JPWO2020169022A5 - - Google Patents

Claims (29)

1. 遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法であって、
   （ａ）第１のヒト染色体を改変すること；ここで、前記改変された第１のヒト染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含む；
   （ｂ）前記改変された第１のヒト染色体を前記動物の細胞に導入すること；及び
   （ｃ）前記改変された第１のヒト染色体と内因性染色体との間の組換えを誘導し、ここで前記内因性染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含み、それにより１つ以上の内因性遺伝子をワンステップ置換でヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における１つ以上のヒトＩＧＨＶ遺伝子、１つ以上のヒトＩＧＨＤ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列に置換すること、ここで前記連続ヒト配列は、少なくとも５００ｋｂの長さを有する、
   を含む方法。
2. ヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＨＶ遺伝子、全てのヒトＩＧＨＤ遺伝子及び全てのヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列がワンステップ置換で組み込まれる、請求項１に記載の方法。
3. （ｄ）第２のヒト染色体を改変すること；ここで、前記改変された第２のヒト染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含む；
   （ｅ）前記改変された第２のヒト染色体を前記動物の細胞に導入すること；及び
   （ｆ）前記改変された第２のヒト染色体と内因性染色体との間の組換えを誘導し、ここで前記内因性染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含み、それにより１つ以上の内因性遺伝子をワンステップ置換でヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における１つ以上のヒトＩＧＫＶ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列に置換すること、ここで前記連続ヒト配列は、少なくとも５００ｋｂの長さを有する、
   をさらに含む、請求項１に記載の方法。
4. ヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＫＶ遺伝子及び全てのヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列がワンステップ置換で組み込まれる、請求項３に記載の方法。
5. 前記動物は、マウスである、請求項１に記載の方法。
6. 遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法であって、
   （ａ）第１のヒト染色体を改変すること；ここで、前記改変された第１のヒト染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含む；
   （ｂ）前記改変された第１のヒト染色体を前記動物の細胞に導入すること；及び
   （ｃ）前記改変された第１のヒト染色体と内因性染色体との間の組換えを誘導し、ここで前記内因性染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含み、それにより１つ以上の内因性遺伝子をワンステップ置換でヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における１つ以上のヒトＩＧＫＶ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列に置換すること、ここで前記連続ヒト配列は、少なくとも５００ｋｂの長さを有する、
   を含む方法。
7. ヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＫＶ遺伝子及び全てのヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列がワンステップ置換で組み込まれる、請求項６に記載の方法。
8. （ｄ）第２のヒト染色体を改変すること；ここで、前記改変された第２のヒト染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含む；
   （ｅ）前記改変された第２のヒト染色体を前記動物の細胞に導入すること；及び
   （ｆ）前記改変された第２のヒト染色体と内因性染色体との間の組換えを誘導し、ここで前記内因性染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含み、それにより１つ以上の内因性遺伝子をワンステップ置換でヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における１つ以上のヒトＩＧＨＶ遺伝子、１つ以上のヒトＩＧＨＤ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列に置換すること、ここで前記連続ヒト配列は、少なくとも５００ｋｂの長さを有する、
   をさらに含む、請求項６に記載の方法。
9. ヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＨＶ遺伝子、全てのヒトＩＧＨＤ遺伝子及び全てのヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列がワンステップ置換で組み込まれる、請求項８に記載の方法。
10. 前記動物は、マウスである、請求項６に記載の方法。
11. ヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＨＶ遺伝子、全てのヒトＩＧＨＤ遺伝子及び全てのヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列を内因性重鎖免疫グロブリン遺伝子座に含む遺伝子改変非ヒト動物であって、前記ヒトＩＧＨＶ遺伝子、前記ヒトＩＧＨＤ遺伝子及び前記ヒトＩＧＨＪ遺伝子は、作動可能に連結されており、且つＶＤＪ再構成を受けることができ；前記動物の内因性重鎖免疫グロブリン遺伝子座の破壊を含む、遺伝子改変非ヒト動物。
12. マウスであり、及び前記動物の内因性重鎖免疫グロブリン遺伝子座の前記破壊は、マウスＩＧＨＶ１－８５遺伝子から始まってマウスＩＧＨＪ４遺伝子までの連続配列の欠失を含む、請求項１１に記載の動物。
13. 以下のうちの１つによって特徴づけられる、請求項１１に記載の動物：
    （ｉ）ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変ヒト配列を含み、前記非改変ヒト配列は、少なくとも８００ｋｂである；
    （ｉｉ）ヒトＩＧＨＶ（ＩＩＩ）－８２から始まってヒトＩＧＨＶ１－２までのヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変ヒト配列を含む；
    （ｉｉｉ）ヒトＩＧＨＶ（ＩＩＩ）－８２から始まってヒトＩＧＨＶ６－１までのヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変ヒト配列を含む；
    （ｉｖ）ヒトＩＧＨＤ１－１から始まってヒトＩＧＨＪ６までのヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変ヒト配列を含む；
    （ｖ）ヒトＩＧＨＶ（ＩＩＩ）－８２から始まってヒトＩＧＨＪ６までのヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変ヒト配列を含む。
14. １つ以上のヒトＩＧＫＶ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＫＪ遺伝子を内因性軽鎖免疫グロブリン遺伝子座に更に含む、請求項１１に記載の動物。
15. 前記動物の内因性λ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の破壊を含む、請求項１１に記載の動物。
16. マウスである、請求項１１に記載の動物。
17. ヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＫＶ遺伝子及び全てのヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列を内因性軽鎖免疫グロブリン遺伝子座に含み；前記動物の内因性軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の破壊を含む、遺伝子改変非ヒト動物。
18. ヒトＩＧＫＶ３Ｄ－７から始まってヒトＩＧＫＪ５までのヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子座に由来する非改変配列を含む、請求項１７に記載の動物。
19. マウスであり、及び前記動物の内因性軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の前記破壊は、マウスＩＧＫＶ２－１３７から始まってマウスＩＧＫＪ５までの配列の欠失を含む、請求項１７に記載の動物。
20. １つ以上のヒトＩＧＨＶ遺伝子、１つ以上のヒトＩＧＨＤ遺伝子及び１つ以上のヒトＩＧＨＪ遺伝子を内因性重鎖免疫グロブリン遺伝子座に更に含む、請求項１７に記載の動物。
21. マウスである、請求項１７に記載の動物。
22. 遺伝子改変非ヒト動物であって、そのゲノムは、ヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＨＶ、全てのヒトＩＧＨＤ及び全てのヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列による１つ以上の内因性ＩＧＨＶ、内因性ＩＧＨＤ及び内因性ＩＧＨＪ遺伝子のワンステップ置換での置換を含む内因性重鎖免疫グロブリン遺伝子座を含み、ヒトＩＧＨＶ、ヒトＩＧＨＤ及びヒトＩＧＨＪ遺伝子は、内因性ＩＧＨＭ、ＩＧＨδ、ＩＧＨＧ、ＩＧＨＥ及びＩＧＨＡ遺伝子の１つ以上に作動可能に連結されている、遺伝子改変非ヒト動物。
23. マウスであり、マウスＩＧＨＶ１－８５遺伝子から始まってマウスＩＧＨＪ４遺伝子までの連続配列は、ワンステップ置換で置換されている、請求項２２に記載の動物。
24. 遺伝子改変非ヒト動物であって、そのゲノムは、ヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＫＶ及びヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列による１つ以上の内因性ＩＧＫＶ及び内因性ＩＧＫＪ遺伝子のワンステップ置換での置換を含む内因性軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含み、前記ヒトＩＧＫＶ及びヒトＩＧＫＪ遺伝子は、内因性ＩＧＫＣ遺伝子に作動可能に連結されている、遺伝子改変非ヒト動物。
25. マウスであり、マウスＩＧＫＶ２－１３７から始まってマウスＩＧＫＪ５までの連続配列は、ワンステップ置換で置換されている、請求項２４に記載の動物。
26. 請求項１１～２５のいずれか一項に記載の動物から入手される細胞。
27. 細胞のゲノムを改変する方法であって、
    （ａ）ヒト染色体を改変すること；ここで、前記改変されたヒト染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含む；
    （ｂ）前記改変されたヒト染色体を動物の細胞に導入すること；及び
    （ｃ）前記改変されたヒト染色体と内因性染色体との間の組換えを誘導し、ここで前記内因性染色体は、２つ以上の外因性組換え部位を含み、それにより１つ以上の内因性遺伝子をワンステップ置換でヒト１４番染色体の重鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＨＶ遺伝子、全てのヒトＩＧＨＤ遺伝子及び全てのヒトＩＧＨＪ遺伝子を含む連続ヒト配列に置換すること
    を含む方法。
28. ヒト２番染色体の内因性κ鎖免疫グロブリン遺伝子座における全てのヒトＩＧＫＶ及びヒトＩＧＫＪ遺伝子を含む連続ヒト配列もまたワンステップ置換で組換えによって前記内因性染色体に組み込まれる、請求項２７に記載の方法。
29. 抗原に特異的に結合する抗体を作製する方法であって、
    前記抗原に特異的に結合するハイブリッド抗体を発現する細胞におけるヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン可変領域をコードする核酸配列を入手することであって、前記細胞は、請求項１１～２５のいずれか一項に記載の動物を前記抗原に曝露することによって入手される、入手すること；
    前記ヒト重鎖免疫グロブリン可変領域をコードする前記核酸を、ヒト重鎖免疫グロブリン定常領域をコードする核酸と、且つ前記ヒト軽鎖免疫グロブリン可変領域をコードする前記核酸を、ヒト軽鎖免疫グロブリン定常領域をコードする核酸と作動可能に連結すること；及び
    細胞において前記核酸を発現させ、それにより前記抗体を入手すること
    を含む方法。