JPS62259594A - α−グリコシルグリチルリチンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、α−グリコシルグリチルリチンの製造方法に
関し、更に詳細には、グリチルリチンと澱粉質とを含有
する水溶液にシクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼ（ＥＣ２，４゜１．１９）を作用させてα−グリ
コシルグリチルリチンを生成せしめ、これを採取するこ
とを特徴とするα−グリコシルグリチルリチンの製造方
法に関する。

クリチルリチン（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ）は、豆科
の多年生植物甘草（Ｌｉｃｏｒｉｃｅ）　、　（Ｇｌｙ
ｃｙｒｒｈｉｚａｇｌａｂｒａ　Ｌｉｎｎｅ　ｖａｒ、
　ｇｌａｎｄｕｌｉｆｅｒａ　Ｒｅｇａｌ　ｅｔＨｅｒ
ｄｅｒ、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ
　Ｆｉｓｈｅｙ）の根およびストロン（ｓｔｏｌｏｎ）
を水抽出して製造される甘味物質で、古来より甘味料、
医薬品などとして広く利用され、その構造は、次式に示
すグリチルリチン酸（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ　ａｃ
ｉｄ）又はその塩である。

グリチルリチンは、砂糖などの糖類甘味料と比較して一
般に次の欠点を有している。

（１）甘味以外に苦味、渋味、えぐ味などの嫌味や、薬
品臭を有しており、そのままでは側底甘味を楽しめるも
のではない。

（２）甘味が砂糖よりもはるかに遅れて現われ、その甘
味が前記の嫌味とともに後味として長く尾を引き、不快
感を与える。

（３）水溶液を酸性側にすると、沈澱を生じたり、ゲル
化したりして、低ｐＨ食品に使用しにくく、調味料とし
て用途が制限されている。

（４）グリチルリチン水溶液は、攪拌、濃縮、煮つめな
どにより発泡しやすく、必要に応じて消泡剤を使用する
などその取り扱いに苦心している。

クリチルリチンのこれら欠点を改良するために、例えば
特公昭４９−７２２７号公報では、クエン酸ナトリウム
をグリチルリチンの３０％乃至５００％添加して混合使
用することによりグリチルリチンの呈味な改善すること
を提案し、また、特公昭４３−１７７２１号公報では、
甘草の水抽出物にアルカリ金属塩類および澱粉分解物を
加えて加熱することにより、酸性下での沈澱やゲル形成
を防止することを提案し、更に、特開昭５０−２９７７
７号公報では、酸性下でのグリチルリチンの使用に際し
、グルコノデルタラクトンとアルカリ金属塩類とを併用
することによりグリチルリチンの沈澱やゲル形成を防止
することを提案している。しかしながら、これら提案に
おいてもその改良はなお不充分であることが判明した。

本発明者等は、グリチルリチンの前記欠点を解消するこ
とを目的に鋭意研究した。

その結果、グリチルリチン分子にα−グルコシル残基が
等モル以上結合したα−グリコシルグリチルリチンか、
従来のグリチルリチン製品とは全く違って、 （１）嫌味、薬品臭がなく、まろやかな甘味を呈する。

（２）　ｌｔ味が早く現われ、後味として長く尾を引か
ない。

（３）酸性下においても沈澱形成、ゲル形成か極度に抑
えられる。

（４）泡立ちか抑制され、取り扱いが容易となる。

などの極めて優れた性質を有していることを見いたし、
これが飲食物等の甘味付け、呈味改良に好適であること
を確認して、本発明を完成した。

本発明ていう飲食物等とは単に飲料および食品だけてな
く、味覚刺激を味わうことのできる物品全般を意味し、
例えば酒類、清涼飲料などの飲料類、甘味料などの調味
料、菓子、漬物などの食品類、飼料、餌料類、リップク
リーム、歯磨などの化粧品類、うがい薬、内服薬などの
医薬品類などを意味する。

本発明でいうα−グリコシルグリチルリチンは、グリチ
ルリチン分子にα−グリコシル残基か等モル以上結合し
たα−グリコシルグリチルリチンを含有しておればよい
。

本発明のα−グリコシルグリチルリチンを製造する方法
としては、グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶液
にシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（Ｅ
Ｃ２，４，１，１９）を作用させる方法が、安価に大量
生産できるので好都合である。

以下、この製造方法をより詳細に説明する。

シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼの反応
に使用するグリチルリチンは、グリチルリチン酸又はそ
の塩を含有し、α−グリコシルグリチルリチンを生成す
るものであればよい。従って、高度に精製されたグリチ
ルリチン製品だけでなく、甘草からのグリチルリチンを
含有する粗油出物であってもよい。

本発明に用いる澱粉質としては、シクロデキストリング
ルカノトランスフェラーゼの基質となり、そのα−グリ
コシル残基の１又は２分子以上がグリチルリチン分子に
転移されα−グリコシルグリチルリチンを生成しつるも
のであればよく、通常、アミロース、アミロペクチン、
澱粉だけでなく、例えばシクロデキストリン、ＤＥ１〜
５０程度の澱粉液化物、澱粉糖化物などの澱粉部分加水
分解物も好んて用いられる。また、原料の澱粉は、甘藷
、馬鈴薯などの地下系澱粉であっても、米、小麦、コー
ンなどの地上系澱粉であってもよく、更に粗グリチルリ
チンなどに共存している甘草由来の澱粉であってもよい
。

シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼは、例
えば、特開昭４７−２０３７３号公報、特開昭５０−６
３１８９号公報、特開昭５０−８８２９０号公報、Ｈａ
ｎｓ　Ｂｅｎｄｅｒ、　Ａｒｃｈ。

Ｍｉｃｒｏｂｊｏｌ、　Ｖｏｌ、　１１１．２７１−２
８２　（１９７７）などに示されているように、バチル
ス・マセランス、バチルス・メガテリウム、バチルス・
サーキュランス、バチルス・ポリミキサ、バチルス・ス
テアロサーモフィラスなどのバチルス属、クレブシーラ
・ニューモニアエなとのクレブシーラ属などの細菌によ
って生産されることが知られており、何れも本発明に自
由に用いることができる。また、シフロブキスリングル
カノトランスフェラーゼは、必ずしも精製して使用する
必要はなく、通常は粗酵素で目的を達成することができ
る。

また、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ
を固定化してバッチ式で反応に繰返し利用することも、
連続式で反応に利用することも自由にできる。

シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼの反応
条件は、グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶液に
シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを反応
させることがてきればよい。

通常、グリチルリチンを水に溶解して反応液中の濃度を
約０．１〜２５８７％Ｊとし、澱粉質の濃度を約１〜５
０ｗへ２とすればよく、グリチルリチンに対する澱粉質
の比率は固形物当り約０．５〜５００倍の範囲が好まし
い。

反応液のｐＨと温度はシクロデキストリングルカノトラ
ンスフェラーゼが作用してα−グリコシルグリチルリチ
ンを生成できればよく、通常ｐＨ３〜１０、温度２０〜
８０℃の範囲から選ばれる。

また、甘草からグリチルリチンを抽出する際に、澱粉質
を含有する水溶液で抽出すれば、夾雑物の混入か比較的
少ない状態で高収率に抽出でき、次いで、この抽出液に
直接または濃縮した後にシクロデキストリングルカノト
ランスフェラーゼを作用させてα−グリコシルグリチル
リチンを生成させてもよい。

この際、抽出時にシクロデキストリングルカノトランス
フェラーゼを共存させ、抽出と酵素反応とを並行して行
ない抽出の促進と、抽出、反応に要する時間の短縮を計
ることもできる。

これらの方法によれば、比較的夾雑物の混入の少ない状
態でα−グリコシルグリチルリチンを含有する製品が甘
草から直接製造することができるので極めて有利である
。

また、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ
の作用によって高分子のα−グリコシル残基を有するグ
リチルリチンを生じる場合には、必要ならば、さらにα
−アミラーゼ、β−アミラーゼなどを作用させ低分子の
α−グリコシル残基を有するグリチルリチンに変換し、
その粘度、呈味などを改善して利用することも自由であ
る。

本発明では、目的によっては、反応液そのままでもα−
グリコシルグリチルリチン製品として使用できるが、必
要に応じて反応後に酵素を加熱失活させた後、ケイ酸ア
ルミン酸マグネシウム（例えば、富士化学工業株式会社
製、商品名ノイシリン）、マグネシア系吸着剤（例えば
、北海道曹達株式会社製、商品名Ｍ−５１１）などで有
色夾雑物を吸着除去し、その非吸着部分を採取してα−
グリコシルグリチルリチン製品とするか、更に、これを
濃縮してシラツブ状のα−グリコシルグリチルリチン製
品、或いは、乾燥粉末状のα−グリコシルグリチルリチ
ン製品とすることもできる。必要ならば、Ｈ型イオン交
換樹脂を用いて脱塩精製したα−グリコシルグリチルリ
チン製品にすることもできる。

これらのα−グリコシルグリチルリチル製品に含まれる
α−グリコシルグリチルリチンなどのグリチルリチン化
合物と遊離の糖類とを分離する必要がある場合には、合
成吸着剤（例えば、三菱化成工業株式会社製造、商品名
ＨＰ−１０、ＨＰ−２０又は、ローム社製−ス社製造、
商品名アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡ
Ｄ−７など）を充填したカラムに通液すれば、α−グリ
コシルグリチルリチン、未反応のグリチルリチンなどの
グリチルリチン化合物は吸着され、多量に共存する水溶
性糖類は吸着されることなくそのまま流出する。次いで
、この多孔性合成吸着剤を希アルカリ水、水などで洗浄
した後、比較的少量の有機溶媒または有機溶媒と水との
混合液１例えばメタノール水、エタノール水などを通液
すれば、まず遊離の糖類な含まないα−グリコシルグリ
チルリチンが溶出され、次いで通液量を増すか有機溶媒
濃度を高めるかすれば、未反応のグリチルリチンか溶出
してくる。このα−グリコシルグリチルリチン高含有溶
出液を蒸溜して。

まず有機溶媒を除去し、これを適当な濃度まで濃縮して
シラツブ状高純度α−グリコシルグリチルリチン製品と
するか、更には乾燥粉末化して粉末状高純度α−グリコ
シルグリチルリチン製品とすることかできる。

このようにして得られるα−グリコシルクリチルリチン
製品は、従来きわめて遅かった甘味の発現がいちしるし
く早まるため甘味度の比較は困難であるが、最大発現時
で比較すれば、使用したグリチルリチン固形物重量に見
合う甘味度とほぼ同程度乃至やや弱い程度である。また
、その甘味の質は、粉末状のものをそのまま口に含んで
も苦味、渋味、えぐ味などの嫌味をほとんど呈すること
なく、まろやかな甘味を呈し、残り味の切れもよい。

また、本発明のα−グリコシルグリチルリチンを含有す
るシラツブ状製品は、酸性下においても沈澱形成、ゲル
形成が極度に抑えられ、低ｐＨ飲料、低ｐＨ食品の甘味
付け、調味などに自由に利用できることが判明した。

また、本発明のα−グリコシルグリチルリチンを含有す
るシラツブ状製品は、グリチルリチンの場合と比較して
泡立ちがきわめて少なく、その取り扱いの容易であるこ
とが判明した。

また、本発明のα−グリコシルグリチルリチンを含有す
る粉末状製品は、それに含まれる各α−グリコシル化合
物が互いに溶は合ったいわゆる固溶体の粉末である。従
って。この粉末の水に対する溶解速度は、瞬時に溶解で
きる程大きく、しかもその溶解度には際限がないので、
シラツブ状からペースト状になる程の高濃度にも自由に
溶解することができる。

また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン製品は、
そのままで甘味付け、呈味改良などのために調味料とし
て使用できる。必要ならば、例えば水飴、グルコース、
マルトース、異性化糖、カップリングシュガー（林原株
式会社の登録商標）、砂糖、蜂蜜、メーブルシュガー、
ソルビット、マルチトール、ラクチトール、ジヒドロカ
ルコン、Ｌ−アスパラチルフェニルアラニンメチルエス
テル、サッカリン、グリシン、アラニン、グリチルリチ
ン、ステビオシト、α−グリコシルステビオシド、レバ
ウディオシドＡ等のような他の甘味料と、またクエン酸
、リンゴ酸などの有機酸又はその塩、グルタミン酸、ア
スパラギン酸などのアミノ酸又はその塩、またデキスト
リン、澱粉、乳糖等のような増量剤、更には着香料、着
色料等と混合して使用することも自由である。

また、α−グリコシルグリチルリチン製品の粉末品は、
そのまま又は必要に応じて増量剤、賦型剤と混合して顆
粒状、球状、タブレット状等に成型して使用することも
でき、液状品は使用上便利なように、その濃度を調節す
ることもできる。

α−グリコシルグリチルリチン製品の甘味度は、前記し
たように反応に用いた固形物重量に見合う甘味度とほぼ
同程度乃至やや弱い程度であることから、反応に用いる
グリチルリチンと澱粉質との固形物重量当りの比率によ
って変ってくる。

グリチルリチンに対する澱粉質の比率が約１００倍程度
である場合に得られる製品の重量当りの甘味度は一般に
砂糖と同程度である。

この比率が約１００倍を越える場合に得られる製品は１
重量当りの甘味度が一般に砂糖よりも低くなる。従って
、この種のα−グリコシルグリチルリチン製品は濃厚味
、粘稠性、重量感等のテクスチャーを飲食物、嗜好物、
医薬品等に与えることができる減寸効果を持つ甘味料と
して利用できる。

これとは逆に、この比率が約１００倍未満の場合に得ら
れる製品は、重量当りの甘味度が一般に砂糖よりも高く
なる。そして、この比率が低くなればなる程、その甘味
度はより高くなり、α−グリコシルグリチルリチン製品
から遊離の糖類な分離除去するときには、砂糖の甘味度
の約５０〜１００倍にも高められる。このような高い甘
味度の製品で甘味付けする場合には、必要甘味に対する
製品の使用量が砂糖よりも大幅に低下することから、甘
味付けされた飲食物、嗜好物等のカロリーを低下させる
ことができる。換言すれば、本発明のα−グリコシルグ
リチルリチン製品は、糖尿病者、肥満者等のカロリーを
制限している人等のための低カロリー製品として、また
低カロリー飲食物、低カロリー嗜好物等いわゆる美容食
、健康食、ダイエツト食への甘味付に利用できるのであ
る。

また、本発明のα−グリコシルグリチルリチン製品は、
虫歯原因菌等によって醗酵されにくいこと等より虫歯を
起しにくい甘味料としても利用てきる。例えば、チュー
インガム、チョコレート、ビスケット、クツキー、キャ
ラメル、キャンデー等の菓子類、コーラ、サイダー、ジ
ュース、コーヒー、乳酸飲料等の飲料水類等における虫
歯を起しにくい飲食物、嗜好物等への甘味付けに好適で
ある。また、うがい水や練り歯みがき等、化粧品、医薬
品等へも虫歯を懸念することなく甘味付けできるので好
都合である。

更に、本発明のα−グリコシルグリチルリチン製品は酸
味、塩から味、渋味、旨味、苦味等の他の呈味を有する
各種の物質とよく調和し、＃酸性、耐熱性も大きいのて
今まで述べたような特殊な場合だけでなく、普通一般の
飲食物、嗜好物等への甘味付けに、また呈味改良等に自
由に利用できる。例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末
味噌、もろみ、ひしお、マヨネーズ、ドレッシング、食
酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、
ソース、ケチャツプ、焼肉のタレ、カレールウ−、シチ
ューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん
、新みりん、テーブルシラツブ等の各種の調味料に使用
できる。また。

せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゅう、ういろ
う、あん類、羊臭、水羊奨、錦玉、ゼリー、カステラ、
飴玉等の各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカー、
クツキー、パイ、プリン、バタークリーム、カスタード
クリーム、シュークリーム、ワツフル、スポンジケーキ
、トーナー１フー ツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャ
ンデー等の各種洋菓子、アイスクリーム、シャーベット
等の氷菓、果実のシロップ漬、水蜜等のシロップ類、フ
ラワーペースト、ビーナツツペースト、フラーペースト
等のペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、
糖果等の果実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬
、千枚漬、らっきょう漬等の漬物類、ハム、ソーセージ
等の畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ
、チクヮ、天ぷら等の魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、さ
きするめ、ふぐのみりん干し等の各種珍味類、のり、山
菜、するめ、小魚、貝等で製造されるつくだ魚類、煮豆
、ポテトサラダ、コンブ巻等のそう菜食品、魚肉、畜肉
、果実、野菜のビン詰、缶詰類、合成酒、果実酒、洋酒
等の酒類、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳
酸飲料、乳酸菌飲料等の清涼飲料水、プリンミックス、
ホットケーキミックス、即席ジュース、即席コーヒー、
即席しるこ等即席飲食品等の各種飲食物、嗜好物の甘味
付け、呈味改良など−１８＝ に自由に使用できる。

また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚等の飼育動物の
ために、餌料、飼料、ベットフード等の嗜好性を向上さ
せる目的で使用することもできる。

その他、タバコ、線画みがき、口紅、リップクリーム、
内服薬、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香
錠、うがい薬等各種固形状、ペースト状、液状嗜好物、
化粧品、医薬品等への甘味剤として、又は呈味改良剤、
矯味剤として自由に利用できる。

さらに、α−グリコシルグリチルリチン製品を生薬甘草
と同じ薬効用途、すなわち消炎、整腸、χ夫痰、咳止め
、抗ウィルス剤などの用途にも使用することができ、例
えば咳止めシロップ、ぜんそくの発作をおさえる錠剤な
どとして使用できる。

以上述べたような飲食物、嗜好物、餌料、飼料、化粧品
、医薬品等にα−グリコシルグリチルリチンを使用する
には、その製品が完成するまでの工程に、例えば、混和
、混捏、溶解、浸漬、滲透、散布、塗布、噴霧、注入等
の公知の方法で含有せしめることにより行なわれる。

次に、本発明のα−グリコシルグリチルリチンを実験に
基づいて説明する。

実験１．α−グリコシルグリチルリチンの調製ｌ−１グ
ルコシル転移酵素の調製 バチルス　ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）　　Ｆ　Ｅ　
ＲＭ　−Ｐ　　Ｎｏ、　２２２２をソへニブルスターチ
２°八２、硝酸アンモニウムＩｗへ２、リン酸２カリウ
ム０．１ｗ八へ、硫酸マクネシウム・７水塩０．０５ｗ
八２へコーンステイープリカー０．５８八２、炭酸カル
シウム１０八２および水からなる殺菌した液体培地１０
！；１．に植菌し、５０℃で３日間通気攪拌培養した。

得られた培養液を遠心分離して、その上清を硫安０．７
飽和て塩析し、シクロデキストリングルカノトランスフ
ェラーセ（ＥＣ２，４，１，１９）の活性約ｇｏ、ｏｏ
ｏ単位を有する粗酵素標品を得た。ここでいう活性１単
位とは、ｐＨ５，５，０，０２Ｍの酢酸緩衝液及び２ｘ
ｌＯ−３Ｍの塩化カルシウムを含む０．３″八２のソリ
ュブルスターチ溶液５ｍｌに、適当に希釈した酵素液０
．２ｍｆＬを加え、４０℃で１０分間反応させた後、そ
の反応液０．５ｍｕをとり、０．０２Ｎ−硫酸水溶液１
５ｍｆＬに混合して反応を停止させ、さらにこの反応停
止液にＯ，ＩＮヨウ素ヨウ化カリウム溶液０．２ｍＪ１
を加えて発色させ、ついで６６０ｎｍにおける吸光度を
測定して、４０°Ｃで１０分間反応させることによりソ
リュブルスターチ１５ｍｇのヨウ素の呈色を完全に消失
させる酵素量をいう。

１−２　酵素反応 精製グリチルリチン（丸善化成株式会社製造、商品名純
グリチミン）１００ｇと、マルトデキストリン（ＤＥ　
　３０）５００ｇとを水５文に加熱溶解した後、６０°
Ｃに冷却すると共に、ｐＨ６゜０に調整し、これに前述
の粗シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ標
品の５，０００単位を加え、ｐＨ６，０，６０°Ｃに維
持しつつ２４時間反応させた。この反応液を９５℃に１
０分間保って酵素を加熱失活させた′Ｘ（この標品は第
１表の試料Ｎｏ、３に相当する。）後、濾過して得た濾
液を７０℃以下で減圧濃縮すると共に、乾燥して粉末品
（この標品は第１表の試料Ｎｏ、４に相当する。）を得
た。対照品は同様に加熱溶解後、反応工程、加熱失活工
程までを経たものでその配合組成は第１表に示す。

実験２．１ｒ味の質の比較テスト 予備テストから求めた甘味度から算出して、各試料を１
０％砂糖水溶液に相当する甘味度の水溶液に調製した。

そして、最も劣っているものと、最も優れているものを
各１つずつ選出させ、かつ味質について意見を求めた。

２０名のパネル員て２５℃の室温で行なった。

その結果は、第２表に示す通りであった。

第　　　２　　　表 第２表の結果から、試料Ｎｏ、１、Ｎｏ、２の対照品は
、甘味の質が劣っており、これに対し、試料Ｎｏ、３、
Ｎ００４の本発明品は、甘味の質が砂糖のそれに近く優
れている。

従って、本発明のα−グリコシルグリチルリチンは、従
来のグリチルリチン、またはグリチルリチンと他の糖類
との単なる混合物などとは違って、嫌味かなく、まろや
かな砂糖に近い甘味を有しており、しかも残り味の切れ
もよいことから、そのまま口にふくんで甘味を味わうこ
とのできる極めて優れた甘味料である。

実験３．　α−グリコシルグリチルリチンの確認実験１
−２で調製した試料Ｎ０１４の１５ｇを水１００ｍＪＬ
に溶解して得られる溶液を、合成吸着剤（商品名ＨＰ−
２０，三菱化成工業株式会社製造）１００ｍＭのカラム
に通液した後、充分水洗いして遊離の糖類を除去した。

次いで、このカラムに５０ｖ／ｖｚメタノール３００　
ｍ　ＫＬを通してα−グリコシルグリチルリチンなどの
グリチルリチン化合物を溶出し、濃縮、乾燥、粉砕して
約２゜５ｇの粉末（試料Ｎｏ、５）を得た。

この試料Ｎｏ、５は、水に極めてよく溶け、まろやかな
甘味を有する無臭、無色でほぼ中性の物質である。また
、酸性下においては、グリチルリチンと比較すれば、い
ちじるしくゲル形成を起しにくい物質である。

また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの
低級アルコールには一部溶け、クロロホルムやエチルエ
ーテルには難溶性の物質である。

試料Ｎｏ、５のＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクト
ルを図に示した。この図で８４０ｃｍ−’附近の吸収は
α−結合に特有な吸収であって、原料のグリチルリチン
の場合には見られない吸収である。試料Ｎ００５の一部
を少量の水に溶解した溶液に市販の結晶グルコアミラー
ゼ（ＥＣ３゜２．１．３）を０．０２Ｍ酢酸塩緩衝溶液
（ｐＨ５，０）の存在下のもとに５０℃で作用させて、
経済的にサンプリングし、薄層板（メルク社製造、商品
名Ｋｉｅｓｅ１ｇｅｌ　Ｆ　２５４）にスポットし、展
開溶媒、酢酸エチル：メタノール：水＝２．５：、１：
ｌの混合溶媒を使用して上昇法て展開させた。これを乾
燥した後、グリチルリチン化合物を紫外線照射で確認し
、更に５　’／Ｊバニリン、５０　ｖ／Ｊ硫酸メタノー
ル溶液からなる発色剤を噴霧して発色させた。また、試
料Ｎｏ、１、Ｎｏ、５およびＤ−グルコースをスポット
して比較してみた。

その結果、試料Ｎｏ、５には、試料Ｎｏ。

１のクリチルリチンに相当するＲｆ　　Ｏ，７０附近の
スポット以外に新たにＲｆ　’［１，６６、ＲｆＯ１６
０、Ｒｆ　Ｏ，５７、Ｒｆ　Ｏ，５４、Ｒｆ　Ｏ，５１
、Ｒｆ　　Ｏ，４８、Ｒｆ　　Ｏ，４４、Ｒｆ　Ｏ，４
０、ＲｆＯ１３４および原点近くに分離不充分なＲｆｏ
、２２ならびにＲｆ　　０．１１のスポットか確認でき
た。

これらの新たなスポットは、グリチルリチン同様に紫外
線照射による蛍光で、紫外線吸収スポットとして　確認
され、発色剤で青色に発色した。

また、試料Ｎｏ、５にグルコアミラーゼを作用させ、経
済的にサンプリングして同様にクロマト分析したものは
、反応時間とともに新しいスポットを示す物質が徐々に
加水分解を受け、最終的に青色のＲｆ　　Ｏ，７０のス
ポットを示すグリチルリチンと緑褐色のＲｆ　Ｏ，５７
のスポットを示すＤ−クルコースとになることか判明し
た。

また、試料Ｎｏ、５にβ−アミラーゼを作用させ、経時
的にサンプリングして同様に薄層クロマト分析したもの
は、反応時間とともにＲｆ　　０．５４以下の新しいス
ポットを示す物質か徐々に加水分解を受け、最終的に青
色のＲｆ　’０．７０のスポットを示すグリチルリチン
、青色のＲｆ　　Ｏ，６６、ＲｆＯ，６０、Ｒｆｏ、５
７．のスポットを示す新しい物質および緑褐色のＲｆ　
０．３６のスポットを示すマルトースとなることが判明
した。

以上の事実から、Ｒｆ　　Ｏ，６６、Ｒｆ　　Ｏ，６０
、Ｒｆ　　Ｏ，５７、Ｒｆ　　Ｑ、５４　、　Ｒｆ　　
Ｏ，５１、ＲｆＯ９４８、Ｒｆ　　Ｏ，４４、Ｒｆ　　
Ｏ，４０、Ｒｆ　　Ｏ，３４、Ｒｆ　　Ｏ，２２、Ｒｆ
　　［１，１１などを示す新しい物質は、クリチルリチ
ンにＤ−グルコースが等モル以上α−グルコシド結合し
ているものと判断される。従って、試料Ｎｏ、５は、シ
クロデキストリングルカノトランスフェラーゼによって
新らたに生じたＲｆｏ、６６、Ｒｆ　０．６（１、Ｒｆ
　Ｏ，’５７　、　Ｒｆ　Ｏ，５４、ＲｆＯ，５１，Ｒ
ｆ　　Ｏ，４８、Ｒｆ　　Ｏ，４４、ＲｆＯ０３４、Ｒ
ｆ　　Ｏ，２２、Ｒｆ　　Ｏ，１１を示す新物質と少量
の未反応のグリチルリチンとの混合物である。

また、試料Ｎｏ、５と同様にして調製した試料にβ−ア
ミラーゼを作用させたものを用いて、酢酸エチル；メタ
ノール；水＝２．５：１：１の混合溶媒を使用してシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを行って、前述の薄層
クロマトグラフィーでＲｆ　　ｆｌ、６６　、　Ｒｆ　
　Ｏ，６０、Ｒｆ　　Ｏ，５７のスポットを示す新物質
の混合物を分離し、乾燥して粉末を得た。

本粉末は、試料Ｎｏ、５と同様に水によく溶け、まろや
かな甘味を有する無臭、無色てほぼ中性の物質である。

また、酸性下においては、グリチルリチンと比較すれば
いちじるしくゲル形成を起しにくい物質である。

また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの
低級アルコールには一部溶け、クロロホルムやエチルエ
ーテルには難溶性の物質である。

また、本粉末のＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクト
ルを求めたところ、試料Ｎｏ、５の場合と同様にα−結
合に特有な８４０ｃｍ−’附近の吸収が見られた。

また、これら新物質は、豚の肝臓から抽出し、部分精製
したα−グルコシダーゼによっても同様にグリチルリチ
ンとＤ−グルコースとに加水分解されることが判明した
。このことから、これら新物質は、人や動物が摂取する
とき、体内でグリチルリチンとＤ−クルコースとに容易
に分解されることを示唆している。

また、試料Ｎｏ、５は、実験２て使用した試料Ｎｏ、３
およびＮｏ、４と同様に、嫌味、薬品臭なくまろやかな
甘味で甘味の発現も早く、残り味の切れもよく、砂糖に
近い優れた甘味を有してい−・　３　〇　− ることから、本発明のα−グリコシルグリチルリチン製
品として好適である。

従って、本発明のグリチルリチンの欠点を解消するとい
う目的は、グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶液
にシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを作
用させてα−グリコシルグリチルリチンを生成させて、
グリチルリチンをα−グリコシルグリチルリチンに変換
せしめることによって達成されるものと判断される。

次に２〜３の実施例を述べる。

実施例１゜ バチルス・メガテリウム　ＦＥＲＭ−ＰＮｏ、９３５を
、実験１−１の培地５ｆＬに植菌し、２８°Ｃで３日間
通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離して得た上清
に硫安を０．７飽和にし、更に遠心分離して沈澱を採取
した。

この沈澱は、実験１−１に記載する活性の測定方法でシ
クロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ２
，４，１，１９）を３０万単位含んでいた。

コーンスターチを３０’／ｗ％、ｐＨ６，０で市販の液
化酵素剤を澱粉固形物当り０．２％加え、温度９５〜９
８℃で連続液化し、９０℃で反応を進めてＤＥ２０にな
った時に液化酵素を加熱失活させた。この液化液に、精
製クリチルリチン（丸善化成株式会社製造、商品名　純
グリチミン）を固形物重量でグリチルリチン：澱粉部分
加水分解物の比が１：３になるように溶解して５０℃に
冷却し、これに上記のシクロデキストリングルカノトラ
ンスフェラーゼを原料澱粉固形物ダラム当り１０単位の
割合で加え、５０°Ｃ，ｐＨ５，５で４８時間反応させ
た。反応液の酵素を加熱失活させて濾過した後、濾液に
ケイ酸アルミン酸マグネシウム（富士化学工業株式会社
製造、商品名　ノイシリン）を原料澱粉固形物当り０．
３％加え、徐々に攪拌しつつ３０分間保った後、濾過し
、次で減圧濃縮、乾燥、粉末化して、粉末状のα−グリ
コシルグリチルリチン製品を固形物収率的９５％で得た
。

本製品は、吸湿性が少なく、取扱いが容易である。また
、水に対する溶解速度はきわめて大きく、冷水に容易に
溶け、また溶解量も非常に大で、木製品がペースト状に
なる程の高濃度にまで容易に溶けた。

木製品は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２５倍であっ
て、甘味の質もまろやかで残り味の切れもよい。本製品
は、せ味付または呈味改良を必要とするあらゆる場合に
利用できるが、中でも低う触性甘味料、低カロリー甘味
料などとして好適である。

実施例２゜ グリチルリチン酸三ナトリウム（東京化成株式会社製造
）１００ｇとβ−シクロデキストリン５００ｇとを水５
文に加熱溶解し、６０°Ｃに冷却してｐＨ５，５に調整
し、これに実験１の方法で調製したシクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼをβシクロデキストリン固
形物ダラム当り１００単位の割合で加え、６０℃、ｐＨ
５，５に２４時間保った。反応液の酵素を加熱失活させ
て濾過した後、濾液にマグネシア系吸着剤−３３＝ （北海道曹達株式会社製造、商品名Ｍ−５１１）２ｇを
加え、徐々に攪拌しつつ３０分間保ち、次いで濾過し得
られた濾液を、合成吸着剤（ローム社製−ス社製造、商
品名　ＸＡＤ−７）４１を充填したカラムに通液し、こ
のカラムを充分水洗して遊離の糖類を除去した。次いて
、このカラムに５０　’／ｖ％エタノールｌＯ！；Ｌを
通してα−グリコシルグリチルリチンを溶出し、濃縮、
乾燥して約１５０ｇの粉末状のα−グリコシルグリチル
リチン製品を得た。

水晶を実験３の試料Ｎｏ、５の場合と同様に薄層クロマ
トグラフィーで調べたところ、ＲｆＯ１７０附近の小ス
ポットを示すグリチルリチン以外に、新たにＲｆＯ，６
７附近、Ｒｆｏ、５９附近のスポットを示す物質、更に
原点からＲｆｏ、２６附近に至る分離不充分で巨大なス
ポットを示す物質などがシクロデキストリングルカノト
ランスフェラーゼによって生成していることが確認され
た。また、試料Ｎｏ、５の場合と同様に、これら新しい
物質はグルコアミラーゼによってグリチルリチンとＤ−
グルコースとに徐々に加水分解されることも確認された
。

木製品は、固形物当りの甘味度が砂糖の約６０倍であっ
て、甘味の質もまろやかて、残り味の切れもよい。従っ
て、各種飲食物、嗜好物など多方面への１ｆ味付、呈味
改良などに自由に利用できる。また、実施例１の甘味料
と同様に低う触性甘味料、低カロリー甘味料としても有
利に用いることかてきる。

実施例３゜ 純グリチルリチンを約２５％しか含有せず黄褐色をした
グリチルリチン粗製品（丸善化成株式会社製造、商品名
　リコゲン）１００ｇとマルトデキストリン（ＤＥ　　
１８）１００ｇとを水３党に加熱溶解した後、６０℃に
冷却し、ｐＨ５，５に調整した。これに実験１で調製し
たシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ標品
の３．０００単位を加え、ｐＨ５，５，６０８Ｃに維持
しつつ４４時間反応させた。この反応液を加熱して酵素
を失活させた後濾過し、濾液に実施例２の場合に用いた
マクネシア系吸着剤５ｇを加え、徐々に攪拌しつつ２０
分間保ち、次いて濾過し得られる濾液を減圧濃縮し、水
分３０　’／Ｗ％の淡黄色液状のα−グリコシルグリチ
ルリチン製品を原料固形物当り約９７％の収率て得た。

本製品は、精製グリチルリチンを用いる場合以上に甘味
の質の改良のいちじるしいことがわかった。本製品の甘
味度は、砂糖の約４倍てあって各種飲食物、嗜好物、医
薬品等の甘味付、呈味改良らの有色夾雑物の完全除去に
やや難点があるが、色にこだわらない例えば、醤油、ソ
ース、味噌、マヨネーズ、焼肉のたれ、スープの素など
の調味料、福神漬、沢庵漬、奈良漬などの漬物類、チョ
コレート、ココア、チューインガム、プリン、餡などの
菓子類、その他佃煮、珍味、塩辛、乳酸飲料などの製造
には高度に精製したグリチルリチンを用いる場合よりも
安価に大量に供給できるので好都合である。

参考例１．　　甘味料 還元麦芽糖水飴（株式会社林原生物化学研究所製造、商
品名　マビット）ＩＫｇに実施例１の方法で製造した粉
末状のα−グリコシルグリチルリチン製品１０ｇを溶解
して調製した液状甘味料は、甘味の質がすぐれ、砂糖と
同程度の甘味を有し、カロリーは砂糖の約１／２０であ
る。

本甘味料は、低カロリー甘味料としてカロリー摂取を制
限している人、例えば肥満者、糖尿病者などのための低
カロリー飲食物、嗜好物の甘味付に好適であり、またこ
のままテーブルシラツブとしても自由に利用できる。ま
た、虫歯原因菌によって酸の生成もなく、水不溶性グル
カンの生成もないことより、虫歯を予防する飲食物など
への甘味付に好適である。

参考例２．　　甘味料 グルコース８００ｇに砂糖２００ｇ、実施例２の方法で
製造した粉末状のα−グリコシルグリチルリチン製品５
ｇとを均一に混合して粉末化した粉末に、少量の水をス
プレーしかるく圧縮して成形し、角砂糖様形状の甘味料
を製造した。本甘味料は、砂糖とほぼ同程度の甘味度を
有すると同時に、きわめてすぐれた甘味の質を持ってい
て、冷水にも容易に溶ける。冷水に溶かしたものは、そ
のままでも清涼飲料水に好適である。

本甘味料の甘味の質がすぐれているのは、これら混合し
た三つの甘味源の相乗効果と判断された。

参考例３．　　甘味料 実施例２の方法で製造した粉末状のα−グリコシルグリ
チルリチン製品１６ｇを水２０ｍ１に溶かし込み、これ
に蜂蜜１ｋｇを均一に混合して複合甘味料を得た。

本甘味料は、甘味度が砂糖の約２倍であって、甘味の質
もきわめてすぐれており、蜂蜜の香りを一段とひき立た
せた９本甘味料は、美容飲料、健康食品、ダイエツトフ
ードなどへの甘味付や医薬品などの矯味剤などに自由に
利用できる。

参考例４．　　ハードキャンデー 還元麦芽糖水飴（商標名　マビット、株式会社材厚生物
化学研究所製造）１５ｋｇに５実施例１の方法で製造し
たα−グリコシルグリチルリチン製品６０ｇを溶解した
後、減圧下で水分約２％以下になるまで加熱濃縮し、こ
れにクエン酸１５０ｇおよび少量のレモン香料と着色料
とを混和し１次いで常法に従って成形しハードキャンデ
ーを得た。

の 水晶は高甘味、低カロリー、低う触性呂λ−トキャンデ
ーである。

参考例５．　　チューインガム ガムベース２ｋｇを柔らかくなる程度に加熱溶融し、こ
れにラクチトール（結晶粉末）６ｋｇ、実施例２の方法
で製造したαグリコジルグリチルリチン製品１６０ｇ、
ソルビトール（結晶粉末）１ｋｇおよび少量のへツカ香
料と着色料とを混合した後、常法に従ってロールにより
練り合わせ、成型することによってチューインガムを得
た。水晶はテクスチャー、甘味ともに良好で、低カロ陥
蝕性のチューインガムである。

参考例６．　　チョコレート カカオペースト４０ｋｇ、カカオバター１０ｋｇ、麦芽
糖１０ｋｇ、乳糖５ｋｇ、全脂粉乳２０ｋｇおよび実施
例１の方法で製造したα−グリコシルグリチルリチン製
品１ｋｇを混合し、レファイナーを通した。そして粒度
な下げた後、コンチェに入れレシチン５００ｇを加え。

５０°Ｃで二昼夜練り上げた。次いで、常法に従い成型
機に流し込み固化＃、型することにより製品とした。

水晶はファツトブルーム、シュガーブルームの恐れがな
く、舌にのせた時の融は具合、風味ともに良好で、低う
触性のチョコレートである。

参考例７．　　乳酸飲料 １０ｋｇの脱脂乳を８０’Ｃて２ｏ分間加熱殺菌した後
、４０℃に冷却し、これにスターター３００、ｇを加え
３５〜３７℃で１０時間発酵させた。次いて、これをホ
モゲナイズした後、実施例３の方法で製造した液状のα
−グリコシルグリチルリチン製品２ｋｇおよびカップリ
ングシュガー２ｋｇを加え８０−８５°Ｃで攪拌混合し
つつ殺菌した。

これを冷却した後、少量の香料を加えてビン詰参考例８
．　　佃　　煮 常法に従って砂取り、酸処理して角切りしたコンブ２５
０ｇに、醤油２１２ｍＡ、アミノ酸液３１８ｍ文、粉飴
５０ｇ、プルラン１ｇおよび実施例３の方法で製造した
α−グリコシルクリチルリチン製品１０ｇを加えて煮込
みつつ、更にグルタミン酸ソーダ１２ｇ、カラメル８ｇ
、味淋２１ｍＭを加えて煮き上げて昆布の佃煮を得た。

水晶は味、香りたけでなく、色、艶も充分で食欲をそそ
る商品価値の高い製品であった。

参考例９．　　ラッキョウ漬 生ラッキョウ５ｋｇを、常法に従って約２０％食塩水２
，５磨に塩漬して３週間の後、水切りして得た塩漬はラ
ッキョウを水２．０文、氷酢酸８０ｍ文、食塩８０ｇか
らなる酢酸液に１ケ月間酢漬けした。

得られた酢漬はラッキョウを、更に食酢８００ｍ文、味
淋４００ｍ文、唐芥子１０ｇおよび実施例２の方法で製
造したα−グリコシルクリチルリチン製品１０ｇからな
る調味液に１０日間漬けて風味豊かなラッキョウのせ酢
漬を得た。

参考例１０．　　　錠　　剤 アスピリン５０ｇに、麦芽糖１３ｇ、コーンスターチ４
ｇおよび実施例２の方法で製造したα−グリコシルグリ
チルリチン製品１ｇを均一に混合した後、直径１２ｍｍ
、２ＯＲ杆を用いて１錠６８０ｍｇ、錠剤の厚さ５．２
５ｍｍ、硬度８ｋｇ±Ｉｋｇで打錠した。

水晶は、適度の甘味を有する飲み易い錠剤である。

参考例１１．　　　練歯磨 配　　　合 第２リン酸カルシウム　　　　４５．０％グ　　ル　　
ラ　　ン　　　　　　　　　　　　　２．７５％ラウリ
ル硫酸ナトリウム　　　　１．５％グ　　リ　　セ　　
リ　　ン　　　　　　　　　　２０．　０　％ポリオキ
シエチレン　ソルビタンｆノラウレート　　　　　　　
　　０　、５　％防腐剤　　　　０．０５％ 実施例２の方法で製造したα−グリコ シルグリチルリチン製品　　　　０．２％水　　　　　
　　　　　　　　　３０．０％上記の材料を常法に従っ
て混合し、練歯磨を得た。

水晶は、適度の甘味を有しており、子供用練歯磨として
利用できる。

【図面の簡単な説明】

図は、実施例３で得た試料Ｎｏ、５の赤外線吸収スペク
トルを示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶液に、
   シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用
   させてα−グリコシル残基がグリチルリチンに等モル以
   上結合したα−グリコシルグリチルリチンを生成せしめ
   、これを採取することを特徴とするα−グリコシルグリ
   チルリチンの製造方法。
2. （２）α−グリコシルグリチルリチンを採取するに際し
   、生成されたα−グリコシルグリチルリチンと水溶性糖
   類とを含有している水溶液を多孔性合成吸着剤に接触せ
   しめて多孔性合成吸着剤にα−グリコシルグリチルリチ
   ンを吸着させ、その多孔性合成吸着剤からα−グリコシ
   ルグリチルリチンを溶出し、これを採取することを特徴
   とする特許請求の範囲第１項記載のα−グリコシルグリ
   チルリチンの製造方法。