１、No.
５およびＤ−グルコースをスポツトして比較して
みた。その結果、試料No.５には、試料No.１のグリチル
リチンに相当するRf0.70附近のスポツト以外に新
たにRf0.66、Rf0.60、Rf0.57、Rf0.54、Rf0.51、
Rf0.48、Rf0.44、Rf0.40、Rf0.34および原点近く
に分離不充分なRf0.22ならびにRf0.11のスポツト
が確認できた。これらの新たなスポツトは、グリチルリチン同
様に紫外線照射による蛍光で、紫外線吸収スポツ
トとして確認され、発色剤で青色に発色した。また、試料No.５にグルコアミラーゼを作用さ
せ、経時的にサンプリングして同様にクロマト分
析したものは、反応時間とともに新しいスポツト
を示す物質が徐々に加水分解を受け、最終的に青
色のRf0.70のスポツトを示すグリチルリチンと緑
褐色のRf0.57のスポツトを示すＤ−グルコースと
になることが判明した。また、試料No.５にβ−アミラーゼを作用させ、
経時的にサンプリングして同様に薄層クロマト分
析したものは、反応時間とともにRf0.54以下の新
しいスポツトを示す物質が徐々に加水分解を受
け、最終的に青色のRf0.70のスポツトを示すグリ
チルリチン、青色のRf0.66、Rf0.60、Rf0.57、の
スポツトを示す新しい物質および緑褐色のRf0.36
のスポツトを示すマルトースとなることが判明し
た。以上の事実から、Rf0.66、Rf0.60、Rf0.57、
Rf0.54、Rf0.51、Rf0.48、Rf0.44、Rf0.40、
Rf0.34、Rf0.22、Rf0.11などを示す新しい物質
は、グリチルリチンにＤ−グルコースが等モル以
上α−グルコシド結合しているものと判断され
る。従つて、試料No.５は、シクロデキストリング
ルカノトランスフエラーゼによつて新らたに生じ
たRf0.66、Rf0.60、Rf0.57、Rf0.54、Rf0.51、
Rf0.48、Rf0.44、Rf0.34、Rf0.22、Rf0.11を示す
新物質と少量の反応のグリチルリチンとの混合物
である。また、試料No.５と同様にして調製した試料にβ
−アミラーゼを作用させたものを用いて、酢酸エ
チル：メタノール：水＝2.5：１：１の混合溶媒
を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフイー
を行つて、前述の薄層クロマトグラフイーで
Rf0.66、Rf0.60、Rf0.57のスポツトを示す新物質
の混合物を分離し、乾燥して粉末を得た。本粉末は、試料No.５と同様に水によく溶け、ま
ろやかな甘味を有する無臭、無色でほぼ中性の物
質である。また、酸性下においては、グリチルリ
チンと比較すればいちじるしくゲル形成を起しに
くい物質である。また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノー
ルなどの低級アルコールには一部溶け、クロロホ
ルムやエチルエーテルには難溶性の物質である。また、本粉末のKBr錠剤法による赤外線吸収
スペクトルを求めたところ、試料No.５の場合と同
様にα−結合に特有な840cm^-1附近の吸収が見ら
れた。また、これら新物質は、豚の肝臓から抽出し、
部分精製したα−グルコシダーゼによつても同様
にグリチルリチンとＤ−グルコースとに加水分解
されることが判明した。このことから、これら新
物質は、人や動物が摂取するとき、体内でグリチ
ルリチンとＤ−グルコースとに容易に分解される
ことを示唆している。また、試料No.５は、実験２で使用した試料No.３
およびNo.４と同様に、嫌味、薬品臭なくまろやか
な甘味で甘味の発現も早く、残り味の切れもよ
く、砂糖に近い優れた甘味を有していることか
ら、本発明のα−グリコシルグリチルリチン製品
として好適である。従つて、本発明のグリチルリチンの欠点を解消
するという目的は、グリチルリチンと澱粉質とを
含有する水溶液にシクロデキストリングルカノト
ランスフエラーゼを作用させてα−グリコシルグ
リチルリチンを生成させて、グリチルリチンをα
−グリコシルグリチルリチンに変換せしめること
によつて達成されるものと判断される。次に２〜３の実施例を述べる。実施例１バチルス・メガテリウムFERM−Ｐ No.935
を、実験１−１の培地５に植菌し、28℃で３日
間通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離して
得た上清に硫安を0.7飽和にし、更に遠心分離し
て沈澱を採取した。この沈澱は、実験１−１に記載する活性の測定
方法でシクロデキストリングルカノトランスフエ
ラーゼ（EC2.4.1.19）を30万単位含んでいた。コーンスターチを30w／ｗ％、PH6.0で市販の
液化酵素剤を澱粉固形物当り0.2％加え、温度95
〜98℃で連続液化し、90℃で反応を進めてDE20
になつた時に液化酵素を加熱失活させた。この液
化液に、精製グリチルリチン（丸善化成株式会社
製造、商品名純グリチミン）を固形物重量でグリ
チルリチン：澱粉部分加水分解物の比が１：３に
なるように溶解して50℃に冷却し、これに上記の
シクロデキストリングルカノトランスフエラーゼ
を原料澱粉固形物グラム当り10単位の割合で加
え、50℃、PH5.5で48時間反応させた。反応液の
酵素を加熱失活させて濾過した後、濾液にケイ酸
アルミン酸マグネシウム（富士化学工業株式会社
製造、商品名ノイシリン）を原料澱粉固形物当り
0.3％加え、徐々に攪拌しつつ30分間保つた後、
濾過し、次で減圧濃縮、乾燥、粉末化して、粉末
状のα−グリコシルグリチルリチン製品を固形物
収率約95％で得た。本製品は、吸湿性が少なく、取扱いが容易であ
る。また、水に対する溶解速度はきわめて大き
く、冷水に容易に溶け、また溶解量も非常に大
で、本製品がペースト状になる程の高濃度にまで
容易に溶けた。本製品は、固形物当りの甘味度が砂糖の約25倍
であつて、甘味の質もまろやかで残り味の切れも
よい。本製品は、甘味付または呈味改良を必要と
するあらゆる場合に利用できるが、中でも低う蝕
性甘味料、低カロリー甘味料などとして好適であ
る。実施例２グリチルリチン酸三ナトリウム（東京化成株式
会社製造）100ｇとβ−シクロデキストリン500ｇ
とを水５に加熱溶解し、60℃に冷却してPH5.5
に調整し、これに実験１の方法で調整したシクロ
デキストリングルカノトランスフエラーゼをβシ
クロデキストリン固形物グラム当り100単位の割
合で加え、60℃、PH5.5に24時間保つた。反応液
の酵素を加熱失活させて濾過した後、濾液にマグ
ネシア系吸着剤（北海道曹達株式会社製造、商品
名Ｍ−511）２ｇを加え、徐々に攪拌しつつ30分
間保ち、次いで濾過し得られた濾液を、合成吸着
剤（ローム＆ハース社製造、商品名XAD−７）
４を充填したカラムに通液し、このカラムを充
分水洗して遊離の糖類を除去した。次いで、この
カラムに50v／ｖ％エタノール10を通してα−
グリコシルグリチルリチンを溶出し、濃縮、乾燥
して約150ｇの粉末状のα−グリコシルグリチル
リチン製品を得た。本品を実験３の試料No.５の場合と同様に薄層ク
ロマトグラフイーで調べたところ、Rf0.70附近の
小スポツトを示すグリチルリチン以外に、新たに
Rf0.67附近、Rf0.59附近のスポツトを示す物質、
更に原点からRf0.26附近に至る分離不充分で巨大
なスポツトを示す物質などがシクロデキストリン
グルカノトランスフエラーゼによつて生成してい
ることが確認された。また、試料No.５の場合と同
様に、これら新しい物質はグルコアミラーゼによ
つてグリチルリチンとＤ−グルコースとに徐々に
加水分解されることも確認された。本製品は、固形物当りの甘味度が砂糖の約60倍
であつて、甘味の質もまろやかで、残り味の切れ
もよい。従つて、各種飲食物、嗜好物など多方面
への甘味付、呈味改良などに自由に利用できる。
また、実施例１の甘味料と同様に低う蝕性甘味
料、低カロリー甘味料としても有利に用いること
ができる。実施例３純グリチルリチンを約25％しか含有せず黄褐色
をしたグリチルリチン粗製品（丸善化成株式会社
製造、商品名リコゲン）100ｇとマルトデキスト
リン（DE18）100ｇとを水３に加熱溶解した
後、60℃に冷却し、PH5.5に調整した。これに実
験１で調製したシクロデキストリングルカノトラ
ンスフエラーゼ標品の3000単位を加え、PH5.5、
60℃に維持しつつ44時間反応させた。この反応液
を加熱して酵素を失活させた後濾過し、濾液に実
施例２の場合に用いたマグネシア系吸着剤５ｇを
加え、徐々に攪拌しつつ20分間保ち、次いで濾過
し得られる濾液を減圧濃縮し、水分30w／ｗ％の
淡黄色液状のα−グリコシルグリチルリチン製品
を原料固形物当り約97％の収率で得た。本製品は、精製グリチルリチンを用いる場合以
上に甘味の質の改良のいちじるしいことがわかつ
た。本製品の甘味度は、砂糖の約４倍であつて各
種飲食物、嗜好物、医薬品等の甘味付、呈味改良
などに自由に利用できる。本製品の製造には、原料の粗グリチルリチンか
らの有色夾雑物の完全除去にやや難点があるが、
色にこだわらない例えば、醤油、ソース、味噌、
マヨネーズ、焼肉のたれ、スープの素などの調味
料、福神漬、沢庵漬、奈良漬などの漬物類、チヨ
コレート、ココア、チユーインガム、プリン、餡
などの菓子類、その他佃煮、珍味、塩辛、乳酸飲
料などの製造には高度に精製したグリチルリチン
を用いる場合よりも安価に大量に供給できるので
好都合である。参考例１甘味料還元麦芽糖水飴（株式会社林原生物化学研究所
製造、商品名マビツト）１Kgに実施例１の方法で
製造した粉末状のα−グリコシルグリチルリチン
製品10ｇを溶解して調製した液状甘味料は、甘味
の質がすぐれ、砂糖と同程度の甘味を有し、カロ
リーは砂糖の約１／20である。本甘味料は、低カロリー甘味料としてカロリー
摂取を制限している人、例えば肥満者、糖尿病者
などのための低カロリー飲食物、嗜好物の甘味付
に好適であり、またこのままテーブルシラツプと
しても自由に利用できる。また、虫歯原因菌によ
つて酸の生成もなく、水不溶性グルカンの生成も
ないことより、虫歯を予防する飲食物などへの甘
味付に好適である。参考例２甘味料グルコース800ｇに砂糖200ｇ、実施例２の方法
で製造した粉末状のα−グリコシルグリチルリチ
ン製品５ｇとを均一に混合して粉末化した粉末
に、少量の水をスプレーしかるく圧縮して成形
し、角砂糖様形状の甘味料を製造した。本甘味料
は、砂糖とほぼ同程度の甘味度を有すると同時
に、きわめてすぐれた甘味の質を持つていて、冷
水にも容易に溶ける。冷水に溶かしたものは、そ
のままでも清涼飲料水に好適である。本甘味料の甘味の質がすぐれているのは、これ
ら混合した三つの甘味源の相乗効果と判断され
た。参考例３甘味料実施例２の方法で製造した粉末状のα−グリコ
シルグリチルリチン製品16ｇを水200mlに溶かし
込み、これに蜂蜜１Kgを均一に混合して複合甘味
料を得た。本甘味料は、甘味度が砂糖の約２倍であつて、
甘味の質もきわめてすぐれており、蜂蜜の香りを
一段とひき立たせた。本甘味料は、美容飲料、健
康食品、ダイエツトフードなどへの甘味付や医薬
品などの矯味剤などに自由に利用できる。参考例４ハードキヤンデー還元麦芽糖水飴（商標名マビツト、株式会社林
原生物化学研究所製造）15Kgに、実施例１の方法
で製造したα−グリコシルグリチルリチン製品60
ｇを溶解した後、減圧下で水分約２％以下になる
まで加熱濃縮し、これにクエン酸150ｇおよび少
量のレモン香料と着色料とを混和し、次いで常法
に従つて成形しハードキヤンデーを得た。本品は高甘味、低カリー、低う蝕性のハードキ
ヤンデーである。参考例５チユーインガムガムベース２Kgを柔らかくなる程度に加熱溶融
し、これにラクチトール（結晶粉末）６Kg、実施
例２の方法で製造したα−グリコシルグリチルリ
チン製品160ｇ、ソルビトール（結晶粉末）１Kg
および少量のハツカ香料と着色料とを混合した
後、常法に従つてロールにより練り合わせ、成型
することによつてチユーインガムを得た。本品は
テクスチヤー、甘味ともに良好で、低カロリー、
低う蝕性のチユーインガムである。参考例６チヨコレートカカオペースト40Kg、カカオバター10Kg、麦芽
糖10Kg、乳糖５Kg、全脂粉乳20Kgおよび実施例１
の方法で製造したα−グリコシルグリチルリチン
製品１Kgを混合し、レフアイナーを通した。そし
て粒度を下げた後、コンチエに入れレシチン500
ｇを加え、50℃で二昼夜練り上げた。次いで、常
法に従い成型機に流し込み固化成型することによ
り製品とした。本品はフアツトブルーム、シユガーブルームの
恐れがなく、舌にのせた時の融け具合、風味とも
に良好で、低う蝕性のチヨコレートである。参考例７乳酸飲料 10Kgの脱脂乳を80℃で20分間加熱殺菌した後、
40℃に冷却し、これにスターター300ｇを加え35
〜37℃で10時間発酵させた。次いで、これをホモ
ゲナイズした後、実施例３の方法で製造した液状
のα−グリコシルグリチルリチン製品２Kgおよび
カツプリングシユガー２Kgを加え80〜85℃で攪拌
混合しつつ殺菌した。これを冷却した後、少量の香料を加えてビン詰
めし製品とした。本品は低う蝕性の乳酸菌飲料である。参考例８佃煮常法に従つて砂取り、酸処理して角切りしたコ
ンブ250ｇに、醤油212ml、アミノ酸液318ml、粉
飴50ｇ、プルラン１ｇおよび実施例３の方法で製
造したα−グリコシルグリチルリチン製品10ｇを
加えて煮込みつつ、更にグルタミン酸ソーダ12
ｇ、カラメル８ｇ、味淋21mlを加えて煮き上げて
昆布の佃煮を得た。本品は味、香りだけでなく、色、艷も充分で食
欲をそそる商品価値の高い製品であつた。参考例９ラツキヨウ漬生ラツキヨウ５Kgを、常法に従つて約20％食塩
水2.5に塩漬して３週間の後、水切りして得た
塩漬けラツキヨウを水2.0、氷酢酸80ml、食塩
80ｇからなる酢酸液に１ケ月間酢漬けした。得られた酢漬ラツキヨウを、更に食酢800ml、
味淋400ml、唐芥子10ｇおよび実施例２の方法で
製造したα−グリコシルグリチルリチン製品10ｇ
からなる調味液に10日間漬けて風味豊かなラツキ
ヨウの甘酢漬を得た。参考例 10 錠剤アスピリン50ｇに、麦芽糖13ｇ、コーンスター
チ４ｇおよび実施例２の方法で製造したα−グリ
コシルグリチルリチン製品１ｇを均一に混合した
後、直径12mm、20R杆を用いて１錠680mg、錠剤
の厚さ5.25mm、硬度８Kg±１Kgで打錠した。本品は、適度の甘味を有する飲み易い錠剤であ
る。参考例 11 練歯磨配合第２リン酸カルシウム 45.0％プルラン 2.75％ラウリル硫酸ナトリウム 1.5％グリセリン 20.0％ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト 0.5％防腐剤 0.05％実施例２の方法で製造したα−グリコシルグリ
チルリチン製品 0.2％水 30.0％上記の材料を常法に従つて混合し、練歯磨を得
た。本品は、適度の甘味を有しており、子供用練歯
磨として利用できる。

【図面の簡単な説明】

図は、実施例３で得た試料No.５の赤外線吸収ス
ペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶液
に、シクロデキストリングルカノトランスフエラ
ーゼを作用させてα−グリコシル残基がグリチル
リチンに等モル以上結合したα−グリコシルグリ
チルリチンを生成せしめ、これを採取することを
特徴とするα−グリコシルグリチルリチンの製造
方法。２ α−グリコシルグリチルリチンを採取するに
際し、生成されたα−グリコシルグリチルリチン
と水溶性糖類とを含有している水溶液を多孔性合
成吸着剤に接触せしめて多孔性合成吸着剤にα−
グリコシルグリチルリチンを吸着させ、その多孔
性合成吸着剤からα−グリコシルグリチルリチン
を溶出し、これを採取することを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載のα−グリコシルグリチル
リチンの製造方法。