JP4548339B2 - 高グルタミン・グルタミン酸含有ポリペプチド混合物及びその製造法 - Google Patents
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Description
subutilis由来のアルカリプロテアーゼであるビオブラーゼなどを用いることが出来る。
即ち、第1工程において、疎水性アミノ酸の豊富な未分解の高分子画分を沈殿として除去することが出来る。この未分解高分子画分の沈殿除去は酸性pH調節及び/又はエタノールの添加によって行うことが出来る。
このようにすると未分解の疎水性高分子ポリペプチドは沈殿するが、グルタミン酸の豊富な高Glx含有ポリペプチドは溶液中に残るため、両者を分別できる。
沈殿の程度は用いる蛋白原料(例えば分離大豆蛋白、濃縮大豆蛋白、豆乳、脱脂大豆など)により異なり、大豆蛋白の割合が低くなるほど沈殿度が悪くなるため、この場合はさらにエタノール添加をすることが好ましい。
G−50などを用いることが出来る。エタノールによって沈殿した高Glx含有ポリペプチドはエタノールを蒸散するなどして除去した後、該高Glx含有ポリペプチドに含まれる分子量の異なるペプチドをゲル濾過によって分画した場合分子量が6〜13kDaでGlxの含量が37〜39mol%、アスパラギン酸・アスパラギン(Asx)の含量が15.4〜16.2mol%である高Glx含有ポリペプチド混合物とすることが出来る。分子量の大きい画分ほどGlxを多く含み、そのGlx含量は39mol%まで上昇させることができる。なお、透析による分画では、高分子量画分(内液)と低分子量画分(外液)のGlx含量は殆ど同じで、ゲル濾過のような効果は認められない。
[実施例1]
分離大豆蛋白質(SPI)(不二製油(株)製「フジプロ−R」)300gに脱イオン水を加えて31とし、5%アンモニア溶液でpH9に調整した後ビオブラーゼ6gを加え、攪拌しながら50℃恒温槽中、同アンモニア溶液でpH9に調節しながら20時間インキュベートした。遠心分離して得られた上清をロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮した後、凍結乾燥し、241g(収量=80.1%)のSPI−ビオブラーゼ分解物を得た。
分離大豆蛋白質200gに脱イオン水を加えて2lとし、アンモニア溶液でpHを9にした後、ビオブラーゼ4gを加え、50℃で20時間インキュベートした。分解液を減圧濃縮により1lまで濃縮した後、酢酸を加えてpHを5に調節して氷冷し、生じた沈殿を遠心分離によって除去した。先ず、得られた上清に同容量のエタノールを加えて冷却し、生じた沈殿をSPIからのpH5/0〜50%EtOH−Ppt画分とし遠心分離し、次いで上清に70%濃度になるまでエタノールを加え、生じた沈殿をSPIからのpH5/50〜70%EtOH−Ppt画分として分離した。脱イオン水に溶解後、凍結乾燥した結果18.9g〔収量=9.5%〕のpH5/0〜50%EtOH−Ppt画分と47.4g(収量=23.7%)のpH5/50〜70%EtOH−Ppt画分が得られ、表1に示すように、いずれもLysとArgを多く含む高Glx含有ポリペプチド混合物であった。
ヘキサン脱脂大豆粉末300gに脱イオン水を加えホモゲナイズし(約31)、5%アンモニア溶液でpH9に調節した後、3gビオブラーゼを加え、50℃で20時間分解した。遠心濾過して得られた濾液を減圧濃縮した後、凍結乾燥し188gの脱脂大豆−ビオブラーゼ分解物を得た。10gの分解物に脱イオンス水100mlを加え、酢酸にてpHを5に調節して冷却した後、生じた沈殿を遠心分離によって除去した。得られた上清に同容量のエタノールを加え、生じた沈殿を脱脂大豆からのpH5/0〜50%EtOH−Ppt画分とし、さらに70%濃度までエタノールを加え、生じた沈殿を脱脂大豆からのpH5/50〜70%EtOH−Ppt画分として分離した。
Claims (3)
- 大豆蛋白原料をプロテアーゼで処理する際、pH7.5〜10のアルカリ域を保持しながら加水分解し、加水分解後の溶液を、pH3.5〜5.5の酸性pH調節及び/又は、エタノール濃度が50%以下になるようにエタノール添加することにより、疎水性アミノ酸の豊富な未分解の高分子画分を沈殿として除去する第1工程、残りの溶液にエタノール濃度が70〜80%となるようにエタノールを添加して沈殿画分を得る第2工程を経て、該沈殿画分を乾燥することを特徴とする高グルタミン・グルタミン酸(Glx)含有ポリペプチド混合物の製造法。
- プロテアーゼ処理が、基質特異性の低いプロテアーゼで加水分解する請求項1の製造法。
- 第2工程の後にゲル濾過により低分子ペプチドを除去する請求項1又は請求項2の製造法。
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