JP2564752B2 - テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステル - Google Patents
テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステルInfo
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- JP2564752B2 JP2564752B2 JP5112142A JP11214293A JP2564752B2 JP 2564752 B2 JP2564752 B2 JP 2564752B2 JP 5112142 A JP5112142 A JP 5112142A JP 11214293 A JP11214293 A JP 11214293A JP 2564752 B2 JP2564752 B2 JP 2564752B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、界面活性剤及び生体物
質の保護剤として有用なテトラグルコース及びその部分
脂肪酸エステルに関するものである。
質の保護剤として有用なテトラグルコース及びその部分
脂肪酸エステルに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、微生物の産生する糖脂質系バイオ
サーファクタントとして、二糖を結合したソホロリピッ
ド及び単糖ないし二糖を結合したラムノリピッドが水溶
性及び油溶性のバイオサーファクタントとなることが知
られている。また、ミクロポリスポラ属菌が産生するオ
リゴ糖脂肪酸エステルの存在が知られているが、このも
のは親油性が大きく、水に不溶である（特開昭６２−１
７５１８９）。
サーファクタントとして、二糖を結合したソホロリピッ
ド及び単糖ないし二糖を結合したラムノリピッドが水溶
性及び油溶性のバイオサーファクタントとなることが知
られている。また、ミクロポリスポラ属菌が産生するオ
リゴ糖脂肪酸エステルの存在が知られているが、このも
のは親油性が大きく、水に不溶である（特開昭６２−１
７５１８９）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、バイオサー
ファクタントとして有用な新規な糖化合物を提供するこ
とをその課題とする。
ファクタントとして有用な新規な糖化合物を提供するこ
とをその課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、特定の放線菌生産
物であるオリゴ糖脂肪酸エステルの完全加水分解物及び
部分加水分解物が特定の構造のテトラグルコース化合物
であることを見出すとともに、このものはマイルドな界
面活性作用を有することを見出し、本発明を完成するに
至った。即ち、本発明によれば、ミクロポリスポラ属に
属し、オリゴ糖脂肪酸エステルを生産する能力を有する
放線菌を栄養培地に培養して産生したオリゴ糖脂肪酸エ
ステルの完全加水分解物であって、分子量が６６６で、
ＮＭＲスペクトル測定値が下記値を有するテトラグルコ
ースが提供される。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，Ｄ
２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ＝３．５４），４．６０
（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨ
ｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５２，９７．１９，８２．
０９，７８．７３，７８．６３，７６．５２，７４．７
６，７４．６０，７２．７７，７１．９７，６３．８
０，６２．９８また、本発明によれば、前記オリゴ糖脂
肪酸エステルの部分加水分解物が提供される。さらに、
本発明によれば、前記テトラグルコース又は前記部分加
水分解物からなる界面活性剤が提供される。
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、特定の放線菌生産
物であるオリゴ糖脂肪酸エステルの完全加水分解物及び
部分加水分解物が特定の構造のテトラグルコース化合物
であることを見出すとともに、このものはマイルドな界
面活性作用を有することを見出し、本発明を完成するに
至った。即ち、本発明によれば、ミクロポリスポラ属に
属し、オリゴ糖脂肪酸エステルを生産する能力を有する
放線菌を栄養培地に培養して産生したオリゴ糖脂肪酸エ
ステルの完全加水分解物であって、分子量が６６６で、
ＮＭＲスペクトル測定値が下記値を有するテトラグルコ
ースが提供される。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，Ｄ
２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ＝３．５４），４．６０
（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨ
ｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５２，９７．１９，８２．
０９，７８．７３，７８．６３，７６．５２，７４．７
６，７４．６０，７２．７７，７１．９７，６３．８
０，６２．９８また、本発明によれば、前記オリゴ糖脂
肪酸エステルの部分加水分解物が提供される。さらに、
本発明によれば、前記テトラグルコース又は前記部分加
水分解物からなる界面活性剤が提供される。
【０００５】本発明のテトラグルコースは、ミクロポリ
スラ属に属し、オリゴ糖脂肪酸エステルを生産する能力
を有する放線菌を栄養培地に培養して生産したオリゴ糖
脂肪酸エステルを原料とし、これを加水分解処理するこ
とにより得ることができる。本発明で使用する該放線菌
の具体例としては、ミクロポリスポラ エスピー（Ｍｉ
ｃｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ｓｐ．）ＮＳ−１０８５Ｋ
株が挙げられ、該菌株は通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所に昭和６０年１１月２日に受託され、ＦＥ
ＲＭ Ｐ−８５０８として寄託されている。前記オリゴ
糖脂肪酸エステルを得るための培養条件については、特
開昭６２−１７５１８９号公報に詳述されている。
スラ属に属し、オリゴ糖脂肪酸エステルを生産する能力
を有する放線菌を栄養培地に培養して生産したオリゴ糖
脂肪酸エステルを原料とし、これを加水分解処理するこ
とにより得ることができる。本発明で使用する該放線菌
の具体例としては、ミクロポリスポラ エスピー（Ｍｉ
ｃｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ｓｐ．）ＮＳ−１０８５Ｋ
株が挙げられ、該菌株は通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所に昭和６０年１１月２日に受託され、ＦＥ
ＲＭ Ｐ−８５０８として寄託されている。前記オリゴ
糖脂肪酸エステルを得るための培養条件については、特
開昭６２−１７５１８９号公報に詳述されている。
【０００６】前記オリゴ糖脂肪酸エステルの加水分解
は、従来公知の方法で行うことができ、例えば、ナトリ
ウムアルコラートを触媒として用いることにより容易に
行うことができる。
は、従来公知の方法で行うことができ、例えば、ナトリ
ウムアルコラートを触媒として用いることにより容易に
行うことができる。
【０００７】本発明によるテトラグルコースは、エステ
ル結合を有しないもので、水溶性を示す。このものは、
前記オリゴ糖脂肪酸エステルを完全加水分解することに
よって得ることができる。本発明のテトラグルコース
は、後記実施例４においても記載したように、分子量が
６６６であり、Ｂｒｕｋｅｒ ４００ＭＨｚ ＮＭＲス
ペクトロメーターを用いて３％Ｄ２Ｏ溶液の１Ｈ ＮＭ
Ｒスペクトル、１Ｈ ＣＯＳＹスペクトルおよび１３Ｃ
ＮＭＲスペクトル測定を行なった結果、下記の値を有
し、公知のトレハロース、ソホロースの１３Ｃ ＮＲＭ
スペクトルとを対比し、及びテトラグルコースを構成す
るグルコースの１位の炭素に結合する水素原子の立体構
造を、１Ｈ ＮＭＲスペクトルから、その構造はα−
１，１結合型のトレハロース骨格と、その両側にβ−
１，２結合型のソホロース骨格を有する、グルコースの
４分子が結合したテトラグルコースである。１Ｈ ＮＭ
Ｒ（４００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ
＝３．５４），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ
ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５
２，９７．１９，８２．０９，７８．７３，７８．６
３，７６．５２，７４．７６，７４．６０，７２．７
７，７１．９７，６３．８０，６２．９８
ル結合を有しないもので、水溶性を示す。このものは、
前記オリゴ糖脂肪酸エステルを完全加水分解することに
よって得ることができる。本発明のテトラグルコース
は、後記実施例４においても記載したように、分子量が
６６６であり、Ｂｒｕｋｅｒ ４００ＭＨｚ ＮＭＲス
ペクトロメーターを用いて３％Ｄ２Ｏ溶液の１Ｈ ＮＭ
Ｒスペクトル、１Ｈ ＣＯＳＹスペクトルおよび１３Ｃ
ＮＭＲスペクトル測定を行なった結果、下記の値を有
し、公知のトレハロース、ソホロースの１３Ｃ ＮＲＭ
スペクトルとを対比し、及びテトラグルコースを構成す
るグルコースの１位の炭素に結合する水素原子の立体構
造を、１Ｈ ＮＭＲスペクトルから、その構造はα−
１，１結合型のトレハロース骨格と、その両側にβ−
１，２結合型のソホロース骨格を有する、グルコースの
４分子が結合したテトラグルコースである。１Ｈ ＮＭ
Ｒ（４００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ
＝３．５４），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ
ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５
２，９７．１９，８２．０９，７８．７３，７８．６
３，７６．５２，７４．７６，７４．６０，７２．７
７，７１．９７，６３．８０，６２．９８
【０００８】本発明による部分加水分解物は、前記オリ
ゴ糖脂肪酸エステルを部分加水分解することによって得
ることができる。従って、本発明の部分加水分解物も、
その糖部分の構造は、前記本発明のテトラグルコースの
構造と同じ構造、即ちα−１，１結合型のトレハロース
骨格とその両側にβ−１，２結合型のソホロース骨格を
有する、グルコースの４分子が結合したテトラグルコー
スの構造を有している。該部分加水分解物中に残存する
エステル結合の数は、該テトラグルコース中に存在する
水酸基の１０〜９０モル％、好ましくは３０〜８０モル
％の範囲にするのがよい。
ゴ糖脂肪酸エステルを部分加水分解することによって得
ることができる。従って、本発明の部分加水分解物も、
その糖部分の構造は、前記本発明のテトラグルコースの
構造と同じ構造、即ちα−１，１結合型のトレハロース
骨格とその両側にβ−１，２結合型のソホロース骨格を
有する、グルコースの４分子が結合したテトラグルコー
スの構造を有している。該部分加水分解物中に残存する
エステル結合の数は、該テトラグルコース中に存在する
水酸基の１０〜９０モル％、好ましくは３０〜８０モル
％の範囲にするのがよい。
【０００９】
【発明の効果】本発明のテトラグルコースは、水溶性を
示し、かつ弱い界面活性作用を示し、バイオサーファク
タントとして用いることができる。本発明によるオリゴ
糖脂肪酸エステルの部分加水分解物は、その残存するエ
ステル結合の数に応じて、水溶性ないし親油性を示す。
このものもすぐれた界面活性作用を示し、バイオサーフ
ァクタントとして有利に用いることができる。本発明に
よるテトラグルコース及び部分加水分解物は、界面活性
作用を示す他、疎水性物質に対し親和性を示し、生体物
質の抽出及び保護剤として使用することができる。
示し、かつ弱い界面活性作用を示し、バイオサーファク
タントとして用いることができる。本発明によるオリゴ
糖脂肪酸エステルの部分加水分解物は、その残存するエ
ステル結合の数に応じて、水溶性ないし親油性を示す。
このものもすぐれた界面活性作用を示し、バイオサーフ
ァクタントとして有利に用いることができる。本発明に
よるテトラグルコース及び部分加水分解物は、界面活性
作用を示す他、疎水性物質に対し親和性を示し、生体物
質の抽出及び保護剤として使用することができる。
【００１０】
【実施例】次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明
する。
する。
【００１１】参考例ミクロポリスポラ エスピー（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐ
ｏｒａ ｓｐ．）ＮＳ−１０８５Ｋ株 を用い、ショ糖３
０ｇ／ｌ、日清ＯＤＯ−Ｐ（日清製油製）３０ｇ／ｌ、
ポリペプトン２ｇ／ｌ，食塩０．５ｇ／ｌの組成を有す
る栄養培地で２８℃、３５日間静置培養した。培養終了
後、培養液１．５リットルを濾紙にて濾過し、得られた
固形分からメタノール４５０ｍｌを用い、室温にて生産
物質を抽出した。更にｎ−ヘキサン１５０ｍｌを用い、
油脂成分を除去した後、ロータリーエバポレーターで溶
媒を留去し、生産物質２２．５ｇを得た。得られた物質
は白色結晶で、ベンゼン：エチルエーテル：メタノール
（８０：７：１０）溶液を用いたシリカゲル薄層クロマ
トグラフィーによってＲｆ＝０．１５を示した。また、
常温でメタノール、エタノール、クロロホルム及びテト
ラヒドロフラン等各種溶媒に溶けるが、水には不溶であ
った。本物質はアンスロン試薬と反応して青緑色を与え
ること、１Ｎ苛性ソーダでケン化した後の水層部をシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーで調べると、ショ糖より
Ｒｆ値の低い部分にスポットが検出されることなどか
ら、オリゴ糖脂肪酸エステルであることが証明された。
ｏｒａ ｓｐ．）ＮＳ−１０８５Ｋ株 を用い、ショ糖３
０ｇ／ｌ、日清ＯＤＯ−Ｐ（日清製油製）３０ｇ／ｌ、
ポリペプトン２ｇ／ｌ，食塩０．５ｇ／ｌの組成を有す
る栄養培地で２８℃、３５日間静置培養した。培養終了
後、培養液１．５リットルを濾紙にて濾過し、得られた
固形分からメタノール４５０ｍｌを用い、室温にて生産
物質を抽出した。更にｎ−ヘキサン１５０ｍｌを用い、
油脂成分を除去した後、ロータリーエバポレーターで溶
媒を留去し、生産物質２２．５ｇを得た。得られた物質
は白色結晶で、ベンゼン：エチルエーテル：メタノール
（８０：７：１０）溶液を用いたシリカゲル薄層クロマ
トグラフィーによってＲｆ＝０．１５を示した。また、
常温でメタノール、エタノール、クロロホルム及びテト
ラヒドロフラン等各種溶媒に溶けるが、水には不溶であ
った。本物質はアンスロン試薬と反応して青緑色を与え
ること、１Ｎ苛性ソーダでケン化した後の水層部をシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーで調べると、ショ糖より
Ｒｆ値の低い部分にスポットが検出されることなどか
ら、オリゴ糖脂肪酸エステルであることが証明された。
【００１２】実施例１ 水酸化カリウム管を付けた１００ｍｌ容丸底フラスコに
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液１
８ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに２時間撹はんを続けて反応させた。反
応液中に非水用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、
オルガノ（株）］をｐＨ試験紙で確認しながら中性にな
るまで加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別し、反
応液を濃縮、乾燥した後、樹脂を濾別し、次いで反応液
を濃縮、乾燥して原料オリゴ糖脂肪酸エステルの部分加
水分解物を得た。収量７３ｍｇ。このものを以下の条件
でＨＰＬＣ分析した。 カラム μＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ−ＮＨ２ ５μ １
００Ａ ３．９ｍｍ×１５ｃｍ 溶媒 Ｈ２０：ＣＨ３ＣＮ＝４０：６０および２０：８
０ 流速 ０．５ｍｌ／ｍｉｎ 検出器 ＲＩ Ｗａｔｅｒｓ ４１０，ＵＶ Ｗａｔｅ
ｒｓ ９９１ チャートにおいて多くのピークが見られたが、テトラグ
ルコースとオリゴ糖脂肪酸エステルを除いたものを部分
加水分解物とした。このものは、水酸基とエステル結合
の両方を含むもので、そのウィルヘルミー型表面張力計
（島津ＳＴ−１型）を用いて０．１％水溶液の表面張力
を測定したところ、４５．２ｍＮ／ｍであった （２５
℃）。また、スピニングドロップ式界面張力計（Ｃｏｒ
ｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いると、ヘキサ
デカンに対する０．１％水溶液の界面張力は２２．５ｍ
Ｎ／ｍであった。
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液１
８ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに２時間撹はんを続けて反応させた。反
応液中に非水用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、
オルガノ（株）］をｐＨ試験紙で確認しながら中性にな
るまで加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別し、反
応液を濃縮、乾燥した後、樹脂を濾別し、次いで反応液
を濃縮、乾燥して原料オリゴ糖脂肪酸エステルの部分加
水分解物を得た。収量７３ｍｇ。このものを以下の条件
でＨＰＬＣ分析した。 カラム μＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ−ＮＨ２ ５μ １
００Ａ ３．９ｍｍ×１５ｃｍ 溶媒 Ｈ２０：ＣＨ３ＣＮ＝４０：６０および２０：８
０ 流速 ０．５ｍｌ／ｍｉｎ 検出器 ＲＩ Ｗａｔｅｒｓ ４１０，ＵＶ Ｗａｔｅ
ｒｓ ９９１ チャートにおいて多くのピークが見られたが、テトラグ
ルコースとオリゴ糖脂肪酸エステルを除いたものを部分
加水分解物とした。このものは、水酸基とエステル結合
の両方を含むもので、そのウィルヘルミー型表面張力計
（島津ＳＴ−１型）を用いて０．１％水溶液の表面張力
を測定したところ、４５．２ｍＮ／ｍであった （２５
℃）。また、スピニングドロップ式界面張力計（Ｃｏｒ
ｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いると、ヘキサ
デカンに対する０．１％水溶液の界面張力は２２．５ｍ
Ｎ／ｍであった。
【００１３】実施例２ 水酸化カリウム管を付けた１００ｍｌ容丸底フラスコに
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液３
４ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに２時間撹はんを続けて反応させた。反
応液中に非水用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、
オルガノ（株）製］を、ｐＨ試験紙で確認しながら中性
になるまで加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別
し、反応液を濃縮、乾燥して、原料オリゴ糖脂肪酸エス
テルの部分加水分解物を得た。収量５６ｍｇ。実施例１
と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られた部分加水
分解物の０．１％水溶液の表面張力は４６．７ｍＮ／ｍ
（２５℃）であった。
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液３
４ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに２時間撹はんを続けて反応させた。反
応液中に非水用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、
オルガノ（株）製］を、ｐＨ試験紙で確認しながら中性
になるまで加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別
し、反応液を濃縮、乾燥して、原料オリゴ糖脂肪酸エス
テルの部分加水分解物を得た。収量５６ｍｇ。実施例１
と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られた部分加水
分解物の０．１％水溶液の表面張力は４６．７ｍＮ／ｍ
（２５℃）であった。
【００１４】実施例３ 水酸化カリウム管を付けた１００ｍｌ容丸底フラスコに
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液１
５ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに３０分撹はんを続けて反応させた。得
られた部分加水分解物の０．１％水溶液の表面張力は４
６．１ｍＮ／ｍであった。
脱水メタノール３０ｍｌを入れ、前記参考例で得られた
オリゴ糖脂肪酸エステル１００ｍｇを含む脱水メタノー
ル溶液１０ｍｌを加えた。磁気撹はんしながら、室温に
て滴下ロートからナトリウムメチラートの７２％溶液１
５ｍｇを含む脱水メタノール溶液を徐々に滴下した。滴
下終了後、さらに３０分撹はんを続けて反応させた。得
られた部分加水分解物の０．１％水溶液の表面張力は４
６．１ｍＮ／ｍであった。
【００１５】実施例４ 実施例１と同様に水酸化カリウム管をつけた１００ｍｌ
丸底フラスコに前記参考例で得られたオリゴ糖脂肪酸エ
ステル５００ｍｇの２０ｍｌメタノール溶液を入れ、金
属ナトリウム５０ｍｇの５０ｍｌ脱水メタノール溶液を
徐々に加え、室温で２時間撹はんした。反応液中に非水
用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、オルガノ
（株）製］を、ｐＨ試験紙で確認しながら中性になるま
で加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別し、反液を
濃縮、乾燥して脂肪酸と糖との混合物を得た。収量２４
０ｍｇ。次に、この混合物１５０ｍｇを水２００ｍｌに
溶解した後、クロロホルム１００ｍｌを用いてクロロホ
ルム可溶成分（脂肪酸、色素等）を溶出させて取り除い
た。蛋白質のような浮遊物があったので、濾紙（Ｔｏｙ
ｏ ５ｃ）を用いて除去した後、各層を減圧下で濃縮
（４５℃）した。 クロロホルム層：１４ｍｇ、水層：
１２５ｍｇ。水層の１００ｍｇを以下の条件でカラムク
ロマトグラフィー分離した。 （１）担体：活性炭 １０ｇ （２）溶媒水のみ：〜４００ｍｌ 水：エタノール＝９：１：４００ｍｌ〜８００ｍｌ 水：エタノール＝４：１：８００ｍｌ〜
丸底フラスコに前記参考例で得られたオリゴ糖脂肪酸エ
ステル５００ｍｇの２０ｍｌメタノール溶液を入れ、金
属ナトリウム５０ｍｇの５０ｍｌ脱水メタノール溶液を
徐々に加え、室温で２時間撹はんした。反応液中に非水
用イオン交換樹脂［アンバーリスト１５、オルガノ
（株）製］を、ｐＨ試験紙で確認しながら中性になるま
で加えた。２時間撹はんした後、樹脂を濾別し、反液を
濃縮、乾燥して脂肪酸と糖との混合物を得た。収量２４
０ｍｇ。次に、この混合物１５０ｍｇを水２００ｍｌに
溶解した後、クロロホルム１００ｍｌを用いてクロロホ
ルム可溶成分（脂肪酸、色素等）を溶出させて取り除い
た。蛋白質のような浮遊物があったので、濾紙（Ｔｏｙ
ｏ ５ｃ）を用いて除去した後、各層を減圧下で濃縮
（４５℃）した。 クロロホルム層：１４ｍｇ、水層：
１２５ｍｇ。水層の１００ｍｇを以下の条件でカラムク
ロマトグラフィー分離した。 （１）担体：活性炭 １０ｇ （２）溶媒水のみ：〜４００ｍｌ 水：エタノール＝９：１：４００ｍｌ〜８００ｍｌ 水：エタノール＝４：１：８００ｍｌ〜
【００１６】フラクションンは１０ｍｌずつ採取し、Ｈ
ＰＬＣ分析を行った。フラクションＮｏ．５８〜７０が
一成分であったので、減圧濃縮してオリゴ糖の粗結晶を
得た。濃縮時、メタノールを加えて減圧留去し、乾燥さ
せた。収量６５ｍｇ。オリゴ糖の粗結晶６５０ｍｇを、
分取用のＨＰＬＣカラムを用いることによって精製し
た。条件は以下のとおりである。 収量 ２４７ｍｇ。 カラム μＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ−ＮＨ２ ５μ １
００Ａ １９ｍｍ×１５ｃｍ 溶媒 Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＮ＝４０：６０ 流速 １０ｍｌ／ｍｉｎ 検出器 ＲＩ Ｗａｔｅｒｓ４１０，ＵＶ Ｗａｔｅｒ
ｓ９９１ ＦＡＢ／ＭＳ分析により、オリゴ糖の分子量は６６６で
あった。さらに、Ｂｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚＮＭＲスペ
クトロメーターを用いて３％Ｄ２Ｏ溶液の１Ｈ及び１３
Ｃ ＭＭＲ）１Ｈ−ＣＯＳＹスペクトル測定を行い、グ
ルコースのみから成るテトラオリゴ糖（テトラグルコー
ス）であることがわかった。１ＨＮＭＲ及び１３Ｃ Ｎ
ＭＲデータを以下に示す。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ＝３．５４），
４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ ＮＭＲ（１００
ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５２，９７．１９，８
２．０９，７８．７３，７８．６３，７６．５２，７
４．７６,７４．６０，７２．７７，７１．９７，６
３．８０，６２．９８
ＰＬＣ分析を行った。フラクションＮｏ．５８〜７０が
一成分であったので、減圧濃縮してオリゴ糖の粗結晶を
得た。濃縮時、メタノールを加えて減圧留去し、乾燥さ
せた。収量６５ｍｇ。オリゴ糖の粗結晶６５０ｍｇを、
分取用のＨＰＬＣカラムを用いることによって精製し
た。条件は以下のとおりである。 収量 ２４７ｍｇ。 カラム μＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ−ＮＨ２ ５μ １
００Ａ １９ｍｍ×１５ｃｍ 溶媒 Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＮ＝４０：６０ 流速 １０ｍｌ／ｍｉｎ 検出器 ＲＩ Ｗａｔｅｒｓ４１０，ＵＶ Ｗａｔｅｒ
ｓ９９１ ＦＡＢ／ＭＳ分析により、オリゴ糖の分子量は６６６で
あった。さらに、Ｂｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚＮＭＲスペ
クトロメーターを用いて３％Ｄ２Ｏ溶液の１Ｈ及び１３
Ｃ ＭＭＲ）１Ｈ−ＣＯＳＹスペクトル測定を行い、グ
ルコースのみから成るテトラオリゴ糖（テトラグルコー
ス）であることがわかった。１ＨＮＭＲ及び１３Ｃ Ｎ
ＭＲデータを以下に示す。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ＝３．５４），
４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ ＮＭＲ（１００
ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５２，９７．１９，８
２．０９，７８．７３，７８．６３，７６．５２，７
４．７６,７４．６０，７２．７７，７１．９７，６
３．８０，６２．９８
【００１７】実施例５ 実施例４で得たテトラグルコースが、リン脂質と相互作
用して、リン脂質からなるリポソームのサイズを大きく
するとともに、リポソーム壁膜の二分子膜構造を乱すこ
とを下記の実験から明らかにした。すなわち、Ｌ，α−
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）２８
μｍｏｌ、コレステロール８μｍｏｌ及びジセチルホス
フェート（ＤＣＰ）４μｍｏｌのクロロホルム−メタノ
ール（３：２）溶液を２００ｍｌ容ナス型フラスコに入
れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を蒸発除去
してフラスコ内壁に薄い脂質膜を張った後、減圧下に１
時間静置した。ついで、フラスコに４ｍＭカルセイン溶
液（Ｎａ２ＨＰＯ４１．１５ｇとＫＨ２ＰＯ３０．２０
ｇ／ｌからなる緩衝液、ｐＨ７．２）０．４ｍｌとリン
酸緩衝液２．８ｍｌを加えて、湯浴上で６０℃に加熱し
た後ボルテックスミキサーでフラスコを振動させて器壁
から脂質膜をはぎとってリポソームサスペンジョン
（Ａ）を得た。サスペンションの０．５ｍｌを蛍光分光
光度計用セルに取り、リン酸緩衝液２．０ｍｌを加えて
磁気撹はんした後、蛍光分光光度計を用い、励起光４８
０ｎｍとし、５２０ｎｍでの蛍光強度を測定した。つい
で塩化コバルト六水塩３ｍｇを加えるとリポソーム外水
相のカルセインが消光することを５２０ｎｍでの蛍光強
度から確認し、次いで１０％トリトンＸ−１００水溶液
０．０４ｍｌをセルに加えてリポソーム内水相中のカル
セイン量を測定［Ｎ．Ｏｋｕｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，６９１，３３２（１
９８２）］することにより、リポソーム内水相が２３％
で、大きさが０．３μｍあることを確かめた。こうし
て、リポソームの生成と内水相の大きさが確認された。
次に、前記のリボソームサスペンジョン（Ａ）０．４ｍ
ｌにリン酸緩衝液２．８ｍｌを加え、ついでコレステロ
ールまたは本発明のテトラグルコース１００ｍｇを加え
た後、室温（約２０℃）にて１時間静置し、蛍光測定を
塩化コバルトの添加前後及びトリトンＸ−１００の添加
後の３回行うことにより、該テトラグルコース添加系の
内水相の内包率を測定すると、４．５％で、リポソーム
の大きさが、１．２μｍ；コレステロール添加系は、
１．０％で、リポソームの大きさが０．６μｍとなっ
た。以上の実験から、テトラグルコースがＤＰＰＣに対
してコレステロールよりも大きい親和性を示すことが明
らかである。
用して、リン脂質からなるリポソームのサイズを大きく
するとともに、リポソーム壁膜の二分子膜構造を乱すこ
とを下記の実験から明らかにした。すなわち、Ｌ，α−
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）２８
μｍｏｌ、コレステロール８μｍｏｌ及びジセチルホス
フェート（ＤＣＰ）４μｍｏｌのクロロホルム−メタノ
ール（３：２）溶液を２００ｍｌ容ナス型フラスコに入
れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を蒸発除去
してフラスコ内壁に薄い脂質膜を張った後、減圧下に１
時間静置した。ついで、フラスコに４ｍＭカルセイン溶
液（Ｎａ２ＨＰＯ４１．１５ｇとＫＨ２ＰＯ３０．２０
ｇ／ｌからなる緩衝液、ｐＨ７．２）０．４ｍｌとリン
酸緩衝液２．８ｍｌを加えて、湯浴上で６０℃に加熱し
た後ボルテックスミキサーでフラスコを振動させて器壁
から脂質膜をはぎとってリポソームサスペンジョン
（Ａ）を得た。サスペンションの０．５ｍｌを蛍光分光
光度計用セルに取り、リン酸緩衝液２．０ｍｌを加えて
磁気撹はんした後、蛍光分光光度計を用い、励起光４８
０ｎｍとし、５２０ｎｍでの蛍光強度を測定した。つい
で塩化コバルト六水塩３ｍｇを加えるとリポソーム外水
相のカルセインが消光することを５２０ｎｍでの蛍光強
度から確認し、次いで１０％トリトンＸ−１００水溶液
０．０４ｍｌをセルに加えてリポソーム内水相中のカル
セイン量を測定［Ｎ．Ｏｋｕｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，６９１，３３２（１
９８２）］することにより、リポソーム内水相が２３％
で、大きさが０．３μｍあることを確かめた。こうし
て、リポソームの生成と内水相の大きさが確認された。
次に、前記のリボソームサスペンジョン（Ａ）０．４ｍ
ｌにリン酸緩衝液２．８ｍｌを加え、ついでコレステロ
ールまたは本発明のテトラグルコース１００ｍｇを加え
た後、室温（約２０℃）にて１時間静置し、蛍光測定を
塩化コバルトの添加前後及びトリトンＸ−１００の添加
後の３回行うことにより、該テトラグルコース添加系の
内水相の内包率を測定すると、４．５％で、リポソーム
の大きさが、１．２μｍ；コレステロール添加系は、
１．０％で、リポソームの大きさが０．６μｍとなっ
た。以上の実験から、テトラグルコースがＤＰＰＣに対
してコレステロールよりも大きい親和性を示すことが明
らかである。
【００１８】実施例６ 実施例５ において、ＤＰＰＣのかわりに卵黄レシチンを
用いて全く同様の実験を行うと、レシチン−コレステロ
ール−ＤＣＰ系、レシチン−コレステロール系及びレシ
チン−本発明のテトラグルコース系のリポソームの内包
率はそれぞれ１０％、１５％及び４％であった。コレス
テロールは該テトラグルコースよりも卵黄レシチンに対
して大きな親和性を示すことが考えられる。
用いて全く同様の実験を行うと、レシチン−コレステロ
ール−ＤＣＰ系、レシチン−コレステロール系及びレシ
チン−本発明のテトラグルコース系のリポソームの内包
率はそれぞれ１０％、１５％及び４％であった。コレス
テロールは該テトラグルコースよりも卵黄レシチンに対
して大きな親和性を示すことが考えられる。
【００１９】実施例７ ２Ｍ塩化ナトリウム水溶液を溶媒として５０％グルコー
ス溶液、５０％マンノース溶液、５０％本発明のテトラ
グルコース溶液を調製した。２ｍｌ容のアンプルに各溶
液１．０ｇを取り、ｎ−オクタノールを、１１６．５ｍ
ｇ／２ＭＮａＣｌ、１１６．７ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−５
０％グルコース溶液、１１６．２ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−
５０％マンノース及び１１５．５ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−
５０％該テトラグルコースの割合で加え、４０℃の恒温
水槽に浸漬して振とうした。３日後、目視によりｎ−オ
クタノールの溶解状態を観察したところ、２ＭＮａＣｌ
のアンプル内容物が濁っている他、グルコース、マンノ
ース、及び該テトラグルコースを含むアンプルはいずれ
も透明であった。
ス溶液、５０％マンノース溶液、５０％本発明のテトラ
グルコース溶液を調製した。２ｍｌ容のアンプルに各溶
液１．０ｇを取り、ｎ−オクタノールを、１１６．５ｍ
ｇ／２ＭＮａＣｌ、１１６．７ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−５
０％グルコース溶液、１１６．２ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−
５０％マンノース及び１１５．５ｍｇ／２ＭＮａＣｌ−
５０％該テトラグルコースの割合で加え、４０℃の恒温
水槽に浸漬して振とうした。３日後、目視によりｎ−オ
クタノールの溶解状態を観察したところ、２ＭＮａＣｌ
のアンプル内容物が濁っている他、グルコース、マンノ
ース、及び該テトラグルコースを含むアンプルはいずれ
も透明であった。
【００２０】実施例８ Ｄ２Ｏの０．１Ｍ塩化ナトリウム溶液を溶媒として本発
明のテトラグルコースの３．３３％溶液（Ｗ／Ｗ）０．
８ｇを調製し、ｎ−オクタノール５７ｍｇを加えて、は
じめ４０℃で６時間、次いで恒温室（室温２５℃）にて
３日間磁気撹はんして溶解平衡に到達させた。静置して
下層から０．５ｇをピペットアウトして、ＮＭＲ用試料
管に約０．５ｍｌを入れ、３−（トリメチルシリル）プ
ロピオン酸−２，２，３，３−ｄ４のナトリウム塩０．
１ｍｇを加えてＢｒｕｋｅｒ社２００ＭＨＺ ＮＭＲス
ペクトロメーターにてプロトンＮＭＲスペクトルを測定
した。該テトラグルコースのプロトン（２８Ｈ；ＯＨは
ＯＤとなり観測されないで除いてある）に対するするｎ
−オクタノールのメチレン基のプロトン（１３Ｈ）の面
積強度の比から、３．３％該テトラグルコースの０．１
ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ溶液１ｇ当りのｎ−オクタノールの
可溶化力が２０．４ｍｇと計算され、グルコース（７
Ｈ）の６％溶液（０．２ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ）１ｇ当り
１．４７ｍｇ、及び２ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ溶液中の５．
１８ｍｇよりも、はるかに大きかった。以上の実験か
ら、該テトラグルコースがｎ−オクタノールなどの疎水
性物質に対して親和力を有することが示された。
明のテトラグルコースの３．３３％溶液（Ｗ／Ｗ）０．
８ｇを調製し、ｎ−オクタノール５７ｍｇを加えて、は
じめ４０℃で６時間、次いで恒温室（室温２５℃）にて
３日間磁気撹はんして溶解平衡に到達させた。静置して
下層から０．５ｇをピペットアウトして、ＮＭＲ用試料
管に約０．５ｍｌを入れ、３−（トリメチルシリル）プ
ロピオン酸−２，２，３，３−ｄ４のナトリウム塩０．
１ｍｇを加えてＢｒｕｋｅｒ社２００ＭＨＺ ＮＭＲス
ペクトロメーターにてプロトンＮＭＲスペクトルを測定
した。該テトラグルコースのプロトン（２８Ｈ；ＯＨは
ＯＤとなり観測されないで除いてある）に対するするｎ
−オクタノールのメチレン基のプロトン（１３Ｈ）の面
積強度の比から、３．３％該テトラグルコースの０．１
ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ溶液１ｇ当りのｎ−オクタノールの
可溶化力が２０．４ｍｇと計算され、グルコース（７
Ｈ）の６％溶液（０．２ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ）１ｇ当り
１．４７ｍｇ、及び２ＭＮａＣｌ−Ｄ２Ｏ溶液中の５．
１８ｍｇよりも、はるかに大きかった。以上の実験か
ら、該テトラグルコースがｎ−オクタノールなどの疎水
性物質に対して親和力を有することが示された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 染谷 淳一郎 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 高森 康彰 静岡県磐田市中泉3069 磐田化学工業株 式会社内 (72)発明者 伊藤 卓治 静岡県磐田市中泉3069 磐田化学工業株 式会社内 審査官 谷口 博 (56)参考文献 特開 昭62−175189（ＪＰ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】 ミクロポリスポラ属に属し、オリゴ糖脂
肪酸エステルを生産する能力を有する放線菌を栄養培地
に培養して産生したオリゴ糖脂肪酸エステルの完全加水
分解物であって、分子量が６６６で、ＮＭＲスペクトル
測定値が下記値を有するテトラグルコース。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（４００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝５．３４（ｄ，Ｊ
＝３．５４），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８１）１３Ｃ
ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ＝１０６．５
２，９７．１９，８２．０９，７８．７３，７８．６
３，７６．５２，７４．７６，７４．６０，７２．７
７，７１．９７，６３．８０，６２．９８ - 【請求項２】 請求項１記載のオリゴ糖脂肪酸エステル
の部分加水分解物。 - 【請求項３】 請求項１記載のテトラグルコース又は請
求項２記載の部分加水分解物からなる界面活性剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5112142A JP2564752B2 (ja) | 1993-04-15 | 1993-04-15 | テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステル |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5112142A JP2564752B2 (ja) | 1993-04-15 | 1993-04-15 | テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステル |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06298784A JPH06298784A (ja) | 1994-10-25 |
| JP2564752B2 true JP2564752B2 (ja) | 1996-12-18 |
Family
ID=14579275
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5112142A Expired - Lifetime JP2564752B2 (ja) | 1993-04-15 | 1993-04-15 | テトラグルコース及びその部分脂肪酸エステル |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2564752B2 (ja) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6143992A (ja) * | 1984-08-03 | 1986-03-03 | Dai Ichi Kogyo Seiyaku Co Ltd | 糖または糖アルコ−ルの脂肪酸エステルの製造法 |
| JPS61202700A (ja) * | 1985-03-07 | 1986-09-08 | Norin Suisansyo Shokuhin Sogo Kenkyusho | マルトテトラオ−スの製造方法 |
| JPS62175189A (ja) * | 1985-12-27 | 1987-07-31 | Nippon Saafuakutanto Kogyo Kk | 発酵法によるオリゴ糖脂肪酸エステルの製造法 |
-
1993
- 1993-04-15 JP JP5112142A patent/JP2564752B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06298784A (ja) | 1994-10-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |