KR100755425B1

KR100755425B1 - 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 함유하는피부외용 조성물

Info

Publication number: KR100755425B1
Application number: KR1020060041237A
Authority: KR
Inventors: 김기호; 김영희; 한창성; 박선희; 고수연; 김진국
Original assignee: 주식회사 바이오랜드
Priority date: 2006-05-08
Filing date: 2006-05-08
Publication date: 2007-09-04

Abstract

본 발명은 항염 및 항자극 효과가 뛰어난 노르베르게닌을 함유하는 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 iNOS의 활성을 저해하고 iNOS 및 COX-2 유전자의 발현을 억제하며 PGE2, IL-6 및 IL-8의 생성을 억제하여 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 포함하는 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것이다.

노르베르게닌, 항염, 항자극, 피부외용, 약학조성물, 화장료 조성물

Description

항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 함유하는 피부외용 조성물{A topical composition comprising norbergenin showing anti-inflammatory and anti-irritation activity}

본 발명은 항염, 항자극 추출물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 항염, 항자극 효과가 뛰어난 노르베르게닌(norbergenin)을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물을 살펴보면 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품 형성에 필수 불가결한 존재로서 사용된다. 예를 들면 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소 및 기타 효능, 효과를 부여하기 위해 쓰이는 여러 가지 성분들을 들 수 있다. 이러한 성분들은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지, 부종 등 여러 가지 부작용을 발생하는 것으로 알려져 있다(Maibach, H. I., Contact Dermatitis, 6, pp369-404, 1980). 또한, 체내로부터 배출되는 피지 성분, 땀 성분 및 화장품 성분 중의 지방산, 고급 알콜, 단백질 등이 피부상에 존재하는 피부 상재균들에 의해 독성이 강한 물질로 분해되어 이들에 의해 피부 염증이 유발될 수도 있으며, 태양으로부터 나오는 자외선에 의해서도 피부 염증이 유발된다는 것은 잘 알려진 사실이다.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화 하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어 목적으로 나타나는 것이며, 신경 및 혈관, 임파관, 체액 반응, 세포 반응을 일으켜 결과적으로 통증, 부종, 발적, 발열 등을 일으켜 기능장애를 유방하는 것이다. 염증을 유발하는 원인으로 외상, 동상, 화상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체 반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 발생된다. 외부 자극으로 손상된 세포들이 분비한 여러 화학 매개 물질에 의해 혈관 확장이 일어나고, 투과성이 높아짐에 따라 항체, 보체, 혈장(plasma), 식균 세포들이 염증 부위로 몰려들게 된다. 이러한 현상이 홍반의 원인이 된다.

이러한 염증은 자외선이나 활성산소, 유리 라디칼 등의 산화적 스트레스 등이 염증성 인자를 활성화시켜 각종 질병 및 피부의 노화를 일으킨다. 염증의 특징 중 하나는 프로스타글란딘을 생성하는 시클로옥시게나제(COX) 및 류코트리엔을 생성하는 5-리폭시게나제 경로에 의해 대사되는 아라키돈산(Arachidonic acid)의 산소첨가반응의 증가이다. 프로스타글란딘 및 류코트리엔은 염증의 매개체이다. 따라서, 시클로옥시게나제 및/또는 리폭시게나제 활성을 억제하도록 설계된 치료법은 큰 관심사이다. 시클로옥시게나제 효소는 시클로옥시게나제-1 및 시클로옥시게나제-2의 2개의 형태가 있다. 후자의 형태, 즉 시클로옥시게나제-2는 염증 진행에 중요한 역할 을 하는 것으로 보인다. 따라서, 시클로옥시게나제-2 효소를 억제하는 것이 비가역적인 시클로옥시게나제-1 억제와 관련된 부작용 없이 염증을 감소시킬 수 있는 효과적인 방법일 수 있다.

또 하나의 강력한 염증 매개물인 나이트릭 옥사이드(Nitric oxide, NO)는 NO 합성 효소(NOS)에 의해 L-알지닌으로부터 생성되며 UV와 같은 스트레스나 엔도톡신, 사이토카인에 의해 많은 타입의 세포에서 발생된다. 이러한 염증 자극들은 세포 내의 유도성 NOS의 발현을 증가시켜 NO를 발생시켜 대식 세포를 활성화시켜 염증 반응을 일으킨다.

인터루킨-8(IL-8)은 단핵세포, 섬유아세포, 내피 세포 및 각질 세포를 비롯한 몇몇 세포 유형에 의해 생성되는 주화성 인자이다. 내피세포로부터의 이의 생성은 인터루킨-1, 종양괴사인자(Tumor Necrosis Factor) 또는 리포폴리사카라이드에 의해 유도된다. IL-8은 시험관내에서 수많은 기능을 자극한다. 이는 호중구, T-림프구 및 호염기성 세포에 대해 화학 유인 특성을 갖는 것으로 나타나 있다. 게다가, 이는 정상 및 아토피성 개체 모두의 호염기성 세포로부터의 히스타민 방출을 유도할 뿐만 아니라, 호중구로부터 리소좀 효소 방출 및 호흡 폭발을 유도한다. IL-8은 또한 단백질 신생합성없이 호중구상에서 Mac-1(CD11b/CD18)의 표면 발현을 증가시키는 것으로 나타나 있고, 이는 혈관 내피 세포에 대한 호중구의 부착을 증가시키는 데 기여할 수 있다. 많은 질환은 호중구 대량 침투를 특징으로 한다.

현재까지 홍반이나 부종같은 자극완화 및 염증 완화 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루폐나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있고 스테로이드계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone)등이 있으며(김창종, 병태생리학, 한림상사, p61-69, 1988) 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존(ⅴ), 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산유도체)등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다(광정무부, 신화장품학, 남산당, p162, 1993).

이렇듯 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있으며 이를 해결 하고자 여러가지 연구가 진행되어 왔으나, 항염제로 쓰이는 인도메타신(indomethacin)은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있고 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성면이나 화장료 배합시의 안정성면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.

특히, 최근에는 소비자들의 욕구에 부응하기 위하여 천연 원료를 이용한 화장료에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있는 실정이다.

본 발명에서 사용된 노르베르게닌을 분리정제하기 위해 주원료로 사용된 백량금(Ardisia crenata)은 쌍떡잎식물 앵초목 자금우과의 식물로 섬 골짜기나 숲의 그늘에서 자라는 높이 약 1m의 상록관목이다. 잎은 어긋나고 긴 타원형이며 짙은 초록빛으로서 윤이 나고 가장자리의 둔한 톱니 사이에는 선모(腺毛)가 있다. 꽃은 양성화로서 6∼8월에 피는데, 흰 바탕에 검은 점이 있으며 가지와 줄기 끝에 산형 꽃차례로 달린다. 열매는 핵과로서 둥글고 9월에 붉게 익으며 다음해 새 꽃이 필 때까지 달리며 한국(홍도·제주도)·일본·타이완·중국·인도에 분포한다.

백량금은 동의치료에서 뿌리를 독풀이 약으로 달여 쓰였으며 민간에서는 기생충 약으로도 사용되어져 왔다. 함유되어져 있는 성분으로는 트리터페노이드사포닌류가 알려져 있으며(Jia et al, Phytochemistry , 37(5), pp1389-1396, 1994;, Jia et al, Tetrahedron 50(41), pp11853-11864, 1994) 또한 지방산류와 스테롤(sterol)류의 화합물도 함유되어져 있다(Han et al, Zhonggou Zhong Yao Za Zhi, 14(12), pp737-739, 1989).

이에 본 발명자들은 예의 연구한 결과 피부에 안전성이 우수하며 화장료 배합 시 보존안정화가 쉽고 실질적으로 우수한 항염 및 자극완화 효과가 있는 노르베르게닌을 제조하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 포함하는 피부외용 약학조성물 및 화장료 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항염 및 항자극 활성을 하기 구조식 1로 표현되는 노르베르게닌을 유효성분으로 함유하는 염증 및 알레르기의 예방 및 치료용 피부외용 약학조성물을 제공한다.

(1)

상기 약학 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형을 포함한다.

또한 본 발명은 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 유효성분으로 함유하는 염증 및 알레르기의 개선 및 완화용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 상기 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 밀크로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 팩의 제형을 포함한다.

상기한 노르베르게닌은 백량금(Ardisia crenata), 자금우(Ardisia japonica), 예덕나무(Mallotus japonicus), 노루풀(Astilbe chinensis Maxim), 암백채(Bergenia crassifolia)를 건조하여 물, 메탄올, 에탄올 등의 C₁ 내지 C₄의 저급알콜, 또는 이들의 혼합용매로 50 내지 100℃, 2 내지 5 시간 추출, 분리하여 추출물을 수득한 후, HPLC를 실시하여 노르베르게닌을 수득하거나, 80 내지 100℃에서 5 내지 10시간 추출하여 농축한 후, 재결정하여 노르베르게닌을 수득할 수 있다.

본원에서 정의되는 염증은 일반적인 염증질환을 포함하며, 각종 피부염, 전 신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염, 신장염, 바람직하게는 피부염을 포함하고, 상기 알레르기는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염 (atopic dermatitis), 접촉성 피부염, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지, 약품 알러지, 바람직하게는 알러지성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 노르베르게닌은, 건조된 백량금(Ardisia crenata), 자금우(Ardisia japonica), 예덕나무(Mallotus japonicus), 노루풀(Astilbe chinensis Maxim) 또는 암백채(Bergenia crassifolia), 바람직하게는 백량금 전초를 건조하여 무게(㎏)의 1 내지 20배, 바람직하게는 4 내지 10배의 물, 메탄올, 에탄올 등의 C₁ 내지 C₄의 저급알콜, 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 100℃에서 30분 내지 20 시간, 바람직하게는 2 내지 5시간 추출, 분리하여 추출물을 수득한 후, HPLC를 실시하여 노르베르게닌을 수득하거나, 50 내지 100℃, 바람직하게는 80 내지 100℃에서 1시간 내지 20시간, 바람직하게는 5 내지 10시간 추출하여 농축한 후, 재결정하여 노르베르게닌을 수득할 수 있다.

상기 노르베르게닌은 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 90 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%로 사용이 가능하다.

본 발명의 노르베르게닌을 함유하는 피부외용 약학조성물은 피부의 염증 및 자극을 완화시키는 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 노르베르게닌의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 노르베르게닌은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 노르베르게닌은 피부의 염증 및 자극을 완화시키는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다.

본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 화장수, 스킨, 로션, 밀크로션, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코 르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터 의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, dl-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜 지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산 아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지 만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1.

1-1. HPLC 를 이용한 분리예 (1)

건조된 백량금 전초 500 g을 메탄올 5 kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기를 사용하여 70℃에서 3시간 동안 가온하여 추출한 후 여과하고 여액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거하여 15.1 g 의 추출물을 얻었다. 얻어진 고체상의 추출물 150 mg 을 메탄올 5 ml 에 용해하여 표 1의 조건에서 Prep-HPLC를 실시하여 분자량: 314.2, 융용점: 277-278 ℃인 노르베르게닌(Norbergenin) 25 mg(추출물 대비 16.7%)을 수득하였으며 그 구조분석을 위해 측정한 ¹H-NMR, ¹³C-NMR 케미컬 시프트(chemical shift) 값 및 IR 흡수파장을 하기 표 2에 나타내었다.

컬럼(column)	캡셀(Capcell) Pak C18 20x250mm시세이도(Shiseido)
이동상(Mobile phase)	18% 메탄올-물(Methanol-Water)
유속(Flow rate)	18ml/min
탐지기(Detector)	UV 280nm
주사 용량(Injection volume)	1ml

¹H-NMR(DMSO-d₆)	6.95(s,1H), 4.95(d,1H), 3.92(t,1H), 3.83(d,1H),3.63(t,1H), 3.55(m,1H),3.42(m,1H), 3.19(t,1H)
¹³C-NMR(DMSO-d₆)	163.7, 145.9, 142.4, 139.7, 116.1, 112.6, 109.2, 81.6, 79.8, 73.5, 72.2, 70.8, 61.2
IR(cm^-1)	3297, 1693, 1617, 1309, 1191, 1056

1-2. 재결정법을 이용한 분리예 (1)

건조된 백량금 전초 500g을 증류수 2kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기를 사용하여 90-95℃에서 8시간 가온하여 추출한 후 여과하고 여액을 감압회전증발기에서 용매를 제거하여 500g의 농축액으로 제조하였다. 농축액을 상온에서 3일 동안 방치시킨 후 생성된 고체를 여과하여 여액을 100g 까지 농축시켰다. 다시 1일간 상온에 방치한 후 생성된 고체를 여과하여 건조시킨 다음 에탄올에서 재결정을 2회 실시하여 노르베르게닌 1.87g 을 얻었다. 분석 결과는 실시예 1-1과 일치하였다.

참고예 1. 제형예 1 및 비교제형예 1의 제조

노르베르게닌을 함유한 제형예 1 및 비교제형예 1을 하기 표 3에 기재된 배합성분으로 제조하여 하기 실험예 5 및 실험예 6의 시료로 사용하였다. 비교제형예 1은 노르베르게닌 대신 동량의 1,3-부틸렌글리콜을 추가하여 첨가하였다.

원 료	제형예1	비교제형예1
실시예 1의 노르베르게닌	0.1	-
1,3-부틸렌글리콜	2.00	2.10
글리세린	3.00	3.00
올레일알코올	2.00	2.00
폴리솔베이트 20	1.00	1.00
에탄올	6.00	6.00
방부제	미량	미량
향	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100.00	100.00

참고예 2. 제형예 2 및 비교제형예 2의 제조

노르베르게닌을 함유한 제형예 2 및 비교제형예 2를 하기 표 4에 기재된 배합성분으로 제조하여 하기 실험예 5 및 실험예 6의 시료로 사용하였다. 비교제형예 2는 노르베르게닌 대신 동량의 1,3-부틸렌글리콜을 추가하여 첨가하였다.

원 료	제형예2	비교제형예2
실시예 1의 노르베르게닌	0.1	-
1,3-부틸렌글리콜	4.00	4.10
글리세린	3.00	3.00
올레일알코올	0.05	0.05
폴리솔베이트 20	1.00	1.00
방부제	미량	미량
향	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100.00	100.00

실험예 1. 세포 독성에 관한 실험

세포 독성 및 세포 생존율을 알아보기 위하여 살아있는 세포의 미토콘드리아 내에존재하는 숙신산탈수소효소(succinate dehydrogenase or mitochondrial dehydrogenase)에 의해서 수용성이고 노란색의 염인 MTT(3-[4,5-dimethylthiazole -2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)가 수불용성인 파란색의 포르마잔(formazan) 유도체로 환원되는 원리를 이용한 MTT 분석법을 실시하였다.

MTT 분석(assay)은 살아있는 세포의 수를 측정함으로서 세포 증식이나 독성에 많이 사용되는 실험법으로, 생성된 포르마잔(formazan) 유도체는 용해제(보통 dimethylsulfoxide 사용)를 넣고 용해시킨 후 흡광도를 측정하였다. 좀 더 자세히 설명하면, 인간 섬유아세포 세포주(human fibroblasts cell line; ATCC, CRL-2310)를 1x10⁴cells/ml의 농도로 하여 24 웰 플레이트(well plate)에 접종하였다. 배지는 소혈청 10%를 함유한 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle Medium, BRL, USA)을 사용하였다. 접종 후 24시간 후 소혈청 2%를 함유한 DMEM으로 교체하고, 시험 시료를 50 ㎍/㎖의 농도로 10 ㎕ 첨가 한 후 3일 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 배양이 끝난 후 상등액을 제거 하고 다시 PBS(phosphate buffered saline) 200㎕씩을 가하여 세척하고 MTT 용액을 웰(well)당 1.0 ㎖씩 가한 후 4시간 후에 MTT를 제거하고 DMSO를 웰(well)당 1.0 ㎖씩 가한 후 하룻밤 37℃에서 인큐베이션 후 570 nm에서 흡광도를 측정 하였고, 그 실험 결과를 표 5에 나타내었다.

노르베르게닌의 단층 세포배양에서의 세포독성

시료	농도(ug/ml)	세포 생존율(%)
실시예 1의 노르베르게닌	0.1	110.5
	0.5	125.7
	1	107.9
	10	100.0
	50	101.9

상기 실험 결과에서 확인할 수 있는 바와 같이 적용한 50ug/ml 농도까지 세포독성이 없음을 알 수 있었다.

실험예 2. iNOS 생성 억제 실험

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 이용하여 인위적으로 유발시킨 염증의 억제 효과를 알아보기 위하여 iNOS(inducible Nitric Oxide Synthase, 유도성 나이트릭 옥사이드 생성 효소)의 활성을 측정하였다. 페놀-레드(phenol-red)가 들어있지 않은 10% FBS(Fetal Bovine Serum) - DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에 8 x 10⁵세포를 현탁시켜 24웰 배양판에 접종하여 부착시켰다. 하루 후 시료를 농도별로 처리하여 18시간 배양(incubation)한 후 1 ㎍/ml의 리포폴리사카라이드 (LPS, lipopolysaccharide, 시그마 사)를 처리하여 24시간 배양(incubation) 하였다. 그 후, 상층액을 회수하여 96웰 플레이트에 100 ㎕씩 넣고 그리스 시약(Griess reagent, 시그마 사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 가볍게 흔들어 주어 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 소디움 나이트리트를 표준품으로 하여 검량선을 작성하고 각 시료를 첨가한 배양액 중의 나이트릭 옥사이드 생성량을 구하였다. 리포폴리사카라이드를 처리한 군의 나이트릭옥사이드의 생성량을 100%로 하여 각 시료의 iNOS 생성억제효과(%)를 구하였으며 계산식은 하기와 같다.

대조군으로 사용된 알파 비사볼롤은 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 물질이다. (표 6 참조)

노르베르게닌의 iNOS 생성 억제 효과

시료	농도(ug/ml)	억제효과(%)
LPS +노르베르게닌	1.0ug/ml	10.6
	10ug/ml	39.6
	20ug/ml	47.9
	40ug/ml	61.3
LPS +α-bisabolol	1.0ug/ml	6.4
	10ug/ml	21.8
	20ug/ml	35.5
	40ug/ml	48.7

실험예 3. iNOS 및 COX 2 유전자 발현 저해 실험

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포에 리포폴리사카라이드를 처리하여 인위적으로 COX 2 (Cyclooxygenase 2) 유전자 발현을 증가시킨 후 시료에 의한 저해능을 RT-PCR 방법을 이용하여 측정하였다. 10% FBS - DMEM 배지에 8 x 10⁵세포를 현탁시켜 100 mm 디쉬(dish)에 접종하여 부착시켰다. 하루 후 시료를 농도별로 처리하여 18시간 배양(incubation)한 후, 1㎍/ml 의 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide, LPS, 시그마社)를 처리하여 8시간 배양(incubation) 하였다. 세포의 배지를 제거하고 트라이졸(Trizol, 인비트로젠 사) 1ml 를 첨가하여 인비트로젠 사의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하고 260 nm에서 정량하여 역전사 중합 반응(Reverse transcription - polymerase chain reaction)을 실시하였다. 역전사 중합 반응은 올 인 원 역전사 중합 반응 키트(All-in-one RT-PCR kit, 수퍼바이오 사)를 사용하였고, 프라이머(primer)와 반응 조건은 하기 표 7에 나타내었다. 올 인 원 역전사 중합 반응 키트의 메뉴얼에 따라 실험을 진행하였고, 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 물질인 알파 비사보롤(α-bisabolol)을 대조군으로 사용하였다. 그 실험 결과는 표 8에 나타내었다.

iNOS 프라이머?BR/>	sense	5'-CAGTTCTGCGCCTTTGCTCAT-3'(서열목록 1)
	antisense	5'-GGTGGTGCGGCTGGACTTT-3'(서열목록 2)
	반응조건	50℃에서 30분간 역전사 후 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 30초, 60℃ 30초, 72℃ 1분간 32cycle로 PCR 반응
COX 2 프라이머	sense	5'-CTGAAGCCCACCCCAAAC-3'(서열목록 3)
	antisense	5'-AACCCAGGTCCTCGCTTATG-3'(서열목록 4)
	반응조건	50℃에서 30분간 역전사 후 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 30초, 55℃ 30초, 72℃ 1분간 32 cycle로 중합 반응
Actin 프라이머	sense	5'-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3'(서열목록 5)
	antisense	5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGTC-3'(서열목록 6)
	반응조건	50℃에서 30분간 역전사 후 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 1분, 62℃ 1분, 72℃ 1분간 22 cycle로 중합 반응

노르베르게닌의 iNOS 및 COX 2 유전자 발현 저해율

시료	농도(ug/ml)	iNOS(%)	COX2(%)
LPS +노르베르게닌	1.0ug/ml	8.8	12.6
	10ug/ml	21.6	23.5
	20ug/ml	43.7	36.1
	40ug/ml	51.3	48.4
LPS +α-bisabolol	1.0ug/ml	4.7	8.3
	10ug/ml	18.5	13.6
	20ug/ml	27.2	34.3
	40ug/ml	34.2	43.7

실험예 4. PGE ₂ , IL-6, IL-8 생성 억제 효과

사람 섬유아세포를 6웰 배양판에 1 x 10⁵세포의 밀도로 접종하여 24시간 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. H₂O₂ 500uM을 웰에 처리하여 24시간 자극을 준 후 시료를 농도별로 처리하여 48시간 반응시키고 배양액을 수거하여 ELISA 분석을 실시하였고, 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 물질인 알파 비사보롤(α-bisaborol)을 대조군으로 사용하였다. PGE₂는 어세이 디자인(Assay Design)사의 키트를, IL-6, IL-8는 엔도젠(Endogen)사의 키트를 사용하였고, 각 회사의 매뉴얼에 명기된 방법에 따라 실험하였다. 대조군은 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 물질인 알파 비사보롤(α-bisabolol)을 사용하였다.

PGE₂, IL-6, IL-8 의 생성량 억제 효과는 하기 수학식 2의 계산식에 의해 구하였으며, 그 실험 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

노르베르게닌의 PGE₂, IL-6, IL-8 생성 억제 효과

시료	농도(ug/ml)	PGE₂		IL-6		IL-8
시료	농도(ug/ml)	(pg/ml)	(%)	(pg/ml)	(%)	(pg/ml)	(%)
H₂O₂ +노르베르게닌	1.0ug/ml	304	17.08	225	50	273	30
	10ug/ml	257	36.7	197	61.67	254	37.9
	20ug/ml	227	49.1	159	77.5	219	52.5
	40ug/ml	198	61.25	142	84.58	183	67.5
H₂O₂ +α-bisabolol	1.0ug/ml	329	6.7	238	44.58	251	39.2
	10ug/ml	288	23.75	205	58.3	211	55.8
	20ug/ml	254	37.9	174	71.25	194	62.9
	40ug/ml	213	55	163	75.83	176	70.4

실험예 5. 항염증 평가

상기 참고예 1 및 참고예 2 에서의 제형예 1, 제형예 2와 비교제형예 1,비교제형예2에 대하여 항염증 효과에 관한 실험을 다음과 같이 측정 하였다.

마우스 좌측 귀를 대조부위, 우측 귀를 시험부위로 하여 시료를 적용 전 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고 시료 20㎕를 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하고 마지막 도포 1시간 후에 좌측 귀에 에탄올을, 우측 귀에는 아라키돈산(Arachidonic acid)을 2㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의 부종(ear edema)정도를 마이크로미터로 양쪽 귀를 3회씩 반복 측정하였다.

항염 효과는 아라키돈산(Arachidonic acid) 처리군을 기준으로 부종억제 정도로 판정하였으며 억제 효과는 하기 수학식 3의 계산식에 의해 구하였으며, 그 실험 결과를 표 10에 나타내었다.

국소적용에 의한 귀두께 및 염증 억제율

	시료	농도(%)	용매	귀두께(㎛)		억제율(%)
	시료	농도(%)	용매	시료처리전	시료처리후	억제율(%)
	아라키돈산	-	에탄올	299	551	-
	인도메타신 (Indomethacin)	1	에탄올	284	421	45.6
1	제형예1	100	에탄올	301	487	26.2
2	비교 제형예1	100	에탄올	284	505	12.4
3	제형예2	100	에탄올	287	464	29.8
4	비교 제형예2	100	에탄올	283	519	10.7

노르베르게닌(실시예 1)이 첨가된 화장료 제형은 첨가되지 않은 비교제형에서 나타나지 않는 뛰어난 항염증 효과를 보였다.

실험예 6. 피부 자극 완화 실험

상기 참고예 1 및 참고예 2 에서의 제형예 1, 제형예 2와 비교 제형예 1, 비교 제형예 2에 대하여 항염증 효과에 관한 실험을 다음과 같이 측정 하였다.

제형 및 소디움라우릴설페이트 0.08% 수용액을 건강한 성인 남, 여 50명을 대상으로 등 부위에 각 시료의 일정량(0.2g)을 24시간 첩포한 후 핀챔버를 제거하고 4시간 경과한 다음 육안으로 피부상태 변화를 판독하여 그 실험 결과를 표 11에 나타내었고, 자극도는 수학식 4의 계산식을 통해 구하였다.

피부 자극성 시험결과

시 료	피시험자수	판정결과				자극도
시 료	피시험자수	++	+	+-	-	자극도
소디움라우릴설페이트0.08%	50	2	16	29	3	67
제형예1 + 소디움라우릴설페이트0.08%	50	1	9	19	21	38
비교 제형예1 + 소디움라우릴설페이트0.08%	50	2	15	28	5	64
제형예2 + 소디움라우릴설페이트0.08%	50	0	10	16	24	36
비교 제형예2 + 소디움라우릴설페이트0.08%	50	2	13	27	8	59
※ 판정기준 - ; 홍반이나 특이한 현상 없음 +- ; 주위보다 약간 붉어짐 + ; 주위보다 현저히 붉어짐 ++ ; 주이보다 심하게 붉어지고 부풀어 오름

노르베르게닌(실시예 1)이 첨가된 화장료 제형은 첨가되지 않은 비교 제형예에서 나타나는 자극을 완화시키는 효과를 보였다.

제제예 1. 친수성 연고제의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 노르베르게닌	9.00
백색 바세린	36.00
스테아릴 알콜	31.00
에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트	미량
프로필렌 글리콜	19.00
라우릴 황산 나트륨	2.40
프로필 p-옥시벤조에이트	미량
계	100.00

제제예 2. 유연화장수( 스킨 )의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 노르베르게닌	0.1
1,3-부틸렌글리콜	2.00
글리세린	3.00
올레일알코올	2.00
폴리솔베이트 20	1.00
에탄올	6.00
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 3. 밀크로션의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 노르베르게닌	0.1
1,3-부틸렌글리콜	4.00
글리세린	3.00
올레일알코올	0.05
폴리솔베이트 20	1.00
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 4. 영양 크림의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 노르베르게닌	0.1
글리세린	5.00
트리에탄올아민	0.50
토코페릴 아세테이트	1.00
유동파라핀	5.00
스쿠알란	5.00
마카다미아너트 오일	15.00
폴리솔베이트 60	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00
카르복실비닐포리머	0.20
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 5. 맛사지 크림의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 노르베르게닌	0.1
바세린	5.00
유동파라핀	30.00
밀납	3.00
폴리솔베이트 60	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00
1,3-부틸렌글리콜	5.00
글리세린	5.00
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

상술한 바와 같이, 본 발명은 iNOS의 활성을 저해하고 iNOS 및 COX-2 유전자의 발현을 억제하며 PGE2, IL-6 및 IL-8의 생성을 억제하여 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 포함하는 피부외용제 조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것으 로, 본 발명의 노르베르게닌을 함유하는 염증 및 알레르기의 치료 및 개선용 피부외용제 또는 화장품으로 사용할 수 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 유효성분으로 함유하는 염증 및 알레르기의 예방 및 치료용 피부외용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 노르베르게닌은 백량금(Ardisia crenata), 자금우(Ardisia japonica), 예덕나무(Mallotus japonicus), 노루풀(Astilbe chinensis Maxim) 또는 암백채(Bergenia crassifolia)로부터 분리됨을 특징으로 하는 피부외용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 노르베르게닌은 조성물 총중량에 대하여 0.01~10 % 중량 백분율로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부외용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형인 피부외용 약학조성물.
백량금(Ardisia crenata)으로부터 분리된 항염 및 항자극 활성을 갖는 노르베르게닌을 유효성분으로 함유하는 피부염증 및 피부알레르기 개선용 화장료 조성물.
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