KR20130058546A

KR20130058546A - 쿠라리논 또는 고삼추출물을 포함하는 피부질환 예방 및 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20130058546A
Application number: KR1020110124614A
Authority: KR
Inventors: 김병학; 김태윤
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단
Priority date: 2011-11-25
Filing date: 2011-11-25
Publication date: 2013-06-04
Also published as: KR101480164B1

Abstract

본 발명은 쿠라리논 또는 고삼추출물을 포함하는 피부질환 예방 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 고삼 (Sophora Flavescens Aiton)에서 분리한 플라보노이드 계열의 물질인 쿠라리논이 건선, 아토피 또는 접촉성 피부염을 포함하는 다양한 피부질환에 대한 예방 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 고삼에서 분리한 쿠라리논은 아토피, 건선 및 접촉성 피부염을 포함하는 피부질환을 유발하는 세포활성을 우수하게 억제하는 효과가 있으므로 이에 관한 질환의 개선의 목적으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

쿠라리논 또는 고삼추출물을 포함하는 피부질환 예방 및 개선용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for preventing or improving skin disease comprising kurarinone or extract of Sophora Flavescens as an active ingredient}

본 발명은 쿠라리논 또는 고삼추출물을 포함하는 피부질환 예방 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 고삼 (Sophora Flavescens Aiton)에서 분리한 플라보노이드 계열의 물질인 쿠라리논이 건선, 아토피 또는 접촉성 피부염을 포함하는 다양한 피부질환에 대한 예방 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부질환이란 피부 (머리털과 손, 발톱을 포함하는)에 나타나는 모든 이상 소견을 의미한다. 피부질환은 온도나 습도, 자외선 같은 환경변화와 곰팡이, 세균감염, 알레르기 반응, 심지어 벌레에 물린 합병증 등의 외부자극으로 발생할 수 있다. 또한 염증, 양성 및 악성종양, 호르몬, 유전, 외상 및 퇴행변성 등의 체내로부터의 병적 변화에도 영향을 받으므로 다양한 원인에 의하여 피부질환이 유발될 수 있다.

예를 들어 피부 상피 내에 일련의 염증 반응을 일으키는 다양한 자극 요인들로 인해 가려움, 부종, 홍반, 벗겨짐 등과 같은 일련의 임상적 징후와 증상이 유발되는 피부질환이 알려져 있다.

아울러 다양한 원인과 체질에 의해서 나타나는 면역과민반응 현상으로서 알레르기성 피부염, 두드러기 등과 관계가 있는 알레르기 질환도 알려져 있다.

아토피는 심한 가려움증 (소양감)을 가지는 재발성의 만성 피부질환으로 종전에는 유아기에 주로 발생하여 태열이라고도 하였으며, 주로 유전적으로나 잦은 샤워 등 생활 습관에 의해 각질층내의 세라마이드 (ceramides)의 함량이 감소됨에 따라 발생하는 것으로서 각질층의 수분유지기능이 떨어짐에 따라 피부가 건조되어 각질이 쉽게 일어나며, 피부 장벽 (skin barrier) 기능이 저하됨에 따라 자극유발물질 (또는 allergen)이 각질층내로 침입하여 자극을 유발시키고 정상피부에서는 침입하기 어려운 항원 단백질이 침입함에 따라 피부 알레르기 등이 용이하게 발생하여 붉은 반점과 부종, 견디기 힘들만큼의 소양증 증상을 나타내기도 하는 것이다. 최근 수십 년 동안 환경오염 등에 의한 공기매개성 원인물질의 증가와 건성 피부를 형성시키는 조건의 증가 등으로 인해 아토피에 대한 유병율이 증가하고 있다.

건선은 만성적이며 재발이 잘 되는 난치성 질환 중의 하나로 전 인구의 1~3%에 달하며 비교적 흔히 볼 수 있는 피부질환이다. 건선은 피부면에서 조금 두드러져 오른 경계가 뚜렷한 선홍색 반점 위에 은백색의 두꺼운 운모와 같은 인설이 붙은 피진이 생기는 병으로 현재 발병률이 늘어가는 추세이다. 피진의 형태, 분포, 경과 외에 합병증이 있는지 없는지에 따라 심상성 건선, 적상성 건선, 농포성 건선, 관절증성 건선 등 크게 네 가지 유형으로 분류되고 있다. 어느 유형이든 건선을 일으키는 발병 원인은 분명하지 않으나 피부 세포의 각질화 과정에 이상이 생긴 것에 의해 유발되는 것으로 추정되고 있다.

한편 고삼(Sophora Flavescens)은 콩과에 속하는 다년생 초본으로 도둑놈의 지팡이라 불린다. 피부가려움증과 이질, 만성기관지염 등의 완화에 이용되어 왔다. 고삼의 주피를 거의 벗긴 뿌리로부터 분리한 플라보노이드 계열의 성분으로 사코마 180 (Sacoma 180), 림포이드 류케믹 1210 (lymphoid leukemic 1210) 및 멜라노틱 멜라노마 (melanotic melanoma)의 암 세포주에서 항암활성을 보인다고 보고되어 있다.

지금까지는 세라마이드 (ceramides)를 포함하는 지질 복합체를 치료제로서 이용되고 있지만 보다 근본적인 접근은 심한 가려움증 (소양증)과 발진 등 증상을 더불어 개선하는 것이라 할 수 있다. 현재 이용되는 의약품은 Cyclosporin, FK506 등이 이용되고 있으나 아토피 등의 피부국소적 치료제로는 비용 등의 한계로 인하여 이용되지 못하고 있고 피부외용제로서 하이드로코티손 (hydrocortisone)과 같은 스테로이드 제품이 여전히 대부분 이용되고 있다. 그러나 이러한 약물은 그 효과가 일시적이거나 대부분 효능이 낮을뿐더러 장기 복용 시 혈압 상승, 고지혈증, 동맥경화, 혈당 상승, 비만, 골다공증, 성장장애, 결핵 등을 악화시켜 부작용 발생률이 높았다.

이에 본 발명자들은 장기간 사용해도 인체 안전성이 높은 물질을 개발하기 위해 연구를 거듭한 결과 한방 의학에서 사용되고 있으면서 주변에서 흔히 볼 수 있는 잡초 성격의 고삼 식물추출 혼합물 또는 여기에서 분리된 쿠라리논이 건선, 아토피, 접촉성 피부염 등 다양한 피부질환에 대해 유효한 효과를 가지고 있는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 쿠라리논을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피, 접촉성 피부염 또는 암 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 고삼추출물을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피, 접촉성 피부염의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 쿠라리논을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피, 접촉성 피부염의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 고삼추출물을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피, 접촉성 피부염의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 화장료 조성물은 고삼추출물, 보다 바람직하게는 쿠라리논을 유효성분으로 포함하여 아토피, 건선 및 접촉성 피부염의 예방 및 개선의 목적으로 사용될 수 있다.

보다 구체적으로 본 발명의 쿠라리논은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물일 수 있다.

[화학식 1]

또한, 본 발명의 고삼추출물 내에 함유된 14종의 화합물은 하기 화학식 2 내지 15로 표시되는 화합물일 수 있다.

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

[화학식 5]

[화학식 6]

[화학식 7]

[화학식 8]

[화학식 9]

[화학식 10]

[화학식 11]

[화학식 12]

[화학식 13]

[화학식 14]

[화학식 15]

(화학식2: trifolirhizin, 화학식3: (-)-maackiain, 화학식4: variabilin, 화학식5: medicarpin, 화학식6: sophoracarpan A, 화학식7: kurarinol, 화학식8: kurarinone, 화학식9: sophoraflavanone G, 화학식10: (2S)-2`-methoxykurarinone, 화학식11: kushenol I, 화학식12: kushenol N, 화학식13: kushenol M, 화학식14: kuraridin, 화학식15: 8-lavandulylkaempferol)

본 발명의 일실시예에서는 5kg의 시료를 30L의 디클로로메탄과 30L의 메탄올에 침지하여 3회 반복 추출한 추출용액을 다시 순차적으로 145.3g의 부탄올-13.3g의 헥산/90%메탄올-40.9g의 물/69.6g의 에틸아세테이트로 분리하였다. 이 에틸아세테이트층을 역상 고속 감압크로마토그래피를 이용하여 순차적으로 50%-40%-30%-20%-10% 물을 포함하는 메탄올과 100% 아세톤으로 분리하고 역상 고성능 크로마토그래피로 물질의 구조를 동정하였다.

본 발명의 고삼추출물은 공지된 용매 추출법에 의해 추출될 수 있다. 예를 들어, 고삼뿌리로부터 물, 에탄올, 주정, 메탄올, 프로판올(propanol),이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol)과 같은 탄소수 1 내지 6개의 알코올, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산, 시클로헥산, 석유에테르 (petroleum ether), 디에틸에테르, 벤젠과 같은 유기용매 중에서 선택된 어느 하나 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출할 수 있다. 바람직하게는 에탄올, 주정, 아세톤, 에틸아세테이트 또는 메틸렌클로라이드로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매를 사용하거나 이들 용매를 그 밖의 공지된 용매와 혼합하여 추출한 것일 수 있다.

본 발명의 고삼추출물은 용매 추출법에 의하여 추출된 추출물을 그대로 사용할 수 있으며, 또는 불순물을 제거하고 활성성분의 농도를 높이기 위해 공지의 방법으로 분획할 수 있다. 분획의 효율을 위하여 추출물을 감압 농축할 수 있으며, 분획을 위한 용매로는 물, 에탄올, 주정 및 메탄올과 같은 탄소수 1 내지 6개의 알코올, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 디클로로메탄, 클로로포름, n-헥산 (n-Hexane), 디에틸에테르, 아세톤, 벤젠과 같은 유기용매 중에서 선택된 어느 하나 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물, n-부탄올, 에탄올 및 에틸아세테이트 중에서 선택된 어느 하나 또는 이들의 혼합용매로 분획할 수 있다. 분획물은 그대로 사용되거나 재분획 할 수 있으며, 재분획 하는 경우 바람직하게는 에틸아세테이트를 사용할 수 있다. 특히 추출공정을 보다 경제적으로 수행하기 위해서는 단일 또는 혼합 용매로 1회 추출하는 것이 바람직한데 물, 에탄올, 주정 및 메탄올과 같은 탄소수 1 내지 6개의 알코올, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 디클로로메탄, 클로로포름, n-헥산 (n-Hexane), 디에틸에테르, 아세톤, 벤젠과 같은 유기용매 중에서 선택된 어느 하나 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하다. 더 바람직하게는 에탄올, 주정, 아세톤, 에틸아세테이트 및 메틸렌클로라이드를 사용할 수 있다. 에탄올, 특히 주정을 추출용매로 사용 시 추출물의 분리과정을 단축할 수 있어 가장 바람직하다.

상기 과정으로 Kurarinol, Kurarinone, Kushenol N, Kushenol I, Kushenol M, Kuraridin, 8-Lavandulylkaempferol, (2S)-2`-Methoxykurarinone, Sophoraflavanone G, Trifolirhizin, (-)-Maackiain, variabilin, Medicarpin 및 Sophoracarpan A와 같은 화합물을 각각 얻을 수 있고, 본 발명의 고삼추출물은 이를 하나 이상 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에서 STAT3가 비정상적으로 활성화되어 있는 세포주로 호치킨 림프종인 L540, 유방암 세포주인 MAD-MB-468, 전립선 암세포주인 DU145, 폐암 세포주인 NCI-H460, 그리고 악성흑색종 세포주인 A375를 이용해 STAT3의 활성화 억제를 확인하였다. 사이토카인과 성장인자들에 의한 신호를 전달하는 역할을 하는 단백질 그룹의 일원인 STAT3 는 이상 활성화로 무제한적인 세포 성장 및 정상세포의 악성 세포로의 변화에 관련되어 암을 유발시키는 것으로 나타났다. 본 발명의 쿠라리논 또는 고삼추출물은 STAT3 신호전달을 차단하여 암의 성장을 저해하고 사멸을 유도함을 확인하였다.

본 발명의 일실시예에서 피부질환 모델인 인터루킨-23 (IL-23)에 의한 건선 병변 유발과 2,4,6-트리니트로클로로벤젠 (2,4,6-trinitrochlobenzene, TNCB)으로 유도되는 지연성 과민반응에 의한 접촉성 피부염 유발에 대해 쿠라리논의 억제작용을 확인하였다. 인터루킨은 림프구, 마크로파지 등이 항원을 인지하여 생산하는 생물학적 활성을 가진 단백질군 중 백혈구 상호 간의 신호전달 물질로 매우 적은 양으로도 대식세포를 활성화시켜 식세포 작용을 도우며 세포성 면역을 조절한다. 이를 통해 쿠라리논이 염증인자의 발현을 현저하게 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 일실시예에서 쿠라리논의 T 세포 분화 억제작용을 확인하였다. 림프구의 일종인 T 세포는 후천성 면역반응 (adaptive immune response)에 관여하고 있는 세포다. 세포 관련 면역 반응에 관여하고 있으며, 특히 항체 생성에 밀접하게 관여한다. 이들의 기능은 항원 제시의 과정을 통해 신체 내에 존재하는 자신의 것이 아닌 항원을 인식하고 특이적인 반응을 한다. T 세포 중 보조 T 세포 (Helper T cell, 또는 Th cell)는 다른 백혈구들의 분화 및 활성화를 조절함으로써 체액성 면역을 촉진한다. 이를 통해 쿠라리논이 면역 반응의 분화 및 활성화를 조절할 수 있는 것을 확인할 수 있었다.

이에 본 발명의 조성물은 피부질환 등의 예방 및 치료/개선에 탁월한 효능이 있음을 확인하였다. 따라서 본 발명의 쿠라리논 또는 고삼추출물은 피부질환의 예방 또는 개선을 위한 화장품 조성물의 형태로 제공될 수 있다.

상기 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 쿠라리논 또는 고삼추출물을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물 (화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물 (화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물 (샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 본 발명의 바이아릴아미드 유도체를 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형 (O/W)의 크림베이스에 본 발명의 바이아릴아미드 유도체를 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 본 발명의 바이아릴아미드 유도체의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5 중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 본 발명의 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는 이에 한정되는 것은 아니나 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 바디크림, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 트리트먼트, 미용액, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 고삼에서 분리한 쿠라리논은 아토피, 건선 및 접촉성 피부염을 포함하는 피부질환을 유발하는 세포활성을 우수하게 억제하는 효과가 있으므로 이에 관한 질환 치료의 목적으로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 고삼에서 분리한 물질의 인간유래 암세포에서 STAT3 인산화 억제작용을 나타낸 것이다.
도 2는 쿠라리논의 피부질환 치료/개선작용을 나타내는 그래프이다.
도 3은 쿠라리논의 CD4^＋ T 세포 분화 억제작용을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

고삼에서 물질 분리 및 동정

고삼은 서울시 경동시장에서 구입하였으며, 서울대학교 약학대학 천연물연구소에서 검증하였다. 고삼의 건조된 뿌리 5kg을 디클로로메탄 (dichloromethane, 10 L×3)과 메탄올 (methanol, 10L×3)으로 3회 반복하여 추출하고 이들을 다시 순차적으로 부탄올 (butanol, 145.3g)- 헥산 (n-hexane, 13.3g)/90% 메탄올 (10% aqueous MeOH, 118.2g) - 물 (H2O, 40.9g)/에틸아세테이트 (EtOAc, 69.6 g)로 분리하였다. 에틸아세테이트층을 역상 고속 감압크로마토그래피 (reverse-phase vacuum flash chromatography)을 이용하여 순차적으로 50%-40%-30%-20%-10% 물을 포함하는 메탄올과 100% 아세톤 (acetone)으로 분리하고 역상 고성능 크로마토그래피 (reverse-phase high performance liquid chromatography)로 물질의 구조를 동정하였다.

<실시예 2>

고삼에서 분리한 물질의 암세포에서 STAT3 억제작용

정상적인 (Janus kinase)/STAT (Signal Transducer and Activator of Transcription) 신호전달은 다양한 사이토카인과 성장인자들에 대한 세포반응을 조절하여 성장, 증식, 발달과 면역에 중요한 역할을 하고 있다. 하지만 비정상적으로 활성화된 JAK/STAT 신호는 다양한 종류의 암 질환에서 확인되고 있어 인간의 암 질환에 중요한 작용을 한다. 특히 STAT3은 림프종과 백혈병을 비롯한 혈액암, 유방암, 전립선암, 폐암 및 악성흑색종 등 고형암을 비롯한 다양한 암 질환에서 발현이 증가되어 있다. 본 발명에 사용한 암세포주는 인간에서 유래하였으며, 모두 STAT3가 비정상적으로 활성화되어 있는 세포주로 호치킨 림프종인 L540, 유방암 세포주인 MAD-MB-468, 전립선 암세포주인 DU145, 폐암 세포주인 NCI-H460, 그리고 악성흑색종 세포주인 A375를 이용하였다. 각각의 세포주를 12-well plate에 분주하고 고삼에서 분리한 14종의 물질을 20 μM의 농도로 6시간 처리하여 STAT3의 활성화 억제작용을 웨스턴블럿으로 확인하였다.

그 결과 도 1에서 보듯이, 고삼에서 분리한 14종의 물질에 대한 STAT3 인산화에 대한 작용은 세포주에 따라 약간의 차이를 보였지만 전반적으로 억제작용을 보였으며, 그 중에서도 호치킨 림프종인 L540과 전립선 암세포주인 DU145에서 억제작용이 우수하였다. 특히 14종의 물질 중에서 쿠라리논 (kurarinone),쿠세놀 M (kushenol M), 쿠라리딘 (kuraridin)과 소포라플라바논 G (sophoraflavanone G)의 억제작용이 가장 우수하였다.

<실시예 3>

피부질환 모델에서 쿠라리논 (kurarinone)의 작용

<3-1> 인터루킨-23 (IL-23)에 의한 건선 병변 유발

500 μg의 IL-23를 10 μl 용량으로 C57BL/6 마우스의 귀에 2일에 1회씩 주사기로 피내주입 하여 12일간 모두 7회 주입하고 최종 주입 다음날 귀의 두께를 측정하였다. 마우스의 귀를 채취하여 조직촬영과 RNA를 분리하여 다음 실험에 사용하였다.

실험결과 도 2a, b에서 보듯이 IL-23에 의하여 귀의 두께가 정상군에 비교하여 현저하게 두꺼워졌으며, 조직검사 결과 건선 질환의 병변으로 예상되는 표피의 과형성 (epidermal hyperplasia = 극세포증 acanthosis), 각막비후증 (hyperkeratosis)과 진피부위로 염증세포의 이동이 현저하게 증가되었다. 그리고 건선 질환과 관련된 다양한 사이토카인 (cytokine)과 키모카인 (chemokine) 등 다양한 염증인자들의 발현이 현저하게 증가하였다. 하지만 고삼에서 추출한 쿠라리논은 IL-23에 의한 귀의 두께 감소, 건선 질환 병변의 감소 및 염증인자의 발현을 현저하게 억제하였다.

<3-2> 2,4,6-트리니트로클로로벤젠 (2,4,6-trinitrochlobenzene, TNCB)으로 유도되는 지연성 과민반응에 의한 접촉성 피부염 유발

아세톤 (acetone)과 올리브오일 (olive oil)을 3:1의 비율로 혼합한 용액에 녹인 3%의 TNCB 100 ul를 C57BL/6 마우스의 복부에 처리하여 감작시키고 7일 후에 다시 아세톤 (acetone)과 올리브오일 (olive oil)을 3:1의 비율로 혼합한 용액에 녹인 1%의 TNCB 10 ul를 마우스의 양쪽 귀에 골고루 처리하여 염증 반응을 유발시켰다. 다음날 귀의 두께를 측정하고 마우스의 귀를 채취하여 조직촬영과 RNA를 분리하여 다음 실험에 사용하였다.

실험결과 도 2c, d에서 보듯이 IL-23 자극과 비슷하게 TNCB 자극에 의한 세포성 면역반응인 지연형 과민반응현상에 의하여 귀의 두께가 정상군에 비교하여 현저하게 두꺼워졌다. 조직검사 결과 접촉성 피부염으로 인한 표피의 과형성 (epidermal hyperplasia)과 진피부위로 염증성 세포의 이동이 현저하게 증가하였으며, 염증질환과 관련된 다양한 사이토카인 (cytokine)과 키모카인 (chemokine) 등 다양한 염증인자들의 발현도 현저하게 증가하였다. 하지만 고삼에서 추출한 쿠라리논은 TNCB에 의한 귀의 두께 감소와 염증성 세포의 이동 억제 및 염증인자의 발현을 억제하였다.

<실시예 4>

쿠라리논의 T세포 분화 억제작용

C57BL/6 마우스 비장과 림프절에서 분리한 CD4^＋ T 세포를 MACS 컬럼을 이용하여 분리하였다. 분리한 세포를 RPMI 1640 배지에서 배양하며 CD3 항체와 CD28 항체를 첨가하였다. 그리고 각각의 T 세포로 분화시키기 위하여 필요한 사이토카인 성분들과 쿠라리논을 첨가하여 4일간 배양하였다. Th1 세포로 분화시키기 위하여 10 ng/ml IL-12과 10 μg/ml anti-IL-4, Th2 세포로 분화시키기 위하여 20 ng/ml IL-4와 10 μg/ml anti-IFN-γ, Th17 세포로 분화시키기 위하여 20 ng/ml IL-6, 5 ng/ml TGF-β와 10 μg/ml anti-IFN-γ, 그리고 Treg 세포로 분화시키기 위하여 5 ng/ml TGF-β와 10 ng/ml IL-2를 첨가하였다. CD4^＋T 세포 분화에 대한 쿠라리논의 효과를 확인하기 위하여 각각의 세포 분화와 관련된 전사인자와 분화에 의하여 발현이 증가되는 사이토카인에 대한 발현을 실시간 중합효소 반응으로, 그리고 사이토카인의 생성은 ELISA로 확인하였다.

그 결과 도 3에서 보듯이 Th1, Th2, Th17과 Treg 세포분화에 대한 전사인자로 작용하는 T-bet, GATA-3, RORγt, 그리고 Foxp3의 발현을 쿠라리논은 모두 억제하였는데, 특히 Th2와 Th17에 대한 전사인자인 GATA-3와 RORγt의 발현에 대한 억제작용이 우수하였으며, 상대적으로 T-bet과 Foxp3에 대한 효과는 약하였다. 그리고 사이토카인으로 Th2 세포에 대한 IL-4와 Th17 세포에 대한 IL-17A와 IL-22의 발현에 대하여도 억제작용이 우수하였지만 Th1과 Treg에 대한 사이토카인인 IFN-γ와 TGF-β에 대한 억제작용은 상대적으로 약하였다. 그리고 각각의 사이토카인의 생성에 대한 영향도 RNA 발현에 대한 작용과 비슷하였다. 즉 IL-4와 IL-17A의 생성을 강하게 억제하였지만 IFN-γ 생성 억제작용은 상대적으로 약하였다. 그리고 염증반응을 유발하는 것으로 잘 알려진 사이토카인으로 IL-6와 T 세포 수용체 (T cell receptor, TCR) 신호전달에서 중요한 작용을 하는 사이토카인인 IL-2의 생성을 억제하였다. 하지만 항염증 작용을 하는 것으로 알려진 사이토카인으로 IL-10의 생성은 증가하였다.

본 발명의 고삼추출물인 쿠라리논은 소양증 등의 증상들의 억제효과와 치료/개선효과가 제공된다. 따라서, 본 발명의 쿠라리논을 이용하여 다양한 피부질환의 예방 및 치료/개선을 위한 기능성 화장품 등의 목적으로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 쿠라리논 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피 또는 접촉성 피부염 예방 및 개선용 화장료 조성물;

[화학식1]
고삼추출물을 유효성분으로 포함하는 건선, 아토피 또는 접촉성 피부염 예방 및 개선용 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 상기 고삼추출물은 Kurarinol, Kurarinone, Kushenol N, Kushenol I, Kushenol M, Kuraridin, 8-Lavandulylkaempferol, (2S)-2`-Methoxykurarinone, Sophoraflavanone G, Trifolirhizin, (-)-Maackiain, Variabilin, Medicarpin 및 Sophoracarpan A로 이루어진 군에서 선택된 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 고삼추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 디클로로메탄, 클로로포름, n-헥산 (n-Hexane), 디에틸에테르, 아세톤 및 벤젠으로 이루어진 군에서 선택된 용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.