JP7264200B2 - 頭皮用剤 - Google Patents
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(1)アスパラサスリネアリス、イチョウ、イネ、ウコン、ウンシュウミカン、オウレン、ガンビールノキ、キイチゴ、キナノキ、クララ、シナニッケイ、ゲンノショウコ、サンザシ、ショウガ、セイヨウオトギリソウ、セイヨウトチノキ、セイヨウバラ、チョウジ、テンチャ、ドクダミ、ノイバラ、ハマメリス、ヒキオコシ、ヒバマタ、ブドウ、ホップ、マグワ、ユーカリ、ヨーロッパシラカバ及びワレモコウからなる群から選ばれる少なくとも1種の植物又はこれらのエキスを含有することを特徴とする、コラーゲン過剰産生抑制剤、
(2)頭皮に適用される、(1)に記載のコラーゲン過剰産生抑制剤、
(3)(1)又は(2)に記載のコラーゲン過剰産生抑制剤を含む、頭皮柔軟剤、
(4)TGF-β刺激によりコラーゲン産生量が増加した線維芽細胞に対して被験物質を添加し、コラーゲン過剰産生を抑制することを指標として、コラーゲン過剰産生抑制剤又はコラーゲン過剰産生抑制作用に基づく頭皮柔軟剤をスクリーニングする方法、
である。
<試験方法>
ヒト線維芽細胞(倉敷紡績(株))を96穴プレートに1×104細胞/穴の密度で播種し、37℃、CO2 5%にセットしたインキュベーター内で24時間予備培養した。培地には、血清(2体積%)、L-グルタミン及びペニシリン・ストレプトマイシンを含むFibroLife BM基礎培地(倉敷紡績(株))を用いた。予備培養後、PBSにて細胞表面を洗浄した後、下記の通りに培地を添加した。無刺激群には、溶媒(1,3-ブチレングリコール又はエタノール)の終濃度が各植物エキス群と同一となるように溶媒を含有した無血清培地を添加した。TGF-β1刺激(対照)群には、コラーゲン産生を亢進させるためにTGF-β1(10ng/mL)を加え、さらに溶媒(1,3-ブチレングリコール又はエタノール)の終濃度が各植物エキス群と同一となるように溶媒を加えた無血清培地を添加した。各植物エキス群には、コラーゲン過剰産生抑制作用を評価する素材として植物エキス(10μg/mL)を加え、さらにTGF-β1(10ng/mL)を加えた無血清培地を添加した。培地交換後、72時間培養した。その後、培地を回収し、コラーゲン産生量の測定に用いた。培地回収後の細胞に、M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent(サーモフィッシャーサイエンティフィック(株))を添加して細胞溶解液を回収し、細胞蛋白質量の測定に用いた。コラーゲン産生量は、Procollagen type I C-peptide (PIP) EIA Kit(タカラバイオ(株))を用いて、取扱説明書の手順に従い測定した。細胞蛋白質量は、BCA protein assay reagent kit(サーモフィッシャーサイエンティフィック(株))を用いて、取扱説明書の手順に従い測定した。コラーゲン産生量の測定値は、細胞蛋白質量当たりのPIP量(ng/μg protein)とした。各穴のコラーゲン産生量の測定値から、各群3穴の平均値及び標準誤差を算出した。なお、1,3-ブチレングリコール及びエタノールの終濃度は、細胞に対して毒性を示さないようにいずれも0.5体積%以下とした。
図1は、TGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量と、無刺激群のコラーゲン産生量を示した図である。コラーゲン産生量の測定値(ng/μg protein)は、無刺激群で12.35±0.62、TGF-β1刺激(対照)群で26.79±0.69であり、TGF-β1刺激(対照)群でコラーゲン産生の有意な亢進が認められた。
図2~図5は、本発明の各植物エキスのコラーゲン過剰産生抑制効果を示した図である。図2では、コラーゲン過剰産生抑制効果について、TGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量を100%として、各植物エキス群のコラーゲン産生量の相対値(平均値±標準誤差)で示した(溶媒:0.1%1,3-ブチレングリコール)。図1に示したTGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量の測定値(ng/μg protein)は26.79±0.69であり、このTGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量を100%として図2に示した。図2から明らかなように、各植物エキスはコラーゲン過剰産生抑制効果を示した。
図3では、コラーゲン過剰産生抑制効果について、TGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量を100%として、各植物エキス群のコラーゲン産生量の相対値(平均値±標準誤差)で示した(溶媒:0.3%1,3-ブチレングリコール)。図3から明らかなように、イネ、ドクダミのエキスはコラーゲン過剰産生抑制効果を示した。なお、コラーゲン産生量の測定値(ng/μg protein)は、無刺激群で8.77±0.08(ng/μg protein)、TGF-β1刺激(対照)群で12.97±1.11(ng/μg protein)であり、TGF-β1刺激(対照)群でコラーゲン産生の有意な亢進が認められた。
図4では、コラーゲン過剰産生抑制効果について、TGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量を100%として、各植物エキス群のコラーゲン産生量の相対値(平均値±標準誤差)で示した(溶媒:0.1%エタノール)。図4から明らかなように、シナニッケイ、ショウガのエキスはコラーゲン過剰産生抑制効果を示した。なお、コラーゲン産生量の測定値(ng/μg protein)は、無刺激群で7.12±0.81、TGF-β1刺激(対照)群で13.63±1.13であり、TGF-β1刺激(対照)群でコラーゲン産生の有意な亢進が認められた。
図5では、コラーゲン過剰産生抑制効果について、TGF-β1刺激(対照)群のコラーゲン産生量を100%として、各植物エキス群のコラーゲン産生量の相対値(平均値±標準誤差)で示した(溶媒:0.5%エタノール)。図5から明らかなように、チョウジのエキスはコラーゲン過剰産生抑制効果を示した。なお、コラーゲン産生量の測定値(ng/μg protein)は、無刺激群で8.59±0.26、TGF-β1刺激(対照)群で12.77±1.54であり、TGF-β1刺激(対照)群でコラーゲン産生の亢進が認められた。
Claims (3)
- オウレン又はこのエキスを有効成分として含有することを特徴とする、細胞外分泌のコラーゲン量を抑制するコラーゲン過剰産生抑制剤。
- 頭皮に適用される、請求項1に記載のコラーゲン過剰産生抑制剤。
- オウレン又はこのエキスを有効成分として含有することを特徴とする、頭皮柔軟剤。
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