JP7064820B2 - 育毛剤、並びにε‐ポリリジンおよび／またはシャクヤク抽出物の使用 - Google Patents

Description

本発明は、毛成長を有効に促進する成分を含む育毛剤に関する。

米国のＡｌｌｅｒｇａｎ（アラーガン）社が緑内障の処置用に開発したＬｕｍｉｇａｎ（登録商標）点眼液について、下記特許文献１に記載されている。

特許文献１において、Ｌｕｍｉｇａｎ点眼液には、睫毛の成長を促進させるのに有効であるＢｉｍａｔｏｐｒｏｓｔ（ビマトプロスト）が含まれることが見出されている。

ビマトプロストは、哺乳動物において毛成長を刺激する医薬組成物として知られている。また、睫毛の外観の相違を引き起こす能力、移行領域での軟毛又は中間毛から硬毛への転換を刺激する能力、及び皮膚上の軟毛の成長を刺激する能力は、ビマトプロストが毛成長の刺激に多様な効果を持つ有効な薬剤であることを示している。

そして、Ｌｕｍｉｇａｎ点眼液を使用した患者の睫毛が伸びるという事例から、アラーガン社は、Ｌｕｍｉｇａｎ点眼液に含まれる育毛成分（ビマトプロスト）を応用し、睫毛貧毛症治療薬として、Ｌａｔｉｓｓｅ（登録商標）（ラティース（登録商標））を開発し、米国で、ＬＡＴＩＳＳＥ （ｂｉｍａｔｏｐｒｏｓｔ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ） ０．０３％として、日本で、グラッシュビスタ（登録商標）外用液剤０．０３％５ｍＬとして開発した。

また、ビマトプロストは、プロスタグランジン構造類似体であり、睫毛の毛包に作用し、毛周期における成長期を延長することにより、睫毛の成長を促進させると考えられている（非特許文献１）。

さらに、ビマトプロストは、睫毛の毛包のみならず、頭髪の毛包にも作用し、毛成長を促進させることがわかっている（非特許文献２）。

特表２００５‐５２１６７２号公報 特開２００６‐３４７９５９号公報

Ｔａｕｃｈｉ Ｍ， ｅｔ ａｌ．：Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， ２０１０；１６２， １１８６‐１１９７． Ｋａｒｚａｎ Ｇ．Ｋｈｉｎｄｈｉｒ ｅｔ ａｌ．：ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２０１３：２７（２）， ５５７‐５６７．

上記特許文献１、非特許文献１及び非特許文献２において、上述のように、ビマトプロストは、睫毛及び頭髪の毛包に作用し、毛周期における成長期を延長させる作用を有することで、毛成長を促進させるのに有効であることが知られている。しかしながら、ビマトプロストが毛成長を促進させる詳細な育毛作用機序については全く知られていない。したがって、ビマトプロストの詳細な育毛作用機序の解明が望まれている。

そこで、発明者らは、斯かる実情に鑑み、ラティース（ビマトプロスト）の育毛作用機序について、サイトカイン抗体アレイ法を用いて解析を行った。

より具体的には、サイトカイン抗体アレイ法を用いて、約１２０種のサイトカインの中から、ラティース（ビマトプロスト）添加により産生量が変化するサイトカインを解析した。その結果、ビマトプロストが、特定のサイトカインのうち、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンの産生を促進することを見出した。

また、発明者らは、ビマトプロストによって産生量が変化するサイトカインについて、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ‐Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）法で確認したところ、同じく血管新生因子であるＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）の産生量が増加することを見出した。ビマトプロストの育毛作用機序の解析結果から、ビマトプロスト添加により、アンジオゲニン、ＶＥＧＦが増加することで、毛成長（例えば、長さ、太さ等）を促進することが考えられた。

そして、発明者らは、それらのサイトカイン（アンジオゲニン、ＶＥＧＦ）の産生を促進する物質をスクリーニングし、アンジオゲニン、ＶＥＧＦの産生を促進する物質として、新たな知見を得た。すなわち、発明者らは、１００種以上の素材についてスクリーニングを実施し、アンジオゲニン、ＶＥＧＦの最も高い産生促進作用を持つものを見出した。

本発明は、アンジオゲニンの産生を促進する成分を含むことで、毛成長を有効に促進する育毛剤を提供することを目的とする。

本発明の育毛剤は、アンジオゲニンの産生を促進する成分を含むことを特徴とする。

上記構成の育毛剤によれば、アンジオゲニンの産生を促進する成分を含むため、アンジオゲニンの産生を促進する成分が、アンジオゲニンの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンが毛細血管の血流を促進し、毛成長を有効に促進することができる。

本発明の一態様として、前記アンジオゲニンの産生を促進する成分は、ε‐ポリリジンを含む、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、アンジオゲニンの産生を促進する成分として、ε‐ポリリジンを含むため、ε‐ポリリジンが、アンジオゲニンの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンが毛細血管の血流を促進し、毛成長を有効に促進することができる。

本発明の他態様として、ＶＥＧＦの産生を促進する成分をさらに含む、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、ＶＥＧＦの産生を促進する成分をさらに含むため、ＶＥＧＦの産生を促進する成分が、ＶＥＧＦの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるＶＥＧＦが毛細血管の血流を促進し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

本発明のさらに他の態様として、前記ＶＥＧＦの産生を促進する成分は、シャクヤク抽出物を含む、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、ＶＥＧＦの産生を促進する成分として、シャクヤク抽出物を含むため、シャクヤク抽出物が、ＶＥＧＦの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるＶＥＧＦが毛細血管の血流を促進し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

本発明のさらに別の態様として、前記ε‐ポリリジンを、０．０００１重量％以上含む、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、ε‐ポリリジンを、０．０００１重量％以上含むため、０．０００１重量％といった微量で、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

本発明のさらに別の態様として、前記シャクヤク抽出物を、０．０００１重量％以上含む、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、シャクヤク抽出物を、０．０００１重量％以上含むため、０．０００１重量％といった微量で、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

本発明のさらに別の態様として、前記ε‐ポリリジンと前記シャクヤク抽出物との重量比は、乾燥物換算で２．５：７．５～９：１である、のが好ましい。

上記構成の育毛剤によれば、ε‐ポリリジンとシャクヤク抽出物との重量比が、乾燥物換算で２．５：７．５～９：１である場合に、例えば、ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖を促進し、細胞数を相乗的に増加させることにより、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

本発明のさらに別の態様として、クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とを、さらに含む、のが好ましい。

クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とは、養毛に有効であることが知られている（特許文献２）。上記構成の育毛剤によれば、クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とを、さらに含むため、育毛成分としてε‐ポリリジン、シャクヤク抽出物のみを含む場合に比し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

以上のように、本発明によれば、毛成長を有効に促進する育毛剤を提供することができる、といった優れた効果を奏し得る。

本発明の一実施形態に係る育毛剤の成分を用いて培養したヒト頭髪毛乳頭細胞の細胞数（比率）を示すグラフである。 本発明の一実施形態に係る育毛剤の成分を用いて培養したヒト頭髪毛乳頭細胞の細胞数（比率）を示すグラフである。 本発明の一実施形態に係る育毛剤の成分を用いて培養したヒト頭髪毛乳頭細胞の細胞数（比率）を示すグラフである。 本発明の一実施形態に係る育毛剤の睫毛伸長作用の著効例を示す図である。

以下、本発明の一実施形態について、詳細に説明する。

本実施形態に係る育毛剤は、毛成長を有効に促進するためのものである。

発明者らは、上述のように、アンジオゲニンの産生を促進する成分に関する新たな知見を得た。本実施形態に係る育毛剤は、アンジオゲニンの産生を促進する成分を含むことを特徴とする。

アンジオゲニンは、ヒト結腸癌（ＨＴ‐２９細胞株）から単離され、血管新生を促進する活性を有するタンパク質として同定された。その後、アンジオゲニンは、血清中、及び乳中にも存在することが確認されており、血管内皮細胞培養系にて、ＤＮＡ合成を促進する活性、及び血管内皮細胞の管腔形成を促進する活性を有し、さらに、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）活性を有することが明らかとなっている。

本実施形態において、アンジオゲニンの産生を促進する成分は、ε‐ポリリジンを含む。

ε‐ポリリジンとは、Ｌ又はＤ‐リシンのα‐カルボキシル基とε‐アミノ基がアミド結合してなるアミノ酸ポリマーである。

本実施形態で用いられるε‐ポリリジンは、有機合成法又は微生物を用いた発酵法のいずれの方法で得られたものでもよく、例えば、特許第１２４５３６１号公報に記載されているＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ又はその亜種をグルコース及び無機塩からなる培地にて培養し、その培養液から分離することで得られる。

本実施形態において、ε‐ポリリジンは遊離のものを用いてもよく、塩酸、硫酸、及びリン酸などの無機酸とε‐ポリリジンとで形成されるε‐ポリリジンの無機酸塩、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、マレイン酸、アジピン酸、グルコン酸、及び乳酸などの有機酸とε‐ポリリジンとで形成されるε‐ポリリジンの有機酸塩、カプロン酸、ラウリン酸、及びステアリン酸などの中鎖及び長鎖の飽和脂肪酸とε‐ポリリジンとで形成されるε‐ポリリジンの飽和脂肪酸塩、並びにオレイン酸、リノール酸、及びアラキドン酸などの中鎖及び長鎖の不飽和脂肪酸とε‐ポリリジンとで形成されるε‐ポリリジンの不飽和脂肪酸塩などを用いてもよく、これらの混合物でもよい。

ポリリジンはこの他、合成法によるα‐ポリリジンも使用できるが、本目的にはε‐ポリリジンを用いるのが安全性の面から好ましい。又、ε‐ポリリジンは、該ポリリジン製剤又は化粧料組成物の剤型・形態により乾燥、濃縮、もしくは希釈等を任意に行い調製すればよい。

なお、前記ε‐ポリリジンとしては、例えば、化粧料等の原料として市販されているものを用いることができる。

本実施形態において、ＶＥＧＦの産生を促進する成分をさらに含む。

ＶＥＧＦは、血管内皮細胞増殖因子ともよばれ、脈管形成及び血管新生に関与する一群の糖タンパク質である。ＶＥＧＦは、主に血管内皮細胞表面にある血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）にリガンドとして結合し、血管内皮細胞の増殖、遊走、分化の促進、微小血管の血管透過性の亢進、単球・マクロファージの活性化等に関与する。

本実施形態において、ＶＥＧＦの産生を促進する成分は、シャクヤク抽出物を含む。

シャクヤク（芍薬）（学名 Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ）は、ボタン科の多年草であり、シャクヤク又は近縁植物の根は、消炎・鎮痛・抗菌・止血・抗けいれん作用等を有する生薬である。

本実施形態で用いられるシャクヤクの使用部位は花、葉、茎、根など特に限定されるものではないが、根が特に好ましい。

本実施形態で用いられるシャクヤク抽出物は、シャクヤクの粉砕物を、常温又は加温下で溶媒により抽出するか、又は、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液、あるいはその乾燥末等のものである。

抽出に用いる溶媒としては、通常の植物の抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができる。例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒類等であり、それらは、単独あるいは組み合わせて用いることができる。

本実施形態において、育毛剤は、ε‐ポリリジンを、０．０００１重量％以上含む。好ましくは、育毛剤は、ε‐ポリリジンを、０．０００５重量％以上含む。より好ましくは、育毛剤は、ε‐ポリリジンを、０．００１重量％以上含む。

本実施形態において、育毛剤は、シャクヤク抽出物を、０．０００１重量％以上含む。好ましくは、育毛剤は、シャクヤク抽出物を、０．０００５重量％以上含む。より好ましくは、育毛剤は、シャクヤク抽出物を、０．００１重量％以上含む。

本実施形態において、ε‐ポリリジンとシャクヤク抽出物との重量比は特に限定されるものではないが、重量比が、乾燥物換算で２．５：７．５～９：１であることが好ましい。

クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とは、養毛に有効であることが知られている（特許文献２）。そこで、発明者らは、クスノハガシワ抽出物及びアロエベラ抽出物に、本実施形態に係るε‐ポリリジン及びシャクヤク抽出物を添加したものを、育毛剤として使用することを考えた。

本実施形態において、育毛剤は、クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とを、さらに含む。

本発明の育毛剤中には、一般に化粧料で用いられ、あるいは医薬部外品、医薬品等の育毛剤に用いられる各種任意成分を必要に応じて適宜配合することができる。このような任意成分として、例えば、精製水、エタノール、油性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、薬効成分、粉体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤等を挙げることができる。

また、本発明の育毛剤の形態は、液状、乳液、軟膏、クリーム、ゲル、エアゾール等外皮に適用可能な性状のものであれば問われるものではなく、必要に応じて適宜基剤成分等を配合して所望の形態の育毛剤を調製することができ、医薬品、医薬部外品又は化粧品等の多様な分野において適用可能である。

本発明の育毛剤は、脱毛の治療や予防に用いることが可能であり、例えば、男性性脱毛症の治療や予防、女性に多いびまん性脱毛症の治療や予防、円形脱毛症の治療等に広く用いることができる。なお、ここに示した脱毛疾患名は例示であり、これらの脱毛疾患に本発明の育毛剤の適用可能な疾患が限定されるものではない。さらに、本発明の育毛剤は、睫毛の育毛用として使用できる他、眉毛や頭髪の育毛用としても使用することができる。

次に、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

＜ラティース（ビマトプロスト）の育毛作用機序の解析＞

（サイトカイン抗体アレイ法によるスクリーニング実験）
発明者らは、ラティース（ビマトプロスト）の育毛作用機序について、サイトカイン抗体アレイ法を用いて解析を行った。

より具体的には、サイトカイン抗体アレイ法を用いて、ラティース（ビマトプロスト）によって産生量が変化するサイトカインのスクリーニング実験を行った。約１２０種類のサイトカインの中から、ラティース（ビマトプロスト）添加により産生量が変化するサイトカインを解析した。

サイトカイン抗体アレイ法は、マルチプレックスサンドイッチＥＬＩＳＡ技術をベースにした定量可能な抗体アレイ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｒｒａｙ）法であり、少ない試料容量で多数のサイトカインの定量を一度に行える技術である。

（サイトカイン抗体アレイ法による測定）
まず、ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製（ＣＡ６０２０５ａ））を、毛乳頭細胞培養培地ＰＣＧＭ（東洋紡株式会社製（ＴＭＴＰＧＭ‐２５０））を用いて培養した。培養細胞を、サブカルチャー試薬セット（東洋紡株式会社製（ＣＡ０９０Ｋ））を用いて回収し、回収した細胞を、１２ｗｅｌｌマイクロプレートに１．０×１０^５個／ｗｅｌｌで播種し、ＰＣＧＭ培地で７２時間培養した。１．０体積％のラティースを含むＰＣＧＭ培地に交換して、さらに２４時間培養した。

培養上清を回収し、得られた培養上清中の各種サイトカインを、Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｒｒａｙ Ｇ Ｓｅｒｉｅｓ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて検出した。その結果を表１に示す。なお、アンジオゲニンの蛍光強度は、ポジティブコントロールの蛍光強度を１とした場合の値（比率）で示した。

表１の結果より、ラティース（ビマトプロスト）添加により産生量が変化するサイトカインとして、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンの産生量が増加していることが分かった。

（ＥＬＩＳＡ法によるスクリーニング実験）
発明者らは、ラティース（ビマトプロスト）によって産生量が変化するサイトカインについて、ＥＬＩＳＡ法で確認した。

（ＥＬＩＳＡ法による測定）
ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製（ＣＡ６０２０５ａ））を、毛乳頭細胞培養培地ＰＣＧＭ（東洋紡株式会社製（ＴＭＴＰＧＭ‐２５０））を用いて培養した。培養細胞を、サブカルチャー試薬セット（東洋紡株式会社製（ＣＡ０９０Ｋ））を用いて回収し、回収した細胞を、４８ｗｅｌｌマイクロプレートに２．５×１０^４個／ｗｅｌｌで播種し、ＰＣＧＭ培地で７２時間培養した。１．０体積％のラティースを含むＰＣＧＭ培地に交換して、さらに２４時間培養した。

培養上清を回収し、得られた培養上清中のアンジオゲニン量を、Ｈｕｍａｎ ＡＮＧ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄシステムズ社製）を用いて測定した。その結果を表２に示す。なお、アンジオゲニン産生促進効果は、ＰＣＧＭ培地のみで培養した場合の産生量を１００とした場合の値（比率）で示した。

表２の結果より、ラティース（ビマトプロスト）を添加したＰＣＧＭ培地で培養したヒト頭髪毛乳頭細胞からのアンジオゲニン産生量は、コントロールに比し、３９％増加することが明らかとなった。

上記と同様に、得られた培養上清中のＶＥＧＦ量を、Ｈｕｍａｎ ＶＥＧＦ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄシステムズ社製）を用いて測定した。その結果を表３に示す。なお、ＶＥＧＦ産生促進効果は、ＰＣＧＭ培地のみで培養した場合の産生量を１００とした場合の値（比率）で示した。

表３の結果より、ラティース（ビマトプロスト）を添加したＰＣＧＭ培地で培養したヒト頭髪毛乳頭細胞からのＶＥＧＦ産生量は、コントロールに比し、１６％増加することが明らかとなった。

また、表２及び表３の結果から、ラティース（ビマトプロスト）を添加したＰＣＧＭ培地で培養したヒト頭髪毛乳頭細胞からの、アンジオゲニン及びＶＥＧＦの産生量が増加することが明らかとなった。これにより、ラティース（ビマトプロスト）のアンジオゲニン及びＶＥＧＦを介した育毛作用機序の一部が明らかとなり、ラティースの有効成分であるビマトプロストは、アンジオゲニン及びＶＥＧＦの産生量を増加させることにより、育毛作用に関与している可能性が高い。

＜ラティース（ビマトプロスト）の育毛作用機序から得られた新育毛理論＞

（製造例１）
シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ）の根の乾燥物１００ｇを粉砕後、１Ｌの５０％エタノールに浸漬し、６０～８０℃で３日間抽出し、抽出液から溶媒を除去し、５．１ｇの抽出物を得た。

ε‐ポリリジンとしては、「ポリリジン １０」（一丸ファルコス株式会社製）を用いた。

（毛乳頭細胞のアンジオゲニン産生能に対するε‐ポリリジンの促進作用）
発明者らは、ヒト頭髪毛乳頭細胞からのアンジオゲニン産生を促進させる作用を確認するために、ビマトプロスト及びε‐ポリリジンの各濃度におけるアンジオゲニン産生量を、以下のように測定した。ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製（ＣＡ６０２０５ａ））を、毛乳頭細胞培養培地ＰＣＧＭ（東洋紡株式会社製（ＴＭＴＰＧＭ‐２５０））を用いて培養した。培養細胞を、サブカルチャー試薬セット（東洋紡株式会社製（ＣＡ０９０Ｋ））を用いて回収し、回収した細胞を、４８ｗｅｌｌマイクロプレートに２．５×１０^４個／ｗｅｌｌで播種し、ＰＣＧＭ培地で７２時間培養した。

乾燥物換算で各濃度（０．０００１重量％、０．０００５重量％、０．００１重量％、０．００５重量％及び０．０１重量％）のビマトプロスト又はε‐ポリリジンを含むＰＣＧＭ培地に交換して、さらに２４時間培養した。

培養上清を回収し、得られた培養上清中のアンジオゲニン量を、Ｈｕｍａｎ ＡＮＧ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄシステムズ社製）を用いて測定した。その結果を表４に示す。なお、アンジオゲニン産生促進効果は、ＰＣＧＭ培地のみで培養した場合（コントロール）の産生量を１００とした場合の値（比率）で示した。

表４の結果から、ビマトプロストは、０．０００１重量％の濃度で、１３２％のアンジオゲニン産生量を示し、０．０１重量％の濃度まで、アンジオゲニン産生量を微増させていたのに対して、ε‐ポリリジンは、０．０００１重量％の濃度で、１４６％のアンジオゲニン産生量を示し、０．０００５重量％の濃度で、アンジオゲニン産生量を１８８％まで増加させた。その後、ε‐ポリリジンは、０．００１重量％～０．０１重量％の濃度において、１９２％～１８１％とビマトプロストよりも有意に高いアンジオゲニン産生量を示した。これにより、ε‐ポリリジンは、ビマトプロストに比し、アンジオゲニン産生量を有意に増加させることが明らかとなった。

（毛乳頭細胞のＶＥＧＦ産生能に対するシャクヤク抽出物の促進作用）
発明者らは、ヒト頭髪毛乳頭細胞からのＶＥＧＦ産生を促進させる作用を確認するために、ビマトプロスト及びシャクヤク抽出物の各濃度におけるＶＥＧＦ産生量を、以下のように測定した。ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製（ＣＡ６０２０５ａ））を、毛乳頭細胞培養培地ＰＣＧＭ（東洋紡株式会社製（ＴＭＴＰＧＭ‐２５０））を用いて培養した。培養細胞を、サブカルチャー試薬セット（東洋紡株式会社製（ＣＡ０９０Ｋ））を用いて回収し、回収した細胞を、４８ｗｅｌｌマイクロプレートに２．５×１０^４個／ｗｅｌｌで播種し、ＰＣＧＭ培地で７２時間培養した。

乾燥物換算で各濃度（０．０００１重量％、０．０００５重量％、０．００１重量％、０．００５重量％及び０．０１重量％）のビマトプロスト又はシャクヤク抽出物を含むＰＣＧＭ培地に交換して、さらに２４時間培養した。

培養上清を回収し、得られた培養上清中のＶＥＧＦ量を、Ｈｕｍａｎ ＶＥＧＦ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄシステムズ社製）を用いて測定した。その結果を表５に示す。なお、ＶＥＧＦ産生促進効果は、ＰＣＧＭ培地のみで培養した場合（コントロール）の産生量を１００とした場合の値（比率）で示した。

表５の結果から、ビマトプロストは、０．０００１重量％の濃度で、１０５％のＶＥＧＦ産生量を示し、０．０１重量％の濃度まで、ＶＥＧＦ産生量を微増させていたのに対して、シャクヤク抽出物は、０．０００１重量％の濃度で、１０５％のＶＥＧＦ産生量を示し、０．０００５重量％の濃度で、ＶＥＧＦ産生量を１１９％まで増加させた。その後、シャクヤク抽出物は、０．００１重量％～０．０１重量％の濃度において、１３２％～２０１％とビマトプロストよりも有意に高いＶＥＧＦ産生量を示した。これにより、シャクヤク抽出物は、ビマトプロストに比し、ＶＥＧＦ産生量を有意に増加させることが明らかとなった。

（試験例１）
（ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖に対する作用試験）
ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製（ＣＡ６０２０５ａ））を、毛乳頭細胞培養培地ＰＣＧＭ（東洋紡株式会社製（ＴＭＴＰＧＭ‐２５０））を用いて培養した。培養細胞を、サブカルチャー試薬セット（東洋紡株式会社製（ＣＡ０９０Ｋ））を用いて回収し、回収した細胞を、９６ｗｅｌｌマイクロプレートに２．０×１０^３個／ｗｅｌｌで播種し、ＰＣＧＭ培地で２４時間培養した。

乾燥物換算で合計濃度を０．０００１重量％に固定し、ε‐ポリリジン：シャクヤク抽出物＝０：１０，１：９，２．５：７．５，５：５，７．５：２．５，９：１，１０：０となるようなε‐ポリリジン及びシャクヤク抽出物の混合物を含むＰＣＧＭ培地に交換して、さらに培養を続けた。７日間培養した後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ‐８（株式会社同仁化学研究所製（ＣＫ０４））を用いて、細胞数を測定した。なお、細胞増殖促進効果は、ＰＣＧＭ培地のみで培養した場合（コントロール）の細胞数を１００とした場合の値（比率）で示した。

試験例１の結果を表６に示し、表６をグラフ化したものを図１に示す。

（試験例２）
乾燥物換算での合計濃度０．０００１重量％に代えて、乾燥物換算での合計濃度を０．０００５重量％とした点以外は、試験例１と同様にして細胞数を測定した。その結果を表７に示し、表７をグラフ化したものを図２に示す。

（試験例３）
乾燥物換算での合計濃度０．０００１重量％に代えて、乾燥物換算での合計濃度を０．００１重量％とした点以外は、試験例１と同様にして細胞数を測定した。その結果を表８に示し、表８をグラフ化したものを図３に示す。

表６～表８に明らかなように、乾燥物換算での合計濃度が０．０００１重量％、０．０００５重量％及び０．００１重量％の場合において、ε‐ポリリジン及びシャクヤク抽出物を組み合わせることにより、毛乳頭細胞の増殖が相乗的に促進されることが分かった。

＜ヒト睫毛に対する作用試験＞
そこで、発明者らは、表９に示す処方を用いて、育毛剤（実施例１及び比較例１）を製造し、ヒト睫毛に対する育毛効果確認試験を行った。

評価対象として、２４～３９歳の女性２１名を、実施例１使用群１２名及び比較例１使用群９名に分類した。実施例１又は比較例１を、同型容器（マスカラ型容器）に充填したものを付属のブラシで、１２週間、評価対象に、毎朝晩１日２回、睫毛とその根元に塗布させた。そして、以下の評価方法により、評価対象の毛成長促進作用を調べた。
評価方法：１．長さ評価
２．太さ評価
３．アンケート評価

１．長さ評価
睫毛の生え際のカーブに合わせて、ほぼ同心円状の睫毛長さ測定目盛りが配置された睫毛スケールを用いて、最長睫毛長さ（ｍｍ）を測定した。その結果を表１０に示す。

表１０の結果から、比較例１を使用した９名の平均の最長睫毛長さは、７．３９ｍｍ（０週）から７．８６ｍｍ（１２週）へと０．４７ｍｍ伸びたのに対して、実施例１を使用した１２名の平均の最長睫毛長さは、７．５４ｍｍ（０週）から８．１５ｍｍ（１２週）へと０．６１ｍｍ伸びた。したがって、実施例１は、比較例１に比し、睫毛の長さを有意に伸長させることが分かった。

上記睫毛スケールによる長さ評価において、著効例として、実施例１使用群１２名の中で、実施例１の使用前に最長睫毛の長さが８．０ｍｍであったが、実施例１の使用１２週後の最長睫毛の長さが１０．５ｍｍと、２．５ｍｍ伸長した例もあった（図４及び表１１を参照のこと）。

２．太さ評価
マイクロスコープで撮影した睫毛の１００倍拡大画像より、睫毛の太さが６０μｍより太い毛（太毛）の割合を太毛率として、睫毛の太毛率を調べた。比較例１の太毛率を１００とした時の実施例１の太毛率を、表１２に示す。

表１２の結果から、上記評価対象において、実施例１の使用開始時から１２週間で、太毛率が１００％から１２６％まで増加した。したがって、実施例１は、睫毛の太毛率を有意に増加させることが分かった。

３．アンケート評価
また、使用後に、上記評価対象にアンケートをとり、表１３及び表１４に記載の各項目について、５段階の評価（有効、やや有効、変化なし、やや悪化、悪化）を行った。その結果を表１３及び表１４に示す（表中の数字は回答割合（％、小数点第一位四捨五入））。

表１３及び表１４から明らかなように、実施例１を使用した被験者群では、育毛に関する各項目について有効、あるいはやや有効であったと評価している割合が、比較例１を使用した被験者群に比して顕著に高く、実施例１では、高い育毛効果が見られた。

以上のように、本実施形態に係る育毛剤によれば、アンジオゲニンの産生を促進する成分が、アンジオゲニンの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンが毛細血管の血流を促進し、毛成長を有効に促進することができる。

また、ε‐ポリリジンが、アンジオゲニンの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるアンジオゲニンが毛細血管の血流を促進し、毛成長を有効に促進することができる。

また、ＶＥＧＦの産生を促進する成分が、ＶＥＧＦの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるＶＥＧＦが毛細血管の血流を促進し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

また、シャクヤクが、ＶＥＧＦの産生を促進することにより、血管新生因子の一種であるＶＥＧＦが毛細血管の血流を促進し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

また、ε‐ポリリジンを、０．０００１重量％以上含むため、０．０００１重量％といった微量で、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

また、シャクヤクを、０．０００１重量％以上含むため、０．０００１重量％といった微量で、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

また、ε‐ポリリジンとシャクヤク抽出物との重量比が、乾燥物換算で２．５：７．５～９：１である場合に、ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖を促進し、細胞数を有意に増加させることにより、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

また、クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とを、さらに含むため、育毛成分としてε‐ポリリジン、シャクヤク抽出物のみを含む場合に比し、毛成長をさらにより有効に促進することができる。

以下に、本発明の育毛剤における処方例を示す。

（処方例１）
本処方例は、ヘアクリームの処方例であり、その組成は表１５の通りである。なお、配合量は重量％である。

（処方例２）
本処方例は、ヘアローションの処方例であり、その組成は表１６の通りである。なお、配合量は重量％である。

（処方例３）
本処方例は、アイラッシュジェルの処方例であり、その組成は表１７の通りである。なお、配合量は重量％である。

なお、本発明の育毛剤は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲で適宜変更し得ることは勿論のことである。

本発明の育毛剤は、毛成長を有効に促進することができるため、産業上の利用可能性が非常に高い。

Claims (8)

1. 育毛のためにアンジオゲニンの産生を促進するための有効成分として、ε‐ポリリジンを含有する、育毛剤。
2. 育毛のためにＶＥＧＦの産生を促進するための有効成分として、シャクヤク抽出物、ビマトプロストの少なくともいずれか一方をさらに含有する、請求項１に記載の育毛剤。
3. 前記ε‐ポリリジンを、０．０００１重量％以上含む、請求項１に記載の育毛剤。
4. 前記シャクヤク抽出物を、０．０００１重量％以上含む、請求項２に記載の育毛剤。
5. 前記ε‐ポリリジンと前記シャクヤク抽出物との重量比は、乾燥物換算で２．５：７．５～９：１である、請求項２または４に記載の育毛剤。
6. クスノハガシワ抽出物と、アロエベラ抽出物とを、さらに含む、請求項１～５の何れかに記載の育毛剤。
7. アンジオゲニンの産生を促進するための、ε‐ポリリジンの使用。
8. アンジオゲニンおよびＶＥＧＦの産生を促進するための、ε‐ポリリジンおよびシャクヤク抽出物の使用。

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