JPS6379590A - β−アミラ−ゼを製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ■　産業上の利用分野 本発明は、小麦粉又はそれから分別した未変性の生グル
テン区分をそのまま又は分散させた上、プロテアーゼを
作用させ又はさせないでそのまま、もしくは更に精製す
るなどにより、液体又は粉末状のβ−アミラーゼを製造
することにある。

■　従来の技術及びその問題点 現在、α−アミラーゼを含まないβ−アミラーゼの酵素
剤として市販されているものは、大豆分離蛋白質製造時
の廃液を限外濾過濃縮した後、そのままもしくは塩析し
て精製し、これを液体又は粉末として製品化したものが
殆んどである。

しかし、上記廃液中のβ−アミラーゼカ価（力価測定法
については末尾記載の注を参照されたい）は２０単位／
　ｗｅ程度であり、これを原料として高力価製品（通常
、２０００単位／）程度以上のものをいう）を製造する
には力価がひくすぎて膨大なｒ過面積を有する限外濃縮
機が必要であり、製造設備及びランニングコストが高い
等の問題点があった。

■　問題点を解決するための手段 本発明者等は、小麦粉を分別して得られる小麦グルテン
区分が高力価のβ−アミラーゼ活性を有すること及び小
麦粉にプロテアーゼを作用させるとβ−アミラーゼ力価
が約２倍に上昇することを発見した。このことは従来全
く知られていなかった新しい事実である。

そこで、この事実に基き、小麦グルテンをｐＨ３，８〜
７．８の範囲で分散後そのまま粉末化するか、又は生グ
ルテンもしくは小麦粉そのものをプロテアーゼで処理し
て得られる水可溶部をそのままあるいは更に精製する等
、鋭意工夫して本発明を完成させたものである。

本発明で採用する小麦粉は、格別なものでなく、グルテ
ン含艮、小麦粉の市価などにより適宜選択される。また
、ここでいう未変性グルテンとは、加熱変性をうけてい
ないものであって、Ｉ）Ｈがおよそ４以下又は８以上に
なるような処理を受けていないものをいう。

β−アミラーゼが失活しない安定領域がｐＨおよそ３．
８〜７．８であるから以後の処理においてもこのｐＨ領
域又は好ましくはｐＨ４，０〜７．５を外れないように
することが肝要である。

第１発明（特許請求の範囲の■に記載の発明を第１発明
、同範囲の■に記載の発明を第２発明、同範囲の■に記
載の発明を第３発明という。以下同じ）から第３発明に
かけて共通にいえることは、未変性グルテンを充分分散
させるか又はβ−アミラーゼの酵素活性が失活しない条
件で加水分解することが大切である、ということである
。充分に分散するためには、グルテンの等電点であるｐ
Ｈ７付近から４〜５．５程度に下げる必要がある。もっ
とも、第２発明、第３発明においては、場合によっては
ｐＨ調整を必要としないときもある。ｐＨ調整のために
は、通常、酢酸、乳酸等の他適宜な緩衝液を加えればよ
い。

未変性グルテンを酸性で分散するとき、亜硫酸水素ナト
リウムの如き亜硫酸塩を加えるとグルテンのＳ−８結合
を切断して分散液の粘度を下げることができるので、そ
れでもって通常の粘度範囲になるまで分散液の固型分濃
度を上げることができ、作業性、経済性を改善すること
ができる。

第１発明ではかかるグルテン分散後そのまま乾燥しても
よいし、又は、更に精製してもよい。精製するには、た
とえば食塩、硫安、リン酸塩の如きを溶解して塩析し、
溶解部分を分取するとか、又は単にかかる分散液のｐＨ
を再び７付近にもどして液部のみを分取するとかによれ
ばよい。このようにして分取されたものは、限外ｆ過已
縮、真空乾燥、噴霧乾燥等の適宜の処理を経て製品化さ
れることとなる。かかる精製法は第２〜３発明において
も同様に採用することができる。

本発明で使用するプロテアーゼは、酸〜中性プロテアー
ゼであればよく、特定なものには限らない。加水分解の
程度についても特に限定はないが分解の程度がひくけれ
ばβ−アミラーゼ力価が余り向上しないし、逆に分解度
が高いと可溶化が進み最終製品に水可溶性ペプタイドが
不純物としてくるＬｌが大きくなる。もっともこの場合
は、可溶区分を分取し限外１過濃縮とか硫安等による塩
析によって精製することにより最終製品のβ−アミラー
ゼ力価をあげることが出来る。しかし精製工程を経ない
ときは、力価向上と可溶化の程度を調べなから適宜に作
用させ可溶化するとよい。最終製品から使用したプロテ
アーゼを除去する必要があるときは、安定域のせまいプ
ロテアーゼを使用し、グルテン分解後、液のｐＨをその
安定域外に変更することによってプロテアーゼのみ不活
性化するなどが考えられる。

第３発明においては、たとえば、小麦粉に２倍以上（好
ましくは５倍）の水を加え、得られた懸濁液に直接プロ
テアーゼを作用させ、小麦粉中のグルテンを充分分解し
てからそのままもしくは逮心分離で水不溶分を除去した
のち、乾燥するか又は更に限外ｆ過濃縮とかε）を安等
による塩析によって精製後乾燥する。

又他の方法としては、たとえば、小麦粉に３倍の水を加
え、酢酸、乳酸等でｐＨ４，５〜４．８とし分散し遠心
公認で水不溶部を除去した後、可溶部を分取し、それを
そのまま乾燥するかあるいは更にプロテアーゼを作用さ
せグルテンを充分分解してからそのままもしくは１過し
たのち乾燥するか又は更に限外ｎ縮とか硫安等による塩
析によって精製後乾燥する。

硫安で処理する場合、硫安濃度を段階的に変えて沈でん
物を分取し精製度合をたかめることもできる。

プロテアーゼを作用させるについてはｐＨや温度をどの
ようにするかの他、作用時間中の発酵・腐敗を防止する
ため、低濃度のアルコール、プロピレングリコール等を
加えるとか、食塩その他殺菌性、静菌効果のある物質を
添加することも有用である。

■　作用及び効果 通常市販されている未変性グルテンにはβ−アミラーゼ
活性が殆んどみられないため、従来はグルテンにはβ−
アミラーゼ活性はないと思われていた。しかし、これは
生グルテンを活性グルテン粉末として製品化する工程で
、アンモニア水を加えてｐＨ１０付近にするため酵素が
失活したものであろうと推定される。本発明ではかかる
高ｐＨ処理をうけていない未変性グルテンにはβ−アミ
ラーゼ活性があり、かつ、グルテンを加水分解すればそ
の力価が向上することを発見したのは、先述の通りであ
る。

そして、この現象は、小麦粉中には水溶性タイプのβ−
アミラーゼと小麦グルテンと結合した非水溶性タイプの
β−アミラーゼが存在するのか、又はその他何らかの理
由でグルテンによりβ−アミラーゼ活性が阻害されてい
ることを推察させるものである。従って、単にグルテン
を水で洗ってもアミラーゼ力価は出ない。グルテンを分
散させ、又は加水分解して初めてグルテンにより阻害さ
れていたアミラーゼ活性が顕在化し、力価が向上する。

たとえば、小麦種粒の糊粉層付近から分別されたいわゆ
るマルシー粉（九〇粉、たとえば日清製粉株式会社製の
青銀杏など）に含まれているβ−アミラーゼの力価は約
２００単位／ノであるが、これにプロテアーゼを作用さ
せると約２倍の４００単位／？であったし、この小麦粉
から分別した生グルテンをｐＨ調整して適宜分散させた
後噴霧乾燥したものは、グルテンを分解したわけでもな
く単に分散させただけのものであるにもかかわらず、実
に約１，４００単位／？という高力価を示した。このも
のは不純物は多いが力価が高いのでこのまま糖化用酵素
として利用できるものである。

本発明は、このような未変性グルテンの酸分散液又はプ
ロテアーゼ分解液は従来の活性グルテン及び小麦でん粉
の製造設備をそのまま利用できるのでβ−アミラーゼ酵
素粉末を大量・安価に製造できること及び小麦でん粉も
従来通り分取でき、かつ場合によってはグルテンを再び
回収することもできるという経済的に有利な方法である
。即ち大豆分離蛋白質製造時に副生ずるβ−アミラーゼ
含有液が約２０単位／　ｙｘｌであるのに対し、未変性
グルテンの酸分散液の再破壊（グルテンの再沈でん）に
よるときの液が２８単位／　ｗｅ、未変性グルテンのプ
ロテアーゼ処理液が約４６０単位／　ｍｌ　、小麦粉に
加水してプロテアーゼ処理後遠沈による液が８０単位／
　ｍｌ等の如く、本発明によるものが大豆起源より高濃
度の（のかえられるから、はるかにその後の精製が容易
・低部となる。

以下実施例をあげ本発明の内容を詳述する。

実施例１ 日清製粉株式会社製の小麦粉青銀杏５００　ｋｑに水４
００１を加え、ニーターで混線しドウを作り３０分間放
置後水洗機に移し、水４，０ＯＯ１で水洗し生グルテン
２５９ｋｇとでん粉濃度約６．８％の粗でん粉乳的３，
７００１を得た。次に水５２０１に酢酸６．７４を加え
、生グルテン２５９ｋｑを投入しホモゲナイザーで分散
した後直ちに噴霧乾燥機で乾燥しβ−アミラーゼ活性を
有するグルテン粉末（ｐＨ４，８、β−アミラーゼ力価
１，４００単位／Ｐ）８１．５＆りを得た。

実施例２ 実施例１と同様に処理して得たグルテン分散液７８５＆
ｇに食塩７．８５　ｋｇ、リン酸２ナトリウム３．９　
ｋｇを加えて分散状態を破壊した。次にこれを遠心分離
して液部を分取し、更にグーソー上２５＆りを加えて濾
過し清澄液（β−アミラーゼ力価２８単位／ｚｌ）４９
０１１を得、噴霧乾燥してβ−アミラーゼ粉末（β−ア
ミラーゼカ価１，４００単位／７）２３．８に９を得た
。

実施例３ 実施例２と同様に処理して得た清澄液４９０１を日東電
気工業株式会社製限外ｒ過濃縮膜ＮＴＵ３５２０で１０
Ｏｌ迄濃縮し、濃縮液を濾過後ｒ液を噴霧乾燥してβ−
アミラーゼ粉末（β−アミラーゼ力価３，５００単位／
Ｐ）８．２に９を得た。

実施例４ 実施例１と同様に処理して得た生グルテン２５９に９に
、オリエンラーゼ３ＯＮ（上田化学工業株式会社製中性
プロテアーゼ）　０．６５ｋｇを入れ、４０℃で５時間
反応させて分解液を得、これを真空乾燥してβ−アミラ
ーゼ活性を有する粉末（β−アミラーゼ力価１，４００
単位／））を８０に９得た。

実施例５ 実施例１と同様に処理して得た生グルテン２Ｂ９ｋｑに
、オリエンラーゼ３ＯＮ（上田化学工業株式会社製中性
プロテアーゼ）　０．６５ｋｇを入れ、４０°Ｃで５時
間反応させて分解液を得、次にグーソー上１５＃を加え
て濾過し清澄液（β−アミラーゼ力価４６０単位／ｇ／
）　　１３０１を得、これを噴霧乾燥してβ−アミラー
ゼ粉末（ｐＨ６，２、β−アミラーゼ力価２，０００単
位／ｉＰ）　２９．４ｋｇを得た。

実施例６ 実施例１と同様に処理して得た生グルテン２５９に９に
、オリエンラーゼ３ＯＮ（上田化学工業株式会社製中性
プロテアーゼ）　０．６５に９を入れ、４０°Ｃで５時
間反応させて分解液を得、次にグーソー上１５ｋ（ｊを
加えて濾過し清澄液（β−アミラーゼ力価４６０単位／
Ｍｔ）１３０１を得、これを日東電気工業株式会社製限
外濾過濃縮膜ＮＴＵ３５２０で３ｏｌ迄濃縮し、濃縮液
をＣ過後Ｐ液を噴霧乾燥してβ−アミラーゼ粉末（β−
アミラーゼ力価４，０００単位／？）１２．８　ｋｇを
得た。

実施例７ 日清製粉株式会社製の小麦粉Ｖ！？銀杏５００　ｋｇに
水２，５００１加え、オリエンラーゼ３ＯＮ（上田化学
工業株式会社製中性プロテアーゼ）０．６５にりを入れ
４０°Ｃで５時間反応後遠心分離機で不溶部１，２０１
ｑと液部１，８００１を得た、液部は更にグーソー上９
０に９加え濾過して清澄液（β−アミラーゼ力価８０単
位／ｍ１）１．６５０１とし、これを日東電気工業株式
会社製限外濾過濃縮膜ＮＴＵ３５２０で３０ｏｌ迄濃縮
し、濃縮液を再度ｒ過後ｆ液を噴霧乾燥してβ−アミラ
ーゼ粉末（β−アミラーゼ力価３．８００単位／？）　
３４．７に９を得た。

一方、遠心分離で得た不溶部に水４，５００　ｇを加え
、ノズルセパレーターで澱粉乳を分別し以下常法に従っ
て乾燥した所、小麦でん粉２７０　ｋｑを得た。

（注）β−アミラーゼ力価測定法 ２％可溶性でん粉 参考：１単位とは、酵素１グラム当り １分間にブドー糖として１■生 成する力価を示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）小麦粉から分別された未変性のグルテンを、それ
   に含有されているβ−アミラーゼの酵素活性が失活しな
   い範囲においてｐＨを調整することにより分散させ、必
   要に応じてこれをそのまま又は水溶性区分のみを分取す
   ることを特徴とするβ−アミラーゼを製造する方法。
2. （２）小麦粉から分別された未変性のグルテンを、必要
   に応じてそれに含有されているβ−アミラーゼの酵素活
   性が失活しない範囲においてｐＨを調整することにより
   分散させたのち、プロテアーゼを作用させることを特徴
   とするβ−アミラーゼを製造する方法。
3. （３）小麦粉に加水して得られる懸濁液を、それに含有
   されているβ−アミラーゼの酵素活性が失活しない範囲
   においてｐＨを調整して小麦粉中のグルテンを分散させ
   たのち、これを遠心分離により沈殿物を除去するか又は
   しないで、必要に応じてプロテアーゼを作用させること
   を特徴とするβ−アミラーゼの製造法。