JPH0533991B2 - - Google Patents
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- JPH0533991B2 JPH0533991B2 JP60043569A JP4356985A JPH0533991B2 JP H0533991 B2 JPH0533991 B2 JP H0533991B2 JP 60043569 A JP60043569 A JP 60043569A JP 4356985 A JP4356985 A JP 4356985A JP H0533991 B2 JPH0533991 B2 JP H0533991B2
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規なマルトテトラオース生成酵素を
用いてマルトテトラオースを製造する方法に関す
る。
用いてマルトテトラオースを製造する方法に関す
る。
近年、マルトオリゴ糖に関する研究が活発にす
すめられているが、現在工業的に大量生産されて
いるものはマルトースのみである。マルトース以
外には、マルトトリオースが試薬用として、また
マルトペンタオースがアミラーゼ活性測定用とし
てそれぞれ少量生産されているにすぎない。
すめられているが、現在工業的に大量生産されて
いるものはマルトースのみである。マルトース以
外には、マルトトリオースが試薬用として、また
マルトペンタオースがアミラーゼ活性測定用とし
てそれぞれ少量生産されているにすぎない。
しかし、最近マノトトリオース〜マルトヘキサ
オースのマルトオリゴ糖が次々に発見され、澱粉
から各種オリゴ糖の生産が容易に行なえるように
なつてきた。たとえばマルトテトラオースに関し
てはＡｇric−Biol−Chem.，46(3)，639〜646
（1982），J.F.Robyt and R.J.Ackerman：Arch.
Biochem.Biophys.，145，105〜114（1971）に記
載の酵素が知られている。この酵素はシユードモ
ナス・スツツチエリ（Pseudomonas stutzeri）
から生産されるものであるが、生産性が低い。こ
の他の微生物については未だ知られていない。
オースのマルトオリゴ糖が次々に発見され、澱粉
から各種オリゴ糖の生産が容易に行なえるように
なつてきた。たとえばマルトテトラオースに関し
てはＡｇric−Biol−Chem.，46(3)，639〜646
（1982），J.F.Robyt and R.J.Ackerman：Arch.
Biochem.Biophys.，145，105〜114（1971）に記
載の酵素が知られている。この酵素はシユードモ
ナス・スツツチエリ（Pseudomonas stutzeri）
から生産されるものであるが、生産性が低い。こ
の他の微生物については未だ知られていない。
そこで本発明者らは、マルトテトラオースを効
率よく生成し得る高活性酵素を探索すべく研究を
重ねた。その過程で各種保存菌株を検索した結
果、シユードモナス・サツカロフイラ
（Pseudomonas saccharophila）を培養するこ
とによりマルトテトラオース合成酵素が得られる
ことおよびこの酵素を用いることにより効率よく
マルトテトラオースを製造できることを見出し、
本発明を完成するに至つた。
率よく生成し得る高活性酵素を探索すべく研究を
重ねた。その過程で各種保存菌株を検索した結
果、シユードモナス・サツカロフイラ
（Pseudomonas saccharophila）を培養するこ
とによりマルトテトラオース合成酵素が得られる
ことおよびこの酵素を用いることにより効率よく
マルトテトラオースを製造できることを見出し、
本発明を完成するに至つた。
本発明は下記の性質を有する新規なマルトテト
ラオース生成酵素を澱粉、澱粉の組成画分および
澱粉の分解反応生成物のうちの少くとも１種の物
質に作用させることを特徴とするマルトテトラオ
ースの製造方法に関するものである。
ラオース生成酵素を澱粉、澱粉の組成画分および
澱粉の分解反応生成物のうちの少くとも１種の物
質に作用させることを特徴とするマルトテトラオ
ースの製造方法に関するものである。
(1) 本酵素はアミロース、可溶性澱粉、馬鈴薯澱
粉、甘藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモ
ロコシ澱粉、モチトウモロコシ澱粉、サゴ澱粉
などに作用してマルトテトラオースを生成す
る。
粉、甘藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモ
ロコシ澱粉、モチトウモロコシ澱粉、サゴ澱粉
などに作用してマルトテトラオースを生成す
る。
(2) 本酵素は30℃にてPH6.7が至適であり、PH5.5
〜10.5で安定である。
〜10.5で安定である。
(3) 本酵素はPH7.0において至適温度は50〜55℃
であり、60℃以上の温度で30分間放置すると失
活する。
であり、60℃以上の温度で30分間放置すると失
活する。
(4) 本酵素は1mMパラクロロ安息香酸第二水銀
溶液中で阻害を受けるが、阻害率は60〜70％、
Fe3+，Co2+では94〜99％であるが、Ｍｇ2+で
は全く阻害を受けない。
溶液中で阻害を受けるが、阻害率は60〜70％、
Fe3+，Co2+では94〜99％であるが、Ｍｇ2+で
は全く阻害を受けない。
(5) 本酵素の分子量は62000（デイスクゲル電気泳
動法による）である。
動法による）である。
(6) 本酵素の等電点はPH4.7（アンフオライン電気
泳動法による）である。
泳動法による）である。
本発明で用いる新規なマルトテトラオース生成
酵素は微生物を用いて生産され、その生産菌とし
ては、上記性質を有する酵素を生産する能力を有
するものであればよく、たとえばシユードモナ
ス・サツカロフイラIAM1504などがある。本発
明に用いる微生物としては本菌株とその変種、変
異株に制限されるものではなく、上記酵素の生産
能を有するものであればよい。
酵素は微生物を用いて生産され、その生産菌とし
ては、上記性質を有する酵素を生産する能力を有
するものであればよく、たとえばシユードモナ
ス・サツカロフイラIAM1504などがある。本発
明に用いる微生物としては本菌株とその変種、変
異株に制限されるものではなく、上記酵素の生産
能を有するものであればよい。
前述したように、本酵素はアミロース、可溶性
澱粉、各種澱粉に作用してマルトテトラオースを
生成する。したがつて、澱粉、澱粉の組成画分お
よび澱粉の分解反応生成物のうちの少なくとも１
種の物質に本酵素を作用させることによりマルト
テトラオースが生成・蓄積する。
澱粉、各種澱粉に作用してマルトテトラオースを
生成する。したがつて、澱粉、澱粉の組成画分お
よび澱粉の分解反応生成物のうちの少なくとも１
種の物質に本酵素を作用させることによりマルト
テトラオースが生成・蓄積する。
マルトテトラオースを製造するにあたり、本酵
素の性質を考慮してマルトテトラオースの生成量
が最大となるような条件を選定すべきである。こ
こで澱粉としては、たとえば馬鈴薯、甘藷、トウ
モロコシ、モチトウモロコシ、大麦、小麦、米、
タピオカ、サゴなどの任意の原料から得られるも
のを使用することができる。また、澱粉の組成画
分としては、たとえばアミロース、アミロペクチ
ンなどがあり、澱粉の分解反応生成物としては、
たとえば白色デキストリン、黄色デキストリン、
ブリテイツシユガムなどの焙焼デキストリン；酸
化澱粉、低粘性変性（酵素、酸、機械高速攪拌等
の処理による）澱粉などの化工澱粉；リン酸澱
粉、酢酸澱粉などで代表される澱粉エーテル、澱
粉エステルなどの澱粉誘導体；放射線や中性子線
を照射したり高周波処理あるいは湿熱処理した澱
粉などの物理的処理澱粉；α−澱粉などを挙げる
ことができる。これらの澱粉類は単独もしくは２
種以上を組合せて用いる。
素の性質を考慮してマルトテトラオースの生成量
が最大となるような条件を選定すべきである。こ
こで澱粉としては、たとえば馬鈴薯、甘藷、トウ
モロコシ、モチトウモロコシ、大麦、小麦、米、
タピオカ、サゴなどの任意の原料から得られるも
のを使用することができる。また、澱粉の組成画
分としては、たとえばアミロース、アミロペクチ
ンなどがあり、澱粉の分解反応生成物としては、
たとえば白色デキストリン、黄色デキストリン、
ブリテイツシユガムなどの焙焼デキストリン；酸
化澱粉、低粘性変性（酵素、酸、機械高速攪拌等
の処理による）澱粉などの化工澱粉；リン酸澱
粉、酢酸澱粉などで代表される澱粉エーテル、澱
粉エステルなどの澱粉誘導体；放射線や中性子線
を照射したり高周波処理あるいは湿熱処理した澱
粉などの物理的処理澱粉；α−澱粉などを挙げる
ことができる。これらの澱粉類は単独もしくは２
種以上を組合せて用いる。
反応終了後、加熱して酵素を失活させて反応を
停止し、反応液から常法によつてマルトテトラオ
ースを得ることができる。
停止し、反応液から常法によつてマルトテトラオ
ースを得ることができる。
マルトテトラオースは現在大量生産がされてい
ないため、試薬など特殊な用途に限られている
が、本酵素が効率よく大量、かつ安価に生産され
るようになり、食品をはじめ各種用途が拓けるも
のと期待される。マルトテトラオースは溶解性に
優れ、甘味がなくボデイ感があるので製菓用材料
として有用であり、また消化・吸収性が良いの
で、幼児、老人、患者用の滋養食としての利用も
可能である。
ないため、試薬など特殊な用途に限られている
が、本酵素が効率よく大量、かつ安価に生産され
るようになり、食品をはじめ各種用途が拓けるも
のと期待される。マルトテトラオースは溶解性に
優れ、甘味がなくボデイ感があるので製菓用材料
として有用であり、また消化・吸収性が良いの
で、幼児、老人、患者用の滋養食としての利用も
可能である。
次に、実施例により本発明を説明する。
参考例
マルトテトラオース生成酵素の調製
シユードモナス・サツカロフイラIAM1504を
可溶性澱粉１％、ポリペプトン１％、リン酸１カ
リウム0.1％、リン酸２カリウム0.28％の斜面寒
天培地に接種し、30℃で２日間培養した後、その
１白金耳をとり、同じ組成の液体培地（100ml培
地／500ml三角フラスコ）に移し、300℃で２日間
通気振とう培養を行なつた。
可溶性澱粉１％、ポリペプトン１％、リン酸１カ
リウム0.1％、リン酸２カリウム0.28％の斜面寒
天培地に接種し、30℃で２日間培養した後、その
１白金耳をとり、同じ組成の液体培地（100ml培
地／500ml三角フラスコ）に移し、300℃で２日間
通気振とう培養を行なつた。
培養終了後、低温で培養物中の菌体および不溶
物を遠沈除去して上澄を得、これを粗酵素とし
た。この粗酵素液の活性は14.0IU／mlであつた。
物を遠沈除去して上澄を得、これを粗酵素とし
た。この粗酵素液の活性は14.0IU／mlであつた。
実施例 １
馬鈴薯澱粉を細菌液化型酵素（BLA）により
液化し、ヨウ素−澱粉反応が青色のところで失活
処理し、基質濃度10％、マルトテトラオース生成
酵素（粗酵素液）5IU／ｇ・基質、PH7.0，45℃で
17時間攪拌しながら反応せしめマルトテトラオー
スを70％含む反応液を得た。本反応液を精製濃縮
すれば、G4を多量に含む水アメ製品とすること
もできる。
液化し、ヨウ素−澱粉反応が青色のところで失活
処理し、基質濃度10％、マルトテトラオース生成
酵素（粗酵素液）5IU／ｇ・基質、PH7.0，45℃で
17時間攪拌しながら反応せしめマルトテトラオー
スを70％含む反応液を得た。本反応液を精製濃縮
すれば、G4を多量に含む水アメ製品とすること
もできる。
実施例 ２
実施例１のようにして液化馬鈴薯澱粉を造り、
基質濃度20％、マルトテトラオース生成酵素（粗
酵素液）5IU／ｇ・基質、PH7.0，45℃で限外過
器〔東洋紙(株)製、UHP−76（膜はUK−10）〕
中で窒素ガスで圧力をかけながら反応させてマル
トテトラオースを90％以上含む糖液を得た。収率
は12時間反応で出発基質の70％であり、得られた
糖液は逆浸透膜で20％にまで濃縮することができ
た。
基質濃度20％、マルトテトラオース生成酵素（粗
酵素液）5IU／ｇ・基質、PH7.0，45℃で限外過
器〔東洋紙(株)製、UHP−76（膜はUK−10）〕
中で窒素ガスで圧力をかけながら反応させてマル
トテトラオースを90％以上含む糖液を得た。収率
は12時間反応で出発基質の70％であり、得られた
糖液は逆浸透膜で20％にまで濃縮することができ
た。
実施例 ３
プルラナーゼを1IU／５ｇ基質に加えたこと以
外は実施例２と同様に操作し、12時間の反応でマ
ルトテトラオースを90％以上含む糖液を収率75％
で得た。
外は実施例２と同様に操作し、12時間の反応でマ
ルトテトラオースを90％以上含む糖液を収率75％
で得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 澱粉、澱粉の組成画分および澱粉の分解反応
生成物のうちの少なくとも１種の物質に下記の性
質を有する新規なマルトテトラオース生成酵素を
作用させることを特徴とするマルトテトラオース
の製造方法。 (1) 本酵素は30℃にてPH6.7が至適であり、PH5.5
〜10.5で安定である。 (2) 本酵素はPH7.0において至適温度が50〜55℃
であり、60℃以上の温度で30分間放置すると失
活する。 (3) 本酵素は1mMパラクロロ安息香酸第二水銀
溶液中で阻害を受け、阻害率は60〜70％、
Fe3+，Co2+では95〜99％であるが、Ｍｇ2+で
は全く阻害を受けない。 (4) 本酵素の分子量は62000（デイスクゲル電気泳
動法による）である。 (5) 本酵素の等電点はPH4.7（アンフオライン電気
泳動法による）である。 ２ 澱粉の組成画分がアミロースまたはアミロペ
クチンである特許請求の範囲第１項記載の製造方
法。 ３ 澱粉の分解反応生成物が化工澱粉である特許
請求の範囲第１項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60043569A JPS61202700A (ja) | 1985-03-07 | 1985-03-07 | マルトテトラオ−スの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60043569A JPS61202700A (ja) | 1985-03-07 | 1985-03-07 | マルトテトラオ−スの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61202700A JPS61202700A (ja) | 1986-09-08 |
| JPH0533991B2 true JPH0533991B2 (ja) | 1993-05-20 |
Family
ID=12667374
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60043569A Granted JPS61202700A (ja) | 1985-03-07 | 1985-03-07 | マルトテトラオ−スの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61202700A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6416596A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-20 | Japan Maize Prod | Starch sugar containing maltotetraose as main component |
| JP2678605B2 (ja) * | 1987-10-30 | 1997-11-17 | 日本食品化工株式会社 | 腸内細菌叢改善剤 |
| JP2564752B2 (ja) * | 1993-04-15 | 1996-12-18 | 工業技術院長 | テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステル |
-
1985
- 1985-03-07 JP JP60043569A patent/JPS61202700A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61202700A (ja) | 1986-09-08 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |