JP3185423B2 - 酵素保存剤 - Google Patents
酵素保存剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、安定的に酵素を保存す
るために用いる酵素保存剤に関する。さらに詳しくはポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩を有効成分とする酵素保
存剤であって、酵素液および酵素保存液中に混在する微
生物の増殖により酵素が失活するのを防止するための酵
素保存剤に関する。
るために用いる酵素保存剤に関する。さらに詳しくはポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩を有効成分とする酵素保
存剤であって、酵素液および酵素保存液中に混在する微
生物の増殖により酵素が失活するのを防止するための酵
素保存剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】酵素を溶解した酵素液を保存する場合に
種々の微生物が該酵素液中に混在し、増殖することによ
り酵素の失活が起こる。このため、２〜４℃程度の低温
で保存すること行われているが、その場合でも長期間の
保存はできないのが現状である。また、固定化酵素など
の保存には、該固定化酵素保存液中に抗生物質や抗菌剤
を添加する方法が知られている。しかしながら、これら
の抗生物質や抗菌剤は、酵素反応に用いる酵素の阻害剤
となるものが多く、酵素反応自体を阻害し有用物質の生
産が行えなくなる場合があり、このため酵素反応を行う
前にこれら抗生物質や抗菌剤を除去する必要がある。ま
た、通常用いらる抗菌剤としてアジ化ナトリウムが知ら
れているが該アジ化ナトリウムは人体に対して有害であ
り、酵素反応は阻害しなくとも反応生成物の分離、生成
の段階で反応生成物から完全に除去することが必要とな
る。これらを除去するための操作によって反応生成物の
収率の低下が引き起こされる場合もある。このように酵
素保存剤として十分な保存効果を持ち、安全でかつ酵素
反応を阻害しないという条件を満足する酵素保存剤は今
までのところ知られていない。
種々の微生物が該酵素液中に混在し、増殖することによ
り酵素の失活が起こる。このため、２〜４℃程度の低温
で保存すること行われているが、その場合でも長期間の
保存はできないのが現状である。また、固定化酵素など
の保存には、該固定化酵素保存液中に抗生物質や抗菌剤
を添加する方法が知られている。しかしながら、これら
の抗生物質や抗菌剤は、酵素反応に用いる酵素の阻害剤
となるものが多く、酵素反応自体を阻害し有用物質の生
産が行えなくなる場合があり、このため酵素反応を行う
前にこれら抗生物質や抗菌剤を除去する必要がある。ま
た、通常用いらる抗菌剤としてアジ化ナトリウムが知ら
れているが該アジ化ナトリウムは人体に対して有害であ
り、酵素反応は阻害しなくとも反応生成物の分離、生成
の段階で反応生成物から完全に除去することが必要とな
る。これらを除去するための操作によって反応生成物の
収率の低下が引き起こされる場合もある。このように酵
素保存剤として十分な保存効果を持ち、安全でかつ酵素
反応を阻害しないという条件を満足する酵素保存剤は今
までのところ知られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】このようなことから酵
素液の保存中に、酵素液および酵素保存液中に混在する
微生物の増殖により酵素が失活するのを防止するととも
に、酵素液または酵素保存液をそのまま酵素反応に供し
ても該酵素反応を阻害せず、反応生成物との分離も容易
な酵素保存剤が求められてきた。本発明は、これらの課
題を解決し、酵素液および酵素保存液中に混在する微生
物の増殖によって酵素が失活するのを防ぎ、安定的な酵
素反応を行わせるとともに反応生成物との分離も容易で
ある酵素保存剤を提供することを目的とする。
素液の保存中に、酵素液および酵素保存液中に混在する
微生物の増殖により酵素が失活するのを防止するととも
に、酵素液または酵素保存液をそのまま酵素反応に供し
ても該酵素反応を阻害せず、反応生成物との分離も容易
な酵素保存剤が求められてきた。本発明は、これらの課
題を解決し、酵素液および酵素保存液中に混在する微生
物の増殖によって酵素が失活するのを防ぎ、安定的な酵
素反応を行わせるとともに反応生成物との分離も容易で
ある酵素保存剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、酵素液および
酵素保存液中の酵素を保存するに際し、ポリ−Ｌ−リジ
ンもしくはその塩を有効成分とする酵素保存剤およびそ
れを用いた保存方法を要旨とする。以下、本発明につい
て詳述する。本発明の酵素保存剤は、酵素液および酵素
保存液中の酵素を保存するに際し、酵素液および酵素保
存液中に添加することで効果を発揮する。また、本発明
の酵素保存剤は、酵素反応中に残存することによって酵
素反応中での混在する微生物の増殖も抑制することがで
きる。また、本発明の酵素保存剤は、酵素反応に対して
阻害がなく、反応前に除去する必要はない。
酵素保存液中の酵素を保存するに際し、ポリ−Ｌ−リジ
ンもしくはその塩を有効成分とする酵素保存剤およびそ
れを用いた保存方法を要旨とする。以下、本発明につい
て詳述する。本発明の酵素保存剤は、酵素液および酵素
保存液中の酵素を保存するに際し、酵素液および酵素保
存液中に添加することで効果を発揮する。また、本発明
の酵素保存剤は、酵素反応中に残存することによって酵
素反応中での混在する微生物の増殖も抑制することがで
きる。また、本発明の酵素保存剤は、酵素反応に対して
阻害がなく、反応前に除去する必要はない。
【０００５】本発明の酵素保存剤は、例えばアミラー
ゼ、セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシ
ロースイソメラーゼもしくはサイクロデキストリングル
コトランスフェラーゼ等の酵素の保存に用いることがで
きる。
ゼ、セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシ
ロースイソメラーゼもしくはサイクロデキストリングル
コトランスフェラーゼ等の酵素の保存に用いることがで
きる。
【０００６】アミラーゼには、α−アミラーゼ、マルト
トリオース生成α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グル
コアミラーゼ、α−１，６−グルコシダーゼ、アミロ−
１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−１，６−グルコシダ
ーゼ等がある。食品工業的には、α−アミラーゼを用い
た澱粉の液化、マルトトリオースの製造が知られてい
る。また、β−アミラーゼはマルトースの製造の他、水
あめの製造、餅の老化防止、製パン、製菓、酒の醸造に
用いられている。グルコアミラーゼは、澱粉をグルコー
ス単位に分解する酵素でグルコースの製造に用いられて
いる。α−１，６−グルコシダーゼは、プルラナーゼと
も呼ばれる酵素でグルコース、マルトースの製造に用い
られる。アミロ−１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−
１，６−グルコシダーゼは、α−１，６結合を切断した
り、分枝の側鎖を切る酵素である。
トリオース生成α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グル
コアミラーゼ、α−１，６−グルコシダーゼ、アミロ−
１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−１，６−グルコシダ
ーゼ等がある。食品工業的には、α−アミラーゼを用い
た澱粉の液化、マルトトリオースの製造が知られてい
る。また、β−アミラーゼはマルトースの製造の他、水
あめの製造、餅の老化防止、製パン、製菓、酒の醸造に
用いられている。グルコアミラーゼは、澱粉をグルコー
ス単位に分解する酵素でグルコースの製造に用いられて
いる。α−１，６−グルコシダーゼは、プルラナーゼと
も呼ばれる酵素でグルコース、マルトースの製造に用い
られる。アミロ−１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−
１，６−グルコシダーゼは、α−１，６結合を切断した
り、分枝の側鎖を切る酵素である。
【０００７】セルラーゼには、セルラーゼ、ヘミセルラ
ーゼがあり、食品工業的には、澱粉の製造、野菜や果実
の処理、穀類や豆類の処理のほか、コーヒーのガム質分
解、ゲル化防止に用いられる。また、ペクチナーゼに
は、プロトペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリ
ガラクチュロナーゼ等がある。これらの工業的な利用分
野は、果汁の加工、クエン酸製造、果実、野菜の加工が
ある。キシロースイソメラーゼは、工業的にはグルコー
スイソメラーゼと呼ばれる酵素でグルコースを異性化し
異性化糖を製造するのに用いられる。サイクロデキスト
リングルコトランスフェラーゼは、澱粉よりサイクロデ
キストリンを製造するのに用いられる酵素である。
ーゼがあり、食品工業的には、澱粉の製造、野菜や果実
の処理、穀類や豆類の処理のほか、コーヒーのガム質分
解、ゲル化防止に用いられる。また、ペクチナーゼに
は、プロトペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリ
ガラクチュロナーゼ等がある。これらの工業的な利用分
野は、果汁の加工、クエン酸製造、果実、野菜の加工が
ある。キシロースイソメラーゼは、工業的にはグルコー
スイソメラーゼと呼ばれる酵素でグルコースを異性化し
異性化糖を製造するのに用いられる。サイクロデキスト
リングルコトランスフェラーゼは、澱粉よりサイクロデ
キストリンを製造するのに用いられる酵素である。
【０００８】インベルターゼは、サッカラーゼとも言わ
れ、シュークロースをフラクトースとグルコースに切る
酵素である。シュークロースをフラクトース側から切る
β−フラクトフラノシダーゼとグルコース側から切るα
−グルコシダーゼがある。β−フラクトフラシノダーゼ
は、転化糖の製造に用いられる。また、α−グルコシダ
ーゼは、転化糖の製造の他、マルトースに作用させてイ
ソマルトースを製造するのにも利用されている。
れ、シュークロースをフラクトースとグルコースに切る
酵素である。シュークロースをフラクトース側から切る
β−フラクトフラノシダーゼとグルコース側から切るα
−グルコシダーゼがある。β−フラクトフラシノダーゼ
は、転化糖の製造に用いられる。また、α−グルコシダ
ーゼは、転化糖の製造の他、マルトースに作用させてイ
ソマルトースを製造するのにも利用されている。
【０００９】本発明の酵素保存剤を酵素液および酵素保
存液中に添加する場合、酵素液および酵素保存液に対
し、ポリ−Ｌ−リジンとして０．００１〜１０重量％添
加するのが望ましい。１０重量％を超えて添加すると、
得られた反応生成物を精製する場合、収率低下を起こす
場合があり、また、保存効果が飽和しこれ以上の保存効
果の向上が得られなく、不経済である。
存液中に添加する場合、酵素液および酵素保存液に対
し、ポリ−Ｌ−リジンとして０．００１〜１０重量％添
加するのが望ましい。１０重量％を超えて添加すると、
得られた反応生成物を精製する場合、収率低下を起こす
場合があり、また、保存効果が飽和しこれ以上の保存効
果の向上が得られなく、不経済である。
【００１０】本発明に用いられるポリ−Ｌ−リジンは、
例えば特公昭５９−２０３５９号公報に記載のε−ポリ
−Ｌ−リジンの製造法によって得ることができる。すな
わち、ストレプトマイセス属に属するε−ポリ−Ｌ−リ
ジン生産菌であるストレプトマイセス・アルブラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラスを培地に培養し、得
られた培養物からε−ポリ−Ｌ−リジンを分離、採取す
ることによって得られる。
例えば特公昭５９−２０３５９号公報に記載のε−ポリ
−Ｌ−リジンの製造法によって得ることができる。すな
わち、ストレプトマイセス属に属するε−ポリ−Ｌ−リ
ジン生産菌であるストレプトマイセス・アルブラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラスを培地に培養し、得
られた培養物からε−ポリ−Ｌ−リジンを分離、採取す
ることによって得られる。
【００１１】Ｌ−リジンは１分子中に２つのアミノ基を
有するアミノ酸であり、これから得られるポリ−Ｌ−リ
ジンは一般にα位のアミノ基とカルボキシル基とが縮合
したα−ポリ−Ｌ−リジンと、ε位のアミノ基とカルボ
キシル基とが縮合したε−ポリ−Ｌ−リジンとの２種類
が存在するが、本発明では上述の製造法により得られる
ε−ポリ−Ｌ−リジンを用いるのが安全性の面から好ま
しい。
有するアミノ酸であり、これから得られるポリ−Ｌ−リ
ジンは一般にα位のアミノ基とカルボキシル基とが縮合
したα−ポリ−Ｌ−リジンと、ε位のアミノ基とカルボ
キシル基とが縮合したε−ポリ−Ｌ−リジンとの２種類
が存在するが、本発明では上述の製造法により得られる
ε−ポリ−Ｌ−リジンを用いるのが安全性の面から好ま
しい。
【００１２】本発明にあっては、ポリ−Ｌ−リジンは遊
離の形で用いることができるが、塩酸、硫酸、リン酸な
どの無機酸もしくは酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リ
ンゴ酸、クエン酸などの有機酸との塩の形で用いること
もできる。ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形であれ、上述の
無機酸もしくは有機酸との塩の形であれ、酵素保存剤と
しての効果には本質的に差はないが、遊離の形のポリ−
Ｌ−リジンの方が、水溶性に優れている。
離の形で用いることができるが、塩酸、硫酸、リン酸な
どの無機酸もしくは酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リ
ンゴ酸、クエン酸などの有機酸との塩の形で用いること
もできる。ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形であれ、上述の
無機酸もしくは有機酸との塩の形であれ、酵素保存剤と
しての効果には本質的に差はないが、遊離の形のポリ−
Ｌ−リジンの方が、水溶性に優れている。
【００１３】また、本発明に用いるポリ−Ｌ−リジン
は、その微生物増殖阻害活性から重合度１０以上のもの
が望ましい。特に重合度２０〜４０程度のものが水溶
性、化合物としての安定性、微生物増殖阻害活性の上か
ら望ましい。
は、その微生物増殖阻害活性から重合度１０以上のもの
が望ましい。特に重合度２０〜４０程度のものが水溶
性、化合物としての安定性、微生物増殖阻害活性の上か
ら望ましい。
【００１４】本発明の酵素保存剤を添加した酵素液およ
び酵素を用いて、酵素反応を行ったあと、得られた反応
生成物を分離精製する場合は、反応生成物各々にあった
定法の方法により分離精製を行う。この場合、本発明の
酵素保存剤の除去は、本発明の酵素保存剤が強いカチオ
ン性の物質であることを利用し、イオン交換樹脂を用い
て容易に分離、除去することができる。
び酵素を用いて、酵素反応を行ったあと、得られた反応
生成物を分離精製する場合は、反応生成物各々にあった
定法の方法により分離精製を行う。この場合、本発明の
酵素保存剤の除去は、本発明の酵素保存剤が強いカチオ
ン性の物質であることを利用し、イオン交換樹脂を用い
て容易に分離、除去することができる。
【００１５】
【実施例】以下、本発明の実施例を用い、その詳細を説
明する。なお、本実施例は本発明をなんら限定するもの
ではない。
明する。なお、本実施例は本発明をなんら限定するもの
ではない。
【００１６】実施例１ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにα−アミ
ラーゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍｇを１６ｍＭ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解した。該液を２０℃で
３分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマ
ルトース量を測定した。生成したマルトース量は３ｍｇ
であった。
ラーゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍｇを１６ｍＭ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解した。該液を２０℃で
３分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマ
ルトース量を測定した。生成したマルトース量は３ｍｇ
であった。
【００１７】比較例１ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにα−アミ
ラーゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置
した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍ
ｇを１６ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解し
た。該液を２０℃で３分間反応させた。反応終了後、該
液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。マルトース
の生成は認められなかった。
ラーゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置
した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍ
ｇを１６ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解し
た。該液を２０℃で３分間反応させた。反応終了後、該
液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。マルトース
の生成は認められなかった。
【００１８】実施例２ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにα−アミ
ラ−ゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩０．
５ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓ１０3個を接種し、３０℃で２４時間放置した。そ
の後該液を０．４５μｍメンブレンフィルタ−でろ過し
た。該ろ液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍｇを１６ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解した。該液を
２０℃で３分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブ
レンフィルタ−でろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法
によりマルト−スの生成量を測定した。生成したマルト
−ス量は３ｍｇであった。
ラ−ゼ（和光純薬製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ由来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩０．
５ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓ１０3個を接種し、３０℃で２４時間放置した。そ
の後該液を０．４５μｍメンブレンフィルタ−でろ過し
た。該ろ液０．１ｍｌと、可溶性澱粉１０ｍｇを１６ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）１ｍｌに溶解した。該液を
２０℃で３分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブ
レンフィルタ−でろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法
によりマルト−スの生成量を測定した。生成したマルト
−ス量は３ｍｇであった。
【００１９】実施例３ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに糖化型α−アミラーゼ
（生化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由
来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶
解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3
個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。このろ
過液０．１ｍｌとマルトース３００ｍｇ（和光純薬製）
を２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を
含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した液を混合
し、６０℃２４時間反応させた。反応終了後、沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレン
フィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマトグラフィ
ー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコ
ース量を測定した。生成したグルコースは、２６０ｍｇ
であった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに糖化型α−アミラーゼ
（生化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由
来）１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶
解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3
個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。このろ
過液０．１ｍｌとマルトース３００ｍｇ（和光純薬製）
を２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を
含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した液を混合
し、６０℃２４時間反応させた。反応終了後、沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレン
フィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマトグラフィ
ー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコ
ース量を測定した。生成したグルコースは、２６０ｍｇ
であった。
【００２０】比較例２ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに糖化型α−アミラーゼ
（生化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由
来）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放
置した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルタ
ーでろ過した。このろ過液０．１ｍｌとマルトース３０
０ｍｇ（和光純薬製）を２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解した液を混合し、６０℃２４時間反応させた。
反応終了後、沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高
速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ
１０１１）によりグルコース量を測定した。グルコース
の生成は認められなかった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに糖化型α−アミラーゼ
（生化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由
来）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放
置した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルタ
ーでろ過した。このろ過液０．１ｍｌとマルトース３０
０ｍｇ（和光純薬製）を２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解した液を混合し、６０℃２４時間反応させた。
反応終了後、沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高
速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ
１０１１）によりグルコース量を測定した。グルコース
の生成は認められなかった。
【００２１】実施例４ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにβ−アミラーゼ（天野
製薬製）１０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍ
ｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓを１０3個接種し、３０℃２４時間放置した。放
置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過
した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍｇを２
０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む
緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した液を混合し、３
０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレン
フィルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によ
りマルトース量を測定した。生成したマルトース量は７
ｍｇであった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにβ−アミラーゼ（天野
製薬製）１０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍ
ｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓを１０3個接種し、３０℃２４時間放置した。放
置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過
した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍｇを２
０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む
緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した液を混合し、３
０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレン
フィルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によ
りマルトース量を測定した。生成したマルトース量は７
ｍｇであった。
【００２２】比較例３ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにβ−アミラーゼ（天野
製薬製）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌ
ｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２４時
間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフ
ィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱
粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃
度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した
液を混合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、
該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。マルトース
の生成は認められなかった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにβ−アミラーゼ（天野
製薬製）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌ
ｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２４時
間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフ
ィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱
粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃
度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解した
液を混合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、
該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。マルトース
の生成は認められなかった。
【００２３】実施例５ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにグルコアミラーゼ＋α
−１，６グルコシダーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ
［商品名］）１０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．
１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解し溶液を混合
し、３０℃２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は８ｍ
ｇであった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにグルコアミラーゼ＋α
−１，６グルコシダーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ
［商品名］）１０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．
１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解し溶液を混合
し、３０℃２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は８ｍ
ｇであった。
【００２４】比較例４ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにグルコアミラーゼ＋α
−１，６グルコシダーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ
［商品名］）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２
４時間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレ
ンフィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶
性澱粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍ
Ｍ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解
し溶液を混合し、３０℃２日間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．
４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速
液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１
０１１）によりグルコース量を測定した。グルコースの
生成は認められなかった。
む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにグルコアミラーゼ＋α
−１，６グルコシダーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ
［商品名］）１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓを１０3 個接種し、３０℃２
４時間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレ
ンフィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶
性澱粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍ
Ｍ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌに溶解
し溶液を混合し、３０℃２日間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．
４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速
液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１
０１１）によりグルコース量を測定した。グルコースの
生成は認められなかった。
【００２５】実施例６ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌにα−グルコシダーゼ
（フナコシ製）１ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．
１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌに溶解した溶液を混
合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を
沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１８２１）に
よりマルトトリオース量を測定した。生成したマルトト
リオース量は１ｍｇであった。
む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌにα−グルコシダーゼ
（フナコシ製）１ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．
１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶性澱粉１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌに溶解した溶液を混
合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を
沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１８２１）に
よりマルトトリオース量を測定した。生成したマルトト
リオース量は１ｍｇであった。
【００２６】比較例５ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌにα−グルコシダーゼ
（フナコシ製）１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２
４時間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレ
ンフィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶
性澱粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍ
Ｍ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌに溶解
した溶液を混合し、３０℃で２日間反応させた。反応終
了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製Ｓ
Ｃ１８２１）によりマルトトリオース量を測定した。マ
ルトトリオースの生成は認められなかった。
む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌにα−グルコシダーゼ
（フナコシ製）１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２
４時間放置した。放置後、該液を０．４５μｍメンブレ
ンフィルターでろ過した。このろ過液０．１ｍｌと可溶
性澱粉１０ｍｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍ
Ｍ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍｌに溶解
した溶液を混合し、３０℃で２日間反応させた。反応終
了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製Ｓ
Ｃ１８２１）によりマルトトリオース量を測定した。マ
ルトトリオースの生成は認められなかった。
【００２７】実施例７ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌにキシロースイソメラー
ゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１
０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後、該液
を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。この
ろ過液０．１ｍｌとグルコース１０ｍｇを２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．８）１ｍｌに溶解した溶液を混合し、３０℃で２
日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー
法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりフラクト
ースおよびグルコース量を定量し、フラクトース含有率
を求めた。フラクトース含有率は３５％であった。
む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌにキシロースイソメラー
ゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１
０ｍｇおよびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後、該液
を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。この
ろ過液０．１ｍｌとグルコース１０ｍｇを２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．８）１ｍｌに溶解した溶液を混合し、３０℃で２
日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー
法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりフラクト
ースおよびグルコース量を定量し、フラクトース含有率
を求めた。フラクトース含有率は３５％であった。
【００２８】比較例６ ２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含
む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌにキシロースイソメラー
ゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１
０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌとグルコース１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌに溶解した溶液を混
合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を
沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍ
メンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロ
マトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）
によりフラクトースおよびグルコース量を定量し、フラ
クトース含有率を求めた。フラクトースおよびグルコー
スの生成は認められなかった。
む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌにキシロースイソメラー
ゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１
０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃ
ｅｒｅｕｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置し
た。放置後、該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。このろ過液０．１ｍｌとグルコース１０ｍ
ｇを２０ｍＭ濃度のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩
を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌに溶解した溶液を混
合し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を
沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍ
メンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロ
マトグラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）
によりフラクトースおよびグルコース量を定量し、フラ
クトース含有率を求めた。フラクトースおよびグルコー
スの生成は認められなかった。
【００２９】実施例８ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにセルラー
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．
５ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置
後該液を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。該ろ過液０．１ｍｌと、アビセル（ＦＭＣ ｃｏｒ
ｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）
１ｍｌに溶解した。該液を３０℃で６０分間反応させ
た。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を
停止させ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭
和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコース量を測定し
た。生成したグルコース量は５ｍｇであった。
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．
５ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置
後該液を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。該ろ過液０．１ｍｌと、アビセル（ＦＭＣ ｃｏｒ
ｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）
１ｍｌに溶解した。該液を３０℃で６０分間反応させ
た。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を
停止させ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭
和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコース量を測定し
た。生成したグルコース量は５ｍｇであった。
【００３０】比較例７ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにセルラー
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉ
ｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４
時間放置した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフ
ィルターでろ過した。該ろ過液０．１ｍｌと、アビセル
（ＦＭＣｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）１ｍｌに溶解した。該液を３０℃で６０
分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー
法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコー
ス量を測定した。グルコースの生成は認められなかっ
た。
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉ
ｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４
時間放置した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフ
ィルターでろ過した。該ろ過液０．１ｍｌと、アビセル
（ＦＭＣｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）１ｍｌに溶解した。該液を３０℃で６０
分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー
法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）によりグルコー
ス量を測定した。グルコースの生成は認められなかっ
た。
【００３１】実施例９ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにインベル
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液０．１ｍｌとシュークロース１０ｍｇ（和光純薬製）
を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．６）１ｍｌに溶解し、
３０℃で６０分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は５ｍ
ｇであった。
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０
3個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液０．１ｍｌとシュークロース１０ｍｇ（和光純薬製）
を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．６）１ｍｌに溶解し、
３０℃で６０分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー法（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は５ｍ
ｇであった。
【００３２】比較例８ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにインベル
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置
した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液０．１ｍｌとシュークロース１０
ｍｇ（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
６）１ｍｌに溶解し、３０℃で６０分間反応させた。反
応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
し、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工
製ＳＣ１０１１）によりグルコース量を測定した。グル
コースの生成は認められなかった。
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種し、３０℃２４時間放置
した。放置後該液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液０．１ｍｌとシュークロース１０
ｍｇ（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
６）１ｍｌに溶解し、３０℃で６０分間反応させた。反
応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
し、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工
製ＳＣ１０１１）によりグルコース量を測定した。グル
コースの生成は認められなかった。
【００３３】実施例１０ サイクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ
（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ／ml］
を３mlにε−ポリ−Ｌ−リジン２５ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 を接
種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過液２ｍｌ
と可溶性澱粉１０ｇを２０ｍＭリン酸６．７ｍＭ食塩緩
衝液（ｐＨ７．５）５０mlに溶解、混合し、６５℃で４
０時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放置し
た。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カ
ラム：昭和電工製ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）によりサイ
クロデキストリン量を測定した。α−、β−およびγ−
サイクロデキストリンの総生成量は７ｇであった。
（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ／ml］
を３mlにε−ポリ−Ｌ−リジン２５ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3 を接
種し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過液２ｍｌ
と可溶性澱粉１０ｇを２０ｍＭリン酸６．７ｍＭ食塩緩
衝液（ｐＨ７．５）５０mlに溶解、混合し、６５℃で４
０時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放置し
た。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カ
ラム：昭和電工製ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）によりサイ
クロデキストリン量を測定した。α−、β−およびγ−
サイクロデキストリンの総生成量は７ｇであった。
【００３４】比較例９ サイクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ
（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ／ml］
３mlにＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種
し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を０．４５μ
ｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過液２ｍｌと
可溶性澱粉１０ｇを２０ｍＭリン酸６．７ｍＭ食塩緩衝
液（ｐＨ７．５）５０mlに溶解、混合し、６５℃で４０
時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放置し
た。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィーにより
サイクロデキストリン量を測定した。サイクロデキスト
リンの生成は認められなかった。
（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ／ml］
３mlにＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ１０3個を接種
し、３０℃２４時間放置した。放置後該液を０．４５μ
ｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過液２ｍｌと
可溶性澱粉１０ｇを２０ｍＭリン酸６．７ｍＭ食塩緩衝
液（ｐＨ７．５）５０mlに溶解、混合し、６５℃で４０
時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放置し
た。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィーにより
サイクロデキストリン量を測定した。サイクロデキスト
リンの生成は認められなかった。
【００３５】実施例１１ ２０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）２ｍｌにペ
クチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結乾燥品）を２
０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ
１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液１ｍｌとポリガラクツロン酸（フナコシ製）１ｇを２
０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解した溶
液を混合し、３７℃で２４時間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー法（カラム：ＹＭＣ製Ｄｉ
ｏｌ−１２０）によりガラクツロン酸量を測定した。生
成したガラクツロン酸は、４５０ｍｇであった。
クチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結乾燥品）を２
０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ
１０3 個を接種し、３０℃２４時間放置した。放置後
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。該ろ過
液１ｍｌとポリガラクツロン酸（フナコシ製）１ｇを２
０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解した溶
液を混合し、３７℃で２４時間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー法（カラム：ＹＭＣ製Ｄｉ
ｏｌ−１２０）によりガラクツロン酸量を測定した。生
成したガラクツロン酸は、４５０ｍｇであった。
【００３６】比較例１０ ２０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）２ｍｌにペ
クチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結乾燥品）を２
０ｍｇを加え、溶解した。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時
間放置した。放置後０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液１ｍｌとポリガラクツロン酸（フ
ナコシ製）１ｇを２０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ
５．０）に溶解した溶液を混合し、３７℃で２４時間反
応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素
反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィルターで
ろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カラ
ム：ＹＭＣ製Ｄｉｏｌ−１２０）によりガラクツロン酸
量を測定した。ガラクツロン酸の生成は認められなかっ
た。
クチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結乾燥品）を２
０ｍｇを加え、溶解した。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ１０3 個を接種し、３０℃２４時
間放置した。放置後０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。該ろ過液１ｍｌとポリガラクツロン酸（フ
ナコシ製）１ｇを２０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ
５．０）に溶解した溶液を混合し、３７℃で２４時間反
応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素
反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィルターで
ろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法（カラ
ム：ＹＭＣ製Ｄｉｏｌ−１２０）によりガラクツロン酸
量を測定した。ガラクツロン酸の生成は認められなかっ
た。
【００３７】
【発明の効果】本発明の酵素保存剤は、ポリ−Ｌ−リジ
ンを有効成分とすることにより、酵素液および酵素保存
液中に混在する微生物の増殖による酵素の失活を防止す
ると共に酵素反応阻害がなく、反応生成物との分離除去
も容易であり、酵素保存剤として好適に使用できる。
ンを有効成分とすることにより、酵素液および酵素保存
液中に混在する微生物の増殖による酵素の失活を防止す
ると共に酵素反応阻害がなく、反応生成物との分離除去
も容易であり、酵素保存剤として好適に使用できる。
Claims (6)
- 【請求項１】ポリ−Ｌ−リジンもしくはその塩を有効成
分とする酵素保存剤。 - 【請求項２】保存する酵素がアミラーゼ、セルラーゼ、
インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシロースイソメラー
ゼ、サイクロデキストリングルコシルトランスフェラー
ゼである請求項１記載の酵素保存剤。 - 【請求項３】ポリ−Ｌ−リジンもしくはその塩がε−ポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩である請求項１記載の酵
素保存剤。 - 【請求項４】ポリ−Ｌ−リジンの塩が塩酸、硫酸、リン
酸および臭化水素酸のなかから選ばれる無機酸または酢
酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸およびクエン酸
のなかから選ばれる有機酸である請求項１記載の酵素保
存剤。 - 【請求項５】酵素液および酵素保存液中にポリ−Ｌ−リ
ジンもしくはその塩を添加することによって混在する微
生物の増殖による酵素の失活を防止し、安定的に酵素を
保存する方法。 - 【請求項６】酵素液および酵素保存液中にポリ−Ｌ−リ
ジンもしくはその塩０．００１重量％〜１０重量％を添
加することを特徴とする請求項５記載の酵素を保存する
方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33967292A JP3185423B2 (ja) | 1992-11-26 | 1992-11-26 | 酵素保存剤 |
| DE69331597T DE69331597T2 (de) | 1992-11-25 | 1993-11-25 | Methoden und Verwendung von poly-L-lysine als Enzymschutzmittel |
| EP93309433A EP0599652B1 (en) | 1992-11-25 | 1993-11-25 | Methods and uses of poly-L-lysine as enzyme preservative |
| US08/338,269 US5674726A (en) | 1992-11-25 | 1994-11-14 | Enzyme stabilization with poly-L-lysine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33967292A JP3185423B2 (ja) | 1992-11-26 | 1992-11-26 | 酵素保存剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06153948A JPH06153948A (ja) | 1994-06-03 |
| JP3185423B2 true JP3185423B2 (ja) | 2001-07-09 |
Family
ID=18329712
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33967292A Expired - Fee Related JP3185423B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-26 | 酵素保存剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3185423B2 (ja) |
-
1992
- 1992-11-26 JP JP33967292A patent/JP3185423B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06153948A (ja) | 1994-06-03 |
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