JPH02215394A

JPH02215394A - モラノリン誘導体の製法

Info

Publication number: JPH02215394A
Application number: JP3424689A
Authority: JP
Inventors: Yasuichi Usui; 泰市碓氷; Yoji Ezure; 洋治江連; Osamu Uejima; 修上島
Original assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1989-02-14
Filing date: 1989-02-14
Publication date: 1990-08-28

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【産業上の利用分野］本発明は、アミラーゼを用いて、次の一般式ＣＩ）で表
されるモラノリン誘導体を製造する方法に関する。ＣＨＩＱ　Ｈ〔式中、Ｒ’は水素又は低級アルキルを表す。ｎは０〜
２０の整数を表す。〕本発明に係る化合物は、糖負荷時に訴いて優れた血糖上
昇抑制作用を有し、例えば糖尿病治療剤等の医薬品とし
て極めて有用である。（従来の技術］一般式〔Ｉ〕で表されるオリゴグルコシルモラノリン誘
導体のうち、それが混合物として得られるものについて
はこれまでにその取得方法が容易であった。例えば、次
の一般式（ｎ）〔式中、Ｒ２は水素又は低級アルキルを表す。〕で表さ
れるモラノリン又はモラノリン誘導体と、サイクロデキ
ストリン又は可溶性澱粉とを、水に溶解させ、これにサ
イクロデキストリングリコジルトランスフェラーゼ（Ｂ
Ｃ２，４，１，１９゜ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ　ｇｌ
ｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、以下ｒｃＧＴ−
ａｓｅＪという）を作用させて得るものであった。このようにして得られた一般式〔Ｉ〕においてｎが異な
る数種の化合物の混合物は、例えば、グルコアミラーゼ
（α−１，４−グルカングルコハイドロラーゼ［ＩＣ３
，２，１，３）を作用させることにより次の一般式［ｒ
Ｖ）（ｆｆ）〔式中　Ｒ４は水素又は低級アルキルを表す。〕で表さ
れる化合物に変換することができ（特開昭５７−０５８
８９０号公報）、また〔Ｉ〕と［ＩＶ）との混合物から
、極性溶媒を用いる分別結晶法を適用することによって
［ＩＶ］を取得することができることも判っている（特
開昭６２−２４２６９２号公報、他）。ＣＧＴ−ａｓｓによる糖転移反応を用いたこれまでの技
術では、〔Ｉ〕の製造においてｎが１〜１５のものの混
合物が得られるに過ぎず、ｎが一定のものを得る製造法
は、知られていなかった。【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記した困難な課題を解決することに
あった。〔Ｉ〕に看いてｎが一定のものを得る反応に関
するものである。

【課題を解決するための手段】

本発明の要旨は、以下の諸点にある。 ■親水性有機溶媒と水との混合溶媒中で反応させること
、 ■マルトオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によってマル
トオリゴ糖に変換することができる物質を使用すること
、 ■上記一般式［１１］で表されるモラノリン若しくはモ
ラノリン誘導体、又は一般式（ＩＩＩ）〔式中、Ｒ３は
水素又は低級アルキルを表す。ｌは０〜１５の整数を表
す。〕で表されるモラノリン誘導体、を原料として用い
ること、 ■アミラーゼを作用させること。以下、本発明について更に詳しく説明する。本発明において用いられるマルトオリゴ糖とは、グルコ
ースの重合度が２〜１５のものが良い。このようなマル
トオリゴ糖としては、例えばマルトース、マルトトリオ
ース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マル
トヘキサオース、マルトヘプタオース等を挙げることが
できる。本発明に奢いては、アミラーゼの作用によって上記した
マルトオリゴ糖に変換することができる物質、例えば澱
粉分解物等をも用いることができる。本発明においては、〔■〕又は［Ｉ［Ｉ）で表されるモ
ラノリン誘導体を用いる。いずれもグルコース受容体と
なることができるものである。本発明に用いるアミラーゼとしては、澱粉を加水分解す
る酵素であればいずれでもよいが、効率よく目的とする
物質を生成させるためには、例えばグルコアミラーゼ又
はマルトオリゴ糖生成アミラーゼを使用することが好ま
しい。グルコアミラーゼ、マルトトリオース生成アミラ
ーゼ、マルトテトラオース生成アミラーゼ、マルトペン
タオース生成アミラーゼ、マルトヘキサオース生成アミ
ラーゼ等は、特に好ましい。マルトース生成アミラーゼとしては、大豆、麦芽等の植
物起源のβ−アミラーゼのほか、バチルス・ポリミキサ
［Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｏｌｙｍｙｘａ、　Ｊ、　Ｒｏ
ｂｙｔａｎｄ　Ｏ，Ｆｒｅｎｃｈ、＾ｒｃｈ、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　１０４゜３３８　（１
９６４）　）　、バチルス・セレウス［Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓｃｅｒｅｕｓ、　Ｙ、Ｔａｋａｓａｋｉ、＾ｇｒｉｃ
、　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｆｆｉ、、　４０゜１５１５　（
１９’ｒ６）　）　、シュードモナス属菌［Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓａｐ、Ｓ、５ｈｉｎｋｅ　ａｔ　ａｌ、、
　Ｊ、　Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、。５３、６９３（１９７５））　、ストレプトミセス・ヒ
ユーグロスコピカス［Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙ
ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、　Ｙ。Ｈｉｄａｋａ　ｅｔ　ａｔ、、　５ｔａｅｒｋｅ、　２
６．４１３（１９７４））−、ストレプトミセス・プレ
コックス［５ｔｒｅｐｔｏＬＩｌｙｃａｓｐｒａａｃｏ
ｘ　、若生勝男ら。澱粉化学、　２５．　１５５＜１９
７８）１等の微生物起源のマルトース生成アミラーゼ等
を挙げることができる。更に、マルトトリオース以上のグルコース重合度を有す
るオリゴ糖を生成するアミラーゼとしては、以下のもの
を挙げることができる。マルトトリオース生成アミラーゼとしては、若生勝男ら
、澱粉化学、２６．１７５　（１９７９）記載のストレ
プトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｌｌｙｃｅｓ
　ｇｒｉｓｅｕｓ）起源のもの、高橋義幸、昭和５８年
度日本農芸化学会大会要旨集、ｐ１６９　（１９８３）
記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）起源のもの。マルトテトラオース生成アミラーゼとしては、Ｊ、　Ｆ
、　Ｒｏｂｙｔ　ａｎｄ　Ｒ８Ｊ、＾ｃｋｅｒｍａｎ、
　Ａｒｃｈ。Ｂｉｏｃｈｅａ＋、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　１４５．１
０５（１９７１）記載のシェードモナスｅストッツェリ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｔｕｔｚｅｒｉ）起源の
もの。マルトペンタオース生成アミラーゼとしては、Ｎ、　５
ａｉｔｏ、＾ｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ、、　１５５．２９０（１９７３）記載のバチルス・
リッケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　１ｉｃｋｅｎｉ
ｆｏｒｓｉｓ）起源のもの、小林ら、昭和５８年度日本
澱粉学会大会要旨集、ｐ３０１（１９８３）記載のもの
、古傷ら、昭和５９年度日本農芸化学会大会要旨集、ｐ
５８４　（１９８４）記載のもの。マルトヘキサオース生成アミラーゼとしては、に、にａ
ｉｎｕｍａ　ａｔ　ａｌ、、　ＦＢＢＳ　１ｅｔｔ、、
　２６．２８１（１９７２）記載のエアロバクター・エ
アロゲネス（＾ｅｒｏｂａｃｔｏｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ
）起源のもの、Ｊ、　Ｆ、　Ｋｅｎｎｅｄｙ　ａｎｄ　
Ｃ。Ａ、　１ｌｈｉｔｅ、　５ｔｅａｒｋｅ、　３１．９３
（１９７９）記載、呑口ら、澱粉化学２９．１０７（１
９８２）記載、Ｙ、　Ｔａｋａｓａｋｉ。＾ｇｒｉｃ、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅ＋ｓ、、　４７．２１９
３（１９８３）等がある。本発明において、親水性有機溶媒としては特に限定され
るものはなく、水混和性の有機溶媒であればいずれの溶
媒をも使用することができる。例えば、メタノール、エ
タノール、ｎ−プロパツール、イソプロパツール、アセ
トン、ジオキサン、ホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルスルホキサイド、エチレングリコ
ール、プロピレングリコール等を挙げることができるが
、特にアルコール系溶媒が好ましい。本発明の実施にあたって、これらの親水性溶媒は、単独
で使用してもよくまた２種以上を混合して使用してもよ
い。水との混合溶媒における親水性有機溶媒の含有率は、溶
媒の種類や基質の種類によって適宜変化させることがで
きるが、通常的２０〜３０％が適当である。本発明の実施にあたっては、マルトオリゴ糖類とモラノ
リン誘導体とのモル比は特に限定されるものではなく、
反応溶媒に対する溶解度、反応速度、収率、経済性等を
考慮して適宜決定することができるが、通常は約１：１
から、約１：５の範囲内が好ましい。またマルトオリゴ糖類とモラノリン誘導体との混合溶媒
中における合計濃度は、モル比と同様に、溶媒に対する
溶解度、反応速度、収率等を考慮して適宜決定すること
ができるが、通常１０〜６０％、好ましくは２０〜５０
％が適当である。反応温度は、約２０〜７０℃程度の、アミラーゼの活性
を発現することができる温度がよい。使用する酵素の種
類、反応速度、収率等を考慮して適宜決定することがで
きる。反応時のＰＨは、酵素の種類によって異なるが、通常は
約４〜ｌＯの範囲が適当である。反応時間は、反応温度、酵素の使用量によって異なるが
、通常は約２時間から１２０時間、好ましくは、約１２
〜４８時間の範囲が適当である。本発明の実施にあたっては、可溶性酵素、固定化酵素の
いずれをも用いることができる。また反応の形式も、バ
ッチ式、連続式のいずれをも適用することができる。反応終了後は、各種のカラムクロマトグラフィー、溶媒
抽出等によって分画を行い、目的とするモラノリン誘導
体を取得することができる。分画の際に、未反応の原料
モラノリン誘導体画分を回収し、繰り返して使用するこ
とができ、これによって収率を高めることができる。

【実施例】

以下に本発明の実施例を掲げて、本発明を更に詳しく説
明する。実施例１マルトトリオシルモラノリンマルトトリオース４００ｎｇと、モラノリン２００ωｇ
とを３０％口ＭＳＯを含む１５ａ＋Ｍリン酸緩衝液（ｐ
）１６．０）５ｄに溶解し、ストレプトミセス　グリシ
ウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓａｕｓ　）
の生産するマルトトリオース生成アミラーゼ５ユニツト
（１％可溶性澱粉を基質として３０℃で１分間に１μ賛
のグルコシド結合を分解する酵素量を１ユニツトとして
計算する。以下同様）を加え、４０℃で８０時間反応後
、反応を煮沸により停止した。反応液をダウエックス５
０１１　ｘ１２（Ｈ”　）に供し、カラムを水で充分に
洗浄後、吸着部を０．５Ｎアンモニア水で溶出した。溶出部を濃縮後、セミ分取用Ｐ−ＮＴｏカラムによる高
速液体クロマトグラフィーにより単離し、目的物５０ｍ
ｇを得た。融点１８０〜１８５℃（分解）。旋光度（２４℃、水、１％）　　＋１０６．９＠元素分
析値（Ｃ＊−Ｈ＊ｓＯ＋ｓＮ・２Ｔｏ口）計算値（％）
　　Ｃ：４２．０４Ｈ：６．９１　　Ｎ：２，０４実Ｉ
（％）　　Ｃ：４２．４０Ｈ：６．９１　　Ｎ：２．２
１実施例２マルトトリオシルモラノリンマルトペンタオース４３０ｍｇと、モラノリン１７Ｇｍ
ｇとを５０％ＤＭＳＯを含む１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ９，０）５−に溶解し、シュードモナス　ストッツエ
リイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｔｕｚｅｒｉ）の生
産するマルトテトラオース生成アミラーゼ５ユニツトを
加え、４０℃で５０時間反応後、反応を煮沸により停止
した。反応液をダウエックス５０１１　Ｘ１２（Ｈ”　
）に供し、カラムを水で充分に洗浄後、吸着部を０．５
Ｎアンモニア水で溶出した。溶出部を濃縮後、セミ分取
用Ｐ−ＮＨ，カラムによる高速液体クロマトグラフィー
により単離し、目的物４ｈｇを得た。融点１８５〜１９２℃（分解）。旋光度（２４℃、水、１％）　　＋１６６．３゜元素分
析値（Ｃｓ。Ｈｓ＝Ｏ＊ａＮ・　２．５ｏ＊ｏ）計算値
（％）　　Ｃ：４２．０５Ｈ：６．８２　　Ｎ：１．６
３実測値（％）　　Ｃ：４１．８８Ｈ：６．７８　　Ｎ
：１．９２実施例３マルトペンタオシル　Ｎ−メチルモラノリンマルトヘン
タオース４００ｍｇと、グルコシル　Ｎ−メチルモラノ
リン４００ｍｇとシュードモナス　ストッツエリイ（Ｐ
ｓａｕｄｏａ＋ｏｎａｓ　５ｔｕｚｅｒｉ）の生産する
マルトテトラオース生成アミラーゼ５ユニツトを３０％
メタノールを含む１５ｍＭＩＪン酸緩衡液（ｐＨ９，０
）　５ｄに溶解し、３０℃で５０時間反反応後反応を煮
沸により停止した。反応液を実施例１と同様に処理して
、目的物３０Ｉ！Ｉｇを得た。融点２００〜２０５℃（分解）。旋光度（２４℃、水、１％’）　　＋１６１．１”元素
分析値（ＣｓｑＨｓｓｏ　ｚ＊Ｎ　・３　Ｌ口）計算値
（％）　　Ｃ：４２．６５Ｈ：６，８７　　Ｎ二１，３
４実測値（％’）　　Ｃニア４２．４３Ｈ：６．９１　
　Ｎ：１．５２実施例４マルトトリオース　Ｎ−メチルモラノリンマルトトリオ
ース４００＋ｎｇと、マルトペンタオシル　Ｎ−メチル
モラノリン２００ａ＋ｇとストレプトミセス　グリシウ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ　）の
生産するマルトトリオース生成アミラーゼ５ユニツトを
３０％ＤＭＳＯを含む１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，
０）　５ｍに溶解し、４０℃で８０時間反応後、反応を
煮沸により停止した。反応液を実施例１と同様に処理し
て、目的物２０ｎｇを得た。融点２００〜２０５℃（分解）。旋光度（２４℃、水、１％）　　＋１６２．０”元素分
析値（ＣｓｓＨ□０．４Ｎ・３　）１１０）計算値（％
）　　Ｃ：４３．２２Ｈ：６．６８　　Ｎ：０．９２実
測値（％）　　Ｃ：４２．７７Ｈ：６．８５　　Ｎ：０
．９０実施例５マルトトリオース　Ｎ−（ｎ−プロピル）モラノリマル
トペンタオース４０ｈｇと、マルトトリオシル　Ｎ−（
ｎ−プロピル）モラノリン４００ωｇとシェードモナス
　ストッツエリイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｔｕｚ
ｅｒｉ）の生産するマルトテトラオース生成アミラーゼ
５ユニツトを３０％メタノールを含む１５＋ｓＭリン酸
緩衝液（ｐＨ９，０＞　５−に溶解し、３０℃で５０時
間反反応後反応を煮沸により停止した。反応液を実施例
１と同様に処理して、目的物２７ｍｇを得た。融点２０２〜２０８℃（分解）。旋光度（２４℃、水、１％”）　　＋１５３．０゜元素
分析値（Ｃｓ＋ＨｓｓＯｓ＊Ｎ・３　Ｈ，０）計算値（
％）　　Ｃ：４３．９３Ｈ：８．８７　　Ｎ：１．０１
実測値（％）　　Ｃ：４３．７７Ｈニア、２１　　Ｎ：
０．８８以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）［１］次の一般式〔II〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔II〕〔式中、Ｒ＾２は水素又は低級アルキルを表す。〕で表
されるモラノリン若しくはその誘導体、［２］次の一般
式〔III〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔III〕〔式中、Ｒ＾３は水素又は低級アルキルを表す。ｍは０
〜１５の整数を表す。〕で表されるモラノリン誘導体、の上記［１］又は［２］と、マルトオリゴ糖又はアミラ
ーゼによってマルトオリゴ糖に変換することができる物
質とを、親水性溶媒と水との混合溶媒中で、アミラーゼ
を用いて、反応させることを特徴とする、次の一般式〔
I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔 I 〕〔式中、Ｒ＾１は水素又は低級アルキルを表す。ｎは０
〜２０の整数を表す。〕で表されるモラノリン誘導体の
製法。