JP3120607B2 - 酵素反応安定化剤 - Google Patents
酵素反応安定化剤Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、酵素反応により有用な
物質を製造するにあたり、安定的に酵素反応を行わせ、
有用物質を安定的に製造するために用いる酵素反応安定
化剤に関する。さらに詳しくは、ポリ−Ｌ−リジンもし
くはその塩を有効成分とし、アミラーゼ、セルラーゼ、
インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシロースイソメラー
ゼもしくはサイクロデキストリングルコシルトランスフ
ェラーゼを用いた酵素反応の酵素反応安定化剤であっ
て、酵素反応生成物精製過程を含む酵素反応中に混在す
る微生物の増殖による酵素の失活および酵素反応生成物
の分解を防止し、酵素反応を安定的に行わせるための酵
素反応安定化剤に関する。
物質を製造するにあたり、安定的に酵素反応を行わせ、
有用物質を安定的に製造するために用いる酵素反応安定
化剤に関する。さらに詳しくは、ポリ−Ｌ−リジンもし
くはその塩を有効成分とし、アミラーゼ、セルラーゼ、
インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシロースイソメラー
ゼもしくはサイクロデキストリングルコシルトランスフ
ェラーゼを用いた酵素反応の酵素反応安定化剤であっ
て、酵素反応生成物精製過程を含む酵素反応中に混在す
る微生物の増殖による酵素の失活および酵素反応生成物
の分解を防止し、酵素反応を安定的に行わせるための酵
素反応安定化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】酵素反応により有用な物質を生産する場
合、反応液中には種々の微生物の混在が混在し、増殖す
ることにより酵素の失活および反応生成物の分解などを
引き起こすことが知られている。従来、これらの対策と
して、耐熱性のアミラーゼを用いる方法が知られている
が６０℃の温度で酵素反応を行っても好熱性微生物の増
殖を完全に抑制することは困難であり、反応中での酵素
の失活および反応生成物の分解を防ぐのには十分でな
い。また酵素反応終了後反応生成物の精製のために酵素
反応液を冷却するがこのとき耐熱性芽胞菌が増殖し、反
応生成物の分離、精製の段階で反応生成物が分解し、必
要とする有用な物質が安定的に高収率で得られないとい
った問題がある。
合、反応液中には種々の微生物の混在が混在し、増殖す
ることにより酵素の失活および反応生成物の分解などを
引き起こすことが知られている。従来、これらの対策と
して、耐熱性のアミラーゼを用いる方法が知られている
が６０℃の温度で酵素反応を行っても好熱性微生物の増
殖を完全に抑制することは困難であり、反応中での酵素
の失活および反応生成物の分解を防ぐのには十分でな
い。また酵素反応終了後反応生成物の精製のために酵素
反応液を冷却するがこのとき耐熱性芽胞菌が増殖し、反
応生成物の分離、精製の段階で反応生成物が分解し、必
要とする有用な物質が安定的に高収率で得られないとい
った問題がある。
【０００３】また、従来知られている抗生物質や抗菌剤
は、酵素反応に用いる酵素の阻害剤となるものが多く、
酵素反応自体を阻害し有用物質の生産が行えなくなった
り、また、酵素反応後反応液中から分離する際、容易に
反応生成物と分離できなくなるなどの問題がある。ま
た、リゾチームを用いる方法も知られているが、その安
定化効果が十分でなかったり、反応時の高温によるリゾ
チームの失活、反応生成物との分離が容易でないという
欠点を有している。このように酵素反応安定化剤として
現在十分な安定化効果を持つものは知られていない。
は、酵素反応に用いる酵素の阻害剤となるものが多く、
酵素反応自体を阻害し有用物質の生産が行えなくなった
り、また、酵素反応後反応液中から分離する際、容易に
反応生成物と分離できなくなるなどの問題がある。ま
た、リゾチームを用いる方法も知られているが、その安
定化効果が十分でなかったり、反応時の高温によるリゾ
チームの失活、反応生成物との分離が容易でないという
欠点を有している。このように酵素反応安定化剤として
現在十分な安定化効果を持つものは知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】このようなことから酵
素反応を行うにあたり混在する微生物の増殖による酵素
の失活および反応生成物の分解を防止するとともに反応
生成物との分離も容易な酵素反応安定化剤が求められて
きた。本発明は、これらの課題を解決し、酵素反応にお
いて混在する微生物の増殖による反応阻害を防ぎ、安定
的な酵素反応を可能にするとともに、反応生成物との分
離も容易な酵素反応安定化剤を提供することを目的とす
る。
素反応を行うにあたり混在する微生物の増殖による酵素
の失活および反応生成物の分解を防止するとともに反応
生成物との分離も容易な酵素反応安定化剤が求められて
きた。本発明は、これらの課題を解決し、酵素反応にお
いて混在する微生物の増殖による反応阻害を防ぎ、安定
的な酵素反応を可能にするとともに、反応生成物との分
離も容易な酵素反応安定化剤を提供することを目的とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、アミラーゼ、
セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシロー
スイソメラーゼもしくはサイクロデキストリングルコシ
ルトランスフェラーゼを用いた酵素反応に使用する、ポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩を有効成分とする酵素反
応安定化剤およびそれの使用方法を要旨とする。以下、
本発明について詳述する。本発明の酵素反応安定化剤
は、酵素反応を行うに際し、酵素反応液中に添加するこ
とで効果を発揮する。
セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、キシロー
スイソメラーゼもしくはサイクロデキストリングルコシ
ルトランスフェラーゼを用いた酵素反応に使用する、ポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩を有効成分とする酵素反
応安定化剤およびそれの使用方法を要旨とする。以下、
本発明について詳述する。本発明の酵素反応安定化剤
は、酵素反応を行うに際し、酵素反応液中に添加するこ
とで効果を発揮する。
【０００６】また、本発明の酵素反応安定化剤は、アミ
ラーゼ、セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、
キシロースイソメラーゼ、サイクロデキストリングルコ
トランスフェラーゼ等の酵素を用いた酵素反応に用い
る。また、本発明の酵素反応安定化剤は上述の酵素溶液
を用いた酵素反応だけでなく、上述の酵素を固定化した
固定化酵素を用いた反応にも用いることができる。以
上
ラーゼ、セルラーゼ、インベルターゼ、ペクチナーゼ、
キシロースイソメラーゼ、サイクロデキストリングルコ
トランスフェラーゼ等の酵素を用いた酵素反応に用い
る。また、本発明の酵素反応安定化剤は上述の酵素溶液
を用いた酵素反応だけでなく、上述の酵素を固定化した
固定化酵素を用いた反応にも用いることができる。以
上
【０００７】アミラーゼには、α−アミラーゼ、マルト
トリオース生成α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グル
コアミラーゼ、α−１，６−グルコシダーゼ、アミロ−
１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−１，６−グルコシダ
ーゼ等がある。食品工業的には、α−アミラーゼを用い
た澱粉の液化、マルトトリオースの製造が知られてい
る。また、β−アミラーゼはマルトースの製造の他、水
あめの製造、餅の老化防止、製パン、製菓、酒の醸造に
用いられている。グルコアミラーゼは、澱粉をグルコー
ス単位に分解する酵素でグルコースの製造に用いられて
いる。α−１，６−グルコシダーゼは、プルラナーゼと
も呼ばれる酵素でグルコース、マルトースの製造に用い
られる。アミロ−１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−
１，６−グルコシダーゼは、α−１，６結合を切断した
り、分枝の側鎖を切る酵素である。
トリオース生成α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グル
コアミラーゼ、α−１，６−グルコシダーゼ、アミロ−
１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−１，６−グルコシダ
ーゼ等がある。食品工業的には、α−アミラーゼを用い
た澱粉の液化、マルトトリオースの製造が知られてい
る。また、β−アミラーゼはマルトースの製造の他、水
あめの製造、餅の老化防止、製パン、製菓、酒の醸造に
用いられている。グルコアミラーゼは、澱粉をグルコー
ス単位に分解する酵素でグルコースの製造に用いられて
いる。α−１，６−グルコシダーゼは、プルラナーゼと
も呼ばれる酵素でグルコース、マルトースの製造に用い
られる。アミロ−１，６−グルコシダーゼ、オリゴ−
１，６−グルコシダーゼは、α−１，６結合を切断した
り、分枝の側鎖を切る酵素である。
【０００８】セルラーゼには、セルラーゼ、ヘミセルラ
ーゼがあり、食品工業的には、澱粉の製造、野菜や果実
の処理、穀類や豆類の処理の他、コーヒーのガム質分
解、ゲル化防止に用いられる。また、ペクチナーゼに
は、プロトペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリ
ガラクチュロナーゼ等がある。これらの工業的な利用分
野は、果汁の加工、クエン酸製造、果実、野菜の加工が
ある。キシロースイソメラーゼは、工業的にはグルコー
スイソメラーゼと呼ばれる酵素でグルコースを異性化し
異性化糖を製造するのに用いられる。サイクロデキスト
リングルコトランスフェラーゼは、澱粉よりサイクロデ
キストリンを製造するのに用いられる酵素である。
ーゼがあり、食品工業的には、澱粉の製造、野菜や果実
の処理、穀類や豆類の処理の他、コーヒーのガム質分
解、ゲル化防止に用いられる。また、ペクチナーゼに
は、プロトペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリ
ガラクチュロナーゼ等がある。これらの工業的な利用分
野は、果汁の加工、クエン酸製造、果実、野菜の加工が
ある。キシロースイソメラーゼは、工業的にはグルコー
スイソメラーゼと呼ばれる酵素でグルコースを異性化し
異性化糖を製造するのに用いられる。サイクロデキスト
リングルコトランスフェラーゼは、澱粉よりサイクロデ
キストリンを製造するのに用いられる酵素である。
【０００９】インベルターゼは、サッカラーゼとも言わ
れ、シュークロースをフラクトースとグルコースに切る
酵素である。シュークロースをフラクトース側から切る
β−フラクトフラノシダーゼとグルコース側から切るα
−グルコシダーゼがある。β−フラクトフラシノダーゼ
は、転化糖の製造に用いられる。また、α−グルコシダ
ーゼは、転化糖の製造の他、マルトースに作用させてイ
ソマルトースを製造するのにも利用されている。
れ、シュークロースをフラクトースとグルコースに切る
酵素である。シュークロースをフラクトース側から切る
β−フラクトフラノシダーゼとグルコース側から切るα
−グルコシダーゼがある。β−フラクトフラシノダーゼ
は、転化糖の製造に用いられる。また、α−グルコシダ
ーゼは、転化糖の製造の他、マルトースに作用させてイ
ソマルトースを製造するのにも利用されている。
【００１０】本発明の酵素反応安定化剤を酵素液中に添
加する場合、酵素液に対し、ポリーＬ−リジンとして
０．００１〜１０重量％添加するのが望ましい。１０重
量％を超えて添すると、反応終了後に反応生成物を精製
するときに、収率低下を起こす場合があり、また、これ
以上の安定化効果が得られず不経済である。
加する場合、酵素液に対し、ポリーＬ−リジンとして
０．００１〜１０重量％添加するのが望ましい。１０重
量％を超えて添すると、反応終了後に反応生成物を精製
するときに、収率低下を起こす場合があり、また、これ
以上の安定化効果が得られず不経済である。
【００１１】本発明に用いられるポリ−Ｌ−リジンは、
例えば特公昭５９−２０３５９号公報に記載の製造法に
よって得ることができる。すなわち、ストレプトマイセ
ス属に属するε−ポリ−Ｌ−リジン生産菌であるストレ
プトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノ
ポリメラスを培地に培養し、得られた培養物からε−ポ
リ−Ｌ−リジンを分離、採取することによって得られ
る。
例えば特公昭５９−２０３５９号公報に記載の製造法に
よって得ることができる。すなわち、ストレプトマイセ
ス属に属するε−ポリ−Ｌ−リジン生産菌であるストレ
プトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノ
ポリメラスを培地に培養し、得られた培養物からε−ポ
リ−Ｌ−リジンを分離、採取することによって得られ
る。
【００１２】Ｌ−リジンは１分子中に２つのアミノ基を
有するアミノ酸であり、これから得られるポリ−Ｌ−リ
ジンは一般にα位のアミノ基とカルボキシル基とが縮合
したα−ポリ−Ｌ−リジンと、ε位のアミノ基とカルボ
キシル基とが縮合したε−ポリ−Ｌ−リジンとの２種類
が存在するが、本発明では上述の製造法により得られる
ε−ポリ−Ｌ−リジンを用いるのが安全性の面から好ま
しい。
有するアミノ酸であり、これから得られるポリ−Ｌ−リ
ジンは一般にα位のアミノ基とカルボキシル基とが縮合
したα−ポリ−Ｌ−リジンと、ε位のアミノ基とカルボ
キシル基とが縮合したε−ポリ−Ｌ−リジンとの２種類
が存在するが、本発明では上述の製造法により得られる
ε−ポリ−Ｌ−リジンを用いるのが安全性の面から好ま
しい。
【００１３】また、高温条件で酵素反応を行う場合もし
くは酵素添加前に基質溶液に本発明の酵素反応安定化剤
を添加して蒸気滅菌操作を行うような場合には、熱安定
性に優れたε−ポリ−Ｌ−リジンを用いる方が望まし
い。本発明にあっては、ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形で
用いることができるが、塩酸、硫酸、リン酸などの無機
酸もしくは酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸、
クエン酸などの有機酸との塩の形で用いることもでき
る。ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形であれ、上述の無機酸
もしくは有機酸との塩の形であれ、酵素反応安定化剤と
しての効果には本質的に差はないが、遊離の形のポリ−
Ｌ−リジンの方が、水溶性に優れている。
くは酵素添加前に基質溶液に本発明の酵素反応安定化剤
を添加して蒸気滅菌操作を行うような場合には、熱安定
性に優れたε−ポリ−Ｌ−リジンを用いる方が望まし
い。本発明にあっては、ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形で
用いることができるが、塩酸、硫酸、リン酸などの無機
酸もしくは酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸、
クエン酸などの有機酸との塩の形で用いることもでき
る。ポリ−Ｌ−リジンは遊離の形であれ、上述の無機酸
もしくは有機酸との塩の形であれ、酵素反応安定化剤と
しての効果には本質的に差はないが、遊離の形のポリ−
Ｌ−リジンの方が、水溶性に優れている。
【００１４】また、本発明に用いるポリ−Ｌ−リジン
は、その微生物増殖阻害活性という点から重合度１０以
上のものが望ましい。特に重合度２０〜３５のものが水
溶性、安定性、微生物増殖阻害活性の点から望ましい。
は、その微生物増殖阻害活性という点から重合度１０以
上のものが望ましい。特に重合度２０〜３５のものが水
溶性、安定性、微生物増殖阻害活性の点から望ましい。
【００１５】本発明の酵素反応安定化剤を用いて酵素反
応を行った後、得られる反応生成物を分離精製する場合
は、反応生成物各々にあった定法の方法により分離精製
を行えばよく、この場合、本発明の酵素反応安定化剤の
除去は、混在する微生物の増殖による反応生成物の分解
を防止するため、精製段階の終期に除去するのが望まし
い。この場合、本発明の酵素反応安定化剤は、強いカチ
オン性の物質であるためイオン交換樹脂を用いて容易に
分離することができる。
応を行った後、得られる反応生成物を分離精製する場合
は、反応生成物各々にあった定法の方法により分離精製
を行えばよく、この場合、本発明の酵素反応安定化剤の
除去は、混在する微生物の増殖による反応生成物の分解
を防止するため、精製段階の終期に除去するのが望まし
い。この場合、本発明の酵素反応安定化剤は、強いカチ
オン性の物質であるためイオン交換樹脂を用いて容易に
分離することができる。
【００１６】
【実施例】以下、本発明の実施例を用い、その詳細を説
明する。なお、本実施例は本発明をなんら限定するもの
ではない。 実施例１ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉおよびＢａｃｉ
ｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ各１０3 個を接種し、３０℃で
２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマ
ルトース量を測定した。生成したマルトース量は７ｍｇ
であった。
明する。なお、本実施例は本発明をなんら限定するもの
ではない。 実施例１ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉおよびＢａｃｉ
ｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ各１０3 個を接種し、３０℃で
２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメンブレンフィ
ルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマ
ルトース量を測定した。生成したマルトース量は７ｍｇ
であった。
【００１７】比較例１ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇを
加え、溶解した。該液にＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉお
よびＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ各１０3 個を接種
し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸
騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル
酸法によりマルトース量を測定した。マルトースの生成
は認められなかった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇを
加え、溶解した。該液にＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉお
よびＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ各１０3 個を接種
し、３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸
騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロフタル
酸法によりマルトース量を測定した。マルトースの生成
は認められなかった。
【００１８】次に本発明の酵素反応安定化剤が酵素反応
阻害のないことを示すため参考例を記す。 参考例１ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液を３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該
液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。生成したマ
ルトース量は７ｍｇであった。
阻害のないことを示すため参考例を記す。 参考例１ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液を３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該
液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液をジニトロ
フタル酸法によりマルトース量を測定した。生成したマ
ルトース量は７ｍｇであった。
【００１９】参考例２ 可溶性澱粉１０ｍｇを、１６ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
８）１ｍｌに溶解し、α−アミラーゼ（和光純薬製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）０．１ｍｇを加
え、溶解した。該液を２０℃で３分間反応させた。反応
終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止さ
せ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液をジニトロフタル酸法によりマルトース量を測定し
た。生成したマルトース量は３ｍｇであった。
８）１ｍｌに溶解し、α−アミラーゼ（和光純薬製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）０．１ｍｇを加
え、溶解した。該液を２０℃で３分間反応させた。反応
終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止さ
せ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液をジニトロフタル酸法によりマルトース量を測定し
た。生成したマルトース量は３ｍｇであった。
【００２０】実施例２ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｈｉｌｕｓを１０3 接種し、６０℃２４時間反応さ
せた。反応終了後、反応液を沸騰水中で加熱し、酵素反
応を停止し、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過
し、ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和
電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定し
た。生成したグルコースは、２６０ｍｇであった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｈｉｌｕｓを１０3 接種し、６０℃２４時間反応さ
せた。反応終了後、反応液を沸騰水中で加熱し、酵素反
応を停止し、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過
し、ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和
電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定し
た。生成したグルコースは、２６０ｍｇであった。
【００２１】比較例２ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3 接種
し、６０℃で２４時間反応させた。反応終了後、反応液
を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍ
メンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法に
よりグルコース量を測定した。グルコースの生成は認め
られなかった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3 接種
し、６０℃で２４時間反応させた。反応終了後、反応液
を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍ
メンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法に
よりグルコース量を測定した。グルコースの生成は認め
られなかった。
【００２２】本発明の酵素反応安定化剤が酵素反応阻害
のないことを示すため参考例を記す。 参考例３ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を２０ｍＭ濃度の
リン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ
６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生化
学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１
０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液を６０℃２４時間反応させた。反応終了後、反
応液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体ク
ロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）
法によりグルコース量を測定した。生成したグルコース
は、２６５ｍｇであった。
のないことを示すため参考例を記す。 参考例３ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を２０ｍＭ濃度の
リン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ
６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生化
学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１
０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液を６０℃２４時間反応させた。反応終了後、反
応液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体ク
ロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）
法によりグルコース量を測定した。生成したグルコース
は、２６５ｍｇであった。
【００２３】実施例３ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩１ｍｇを加
え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔ
ｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3個接種し、６０℃で２
４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で加
熱して酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレンフィ
ルタ−でろ過し、ろ液を高速液体クロマトグラフィ−法
によりグルコ−ス量を測定した。生成したグルコ−ス量
は２６０ｍｇであった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩１ｍｇを加
え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔ
ｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3個接種し、６０℃で２
４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で加
熱して酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレンフィ
ルタ−でろ過し、ろ液を高速液体クロマトグラフィ−法
によりグルコ−ス量を測定した。生成したグルコ−ス量
は２６０ｍｇであった。
【００２４】比較例３ マルト−ス３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液１ｍ
ｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生化学工業製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１０ｍｇを加
え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3個接種し、６０℃で
２４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で
加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレンフ
ィルタ−でろ過し、ろ液を高速クロマトグラフィ法によ
りグルコ−ス量を測定した。グルコ−スの生成は認めら
れなかった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液１ｍ
ｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生化学工業製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１０ｍｇを加
え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを１０3個接種し、６０℃で
２４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で
加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍメンブレンフ
ィルタ−でろ過し、ろ液を高速クロマトグラフィ法によ
りグルコ−ス量を測定した。グルコ−スの生成は認めら
れなかった。
【００２５】本発明の酵素反応安定化剤が酵素反応阻害
のないことを示すために参考例を示す。 参考例４ マルト−ス３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液１ｍ
ｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生化学工業製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１０ｍｇとε−
ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩１ｍｇを加え、溶解した。該
液を６０℃で２４時間反応させた。反応終了後、反応液
を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍ
メンブレンフィルタ−でろ過し、ろ液を高速クロマトグ
ラフィ−法によりグルコ−ス量を測定した。生成したグ
ルコ−ス量は２６５ｍｇであった。
のないことを示すために参考例を示す。 参考例４ マルト−ス３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液１ｍ
ｌに溶解し、糖化型α−アミラ−ゼ（生化学工業製Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）１０ｍｇとε−
ポリ−Ｌ−リジンの塩酸塩１ｍｇを加え、溶解した。該
液を６０℃で２４時間反応させた。反応終了後、反応液
を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止し、０．４５μｍ
メンブレンフィルタ−でろ過し、ろ液を高速クロマトグ
ラフィ−法によりグルコ−ス量を測定した。生成したグ
ルコ−ス量は２６５ｍｇであった。
【００２６】実施例４ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにセルラー
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．
５ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌと、アビセル（ＦＭ
Ｃ ｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．０）１ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3 個相
当）を接種し、３０℃で６０分間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させた後
３０℃２４時間放置した。この液を０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は５ｍ
ｇであった。
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．
５ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌと、アビセル（ＦＭ
Ｃ ｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．０）１ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3 個相
当）を接種し、３０℃で６０分間反応させた。反応終了
後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させた後
３０℃２４時間放置した。この液を０．４５μｍメンブ
レンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグ
ラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法により
グルコース量を測定した。生成したグルコース量は５ｍ
ｇであった。
【００２７】比較例４ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにセルラー
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌ
と、アビセル（ＦＭＣ ｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌに溶解した。該液
にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数
として１０3 個相当）を接種し、３０℃で６０分間反応
させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反
応を停止させた後３０℃２４時間放置した。この液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ
１０１１）法によりグルコース量を測定した。グルコー
スの生成は認められなかった。
ゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｒｐ．製Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ
由来凍結乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌ
と、アビセル（ＦＭＣ ｃｏｒｐ．製）１０ｍｇを５０
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌに溶解した。該液
にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数
として１０3 個相当）を接種し、３０℃で６０分間反応
させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反
応を停止させた後３０℃２４時間放置した。この液を
０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を
高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ
１０１１）法によりグルコース量を測定した。グルコー
スの生成は認められなかった。
【００２８】実施例５ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにインベル
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液０．１ｍｌと、シュークロース１０ｍｇ
（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．６）１
ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、
３０℃で６０分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止させた後３０℃２４時間
放置した。この液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を
測定した。生成したグルコース量は５ｍｇであった。
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン０．５ｍｇを
溶解した。該液０．１ｍｌと、シュークロース１０ｍｇ
（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．６）１
ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、
３０℃で６０分間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止させた後３０℃２４時間
放置した。この液を０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を
測定した。生成したグルコース量は５ｍｇであった。
【００２９】比較例５ ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍｌにインベル
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌと、シュ
ークロース１０ｍｇ（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝
液（ｐＨ４．６）１ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3
個相当）を接種し、３０℃で６０分間反応させた。反応
終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ
た後３０℃２４時間放置した。この液を０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法に
よりグルコース量を測定した。グルコースの生成は認め
られなかった。
ターゼ（フナコシ製Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．由来，凍結
乾燥粉末）１ｍｇを溶解した。該液０．１ｍｌと、シュ
ークロース１０ｍｇ（和光純薬製）を５０ｍＭ酢酸緩衝
液（ｐＨ４．６）１ｍｌに溶解した。該液にＢａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓの芽胞（生菌数として１０3
個相当）を接種し、３０℃で６０分間反応させた。反応
終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止させ
た後３０℃２４時間放置した。この液を０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法に
よりグルコース量を測定した。グルコースの生成は認め
られなかった。
【００３０】実施例６ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液をジニトロフタル酸法によりマルトース量を測定し
た。生成したマルトース量は７ｍｇであった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇお
よびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液をジニトロフタル酸法によりマルトース量を測定し
た。生成したマルトース量は７ｍｇであった。
【００３１】比較例６ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇを
加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕ
ｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、３
０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２４
時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターで
ろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマルトース
量を測定した。マルトースの生成は認められなかった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、β−アミラーゼ（天野製薬製）１０ｍｇを
加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕ
ｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、３
０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２４
時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターで
ろ過した。ろ液をジニトロフタル酸法によりマルトース
量を測定した。マルトースの生成は認められなかった。
【００３２】実施例７ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数として１０
3 個相当）を接種し、６０℃で２４時間反応させた。反
応終了後、反応液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
した。該液を３０℃で２４時間放置後、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によ
りグルコース量を測定した。生成したグルコースは、２
６０ｍｇであった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジン１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数として１０
3 個相当）を接種し、６０℃で２４時間反応させた。反
応終了後、反応液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
した。該液を３０℃で２４時間放置後、０．４５μｍメ
ンブレンフィルターでろ過し、ろ液を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によ
りグルコース量を測定した。生成したグルコースは、２
６０ｍｇであった。
【００３３】比較例７ マルトース３００ｍｇ（和光純薬製）を、２０ｍＭ濃度
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの
芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、６０℃で
２４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で
加熱し、酵素反応を停止した。該液を３０℃で２４時間
放置後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し、
ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工
製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定した。グ
ルコースの生成は認められなかった。
のリン酸および６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）１ｍｌに溶解し、糖化型α−アミラーゼ（生
化学工業製Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）
１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの
芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、６０℃で
２４時間反応させた。反応終了後、反応液を沸騰水中で
加熱し、酵素反応を停止した。該液を３０℃で２４時間
放置後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し、
ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工
製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定した。グ
ルコースの生成は認められなかった。
【００３４】実施例８ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、グルコアミラーゼ＋α−１，６グルコシダ
ーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ［商品名］）１０ｍｇ
およびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製
ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定した。生成
したグルコース量は８ｍｇであった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、グルコアミラーゼ＋α−１，６グルコシダ
ーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ［商品名］）１０ｍｇ
およびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製
ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を測定した。生成
したグルコース量は８ｍｇであった。
【００３５】比較例８ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、グルコアミラーゼ＋α−１，６グルコシダ
ーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ［商品名］）１０ｍｇ
を加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、
３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２
４時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を
測定した。グルコースの生成は認められなかった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍ
ｌに溶解し、グルコアミラーゼ＋α−１，６グルコシダ
ーゼ（天野製薬製「シルバラーゼ［商品名］）１０ｍｇ
を加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、
３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２
４時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１０１１）法によりグルコース量を
測定した。グルコースの生成は認められなかった。
【００３６】実施例９ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍ
ｌに溶解し、α−グルコシダーゼ（フナコシ製）１ｍｇ
およびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製
ＳＣ１８２１）法によりマルトトリオース量を測定し
た。生成したマルトトリオース量は１ｍｇであった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍ
ｌに溶解し、α−グルコシダーゼ（フナコシ製）１ｍｇ
およびε−ポリ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解し
た。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生
菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間
反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵
素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放置した
後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ
液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製
ＳＣ１８２１）法によりマルトトリオース量を測定し
た。生成したマルトトリオース量は１ｍｇであった。
【００３７】比較例９ 可溶性澱粉１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍ
ｌに溶解し、α−グルコシダーゼ（フナコシ製）１ｍｇ
を加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、
３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２
４時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１８２１）法によりマルトトリオー
ス量を測定した。生成したマルトトリオースの生成は認
められなかった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍ
ｌに溶解し、α−グルコシダーゼ（フナコシ製）１ｍｇ
を加え、溶解した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅ
ｕｓの芽胞（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、
３０℃で２日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水
中で加熱し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２
４時間放置した後、０．４５μｍメンブレンフィルター
でろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：昭和電工製ＳＣ１８２１）法によりマルトトリオー
ス量を測定した。生成したマルトトリオースの生成は認
められなかった。
【００３８】実施例１０ グルコース１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌに溶解し、キシロースイソメラーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１０ｍｇおよびε−ポ
リ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢ
ａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数として１
０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間反応させた。
反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
させた。該液を３０℃、２４時間放置した後、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体
クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１
１）法によりフラクトースおよびグルコース量を定量
し、フラクトース含有率を求めた。フラクトース含有率
は３５％であった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌに溶解し、キシロースイソメラーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１０ｍｇおよびε−ポ
リ−Ｌ−リジン０．１ｍｇを加え、溶解した。該液にＢ
ａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数として１
０3 個に相当）を接種し、３０℃で２日間反応させた。
反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
させた。該液を３０℃、２４時間放置した後、０．４５
μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体
クロマトグラフィー（カラム：昭和電工製ＳＣ１０１
１）法によりフラクトースおよびグルコース量を定量
し、フラクトース含有率を求めた。フラクトース含有率
は３５％であった。
【００３９】比較例１０ グルコース１０ｍｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌに溶解し、キシロースイソメラーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１０ｍｇを加え、溶解
した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞
（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２
日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放
置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和
電工製ＳＣ１０１１）法によりフラクトースおよびグル
コース量を定量した。フラクトースおよびグルコース共
に検出されなかった。
６．７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌに溶解し、キシロースイソメラーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｃｏａｇｕｌａｎｎｓ由来）１０ｍｇを加え、溶解
した。該液にＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓの芽胞
（生菌数として１０3 個に相当）を接種し、３０℃で２
日間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱
し、酵素反応を停止させた。該液を３０℃、２４時間放
置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過し
た。ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：昭和
電工製ＳＣ１０１１）法によりフラクトースおよびグル
コース量を定量した。フラクトースおよびグルコース共
に検出されなかった。
【００４０】実施例１１ 可溶性澱粉１０ｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および６．
７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）５０mlに
溶解し、サイクロデキストリングルコシルトランスフェ
ラーゼ（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ
／ml］を２mlとε−ポリ−Ｌ−リジン５０ｍｇを加え、
溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数とし
て１０3 個相当）を接種し、６５℃で４０時間反応させ
た。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を
停止させた後、３０℃２４時間放置した。放置後反応液
を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液
を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製
ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）によりサイクロデキストリン
量を測定した。α、β、γ−サイクロデキストリンの総
生成量は７ｇであった。
７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）５０mlに
溶解し、サイクロデキストリングルコシルトランスフェ
ラーゼ（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ
／ml］を２mlとε−ポリ−Ｌ−リジン５０ｍｇを加え、
溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕｓの芽胞（生菌数とし
て１０3 個相当）を接種し、６５℃で４０時間反応させ
た。反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を
停止させた後、３０℃２４時間放置した。放置後反応液
を０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。ろ液
を高速液体クロマトグラフィー法（カラム：昭和電工製
ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）によりサイクロデキストリン
量を測定した。α、β、γ−サイクロデキストリンの総
生成量は７ｇであった。
【００４１】比較例１１ 可溶性澱粉１０ｇを、２０ｍＭ濃度のリン酸および６．
７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）５０mlに
溶解し、サイクロデキストリングルコシルトランスフェ
ラーゼ（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ
／ml］を２mlを加え、溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕ
ｓの芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、６５
℃で４０時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放
置した。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィル
ターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法
（カラム：昭和電工製ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）により
サイクロデキストリン量を測定した。サイクロデキスト
リンの生成は認められなかった。
７ｍＭ濃度の食塩を含む緩衝液（ｐＨ７．５）５０mlに
溶解し、サイクロデキストリングルコシルトランスフェ
ラーゼ（天野製薬製［商品名「コンチザイム」６００Ｕ
／ml］を２mlを加え、溶解した。該液にＢ．ｃｅｒｅｕ
ｓの芽胞（生菌数として１０3 個相当）を接種し、６５
℃で４０時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰水中
で加熱し、酵素反応を停止させた後、３０℃２４時間放
置した。放置後反応液を０．４５μｍメンブレンフィル
ターでろ過した。ろ液を高速液体クロマトグラフィー法
（カラム：昭和電工製ＲＳｐａｋＤＣ−６１３）により
サイクロデキストリン量を測定した。サイクロデキスト
リンの生成は認められなかった。
【００４２】実施例１２ ポリガラクツロン酸（フナコシ製）１ｇを２０ｍＭトリ
ス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）１０ｍｌに溶解させた。
この溶液にペクチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結
乾燥品）を１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンを加え、溶
解した。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖ
ｉｓ１０3 個を接種し、３７℃で２４時間反応させた。
反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
させ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。
ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＹＭＣ製
Ｄｉｏｌ−１２０）法によりガラクツロン酸量を測定し
た。生成したガラクツロン酸は、４５０ｍｇであった。
ス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）１０ｍｌに溶解させた。
この溶液にペクチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結
乾燥品）を１０ｍｇとε−ポリ−Ｌ−リジンを加え、溶
解した。該液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖ
ｉｓ１０3 個を接種し、３７℃で２４時間反応させた。
反応終了後、該液を沸騰水中で加熱し、酵素反応を停止
させ、０．４５μｍメンブレンフィルターでろ過した。
ろ液を高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＹＭＣ製
Ｄｉｏｌ−１２０）法によりガラクツロン酸量を測定し
た。生成したガラクツロン酸は、４５０ｍｇであった。
【００４３】比較例１２ ポリガラクツロン酸（フナコシ製）１ｇを２０ｍＭトリ
ス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）１０ｍｌに溶解させた。
この溶液にペクチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結
乾燥品）を１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＬａｃｔ
ｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ１０3 個を接種し、
３７℃で２４時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメン
ブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：ＹＭＣ製Ｄｉｏｌ−１２０）法に
よりガラクツロン酸量を測定した。ガラクツロン酸の生
成は認められなかった。
ス・塩酸緩衝液（ｐＨ５．０）１０ｍｌに溶解させた。
この溶液にペクチナーゼ（フナコシ製黒かび由来、凍結
乾燥品）を１０ｍｇを加え、溶解した。該液にＬａｃｔ
ｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ１０3 個を接種し、
３７℃で２４時間反応させた。反応終了後、該液を沸騰
水中で加熱し、酵素反応を停止させ、０．４５μｍメン
ブレンフィルターでろ過した。ろ液を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：ＹＭＣ製Ｄｉｏｌ−１２０）法に
よりガラクツロン酸量を測定した。ガラクツロン酸の生
成は認められなかった。
【００４４】
【発明の効果】本発明の酵素反応安定化剤は、ポリ−Ｌ
−リジンもしくはその塩を有効成分とすることにより、
従来得られなかった酵素反応中に混在する微生物の増殖
による酵素の失活および反応生成物の分解を防止すると
ともに酵素反応阻害がなく、かつ分離除去も容易であ
る。
−リジンもしくはその塩を有効成分とすることにより、
従来得られなかった酵素反応中に混在する微生物の増殖
による酵素の失活および反応生成物の分解を防止すると
ともに酵素反応阻害がなく、かつ分離除去も容易であ
る。
Claims (7)
- 【請求項１】アミラーゼ、セルラーゼ、インベルター
ゼ、ペクチナーゼ、キシロースイソメラーゼもしくはサ
イクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼを用
いた酵素反応に使用することを特徴とする、ポリ−Ｌ−
リジンもしくはその塩を有効成分とする酵素反応安定化
剤。 - 【請求項２】ポリ−Ｌ−リジンもしくはその塩がε−ポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩であることを特徴とする
請求項１記載の酵素反応安定化剤。 - 【請求項３】ポリ−Ｌ−リジンの塩が塩酸、硫酸、リン
酸および臭化水素酸のなかから選ばれる無機酸または酢
酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸およびクエン酸
のなかから選ばれる有機酸の塩である請求項１記載の酵
素反応安定化剤。 - 【請求項４】酵素反応を行うにあたり反応液中にポリ−
Ｌ−リジンもしくはその塩を添加することにより混在す
る微生物の増殖による酵素の失活を防止し、安定的に酵
素反応を行わせることを特徴とする請求項１記載の酵素
反応安定化剤の使用方法。 - 【請求項５】ポリ−Ｌ−リジンもしくはその塩０．００
１重量％〜１０重量％を酵素反応液に添加することを特
徴とする請求項４記載の酵素反応安定化剤の使用方法。 - 【請求項６】酵素反応を行うにあたり酵素反応液中にポ
リ−Ｌ−リジンもしくはその塩を添加することにより、
混在する微生物の増殖による酵素反応生成物の分解を防
止することを特徴とする請求項１記載の酵素反応安定剤
の使用方法。 - 【請求項７】ポリ−Ｌ−リジンもしくはその塩０．００
１重量％〜１０重量％を酵素反応液に添加することを特
徴とする請求項６記載の酵素反応安定化剤の使用方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04338007A JP3120607B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 酵素反応安定化剤 |
| DE69331597T DE69331597T2 (de) | 1992-11-25 | 1993-11-25 | Methoden und Verwendung von poly-L-lysine als Enzymschutzmittel |
| EP93309433A EP0599652B1 (en) | 1992-11-25 | 1993-11-25 | Methods and uses of poly-L-lysine as enzyme preservative |
| US08/338,269 US5674726A (en) | 1992-11-25 | 1994-11-14 | Enzyme stabilization with poly-L-lysine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04338007A JP3120607B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 酵素反応安定化剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06153949A JPH06153949A (ja) | 1994-06-03 |
| JP3120607B2 true JP3120607B2 (ja) | 2000-12-25 |
Family
ID=18314077
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04338007A Expired - Fee Related JP3120607B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 酵素反応安定化剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3120607B2 (ja) |
-
1992
- 1992-11-25 JP JP04338007A patent/JP3120607B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06153949A (ja) | 1994-06-03 |
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