JP4092689B2 - β−アミラーゼの抽出方法 - Google Patents
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Description
されている(JP63079590)。
D.E.ブリッグス,Barley,チャップマン&ホール,ロンドン,1978年。 クック,Barley and Malt,アカデミックプレス,ロンドン,1962年。 J.R.A.ポロック,Brewing Science,アカデミックプレス,ロンドン,1979年。
くは大麦のβ−アミラーゼを抽出するために使用される。発芽していない穀粒は、β−アミラーゼ以外の酵素を多量に含まないので、このような穀粒からβ−アミラーゼを抽出することは価値がある。酵素は、脱穀されていない穀粒からも抽出され得るが、好ましくは脱穀、製粉、粉砕又は研磨された穀粒から抽出される。ライ麦及び大麦を脱穀することが望ましい。最良の結果は、脱穀した大麦の穀粒を抽出することによって得られる。
エンザイマー ゲーエムベーハー(Rohm Enzymer GmbH)及びノボ ノルディスク(Novo Nordisk)社製)は、β−アミラーゼの収率を改善した。セルラーゼ、ヘミセルラーゼ及びβ−グルカナーゼ活性は、例えば、ノボ社の実用生物工学手引き書,1986年に記載されている。
し600nKat/mLのβ−キシロシダーゼ、約1700ないし2000nKat/mLのアセチルエステラーゼ、約700ないし1400U/mLのRBBキシラナーゼ及び約1900ないし2100U/mLのDNSキシラナーゼを含む。非常に良好な結果は、ローム エンザイム ゲーエムベーハー(Rohm Enzyme GmbH)社製のセルラーゼを使用しても達成され、そしてそれは、商標名ロハラーゼセプ(登録商標:Rohalase)として売られている。配合物は、トリコデルマレーセイ(Trichoderma reesei)菌株から誘導され、そしてそれは多量のβ−1,4−エンドグルカナーゼ活性(少なくとも4700CU/g)及びキシラナーゼ(少なくとも3000XylH/g)及び、少量のセロビオヒドロラーゼ活性を含む。それは、β−1,3−グルカナーゼ活性、とりわけラミナリナーゼも含む。上記酵素配合物を使用する場合、セルラーゼの適当量は、穀物の重量の、少なくとも0.015%、好ましくは、少なくとも0.020%、例えば、0.018ないし0.040%及び特には、0.024ないし0.030%である。
穀物からのβ−アミラーゼの総量を決定する前に、いかなる殻も取り除き、乾燥して微細な穀粉になる場合には、分析される穀物を製粉し、そしてその10gを100mL三角ボトル中に入れる。0.5%(重量/体積)亜硫酸ナトリウム溶液100mLを添加し、その物質を、適当に混合した。混合物は、ボトル内に24時間放置されるが、それは時々、振とうされる。この後、それを適当に混合し、薄い濾紙(MW640W)を通して、濾過した。濾液を、蒸留水を用いて1:50の比で希釈し、その活性を下記の方法によって決定した。この酵素検定は、下記の実施例において、抽出溶液のβ−アミラーゼ含有量を決定するため等にも使用される。
活性=(V0−V1)×23×K/100 DP°/mL
V0=0−試料での滴定による消費量(mL)
V1=試料での滴定による消費量(mL)
K=希釈率
から計算した。
表1:セルラーゼなしでの抽出
Claims (17)
- 穀物を、セルラーゼの存在下において水性媒体中で抽出してβ−アミラーゼを含む抽出物を得、続いて前記媒体から前記β−アミラーゼを回収することを特徴とするβ−アミラーゼを抽出する方法。
- β−アミラーゼが、大麦、小麦又はライ麦から抽出されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- β−アミラーゼが、脱穀した大麦から抽出されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- β−アミラーゼが、脱穀、製粉、粉砕、研磨及びそれらの組み合わせから選択された方法によって、処理された穀物の穀粒から抽出されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 抽出が、還元条件中で実施されることを特徴とする請求項1ないし4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記還元条件が、穀粒の構造タンパク質に結合しているβ−アミラーゼを解離することが可能な還元活性を与えるように適合されていることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 前記還元条件が、SO2を含む水によって与えられることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 脱穀した大麦が、5:8ないし2:3(脱穀した大麦:SO2を含む水)の比でSO2を含む水で抽出されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 抽出が、25ないし33℃、好ましくは29ないし31℃の温度において実施されることを特徴とする前記請求項1ないし8のいずれか一項に記載の方法。
- 抽出時間が48ないし66時間、好ましくは55ないし62時間であることを特徴とする前記請求項1ないし9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記セルラーゼがセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、及び/又はβ−グルカナーゼ活性を有する酵素配合物を含むことを特徴とする請求項1記載の方法。
- セルラーゼが、糸状菌のセルラーゼからなることを特徴とする前記請求項1ないし11のいずれか一項に記載の方法。
- トリコデルマ糸状菌のセルラーゼが使用されることを特徴とする前記請求項1ないし12のいずれか一項に記載の方法。
- セルラーゼが、フミコラ、フサリウム、ミセリオプトラ(Myceliopthora)、アスペルギルス、ペニシリウム及びトリコデルマからなる群から選択された属のセルラーゼ又は該セルラーゼの組み合わせを含むことを特徴とする前記請求項1ないし13のいずれか一項に記載の方法。
- β−アミラーゼが、製粉された穀粒から抽出されることを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。
- 前記回収したβ−アミラーゼが、精製、濃縮及びそれらの組み合わせから選択された処理法によって処理されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 穀物からのβ−アミラーゼの抽出におけるセルラーゼの使用。
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