JP2022513776A - インスリン受容体結合親和性が低下したインスリンアナログ - Google Patents

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Abstract

親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログが、本明細書において提供され、インスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。

Description

親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログが、本明細書において提供され、インスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。
世界中で４億超の人々が１型または２型の真性糖尿病を患っている。１型糖尿病は、インスリン代替で処置される。１型糖尿病とは対照的に、２型糖尿病では、基本的にインスリンの欠乏はないが、多くの症例では、特に進行期では、２型糖尿病患者はインスリンで処置される。
健常なヒトでは、膵臓によるインスリンの放出は、血液グルコースの濃度に厳密に結びついている。例えば食後に生じる血液グルコースレベルの上昇は、インスリン分泌の対応する増大によって迅速に補償される。絶食状態では、血漿インスリンレベルは、インスリン感受性臓器および組織のグルコースによる連続供給を保証し、かつ夜間の肝グルコース生産を低く維持するのに十分である基礎値まで低くなる。多くの場合、外因性による、大部分はインスリンの皮下投与による、内因性インスリン分泌の補充を用いても、上記の血液グルコースに関する生理学的調節の特質が得られることはない。上下への血液グルコースの逸脱が起こる場合があり、このようなことは最も重度の形態では生命を脅かすおそれがある。このことから、糖尿病の改善された療法とは、血液グルコースを生理学的範囲内にできる限り近づけて維持することを第一に目指すことである、ということが導かれることになる。
ヒトインスリンは、５１個のアミノ酸のポリペプチドであり、これらアミノ酸は２つのアミノ酸鎖：２１個のアミノ酸を有するＡ鎖および３０個のアミノ酸を有するＢ鎖に分かれている。これらの鎖は、２つのジスルフィド架橋によって互いに連結されている。第３のジスルフィド架橋が、Ａ鎖の６位と１１位のシステイン間に存在する。真性糖尿病の処置のために現在使用されている一部の製品は、インスリンアナログ、すなわち、その配列が、Ａ鎖におけるおよび／またはＢ鎖における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換によってヒトインスリンの配列とは異なる、インスリンバリアントである。
他の多くのペプチドホルモンと同様に、ヒトインスリンはｉｎ ｖｉｖｏで短半減期を有する。したがって、これは頻繁に投与され、患者にとっては不快感に関連する。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで向上した半減期、したがって、延長された作用持続時間を有する、インスリンアナログが所望されている。
現在、インスリンの半減期を引き延ばすための様々なアプローチがある。
アプローチの一つは、低ｐＨでは製剤が可溶性であること、しかし生理学的ｐＨでは天然のインスリンと比べて溶解度が低下していることに関する開発に基づいている。インスリンアナログの等電点は、Ｂ鎖のＣ末端に２個のアルギニンを付加することによって上昇する。Ａ２１でのグリシン置換と組み合わせて２個のアルギニンを付加すると（インスリングラルギン）、長期の作用の持続時間を有するインスリンが提供される。インスリンアナログは、皮下部位での注射の際に亜鉛の存在下で沈殿し、ゆっくりと溶解し、その結果、インスリングラルギンの持続的な存在がもたらされる。
別のアプローチでは、長鎖脂肪酸基がインスリンのＬｙｓＢ２９のイプシロンアミノ基にコンジュゲートしている。この基の存在により、非共有結合の可逆結合によってインスリンが血清アルブミンに付着することが可能になる。結果として、このインスリンアナログは、ヒトインスリンと比較して著明に延長された時間作用プロファイルを有する（例えば、非特許文献１；または特許文献１を参照されたい）
特許文献２では、ヒトインスリンと比較して、インスリン受容体媒介クリアランス速度が低下したインスリンアナログが開示されている。
特許文献３では、ヒトインスリンと比較して、インスリン受容体媒介クリアランス速度が低下したインスリンアナログが開示されている。
特許文献４では、プロテアーゼ安定化インスリンアナログが開示されている。
薬の作用の持続時間を増大するためには、半減期が重要な役割を演じる。半減期（ｔ１／２）は、クリアランスで割った分布容積に比例する。ヒトインスリンの場合、クリアランスは、インスリン受容体への結合、内部移行およびその後の分解によって主に決定される。
したがって、インスリン受容体結合活性の低下、および、したがって受容体媒介クリアランス速度の低下を有するがｉｎ ｖｉｖｏで血液グルコースレベルを十分に低減させることを可能にするシグナル伝達活性、を有するインスリンアナログが求められている。
ＷＯ２００９／１１５４６９ ＷＯ２０１６／００６９６３ ＷＯ２０１８／０５６７６４ ＷＯ２００８／０３４８８１
Ｍａｙｅｒら、Ｉｎｃ．Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐｔ Ｓｃｉ）８８：６８７～７１３頁、２００７
高いシグナル伝達をなおも維持しつつ、結合親和性が極めて低い（したがって、クリアランス速度がより低い）、長時間作用型インスリンアナログが、本明細書において提供される。
驚くべきことに、本発明の根底にある研究の文脈において、疎水性アミノ酸（例えばロイシン、イソロイシン、バリン、アラニンおよびトリプトファン）でのヒトインスリンのＢ１６位および／またはＢ２５位の置換によってインスリン受容体結合活性の減少がもたらさせること（親インスリンのインスリン受容体結合活性と比較して、実施例を参照されたい）が示された。インスリン受容体結合活性に及ぼす最も強力な効果が、分岐鎖アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）による置換に対して観察された。興味深いことに、これらの位置で（例えばＢ２５位で）かかる置換を有するインスリンアナログは、インスリン受容体アイソフォームＢ（ＩＲ－Ｂ）結合親和性に基づく予想よりも、シグナル伝達において、６倍までの高まりを示した（実施例を参照されたい）。さらに、試験された一部のインスリンアナログは、α－キモトリプシン、カテプシンＤおよびインスリン分解酵素に対してタンパク質分解安定性の向上を示した（実施例を参照されたい）。
したがって、親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログが、本明細書において提供され、インスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。一部の実施形態では、親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログが提供され、インスリンアナログは、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。
本明細書で使用される「インスリンアナログ」という表現は、天然に存在するインスリン中に存在する少なくとも１個のアミノ酸残基を欠失させるおよび／または置換することにより、および／または少なくとも１個のアミノ酸残基を付加することにより、天然に存在するインスリン（本明細書では「親インスリン」、例えばヒトインスリンとも呼ばれる）の構造から形式上誘導可能な分子構造を有するペプチドを指す。付加および／または交換されたアミノ酸残基は、コード可能アミノ酸残基であっても他の天然に存在する残基であっても純粋に合成的なアミノ酸残基であっても、いずれでもよい。本明細書で言及されるアナログは、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えばヒト対象において、血液グルコースレベルを低減させることができる。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、２つのペプチド鎖、Ａ鎖およびＢ鎖を含む。典型的には、２つの鎖は、システイン残基間のジスルフィド架橋によって連結されている。例えば、一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、３つのジスルフィド架橋を含む：Ａ６位とＡ１１位のシステイン間の１ジスルフィド架橋、Ａ鎖のＡ７位のシステインとＢ鎖のＢ７位のシステインの間の１ジスルフィド架橋、およびＡ鎖のＡ２０位のシステインとＢ鎖のＢ１９位のシステインの間の１ジスルフィド架橋。したがって、本明細書で提供されるインスリンアナログは、Ａ６、Ａ７、Ａ１１、Ａ２０、Ｂ７およびＢ１９の各位にシステイン残基を含む。
本明細書で提供される一部の実施形態では、インスリンアナログは単鎖インスリンである。単鎖インスリンとは、インスリンＢ鎖が、非切断連結ペプチドを介してインスリンＡ鎖と隣接して連結している単一のポリペプチド鎖である。
インスリンの変異、すなわち親インスリンの変異は、鎖、すなわちアナログのＡ鎖またはＢ鎖のいずれか、Ａ－鎖またはＢ－鎖における変異アミノ酸残基の位置（例えば、Ａ１４、Ｂ１６およびＢ２５）、および親インスリンの天然アミノ酸を置換するアミノ酸の３文字コード、を参照しつつ、本明細書では示される。「ｄｅｓＢ３０」という用語は、親インスリンからのＢ３０アミノ酸を欠失するアナログを指す（すなわち、Ｂ３０位のアミノ酸が存在しない）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）ｌｌｅ（Ｂ１６）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは、ヒトインスリンのＡ鎖の１４位（Ａ１４）のアミノ酸残基がグルタミン酸で置換され、Ｂ鎖の１６位（Ｂ１６）のアミノ酸残基がイソロイシンで置換され、Ｂ鎖の３０位のアミノ酸を欠失する（すなわち存在しない）、ヒトインスリンのアナログである。
本明細書で提供されるインスリンアナログは、親インスリンと比べて少なくとも１つの変異（アミノ酸の置換、欠失、または付加）を含む。本明細書で使用される用語「少なくとも１つ」とは、「少なくとも２つ」、「少なくとも３つ」、「少なくとも４つ」、「少なくとも５つ」等などの、１つ、または２つ以上を意味する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、Ｂ鎖に少なくとも１つの変異およびＡ鎖に少なくとも１つの変異を含む。さらなる実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、Ｂ鎖に少なくとも２つの変異およびＡ鎖に少なくとも１つの変異を含む。例えば、インスリンアナログは、Ｂ１６位に置換、Ｂ３０位に欠失およびＡ１４位に置換を含むことができる。あるいは、インスリンアナログは、Ｂ２５位に置換、Ｂ３０位に欠失およびＡ１４位に置換を含むことができる。さらに、インスリンアナログは、Ｂ１６位に置換、Ｂ２５位に置換、Ｂ３０位に欠失およびＡ１４位に置換を含むことができる。
本明細書で提供されるインスリンアナログは、上の変異に加えて変異を含むことができる。一部の実施形態では、変異の数は、ある特定の数を超えない。一部の実施形態では、インスリンアナログは、親インスリンと比べて、１２未満の変異（すなわち、欠失、置換、付加）を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて１０未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて、８未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて、７未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて、６未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて５未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて、４未満の変異を含む。別の実施形態では、アナログは、親インスリンと比べて３未満の変異を含む。
本明細書で使用される「親インスリン」という表現は、天然に存在するインスリン、すなわち、非変異の、野生型インスリンを指す。一部の実施形態では、親インスリンは、哺乳動物のインスリンなどの動物のインスリンである。例えば、親インスリンは、ヒトインスリンであっても、ブタインスリンであっても、またはウシインスリンであってもよい。
一部の実施形態では、親インスリンはヒトインスリンである。ヒトインスリンの配列は当技術分野で良く知られており、実施例のセクションの表１に示されている。ヒトインスリンは、配列番号１に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号２に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、親インスリンはウシインスリンである。ウシインスリンの配列は当技術分野で良く知られている。ウシインスリンは、配列番号８１に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＡＳＶＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号８２に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣ－ＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＡ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、親インスリンはブタインスリンである。ブタインスリンの配列は当技術分野で良く知られている。ブタインスリンは、配列番号８３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号８４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣ ＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＡ）を有するＢ鎖を含む。
ヒト、ウシおよびブタのインスリンは、３つのジスルフィド架橋を含む：Ａ６位とＡ１１位のシステイン間の１ジスルフィド架橋、Ａ鎖のＡ７位のシステインとＢ鎖のＢ７位のシステインの間の１ジスルフィド架橋、およびＡ鎖のＡ２０位のシステインとＢ鎖のＢ１９位のシステインの間の１ジスルフィド架橋。
本明細書で提供されるインスリンアナログは、対応する親インスリンの、例えばヒトインスリンのインスリン受容体結合親和性と比較して、減少しているインスリン受容体結合親和性を有する。
インスリン受容体は、ウシ、ブタまたはヒトのインスリン受容体などの任意の哺乳動物のインスリン受容体である。一部の実施形態では、インスリン受容体は、ヒトインスリン受容体、例えば、ヒトインスリン受容体アイソフォームＡまたはヒトインスリン受容体アイソフォームＢ（実施例のセクションで使用されたもの）である。
有利には、本明細書で提供されるヒトインスリンアナログは、ヒトインスリン受容体へのヒトインスリンの結合親和性と比較して、ヒトインスリン受容体に対して著明に低下した結合親和性を有する（実施例を参照されたい）。したがって、インスリンアナログは、極めて低いクリアランス速度、すなわち、極めて低いインスリン受容体媒介クリアランス速度を有する。
一部の実施形態では、インスリンアナログは、その親インスリンと比較して、対応するインスリン受容体への結合親和性２０％未満を有する、すなわち呈する。別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、その親インスリンと比較して、対応するインスリン受容体への結合親和性１０％未満を有する。別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、その親インスリンと比較して対応するインスリン受容体への結合親和性５％未満、例えば、その親インスリンと比較して結合親和性３％未満、を有する。例えば、本明細書で提供されるインスリンアナログは、その親インスリンと比較して、対応するインスリン受容体への結合親和性０．１％から１０％の間、例えば、結合親和性０．３％から５％の間を有することができる。また、本明細書で提供されるインスリンアナログは、その親インスリンと比較して、対応するインスリン受容体への結合親和性０．５％から３％の間、例えば、結合親和性０．５％から２％の間を有することができる。
インスリン受容体へのインスリンアナログの結合親和性を決定する方法は、当技術分野で良く知られている。例えば、インスリン受容体結合親和性は、インスリン受容体への、［１２５Ｉ］－標識ヒトインスリンなどの［１２５Ｉ］標識親インスリンと（非標識）インスリンアナログとの間の競合的結合の評価に基づいたシンチレーション近接アッセイによって決定することができる。インスリン受容体は、組換えインスリン受容体を過剰発現する細胞の、例えばＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞の膜に存在する。一実施形態では、インスリン受容体結合親和性は、実施例のセクションに記載のように決定される。
天然に存在するインスリンまたはインスリンアナログがインスリン受容体へ結合すると、インスリンシグナル伝達経路を活性化する。インスリン受容体はチロシンキナーゼ活性を有する。インスリンが受容体へ結合すると、チロシン残基上で、受容体の自己リン酸化を刺激するコンフォメーション変化が誘発される。インスリン受容体の自己リン酸化によって、受容体のチロシンキナーゼ活性が、シグナルの伝達に関与する細胞内基質に向けて刺激される。したがって、インスリンアナログによるインスリン受容体の自己リン酸化は、前記アナログによって引き起こされるシグナル伝達の尺度と考えられる。
実施例のセクションの表１にあるインスリンアナログを、自己リン酸化アッセイに供した。興味深いことに、Ｂ１６位およびＢ２５位に脂肪族置換を有するインスリンアナログは、これらのインスリン受容体結合親和性に対して、予想よりも高いインスリン受容体自己リン酸化を引き起こした。したがって、本明細書で提供されるインスリンアナログは、低い結合活性を有し、その結果、受容体媒介クリアランス速度がより低いが、それでもなお比較的高いシグナル伝達を引き起こすことができる。したがって、本明細書で提供されるインスリンアナログは、長時間作用型インスリンとして使用される可能性がある。一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、親インスリン（例えばヒトインスリン）と比べて、インスリン受容体自己リン酸化を１～１０％、例えば２～８％誘導することができる。さらに、一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、親インスリン（例えばヒトインスリン）と比べて、インスリン受容体自己リン酸化を３～７％、例えば５～７％誘導することができる。親インスリンと比べたインスリン受容体の自己リン酸化は、実施例のセクションに記載のように決定することができる。
本明細書で提供されるインスリンアナログを、プロテアーゼ安定性アッセイに供した。表３に示すように、本明細書で提供されるインスリンアナログは、ヒトインスリンと比較して、試験したプロテアーゼの少なくとも一部に向けてより高い安定性を有した。タンパク質分解安定性の向上は、α－キモトリプシン、カテプシンＤおよびインスリン分解酵素（ＩＤＥ）に対して観察された。したがって、本明細書で提供されるインスリンアナログは、典型的には、タンパク質分解安定型インスリンアナログである。したがって、これらは、親インスリンと比べて、プロテアーゼによる分解がより遅い。一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、親インスリンと比較して、α－キモトリプシン、カテプシンＤおよびインスリン分解酵素（ＩＤＥ）による分解に対して安定化されている。
上記のように、インスリンアナログは、親インスリンと比較して、少なくとも１つの変異を含む。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異を含む。したがって、Ｂ１６位のアミノ酸（ヒト、ウシおよびブタのインスリンのチロシン）は、疎水性アミノ酸で置き換えられている。
別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。したがって、Ｂ２５位のアミノ酸（ヒト、ウシおよびブタのインスリンのフェニルアラニン）は、疎水性アミノ酸で置き換えられている。
別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。
疎水性アミノ酸は、任意の疎水性アミノ酸である。例えば、疎水性アミノ酸は、分岐鎖アミノ酸などの脂肪族アミノ酸である。
本明細書で提供されるインスリンアナログの一部の実施形態では、Ｂ１６位および／またはＢ２５位の置換に使用される疎水性アミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、トリプトファン、メチオニン、プロリン、グリシン、フェニルアラニンまたはチロシン（または前述のアミノ酸の誘導体）である。
ヒト、ウシおよびブタのインスリンなどのいくつかの親インスリンは、Ｂ１６位にチロシンを、Ｂ２５位にフェニルアラニンを含む。したがって、親インスリンのＢ１６位のアミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、トリプトファン、メチオニン、プロリン、グリシン、またはフェニルアラニン（または前述のアミノ酸の誘導体）で置換することができる。さらに、親インスリンのＢ２５位のアミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、トリプトファン、メチオニン、プロリン、グリシン、またはチロシン（または前述のアミノ酸の誘導体）で置換することができる。
前述のアミノ酸の誘導体は当技術分野で知られている。
ロイシンの誘導体には、それらに限定されないが、ホモロイシンおよびｔｅｒｔ－ロイシンが含まれる。したがって、Ｂ１６位および／またはＢ２５位のアミノ酸は、ホモロイシンまたはｔｅｒｔ－ロイシンで置換することができる。
バリンの誘導体は、例えば、３－エチルノルバリンである。したがって、Ｂ１６位および／またはＢ２５位のアミノ酸は、３－エチルノルバリンで置換することができる。
グリシンの誘導体には、それらに限定されないが、シクロヘキシルグリシン、シクロプロピルグリシンおよびトリフルオロエチルグリシンが含まれる。
アラニンの誘導体には、それらに限定されないが、ベータ－ｔ－ブチルアラニン、シクロブチル－アラニン、シクロプロピル－アラニンおよびホモ－シクロヘキシルアラニンが含まれる。
一部の実施形態では、Ｂ１６位および／またはＢ２５位の置換に使用される疎水性アミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、またはトリプトファンである。
一部の実施形態では、脂肪族アミノ酸はアラニンではない。したがって、Ｂ１６位および／またはＢ２５位の置換に使用される疎水性アミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン、またはトリプトファンである。
一部の実施形態では、Ｂ１６位および／またはＢ２５位の置換に使用される疎水性アミノ酸は、イソロイシン、バリン、またはロイシンである。
一部の実施形態では、本明細書で言及されるアミノ酸は、Ｌ－アミノ酸（例えば、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－バリン、またはＬ－ロイシン）である。したがって、例えばＢ１６位、Ｂ２５位および／またはＡ１４位の置換に使用されるアミノ酸（またはそれらの誘導体）は、典型的にはＬ－アミノ酸である。
一部の実施形態では、疎水性アミノ酸は脂肪族アミノ酸である。したがって、本明細書で提供されるインスリンアナログは、脂肪族アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異、ならびに脂肪族アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異（ならびに場合により、それらに限定されないが、Ｄｅｓ（Ｂ３０）およびＧｌｕ（Ａ１４）を含むさらなる変異）を含む。
脂肪族アミノ酸は、脂肪族側鎖官能基を含む非極性で疎水性のアミノ酸である。炭化水素鎖上の炭素原子数が増加すると疎水性が高くなる。脂肪族の疎水性の尺度は、Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅスケールによる疎水性指標であり、このスケールは、例えば、Ｋｙｔｅ Ｊ．ら Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．１９８２ １５７（１）：１０５～３２頁によって開示されるように決定することができる。一部の実施形態では、脂肪族アミノ酸とは、疎水性指標（Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅスケールに準拠）が２．０超、例えば３．０超または３．５超を有する脂肪族アミノ酸である。
脂肪族アミノ酸には、それらに限定されないが、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニンおよびグリシンが含まれる。例えば、脂肪族アミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシンおよびグリシンから選択されるアミノ酸、例えば、イソロイシン、バリンおよびロイシンから選択されるアミノ酸である。
イソロイシン、バリンおよびロイシンは分岐鎖アミノ酸（略してＢＣＡＡ）である。したがって、脂肪族アミノ酸は分岐鎖アミノ酸である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、分岐鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異ならびに分岐鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異（ならびに場合により、それらに限定されないが、Ｄｅｓ（Ｂ３０）およびＧｌｕ（Ａ１４）を含むさらなる変異）を含む。
イソロイシン、バリンおよびロイシンなどのアミノ酸であるＢＣＡＡは、非直鎖である脂肪族側鎖を有するアミノ酸である、すなわち、分岐鎖アミノ酸は、分岐（３個以上の炭素原子に結合した中央炭素原子）を伴う脂肪族側鎖を有するアミノ酸である。
分枝鎖アミノ酸は、翻訳中に生合成的にタンパクに組み込まれるアミノ酸、すなわちタンパク質原生のＢＣＡＡであっても、自然にコードされていないかいかなる生物体の遺伝コードにも見いだされないアミノ酸、すなわち非タンパク質原生のＢＣＡＡであっても、よい。例えば、タンパク質原生のＢＣＡＡとは、ロイシン、イソロイシンおよびバリンである。したがって、疎水性／脂肪族アミノ酸である分岐鎖アミノ酸は、ロイシン、イソロイシンまたはバリン（またはロイシン、イソロイシンまたはバリンの誘導体、例えば、上記のロイシンまたはバリンの誘導体）である。
一部の実施形態では、分岐鎖アミノ酸はイソロイシンである。一部の実施形態では、分岐鎖アミノ酸はバリンである。一部の実施形態では、分岐鎖アミノ酸はロイシンである。
上記のＢ１６位の変異および／またはＢ２５位の変異に加えて、本明細書で提供されるインスリンアナログは、親インスリンと比べてさらなる変異を含むことができる。
例えば、インスリンアナログは、Ａ１４位の変異をさらに含むことができる。かかる変異は、プロテアーゼ安定性を高めることが知られている（例えば、ＷＯ２００８／０３４８８１を参照されたい）。一部の実施形態では、Ａ１４位のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されている。一部の実施形態では、Ａ１４位のアミノ酸は、アスパラギン酸（Ａｓｐ）で置換されている。一部の実施形態では、Ａ１４位のアミノ酸は、ヒスチジン（Ｈｉｓ）で置換されている。
さらに、本明細書で提供されるインスリンアナログは、Ｂ３０位の変異を含むことができる。一部の実施形態では、Ｂ３０位の変異は、親インスリンのＢ３０位のトレオニンの欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異とも呼ばれる）。
さらに、本発明のインスリンアナログは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異、および／またはグリシン（Ｇｌｙ）で置換されたＡ２１位の変異をさらに含むことができる。
一実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号２２に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号２４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号４４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号４８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号５０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号５８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号６０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号６４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号６６に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号７０に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号７８に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、配列番号８０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を含む、またはそれからなる。
上にまとめたＢ鎖は、Ｄｅｓ（Ｂ３０）変異を含む。したがって、親インスリンのＢ３０位に存在するアミノ酸（ヒトインスリンのトレオニン、およびブタおよびウシのインスリンのアラニン）を欠失する、すなわち存在しない。しかし、本発明のアナログのＢ鎖はこの変異を含まない、すなわち、３０位にトレオニンを含むことも、想定される。したがって、本発明のインスリンアナログのＢ鎖は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むまたはそれからなることができる：
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫＴ （配列番号８５）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８６）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号８７）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８８）
・ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８９）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９０）
・ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９１）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９２）
・ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９３）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９４）
・ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９５）
・ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９６）
・ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９７）
一実施形態では、本発明のインスリンアナログのＡ鎖は、配列番号１に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＡ鎖は、配列番号４３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を含む、またはそれからなる。
別の実施形態では、本発明のインスリンアナログのＡ鎖は、配列番号４５に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＧ）を含む、またはそれからなる。
典型的には、本発明のインスリンアナログは、上記のＡ－鎖およびＢ－鎖を含む。
例えば、本発明のインスリンアナログは、以下からなる群から選択される：
Ｌｅｕ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン、すなわちＬｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン）、
Ｖａｌ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン、すなわちＶａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン）、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、および
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）。
別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、以下からなる群から選択される：
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン、すなわちＡｓｐ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、および
Ａｓｐ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）。
別の実施形態では、本明細書で提供されるインスリンアナログは、以下からなる群から選択される：
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）、および
Ｈｉｓ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－インスリン（例えばヒトインスリン）。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ１１を参照されたい）。例えば、Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号２１に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号２２に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ１２を参照されたい）。例えば、Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号２３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号２４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ２２を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号４３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号４４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ２４を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号４７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号４８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ２５を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号４９に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＧ）を有するＡ鎖および配列番号５０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ２９を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号５７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号５８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３０を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号５６に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３２を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号６３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３３を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号６５に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＧ）を有するＡ鎖および配列番号６６に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３５を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号６９に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７０に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３８を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号７５に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７６に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ３９を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号７７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７８に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
別の実施形態では、インスリンアナログは、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン）である。このアナログの配列は、例えば、実施例のセクションの表１に示されている（アナログ４０を参照されたい）。例えば、Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンは、配列番号７９に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＧ）を有するＡ鎖および配列番号８０に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖を含む。
インスリンアナログは、適当とみなされる任意の方法によって製造することができる。例えば、インスリンアナログは、組換え法によってまたは固相合成によって製造することができる。
上に本明細書で与えた定義および説明は、必要な変更を加えて以下に適用される。
本明細書で提供されるインスリンアナログのＢ鎖に関連して上に本明細書で定義されるインスリンＢ鎖、すなわちインスリンＢ鎖ペプチドが、本明細書において提供される。したがって、親インスリンのインスリンＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンＢ鎖が、本明細書において提供され、ここで、Ｂ鎖は、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異、および／または、疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む。インスリンＢ鎖は、ｄｅｓ（Ｂ３０）欠失など、上に本明細書に記載のさらなる変異を含むことができる。
また、本明細書で提供されるインスリンアナログのインスリンＡ鎖および／またはインスリンＢ鎖を含むプロインスリンも、本明細書において提供される。Ｂ鎖は、本明細書で提供されるインスリンアナログについて本明細書で上に定義される任意のＢ鎖である。例えば、インスリンＡ鎖およびインスリンＢ鎖を含むプロインスリンが、本明細書において提供され、ここで、前記Ｂ鎖は、親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含み、ここで、変異は、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位にありおよび／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位にある。インスリンＢ鎖は、Ｂ鎖について上に本明細書で記載のさらなる変異を含むことができる。
本明細書で提供されるプロインスリンが含むＡ鎖は、本明細書で提供されるインスリンアナログについて本明細書で上に定義される任意のＡ鎖である。一部の実施形態では、前記プロインスリンのＡ鎖は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異を含む。
インスリンＡ鎖および／またはインスリンＢ鎖に加えて、本明細書で提供されるプロインスリンは、リーダー配列またはＣペプチドなどのさらなるエレメントを含むことができる。一部の実施形態では、プロインスリンは、インスリンＢ鎖とインスリンＡ鎖との間に位置するＣペプチドをさらに含むことができる。Ｃペプチドは、長さ４～９個のアミノ酸などの、長さ４～１０個のアミノ酸を有することができる。配向は以下の通りである（Ｎ末端からＣ末端へ）：Ｂ鎖、Ｃペプチド、Ａ鎖。
本明細書で提供されるインスリンアナログ、インスリンＢ鎖、およびプロインスリンをコードするポリヌクレオチドが、本明細書において提供される。前記ポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドの発現を可能にするプロモーターに作動可能に連結している。一部の実施形態では、プロモーターは、前記ポリヌクレオチドに対して異種である。一部の実施形態では、プロモーターは構成的プロモーターである。別の実施形態では、プロモーターは誘導性プロモーターである。
さらに、本明細書で提供されるインスリンアナログをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが、本明細書において提供される。一部の実施形態では、前記ベクターは発現ベクターである。
本明細書で提供される、インスリンアナログ、インスリンＢ鎖、およびプロインスリンをコードする核酸、ポリヌクレオチド、および／またはベクターを含む宿主細胞が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、エスケリキア属に属する細胞、例えば大腸菌細胞などの細菌細胞である。別の実施形態では、宿主細胞は、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞またはクルイベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）細胞などの酵母細胞である。
本明細書で提供されるインスリンアナログの医薬的に有効な量と医薬的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書において提供される。
本明細書で提供される１つまたはそれ以上のインスリンアナログまたはそれらの医薬組成物の医薬的に有効な量を対象に投与する工程を含む、疾患を処置する方法が、本明細書において提供される。
一部の実施形態では、疾患は、ＩＩ型真性糖尿病などの真性糖尿病である。
医学において使用するためのインスリンアナログまたはそれらの医薬組成物が、本明細書において提供される。
ＩＩ型真性糖尿病などの真性糖尿病の処置に使用するためのインスリンアナログまたはそれらの医薬組成物が、本明細書において提供される。
最終的には、ＩＩ型真性糖尿病などの真性糖尿病の処置のための医薬または薬物の製造のための、本明細書で提供されるインスリンアナログまたはそれらの医薬組成物の使用が、本明細書において提供される。
インスリンアナログ、インスリンＢ鎖、プロインスリン、および使用について、以下の実施形態およびそれぞれの従属性および後方参照によって示される実施形態の組合せによってさらに例示する。上に本明細書で与えた定義および説明は、必要な変更を加えて、以下の実施形態に適用される。
１．親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログであって、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む、インスリンアナログ。
２．親インスリンは、ヒトインスリン、ブタインスリン、またはウシインスリンである、実施形態１のインスリンアナログ。
３．Ｂ１６位および／またはＢ２５位の疎水性アミノ酸は脂肪族アミノ酸である、実施形態１または２のインスリンアナログ。
４．Ｂ１６位および／またはＢ２５位の前記脂肪族アミノ酸は、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される分岐鎖アミノ酸などの、分岐鎖アミノ酸である、実施形態１～３のいずれか１つのインスリンアナログ。
５．前記インスリンアナログは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）からなる群から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異をさらに含む、実施形態１～３のいずれか１つのインスリンアナログ。
６．前記インスリンアナログはＢ３０位の変異をさらに含み、例えば、ここで、Ｂ３０位の変異は親インスリンのＢ３０位のアミノ酸の欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、実施形態１～５のいずれか１つのインスリンアナログ。
７．前記インスリンアナログは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異をさらに含む、実施形態１～６のいずれか１つのインスリンアナログ。
８．前記インスリンは、グリシン（Ｇｌｙ）で置換されたＡ２１位の変異をさらに含む、実施形態１～７のいずれか１つのインスリンアナログ。
９．インスリンアナログのＢ鎖は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、実施形態１～８のいずれか１つのインスリンアナログ：
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫ （配列番号２２）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号４４）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号４８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号５０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号５８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号６０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６４）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６６）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号７０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７６）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号８０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫＴ （配列番号８５）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８６）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号８７）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８９）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９０）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９１）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９２）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９３）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９４）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９５）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９６）、および
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９７）
１０．以下
（ａ）配列番号４３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖
および配列番号４４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、
（ｂ）配列番号４７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖
および配列番号４８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、または
（ｃ）配列番号７７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７８に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖
を含む、実施形態１～９のいずれか１つのインスリンアナログ。
１１．以下からなる群から選択されるインスリンアナログ：
Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、および
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン。
１２．親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンＢ鎖であって、Ｂ鎖は、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異、および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む、インスリンＢ鎖。
１３．親インスリンは、ヒトインスリン、ブタインスリン、またはウシインスリンである、実施形態１２によるインスリンＢ鎖。
１４．Ｂ１６位および／またはＢ２５位の疎水性アミノ酸は脂肪族アミノ酸である、実施形態１２または１３によるインスリンＢ鎖。
１５．前記脂肪族アミノ酸は、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される分岐鎖アミノ酸などの、分岐鎖アミノ酸である、実施形態１２～１４のいずれか１つによるインスリンＢ鎖。
１６．前記インスリンＢ鎖は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異をさらに含む、実施形態１２～１５のいずれか１つによるインスリンＢ鎖。
１７．前記インスリンＢ鎖は、Ｂ３０位の変異をさらに含み、Ｂ３０位の変異は親インスリンのＢ３０位のアミノ酸の欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、実施形態１２～１６のいずれか１つによるインスリンＢ鎖。
１８．インスリンＡ鎖およびインスリンＢ鎖を含むプロインスリンであって、インスリンＢ鎖は、親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含み、Ｂ鎖は、疎水性アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異、および／または疎水性アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む、プロインスリン。
１９．前記プロインスリンのインスリンＡ鎖は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異を含む、実施形態１８のプロインスリン。
２０．親インスリンは、ヒトインスリン、ブタインスリン、またはウシインスリンである、実施形態１８または１９によるプロインスリン。
２１．Ｂ１６位および／またはＢ２５位の疎水性アミノ酸は脂肪族アミノ酸である、実施形態１８～２０のいずれか１つによるプロインスリン。
２２．前記脂肪族アミノ酸は、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される分岐鎖アミノ酸などの、分岐鎖アミノ酸である、実施形態１８～２１のいずれか１つによるプロインスリン。
２３．前記プロインスリンは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異をさらに含む、実施形態１８～２２のいずれか１つによるプロインスリン。
２４．前記プロインスリンは、Ｂ３０位の変異をさらに含み、Ｂ３０位の変異は親インスリンのＢ３０位のアミノ酸の欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、実施形態１８～２３のいずれか１つによるプロインスリン。
２５．実施形態１～１１のいずれか１つのインスリンアナログ、実施形態１２～１７のいずれか１つのインスリンＢ鎖、および／または実施形態１８～２４のいずれか１つのプロインスリンをコードするポリヌクレオチド。
２６．実施形態２５のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
２７．実施形態１～１１のいずれか１つのインスリンアナログ、実施形態１２～１７のいずれか１つのインスリンＢ鎖、実施形態１８～２４のいずれか１つのプロインスリン、実施形態２５のポリヌクレオチド、および／または実施形態２６の発現ベクター
を含む宿主細胞。
２８．実施形態１～１１のいずれか１つに定義される１つまたはそれ以上のインスリンアナログを患者に投与する工程を含む、真性糖尿病を有する患者を処置する方法。
２９．真性糖尿病の処置に使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに定義されるインスリンアナログ。
本明細書に引用されるすべての参考文献は、その開示内容全体および本明細書で特に述べる開示内容に関して、参照によって本明細書に組み入れる。
実施例１：ヒトインスリンおよびインスリンアナログの産生
ヒトインスリンならびにインスリンアナログを、組換え的に産生した。プレプロインスリンをコードするポリヌクレオチドを、Ｇｅｎｅａｒｔ（登録商標）から注文した。設計したポリヌクレオチドを、酵母での発現向けに最適化した。それらを、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）Ｋで機能的な発現と分泌を可能にする古典的な制限クローニングによって発現ベクターに挿入した。分泌リーダーとして、遺伝子を、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のアルファ接合因子シグナルをコードするＤＮＡ配列にＣ末端で融合させた。組換え遺伝子発現を、ラクトース誘導性Ｋ．ラクチスのプロモーターによって制御した。
ヒトインスリンおよびインスリンアナログを、プレプロインスリンとして製造した。遺伝的に融合したＮ末端プレ配列を使用して、発現および分泌の収率を改善し、培養液中でペプチドを安定化させた。幅広い種類の配列がこの目的に使用することができ、これらを効率について試験した。プロインスリン自体は、Ｃペプチドに融合したＢ鎖と、これに続くＣ末端のＡ鎖からなる。Ｃ－ペプチドとして、種々のアミノ酸の組合せが記載されている。１～１０個のアミノ酸の短ペプチドがＣ配列としてうまく機能することが示された。インスリンのその後のプロセシングについては、Ｃ－ペプチドに隣接してその切出しを可能にする、特定のプロテアーゼに対する認識部位が重要である。
Ｋ．ラクチス細胞を、化学的手段によってコンピテントとした。その後に、細胞を、それぞれのプレプロインスリンをコードする発現プラスミドで形質転換した。プラスミドの挿入後、細胞を、ｇｅｎｅｔｉｃｉｎを含有する選択寒天プレートにプレーティングした。増殖したコロニーを分離し、組換え遺伝子発現について試験した。細胞を、ｇｅｎｅｔｉｃｉｎを補充した酵母ペプトンデキストロース培地中で十分に高い細胞密度まで増殖させた。最初の増殖期の後、ラクトースを補充したｇｅｎｅｔｉｃｉｎを含む塩緩衝酵母エキス培地を培養物に添加して、組換え遺伝子の発現を誘導した。培養物を数日間増殖させ、上清を遠心分離により回収した。
機能性インスリンまたはインスリンアナログの精製を、濾過手順によって開始した。最初のクロマトグラフィーキャプチャ手順を、イオン交換樹脂を用いて行った。プレプロインスリンからインスリンへの切断を、高度に特異的なプロテアーゼを用いて、実行した。宿主細胞タンパク質、プレ配列、および生成物の関連製品の除去を、さらなる２つのクロマトグラフィーステップのカスケードによって行った。疎水性相互作用クロマトグラフィーの次に、この目的を達成するために別のイオン交換手順を適用した。最終ポリシングを逆相クロマトグラフィーにより行った。濾過、沈殿および凍結乾燥を使用して、インスリン分子の生産プロセスを完了した。
活性化カルボン酸誘導体とのカップリング反応の後、コンジュゲートしたインスリン分子を含む溶液を濾過した。最終精製は逆相クロマトグラフィーにより行った。濾過、沈殿および凍結乾燥を使用して、標的分子の合成を完了した。
例えばＢ１６位、Ｂ２５位および／またはＡ１４位の変異を有する種々のインスリンアナログを生成した。表１に、生成したインスリンの概要を提供する。
Figure 2022513776000001
Figure 2022513776000002
Figure 2022513776000003
実施例２：インスリン受容体結合親和性アッセイ／インスリン受容体自己リン酸化アッセイ
生成した種々のインスリンアナログのインスリン結合およびシグナル伝達を、結合アッセイおよび受容体自己リン酸化アッセイによって決定した。
Ａ）インスリン受容体結合親和性アッセイ
表１にリストされたアナログに対するインスリン受容体結合親和性を、Ｈａｒｔｍａｎｎら（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎａｌｏｇｓ ｇｌａｒｇｉｎｅ ａｎｄ ｄｅｇｌｕｄｅｃ ｏｎ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｄｉａｂｅｔｏｌ．２０１６；１５：９６頁）に記載のように、決定した：インスリン受容体に埋め込まれた原形質膜（Ｍ－ＩＲ）の分離および競合結合実験を、先に記載のように実行した（Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｄら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１０；５（３）：ｅ９５４０）。簡潔にいえば、ＩＲを過剰発現するＣＨＯ細胞を収集し、氷冷２．２５ ＳＴＭバッファー（２．２５Ｍスクロース、５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．４、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）に再懸濁し、ダウンスホモジナイザーを使用して破砕し、これに続いて超音波処理した。ホモジネートを０．８ ＳＴＭバッファー（０．８Ｍスクロース、５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．４、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）でオーバーレイし、１００，０００ｇで９０分間超遠心分離した。界面の原形質膜を収集し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。最終ペレットを希釈バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．４、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）に再懸濁し、ダウンスホモジナイザーで再度ホモジナイズした。競合結合実験を、９６ウェルマイクロプレートで結合バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＢＳＡ、ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ｐＨ７．８に調整）中で実行した。各ウェルで、分離膜２μｇを、小麦胚芽凝集素、ポリビニルトルエンポリエチレンイミン シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）のビーズ０．２５ｍｇとともにインキュベートした。一定濃度の［１２５Ｉ］標識ヒトインスリン（１００ｐＭ）および種々の濃度のそれぞれの非標識インスリン（０．００１～１０００ｎＭ）を室温（２３℃）で１２時間添加した。放射能を、マイクロプレート・シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、ドイツ）で平衡状態で測定した。
ヒトインスリンに対する試験アナログのインスリン受容体結合親和性アッセイの結果を表２に示す。
Ｂ） インスリン受容体自己リン酸化アッセイ（シグナル伝達の尺度として）
インスリン受容体Ｂに結合するインスリンアナログのシグナル伝達を決定するために、自己リン酸化をｉｎ ｖｉｔｒｏで測定した。ヒトインスリン受容体アイソフォームＢ（ＩＲ－Ｂ）を発現するＣＨＯ細胞を、先に記載のようにＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ技術を使用したＩＲ自己リン酸化アッセイに使用した（Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｄら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１０；５（３）：ｅ９５４０）。ＩＧＦ１Ｒ自己リン酸化の分析の場合、ＩＧＦ１Ｒテトラサイクリン調節性発現プラスミドを安定的にトランスフェクトしたマウス胎児線維芽細胞３Ｔ３ Ｔｅｔ ｏｆｆ細胞株（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）において受容体を過剰発現させた。受容体のチロシンリン酸化レベルを決定するために、細胞を９６ウェルプレートに播種し、４４時間増殖させた。細胞を、無血清培地ハムＦ１２培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）で２時間血清飢餓とした。これに続いて、ヒトインスリンまたはインスリンアナログのいずれかの濃度を上昇させて、細胞を３７℃で２０分間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を新たに調製した３．７５％パラホルムアルデヒドで２０分間固定した。細胞を、ＰＢＳの０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で２０分間透過処理した。ブロッキングを、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）で室温で１時間実行した。抗ｐＴｙｒ ４Ｇ１０（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｓｃｈｗａｌｂａｃｈ、ドイツ）を室温で２時間インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）で洗浄した。二次抗マウス－ｌｇＧ－８００－ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）を１時間インキュベートした。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、ドイツ）でのＤＮＡの定量化によって標準化した。データを相対単位（ＲＵ）として得た。
ヒトインスリンと比べた試験アナログのインスリン受容体自己リン酸化アッセイの結果を表２に示す。
Figure 2022513776000004
Figure 2022513776000005
Ｃ） 結論
表２から導き出せる通り、Ｂ１６位および／またはＢ２５位の種々の疎水性置換について試験した（トリプトファン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン）。程度が異なるにもかかわらず、これらの位置に疎水性置換を有する試験インスリンアナログすべてが、インスリン受容体結合活性の減少を示した。Ｔｒｐ置換（例えば、アナログ４、１５および２３を参照されたい）と比較して、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンなどの脂肪族アミノ酸による置換は、インスリン受容体結合活性に対してより強い影響を有した。最も強い効果は、分岐鎖アミノ酸であるバリン、ロイシンおよびイソロイシンで観察された。イソロイシン、バリンおよびロイシンでの置換によって、インスリン受容体結合活性の著明な減少がもたらされた。興味深いことに、Ｂ２５位のかかる置換を有するインスリンアナログは（Ｂ２５位のバリン、ロイシン、またはイソロイシン置換などの、１１、１２、２２、２４、２５、２９、３０、３２、３３、３５、３８、３９、４０の各アナログ）、それらのＩＲ－Ｂ結合親和性に基づく予想よりも、シグナル伝達において、６倍までの高まりを示した。具体的には、Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリンおよびＶａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－インスリン（それぞれアナログ１１および１２）によれば、ヒトインスリンと比べて、インスリン受容体Ｂへの結合はわずか１％を示したが、自己リン酸化は６％を示した。同様に、Ｂ１６位の単一ロイシン置換（アナログ３）も、程度がわずかにより低いながら、シグナル伝達において同様の高まりを示した。比較すると、アナログ２６を別として、ヒスチジンＢ２５の置換を保有するアナログ（１０、１３、１４、２１、２８の各アナログ）もまた、受容体結合の低下を示したが、自己リン酸化の随伴性減少を示した。
一部の例では（３０、３２、３５、３８、３９の各アナログ）、インスリン受容体結合は０％であったが、一方、自己リン酸化アッセイで依然として活性を示した。これらのアナログはすべて、共通して、Ｂ１６位およびＢ２５位のバリン置換および／またはイソロイシン置換の組合せを有するが、このことから、その組合せがインスリン受容体結合のさらなる低下の要因であることが、示唆される。Ｂ２５位の置換がないが、Ｂ１６位の交換があるインスリンは、それらの自己リン酸化値と比較してわずかにより高い結合親和性を呈した（アナログ３、４、１６、１７、１８、１９、２０の各アナログ）。
Ｂ２５位のアラニンは、バリン、ロイシンまたはイソロイシンの置換（１１、１２、２２の各アナログ）と同様の効果を示したが、より低い程度であった。バリン、ロイシンまたはイソロイシンの置換を有するアナログの受容体結合親和性および自己リン酸化活性は、アラニン置換を有するアナログよりも低かった。
実施例３：様々な組換えプロテアーゼおよび人工胃液における ｉｎ ｖｉｔｒｏ 安定性の決定
インスリンアナログを、タンパク質分解安定性（α－キモトリプシン、カテプシンＤ、インスリン分解酵素（ＩＤＥ）および擬似胃液）について試験した。
Ａ） アッセイ条件
Figure 2022513776000006
Ｂ） 擬似胃液の調製
塩化ナトリウム２グラムと精製ペプシン３．２ｇ（ブタ胃粘膜由来、タンパク質１ｍｇ当たり８００～２５００単位の活性を有する）を塩酸７．０ｍｌに溶解した。体積を水で１０００ｍｌまで調整した。生成する溶液を混合し、０．２Ｎ水酸化ナトリウムまたは０．２Ｎ塩酸いずれかでｐＨ１．２±０．１に調整した。
Ｃ） 一般アッセイ手順
安定性の決定は、適当な時点（ＳＩＦおよびＳＧＦについては１５、３０、６０、１２０および２４０分；プロテアーゼについては１５、３０、６０および１２０分）を使用して行った。インキュベーションを３７℃で行い、残存する親化合物の％をＴ０時点を参照して計算した。
親化合物の決定については、エタノール（１ｅｑ．ｖ／ｖ）によるタンパク質沈殿および遠心分離ステップの後に、上清を使用して、適当な生物分析ＬＣ－ＭＳ／ＭＳまたはＬＣ－ＨＲＭＳ法を使用した。
Ｄ） サンプルの調製
化合物を最終濃度４０μＭで希塩酸に溶解した。アッセイにおける化合物濃度を２μＭとした。希釈標準溶液の１：２０希釈をプロテアーゼバッファーへと行い、次いでサンプルを３７℃で撹拌しながらインキュベートした。適当な時点においてアリコートを採取し、反応をエタノール（１ｅｑ．ｖ／ｖ）でクエンチし、次いで遠心分離した。上清を分析した。
Ｅ） 結論
特に、Ｂ鎖の１６位と２５位のバリンおよびイソロイシンなどの親油性アミノ酸置換について調査した。試験したアナログ（２、７、１１、１２、１４、１６、１９、２２、２３、２４、および３８）のうち、ヒトインスリンと比べて、トリプシン、カルボキシペプチダーゼＡおよびカルボキシペプチダーゼＢの各プロテアーゼに対して、安定性に関して軽微な差のみが観察された（データ示さず）。全体として、Ａ１４およびＢ２５の置換を保有するすべてのアナログ（２２、２４、３８の各アナログ）が、α－キモトリプシン、カテプシンＤおよびインスリン分解酵素（ＩＤＥ）に対してタンパク質分解安定性の向上を示した。例えば、α－キモトリプシンの場合、ヒトインスリンは２時間以内に完全に分解したが、一方、アナログ２２はほぼ完全に耐性であった。同様に、試験したすべてのＢ２５置換アナログは、カテプシンＤに対して安定性の向上を示したが、アナログ３８（Ｂ１６／Ｂ２５バリアント）は他のＢ２５バリアントと比較して優れた安定性を示した。
注目すべき一例外がＩＤＥの場合に観察され、Ａ１４／Ｂ１６置換を有するアナログ１９は、Ｂ２５バリアントと比較し成績の改善を示した。しかし、データが示唆するところは、グルタミン酸を用いて本実施例で試験した、Ａ１４の置換が安定性の向上に重要である、ことである。他の置換も、安定性の向上に有益であることが示された：例えば、Ｂ１６位のおよびＢ２５位の置換である。例えば、Ｂ２５位にアミノ酸交換を有するアナログ７は、不安定性の上昇という結果をもたらした。
Figure 2022513776000007
項
以下の項は、本明細書の一部である：
１．親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログであって、インスリンアナログは、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む、インスリンアナログ。
２．親インスリンは、ヒトインスリン、ブタインスリン、またはウシインスリンである、項１のインスリンアナログ。
３．分岐鎖アミノ酸は、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される、項１または２のインスリンアナログ。
４．前記インスリンアナログは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）からなる群から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異をさらに含む、項１～３のいずれか１項のインスリンアナログ。
５．前記インスリンアナログは、Ｂ３０位の変異をさらに含む、項１～４のいずれか１項のインスリンアナログ。
６．Ｂ３０位の変異は、親インスリンのＢ３０位のアミノ酸の欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、項５のインスリンアナログ。
７．前記インスリンアナログは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異をさらに含む、項１～６のいずれか１項のインスリンアナログ。
８．前記インスリンは、グリシン（Ｇｌｙ）で置換されたＡ２１位の変異をさらに含む、項１～７のいずれか１項のインスリンアナログ。
９．インスリンアナログのＢ鎖は、以下：
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫ （配列番号２２）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号４４）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号４８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号５０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号５８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号６０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６４）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６６）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号７０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７６）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号８０）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫＴ （配列番号８５）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８６）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号８７）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８８）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８９）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９０）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９１）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９２）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９３）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９４）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９５）
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９６）、および
ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９７）
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、項１～８のいずれか１項のインスリンアナログ。
１０．以下
（ａ）配列番号４３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖
および配列番号４４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、
（ｂ）配列番号４７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号４８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、または
（ｃ）配列番号７７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７８に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖
を含む、項１～９のいずれか１項のインスリンアナログ。
１１．以下
Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、および
Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン
からなる群から選択されるインスリンアナログ。
１２．親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンＢ鎖であって、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含み、場合により、Ｂ３０位の変異をさらに含み、Ｂ３０位の変異は、親インスリンのＢ３０位のトレオニンの欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、インスリンＢ鎖。
１３．インスリンＡ鎖およびインスリンＢ鎖を含むプロインスリンであって、インスリンＢ鎖は、親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含み、ここで、Ｂ鎖は、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含み、場合により、前記プロインスリンのインスリンＡ鎖は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異を含む、プロインスリン。
１４．項１～１１のいずれか１項のインスリンアナログ、項１２のインスリンＢ鎖、および／または項１３のプロインスリンをコードするポリヌクレオチド。
１５．項１～１１のいずれか１項のインスリンアナログ、項１２のインスリンＢ鎖、項１３のプロインスリン、および／または項１４のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。

Claims (15)

  1. 親インスリンと比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンアナログであって、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含む、前記インスリンアナログ。
  2. 親インスリンは、ヒトインスリン、ブタインスリン、またはウシインスリンである、請求項１に記載のインスリンアナログ。
  3. 分岐鎖アミノ酸は、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される、請求項１または２に記載のインスリンアナログ。
  4. グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）からなる群から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異をさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  5. Ｂ３０位の変異をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  6. Ｂ３０位の変異は、親インスリンのＢ３０位のアミノ酸の欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、請求項５に記載のインスリンアナログ。
  7. グルタミン酸（Ｇｌｕ）で置換されたＢ３位の変異をさらに含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  8. グリシン（Ｇｌｙ）で置換されたＡ２１位の変異をさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  9. インスリンアナログのＢ鎖は、以下：
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫ （配列番号２２）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号４４）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号４８）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号５０）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号５８）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号６０）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６４）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号６６）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ （配列番号７０）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７６）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号７８）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ （配列番号８０）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＬＹＴＰＫＴ （配列番号８５）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８６）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号８７）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８８）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号８９）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９０）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９１）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９２）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＩＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９３）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫＴ （配列番号９４）
    ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９５）
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９６）、および
    ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫＴ （配列番号９７）
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、請求項１～８のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  10. （ａ）配列番号４３に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号４４に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＩＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、
    （ｂ）配列番号４７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号４８に示すアミノ酸配列（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖、または
    （ｃ）配列番号７７に示すアミノ酸配列（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＥＱＬＥＮＹＣＮ）を有するＡ鎖および配列番号７８に示すアミノ酸配列（ＦＶＥＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＶＬＶＣＧＥＲＧＦＶＹＴＰＫ）を有するＢ鎖
    を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のインスリンアナログ。
  11. Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｌｅｕ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）Ｄｅｓ（Ｂ３０）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｉｌｅ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｉｌｅ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン、および
    Ｇｌｕ（Ａ１４）Ｇｌｙ（Ａ２１）Ｇｌｕ（Ｂ３）Ｖａｌ（Ｂ１６）Ｖａｌ（Ｂ２５）－ヒトインスリン
    からなる群から選択されるインスリンアナログ。
  12. 親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含むインスリンＢ鎖であって、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含み、場合により、Ｂ３０位の変異をさらに含み、Ｂ３０位の該変異は、親インスリンのＢ３０位のトレオニンの欠失である（Ｄｅｓ（Ｂ３０）－変異）、前記インスリンＢ鎖。
  13. インスリンＡ鎖およびインスリンＢ鎖を含むプロインスリンであって、該インスリンＢ鎖は、親インスリンのＢ鎖と比べて少なくとも１つの変異を含み、該Ｂ鎖は、分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ１６位の変異および／または分枝鎖アミノ酸で置換されたＢ２５位の変異を含み、場合により、該プロインスリンの該インスリンＡ鎖は、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）から選択されるアミノ酸で置換されたＡ１４位の変異を含む、前記プロインスリン。
  14. 請求項１～１１のいずれか１項に記載のインスリンアナログ、請求項１２に記載のインスリンＢ鎖、および／または請求項１３に記載のプロインスリンをコードするポリヌクレオチド。
  15. 請求項１～１１のいずれか１項に記載のインスリンアナログ、請求項１２に記載のインスリンＢ鎖、請求項１３に記載のプロインスリン、および／または請求項１４に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112876388B (zh) * 2021-01-14 2023-03-31 山东大学 一种gpr120激动剂及其制备方法与应用
CN116162147B (zh) * 2021-11-24 2023-10-03 成都奥达生物科技有限公司 一种长效胰岛素类似物
CN114230451A (zh) * 2021-12-29 2022-03-25 上海药坦药物研究开发有限公司 卤代酸类化合物的制备方法
WO2023144277A1 (en) * 2022-01-26 2023-08-03 Sanofi Insulin conjugates
WO2023247640A1 (en) 2022-06-23 2023-12-28 Sanofi Single chain insulins and fc conjugates thereof
CN115947822B (zh) * 2022-07-04 2023-08-18 北京惠之衡生物科技有限公司 一种长效酰化胰岛素衍生物及其药物组合物和应用
WO2024051787A1 (zh) * 2022-09-09 2024-03-14 北京惠之衡生物科技有限公司 一种长效酰化胰岛素衍生物及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018107117A1 (en) * 2016-12-09 2018-06-14 Akston Biosciences Corporation Insulin-fc fusions and methods of use

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU217684B (hu) 1993-09-17 2000-03-28 Novo Nordisk A/S Acilezett inzulinszármazékok és azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények és előállításuk
JP3872105B2 (ja) 1995-03-17 2007-01-24 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ インスリン誘導体
US6451970B1 (en) 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
CA2306905A1 (en) 1997-10-24 1999-05-06 Eli Lilly And Company Fatty acid-acylated insulin analogs
BRPI0512988A (pt) 2004-07-08 2008-04-22 Novo Nordisk As método para aumentar a meia-vida plasmática de uma molécula, composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica
JP4933455B2 (ja) 2005-02-02 2012-05-16 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規のインスリン誘導体
ES2490243T3 (es) 2005-02-02 2014-09-03 Novo Nordisk A/S Derivados de insulina
WO2007020256A1 (en) 2005-08-16 2007-02-22 Novo Nordisk A/S Method for making mature insulin polypeptides
US8722620B2 (en) 2006-02-27 2014-05-13 Novo Nordisk A/S Insulin derivatives
WO2007104736A2 (en) 2006-03-13 2007-09-20 Novo Nordisk A/S Acylated single chain insulin
US8796205B2 (en) 2006-05-09 2014-08-05 Novo Nordisk A/S Insulin derivative
RU2451029C2 (ru) 2006-05-09 2012-05-20 Ново Нордиск А/С Производное инсулина
EP2049149B1 (en) 2006-07-31 2015-04-15 Novo Nordisk A/S Pegylated extended insulins
HUE029512T2 (en) 2006-09-22 2017-03-28 Novo Nordisk As Protease Resistant Insulin Analogs
WO2008049711A1 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Peptide extended insulins
GB0621973D0 (en) 2006-11-03 2006-12-13 Philogen Spa Binding molecules and uses thereof
EP1974729A1 (en) * 2007-03-28 2008-10-01 Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) AG Substituted imidazopyridine derivates as melanocortin- 4 receptor antagonists
JP5688969B2 (ja) 2007-07-16 2015-03-25 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼに対して安定しているペグ化インスリンアナログ
ES2526924T3 (es) 2007-08-15 2015-01-16 Novo Nordisk A/S Insulinas con una fracción acilo que comprende unidades repetitivas de aminoácidos que contienen alquilenglicol
EP2178912B1 (en) 2007-08-15 2015-07-08 Novo Nordisk A/S Insulin analogues with an acyl and aklylene glycol moiety
US8946148B2 (en) 2007-11-20 2015-02-03 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
WO2009112583A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Novo Nordisk A/S Protease-stabilized insulin analogues
WO2009115469A1 (en) * 2008-03-18 2009-09-24 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, acylated insulin analogues
WO2009121884A1 (en) 2008-04-01 2009-10-08 Novo Nordisk A/S Insulin albumin conjugates
PL219335B1 (pl) * 2008-07-04 2015-04-30 Inst Biotechnologii I Antybiotyków Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna
MX2011004357A (es) 2008-10-30 2011-05-23 Novo Nordisk As Tratamiento de diabetes mellitus utilizando inyecciones de insulina con una frecuencia de inyeccion menor que a diario.
CN102245633A (zh) 2008-12-09 2011-11-16 诺沃—诺迪斯克有限公司 新的胰岛素类似物
CA2744558A1 (en) 2008-12-19 2010-07-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
JP5789515B2 (ja) 2008-12-19 2015-10-07 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ インスリン類似体
WO2010130638A1 (en) 2009-05-14 2010-11-18 Evotec Ag Sulfonamide compounds, pharmaceutical compositions and uses thereof
CN107129538B (zh) * 2010-04-27 2021-07-16 西兰制药公司 Glp-1受体激动剂和胃泌素的肽缀合物及其用途
CA2795091A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Novo Nordisk A/S Process for the preparation of insulin-zinc complexes
EP2585102B1 (en) 2010-06-24 2015-05-06 Indiana University Research and Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
CN103154024A (zh) 2010-10-15 2013-06-12 诺沃—诺迪斯克有限公司 新型n末端修饰的胰岛素衍生物
TWI574687B (zh) * 2011-01-03 2017-03-21 古利斯股份有限公司 具有鋅結合部份之刺蝟拮抗劑
EP2720711A1 (en) 2011-06-15 2014-04-23 Novo Nordisk A/S Multi substituted insulins
AU2012350586B2 (en) 2011-12-15 2017-02-02 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Human insulin analogue and acylated derivative thereof
WO2013086786A1 (zh) 2011-12-15 2013-06-20 Qin Shulin 具有降血糖作用的化合物、组合物及其用途
EP2794648A1 (en) 2011-12-21 2014-10-29 Novo Nordisk A/S N-terminally modified insulin derivatives
WO2014009316A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Novo Nordisk A/S Novel use of insulin derivatives
SG11201503522RA (en) 2012-11-05 2015-06-29 Univ Case Western Reserve Long-acting single-chain insulin analogues
WO2014133324A1 (ko) 2013-02-26 2014-09-04 한미약품 주식회사 신규한 인슐린 아날로그 및 이의 용도
RU2678134C2 (ru) 2013-03-14 2019-01-23 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Конъюгаты инсулин-инкретин
US20160296602A1 (en) 2013-03-20 2016-10-13 Novo Nordisk A/S Dosing Regimen
JP2016519127A (ja) 2013-04-30 2016-06-30 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規投与レジメン
JP2016521701A (ja) 2013-06-07 2016-07-25 ノヴォ ノルディスク アー／エス 成熟インスリンポリペプチドを作製するための方法
WO2015016293A1 (ja) * 2013-08-02 2015-02-05 国立大学法人 富山大学 （ベンゼンスルホニルアミノ）ベンズアミド誘導体およびそれらを有効成分とするｓｈｉｐ２阻害剤
BR112016016578A2 (pt) 2014-01-20 2017-10-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de ação prolongada e uso daanálogo de insulina, polinucleotídeo, vetor de expressão, transformante, insulina de ação prolongada bem como seu método de preparação e formulação da mesma, conjugado, e uso do mesmo mesma
AR099569A1 (es) 2014-02-28 2016-08-03 Novo Nordisk As Derivados de insulina y los usos médicos de estos
AR100639A1 (es) * 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
KR20160001391A (ko) 2014-06-27 2016-01-06 한미약품 주식회사 신규한 지속형 인슐린 아날로그 결합체 및 이의 용도
WO2016001185A1 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Novo Nordisk A/S Dosage regimen for the treatment of diabetes
KR20160007295A (ko) 2014-07-11 2016-01-20 한미약품 주식회사 인슐린 아날로그
US20180000742A1 (en) 2015-01-29 2018-01-04 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical Composition for Oral Insulin Administration Comprising a Tablet Core and a Polyvinyl Alcohol Coating
WO2016172269A2 (en) 2015-04-20 2016-10-27 University Of Utah Research Foundation Insulin analogs having shortened b chain peptides and associated methods
CN107921197B (zh) 2015-08-25 2020-07-28 诺和诺德股份有限公司 具有清洁腔室的医用注射装置
JP2018531901A (ja) 2015-08-25 2018-11-01 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規インスリン誘導体及びその医学的使用
WO2017032797A1 (en) 2015-08-25 2017-03-02 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives and the medical uses hereof
PL239062B1 (pl) 2016-01-22 2021-11-02 Inst Biotechnologii I Antybiotykow Sposób wytwarzania insuliny i jej pochodnych
TWI747929B (zh) 2016-08-02 2021-12-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種人胰島素或其類似物的醯化衍生物
EP3517544A4 (en) 2016-09-23 2020-06-03 Hanmi Pharm. Co., Ltd. INSULIN ANALOG HAVING REDUCED INSULIN RECEPTOR BINDING FORCE AND USE THEREOF
AR110193A1 (es) 2016-11-21 2019-03-06 Univ Case Western Reserve Análogos de insulina de acción rápida de estabilidad mejorada
HRP20221324T1 (hr) 2016-12-16 2022-12-23 Novo Nordisk A/S Farmaceutski pripravci koji sadrže inzulin
BR112019016077A2 (pt) 2017-02-03 2020-03-31 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Conjugado da fórmula 1, método para preparar o conjugado, preparação de atuação longa, preparação para prevenir ou tratar diabetes e método para tratar diabetes
EP3604328A4 (en) 2017-03-23 2021-01-06 Hanmi Pharm. Co., Ltd. REDUCED INSULIN ANALOGUE COMPLEX FOR INSULIN RECEPTOR AND ITS USE
JOP20190273A1 (ar) 2017-05-26 2019-11-24 Lilly Co Eli مركب إنسولين معالج بأسيل
KR20190036956A (ko) 2017-09-28 2019-04-05 한미약품 주식회사 지속형 단쇄 인슐린 아날로그 및 이의 결합체
JP2021014409A (ja) * 2017-11-21 2021-02-12 京都薬品工業株式会社 タンパク質結合性薬物
US11413352B2 (en) 2017-12-18 2022-08-16 Merck, Sharp & Dohme LLC Conjugate based systems for controlled insulin delivery

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018107117A1 (en) * 2016-12-09 2018-06-14 Akston Biosciences Corporation Insulin-fc fusions and methods of use

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