JP2016084337A - 外用組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物を提供する。【解決手段】皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物は、（Ａ）ヘパリン類似物質と、（Ｂ）アラントイン、パントテン酸、ビタミンＡ類、これらの薬学的に許容される塩、及びこれらの薬学的に許容される誘導体からなる群より選ばれる１種又は２種以上と、（Ｃ）非イオン性界面活性剤と、を含有する。【選択図】なし

Description

本発明は、皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物に関する。

痒みを伴う皮膚疾患として、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎、主婦湿疹などの乾燥性皮膚疾患、炎症性皮膚疾患、皮膚掻痒症、あせも、しもやけ、ひび、あかぎれ等が知られている。これらの皮膚疾患に罹患した患者の皮膚は、外部の刺激に対して敏感になり、これが、痒みが繰り返し生じる原因の一つとなっている。この痒みに対して、患者は過剰な掻破行動に及んでしまうことも多い。

これらの症状に対しては、抗ヒスタミン剤及びクロタミトンなどの鎮痒成分、ヘパリン類似物質及び尿素などの保湿剤、アラントイン及びグリチルリチン酸塩などの抗炎症成分を有効成分とした皮膚外用組成物が広く用いられている。

これらのうち、ヘパリン類似物質は、皮膚保湿作用及び血行促進作用を有する。具体的には、ヘパリン類似物質の皮膚保湿作用により、皮膚の乾燥性症状が軽減される。また、ヘパリン類似物質の血行促進作用により、使用部位の血行が促進され、血行障害に基づく痛みや腫れが軽減される。このため、ヘパリン類似物質は、皮脂欠乏症、進行性指掌角皮症、凍瘡、肥厚性瘢痕・ケロイド、血行障害に基づく疼痛又は炎症性疾患、血栓性静脈炎、外傷（打撲、捻挫、挫傷）後の腫脹・血腫・腱鞘炎・筋肉痛・関節炎等の治療又は予防に用いられる。

特許文献１には、クロタミトンとヘパリン類似物質を含む皮膚外用組成物により、乾燥性皮膚疾患や炎症性皮膚疾患等に伴う痒みを改善できると記載されている。

特許文献２には、抗ヒスタミン剤含有製剤とヘパリン類似物質を含む皮膚外用組成物により、乾燥性皮膚疾患及び炎症性皮膚疾患等に伴う痒みを改善できると記載されている。

特許文献３には、非ステロイド抗炎症剤とヘパリン類似物質を含む皮膚外用組成物により、乾燥性皮膚疾患及び炎症性皮膚疾患等に伴う痒みを改善できると記載されている。

特許文献４には、ヘパリン類似物質、アラントイン、及びパントテン酸を配合した皮膚外用組成物が開示されている。そして、この皮膚外用剤によれば、角層細胞の正常な分化を促進することできると記載されている。

特許文献５には、ビタミンＡ類、エデト酸又はその塩、及びヘパリン類似物質を含む皮膚外用組成物が開示されている。そして、この皮膚外用組成物によれば、ビタミンＡ類を安定して含有することができると記載されている。

ところで、痒みに対する患者の過剰な掻破行動により、皮膚が傷ついたり炎症が起こったりし、皮膚に掻痒痕が残ることがある。場合によっては、この掻痒痕は色素沈着を伴う。皮膚への色素沈着が生じる他の場合としては、例えば熱傷、外傷による外部からの傷が完治した後、色素沈着してしまう場合（瘢痕等ともいう）が挙げられる。また、ホルモンバランスの乱れ、加齢、急激な強い日焼け、慢性的な摩擦等も、皮膚への色素沈着の原因となる。皮膚の色素沈着は皮膚外観上または美容上の観点から、抑制、防止、予防又は改善することが望まれている。また、真皮に存在するメラノサイトが過剰にメラニンを産生することで、いわゆる黒あざ、茶あざ、青あざ等のあざ（痣）となることも知られている。更に、外傷（打撲、捻挫、挫傷）などで皮膚が傷ついた場合、色素沈着を伴うだけでなく、血腫（皮下出血による青あざ）が発生し色素沈着が目立つ原因にもなる。

血腫は、外傷によって皮膚又は皮下組織にある毛細血管が破れることによって血液が組織内に滞留したものであり、皮下血腫の症状は外傷を受けた部位が青または紫色に変色する。血腫は、血管及び組織の修復により、滲出物排除により徐々に消失するものの、加齢や色素沈着を併用することで回復までに長期間要することもある。このため皮膚外観上または美容上の観点から早期に血腫を消失させる又は血腫の色を早期に退色（薄くなる）させることが望まれる。このため色素沈着または血腫の抑制、防止、予防又は改善が望まれていた。

特開２０００−２２９８５２号公報 特開２０００−２２９８８４号公報 特開２０００−３８３５２号公報 特開２０１１−２３１１２８号公報 特開２０１２−３６１８３号公報

本発明の目的は、皮膚疾患の抑制、防止、予防、又は改善に使用できる外用組成物を提供することである。

上記の課題を解決する皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物は、（Ａ）ヘパリン類似物質と、（Ｂ）アラントイン、パントテン酸、ビタミンＡ類、これらの薬学的に許容される塩、及びこれらの薬学的に許容される誘導体からなる群より選ばれる１種又は２種以上と、（Ｃ）非イオン性界面活性剤と、を含有する。

上記の構成によれば、外用組成物が成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）を含むので、それらの相乗効果によりメラニン産生抑制効果が発揮される。従って、皮膚へ色素が沈着することを抑制、防止、予防、又は改善することができる。

本発明によれば、外用組成物の成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）を含んでいるので、それらの相乗効果により、皮膚へ色素が沈着することを抑制、防止、予防、又は改善することができる。

ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量とメラニン産生量減少率の関係を示すグラフである。

以下、本発明の好適な実施の形態について詳細に説明する。なお、本明細書において、外用組成物に添加した成分等の、特定の成分等に対する相対量を示す場合には、「重量部」の単位を用いる。

本実施形態の外用組成物Ｅは、例えば、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎、主婦湿疹などの乾燥性皮膚疾患、炎症性皮膚疾患、皮膚掻痒症、あせも、しもやけ、ひび、あかぎれ等の痒みを伴う皮膚疾患の患部に塗布される外皮用薬として用いられる。

外用組成物Ｅには、有効成分として、以下説明する成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）が配合されている。

上記の成分（Ａ）は、ヘパリン類似物質である。ヘパリン類似物質は、血行促進作用、繊維芽細胞増殖抑制作用を有することが知られている。

外用組成物Ｅに配合されるヘパリン類似物質は、コンドロイチン多硫酸等の多硫酸化ムコ多糖の総称である。ヘパリン類似物質は、ムコ多糖を構成する単糖１分子当たり平均０．５〜５分子、好ましくは平均０．６〜３分子の硫酸基を有することが好ましい。

ヘパリン類似物質としては、一般的に入手できる市販品をそのまま用いてよい。また、ムコ多糖を硫酸化する方法、または天然に存在する硫酸化多糖を抽出する等の方法によりヘパリン類似物質を得ることもできる。天然に存在する硫酸化多糖を抽出する方法としては、例えば、ウシ、ブタ等の動物の気管支を含む内臓より水性担体を用いて抽出・精製し、その後、必要に応じて抽出物を硫酸化する方法がある。ヘパリン類似物質としては、日本薬局方外医薬品規格に収載されているものが好適に使用される。

また、ヘパリン類似物質の分子量には特に制限はないが、通常、１０００〜１０００００００程度であり、好ましくは５０００〜１００００００である。

外用組成物Ｅに配合される成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、本願効果を奏し得る限り、特に制限されないが、例えば、０．００００１重量％以上である。成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、０．００１重量％以上が好ましく、０．０１重量％以上がより好ましく、０．０５重量％以上がさらに好ましく、０．１重量％以上がさらにより好ましく、０．３重量％以上が特に好ましい。特定の実施態様においては、成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を０．４５重量％以上としてもよい。成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を０．００００１重量％以上とすることによって好ましい効果を得ることができる。成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を０．００１重量％以上とすることによって優れた効果を得ることができ、また、０．０１重量％以上とすることにより、より優れた効果を得ることができる。また、成分（Ａ）の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、１０重量％以下が好ましく、７重量％以下がより好ましく、５重量％以下がさらにより好ましく、１重量％以下が特に好ましい。成分（Ａ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合が１０重量％よりも小さい場合には、外用組成物Ｅの使用時のベタツキ感が抑制され、より優れた使用感が得られる。

成分（Ｂ）は、アラントイン、パントテン酸、ビタミンＡ類、これらの薬学的に許容される塩、及びこれらの薬学的に許容される誘導体からなる群より選ばれる１種又は２種以上である。アラントインは、創傷治癒促進作用を有する有効成分である。パントテン酸は、糖質、タンパク質、脂質等のエネルギーの代謝を補助する作用を有し、細胞の賦活化、新陳代謝の活発化、保湿、抵抗力の増強等の有用な生理活性を発揮することが知られている。ビタミンＡ類は、打ち身などに伴う皮下出血によるあざの消失促進作用、またはあざの退色促進作用を有する有効成分である。成分（Ｂ）は、１種単独で使用しても、また２種以上を任意に組み合わせて使用しても、いずれでもよい。

外用組成物Ｅに配合されるアラントインの塩の具体例としては、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム等が挙げられる。

外用組成物Ｅに配合されるアラントインの誘導体の具体例としては、アラントイン酸、ジヒドロキシアルミニウムアラントイネート、アラントイングリチルレチン、クロロヒドロキシアルミニウムアラントイネート等が挙げられる。

外用組成物Ｅに配合されるパントテン酸の塩の具体例としては、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム等が挙げられる。

外用組成物Ｅに配合されるパントテン酸の誘導体の具体例としては、パンテノール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル等が挙げられる。

外用組成物Ｅに配合されるビタミンＡ類としては、レチノール又はレチノイン酸のエステルが好ましく、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、δ−レチノイン酸トコフェロールが挙げられる。

ビタミンＡ類は、動物材料などの天然物から単離したもの、化学合成したものの何れであってもよい。また、ビタミンＡ類は、ビタミンＡ油の形態で用いることもできる。ビタミンＡ油は、動物から抽出、精製した天然油でもよく、また、ビタミンＡ類を植物油などに溶解させたものでもよい。後者の代表例として、日本薬局方記載のビタミンＡ油（１ｇにつき３００００ビタミンＡ単位（ＩＵ）以上を含む）が挙げられる。

外用組成物Ｅに配合される成分（Ｂ）の配合量（成分（Ｂ）として２種以上の成分が配合される場合は、それらの配合量の和）の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、一例として、０．０００１重量％以上である。外用組成物Ｅに配合される成分（Ｂ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、０．００１重量％以上が好ましく、０．０４重量％以上がより好ましく、０．０５重量％以上がさらに好ましく、０．５重量％以上がさらにより好ましく、１．５重量％以上が特に好ましい。成分（Ｂ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を０．０００１重量％以上とすることによって好ましい効果を得ることができ、０．００１重量％以上とすることにより、より優れた効果を得ることができる。また、成分（Ｂ）の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、１０重量％以下が好ましく、７重量％以下がより好ましく、５重量％以下がさらに好ましい。上記の範囲であれば、外用組成物Ｅは良好な使用感を有することができる。成分（Ｂ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を１０重量％以下とすることにより、より優れた使用感が得られる。また、成分（Ｂ）の含有量は、成分（Ａ）の１重量部に対して、例えば０．０００１〜２５重量部である。成分（Ｂ）は、成分（Ａ）の１重量部に対して０．０１〜１０重量部含まれていることが好ましく、０．０５〜５重量部含まれていることがより好ましく、０．１〜２重量部含まれていることがさらに好ましい。

成分（Ｃ）は、非イオン性界面活性剤である。成分（Ｃ）は、１種単独で使用しても、また２種以上を任意に組み合わせて使用しても、いずれでもよい。

非イオン性界面活性剤としては、エステル系の非イオン性界面活性剤、エーテル系の非イオン性界面活性剤、アルキルグリコシド、シリコーン系界面活性剤等が挙げられる。

エステル系の非イオン性界面活性剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル類、グリセリン脂肪酸エステル類、ポリグリセリン脂肪酸エステル類、ポリグリセリン脂肪酸類、プロピレングリコール脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンモノヤシ油脂肪酸グリセリル等が挙げられる。

ソルビタン脂肪酸エステル類としては、例えば、非イオン性界面活性剤としては、例えば、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ペンタ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン等が挙げられる。グリセリン脂肪酸エステル類としては、例えば、モノステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸等が挙げられる。ポリグリセリン脂肪酸エステル類としては、例えば、モノステアリン酸ポリグリセリル、モノイソステアリン酸ポリグリセリル、ジイソステアリン酸ポリグリセリル、モノラウリン酸ポリグリセリル、モノオレイン酸ポリグリセリル、モノミリスチン酸ポリグリセリル等が挙げられる。ポリグリセリン脂肪酸類としては、例えば、モノステアリン酸ポリグリセリル、モノイソステアリン酸ポリグリセリル、ジイソステアリン酸ポリグリセリル、モノラウリン酸ポリグリセリル、モノオレイン酸ポリグリセリル、グリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。プロピレングリコール脂肪酸エステル類としては、例えば、モノステアリン酸プロピレングリコール、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル等が挙げられる。硬化ヒマシ油誘導体としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０（ＨＣＯ−４０）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０（ＨＣＯ−５０）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０（ＨＣＯ−６０）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油８０などのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられる。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類としては、例えば、モノラウリル酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０）、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（ポリソルベート６０）、モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）、イソステアリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン等が挙げられる。

エーテル系の非イオン性界面活性剤としては、例えば、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル等が挙げられる。

ポリオキシアルキレンアルキルエーテルとしては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油エーテル、ポリオキシエチレン−２−エチルヘキシルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンベヘニルエーテル等が挙げられる。

アルキルグリコシドとしては、例えば、オクチルグリコシド、デシルグリコシド、ラウリルグリコシド等が挙げられる。

シリコーン系界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体、ラウリルＰＥＧ−９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン、ＰＥＧ−９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン等が挙げられる。

非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値は、川上法により測定された値を基準にしている。ＨＬＢ値は、組成物の皮膚への馴染みが良い点で、８以上であることが好ましく、特に９以上、中でも１０以上のものが好適である。つまり、非イオン性界面活性剤は、疎水性でないことが好ましい。

外用組成物Ｅにおいて、成分（Ｃ）の配合量（成分（Ｃ）として２種以上の成分が配合される場合は、それらの配合量の和）の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、０．０００１重量％以上が好ましく、０．００５重量％以上がより好ましく、０．０１重量％以上がさらに好ましく、０．０５重量％以上が特に好ましい。成分（Ｃ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を０．０００１重量％以上とすることにより、より優れた効果を得ることができる。また、成分（Ｃ）の外用組成物Ｅの全量に占める割合は、２５重量％以下が好ましく、１０重量％以下がより好ましく、５重量％以下がさらに好ましい。成分（Ｃ）の配合量の外用組成物Ｅの全量に占める割合を２５重量％以下とすることにより、外用組成物Ｅの使用時のベタツキ感が抑制され、より優れた使用感が得られる。また、成分（Ｃ）の含有量は、成分（Ａ）の１重量部に対して、例えば、０．１〜８０重量部である。成分（Ｃ）は、成分（Ａ）の１重量部に対して、１〜５０重量部含まれていることが好ましく、５〜４０重量部含まれていることがより好ましく、６〜３５重量部含まれていることがさらに好ましい。

外用組成物Ｅは、上述の成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が配合されていることにより、例えば痒みを伴う皮膚疾患において、患部を掻いた後に皮膚へ色素が沈着することを抑制、防止、予防、又は改善することができる。また、外用組成物Ｅは、上述の成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が配合されていることにより、打ち身などに伴って発生する血腫の消失および／または退色を促進できる。

外用組成物Ｅには、種々の皮膚疾患に対する有効性をより高めるために、必要に応じて上記必須成分の他に、非ステロイド性抗炎症剤、ビタミン類、消炎鎮痛剤、抗真菌剤、ステロイド剤、局所麻酔剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、角質軟化剤、保湿剤、収斂剤、抗酸化剤、清涼化剤等の種々の有効成分を配合することができる。また、これらの成分の配合量は、本発明の効果を奏すれば特に制限されないが、望ましくは薬学上許容される上限配合量を限度に適宜選択される。

外用組成物Ｅには、上記の有効成分以外に、通常の外用組成物に配合される水溶性成分、保存剤、ｐＨ調整剤、増粘剤、酸化防止剤等を必要に応じて適宜配合することができる。

外用組成物Ｅの剤型としては、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、乳剤、外用液剤、貼付剤、固形剤、パップ剤、パック剤、テープ剤等が挙げられる。

なお、各製剤の常法によって外用組成物Ｅを調製することができる。このとき、各種剤型の製剤の調整に必要な公知の賦形剤等の成分を、適宜配合する。

外用組成物Ｅの皮膚への適用量や用法は、特に制限されず、例えば、１日数回（例えば、約１〜５回、好ましくは１〜３回）、１回当たり適量（例えば、約０．０５〜５ｇ）を皮膚に塗布すればよい。なお、外用組成物Ｅの皮膚への適用量や用法は使用対象の皮膚の状態、年齢、性別などによって異なる。塗布期間は、例えば約２週間〜６ヶ月、好ましくは約１〜６ヶ月間とすればよい。外用組成物Ｅは、掻痒によってメラニン産生が促進され、皮膚の色素沈着が生じる虞のある人、又は、掻痒によりメラニン産生が促進されて生じた皮膚の色素沈着を有する人に好適に使用できる。

本実施形態にかかる外用組成物Ｅは、例えば、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎、主婦湿疹などの乾燥性皮膚疾患、炎症性皮膚疾患、皮膚掻痒症、あせも、しもやけ、ひび、あかぎれ等の痒みを伴う皮膚疾患の患部に塗布される外皮用薬として用いられるとして説明したが、外用組成物Ｅの用途は特にこれに限定されない。例えば、外用組成物Ｅを、例えば熱傷、外傷による外部からの傷が完治した後に皮膚に生じた色素沈着（例えば、瘢痕）に対し塗布する外皮用薬として用いてもよい。また、外用組成物Ｅを、例えばホルモンバランスの乱れ、加齢、急激な強い日焼け、慢性的な摩擦等が原因で生じた色素沈着に対し塗布する外皮用薬として用いてもよい。さらに、熱傷、外傷の傷が完治した後や、ホルモンバランスの乱れ、加齢、急激な強い日焼け、慢性的な摩擦等が発生した後、色素沈着が生じる前であっても、色素沈着の予防又は防止の目的で、外用組成物Ｅを皮膚に塗布してもよい。また、外用組成物Ｅを、あざ（例えば、黒あざ、茶あざ、青あざ）の症状がみられる皮膚の部位に塗布してもよいし、あざの予防又は防止の目的で、外用組成物Ｅを塗布してもよい。

以下、評価試験Ｉ及び評価試験ＩＩで作製した実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。本実験においては、メラノーマ細胞を含む細胞溶解液を調製し、細胞１つあたりのメラニン産生量を計測してメラニン産生量を減少させる効果を評価することにより、色素沈着に対する抑制、防止、予防又は改善の効果の指標とした。なお、本発明はメラニン産生抑制の観点から色素沈着の評価を行っている。

（評価試験Ｉ）
（サンプルの調製）
まず、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル）培地を用いて、マウス由来のＢ１６メラノーマ細胞を６ウェルプレート（１ウェルあたり１５．５３ｍＬ）に３ｍＬずつ播種した。このとき、マウス由来のＢ１６メラノーマ細胞の細胞密度が３．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように調製した。そして、プレートを、３７℃及び５％炭酸ガス及び９５％空気の環境下で１日間培養した。

その後、培地を新たなＤＭＥＭ培地に交換し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いて調製した被験薬を、終濃度が所定の値となるように各ウェルに添加した。なお、ここで添加する被験薬の種類及び濃度は、各実施例、比較例、参考例により異なり、これについては後述する。そして、サンプルをさらに３日間培養した。プレート中の最終的な液量は、１ウェルあたり、約３ｍＬであった。

培養終了後、各ウェルの上清を除去し、サンプルをＰＢＳ（−）で１回洗浄した。そして、各ウェルに０．１Ｎ・ＮａＯＨを６００μＬ添加して室温にて２４時間静置した。これにより、プレート中の細胞が溶解し、細胞溶解液が得られた。細胞溶解液において、メラニン色素はアルカリ処理により完全に溶解した状態となった。

（被験薬）
被験薬としては、実施例１〜実施例１２、及び比較例２〜１７のそれぞれにおいて、細胞溶解液に含まれる成分（Ａ）〜成分（Ｃ）の終濃度が以下に示す値となるように濃度を調製した被験薬を用いた。なお、比較例１では被験薬として何も添加しなかった。それぞれの細胞溶解液に含まれる成分（Ａ）〜成分（Ｃ）の終濃度については、表１〜表６にも示す。

（比較例１）
被験薬として成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のいずれも添加しないものを比較例１とした。

（比較例２〜３）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ａ）のみ添加したものを比較例２及び３とした。比較例２及び３は、それぞれ、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％及び０．００２重量％となるように調製した。

（比較例４〜７）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ｂ）のみ添加したものを比較例４〜７とした。比較例４は、パンテノールの終濃度が０．０１重量％となるように調製した。また、比較例５、６及び７は、アラントインの終濃度がそれぞれ０．０１重量％、０．０２重量％、及び０．１重量％となるように調製した。

（比較例８〜１１）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ｃ）のみ添加したものを比較例８〜１１とした。比較例８、９及び１０は、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の終濃度がそれぞれ０．００４重量％、０．０１重量％、及び０．０４重量％となるように調製した。また、比較例１１は、ポリソルベート６０の終濃度が０．０２重量％となるように調製した。

（比較例１２〜１３）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ａ）及び（Ｂ）のみ添加したものを比較例１２及び１３とした。比較例１２は、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％、及びパンテノールの終濃度が０．０１重量％となるように調製した。また、比較例１３は、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％、及びアラントインの終濃度が０．０２重量％となるように調製した。

（比較例１４）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ａ）及び（Ｃ）のみ添加したものを比較例１４とした。比較例１４は、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％、及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の終濃度が０．０４重量％となるように調製した。

（比較例１５〜１７）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ｂ）及び（Ｃ）のみ添加したものを比較例１５〜１７とした。比較例１５は、パンテノールの終濃度が０．０１重量％、及びポリソルベート６０の終濃度が０．０２重量％となるように調製した。比較例１６は、アラントインの終濃度が０．０２重量％、及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の終濃度が０．０４重量％となるように調製した。また、比較例１７は、アラントインの終濃度が０．１重量％、及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の終濃度が０．０４重量％となるように調製した。

（実施例１〜４）
成分（Ａ）の被験薬としてヘパリン類似物質を、成分（Ｂ）の被験薬としてアラントインを、成分（Ｃ）の被験薬としてポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０を配合したものを、実施例１〜４とした。実施例１〜４では、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％となるように配合量を調製した。アラントインの終濃度については、実施例１〜３では０．０２重量％となるように、実施例４では０．１重量％となるように、配合量を調製した。成分（Ｂ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、実施例１〜３では３．３３であり、実施例４では１６．７である。また、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量については、実施例１、２、３及び４のそれぞれの終濃度が０．０１重量％、０．０４重量％、０．２重量％及び０．１重量％となるように調製した。成分（Ｃ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、実施例１〜４で、それぞれ、１．６７重量部、６．６７重量部、３３．３重量部、及び１６．７重量部である。

（実施例５〜９）
成分（Ａ）の被験薬としてヘパリン類似物質を、成分（Ｂ）の被験薬としてパンテノールを、成分（Ｃ）の被験薬としてポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０を配合したものを、実施例５〜９とした。ヘパリン類似物質の終濃度については、実施例５及び６では０．００６重量％となるように、実施例７〜９では０．００２重量％となるように、配合量を調製した。実施例５〜９では、パンテノールの終濃度が０．０１重量％となるように配合量を調製した。成分（Ｂ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、実施例５及び６では１．６７、実施例７〜９では５である。また、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量については、実施例５、６、７、８及び９のそれぞれの終濃度が０．０１重量％、０．０４重量％、０．００４重量％、０．０１重量％及び０．０４重量％となるように調製した。成分（Ｃ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、実施例５〜９でそれぞれ１．６７重量部、６．６７重量部、２重量部、５重量部、及び２０重量部である。

（実施例１０〜１２）
成分（Ｃ）として、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の代わりにポリソルベート６０を配合し、その終濃度が０．０２重量％となるように調製したことを除いて、実施例５と同一の配合で被験薬を添加したサンプルを、実施例１０とした。成分（Ｂ）及び成分（Ｃ）の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、それぞれ１．６７及び３．３３である。また、成分（Ｂ）として、パンテノールの代わりにアラントインを配合し、その終濃度が０．０１重量％となるように調製したことを除いて、実施例１０と同一の配合で被験薬を添加したサンプルを、実施例１１とした。成分（Ｂ）及び成分（Ｃ）の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、それぞれ１．６７及び３．３３である。さらに、成分（Ｃ）として、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の代わりにポリソルベート６０を配合し、その終濃度が０．０１重量％となるように調製したことを除いて、実施例８と同一の配合で被験薬を添加したサンプルを、実施例１２とした。成分（Ｂ）及び成分（Ｃ）の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、それぞれ５重量部及び５重量部である。

（評価方法）
実施例及び比較例の細胞溶解液について、吸光度測定装置（コロナ電気株式会社製、マイクロプレートリーダＳＨ−９０００Ｌａｂ）を用いて、得られた細胞溶解液の４７５ｎｍにおける吸光度を測定し、メラニン産生量の指標とした。なお、ここでのメラニン産生量は、全部のメラノーマ細胞が有するメラニン量である。

また、実施例及び比較例の細胞溶解液について、ＢＣＡ蛋白定量キット（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて、各細胞溶解液の蛋白定量を行った。ここでは、Ｂ１６メラノーマ細胞の蛋白量を測定した。そして、この測定値を、細胞溶解液全体のメラノーマ細胞数の指標とした。

そして、メラノーマ細胞あたりのメラニン量を評価するため、下式に示すように、吸光度の測定から得たメラニン産生量の値を蛋白量で除し、この値をメラニン量基準値とした。なお、メラニン量基準値は、相対値により評価した。

（メラニン量基準値）＝（メラニン産生量）／（蛋白量）
具体的には、比較例１〜３については、比較例１のメラニン量基準値を基準値ｍ_０（１００）とした。また、比較例２及び３のメラニン量基準値ｍを比較例１のメラニン量基準値ｍ_０で除し、それを１から引いたものを百分率で表して、比較例２、３のメラニン産生量減少率ｒとした。

実施例１〜６、実施例１０〜１２、及び比較例４〜１７のメラニン産生量減少率ｒについては、各メラニン量基準値ｍを、被験薬としてヘパリン類似物質のみを終濃度が０．００６重量％となるように添加した場合のメラニン量基準値ｍ_{０．００６}で除し、それを１から引いたものを百分率で表した。また、実施例７〜９のメラニン産生量減少率ｒについては、各メラニン量基準値ｍを、被験薬としてヘパリン類似物質のみを終濃度が０．００２重量％となるように添加した場合のメラニン量基準値ｍ_{０．００２ａ}で除し、それを１から引いたものを百分率で表した。以下にメラニン産生量減少率ｒを求める式を示す。

（評価結果）
これらの評価結果を表１〜表６に示す。

表１によれば、細胞溶解液にヘパリン類似物質を含まない比較例１と、ヘパリン類似物質が配合された比較例２及び３とを比較すると、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００６重量％である比較例２は比較例１よりもメラニン産生量を減少させる効果が低下している一方で、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００２重量％である比較例３は比較例１よりもわずかにメラニン産生量を減少させる効果が増加している。このことから、細胞溶解液にヘパリン類似物質が単独で配合されていても、メラニン産生を減少させることには寄与していないことが分かる。

表２によれば、細胞溶解液に成分（Ｂ）であるアラントイン又はパンテノールが配合された比較例４〜７は、いずれも、ヘパリン類似物質が単独で配合されている場合と比較して、メラニン産生量が増加していることが分かる。従って、細胞溶解液にアラントイン又はパンテノールが単独で配合されているとき、メラニン産生量を減少させる効果は全く得られないことが分かる。

また、表３によれば、細胞溶解液に成分（Ｃ）であるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０又はポリソルベート６０が配合された比較例８〜１１は、いずれも、ヘパリン類似物質が単独で配合されている場合と比較して、メラニン産生量が増加していることが分かる。従って、細胞溶解液にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０又はポリソルベート６０が単独で配合されているとき、メラニン産生量を減少させる効果は全く得られないことが分かる。

従って、成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）は、単独ではメラニン産生量を減少させる効果を有しないことが分かる。

表４によれば、成分（Ａ）及び成分（Ｂ）が配合されているが成分（Ｃ）が配合されていない比較例１２及び比較例１３、成分（Ａ）及び成分（Ｃ）が配合されているが成分（Ｂ）が配合されていない比較例１４、並びに成分（Ｂ）及び成分（Ｃ）が配合されているが、成分（Ａ）が配合されていない比較例１５〜１７のいずれも、ヘパリン類似物質が単独で配合されている場合と比較して、メラニン産生量が増加していることが分かる。このことから、成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）のうち２種類を組み合わせても、メラニン産生量を減少させる効果を有しないことが分かる。

表５及び６によれば、細胞溶解液に成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の全てが配合された実施例１〜１２は、ヘパリン類似物質が単独で配合されている場合と比較して、メラニン産生量が低減していることが分かる。従って、メラニン産生の抑制に効果を有しない成分（Ａ）に対して、成分（Ｂ）及び成分（Ｃ）の両方が組み合わされてはじめて、メラニン産生量を減少させる効果が得られることが分かる。

なお、特開２０１１−２３１１２８号公報には、皮膚外用剤にヘパリン類似物質、アラントイン、及びパントテン酸を配合することが開示され、添加剤として、モノステアリン酸ソルビタン等の界面活性剤を配合することが開示されている。また、特開２０１２−３６１８３号公報には、ヘパリン類似物質、アラントイン、及びパントテン酸を含んだ外用組成物が開示され、この外用組成物が、任意成分としてアラントイン、パントテン酸、及び界面活性剤が配合され得ると記載されている。つまり、本発明のように外用組成物に成分（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）の全てを配合することは公知である。しかしながら、これらの文献には、成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）を組み合わせることによりメラニン産生が抑制される効果について何等開示されておらず、メラニン産生が抑制される効果は、本発明者らによって初めて見出されたものである。

外用組成物が成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）を含むことによりメラノサイトにおけるメラニン産生量を減少させる効果を有するので、皮膚色素が沈着するのを抑制したり、防止したりする効果が得られることが分かる。また、外用組成物が成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）を含むことによりメラニン産生量が減少するので、皮膚の基底層のケラチノサイトがターンオーバーする時に、新たな細胞に含まれるメラニン産生量が減少していることから、皮膚色素沈着を予防したり改善したりする効果が得られることが分かる。また、外用組成物が成分（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）を含むことによりメラノサイトにおけるメラニン産生量を減少させる効果を有するので、真皮においても、あざ（例えば、黒あざ、茶あざ、青あざ）の色素沈着を予防したり改善したりする効果が得られると分かる。

次に、成分（Ｃ）としてポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０が配合された実施例１〜３、５〜９について考える。図１は、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量とメラニン産生量減少率の関係を示すグラフである。ここで、グラフ中のＥ１〜Ｅ３及びＥ５〜Ｅ９は、それぞれ、実施例１〜３及び実施例５〜９のメラニン産生量減少率のデータであることを示す。成分（Ａ）としてヘパリン類似物質（終濃度：０．００６重量％）を配合し、成分（Ｂ）としてアラントイン（終濃度：０．０２重量％）を配合し、成分（Ｃ）の配合量のみ変化させた実施例１〜３の比較を破線Ｌ１で示す。また、成分（Ａ）としてヘパリン類似物質（終濃度：０．００６重量％）を配合し、成分（Ｂ）としてパンテノール（終濃度：０．０１重量％）を配合し、成分（Ｃ）の配合量のみ変化させた実施例５及び６の比較を破線Ｌ２で示す。さらに、成分（Ａ）としてヘパリン類似物質（終濃度：０．００２重量％）を配合し、成分（Ｂ）としてパンテノール（終濃度：０．０１重量％）を配合し、成分（Ｃ）の配合量のみ変化させた実施例７〜９の比較を実線Ｌ３で示す。

図１のグラフより、破線Ｌ１，破線Ｌ２，実線Ｌ３のいずれも、細胞溶解液におけるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量が０．０４重量％となると、メラニン産生量減少率が４０％近くまで向上することが分かる。また、破線Ｌ１では、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量が０．０４重量％よりも増加すると、メラニン産生量減少率が約４０％と一定になる。その結果、メラニン産生量減少率の変化量は、０．０４重量％のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量の前後で、大きく変化することが分かる。従って、０．０４重量％のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量はメラニン産生量減少率の変化量に対して変曲点であり、メラニン産生量減少率を約４０％に増加させることに対して臨界的意義を有する。よって、成分（Ａ）、成分（Ｂ）の種類及び配合量にかかわらず、成分（Ｃ）の配合量を０．０４重量％以上にすると優れたメラニン産生量減少率が得られることが分かる。このことから、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０の配合量の下限値は、０．０４重量％以上であることがさらに好ましい。

このことから、実際に使用する外用組成物中においても、成分（Ａ）や成分（Ｂ）の配合量及び種類に関わらず、成分（Ｃ）の配合量が所定濃度以上である場合に、特に優れたメラニン産生量を減少させる効果が得られると考えられる。

（評価試験ＩＩ）
次に、評価試験ＩＩにおいて作製した実施例１３及び比較例１８〜１９について説明する。

（サンプルの調製）
メラノーマ細胞の溶解処理において、各ウェルに添加するＮａＯＨの濃度を４Ｎとし、溶解処理の条件を６０℃及び３時間としたことを除いて、評価試験Iと同様にして、サンプルを作製した。

（被験薬）
被験薬としては、実施例１３及び比較例１８〜１９のそれぞれにおいて、細胞溶解液に含まれる成分（Ａ）〜成分（Ｃ）の終濃度が以下に示す値となるように濃度を調製した被験薬を用いた。それぞれの細胞溶解液に含まれる成分（Ａ）〜成分（Ｃ）の終濃度については、表７にも示す。

（比較例１８、１９）
被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ａ）のみ添加したものを比較例１８とした。比較例１８は、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００２重量％となるように調製した。また、被験薬として、成分（Ａ）〜成分（Ｃ）のうち成分（Ｂ）のみ添加したものを比較例１９とした。比較例１９は、ビタミンＡ油の終濃度が０．００３重量％となるように調製した。

（実施例１３）
成分（Ａ）の被験薬としてヘパリン類似物質を、成分（Ｂ）の被験薬としてビタミンＡ油を、成分（Ｃ）の被験薬としてポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０を配合したものを、実施例１３とした。実施例１３では、ヘパリン類似物質の終濃度が０．００２重量％、ビタミンＡ油の終濃度が０．００３重量％、及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０の終濃度が０．１６重量％となるように、配合量を調製した。成分（Ｂ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、１．５重量部である。また、成分（Ｃ）の配合量の、成分（Ａ）の配合量に対する割合は、８０重量部である。

（評価方法）
実施例１３及び比較例１８〜１９の細胞溶解液について、評価試験Ｉと同様に吸光度を測定、及び蛋白定量を行った。そして、これらの結果より、評価試験Ｉと同様に、下式に基づいてメラニン量基準値を得た。

（メラニン量基準値）＝（メラニン産生量）／（蛋白量）

比較例１８のメラニン量基準値をｍ_{０．００２ｂ}とした。また、実施例１３又は比較例１９のメラニン量基準値の値と比較例１８のメラニン量基準値ｍ_{０．００２ｂ}を用いて、実施例１３又は比較例１９のメラニン産生量減少率ｒを算出した。

（評価結果）
これらの評価結果を表７に示す。

表７によれば、成分（Ｂ）としてビタミンＡ油を配合した場合にも、成分（Ａ）及び成分（Ｃ）と組合せて用いることにより、メラニン産生量を減少させる効果があることが認められた。

本発明は、皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物について有用である。

Claims (13)

1. 皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物であって、
   （Ａ）ヘパリン類似物質と、
   （Ｂ）アラントイン、パントテン酸、ビタミンＡ類、これらの薬学的に許容される塩、及びこれらの薬学的に許容される誘導体からなる群より選ばれる１種又は２種以上と、
   （Ｃ）非イオン性界面活性剤と、
   を含有する、外用組成物。
2. 請求項１に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   皮膚疾患が皮膚色素沈着である、
   外用組成物。
3. 請求項１又は２に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   皮膚疾患が、痒みを伴う皮膚疾患に起因する色素沈着、傷が完治した後の色素沈着、ホルモンバランスの乱れによる色素沈着、加齢による色素沈着、日焼けによる色素沈着、摩擦による色素沈着、又は、あざによる色素沈着である、
   外用組成物。
4. 請求項１〜３のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記成分（Ａ）の１重量部に対して、前記成分（Ｃ）を、０．１〜８０重量部含む外用組成物。
5. 請求項１〜４のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記アラントイン、その薬学的に許容される塩、及びそれらの薬学的に許容される誘導体が、アラントイン、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、及びアラントインジヒドロキシアルミニウムからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含む、
   外用組成物。
6. 請求項１〜５のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記パントテン酸、その薬学的に許容される塩、及びそれらの薬学的に許容される誘導体が、パントテン酸、パンテノール、パントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム、及びアセチルパントテニルエチルエーテルからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含む、
   外用組成物。
7. 請求項１〜６のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記ビタミンＡ類、その薬学的に許容される塩、及びそれらの薬学的に許容される誘導体が、レチノール、レチノイン酸、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、δ−レチノイン酸トコフェロール、及びビタミンＡ油からなる群より選ばれる１種又は２種以上を含む、
   外用組成物。
8. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値は８以上である、
   外用組成物。
9. 請求項１〜８のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
   前記非イオン性界面活性剤が、エステル系の非イオン性界面活性剤及びエーテル系の非イオン性界面活性剤からなる群より選ばれる１種又は２種以上を含む、
   外用組成物。
10. 請求項１〜９のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
    前記非イオン性界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類、グリセリン脂肪酸エステル類、ポリグリセリン脂肪酸エステル類、ポリグリセリン脂肪酸類、プロピレングリコール脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンモノヤシ油脂肪酸グリセリル、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、
    外用組成物。
11. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
    前記成分（Ａ）の配合量が、外用組成物の全量に対して０．００００１〜１重量％である、
    外用組成物。
12. 請求項１〜１１のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
    前記成分（Ｂ）の配合量が、外用組成物の全量に対して０．０００１〜５重量％である、
    外用組成物。
13. 請求項１〜１２のいずれか一項に記載の皮膚疾患の抑制、防止、予防又は改善に使用される外用組成物において、
    前記成分（Ｃ）の配合量が、外用組成物の全量に対して０．０００１〜２５重量％である、
    外用組成物。

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