JPH031957B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、重合体樹脂上の選択的吸着によつて
タイロシン（Tylosin）を精製する方法に関す
る。従来文献に報告されているように、普通タイ
ロシン塩基はジクロロメタンまたはクロロホルム
のような塩素化有機溶剤またはメチルイソブチル
ケトンのような非塩素化溶剤によつて予め8.5の
PHにした醗酵ブロスから抽出される。

次いで合した有機抽出液を真空濃縮しそして活
性炭素による脱色後にタイロシン塩基をｎ−ヘキ
サンの添加によつて沈殿させる。

あるいはまた、適当な有機または無機酸（酒石
酸または燐酸）による中和によつて、タイロシン
塩基を有機抽出液から水性相に可溶性の塩の形態
で移動することができる。次にタイロシンの可溶
性塩を含有する水溶液を真空乾燥（スプレードラ
イヤー）して使用した酸の塩の形態の抗生物質を
得る。

前述した方法によれば、ある場合においては、
特に醗酵ブロス中に高度な量で存在する不純物の
完全な除去を達成することができず、その結果、
これらの不純物（色素または醗酵副生成物）の型
によつては最終生成物の品質は力価においておよ
び分析および官能性においてしばしば不満足であ
る。

本発明の目的は前述した不都合を除去しそして
非常に簡単であり且つ必要条件を満足する生成物
を得ることを可能にするタイロシンの新規な精製
方法を開示するものである。

本発明の精製方法は、吸着作用樹脂ER−180
（ローム・アンド・ハース社）またはアンバーラ
イト （XAD₂、XAD₄−ローム・アンド・ハー
ス社）、もしくはダイオン 型（HP20、HP21、
HP30、HP40、HP50、三菱化成工業(株)）、ジユ
オライト 型（S861、S862、S863、S866、ダイ
アモンド・シヤムロツク社）、カステル 型
（S112、モンテエジソン社）、レワタイト
（OC1031、バイエル社）のようなその他の型の重
合体樹脂上の醗酵ブロス中のタイロシンの選択的
吸着からなる。

それ故に、当業者には明白であるように、本発
明の精製方法の特有の目的は、主に必要な性質要
求を満足する最終生成物を得ることを可能にする
吸着条件、脱着反応に使用される適当な溶剤また
は溶剤混合物、正確なPH範囲、引続いての操作を
見出したことである。

以下に簡単に記載されそして例により詳細に記
載される本発明の新規な精製方法は、醗酵ブロス
を過しそしてタイロシンを含有する液を
NaOHの水溶液の添加によつてPH7.5〜10となし
次いで重合体樹脂上に吸着させることからなる。

前述したPH値において、ブロス中に存在する着
色不純物の大部分の量は流出液と共に除去されそ
してタイロシン塩基は樹脂上に吸着される。生成
物に対する樹脂の非常に高い吸着能力（40〜50
ｇ／）および水−アルコールまたは水−アセト
ン溶液で実施した脱着工程後に次の反応に対して
樹脂を再び使用する可能性からなるこの方法の他
の利点を指摘することは重要なことである。

醗酵ブロス中に含有されている不純物の種類に
よつても左右されるが20〜30回の操作サイクル後
においてのみ、同じ樹脂を再生することが必要で
ある。この再生は、水／イソプロパノール（70：
30）の混合物および４％NaOHによつて容易に
実施される。樹脂からのタイロシン塩基の脱着は
好適には１：１の比の水／イソプロパノールまた
は水／アセトンの混合物によつて前述したように
実施される。

このようにして得られた溶離液をIRA35 型
（ローム・アンド・ハース社）の巨大網状弱陰イ
オン性樹脂上に吸着せしめて完全な脱色を達成さ
せる。

あるいはまた、レワタイト 型（CA9222、バ
イエル社）またはカステル 型（Ａ−105、モン
テエジソン社）も使用することができる。真空濃
縮しそしてPHを調整した後、タイロシンを塩析に
よつて溶離液から沈殿させる。収率約80％。

このようにして精製されたタイロシン塩基か
ら、それを水−アルコール溶剤中で化学量論的な
量の酸を使用して塩形成させそして脱色炭素を通
した過によつて得られた溶液を濃縮乾涸するこ
とによつてその塩（酒石酸塩、燐酸塩）を得るこ
とができる。あるいはまた精製した溶離液を塩形
成させそしてその後溶液をスプレー乾燥すること
によつてこれらの塩を直接得ることができる。

以下の例は、本発明の方法を説明するものであ
るが、本発明を限定するために示すものではな
い。

例 １ タイロシン塩基の精製 醗酵ブロス440Kgをジカライト（Dicalite）（３
％）と混合しそして次に回転過器上で過す
る。出発有用活性度94％を含有するそのようにし
て得られた過ブロス（615）を20％NaOHの
添加によつてPH7.5となしそして150／ｈの流速
でカラム（樹脂の容量100、カラムの直径22.5
cm）中の樹脂ER−180 （ローム・アンド・ハー
ス社）上に吸着させる。排出ブロスは滴定によつ
て検査していかなる活性度も示さない。次にカラ
ムを150／ｈの流速で水200で洗滌する。この
洗滌水はいかなる活性度も含有していない。次に
カラムを１：１の比の水／イソプロパノールまた
は水／アセトンの混合物で溶離しそして活性度を
含有していないオーバーヘツド50を除去した後
活性度90％を含有する中心の溶離液100を最終
的に集める。

この溶離液を濃縮しそして次に20／ｈの流速
で予め塩の形としたIRA 樹脂（ローム・アン
ド・ハース社）上に吸着せしめる。

このようにして得られた脱色した溶離液を＋10
℃にしそしてNaOHの水溶液の添加によつてPH
約8.5となしそしてそれを塩化ナトリウム4.5Kgを
混合する。

35℃で２時間攪拌した後、沈殿したタイロシン
塩基をブフナー漏斗によつて過しそしてPH8.5
および45℃の温度を有する水８で洗滌する。洗
滌したパネルを45℃で８時間真空乾燥しそして次
に６時間高真空乾燥する。

出発有用活性度を基にして計算した収率は正規
の性質に相当するタイロシン塩基約80％である。

例 ２ タイロシン酒石酸塩（中性）の製造 例１によつて得られた精製されたタイロシン塩
基１Kgをメチルアルコール3.0に懸濁しそして
酒石酸0.066Kgおよび活性炭素0.05Kgと混合する。
室温で30分攪拌した後、混合物をジカライト
（0.10Kg）上で過し、パネルをメタノール1.0
で洗滌しそして液を真空濃縮乾涸（蒸気の温度
20〜50℃）する。

このようにして得られた乾燥した砕けやすい残
留物を更に50℃で３時間乾燥器中で真空乾燥しそ
して次にそれをふるいにかける。有用活性度を
98.5％のタイロシン酒石酸塩911.5ｇが得られる。

例 ３ 醗酵プロス520Kgを例１に記載したように処理
して脱色および精製された溶離液を得る。この溶
理液を酒石酸396ｇと混合しそしてPHを6.0〜6.4
にする。次に、室温で30分攪拌下に維持しなが
ら、活性炭素300ｇを反応混合物に加える。ジカ
ライト上で過した後、溶液を真空濃縮して約25
の容量にしそして次にスプレー乾燥する。有用
活性度の98％のタイロシン酒石酸塩4400ｇが得ら
れる。

例 ４ 醗酵ブロス520Kgを例１に記載したように処理
して中心部の溶離液を得る。次にこの溶離液をオ
ーバーヘツドからの同時的なイソプロパノールの
除去よつて70まで真空濃縮する。塩化メチレン
35を加えそしてPHをNaOHの20％水溶液の添
加によつて8.5にする。

15分攪拌した後、有機抽出液を分離し、9.0
まで真空濃縮しそして攪拌下でシクロヘキサン
30.0と混合する。反応混合物を10〜15℃の温度
で攪拌下に約３時間維持しそして過によつて分
離した沈殿を40℃で４時間真空乾燥する。有用活
性度の95％のタイロシン塩基4600ｇが得られる。

例 ５ カステル S112樹脂100上の吸着を実施しな
がら、醗酵ブロス490Kgを例１に記載したように
処理する。

樹脂を脱イオン化水で洗滌した後、タイロシン
塩基を１時間当り床容量（Ｂ／Ｖ／hr）の流速で
2.3：１の比のアセトン／水の混合物300で溶離
する。

中心部溶離液100を集めそしてH₃PO₄の12％
溶液をPH5.5まで加えることによつて塩形成させ
そして次に10まで真空濃縮してタイロシン燐酸
塩5000ｇに相当する濃厚溶液を得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ タイロシンを含有している醗酵ブロスを過
   し液を約PH7.5〜10.0に調整し、上記PH調整溶
   液をタイロシンを選択的に吸着しうる重合体樹脂
   で処理し、上記樹脂上に吸着したタイロシンを約
   １：１（容量）の水／イソプロパノール、約１：
   １（容量）の水／アセトンまたは約１：2.3（容量）
   の水／アセトンの混合溶媒で溶離し、タイロシン
   を含有する上記溶離液を巨大網状弱陰イオン性樹
   脂で処理して残存する不純物および着色物を除
   き、上記巨大網状弱陰イオン性樹脂を去し、得
   られる精製溶液をPH約8.5に調整し、次いで上記
   精製され、PH調整された溶液にタイロシン塩基が
   沈殿するまで塩化ナトリウムを加えることを特徴
   とするタイロシンの精製方法。 ２ 前記溶離液に含有されている精製タイロシン
   をジクロロメタン、クロロホルムまたはメチル−
   イソブチルケトンで抽出し、次いでｎ−ヘキサン
   およびシクヘキサンを加えて抽出されたタイロシ
   ンを沈殿させることからなる特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ３ 化学量論的な量の酒石酸またはリン酸を精製
   されたタイロシンを含有する溶液に加えてタイロ
   シンをそれぞれ酒石酸塩またはリン酸塩に換え、
   次いで上記タイロシン塩を含有する溶液をスプレ
   ー乾燥することにより精製されたタイロシンを単
   離することからなる特許請求の範囲第１項記載の
   方法。