JP2022088597A5

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Publication number: JP2022088597A5
Application number: JP2022058938A
Authority: JP
Filing date: 2022-03-31
Publication date: 2023-01-18
Anticipated expiration: 2037-06-02

Claims

抗体の集団を作製する方法であって、前記方法は、
遺伝子改変齧歯類が抗原に特異的な抗体の集団を産生するように、前記遺伝子改変齧歯類を前記抗原に曝露すること
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
前記抗体の集団が、プレＢ細胞におけるヒトＴｄＴ発現を欠く同じ種の対応する齧歯類により産生される抗体集団と比較して増加した接合多様性を有する、請求項１に記載の方法。
ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体の発現を誘導する方法であって、前記方法は、
遺伝子改変齧歯類が抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体を産生するように、前記遺伝子改変齧歯類を前記抗原に曝露すること
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類を抗原に曝露することと、
（ｂ）前記齧歯類から、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列および／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列を決定することと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類を抗原に曝露することと、
（ｂ）前記齧歯類から、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列を決定することと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
完全ヒト免疫グロブリン重鎖および／または完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類が、ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗原に特異的な抗体を産生するように、前記遺伝子改変齧歯類を前記抗原に曝露することと、
（ｂ）前記齧歯類から、前記抗原に特異的な前記抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列を決定することと、
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする核酸をヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインをコードする核酸と作動可能に連結させて完全ヒト免疫グロブリン重鎖を形成させるか、および／または、前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸をヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインをコードする核酸と作動可能に連結させて完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を形成させることと、
（ｄ）前記完全ヒト免疫グロブリン重鎖および／または前記完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を発現させることと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
完全ヒト免疫グロブリン重鎖および／または完全ヒト免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類が、ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗原に特異的な抗体を産生するように、前記遺伝子改変齧歯類を前記抗原に曝露することと、
（ｂ）前記齧歯類から、前記抗原に特異的な前記抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列を決定することと、
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする核酸をヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインをコードする核酸と作動可能に連結させて完全ヒト免疫グロブリン重鎖を形成させるか、および／または、前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸をヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインをコードする核酸と作動可能に連結させて完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を形成させることと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類を抗原に曝露することと、
（ｂ）前記遺伝子改変齧歯類から、ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗原に特異的な抗体を発現するＢ細胞を得ることと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
（ｉ）プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
（ｉｉ）免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
ハイブリドーマを作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）遺伝子改変齧歯類から、ヒト免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を得ることと、
（ｂ）前記Ｂ細胞を使用してハイブリドーマを作製することと、
を含み、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
（ｉ）プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
（ｉｉ）免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）宿主細胞において、
（ｉ）免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む免疫グロブリン重鎖をコードする核酸と、
（ｉｉ）免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を含む免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸と
を発現させることと、
（ｂ）前記宿主細胞が前記免疫グロブリン重鎖および前記免疫グロブリン軽鎖を含む抗体を発現するような条件下で前記宿主細胞を培養することと、
を含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列および／または前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む遺伝子改変齧歯類のＢ細胞から得られたものである、方法。
宿主細胞を産生する方法であって、前記方法は、
宿主細胞に、
（ａ）ヒト重鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列と、
（ｂ）ヒト軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖をコードする第２の核酸配列と
を導入することを含み、前記第１の核酸配列の前記ヒト重鎖可変ドメインをコードする配列と、前記第２の核酸配列の前記ヒト軽鎖可変ドメインをコードする配列とが、抗原で免疫化した遺伝子改変齧歯類のＢ細胞から得られ、前記遺伝子改変齧歯類が、その生殖系列ゲノム中に：
プレＢ細胞におけるヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列の発現を駆動する転写制御エレメントに作動可能に連結されたヒトＴｄＴをコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域に作動可能に連結された、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含むヒト免疫グロブリン可変領域と、
を含む、方法。
前記転写制御エレメントがさらに、プロＢ細胞における前記ヒトＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメント、および／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群より選択される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記ヒトＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが未再編成ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子セグメントであり、前記免疫グロブリン定常領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが未再編成ヒト免疫グロブリン軽鎖ＶおよびＪ遺伝子セグメントを含み、前記免疫グロブリン定常領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域であり、前記遺伝子改変齧歯類におけるＶ－Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合の少なくとも１０％が非鋳型付加を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記軽鎖定常領域に作動可能に連結された前記ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントが、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、請求項１５に記載の方法。
（ｉ）前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域がヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントを含むか、
（ｉｉ）前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が免疫グロブリンκ定常領域であるか、
（ｉｉｉ）前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が内因性種由来の免疫グロブリンκ定常領域であるか、および／または
（ｉｖ）前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域および前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が、内因性免疫グロブリン軽鎖κ遺伝子座に位置する、
請求項１５に記載の方法。
（ｉ）前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域がヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントを含むか、
（ｉｉ）前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が免疫グロブリンλ定常領域であるか、
（ｉｉｉ）前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が内因性種由来の免疫グロブリンλ定常領域であるか、および／または
（ｉｖ）前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域および前記免疫グロブリン軽鎖定常領域が、内因性免疫グロブリン軽鎖λ遺伝子座に位置する、
請求項１５に記載の方法。
前記遺伝子改変齧歯類の生殖系列ゲノムがさらに、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結された未再編成ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む、請求項１５に記載の方法。
前記免疫グロブリン重鎖定常領域が内因性種由来である、請求項２０に記載の方法。
前記未再編成ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントおよび前記免疫グロブリン重鎖定常領域が、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に位置する、請求項２１に記載の方法。
前記遺伝子改変齧歯類の前記未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｂ細胞発生中に再編成を受けて、前記齧歯類のＢ細胞において再編成された可変領域遺伝子を生成する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記再編成された可変領域遺伝子の少なくとも１０％が、非鋳型付加を含む、請求項２３に記載の方法。
前記ヒトＴｄＴがＴｄＴの短いアイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記齧歯類がラットまたはマウスである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記齧歯類がマウスである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。