JP2021169507A - 新規なパエニバチルス（ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）株、抗真菌化合物、およびそれらの使用のための方法 - Google Patents

新規なパエニバチルス（ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）株、抗真菌化合物、およびそれらの使用のための方法 Download PDF

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Abstract

【課題】比較的高レベルのフサリシジンを発現し、検出可能なポリミキシンは発現しない、広域スペクトルの活性を示すパエニバチルス種株を提供する。【解決手段】第３モジュールにおいて機能的アデニル化ドメインを欠く変異型フサリシジンシンテターゼを含む殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋な培養物を含む組成物を開示する。また、殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋な培養物または少なくとも１種のパエニセリン（Ｐａｅｎｉｓｅｒｉｎｅ）および少なくとも１種のパエニプロリキシン（Ｐａｅｎｉｐｒｏｌｉｘｉｎ）を含むこれらの無細胞抽出物を含む組成物を開示する。また、開示の組成物及び化合物を用いて植物を処理して、植物病害を防除するための単離化合物および方法も開示される。【選択図】図１４

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／１３８，７６５
号および２０１５年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／２３２，２０５号に
対する優先権を主張するものであり、当該特許出願の内容は両方とも、それらの全体が参
照により本明細書に組み込まれる。
電子的に提出された配列リストの参照
配列リストの公式コピーは、２０１６年３月２１日に作成された、６８キロバイトのサ
イズを有するファイル「ＢＣＳ１５９００２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」をＡＳＣＩＩフォ
ーマットの配列リストとしてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出され、本明細書と同時
に出願される。このＡＳＣＩＩフォーマットの文書に含まれる配列リストは、本明細書の
一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、細菌株および植物病害を防除するそれらの能力に関する。特に、本発明は、
比較的高レベルの広域スペクトル抗真菌活性を有するパエニバチルス種（Ｐａｅｎｉｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）株を対象とする。
殺真菌剤は、作物保護；食品、飼料、および化粧品防腐剤として；ヒトおよび獣医学の
両方のための治療剤としての使用を含む無数の用途を有する。先進国と発展途上国の両方
において、作物収量の減少、ヒトおよび動物両方の食物媒介性疾患および真菌感染症が問
題となっている。
合成殺虫剤または殺真菌剤は、しばしば非特異的であり、したがって、他の天然に存在
する有益な生物を含む、標的以外の生物に作用し得る。それらの化学的性質のために、合
成殺虫剤または殺真菌剤は毒性で非生分解性でもあり得る。世界中の消費者は、特に食品
中の残留化学物質に関連する潜在的な環境および健康問題をますます意識している。この
ため、化学的（すなわち、合成）農薬の使用または少なくとも量を減らすための消費者の
圧力が高まっている。したがって、効果的な有害生物防除を可能にしながら、食物連鎖の
要件を管理する必要がある。
合成殺虫剤または殺真菌剤の使用に伴って生じるさらなる問題は、殺虫剤または殺真菌
剤の繰り返しおよび排他的な施用がばしば耐性病原性微生物の選択につながることである
。通常、このような菌株は、同じ作用様式を有する他の活性成分に対しても交差耐性であ
る。前記活性化合物による病原体の効果的な防除は、この場合もはや不可能である。しか
し、新しい作用機序を有する活性成分は開発が困難で高価である。
病原体集団における耐性発生のリスクと環境およびヒトの健康上の懸念から、植物病害
を管理するための合成殺虫剤および殺真菌剤の代替品の特定に関心が高まっている。生物
学的防除剤の使用も１つの選択肢である。
フサリシジンなどの非リボソームペプチドは、それらの抗菌特性に関して十分に認識さ
れており、作物保護の分野で使用されている。それらの作用様式のために、非リボソーム
ペプチドはまた、バイオ医薬品および他のバイオテクノロジー用途において潜在的用途を
有する。フサリシジンは、パエニバチルス種から単離することができ、１５−グアニジノ
−３−ヒドロキシペンタデカン酸に加えて６個のアミノ酸残基を含む環構造を有する。パ
エニバチルス・ポリミキサ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）から単離
されたフサリシジンは、ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−Ｆ０４、ＬＩ−Ｆ０５、ＬＩ−Ｆ０７およ
びＬＩ−Ｆ０８を含み（Ｋｕｒｕｓｕ Ｋ，Ｏｈｂａ Ｋ，Ａｒａｉ Ｔ ａｎｄ Ｆｕ
ｋｕｓｈｉｍａ Ｋ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０：１５０６−１５１４，１９
８７）、さらなるフサリシジンＡ、Ｂ、ＣおよびＤが報告されている（Ｋａｊｉｍｕｒａ
Ｙ ａｎｄ Ｋａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４９：１２９−１３
５，１９９６；Ｋａｊｉｍｕｒａ Ｙ ａｎｄ Ｋａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓ，５０：２２０−２２８，１９９７）。
特定のフサリシジンは、フサリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐ
ｏｒｕｍ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペ
ルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）およびペニシリウム・トミ
イ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｔｈｏｍｉｉ）などの植物病原性真菌に対して殺菌活性を
有することが知られている。いくつかのフサリシジンはまた、スタフィロコッカス・オウ
レウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）を含むグラム陽性細菌に対して
殺菌活性を有する（Ｋａｊｉｍｕｒａ Ｙ ａｎｄ Ｋａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ，４９：１２９−１３５，１９９６；Ｋａｊｉｍｕｒａ Ｙ ａｎｄ Ｋ
ａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，５０：２２０−２２８，１９９７）。
さらに、特定のフサリシジンは、キャノーラの黒色根腐れ病を引き起こすレプトスファエ
リア・マクランス（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｍａｃｕｌａｎｓ）に対する抗真菌活
性を有することが見出された（Ｂｅａｔｔｙ ＰＨ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅｎ ＳＥ．，Ｃ
ａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４８：１５９−１６９，２００２）。フサリシジン化
合物をさらに特徴付け、比較的低い施用量で広域スペクトルの抗真菌活性を提供するこれ
らのフサリシジンを産生するパエニバチルス種の菌株を同定する必要が存在する。
フサリシジンおよび他の抗真菌代謝産物は、パエニバチルス種の発酵によって得ること
ができる。しかし、多くのパエニバチルス種株は、ポリミキシンとして知られる抗生物質
もまた産生する。ポリミキシンは、グラム陰性細菌に対して選択的に毒性であり、ヒト患
者に投与された場合、神経毒性または腎毒性効果を有し得る。抗菌剤耐性の促進およびポ
リミキシンの相対毒性というグローバルな問題は、これらの抗生物質の慎重な使用と投与
を要求する。この理由のために、 農業で使用するために開発されたパエニバチルス種株
は、比較的高レベルのフサリシジンを発現し、検出可能なポリミキシンは発現しないこと
が非常に望ましい。このような菌株は、研究者および消費者にリスクをほとんど、または
全く与えないと思われる。さらに、広域スペクトルの活性を示すパエニバチルス種株を同
定する必要がある。既存の殺真菌剤、特に真菌耐性の発生を受けにくい殺真菌剤の効力の
改善が非常に望ましい。
Ｋｕｒｕｓｕ Ｋ，Ｏｈｂａ Ｋ，Ａｒａｉ Ｔ ａｎｄ Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ Ｋ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０：１５０６−１５１４，１９８７ Ｋａｊｉｍｕｒａ Ｙ ａｎｄ Ｋａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４９：１２９−１３５，１９９６ Ｋａｊｉｍｕｒａ Ｙ ａｎｄ Ｋａｎｅｄａ Ｍ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，５０：２２０−２２８，１９９７ Ｂｅａｔｔｙ ＰＨ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅｎ ＳＥ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４８：１５９−１６９，２００２
本発明は、第３モジュール（ＦｕｓＡ−Ａ３）において機能的アデニル化ドメインを欠
く変異型フサリシジンシンテターゼを含む殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋
な培養物を含む組成物に関し、機能的ＦｕｓＡ−Ａ３の欠損は、野生型フサリシジンシン
テターゼを含むパエニバチルス種株によるフサリシジンの合成と比較して、アミノ酸残基
（３）においてチロシンまたはフェニルアラニンを含むフサリシジンの合成を阻害する。
特定の態様において、変異型フサリシジンシンテターゼは、ＦｕｓＡ−Ａ３において基質
特異性を決定するアミノ酸残基の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少
なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少
なくとも９つ、または１０個の欠失を含む。他の態様において、このアミノ酸残基は、Ａ
ｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ２９９、Ａｌａ３０１
、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、Ｃｙｓ３３１、Ｌｙｓ５１７、およびこれらの
組み合わせからなる群から選択される。
一実施形態において、このアミノ酸残基は、配列番号１１の３２０３、３２０４、３２
０７、３２４６、３２６７、３２６９、３２９０、３２９８、３２９９および／または３
４８６位に位置する。別の実施形態において、変異型フサリシジンシンテターゼは、Ｆｕ
ｓＡ−Ａ３においてＡｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ
２９９、Ａｌａ３０１、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、およびＣｙｓ３３１の欠
失を含む。いくつかの実施形態において、変異型フサリシジンシンテターゼは、配列番号
１０を含む。
本発明はまた、殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋な培養物または少なくと
も１種のパエニセリン（Ｐａｅｎｉｓｅｒｉｎｅ）および少なくとも１種のパエニプロリ
キシン（Ｐａｅｎｉｐｒｏｌｉｘｉｎ）を含むこれらの無細胞抽出物を含む組成物を提供
する。
特定の態様において、少なくとも１つのパエニセリン は、パエニセリン Ａ１、パエ
ニセリン Ａ２、パエニセリン Ａ３、パエニセリン Ａ４、パエニセリン Ｂ１、パエ
ニセリン Ｂ２、パエニセリン Ｂ３、パエニセリン Ｂ４、パエニセリン Ｃ１、パエ
ニセリン Ｃ２およびパエニセリン Ｃ３からなる群から選択される。
他の態様において、少なくとも１種のパエニプロリキシンは、パエニプロリキシン Ａ
１、パエニプロリキシン Ａ２、パエニプロリキシン Ｂ１、パエニプロリキシン Ｂ２
、パエニプロリキシン Ｃ１、パエニプロリキシン Ｄ１、パエニプロリキシン Ｅ１、
パエニプロリキシン Ｅ２、パエニプロリキシン Ｆ１、パエニプロリキシン Ｆ２、パ
エニプロリキシン Ｇ１およびパエニプロリキシン Ｇ２からなる群から選択される。
特定の実施形態において、組成物は、フサリシジンＡ、ＬｉＦ０８ａ、パエニセリン
Ａ１、パエニセリン Ｂ１、パエニプロリキシン Ａ２およびパエニプロリキシン Ｂ２
を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、ＬｉＦ０３ａ、ＬｉＦ０３ｂ、ＬｉＦ０３ｃ
、ＬｉＦ０３ｄ、ＬｉＦ０７ａ、ＬｉＦ０７ｂ、ＬｉＦ０７ｃおよび／またはＬｉＦ０７
ｄを含まない。他の実施形態において、組成物は、相乗的有効量で、パエニセリン Ａ１
、パエニセリン Ｂ１、パエニプロリキシン Ａ２およびパエニプロリキシン Ｂ２を含
む。
ある態様において、本発明は、パエニバチルス種株が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ
−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺真菌
性突然変異株である組成物に関する。組成物は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９
７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺真菌性突然変
異株の発酵産物を含むことができる。
いくつかの実施形態において、殺真菌性突然変異株は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ
−５０９７２に対して約９０％を超える配列同一性を有するゲノム配列を有する。他の実
施形態において、殺真菌性突然変異株は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２と
同等またはそれ以上の殺真菌活性ならびに／またはフサリシジン、パエニセリンおよび／
もしくはパエニプロリキシンのレベルを有する。さらに他の実施形態において、発酵産物
はポリミキシンを含まない。
いくつかの態様において、発酵産物は液体製剤である。液体製剤は、懸濁濃縮液または
油分散液であってもよい。一実施形態において、組成物は、少なくとも約１×１０４ Ｃ
ＦＵの菌株／ｍＬ液体製剤を含む。別の実施形態において、組成物は約１％〜約２５％の
発酵固形物を含む。
他の態様において、本発明は、ａ）少なくとも１種のフサリシジン；ｂ）少なくとも１
種のパエニセリンまたは少なくとも１種のパエニプロリキシンを、相乗的有効量で含む。
一実施形態において、パエニセリンは、パエニセリン Ａ１、パエニセリン Ａ２、パエ
ニセリン Ａ３、パエニセリン Ａ４、パエニセリン Ｂ１、パエニセリン Ｂ２、パエ
ニセリン Ｂ３、パエニセリン Ｂ４、パエニセリン Ｃ１、パエニセリン Ｃ２および
パエニセリン Ｃ３の少なくとも１つである。別の実施形態において、パエニプロリキシ
ンは、パエニプロリキシン Ａ１、パエニプロリキシン Ａ２、パエニプロリキシン Ｂ
１、パエニプロリキシン Ｂ２、パエニプロリキシン Ｃ１、パエニプロリキシン Ｄ１
、パエニプロリキシン Ｅ１、パエニプロリキシン Ｅ２、パエニプロリキシン Ｆ１、
パエニプロリキシン Ｆ２、パエニプロリキシン Ｇ１およびパエニプロリキシン Ｇ２
の少なくとも１つである。
特に、一実施形態において、少なくとも１種のフサリシジンと少なくとも１種のパエニ
セリンまたは少なくとも１種のパエニプロリキシンとの相乗比は、１：１０００〜１００
０：１の範囲、好ましくは１：５００〜５００：１、より好ましくは１：２５０〜２５０
：１の範囲である。別の実施形態において、少なくとも１種のフサリシジンと少なくとも
１種のパエニセリンまたは少なくとも１種のパエニプロリキシンとの相乗重量比は、１：
１００〜１００：１の範囲、好ましくは１：１００〜１０：１の範囲またはさらに１：５
０〜２５：１の範囲である。一態様において、フサリシジンはフサリシジンＡである。別
の態様において、パエニセリンはパエニセリン Ａ１である。さらに別の態様において、
パエニプロリキシンは、パエニプロリキシン Ｃ１である。
他の態様において、本発明は、構造（Ｉ）：
Figure 2021169507
（式中、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して−ＣＨ（ＣＨ３）２または−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２
ＣＨ３であり、
Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
ｎは１３〜２０の整数である）
を有する単離化合物、ならびにこれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、
幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、非環式類似体、および混合物に関する。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。他の実施形態に
おいて、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。一態様において、Ｒ１は−ＣＨ（
ＣＨ３）２である。別の態様において、Ｒ１は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３である。一
態様において、Ｒ２は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。さらに別の態様において、Ｒ２は−Ｃ
Ｈ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３である。
さらに他の態様において、本発明は、構造（ＩＩ）：
Figure 2021169507
（式中、
Ｒ１は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３であり、
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、ならび
に
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり、
ただし、Ｒ１が−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ２が−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である場合、Ｒ３
はＨである）
を有する単離化合物ならびにこれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾
何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、非環式類似体、および混合物に関する。
いくつかの実施形態において、Ｒ３はＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ３はＨ
である。一態様において、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＨである。別の態様において、Ｒ１は−ＣＨ
（ＯＨ）ＣＨ３である。一態様において、Ｒ２は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。さらに
別の態様において、Ｒ２は−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。
一実施形態において、本発明は、本明細書に開示される単離化合物および農業上許容さ
れる担体を含む組成物に関する。
特定の実施形態において、本発明は、構造（Ｉ）の化合物を、少なくとも０．００１ｍ
ｇ／ｍＬ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で
含む溶液を対象とする。別の実施形態において、本発明は、構造（ＩＩ）の化合物を、少
なくとも０．００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも０．
１ｍｇ／ｍＬの濃度で含む溶液を対象とする。特定の態様において、開示の溶液は、農業
上許容される担体をさらに含む。
さらに別の実施形態において、本発明は、病害を防除するための植物の処理方法であっ
て、有効量の本明細書に開示の組成物を、植物、植物の一部および／または植物の場所に
施用することを含む方法に関する。特定の態様において、本組成物は、パエニバチルス種
ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこ
れらの殺真菌性突然変異株の発酵産物である。他の態様において、本方法は、組成物を葉
の植物部分に施用することを含む。さらに他の態様において、組成物は、約１×１０１０
〜約１×１０１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ヘクタールのパエニバチルス種ＮＲＲＬ
Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺
真菌性突然変異株で施用される。一実施形態において、組成物は、約０．５ｋｇ〜約５ｋ
ｇの発酵固形物／ヘクタールで施用される。
いくつかの態様において、植物病害は真菌によって引き起こされる。他の態様において
、植物病害は、かびまたはさび病である。一実施形態において、かび病は、うどんこ病ま
たはべと病である。別の実施形態において、さび病は、コムギ葉さび病、オオムギの葉さ
び病、ライムギの葉さび病、赤さび病、冠さび病および黒さび病からなる群から選択され
る。
いくつかの実施形態において、真菌は、アルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒ
ｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ
ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）、コレ
トトリカム・ラゲナリウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ）、
フサリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ファエオスフェリア
・ノドラム（Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）、ジモセプトリア・トリシ
チ（Ｚｙｍｏｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、フィトフトラ・クリプトゲア（Ｐｈ
ｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｒｙｐｔｏｇｅａ）、フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈ
ｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）、ピシウム・ウルティムム（Ｐｙｔｈｉｕ
ｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）、マグネポルテ・オリゼ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ
）、タナテフォルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）
、ウスチラゴ・セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａ
ｖｅｎａｅ）、ウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕ
ｌａｔｕｓ）およびプッキニア・トリシチナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）
からなる群から選択される。
他の実施形態において、植物病害は細菌によって引き起こされる。一態様において、細
菌は、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉ
ｓ）、シュードモナス・シリンゲ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）および
エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）からなる群から
選択される。
本発明はまた、有用植物において植物病原性生物を防除するための開示組成物の使用に
関する。特定の態様において、植物病原性生物は、アルテルナリア・アルテルナータ（Ａ
ｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａ
ｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ
）、コレトトリカム・ラゲナリウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉ
ｕｍ）、フサリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ファエオス
フェリア・ノドラム（Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）、ジモセプトリア
・トリシチ（Ｚｙｍｏｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、フィトフトラ・クリプトゲ
ア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｒｙｐｔｏｇｅａ）、フィトフトラ・インフェスタン
ス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）、ピシウム・ウルティムム（Ｐｙ
ｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）、マグネポルテ・オリゼ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒ
ｙｚａｅ）、タナテフォルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅ
ｒｉｓ）、ウスチラゴ・セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖ
ａｒ．ａｖｅｎａｅ）、ウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎ
ｄｉｃｕｌａｔｕｓ）およびプッキニア・トリシチナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃ
ｉｎａ）からなる群から選択される。他の態様において、植物病原性生物は、キサントモ
ナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、シュードモ
ナス・シリンゲ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）およびエルウィニア・カ
ロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）からなる群から選択される。
さらに他の態様において、有用植物は、リンゴ、バナナ、柑橘類、キーウィー、メロン
、桃、洋なし、パイナップル、仁果類、ザクロ、キャベツ、カリフラワー、キュウリ、ウ
リ科植物、トマト、ジャガイモ、コムギ、米および大豆からなる群から選択される。
トマト疫病（ＰＨＹＴＩＮ）、灰色かび病（ＢＯＴＲＣＩ）、およびコムギ葉さび病（ＰＵＣＣＲＴ）に対するパエニバチルス種株の全ブロスの植物体殺真菌活性を示す。 アルテルナリア・アルテルナータ（ＡＬＴＥＡＬ）、ボトリティス・シネリア（ＢＯＴＲＣＩ）、フサリウム・クルモルム（ＦＵＳＡＣＵ）、ファエオスフェリア・ノドラム（ＬＥＰＴＮＯ）、ジモセプトリア・トリシチ（ＳＥＰＰＴＲ）、フィトフトラ・クリプトゲア（ＰＨＹＴＣＲ）、フィトフトラ・インフェスタンス（ＰＨＹＴＩＮ）、ピシウム・ウルティムム（ＰＹＴＨＵＬ）マグネポルテ・オリゼ（ＰＹＲＩＯＲ）、タナテフォルス・ククメリス（ＲＨＩＺＳＯ）、ウスチラゴ・セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａｖｅｎａｅ）（ＵＳＴＩＡＶ）、およびウロミセス・アペンジクラツス（ＵＲＯＭＡＰ）に対するパエニバチルス種株の全ブロス由来フサリシジン抽出物のインビトロ抗真菌活性を示す。 非環式類似体、ＬｉＦ０４ｃを生成するためのＬｉＦ０４ａ（フサリシジンＡとしても知られている）の環構造の開裂を示す。フサリシジンおよびフサリシジン様化合物の各々の非環式類似体も同様の様式で生じる。 位置（１）、（４）および（６）において保存されたアミノ酸が同定され、アミノ酸の変化がＡＡ（アミノ酸）として示されている公知のフサリシジンの構造を概説する図を示す。１５−グアニジノ−３−ヒドロキシペンタデカン酸（ＧＨＰＤ）尾部は、位置（１）のＬ−スレオニンのＮ末端とアミド結合を形成する。位置（６）のＤ−アラニンのＣ末端は、「Ｏ」を指し示す矢印で示される位置（１）のＬ−スレオニンのヒドロキシル基とエステル結合を形成する。 公知のフサリシジンが同定されているパエニバチルス種の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能な公知のフサリシジンを示す。 パエニセリンの構造を概説する図を示す。この種の化合物は、位置（１）および位置（４）の保存スレオニンの一方または両方がセリンで置換されていることを除いて、前記フサリシジンと同様である。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された、その中にパエニセリンが同定された株由来の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能なパエニセリンを示す。検出されたすべての化合物について、ｍ／ｚ値および保持時間（ＲＴ）を示す。 図６Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニセリン Ａ１の化学構造を示す。 図７Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニセリン Ｂ１の化学構造を示す。 パエニプロリキシンの構造を概説する図を示す。この種の化合物は、ＧＨＰＤ尾部の長さが−（ＣＨ２）１２−から−（ＣＨ２）１４−または−（ＣＨ２）１６−に伸長される以外は、フサリシジンと同様である。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された、その中にパエニプロリキシンが同定された株由来の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能なパエニプロリキシンを示す。検出されたすべての化合物について、ｍ／ｚ値および保持時間（ＲＴ）を示す。 図９Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニプロリキシン Ｃ１の化学構造を示す。 図１０Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニプロリキシン Ｄ１の化学構造を示す。 フサリシジンＡおよびＢ（「ＡＢ」）、パエニセリン Ａ１およびＢ１（「８６８」）、パエニプロリキシン Ａ２およびＢ２（「９３８」）、または８６８および９３８の組み合わせを寒天プレート上全体に拡がったコレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）の胞子に適用した、Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ抗生物質ディスク拡散アッセイを示す。真菌増殖の阻害ゾーンを有する各ディスクの直径は、ミリメートルで示される。 図１２Ａは、フサリシジンＡの化学構造およびこの構造の単純化された描写を示す。図１２Ｂ〜１２Ｅは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびこれから誘導された株によって産生されたフサリシジン、パエニセリンおよび／またはパエニプロリキシンの組み合わせの単純化された描写を示す。これらの組み合わせは、相乗的抗真菌効果を生じ、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびそれから誘導された株で観察される比較的高い効力および広域スペクトルの抗真菌活性に関与する。 以下のパニエバチルス種株：パニエバチルス、ペオリエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｏｒｉａｅ）Ａ（配列番号１）；パエニバチルス・ポリミキサＡ（配列番号２）；パエニバチルス・ポリミキサＰＫＢ１（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＢＱ９６３８４．２；配列番号３）；パエニバチルス・ポリミキサＥ６８１（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＤＭ６７９８５．１；配列番号４）；パエニバチルス・ポリミキサＢ（配列番号５）；パエニバチルス・ポリミキサＳＱＲ（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＨＭ６３８１２．１；配列番号６）；パエニバチルス・ポリミキサＣ（配列番号７）；パエニバチルス・ポリミキサＭ１（ＧｅｎＢａｎｋ ＣＣＣ８３０１５．１；配列番号８）；パエニバチルス・ポリミキサＳＣ２（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＣＡ０９７３３．２；配列番号９）；パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株（配列番号１０）；およびパエニバチルス種Ａ株（配列番号１１）によって発現されるＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼのセグメントの多重配列アライメントを示す。基質特異性を決定するアミノ酸残基は、黒色の輪郭で識別される（表１も参照されたい）。これらのアミノ酸残基は、配列番号１〜５および１１の３２０３、３２０４、３２０７、３２４６、３２６７、３２６９、３２９０、３２９８、３２９９および３４８６位、ならびに配列番号６〜９の３２０４、３２０５、３２０８、３２４７、３２６８、３２７０、３２９１、３２９９、３３００、および３４８７位に位置する。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ａ株（「Ａ株」）におけるフサリシジン遺伝子クラスターを示す。矢印は、クラスター内の個々の遺伝子を表す（すなわち、ｆｕｓＧは矢印「Ｇ」で表され、ｆｕｓＦは矢印「Ｆ」によって表されるなど）。最大の矢印は、以下の略号および記号を有するｆｕｓＡフサリシジンシンテターゼ遺伝子を表す：Ａ＝アデニル化ドメイン（基質認識および活性化）；Ｃ＝縮合ドメイン（ペプチド結合形成）；Ｅ＝エピマー化ドメイン（基質ラセミ化）；ＴＥ＝チオエステラーゼドメイン（生成物放出）；文字のない楕円形＝チオール化（Ｔ）ドメイン（ペプチドキャリアタンパク質）。ｆｕｓＡ遺伝子は、各遺伝子クラスターの上または下のボックスに示されるアミノ酸を組み込む役割を果たす６つのモジュールを有する。Ａ株は典型的なフサリシジン遺伝子クラスターを有するが、パエニバチルス種ＮＲＲＬＢ−５０９７２株フサリシジン遺伝子クラスターは、モジュール３において機能的Ａドメインを欠いている。結果として、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株によって産生されるフサリシジンは、位置（３）にチロシンおよびフェニルアラニンを欠き、バリンまたはイソロイシンのみを組み込む。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株（配列番号１２）およびパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株（配列番号１３）におけるｓｐｏ０Ａ遺伝子の配列アライメントを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株コード配列におけるヌクレオチド変化が、保存領域において単一のアミノ酸置換をもたらすことを示す、内生胞子形成細菌由来のＳｐｏ０Ａオルソログの配列アライメントを示す。アライメントされたＳｐｏ０Ａオルソログ配列は：パエニバチルス・テラエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒａｅ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１４）、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１５）、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１６）、パエニバチルス・ポリミキサＳｐｏ０Ａ（配列番号１７）、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１８）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１９）およびクロストリジウム・パステリアヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号２０）である。 真菌病原体アルテルナリア・ソラニ（ＡＬＴＥＳＯ）およびコレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）を用いたいくつかのフサリシジン、パエニセリンおよびパエニプロリキシンの８０％最小発育阻止濃度（ＭＩＣ８０）値を示す。
本発明は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこれから誘導される殺
真菌性突然変異体（菌株）を提供する。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株は
、植物病原体に対して広域スペクトルの活性を有することが見出された。
本明細書に記載される微生物および特定の株は、特に断らない限り、すべて自然から分
離され、振盪フラスコ培養において、または例えば生物活性代謝産物の生産を最大化する
ためにバイオリアクターなどのスケールアップされた製造プロセスなどによって人工的条
件下で増殖される。このような条件下での増殖は、菌株の「順化」をもたらす。一般に、
このような「順化」株は、天然環境で見出される選択圧に曝されず、むしろ人為的選択圧
に曝される均質な集団として培養されるという点で、自然界に見られるその対応物とは異
なる。
本明細書中で使用される場合、用語「単離された」は、全ブロスまたは発酵産物に富ん
だまたは濃縮されているか、または全ブロスまたは発酵産物から部分的にまたは実質的に
精製された化合物を指す。
一実施形態において、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の突然変異株が提
供される。用語「突然変異体」は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株から誘
導された遺伝子変異体を指す。一実施形態において、突然変異体は、パエニバチルス種Ｎ
ＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の１または複数またはすべての識別（機能的）特徴を有する。
特定の例では、突然変異体またはこの発酵産物は、（識別機能的特徴として）真菌、卵菌
類および／または細菌を少なくともパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株と同様
に防除する。このような突然変異体は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株と
約８５％超、約９０％超、約９５％超、約９８％超または約９９％超の配列同一性を有す
るゲノム配列を有する遺伝子変異体であり得る。突然変異体は、パエニバチルス種ＮＲＲ
Ｌ Ｂ−５０９７２株の細胞を、化学物質または放射線照射で処理することによって、ま
たはパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の細胞集団から自発的突然変異体（フ
ァージ耐性または抗生物質耐性突然変異体など）を選択することによって、または当業者
に周知の他の手段によって得ることができる。
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびこの突然変異体は、広範囲の植物
病原体に対して活性を有する。一態様において、この菌株は、キュウリ炭疽病、キュウリ
うどんこ病、コムギ葉さび病、オオムギうどんこ病およびボトリティス病などの真菌；ト
マト疫病、キュウリべと病およびアブラナ属べと病などの卵菌類；および／またはシュー
ドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）およ
びエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）などの細菌に対する活性を有する。
特定の態様において、パエニバチルス種株は、配列番号１０と少なくとも７５％の配列
同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９
５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少
なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を示すＤＮＡ配列を
含む。
特定の態様において、本発明は、フサリシジン、パエニセリン、および／またはパエニ
プロリキシンを産生するパエニバチルス種株を含む発酵産物を対象とする。フサリシジン
は、１５−グアニジノ−３−ヒドロキシペンタデカン酸（ＧＨＰＤ）尾部およびこれらの
線形対応物を有するデプシペプチドのファミリーである。フサリシジンの特異的保存特性
は、このＧＨＰＤ尾部、ならびに配列中の６つのアミノ酸のうちの３つ、すなわち（１）
スレオニン、（４）スレオニンおよび（６）アラニンである。
元々は１９７０年代半ばにＮａｋａｊｉｍａら（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７２，２
５，２４３−２４７）によって最初に発見されたが特徴付けられておらず、フサリシジン
は１９８０年代後半にＫｕｒｕｓｕら（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，１９８７，４０，１５
０６−１５１４）によって記載された。フサリシジンは１９９０年代半ばから２０００年
代初頭にかけて、Ｋａｊｉｍｕｒａら（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，１９９６，４９，１２
９−１３５；Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，１９９７ ５０，２２０−２２８）、Ｋｕｒｏｄ
ａら（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，２０００，５３，１５３３−１５４９；Ｊ．Ｍａｓｓ
Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，２００１，３６，３０−３７）およびＢｅａｔｔｙら（Ｃａｎ．
Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２００２，４８，１５９−１６９）によってさらに研究され
た。この重厚な調査期間中、これらの化合物は著者に応じて数回改名された（フサリシジ
ンＡはＬｉＦ０４ａ、Ｇａｔａｖａｌｉｎ、またはＫＴ−６２９１Ａとしても知られてい
る）。この話題には多くの刊行物が存在するが、２４の公知のフサリシジンの同じ群から
の選択化合物が毎回記述されている。
この話題に関してしばらくの沈黙期間があった後、Ｖａｔｅｒら（Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．
Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，２０１５，２６，１１３０−１１４１）は、質量分析に
よるフサリシジンの構造解明について記載し、そのファミリーのいくつかの類似体を記載
した。Ｖａｔｅｒらは、７アミノ酸（すなわち、ペプチド配列中の（４）スレオニン残基
に連結された余分なアラニン）を有する新規なクラスのフサリシジン様化合物を同定した
。本明細書で使用する用語「非環式類似体」は、フサリシジンまたはフサリシジン様化合
物（例えば、パエニセリンまたはパエニプロリキシン）に対応するが、エステル結合を欠
き、線形構造を生じる化合物を指す。
フサリシジンのアミノ酸鎖は、非リボソームペプチドシンテターゼ（ＮＲＰＳ）によっ
て１つに連結または改変される。マルチドメインＮＲＰＳは、最大１５，０００個のアミ
ノ酸からなり、したがって、事実上最も長いタンパク質の１つであると考えられている（
Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｐ
．２０，２７５−２８７）。ＮＲＰＳ取り込みは、リボソームによって翻訳される２１個
の標準アミノ酸に限定されず、この乱雑さは、非リボソームペプチドの大きな構造的多様
性および生物活性に寄与する（Ｌｉ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅｎ，（２００８））。パエニバ
チルス・ポリミキサＰＫＢ１によるフサリシジンの非リボソーム生合成は、ｄ−アミノ酸
の直接活性化を伴う（Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５，１１８−１２７）。
Ｐ．ポリミキサＥ６８では、フサリシジン生合成遺伝子クラスター（ｆｕｓＧＦＥＤＣ
ＢＡ）が特徴付けられ、クラスター中の最大のコードＤＮＡ配列（ＣＤＳ）であるＮＲＰ
Ｓコード配列が６モジュールペプチドをコードすることが観察された（Ｃｈｏｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓ
ｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｇｅｎｅ
ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｅ６８１．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３６５，８９−９５；Ｌｉ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅ
ｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｇｅｎｅ ｏｆ
Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｅ６８１．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３６５，８９−９５；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１
３）．Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒ
ｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｓ Ｇｅｎｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌ
ｅ ｆｏｒ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＳＱＲ−２１．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ．９７，９４７９−９４８９）。生合成クラスターは、脂質部分の生合成を
担う他のＣＤＳを含むが、トランスポーター遺伝子を含まない（Ｌｉ ａｎｄ Ｊｅｎｓ
ｅｎ，（２００８）．Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆ
ｕｓａｒｉｃｉｄｉｎｓ ｂｙ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＰＫ
Ｂ１ Ｉｎｖｏｌｖｅｓ Ｄｉｒｅｃｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｄ−ａｍｉ
ｎｏ ａｃｉｄ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５，１１８−１２７）。Ｐ．ポリミキサでは、
ｆｕｓオペロンのプロモーターが同定され、これまでの研究により胞子形成の調節因子と
して関与する転写リプレッサー（ＡｂｒＢ）によって結合されることが示されており、こ
のことは、フサリシジンが胞子形成中に合成され、微生物の二次代謝をそのライフサイク
ルで調整することが観察されたので興味深い（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）．Ｐｒ
ｏｍｏｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｓ Ｇｅｎｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ
Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ
ｐｏｌｙｍｙｘａ ＳＱＲ−２１．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ．９７，９４７９−９４８９）。
対立遺伝子多様性は、典型的には化学的多様性の発生に関与していると考えられている
。しかし、ｆｕｓクラスターの興味深い特徴は、組み込まれたアミノ酸（Ｔｙｒ、Ｖａｌ
、Ｉｌｅ、ａｌｌｏ−Ｉｌｅ、Ｐｈｅ）が異なる多様なフサリシジンがｆｕｓＡの単一の
対立遺伝子によって産生され得ることであり、根底にある機序は、アミノ酸の認識に関与
するＮＲＰＳ Ａドメインが基質特異性を緩和したことである（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．，
（２０１２）．Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
Ａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ｎ
ｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｆｏｒ Ｅｎｈａｎ
ｃｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎ Ａｎａｌｏｇｓ．Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３４，１３２７−１３３４；Ｍｏｕｓａ ｅｔ ａｌ．，
（２０１５）Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ Ｅｎｃｏｄｉｎｇ Ａｎｔ
ｉ−Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｒａｉｔｓ ｗｉｔｈｉｎ Ｐｌａｎｔ Ａｓｓｏｃｉａｔ
ｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ，Ｆｒｏｎｔ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．２０１５；６：２３１）。
ｆｕｓＡ遺伝子における基質認識および活性化を担うＡドメインの構造は、Ｘ線結晶学
を用いてＧｒｓＡから決定され、基質特異性を決定する１０個のアミノ酸残基（Ａｓｐ２
３５，Ａｌａ２３６，Ｔｒｐ２３９，Ｔｈｒ２７８，Ｉｌｅ２９９，Ａｌａ３０１，Ａｌ
ａ３２２，Ｉｌｅ３３０，Ｃｙｓ３３１およびＬｙｓ５１７）が同定されている（Ｃｈａ
ｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｂ
ａｓｅｄ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ
Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ａｄｅｎｙｌａｔ
ｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ７：２１１−２２４；Ｓｔａｃｈｅｌｈ
ａｕｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｔｈｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｃｏｎｆｅｒｒ
ｉｎｇ Ｃｏｄｅ ｏｆ Ａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ Ｎｏｎｒｉ
ｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ６：
４９３−５０５）。これらの１０個のシグネチャー残基は、基質結合部位内のそれらの機
能に基づいて３つのサブグループに分類することができる。Ａｓｐ２３５およびＬｙｓ５
１７はそれぞれ基質のカルボキシル末端およびアミノ末端と相互作用し、配列分析により
ＮＲＰＳのＡドメインにおけるそれらの位置が不変であることが明らかにされた。Ａｌａ
２３６、Ａｌａ３０１およびＩｌｅ３３０は、脂肪族側鎖を有するアミノ酸基質に特異的
なＡドメイン内で中程度に可変である。Ｔｒｐ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｉｌｅ２９９、Ａ
ｌａ３２２およびＣｙｓ３３１は非常に位置可変であり、異なる基質の識別および選択に
おいて重要であると考えられている（Ｃｈａｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒ
ｅｄｉｃｔｉｖｅ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｂａｓｅｄ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏ
ｌ ７：２１１−２２４；Ｓｔａｃｈｅｌｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｔｈｅ
Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ Ｃｏｄｅ ｏｆ Ａｄｅｎｙｌａｔ
ｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｔａｓｅｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ６：４９３−５０５）。Ｉｌｅ２９９は、基質特
異性を付与する配列内のすべてのうちで最も位置可変性であった（Ｓｔａｃｈｅｌｈａｕ
ｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｔｈｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｃｏｎｆｅｒｒｉｎ
ｇ Ｃｏｄｅ ｏｆ Ａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ Ｎｏｎｒｉｂｏ
ｓｏｍａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ６：４９
３−５０５）。
フサリシジンシンテターゼにおける基質特異性を決定する１０個のアミノ酸残基を表１
に示す。シンテターゼの６つのモジュールの各々のアデニル化ドメイン（Ａドメイン）は
、第１のモジュールのＦｕｓＡ−Ａ１、第２のモジュールのＦｕｓＡ−Ａ２、第３のモジ
ュールのＦｕｓＡ−Ａ３として知られている。これらの１０個のアミノ酸残基は、図１３
に示す種々のパエニバチルス種株由来のＦｕｓＡの多重配列アラインメントにおいても同
定されている。
Figure 2021169507
特定の態様において、殺真菌性パエニバチルス種株は、ＦｕｓＡ−Ａ３において基質特
異性を決定するアミノ酸残基の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少な
くとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少な
くとも９つ、または１０個すべての欠失を含む変異型フサリシジンシンテターゼを発現す
る。他の態様において、殺真菌性パエニバチルス種株は、ＦｕｓＡ−Ａ３においてＡｓｐ
２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ２９９、Ａｌａ３０１、Ａ
ｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、Ｃｙｓ３３１、Ｌｙｓ５１７およびこれらの組み合
わせからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失を有するフサリシジ
ンシンテターゼを発現する。
本明細書に開示されたＦｕｓＡ−Ａ３における欠失は、フサリジジンまたはフサリシジ
ン様化合物中のペプチド環のアミノ酸位置（３）に特異的アミノ酸を組み込むためのフサ
リジジンシンテターゼの能力に影響を及ぼす。例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−
５０９７２株は、ＦｕｓＡ−Ａ３に欠失を含み、アミノ酸位置（３）にチロシンアミノ酸
またはフェニルアラニンアミノ酸を有するフサリシジン化合物を産生することができない
。いかなる理論にも拘束されることを望まないが、ＦｕｓＡ−Ａ３における欠失は、代謝
を古典的なフサリシジンの生合成から離して、パエニセリンｓおよびパエニプロリキシン
などのフサリシジン様化合物の生合成にシフトさせることができる。
特定の実施形態において、本発明は、第３モジュールの機能的アデニル化ドメイン（Ｆ
ｕｓＡ−Ａ３）を欠く変異型フサリシジンシンテターゼを含み、少なくとも１種のパエニ
セリンおよび少なくとも１種のパエニプロリキシンをさらに含む殺真菌性パエニバチルス
種株の生物学的に純粋な培養物を含む組成物を対象とする。特定の態様において、少なく
とも１種のパエニセリンおよび少なくとも１種のパエニプロリキシンは、組成物中で単離
または濃縮される。
いくつかの実施形態において、単離された化合物またはパエニプロリキシンは以下もの
である
Figure 2021169507
Figure 2021169507
Figure 2021169507
Figure 2021169507
Figure 2021169507
いくつかの実施形態において、単離された化合物またはパエニセリンは以下のものであ
る、
Figure 2021169507
Figure 2021169507
Figure 2021169507
他の態様において、本発明は、殺真菌性パエニバチルス種株を同定する、および／また
は対応する発酵産物を産生する方法に関する。この方法は、変異型フサリシジンシンテタ
ーゼを特徴付け、パエニバチルス種株の殺真菌活性をアッセイするための、パエニバチル
ス種株におけるＦｕｓＡ−Ａ３の配列決定を含む。特定の態様において、ＦｕｓＡ−Ａ３
は、図１３に示される１または複数の配列に基づくプライマー（すなわち、配列番号１〜
１１）を用いて配列決定される。いくつかの実施形態において、スクリーニングの前に、
細胞を増殖させ、以下の特徴の１または複数を有する細胞を選択する：野生型フサリシジ
ンシンテターゼを含む参照パエニバチルス種株（すなわち、機能的ＦｕｓＡ−Ａ３を発現
する）において定量されたフサリシジンと比較した、アミノ酸残基（３）にチロシンまた
はフェニルアラニンを有するフサリシジン（例えば、ＬｉＦ０３ａ、ＬｉＦ０３ｂ、Ｌｉ
Ｆ０３ｃ、ＬｉＦ０３ｄ、ＬｉＦ０７ａ、ＬｉＦ０７ｂ、ＬｉＦ０７ｃ、および／または
ＬｉＦ０７ｄ）のレベルの低減または検出不能；および／または野生型フサリシジンシン
テターゼを含む参照パエニバチルス種株（すなわち、機能的ＦｕｓＡ−Ａ３を発現する）
において定量されたものと比較した、パエニセリン（例えば、パエニセリン Ａ１および
／またはパエニセリン Ｂ１）および／またはパエニプロリキシンのレベルの増大。
一態様において、本発明は、広域スペクトル抗真菌活性を有する発酵産物を産生するた
めの方法であって、変異型フサリシジンシンテターゼを有するパエニバチルス種株を培養
して、胞子形成させることを含む方法を包含する。
別の実施形態において、本発明は、広域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌性パエ
ニバチルス種株を同定する方法であって、ａ）パエニバチルス種株におけるＦｕｓＡ−Ａ
３を配列決定して、変異型フサリシジンシンテターゼを特徴付けること；ｂ）変異型フサ
リシジンシンテターゼを有するパエニバチルス種株の殺真菌活性をアッセイすること；な
らびにｃ）パエニバチルス種株が、変異型フサテリシジンシンテターゼを含み、野生型フ
サリシジンシンテターゼを含む参照パエニバチルス種株と比較して殺真菌活性の増加を示
す場合、広域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌性パエニバチルス種株を選択するこ
と、を含む方法に関する。この方法は、パエニバチルス種株によって産生されたパエニセ
リンおよび／またはパエニプロリキシンを定量すること、ならびにパエニバチルス種株が
、野生型フサリシジンシンテターゼを含む参照パエニバチルス種株と比較して増加レベル
のパエニセリンおよび／またはパエニプロリキシンを産生する場合、広域スペクトルの抗
真菌活性を有するパエニバチルス種株を選択すること、をさらに含む。別の態様において
、この方法は、殺真菌性パエニバチルス種株を培養して、殺真菌性発酵産物を産生するこ
とをさらに含む。
一実施形態において、本発明は、広域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌性パエニ
バチルス種株を含む抗真菌発酵（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を産生する方法であって、
ａ）パエニバチルス種株におけるＦｕｓＡ−Ａ３を配列決定して、変異型フサリシジンシ
ンテターゼを特徴付けること；ｂ）変異型フサリシジンシンテターゼを有するパエニバチ
ルス種株の殺真菌活性をアッセイすること；ｃ）パエニバチルス種株が、変異型フサリシ
ジンシンテターゼを含み、野生型フサリシジンシンテターゼを含む参照パエニバチルス種
株と比較して殺真菌活性の増加を示す場合、広域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌
性パエニバチルス種株を選択すること、ならびにｄ）殺真菌性パエニバチルス種株を培養
して、殺真菌性発酵産物を産生すること、を含む方法に関する。
いくつかの実施形態において、変異型フサリシジンシンテターゼは、ＦｕｓＡ−Ａ３に
おいて基質特異性を決定するアミノ酸残基の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくと
も３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくと
も８つ、少なくとも９つ、または１０個すべての欠失を含む。他の態様において、変異型
フサリシジンシンテターゼは、ＦｕｓＡ−Ａ３において、Ａｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、
Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ２９９、Ａｌａ３０１、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖ
ａｌ３３０、Ｃｙｓ３３１、Ｌｙｓ５１７およびこれらの組み合わせからなる群から選択
される少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失を含む。
本発明はまた、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの突然変異体も
しくはこの無細胞調製物もしくは代謝産物を、葉、茎、花、果実、根、または種子などの
植物もしくは植物部分に投与することによって、または植物または植物部分が生育する場
所、例えば土壌に施用することによって、植物を処理して、植物病病害防除する方法も包
含する。
本発明による方法において、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの
殺真菌性突然変異体を含む組成物は、植物を成長させるために使用される任意のタイプの
培地（例えば、土壌、バーミキュライト、細断された厚紙および水）において成長した任
意の植物もしくは任意の植物の任意の部分に施用するか、または蘭やビカクシダなどの空
気中で増殖する植物もしくは植物の部分に施用することができる。組成物は、例えば、噴
霧（ｓｐｒａｙｉｎｇ）、霧化（ａｔｏｍｉｚｉｎｇ）、気化（ｖａｐｏｒｉｚｉｎｇ）
、散布（ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）、散粉（ｄｕｓｔｉｎｇ）、散水（ｗａｔｅｒｉｎｇ）
、吹きかけ（ｓｑｕｉｒｔｉｎｇ）、振りかけ（ｓｐｒｉｎｋｌｉｎｇ）、注ぎ（ｐｏｕ
ｒｉｎｇ）または燻蒸（ｆｕｍｉｇａｔｉｎｇ）によって施用することができる。既に上
述したように、農業、園芸、森林、プランテーション、果樹園、苗床、有機的に栽培され
た作物、芝草および都市環境など、目的の植物が位置する任意の所望の場所で施用を行う
ことができる。
本発明の組成物は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこれから誘導
される殺真菌性突然変異体（株）を、以下の実施例に記載されている培地および他の方法
を使用することを含む当分野において周知の方法により培養することによって得ることが
できる。従来の大規模な微生物培養プロセスには、液中発酵、固相発酵または液体表面培
養が含まれる。発酵の終わりに向かって、栄養素が枯渇すると、細胞は増殖期から胞子形
成期への移行を開始し、発酵の最終産物は主に胞子、代謝産物および残留発酵培地である
。胞子形成は、パエニバチルスの自然ライフサイクルの一部であり、一般に、栄養制限に
応答して細胞によって開始される。発酵は、高レベルのコロニー形成単位を獲得し、胞子
形成を促進するように構成される。発酵から生じる培養培地中の細菌細胞、胞子および代
謝産物は、直接使用するか、または遠心分離、接線流濾過、深層濾過、および蒸発などの
従来の工業的方法によって濃縮することができる。
本発明の組成物は、発酵産物を含む。いくつかの実施形態において、濃縮発酵ブロスを
、例えば、透析濾過プロセスを介して洗浄して、残留発酵ブロスおよび代謝産物を除去す
る。本明細書で使用される用語「ブロス濃縮液」は、上記のような従来の工業的方法によ
って濃縮されたが、液体形態のままである全ブロス（発酵ブロス）を指す。本明細書で使
用される用語「発酵固形物」は、発酵ブロスが乾燥した後に残る固体物質を指す。本明細
書で使用される用語「発酵産物」は、全ブロス、ブロス濃縮物および／または発酵固形物
を指す。本発明の組成物は、発酵産物を含む。
発酵ブロスまたはブロス濃縮物は、噴霧乾燥、凍結乾燥、トレイ乾燥、流動床乾燥、ド
ラム乾燥、または蒸発などの従来の乾燥プロセスまたは方法を使用して、担体の添加の有
無にかかわらず乾燥させることができる。
得られた乾燥生成物は、粉砕または顆粒化などによりさらに加工して、特定の粒径また
は物理的フォーマットを達成することができる。以下に記載する担体は、乾燥後に添加す
ることもできる。
本発明の菌株の発酵ブロスの無細胞調製物は、発酵ブロスの抽出、遠心分離および／ま
たは濾過のような当技術分野で公知の任意の手段によって得ることができる。当業者であ
れば、いわゆる無細胞調製物は、細胞を欠いていなくてもよく、むしろ、細胞を除去する
ために使用される技術（例えば、遠心分離の速度）に応じて、ほとんど無細胞または本質
的に無細胞であることを認識するであろう。得られた無細胞調製物は、乾燥および／また
は植物または植物成長培地への施用を助ける成分と配合することができる。発酵ブロスの
ための上記の濃縮方法および乾燥技術は、無細胞調製物にも適用可能である。
一実施形態において、発酵産物は、少なくとも約１×１０４コロニー形成単位（ＣＦＵ
）の微生物（例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性
突然変異株）／ｍＬブロスを含む。別の実施形態において、発酵産物は、少なくとも約１
×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）の微生物（例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ
−５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株）／ｍＬブロスを含む。別の実施形態にお
いて、発酵産物は、少なくとも約１×１０６ ＣＦＵの微生物（例えば、パエニバチルス
種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株）／ｍＬブロスを含む。さ
らに別の実施形態において、発酵産物は、少なくとも約１×１０７ ＣＦＵの微生物（例
えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株）／
ｍＬブロスを含む。別の実施形態において、発酵産物は、少なくとも約１×１０８ ＣＦ
Ｕの微生物（例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性
突然変異株）／ｍＬブロスを含む。別の実施形態において、発酵産物は、少なくとも約１
×１０９ ＣＦＵの微生物（例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株また
はこの殺真菌性突然変異株）／ｍＬブロスを含む。別の実施形態において、発酵産物は、
少なくとも約１×１０１０ ＣＦＵの微生物（例えば、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−
５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株）／ｍＬブロスを含む。別の実施形態におい
て、発酵産物は、少なくとも約１×１０１１ ＣＦＵの微生物（例えば、パエニバチルス
種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株）／ｍＬブロスを含む。
本発明の組成物は、その特定の物理的および／または化学的性質に応じて、それらの配
合物の形態またはこれらから調製される使用形態、例えば、エアロゾル、カプセル懸濁液
、冷煙霧濃厚剤（ｃｏｌｄ−ｆｏｇｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、温煙霧濃厚剤
（ｗａｒｍ−ｆｏｇｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、カプセル化顆粒、細粒、種子
処理のための流動性濃縮物、即時使用可能な溶液、散粉剤、乳剤、水中油型乳剤、油中水
型乳剤、顆粒剤、微粒剤、油分散性散剤、油混和性流動性濃縮物、油混和性液剤、ガス剤
（加圧下）、ガス発生剤、フォーム、ペースト、殺虫剤被覆種子、懸濁濃縮物、油性分散
物、サスポエマルジョン濃縮物、可溶性濃縮物、懸濁液、湿潤散剤、可溶性散剤、粉剤お
よび顆粒剤、水溶性および水分散性の顆粒または錠剤、種子処理用の水溶性および水分散
性の散剤、湿潤散剤、活性成分に含浸させた天然生成物および合成物質、ならびに種子の
ためのポリマー物質およびコーティング材料中のマイクロカプセル化、ならびにＵＬＶ冷
煙霧および温煙霧製剤で使用することができる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は液体製剤である。液体製剤の非限定的
な例としては、懸濁濃縮液および油分散液が挙げられる。他の実施形態において、本発明
の組成物は固形製剤である。液体製剤の非限定的な例としては、凍結乾燥粉末および噴霧
乾燥粉末が挙げられる。
本発明の組成物は、効力、安定性および有用性を改善するために、および／または加工
、包装および最終用途への適用を容易にするために、細胞、無細胞調製物または代謝産物
を含む組成物に添加された製剤用不活性成分（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｅｒｔ）を
含み得る。このような製剤用不活性成分および成分は、個々にまたは組み合わせて添加可
能な担体、安定剤、栄養素、または物理的特性改変剤を含み得る。いくつかの実施形態に
おいて、担体としては、水、油、および他の有機または無機溶媒などの液体材料、ならび
に生物学的または化学合成によって誘導された無機物、ポリマーまたはポリマー複合体な
どの固体材料を挙げることができる。いくつかの実施形態において、担体は、種子または
根などの植物部分への組成物の付着を促進する結合剤または接着剤である。例えば、Ｔａ
ｙｌｏｒ，Ａ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ ｏｆ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｓｅｅｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ”，Ａｎｎｕ．Ｒｅ
ｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．２８：３２１−３３９（１９９０）を参照されたい。安定
剤は、固結防止剤、抗酸化剤、乾燥剤、保護剤または防腐剤を含み得る。栄養素としては
、糖、多糖、油、タンパク質、アミノ酸、脂肪酸およびリン酸などの炭素、窒素、および
リン源を挙げることができる。物理的特性改変剤としては、増量剤、湿潤剤、増粘剤、ｐ
Ｈ調整剤、レオロジー調節剤、分散剤、アジュバント、界面活性剤、不凍剤または着色剤
を挙げることができる。いくつかの実施形態において、発酵により生成された細胞、無細
胞調製物または代謝産物を含む組成物は、希釈剤として水と共に、または水なしで、任意
の他の製剤調製をせずに直接使用することができる。いくつかの実施形態において、製剤
用不活性成分は、発酵ブロスを濃縮した後、および乾燥中および／または乾燥後に添加さ
れる。
すべての植物および植物部分は、本発明に従って処理することができる。本文脈では、
植物は、所望および望ましくない野生植物または作物植物（天然に存在する作物植物を含
む）などの、すべての植物および植物集団を意味すると理解される。作物植物は、伝統的
な育種および最適化法によって、またはバイオテクノロジーおよび組換え法、またはこれ
らの方法の組み合わせによって得られ得る植物であり、トランスジェニック植物および植
物品種改良者の権利によって保護され得るまたはされない植物種を含む。植物部分は、苗
条、葉、花および根などの植物の空中および地下の部分および器官のすべてを意味するも
のとして理解され、例としては、葉、針葉、花軸、茎、花、子実体、果実および種子なら
びに根、塊茎および根茎を挙げることができる。植物部分はまた、作物材料および栄養繁
殖材料および生殖繁殖材料、例えば、切穂、塊茎、根茎、接ぎ穂および種子を含む。
既に上述したように、すべての植物およびこれらの部分は、本発明に従って処理するこ
とができる。好ましい実施形態において、野生株またはハイブリッド形成もしくはプロト
プラスト融合などの伝統的な生物学的育種法によって得られる植物種および植物品種、お
よびそれらの部分が処理される。さらに好ましい実施形態において、適切であれば伝統的
な方法（遺伝子組換え生物）と組み合わせて、組換え法によって得られたトランスジェニ
ック植物および植物品種ならびにそれらの部分が処理される。「部分」または「植物の部
分」または「植物部分」という用語は、本明細書に上述してある。いずれの場合も市販さ
れているか、または使用中である植物品種の植物は、本発明に従って特に好ましく処理さ
れる。植物品種は、伝統的な育種、突然変異誘発または組換えＤＮＡ技術のいずれかによ
って育種された新規な形質を有する植物を意味すると理解される。これらは品種、種属、
生物型、遺伝子型の形をとっている。
本発明による組成物による植物および植物部分の処理は、直接または慣用の処理方法、
例えば浸漬、噴霧、霧化、ミスト化、気化、散粉、煙霧、散布、発泡、塗布、拡散、注入
、潅注、液滴灌漑、などによって環境、生息場所または貯蔵空間に作用することによって
行われ、繁殖材料の場合、特に種子の場合にはさらに、乾燥種子処理方法、湿式種子処理
方法、スラリー処理方法、皮殻形成によって、１つまたは複数のコーティングなどでコー
ティングすることによって行われる。さらに、超低容量法によって活性物質を施用するこ
と、または活性物質調製物または活性物質自体を土壌に注入することが可能である。
植物の好ましい直接処理は、葉塗布処理であり、すなわち、本発明による組成物を葉に
施用し、処理頻度および施用量を問題の病原体の感染圧に合わせることが可能である。
全身的に活性な化合物の場合、本発明による組成物は、根系を介して植物に到達する。
この場合、植物の処理は、本発明による組成物を植物の環境に作用させることによって行
うことができる。これは、例えば土壌または栄養溶液に組み込む潅注、すなわち植物の位
置（例えば土壌または水耕栽培システム）に本発明による組成物の液体形態を含浸させる
ことによって、または土壌施用、すなわち、本発明による組成物を、固体形態（例えば、
顆粒の形態）で植物の位置に組み込むことによって行うことができる。水稲栽培の場合、
これは、本発明による組成物を固体使用形態（例えば、顆粒の形態）で浸水した水田に計
量することによって行うこともできる。
好ましい植物は、有用植物、観賞植物、芝、公共および家庭内で観賞植物として用いら
れる一般に使用される樹木、および森林樹木の群からの植物である。森林樹木は、木材、
セルロース、紙および木の一部から作られた製品の生産のための木を含む。
本文脈において使用される用語「有用植物」は、食料、飼料、燃料を得るための、また
は工業目的のための植物として使用される作物植物を指す。
本発明の組成物および方法で処理および／または改良することができる有用植物として
は、例えば、以下のタイプの植物を挙げることができる：芝、ブドウ、穀物、例えばコム
ギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ、米、トウモロコシおよびキビ／ソルガム；ビート
、例えばテンサイおよび飼料ビート；果実、例えば、仁果類、核果および軟質果実、例え
ば、リンゴ、ナシ、プラム、桃、アーモンド、サクランボおよびベリー類、例えば、イチ
ゴ、ラズベリー、ブラックベリーなど；豆科植物、例えば、豆類、レンズ豆、エンドウ豆
および大豆；油糧種子、例えば、ナタネ、マスタード、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ココ
ナッツ、ヒマシ油植物、カカオおよびピーナッツ；ウリ科植物、例えば、カボチャ／スカ
ッシュ、キュウリおよびメロン；繊維植物、例えば綿、亜麻、麻およびジュート；柑橘類
、例えば、オレンジ、レモン、グレープフルーツおよびタンジェリン；野菜類、例えば、
ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ種、ニンジン、タマネギ、トマト、ジャ
ガイモおよびピーマン；クスノキ科、例えば、アボカド、シナモン、樟脳、またはタバコ
、ナッツ、コーヒー、ナス、サトウキビ、茶、コショウ、ブドウ、ホップ、バナナ、ラテ
ックス植物および観賞植物、例えば花、低木、落葉樹および針葉樹などの他の植物。この
列挙は限定的ではない。
以下の植物は、本発明の組成物および方法を適用するための特に適切な標的作物である
と考えられる：綿、ナス、芝、仁果類、核果、軟質果実、トウモロコシ、コムギ、オオム
ギ、キュウリ、タバコ、ブドウ、米、穀類、ナシ、豆類、大豆、アブラナ、トマト、ピー
マン、メロン、キャベツ、ジャガイモおよびリンゴ。
本発明の方法に従って改良することができる樹木の例は、モミ属種（Ａｂｉｅｓ ｓｐ
．）、ユーカリ属種（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｓｐ．）、トウヒ属種（Ｐｉｃｅａ ｓｐ
．）、マツ属種（Ｐｉｎｕｓ ｓｐ．）、トチノキ属種（Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｓｐ．）、
スズカケノキ属種（Ｐｌａｔａｎｕｓ ｓｐ．）、シナノキ属種（Ｔｉｌｉａ ｓｐ．）
、カエデ属種（Ａｃｅｒ ｓｐ．）、ツガ属種（Ｔｓｕｇａ ｓｐ．）、トリネコ属種（
Ｆｒａｘｉｎｕｓ ｓｐ．）、ナナカマド属種（Ｓｏｒｂｕｓ ｓｐ．）、カバノキ属種
（Ｂｅｔｕｌａ ｓｐ．）、サンザシ属種（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｓｐ．）、ニレ属種（
Ｕｌｍｕｓ ｓｐ．）、コナラ属種（Ｑｕｅｒｃｕｓ ｓｐ．）、ブナ属種（Ｆａｇｕｓ
ｓｐ．）、ヤナギ属種（Ｓａｌｉｘ ｓｐ．）ハコヤナギ属種（Ｐｏｐｕｌｕｓ ｓｐ
．）である。
本発明の方法に従って改良することができる好ましい樹木は、樹木種トチノキ属（Ａｅ
ｓｃｕｌｕｓ）由来：Ａ．ヒッポカスタヌム（Ａ．ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）、Ａ．
パリフロラ（Ａ．ｐａｒｉｆｌｏｒａ）、Ａ．カルネア（Ａ．ｃａｒｎｅａ）；樹木種ス
ズカケノキ属（Ｐｌａｔａｎｕｓ）由来：Ｐ．アセリフロラ（Ｐ．ａｃｅｒｉｆｌｏｒａ
）、Ｐ．オクシデンタリス（Ｐ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、Ｐ．ラセモア（Ｐ．ｒａ
ｃｅｍｏｓａ）；樹木種トウヒ属（Ｐｉｃｅａ）由来：Ｐ．アビエス（Ｐ．ａｂｉｅｓ）
；樹種マツ属（Ｐｉｎｕｓ）由来：Ｐ．ラジアータ（Ｐ．ｒａｄｉａｔａ）、Ｐ．ポンデ
ローサ（Ｐ．ｐｏｎｄｅｒｏｓａ）、Ｐ．コントルタ（Ｐ．ｃｏｎｔｏｒｔａ）、Ｐ．シ
ルヴェストル（Ｐ．ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ）、Ｐ．エリオッティ（Ｐ．ｅｌｌｉｏｔｔｉｉ
）、Ｐ．モンチコラ（Ｐ．ｍｏｎｔｅｃｏｌａ）、Ｐ．アルビカウリス（Ｐ．ａｌｂｉｃ
ａｕｌｉｓ）、Ｐ．レジノーサ（Ｐ．ｒｅｓｉｎｏｓａ）、Ｐ．パルストリス（Ｐ．ｐａ
ｌｕｓｔｒｉｓ）、Ｐ．テーダ（Ｐ．ｔａｅｄａ）、Ｐ．フレキシリス（Ｐ．ｆｌｅｘｉ
ｌｉｓ）、Ｐ．ジェフレギ（Ｐ．ｊｅｆｆｒｅｇｉ）、Ｐ．バクシアナ（Ｐ．ｂａｋｓｉ
ａｎａ）、Ｐ．ストロブス（Ｐ．ｓｔｒｏｂｕｓ）；樹木種ユーカリ属（Ｅｕｃａｌｙｐ
ｔｕｓ）由来：Ｅ．グランディス（Ｅ．ｇｒａｎｄｉｓ）、Ｅ．グロブルス（Ｅ．ｇｌｏ
ｂｕｌｕｓ）、Ｅ．カマデンチス（Ｅ．ｃａｍａｄｅｎｔｉｓ）、Ｅ．ニテンス（Ｅ．ｎ
ｉｔｅｎｓ）、Ｅ．オブリクア（Ｅ．ｏｂｌｉｑｕａ）、Ｅ．レグナンス（Ｅ．ｒｅｇｎ
ａｎｓ）、Ｅ．ピルラルス（Ｅ．ｐｉｌｕｌａｒｕｓ）から得ることができる。
本発明の方法に従って改良することができる特に好ましい樹木は、樹木種マツ属（Ｐｉ
ｎｕｓ）由来：Ｐ．ラジオタ、Ｐ．ポンデローサ、Ｐ．コントルタ、Ｐ．シベレス、Ｐ．
ストロバス；樹木種ユーカリ属（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）由来：Ｅ．グランディス、Ｅ．
グロブルス、Ｅ．カマデンチスである。
本発明の方法に従って改善することができる非常に特に好ましい樹木は、セイヨウトチ
ノキ、スズカケノキ科（Ｐｌａｔａｎａｃｅａｅ）、菩提樹、楓である。
本発明は、寒地型芝草および暖地型芝草を含む任意の芝草に施用することもできる。寒
地型芝草の例としては、ケンタッキーブルーグラス（ポア・プラテンシスＬ．（Ｐｏａ
ｐｒａｔｅｎｓｉｓ Ｌ．））、オオスズメノカタビラ（ポア・トリビアリスＬ．（Ｐｏ
ａ ｔｒｉｖｉａｌｉｓ Ｌ．））、カナダブルーグラス（ポア・コンプレッサＬ．（Ｐ
ｏａ ｃｏｍｐｒｅｓｓａ Ｌ．））、スズメノカタビラ（ポア・アンヌアＬ．（Ｐｏａ
ａｎｎｕａ Ｌ．））、アップランドブルーグラス（ポア・グラウカンタ ガウジン（
Ｐｏａ ｇｌａｕｃａｎｔｈａ Ｇａｕｄｉｎ））、ウッドブルーグラス（ポア・ネモラ
リスＬ．（Ｐｏａ ｎｅｍｏｒａｌｉｓ Ｌ．））およびバルバスブルーグラス（ポア・
ブルボサＬ．（Ｐｏａ ｂｕｌｂｏｓａ Ｌ．））などのブルーグラス類（ポア属種（Ｐ
ｏａ ｓｐｐ．））；クリーピングベントグラス（アグロスティス・パルストリスＨｕｄ
ｓ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｐａｌｕｓｔｒｉｓ Ｈｕｄｓ．））、コロニアルベントグラ
ス（アグロスティス・テヌイスＳｉｂｔｈ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｔｅｎｕｉｓ Ｓｉｂ
ｔｈ．））、ベルベットベントグラス（アグロスティス・カニナＬ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ
ｃａｎｉｎａ Ｌ．））、サウスジャーマンミックスドベントグラス（アグロスティス
・テニウスＳｉｂｔｈ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｔｅｎｉｕｓ Ｓｉｂｔｈ．）、アグロス
ティス・カニナＬ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｃａｎｉｎａ Ｌ．）およびアグロスティス・
パルストリスＨｕｄｓ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｐａｌｕｓｔｒｉｓ Ｈｕｄｓ．））を含
むアグロスティス属種（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｓｐｐ．）、およびコヌカグサ（アグロステ
ィス・アルバＬ．（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ａｌｂａ Ｌ．））などのベントグラス類（アグ
ロスティス属種（Ａｇｒｏｓｔｉｓ ｓｐｐ．））；
レッドフェスク（フェストゥカ・ルブラＬ．属種ルブラ（Ｆｅｓｔｕｃａ ｒｕｂｒａ
Ｌ．ｓｐｐ．ｒｕｂｒａ））、クリーピングフェスク（フェストゥカ・ルブラＬ．（Ｆ
ｅｓｔｕｃａ ｒｕｂｒａ Ｌ．））、チューイングスフェスク（フェストゥカ・ルブラ
・コミュタタＧａｕｄ．（Ｆｅｓｔｕｃａ ｒｕｂｒａ ｃｏｍｍｕｔａｔａ Ｇａｕｄ
．））、シープフェスク（フェストゥカ・オビナＬ．（Ｆｅｓｔｕｃａ ｏｖｉｎａ Ｌ
．））、ハードフェスク（フェストゥカ・ロンギホリアＴｈｕｉｌｌ．（Ｆｅｓｔｕｃａ
ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ Ｔｈｕｉｌｌ．））、ヘアフェスク（フェストゥカ・カピラタ
Ｌａｍ．（Ｆｅｓｔｕｃａ ｃａｐｉｌｌａｔａ Ｌａｍ．））、トールフェスク（フェ
ストゥカ・アルンジナセアＳｃｈｒｅｂ．（Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ
Ｓｃｈｒｅｂ．））およびメドウフェスク（フェストゥカ・エラノルＬ．（Ｆｅｓｔｕｃ
ａ ｅｌａｎｏｒ Ｌ．））などのウシノケグサ類（フェストゥカ属種（Ｆｅｓｔｕｃａ
ｓｐｐ．））；
ネズミムギ（ロリウム・ムルチフロルムＬａｍ．（Ｌｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒ
ｕｍ Ｌａｍ．））、ホソムギ（ロリウム・ペレンＬ．（Ｌｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅ
Ｌ．））およびイタリアンライグラス（ロリウム・ムルチフロルムＬａｍ．（Ｌｏｌｉ
ｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ Ｌａｍ．））などのドクムギ類（ロリウム属種（Ｌｏｌ
ｉｕｍ ｓｐｐ．））；
ならびにフェアウェイウィートグラス（アグロピュロン・クリスタツム（Ｌ．）Ｇａｅ
ｒｔｎ．（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ ｃｒｉｓｔａｔｕｍ（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．））、クレ
ステッドウィートグラス（アグロピュロン・デセルトルム（Ｆｉｓｃｈ．）Ｓｃｈｕｌｔ
．（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ ｄｅｓｅｒｔｏｒｕｍ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｓｃｈｕｌｔ．）およ
びウェスタンウィートグラス（アグロピュロン・スミチイＲｙｄｂ．（Ａｇｒｏｐｙｒｏ
ｎ ｓｍｉｔｈｉｉ Ｒｙｄｂ．））などのカモジグサ類（アグロピュロン属種（Ａｇｒ
ｏｐｙｒｏｎ ｓｐｐ．））である。
さらなる寒地型芝草の例は、ビーチグラス（アンモフィラ・ブレビリグラタＦｅｒｎ．
（Ａｍｍｏｐｈｉｌａ ｂｒｅｖｉｌｉｇｕｌａｔａ Ｆｅｒｎ．））、スムーズブロム
グラス（ブロムス・イネルミスＬｅｙｓｓ．（Ｂｒｏｍｕｓ ｉｎｅｒｍｉｓ Ｌｅｙｓ
ｓ．））、オオアワガエリ（プレウム・プラテンスＬ．（Ｐｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓ
ｅ Ｌ．））、サンドカットテイル（プレウム・スブラツムＬ．（Ｐｈｌｅｕｍ ｓｕｂ
ｕｌａｔｕｍ Ｌ．））、カモガヤ（ダクチルイス・グロメラタＬ．（Ｄａｃｔｙｌｉｓ
ｇｌｏｍｅｒａｔａ Ｌ．））、アレチタチドジョウツナギ（プッシネリア・ジスタン
ス（Ｌ．）Ｐａｒｌ．（Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ ｄｉｓｔａｎｓ（Ｌ．）Ｐａｒｌ．）
）およびクシガヤ（シノスルス・クリスタツスＬ．（Ｃｙｎｏｓｕｒｕｓ ｃｒｉｓｔａ
ｔｕｓ Ｌ．））などのガマである。
暖地型芝草の例は、ギョウギシバ（キュノドン属種Ｌ．Ｃ．Ｒｉｃｈ（Ｃｙｎｏｄｏｎ
ｓｐｐ．Ｌ．Ｃ．Ｒｉｃｈ））、ノシバ（ゾイシア属種Ｗｉｌｌｄ．（Ｚｏｙｓｉａ
ｓｐｐ．Ｗｉｌｌｄ．））、イヌシバ（ステノタフルム・セクンダツム・ワルト・クント
ズ（Ｓｔｅｎｏｔａｐｈｒｕｍ ｓｅｃｕｎｄａｔｕｍ Ｗａｌｔ Ｋｕｎｔｚｅ））、
センチピードグラス（エレモクロア・オフィウロイデス・ムンロＨａｃｋ．（Ｅｒｅｍｏ
ｃｈｌｏａ ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ Ｍｕｎｒｏ Ｈａｃｋ．））、カーペットグラス
（アキソノプス・アフィニス・カーゼ（Ａｘｏｎｏｐｕｓ ａｆｆｉｎｉｓ Ｃｈａｓｅ
））、バヒアグラス（パスパルム・ノタツム・フルッグ（Ｐａｓｐａｌｕｍ ｎｏｔａｔ
ｕｍ Ｆｌｕｇｇｅ））、キクユグラス（ペンニセツム・クランデスチヌムＨｏｃｈｓｔ
．ｅｘ Ｃｈｉｏｖ．（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｃｌａｎｄｅｓｔｉｎｕｍ Ｈｏｃｈｓ
ｔ．ｅｘ Ｃｈｉｏｖ．））、バッファローグラス（ブクロ・ダクチルオイドス（Ｎｕｔ
ｔ．）Ｅｎｇｅｌｍ．（Ｂｕｃｈｌｏｅ ｄａｃｔｙｌｏｉｄｓ（Ｎｕｔｔ．）Ｅｎｇｅ
ｌｍ．））、メダカスゲ（ボウテロウア・グラシリス（Ｈ．Ｂ．Ｋ．）Ｌａｇ．ｅｘ グ
リフィトス（Ｂｏｕｔｅｌｏｕａ ｇｒａｃｉｌｉｓ（Ｈ．Ｂ．Ｋ．）Ｌａｇ．ｅｘ Ｇ
ｒｉｆｆｉｔｈｓ））、シーショアパスパラム（パスパルム・バギナツム・スワルトズ（
Ｐａｓｐａｌｕｍ ｖａｇｉｎａｔｕｍ Ｓｗａｒｔｚ））およびアゼガヤモドキ（ボウ
テロウア・クルチペンズラ（Ｍｉｃｈｘ．Ｔｏｒｒ．）（Ｂｏｕｔｅｌｏｕａ ｃｕｒｔ
ｉｐｅｎｄｕｌａ（Ｍｉｃｈｘ．Ｔｏｒｒ．）））である。寒地型芝草は概して、本発明
による使用に好ましい。特に好ましいのは、ブルーグラス、ベントグラスおよびコヌカグ
サ、ウシノケグサ類およびドクムギ類である。ベントグラスが特に好ましい。
本発明の組成物は、強力な殺菌活性を有し、作物保護および材料の保護における望まし
くない微生物、例えば、真菌および細菌の防除に使用することができる。
本発明はまた、本発明の組成物が、植物病原性真菌、植物病原性細菌および／またはこ
れらの生息地に施用されることを特徴とする、望ましくない微生物を防除する方法に関す
る。
殺真菌剤は、植物病原性真菌の防除のための作物保護に使用することができる。それら
は、特に、ネコブカビ類（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）、ペロノスポ
ラミセテス（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）（異名卵菌類）、ツボカビ類（Ｃ
ｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、接合菌類（Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ）、子嚢菌類（
Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）、担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）および不完全菌
類（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）（異名Ｆｕｎｇｉ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ）のメン
バーである土壌媒介性病原体を含む、広域スペクトルの植物病性真菌に対する傑出した効
力により特徴付けられる。いくつかの殺真菌剤は、全身的に活性であり、葉面、種子粉衣
または土壌殺真菌剤として植物保護に使用することができる。さらに、それらはとりわけ
木材または植物の根に蔓延する真菌との戦いに適している。
殺菌剤は、シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、ツツジ科（Ｒｈ
ｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、コリ
ネバクテリア科（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）およびストレプトミセス科（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）の防除のための作物保護に使用することができる
。
本発明に従って処理することができる真菌病害の病原体の非限定的な例には以下のもの
が含まれる：
うどんこ病病原体により引き起こされる病害、例えば、ブルメリア属種（Ｂｌｕｍｅｒ
ｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばブルメリア・グラミニス（Ｂｌｕｍｅｒｉａ ｇｒａｍ
ｉｎｉｓ）；ポドスパエラ属種（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばポ
ドスパエラ・レウコトリカ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｌｅｕｃｏｔｒｉｃｈａ）；スパ
エロテカ属種（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばスパエロテカ・フ
リギネア（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｆｕｌｉｇｉｎｅａ）；ウンキヌラ属種（Ｕｎｃ
ｉｎｕｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばウンキヌラ・ネカトル（Ｕｎｃｉｎｕｌａ ｎｅ
ｃａｔｏｒ）；
さび病病原体により引き起こされる病害、例えば、ギュムノスポランギウム属種（Ｇｙ
ｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばギュムノスポランギウム・サビ
ナエ（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｓａｂｉｎａｅ）；ヘミレイア属種（Ｈｅｍｉ
ｌｅｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばヘミレイア・ワスタトリクス（Ｈｅｍｉｌｅｉａ
ｖａｓｔａｔｒｉｘ）；パコプソラ属種（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例
えばパコプソラ・パキュリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）およびパ
コプソラ・メイボミアエ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｍｅｉｂｏｍｉａｅ）；プッキニア属
種（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばプッキニア・レコンジタ（Ｐｕｃｃｉ
ｎｉａ ｒｅｃｏｎｄｉｔｅ）、Ｐ．トリチシナ（Ｐ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）、Ｐ．グラ
ミニス（Ｐ．ｇｒａｍｉｎｉｓ）またはＰ．ストリフォルミス（Ｐ．ｓｔｒｉｉｆｏｒｍ
ｉｓ）；ウロミセス属種（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばウロミセス・ア
ペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）；
卵菌類の群由来の病原体により引き起こされる病害、例えば、アルブゴ属種（Ａｌｂｕ
ｇｏ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアルブゴ・カンディダ（Ａｌｇｕｂｏ ｃａｎｄｉｄａ
）；ブレミア属種（Ｂｒｅｍｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばブレミア・ラクトゥカエ（
Ｂｒｅｍｉａ ｌａｃｔｕｃａｅ）；ペロノスポラ属種（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐ
ｅｃｉｅｓ）、例えばペロノスポラ・ピシ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｐｉｓｉ）または
Ｐ．ブラシカエ（Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ）；フィトフトラ属種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏ
ｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばフィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ
ｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）；プラスモパラ属各種（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ ｓｐｅｃ
ｉｅｓ）、例えばプラスモパラ・ビチコラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ ｖｉｔｉｃｏｌａ）
；シュードペロノスポラ属種（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）
、例えばシュードペロノスポラ・フムリ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｈｕｍ
ｕｌｉ）またはシュードペロノスポラ・クベンシス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒ
ａ ｃｕｂｅｎｓｉｓ）；ピシウム属種（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばピ
シウム・ウルティムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）；
例えば以下のものより引き起こされる斑点病および葉萎凋病、アルテルナリア属種（Ａ
ｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎ
ａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）；セルコスポラ属種（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ
）、例えばセルコスポラ・ベティコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｂｅｔｉｃｏｌａ）；ク
ラジオスポリウム属各種（Ｃｌａｄｉｏｓｐｏｒｉｕｍｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばクラジ
オスポリウム・ククメリヌム（Ｃｌａｄｉｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ）
；コクリオボラス属種（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばコクリオ
ボラス・サティバス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）（分生子形態：ドレ
クスレラ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ）、異名：ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏ
ｓｐｏｒｉｕｍ））、コクリオボラス・ミヤベアヌス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｍｉ
ｙａｂｅａｎｕｓ）；コレトトリカム属種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｅｃｉ
ｅｓ）、例えばコレトトリカム・リンデムタニウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌ
ｉｎｄｅｍｕｔｈａｎｉｕｍ）；シクロコニウム属種（Ｃｙｃｌｏｃｏｎｉｕｍ ｓｐｅ
ｃｉｅｓ）、例えばシクロコニウム・オレアギヌム（Ｃｙｃｌｏｃｏｎｉｕｍ ｏｌｅａ
ｇｉｎｕｍ）；ディアポルテ属種（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばディ
アポルテ・シトリ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｃｉｔｒｉ）；エルシノエ属種（Ｅｌｓｉｎｏ
ｅ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばエルシノエ・ファウセッチイ（Ｅｌｓｉｎｏｅ ｆａｗｃ
ｅｔｔｉｉ）；グロエオスポリウム属種（Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）
、例えばグロエオスポリウム・ラエチコロル（Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌａｅｔｉｃ
ｏｌｏｒ）；グロメレラ属種（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばグロメ
レラ・シングラータ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｃｉｎｇｕｌａｔａ）；グイグナルディア
属種（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばグイグナルディア・ビドウェリ
（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｂｉｄｗｅｌｌｉ）；レプトスファエリア属種（Ｌｅｐｔｏｓ
ｐｈａｅｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばレプトスファエリア・マクランス（Ｌｅｐｔ
ｏｓｐｈａｅｒｉａ ｍａｃｕｌａｎｓ）、レプトスファエリア・ノドラム（Ｌｅｐｔｏ
ｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）；マグナポルテ属種（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、例えばマグナポルテ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅ
ａ）；マルソニア属種（Ｍａｒｓｓｏｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばマルソニア・コ
ロナリア（Ｍａｒｓｓｏｎｉａ ｃｏｒｏｎａｒｉａ）；ミクロドキウム属種（Ｍｉｃｒ
ｏｄｏｃｈｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばミクロドキウム・ニバレ（Ｍｉｃｒｏｄｏ
ｃｈｉｕｍ ｎｉｖａｌｅ）；ミコスフェレラ属種（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、例えばミコスフェレラ・グラミニコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ
ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、Ｍ．アラキジコラ（Ｍ．ａｒａｃｈｉｄｉｃｏｌａ）およ
びＭ．フィジエンシス（Ｍ．ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ）；ファエオスフェリア属種（Ｐｈａｅ
ｏｓｐｈａｅｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばファエオスフェリア・ノドラム（Ｐｈａ
ｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）；ピレノフォラ属種（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ
ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばピレノフォラ・テレス（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｅｒｅ
ｓ）、ピレノフォラ・トリチシ・リペンティス（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃ
ｉ ｒｅｐｅｎｔｉｓ）；ラムラリア属種（Ｒａｍｕｌａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例
えばラムラリア・コロ−シグニ（Ｒａｍｕｌａｒｉａ ｃｏｌｌｏ−ｃｙｇｎｉ）、ラム
ラリア・アレオラ（Ｒａｍｕｌａｒｉａ ａｒｅｏｌａ）；リンコスポリウム属種（Ｒｈ
ｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばリンコスポリウム・セカリス（Ｒ
ｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｅｃａｌｉｓ）；セプトリア属種（Ｓｅｐｔｏｒｉａ
ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばセプトリア・アピイ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ａｐｉｉ）、セプト
リア・リコペルシイ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｉ）；チフラ属種（Ｔｙｐ
ｈｕｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばチフラ・インカルナタ（Ｔｙｐｈｕｌａ ｉｎｃａ
ｒｎａｔａ）；ベンツリア属種（Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばベンツリ
ア・イナエカリス（Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）；
例えば以下のものにより引き起こされる根および茎の病害、コルシキウム属種（Ｃｏｒ
ｔｉｃｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばコルシキウム・グラミネアルム（Ｃｏｒｔｉｃ
ｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）；フサリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅ
ｓ）、例えばフサリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）；
ゲウマノミセス属種（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばゲウマ
ノミセス・グラミニス（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ）；リゾクト
ニア属種（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばリゾクトニア・ソラニ（
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）；例えばサロクラジウム・オリゼ（Ｓａｒｏｃ
ｌａｄｉｕｍ ｏｒｙｚａｅ）により引き起こされるサロクラジウム病；例えばスクレロ
チウム・オリゼ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｏｒｙｚａｅ）により引き起こされるスクレロ
チウム病；タペシア属種（Ｔａｐｅｓｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばタペシア・アクフ
ォルミス（Ｔａｐｅｓｉａ ａｃｕｆｏｒｍｉｓ）；チエラビオプシス属種（Ｔｈｉｅｌ
ａｖｉｏｐｓｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばチエラビオプシス・バシコラ（Ｔｈｉｅｌ
ａｖｉｏｐｓｉｓ ｂａｓｉｃｏｌａ）；
例えば以下のものに引き起こされる穂および円錐花序の病害（トウモロコシ穂軸を含め
る。）、アルテルナリア属種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）例えば、アルテ
ルナリア種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｐ．）；アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｆｌａｖｕｓ）；クラドスポリウム属種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅ
ｓ）、例えばクラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）；クラビセプス属種（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｓｐｅｃｉ
ｅｓ）、例えばクラビセプス・プルプレア（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｐｕｒｐｕｒｅａ）；
フサリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばフサリウム・クルモルム
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）；ジベレラ属種（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｓｐ
ｅｃｉｅｓ）、例えばジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ）；モノグラ
フェラ属種（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばモノグラフェラ・
ニバリス（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ ｎｉｖａｌｉｓ）；セプトリア属種（Ｓｅｐｔ
ｏｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばセプトリア・ノドルム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｎｏｄ
ｏｒｕｍ）；
例えば以下のものなどの黒穂菌類により引き起こされる病害、スファセロテカ属種（Ｓ
ｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばスファセロテカ・レイリアナ（Ｓ
ｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ ｒｅｉｌｉａｎａ）；チレチア属種（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、例えばチレチア・カリエス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｃａｒｉｅｓ）、Ｔ．
コントロベルサ（Ｔ．ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａ）；ウロシスティス属種（Ｕｒｏｃｙｓｔ
ｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばウロシスティス・オックルタ（Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓ ｏ
ｃｃｕｌｔａ）；ウスティラゴ属種（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばウス
ティラゴ・ヌダ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｎｕｄａ）、Ｕ．ヌダ トリチシ（Ｕ．ｎｕｄａ
ｔｒｉｔｉｃｉ）；
例えば以下のものにより引き起こされる果実腐敗、アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ｆｌａｖｕｓ）；ボトリティス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例え
ばボトリティス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）；ペニシリウム属種（
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばペニシリウム・エクスパンスム（Ｐ
ｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ）およびＰ．プルプロゲヌム（Ｐ．ｐｕｒｐｕ
ｒｏｇｅｎｕｍ）；スクレロチニア属種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、
例えばスクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉ
ｏｒｕｍ）；バーティシリウム属種（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例え
ばバーティシリウム・アルボアトルム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍ ａｌｂｏａｔｒｕｍ）
；
例えば以下のものにより引き起こされる種子および土壌媒介性の腐敗、カビ、萎凋、腐
敗および苗立ち枯れ病、アルテルナリア属種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）
、例えばアルテルナリア・ブラシキコラ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏ
ｌａ）；アファノミセス属種（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアフ
ァノミセス・エウテイケス（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ ｅｕｔｅｉｃｈｅｓ）により引き
起こされる；アスコキタ属種（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアスコキ
タ・レンティス（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｌｅｎｔｉｓ）により引き起こされる；アスペル
ギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばアスペルギルス・フラ
ブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）により引き起こされる；クラドスポリウ
ム属種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばクラドスポリウム・ヘル
バルム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｕｍ）により引き起こされる；コクリ
オボルス属種（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばコクリオボルス・
サチブス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、（分生子形態：ドレクスレラ
（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ）、ビポラリス（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ）異名：ヘルミントスポリ
ウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ））により引き起こされる；コレトトリカム属
種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばコレトトリカム・コッコ
デス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｏｃｃｏｄｅｓ）により引き起こされる；フサ
リウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばフサリウム・クルモルム（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）により引き起こされる；ジベレラ属種（Ｇｉｂｂｅ
ｒｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅ
ａｅ）により引き起こされる；マクロフォミナ属種（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｓｐｅ
ｃｉｅｓ）、例えばマクロフォミナ・ファゼオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａ
ｓｅｏｌｉｎａ）により引き起こされる；モノグラフェラ属種（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌ
ｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばモノグラフェラ・ニバリス（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌ
ａ ｎｉｖａｌｉｓ）により引き起こされる；ペニシリウム属種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばペニシリウム・エクスパンスム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｅｘｐａｎｓｕｍ）により引き起こされる；フォーマ属種（Ｐｈｏｍａ ｓｐｅｃｉｅ
ｓ）、例えばフォーマ・リンガム（Ｐｈｏｍａ ｌｉｎｇａｍ）により引き起こされる；
フォモプシス属種（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばフォモプシス・ソイ
ヤエ（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｏｊａｅ）により引き起こされる；フィトフトラ属種（Ｐ
ｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばフィトフトラ・カクトルム（Ｐｈｙ
ｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｒｕｍ）により引き起こされる；ピュレノフォラ属種（
Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばピュレノフォラ・グラミネア（Ｐｙ
ｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｇｒａｍｉｎｅａ）により引き起こされる；ピリクラリア属種（Ｐ
ｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばピリクラリア・オリゼ（Ｐｙｒｉｃｕ
ｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ）により引き起こされる；ピシウム属種（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、例えばピシウム・ウルティムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）に
より引き起こされる；リゾクトニア属種（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、
例えばリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）により引き起こ
される；リゾプス属種（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばリゾプス・オリゼ
（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）により引き起こされる；スクレロチウム属種（Ｓｃ
ｌｅｒｏｔｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばスクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒ
ｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ）により引き起こされる；セプトリア属種（Ｓｅｐｔｏｒｉ
ａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばセプトリア・ノドルム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｎｏｄｏｒｕ
ｍ）により引き起こされる；テュプラ属各種（Ｔｙｐｈｕｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例え
ばテュプラ・インカルナタ（Ｔｙｐｈｕｌａ ｉｎｃａｒｎａｔａ）により引き起こされ
る；ウェルティキッリウム属各種（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例え
ばウェルティキッリウム・ダリアエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）によ
り引き起こされる；
例えばネクトリア属種（Ｎｅｃｔｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばネクトリア・ガリ
ゲナ（Ｎｅｃｔｒｉａ ｇａｌｌｉｇｅｎａ）により引き起こされるがん腫病、虫こぶお
よびてんぐ巣病、；
例えばモニリニア属種（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばモニリニア・
ラクサ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｌａｘａ）により引き起こされる萎凋、；
例えば、エクソバシディウム属種（Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例え
ばエクソバシディウム・ベクサンス（Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｖｅｘａｎｓ）により引
き起こされる葉のブリスターまたはリーフカール病害、；
タフリナ属種（Ｔａｐｈｒｉｎａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばタフリナ・デフォルマン
ス（Ｔａｐｈｒｉｎａ ｄｅｆｏｒｍａｎｓ）；
例えば以下のものにより引き起こされる木本植物の衰退性病害、例えばパエモニエラ・
クラミドスポラ（Ｐｈａｅｍｏｎｉｅｌｌａ ｃｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ）、パエオアク
レモニウム・アレオピルム（Ｐｈａｅｏａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ａｌｅｏｐｈｉｌｕｍ）
およびフォミチポリア・メジテラネア（Ｆｏｍｉｔｉｐｏｒｉａ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎ
ｅａ）により引き起こされるエスカ病；ユーティパ・ラタ（Ｅｕｔｙｐａ ｌａｔａ）に
よって引き起こされるユーティパダイバック（Ｅｕｔｙｐａ ｄｙｅｂａｃｋ）；ガノデ
ルマ・ボニネンス（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｂｏｎｉｎｅｎｓｅ）によって引き起こされる
霊芝病；例えばリジドポルス・リグノサス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ ｌｉｇｎｏｓｕｓ
）によって引き起こされるリジドポラス病；
例えばボトリティス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばボトリティス
・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）により引き起こされる花および種子の
病害、；
例えば以下のものにより引き起こされる塊茎の病害、リゾクトニア属種（Ｒｈｉｚｏｃ
ｔｏｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎｉ）；ヘルミントスポリウム属種（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）、例えばヘルミントスポリウム・ソラニ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉ
ｕｍ ｓｏｌａｎｉ）；
例えば、プラスモディオフォラ属種（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ
）、例えば、プラスモディオフォラ・ブラシカエ（Ｐｌａｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａ
ｓｓｉｃａｅ）により引き起こされる根こぶ、；
例えば以下のものなどの細菌性病原体により引き起こされる病害、キサントモナス属種
（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばキサントモナス・カンペストリス
・パソバー・オリゼ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｏｒｙｚ
ａｅ）；シュードドモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えばシ
ュードモナス・シリンゲ・パソバー・ラクリマンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉ
ｎｇａｅ ｐｖ．ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）；エルウィニア属種（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐｅ
ｃｉｅｓ）、例えばエルウィニア・アミロボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ
）。
以下の大豆の病害を優先的に防除することができる：
例えば、以下のものにより引き起こされる、葉、茎、さやおよび種子における真菌性病
害、アルテルナリア斑点病（アルテルナリア属種アトランス・テヌイシッマ（Ａｌｔｅｒ
ｎａｒｉａ ｓｐｅｃ．ａｔｒａｎｓ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ））、炭疽病（コレトトリ
カム・グロエオスポロイデス・デマチウム変種トルンカツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈ
ｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｏｉｄｅｓ ｄｅｍａｔｉｕｍ ｖａｒ．ｔｒｕｎｃａｔｕｍ
））、褐斑病（セプトリア・グリシネス（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、紫
斑病（セルコスポラ・キクチイ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｋｉｋｕｃｈｉｉ））、コアネ
フォラ葉枯病（コアネフォラ・インフンディブリフェラ・トリスポラ（Ｃｈｏａｎｅｐｈ
ｏｒａ ｉｎｆｕｎｄｉｂｕｌｉｆｅｒａ ｔｒｉｓｐｏｒａ）（異名））、ダクツリオ
フォラ斑点病（ダクツリオフォラ・グリシネス（Ｄａｃｔｕｌｉｏｐｈｏｒａ ｇｌｙｃ
ｉｎｅｓ））、べと病（ペロノスポラ・マンスリカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｍａｎｓ
ｈｕｒｉｃａ））、ドレクスレラ胴枯病（ドレクスレラ・グリシニ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒ
ａ ｇｌｙｃｉｎｉ））、斑点病（セルコスポラ・ソイナ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏ
ｊｉｎａ））、そばかす病（レプトスファエルリナ・トリフォリイ（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａ
ｅｒｕｌｉｎａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ））、灰星病（フィロスチクタ・ソジャエコラ（Ｐｈ
ｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ ｓｏｊａｅｃｏｌａ））、黒点病（フォモプシス・ソジャエ（Ｐ
ｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｏｊａｅ））、うどんこ病（ミクロスファエラ・ディフサ（Ｍｉｃ
ｒｏｓｐｈａｅｒａ ｄｉｆｆｕｓａ））、ピレノカエタ斑点病（ピレノカエタ・グリシ
ネス（Ｐｙｒｅｎｏｃｈａｅｔａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、葉腐病（リゾクトニア・ソラ
ニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ））、さび病（ファコプソラ・パキリジ（Ｐ
ｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、ファコプソラ・メイボミアエ（Ｐｈａｋ
ｏｐｓｏｒａ ｍｅｉｂｏｍｉａｅ））、黒星病（スファセロマ・グリシネス（Ｓｐｈａ
ｃｅｌｏｍａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、ステムフィリウム葉枯病（ステムフィリウム・ボ
トリオスム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ｂｏｔｒｙｏｓｕｍ））、褐色輪紋病（コリネス
ポラ・カッシコラ（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ））。
例えば以下のものに引き起こされる根および茎基部における真菌性病害、黒根腐病（カ
ロネクトリア・クロタラリアエ（Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｃｒｏｔａｌａｒｉａｅ））
、炭腐病（マクロフォミナ・ファゼオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌ
ｉｎａ））、赤かび病（フサリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏ
ｒｕｍ）、フサリウム・オルトセラス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｒｔｈｏｃｅｒａｓ）、フ
サリウム・セミテクタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ）、フサリウム・エ
クイセチ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｅｑｕｉｓｅｔｉ））、ミコレプトジスクス根腐病（ミュ
コレプトジスカス・テレストリス（Ｍｙｃｏｌｅｐｔｏｄｉｓｃｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒ
ｉｓ））、根腐病（ネオコスモスポラ・バシンフェクタ（Ｎｅｏｃｏｓｍｏｓｐｏｒａ
ｖａｓｉｎｆｅｃｔａ））、黒点病（ディアポルテ・パセオロルム（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ
ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ））、茎腐爛病（ディアポルテ・ファセオロルム・変種カウリ
ボラ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ ｖａｒ．ｃａｕｌｉｖｏｒａ））
、茎疫病（フィトフトラ・メガスペルマ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｇａｓｐｅｒ
ｍａ））、落葉病（ピアロファオラ・グレガタ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｇｒｅｇａｔ
ａ））、根茎腐敗病（ピシウム・アファニデルマトム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄ
ｅｒｍａｔｕｍ）、ピシウム・イッレグラレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）
、ピシウム・デバリアヌム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）、ピシウム・ミリ
オチルム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｙｒｉｏｔｙｌｕｍ）、ピシウム・ウルティムム（Ｐｙｔ
ｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ））、リゾクトニア根腐病（リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚ
ｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ））、菌核病（スクレロチニア・スクレロチオルム（Ｓｃ
ｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ））、スクレロチニアサウザンブライト
病（スクレロチニア・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｒｏｌｆｓｉｉ））、チエ
ラビオプシス根腐病（ティエラウィオプシス・バシコラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ
ｂａｓｉｃｏｌａ））。
本発明の殺真菌性組成物は、植物病原性真菌の治癒的または防御的／予防的防除に使用
することができる。したがって、本発明はまた、種子、植物もしくは植物部分、果実また
は植物が成長する土壌に施用される本発明の組成物の使用によって植物病原性真菌を防除
するための治癒的および防御的方法に関する。
組成物が、植物病害を防除するために必要な濃度で植物に十分耐容されているという事
実は、植物の地上部分、繁殖ストックおよび種子および土壌の処理を可能にする。
本発明によれば、栽培品種および植物品種（植物品種または植物育種者の権利によって
保護可能であるか否かにかかわらず）を含む、すべての植物および植物部分を処理するこ
とができる。栽培品種および植物品種は、倍加半数体、プロトプラスト融合体、ランダム
および指向性突然変異誘発、分子または遺伝子マーカーの使用による、または生物工学お
よび遺伝子工学による、１または複数のバイオテクノロジー方法によって支援または補完
できる従来の増殖および育種法によって得られる植物であり得る。
特定の態様において、本発明の組成物は、約１×１０８〜約１×１０１４コロニー形成
単位（ＣＦＵ）の殺真菌性パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真
菌性突然変異株／ヘクタールで施用される。他の態様において、本発明の組成物は、約１
×１０９〜約１×１０１３コロニー形成単位（ＣＦＵ）の殺真菌性パエニバチルス種ＮＲ
ＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真菌性突然変異株／ヘクタールで施用される。さら
に他の態様において、本発明の組成物は、約１×１０１０〜約１×１０１２コロニー形成
単位（ＣＦＵ）の殺真菌性パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株またはこの殺真
菌性突然変異株／ヘクタールで施用される。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約０．１ｋｇ〜約１０ｋｇの発酵固
形分／ヘクタールで施用される。他の実施形態において、本発明の組成物は、約０．２５
ｋｇ〜約７．５ｋｇの発酵固形分／ヘクタールで施用される。さらに他の実施形態におい
て、本発明の組成物は、約０．５ｋｇ〜約５ｋｇの発酵固形分／ヘクタールで施用される
。本発明の組成物は、約１ｋｇまたは約２ｋｇの発酵固形分／ヘクタールで施用すること
もできる。
本発明の組成物は、植物が良好な耐容性を示す場合、好都合な恒温毒性を有し、環境に
十分認容性であり、植物および植物器官を保護し、収穫高を向上させ、収穫した材料の品
質を改善するのに適している。本発明の組成物は、好ましくは、作物保護組成物として使
用することができる。それらは、通常の感受性の高い種および耐性の種に対して、ならび
に発達の全段階またはいくつかの段階に対して活性である。
本発明に従って処理可能な植物としては、下記の主要な作物が挙げられる：トウモロコ
シ、大豆、アルファルファ、綿、ヒマワリ、ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａ
ｐｕｓ）（例えばキャノーラ、ナタネ）、ブラシカ・ラパ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ
）、Ｂ．ジャンクア（Ｂ．ｊｕｎｃｅａ）例えば、（菜の花、カラシナ）およびブラシカ
・カリナタ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｒｉｎａｔａ）などのアブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃ
ａ）油種子、ヤシ科種（Ａｒｅｃａｃｅａｅ ｓｐ．）（アブラヤシ、ココナッツ）、米
、コムギ、テンサイ、サトウキビ、オートムギ、ライムギ、オオムギ、キビおよびモロコ
シ、ライコムギ、亜麻、ナッツ、ブドウおよびブドウの木および種々の植物分類群、例え
ば、ロサケアエ属種（Ｒｏｓａｃｅａｅ ｓｐ．）からのさまざまな果実および野菜（例
えば、リンゴおよびナシのような仁果類だけでなく、アンズ、サクランボ、アーモンド、
プラムおよび桃などの核果類、ならびにイチゴ、ラズベリー、レッドカーラントラントお
よびブラックカーラントならびにグーズベリーなどのベリー果実）、リベシオイダエ属種
（Ｒｉｂｅｓｉｏｉｄａｅ ｓｐ．）、ユグランダセアエ属種（Ｊｕｇｌａｎｄａｃｅａ
ｅ ｓｐ．）、ベトゥラセアエ属種（Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ ｓｐ．）、アナカルディア
セアエ属種（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ ｓｐ．）、ファガセアエ属種（Ｆａｇａｃｅ
ａｅ ｓｐ．）、モラセアエ属種（Ｍｏｒａｃｅａｅ ｓｐ．）、オレアセアエ属種（Ｏ
ｌｅａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えばオリーブの木）、アクティニダケアエ属種（Ａｃｔｉ
ｎｉｄａｃｅａｅ ｓｐ．）、ラウラセアエ属種（Ｌａｕｒａｃｅａｅ ｓｐ．）（例え
ばアボカド、シナモン、ショウノウ）、ムサセアエ属種（Ｍｕｓａｃｅａｅ ｓｐ．）（
例えば、バナナの木およびバナナプランテーション）、ルビアセアエ属種（Ｒｕｂｉａｃ
ｅａｅ ｓｐ．）（例えば、コーヒー）、テアセアエ属種（Ｔｈｅａｃｅａｅ ｓｐ．）
（例えば茶）、ステルクリセアエ属種（Ｓｔｅｒｃｕｌｉｃｅａｅ ｓｐ．）、ルタセア
エ属種（Ｒｕｔａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えば、レモン、オレンジ、マンダリンおよびグ
レープフルーツ）；ソラナセアエ属種（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えば、トマ
ト、ジャガイモ、ペッパー、トウガラシ、ナス、タバコ）、リリアセアエ属種（Ｌｉｌｉ
ａｃｅａｅ ｓｐ．）、コンポジタエ属種（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ ｓｐ．）（例えば、
レタス、アーティチョークおびチコリ、例えばルートチコリ、エンダイブおよび一般的チ
コリ）、ウムベリフェラエ属種（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ ｓｐ．）（例えば、ニンジ
ン、パセリ、セロリおよび根用セロリ）、ククルビタケアエ属種（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃ
ｅａｅ ｓｐ．）（例えば、キュウリ、例えば、ガーキン、カボチャ、スイカ、ヒョウタ
ンおよびメロン）、アッリアケアエ属種（Ａｌｌｉａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えば、ニラ
ネギおよびタマネギ）、クルキフェラエ属種（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ ｓｐ．）（白キャ
ベツ、赤キャベツ、ブロッコリ、カリフラワー、芽キャベツ、チンゲンサイ、コールラビ
、ダイコン、ホースラディッシュ、クレスおよびハクサイ）、レグミノサエ属種（Ｌｅｇ
ｕｍｉｎｏｓａｅ ｓｐ．）（例えば、ピーナッツ、エンドウ豆、レンズ豆および豆類、
例えばインゲン豆およびソラ豆）、ケノポディアケアエ属種（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅ
ａｅ ｓｐ．）（例えば、スイス・チャード、飼料用ビート、ホウレンソウ、ビートルー
ト）、亜麻科（Ｌｉｎａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えば麻）、アサ科（Ｃａｎｎａｂｅａｃ
ｅａ ｓｐ．）（例えば大麻）、アオイ科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ ｓｐ．）（例えばオク
ラ、ココア）、パパビリセワエ（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）（例えばケシ）、アスパラ
ガセアエ（Ａｓｐａｒａｇａｃｅａｅ）（例えば、アスパラガス）；および芝草、芝生、
草を含む庭および森林の有用植物および観賞植物およびステビア・レバウディアナ（Ｓｔ
ｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）；ならびにいずれの場合もこれらの植物の遺伝子改変
型。
特定の態様において、発酵産物は、さらに、製剤成分を含む。製剤成分は、湿潤剤、増
量剤、溶媒、自発性促進剤、乳化剤、分散剤、霜防止剤、増粘剤、および／またはアジュ
バントであってよい。一実施形態において、製剤成分は湿潤剤である。他の態様において
、発酵産物は、凍結乾燥粉末または噴霧乾燥粉末である。
本発明の組成物は、回復、効力または物理的特性を改善するために、および／または加
工、包装および投与を助けるために、本発明の組成物に添加される製剤成分を含み得る。
このような製剤成分は、個別にまたは組み合わせて添加することができる。
製剤成分は、効力、安定性および物理的特性、有用性を改善するために、および／また
は加工、包装および最終用途への適用を容易にするために、細胞、無細胞調製物、単離化
合物および／または代謝産物を含む組成物に添加することができる。このような製剤成分
は、農業的に許容される担体、不活性成分、安定剤、防腐剤、栄養素または物理的特性改
変剤を含み得、個別にまたは組み合わせて添加することができる。いくつかの実施形態に
おいて、担体としては、水、油、および他の有機または無機溶媒などの液体材料、ならび
に生物学的または化学合成によって誘導された無機物、ポリマーまたはポリマー複合体な
どの固体材料を挙げることができる。いくつかの実施形態において、製剤成分は、葉、種
子、または根などの植物部分への組成物の付着を促進する結合剤、アジュバント、または
接着剤である。例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ａ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｎｃｅｐｔｓ
ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｓｅｅｄ Ｔｒｅａｔｍ
ｅｎｔｓ，”Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．，２８：３２１−３３９（１
９９０）を参照されたい。安定剤は、固結防止剤、抗酸化剤、沈降防止剤、消泡剤、乾燥
剤、保護剤または防腐剤を含み得る。栄養素は、糖、多糖、油、タンパク質、アミノ酸、
脂肪酸およびリン酸などの炭素、窒素、およびリン源を含むことができる。物理的特性改
変剤としては、増量剤、湿潤剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、レオロジー調整剤、分散剤、アジ
ュバント、界面活性剤、フィルム形成剤、ヒドロトロープ、ビルダー、不凍剤または着色
剤を挙げることができる。いくつかの実施形態において、発酵により製造された細胞、無
細胞調製物および／または代謝産物を含む組成物は、他の製剤調製なしに希釈剤として水
と共にまたは水なしで直接使用することができる。特定の実施形態において、凍結乾燥粉
末または噴霧乾燥粉末などの発酵固形物に、湿潤剤または分散剤が添加される。湿潤剤は
、拡散特性および浸透特性を増加させ、または分散剤は、それが表面に適用されたときに
活性成分（一度希釈された）の分散性および溶解性を増加させる。例示的な湿潤剤は、当
業者に公知であり、ＭＵＬＴＩＷＥＴ（商標）ＭＯ−７０Ｒ（Ｃｒｏｄａ Ｉｎｃ．、Ｅ
ｄｉｓｏｎ、ＮＪ）などのスルホコハク酸塩および誘導体；ＢＲＥＡＫ−ＴＨＲＵ（登録
商標）（Ｅｖｏｎｉｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）などのシロキサン；ＡＴＬＯＸ（商標）４８９
４（Ｃｒｏｄａ Ｉｎｃ．、Ｅｄｉｓｏｎ、ＮＪ）などの非イオン性化合物；ＴＥＲＷＥ
Ｔ（登録商標）３００１（Ｈｕｎｔｓｍａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＬＬＣ、Ｔ
ｈｅ Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、Ｔｅｘａｓ）などのアルキルポリグルコシド；ＴＥＲＧＩＴ
ＯＬ（登録商標）１５−Ｓ−１５（Ｔｈｅ Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ
、Ｍｉｄｌａｎｄ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）などのＣ１２−Ｃ１４アルコールエトキシレート
；ＲＨＯＤＡＦＡＣ（登録商標）ＢＧ−５１０（Ｒｈｏｄｉａ、Ｉｎｃ．）などのリン酸
エステル；ならびにＥＭＵＬＳＯＧＥＮ（商標）ＬＳ（Ｃｌａｒｉａｎｔ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）などのアルキルエーテルカルボキシレート
が挙げられる。
寄託情報
本発明のパエニバチルス種株の試料は、米国農業研究センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅ
ｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（ＮＲＲＬ）、１８１５ Ｎｏｒｔｈ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、ＩＬ ６１６０４、ＵＳＡ）に
ある農業研究サービスカルチャーコレクションに寄託され、２０１４年８月２８日にブダ
ペスト条約の下、以下の受託番号：ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２を割り当てられている。
安定したコロニー形態を示すパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株由来のパエ
ニバチルス種の試料は、米国農業研究センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏ
ｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ａｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（ＮＲＲＬ）、１８１５ Ｎｏｒｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓ
ｉｔｙ Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、ＩＬ ６１６０４、ＵＳＡ）にある農業研究サー
ビスカルチャーコレクションに寄託され、２０１５年９月１日にブダペスト条約の下で寄
託され、以下の受託番号：ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９が割り当てられている。
パエニバチルス種株は、本特許出願の係属中に、特許商標庁の長官が３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．
§１．１４および３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２２に基づき権利を有すると決定したものへのア
クセスが確保されることを保証する条件下で寄託されている。しかし、寄託物の入手可能
性は、政府の行為によって付与された特許権を逸脱して本発明を実施するためのライセン
スを構成するものではないことを理解されたい。
以下の実施例は、単に本発明の例示的かつ非限定的な目的のために提供される。
［実施例］
実施例１．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２の選択
いくつかのパエニバチルス種株のゲノムを配列決定した。ゲノムデータを分析して、フ
サリシジン生合成遺伝子クラスターを有するが、ポリミキシンシンテターゼ遺伝子クラス
ターを欠く菌株を同定した。フサリシジン生合成に関与する遺伝子クラスター（ｆｕｓＡ
）は、以前にポリミキシンシンテターゼ遺伝子クラスターを有することが同定され、特徴
付けられていた。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｂｉｏｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄｉｎｓ ｂｙ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＰＫＢ１ Ｉｎｖｏｌｖｅｓ Ｄｉｒｅｃｔ Ａｃｔｉｖａｔｉ
ｏｎ ｏｆ ａ Ｄ−Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ，”Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，
１５：１１８−１２７（２００８）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕ
ｓ Ｇｅｎｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ Ｆｕｓａｒｉｃｉｄ
ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｓ
ＱＲ−２１，”Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，９７：９
４７９−９４８９（２０１３）；ａｎｄ Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｃｌ
ｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ａｎｄ Ｈｅｔｅ
ｒｏｌｏｇｏｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９
１（１０）：３３５０−３３５８（２００９）を参照されたい。
この分析で同定された菌株をさらに評価して、フサリシジン産生を確認した。簡潔に述
べると、各菌株を大豆ベースの培地で培養し、ブロス全体の親油性画分を抽出した。全ブ
ロス抽出物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析し、フサリシジンＡの存在
を、フサリシジンＡを含有する標準試料で生成されたＨＰＬＣプロファイルに基づいて同
定した。
実施例２．植物体におけるパエニバチルス種株の全ブロスの抗真菌活性
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株を含む選択されたパエニバチルス種株を
、大豆ベースの培地中で増殖させて、全ブロス培養物を生成した。蒸留水を全ブロスの各
々に添加して１０％最終希釈液を作製した。
希釈された全ブロスを若い植物の葉に施用し、次いでトマト疫病（ＰＨＹＴＩＮ）、灰
色かび病（ＢＯＴＲＣＩ）、またはコムギ葉さび病（ＰＵＣＣＲＴ）の真菌接種物に曝露
した。各アッセイにおいて比較の目的で、未処理対照を含めた。真菌接種物に曝露して数
日後、各植物を、未処理の対照植物と比較して病原体の防除パーセントについてスコア化
した。各処理を３回反復して、図１に示される各パエニバチルス種株の全ブロスを用いて
平均防除パーセントを評価した。
ＰＨＹＴＩＮ、ＢＯＴＲＣＩおよびＰＵＣＣＲＴに対する抗真菌活性について試験した
２３株のうち、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株は、３種すべての真菌病原
体に対して比較的高いレベルの活性を有する数少ない菌株の１つであった。
実施例３．パエニバチルスＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株のフサリシジン抽出物のインビ
トロにおける生物学的効力
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２を含むいくつかのパエニバチルス種株の全
ブロス培養物を、大豆ベースの培地を用いて調製した。フサリシジンを含む親油性画分を
全ブロスから抽出した。さまざまなフサリシジンおよび抗真菌代謝産物を含有する３つの
別々の画分（すなわち、画分１、画分２および画分３）を、最初のパエニバチルス種株由
来の全ブロスから抽出した。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株由来の抽出物
はさらには分離しなかった。
各菌株由来のフサリシジン含有画分を以下の１２種の真菌病原体に対して試験した：ア
ルテルナリア・アルテルナータ（ＡＬＴＥＡＬ）、ボトリティス・シネリア（ＢＯＴＲＣ
Ｉ）、フサリウム・クルモルム（ＦＵＳＡＣＵ）、ファエオスフェリア・ノドラム（ＬＥ
ＰＴＮＯ）、ジモセプトリア・トリシチ（ＳＥＰＰＴＲ）、フィトフトラ・クリプトゲア
（ＰＨＹＴＣＲ）、フィトフトラ・インフェスタンス（ＰＨＹＴＩＮ）、ピシウム・ウル
ティムム（ＰＹＴＨＵＬ）マグネポルテ・オリゼ（ＰＹＲＩＯＲ）、タナテフォルス・ク
クメリス（ＲＨＩＺＳＯ）、ウスチラゴ・セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓ
ｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａｖｅｎａｅ）（ＵＳＴＩＡＶ）、およびウロミセス・アペンジ
クラツス（ＵＲＯＭＡＰ）。さまざまな画分による真菌細胞増殖の阻害を、大豆ベースの
培地で評価し、未処理対照の増殖と比較した。各画分の８回の投与量を０．００５ｐｐｍ
〜１００ｐｐｍの範囲で試験した。５０％阻害（ＥＤ５０）および８０％阻害（ＥＤ８０
）を生じる有効用量を図２の表に報告する。
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株のフサリシジン含有画分は、他のパエニ
バチルス種株由来の画分では観察されなかった、１２のアッセイにわたる広域スペクトル
の抗真菌活性を示した。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の画分もまた、他
のパエニバチルス種株由来の画分で観察されたものよりも、このアッセイにおいてはるか
に大きな活性を示した（図２参照）。
実施例４．フィトフトラに感染したトマトのインビトロ予防試験
この植物病原体温室アッセイでは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の発
酵産物を試験し、先のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した他
の３種のパエニバチルス種と比較した。この化合物の適切な調製物を製造するために、大
豆培地中で培養した各菌株由来の全ブロスの噴霧乾燥粉末１重量部を、水および０．１重
量部の乳化剤（アルキルアリールポリグリコールエーテル）と混合し、続いて水で希釈し
て所望の濃度にした。
予防活性を試験するために、若い植物に化合物調製物を記載された施用率で噴霧した。
噴霧コーティングを乾燥させた後、植物にフィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏ
ｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）の水性胞子懸濁液を接種した。次いで、植物を約
２０℃および相対大気湿度１００％のインキュベーションキャビネットに置いた。
接種の３日後に試験を評価した。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、
１００％の効力は、病害が観察されないことを意味する。
Figure 2021169507
実施例５．プラスモパラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ）に感染したブドウの木のインビボ予
防試験
この植物病原体温室アッセイでは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の発
酵産物を試験し、先のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した他
の３種のパエニバチルス種と比較した。この化合物の適切な製剤を製造するために、実施
例５に記載のように調製した噴霧乾燥粉末１重量部を、水および０．１重量部の乳化剤（
アルキルアリールポリグリコールエーテル）と混合し、続いて水で希釈して所望の濃度に
した。
予防活性を試験するために、若い植物に化合物調製物を記載された施用率で噴霧した。
噴霧コーティングを乾燥させた後、プラスモパラ・ビチコラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ ｖ
ｉｔｉｃｏｌａ）の水性胞子懸濁液を植物に接種し、次いで約２０℃および相対大気湿度
１００％のインキュベーションキャビネット内に１日間放置した。続いて、植物を約２１
℃および相対大気湿度約９０％の温室内に４日間置いた。次いで、植物に霧を吹きかけ、
インキュベーションキャビネット中に１日間置いた。
接種６日後に試験を評価した。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、１
００％の効力は、病害が観察されないことを意味する。
Figure 2021169507
実施例６．ウロミセスに感染した豆に対するインビボ予防試験
この植物病原体温室アッセイでは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の発
酵産物を試験し、先のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した他
の３種のパエニバチルス種と比較した。この化合物の適切な製剤を製造するために、実施
例５に記載のように調製した噴霧乾燥粉末１重量部を、水および０．１重量部の乳化剤（
アルキルアリールポリグリコールエーテル）と混合し、続いて水で希釈して所望の濃度に
した。
予防活性を試験するために、若い植物に化合物調製物を記載された施用率で噴霧した。
噴霧コーティングを乾燥させた後、植物にマメさび病の原因物質（ウロミセス・アペンジ
クラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ））の水性胞子懸濁液を接
種し、約２０℃および相対大気湿度１００％のインキュベーションキャビネット内に１日
間放置した。
次いで、植物を約２１℃および相対大気湿度約９０％の温室内に置いた。
接種の１０日後に試験を評価した。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し
、１００％の効力は、病害が観察されないことを意味する。
Figure 2021169507
実施例７．うどんこ病菌（スパエロテカ・フリギネア（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｆ
ｕｌｉｇｉｎｅａ））に感染したズッキーニ野外試験におけるパエニバチルス属株の比較
スパエロテカ・フリギネアを人工的に接種したズッキーニの２回の野外試験を実施した
。５回の処理は、大豆ベースの培地で培養した各パエニバチルス種株由来の全ブロスの噴
霧乾燥粉末を水に再懸濁し、１０００Ｌ／ｈａの施用量で、表６に概略を示したように、
ＢＢＣＨ５９〜ＢＢＣＨ７２の成長段階で４〜８日間隔で７月１５日〜８月８日の間植物
に施用した。表５に示されている病害防除パーセントは、最終施用の１０日後に行われた
、病害症状を肉眼で観察した最後の評価の結果である。０％は、未処置対照の効力に相当
する効力を意味し、１００％の効力は、病害が観察されないことを意味した。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
表４の結果は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の観察された活性が、以
前のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した、この野外試験で試
験した他の菌株と比較して優れていることを明らかに示している。
実施例８．うどんこ病（ウンシヌラ・ネクトル（Ｕｎｃｉｎｕｌａ Ｎｅｃａｔｏｒ）
）に感染したブドウの木の野外試験におけるパエニバチルス株の比較
ウンシヌラ・ネクトルに自然感染したブドウの木による２回の野外試験が実施された。
６回の処理は、実施例８に記載の噴霧乾燥粉末を水に再懸濁し、１０００Ｌ／ｈａの施用
量で、６月３日〜７月１日の間にＢＢＣＨ５７〜ＢＢＣＨ７５の成長段階で５〜７日間隔
で表８に示したように植物に施用した。表７に示されている病害防除パーセントは、最終
施用の１５日後に行われた、病害症状を肉眼で観察した最後の評価の結果である。０％は
、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、１００％の効力は、病害が観察されないこ
とを意味した。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
表７の結果は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の観察された活性が、以
前のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した、この野外試験で試
験した他の菌株と比較して優れていることを明らかに示している。
実施例９．夏疫病（アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）
）に感染したトマトの野外試験におけるパエニバチルス株の比較
アルテルナリア・ソラニを人工的に接種したトマト植物を用いた２回の野外試験を行っ
た。３回の処理は、実施例８に記載の噴霧乾燥粉末を水に再懸濁し、１０００Ｌ／ｈａの
施用量で、６月２６日〜７月１０日の間にＢＢＣＨ５１〜ＢＢＣＨ５９の成長段階で６〜
８日間隔で表１０に示したように植物に施用した。表９に示されている病害防除パーセン
トは、最終施用の８日後に行われた、病害症状を肉眼で観察した最後の評価の結果である
。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、１００％の効力は、病害が観察さ
れないことを意味した。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
表９の結果は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の観察された活性が、以
前のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した、この野外試験で試
験した他の菌株と比較して優れていることを明らかに示している。
実施例１０．夏疫病（アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ
））に感染したジャガイモの野外試験におけるパエニバチルス株の比較
アルテルナリア・ソラニを人工的に接種したジャガイモ植物を用いた１回の野外試験を
行った。５回の処理は、実施例８に記載の噴霧乾燥粉末を水に再懸濁し、５００Ｌ／ｈａ
の施用量で、６月２６日〜７月１９日の間にＢＢＣＨ３７〜ＢＢＣＨ５５の成長段階で４
〜８日間隔で表１２に示したように植物に施用した。表１１に示されている病害防除パー
セントは、最終施用の６日後に行われた、病害症状を肉眼で観察した最後の評価の結果で
ある。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、１００％の効力は、病害が観
察されないことを意味した。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
表１１の結果は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の観察された活性が、
以前のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した、この野外試験で
試験した他の菌株と比較して優れていることを明らかに示している。
実施例１１．夏疫病（アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ
））に感染したジャガイモの野外試験におけるパエニバチルス株の比較
アルテルナリア・ソラニを人工的に接種したジャガイモ植物を用いた１回の野外試験を
行った。３回の処理は、実施例８に記載の噴霧乾燥粉末を水に再懸濁し、５００Ｌ／ｈａ
の施用量で７月２４日〜８月５日の間にＢＢＣＨ３７〜ＢＢＣＨ５１の成長段階において
６日間隔で表１４に示したように植物に施用した。表１３に示されている病害防除パーセ
ントは、最終施用の６日後に行われた、病害症状を肉眼で観察した最後の評価の結果であ
る。０％は、未処置対照の効力に相当する効力を意味し、１００％の効力は、病害が観察
されないことを意味した。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
表１３の結果は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の観察された活性が、
以前のスクリーニングアッセイにおいて比較的高い抗真菌活性を示した、この野外試験で
試験した他の菌株と比較して優れていることを明らかに示している。
実施例１２．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株におけるｆｕｓＡ変異の同
定
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株をさらに特徴付けるために、ＦｕｓＡフ
サリシジンシンテターゼをコードするｆｕｓＡ遺伝子のゲノム配列を標準的な配列決定法
で決定し、関連するアミノ酸配列を同定した。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７
２株によって発現されるＦｕｓＡ由来のアミノ酸配列を、以下の刊行物に記載されている
ものを含むいくつかの他のパエニバチルス株のそれと比較した：Ｌｉ Ｓ．，ｅｔ ａｌ
．，（２０１４）．“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐａ
ｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＳＱＲ−２１，ａ Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗ
ｔｈ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗｉｔｈ Ａｎｔｉｆｕｎ
ｇａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏ
ｎ Ａｂｉｌｉｔｙ，”Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎｎｏｕｎｃ，２（２）：ＨＡＳＨ（０ｘ７４
３ｄｂ２８８）；Ｎｉｕ Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）．“Ｔｈｅ Ｇｅｎｏｍｅ
ｏｆ ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｒｈｉｚｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｍ−１ Ｃｏｎｔａｉｎ
ｓ Ｎｉｎｅ Ｓｉｔｅｓ Ｄｅｄｉｃａｔｅｄ ｔｏ Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓ
，”Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１９３（２０）：５８６２−３；Ｍａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ
．，（２０１１）“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐａｅ
ｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＳＣ２，Ａ Ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｐｌａｎ
ｔ Ｇｒｏｗｔｈ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗｉｔｈ Ｂ
ｒｏａｄ−Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｊ．
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１９３（１）：３１１−２；ａｎｄ Ｌｉ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅｎ
，（２００８）．Ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｓ
ａｒｉｃｉｄｉｎｓ ｂｙ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＰＫＢ１
Ｉｎｖｏｌｖｅｓ Ｄｉｒｅｃｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｄ−ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５，１１８−１２７。
図１３に示すアラインメントは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２によって
発現される変異型ＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼにおける有意な欠失を明らかにした
。第１の欠失は、パエニバチルス種Ａ株の対応する配列（配列番号１１）の３００９位か
ら３０３７位に及ぶ。第２の欠失は、パエニバチルス種Ａ株の対応する配列（配列番号１
１）の３０４７位から３３１７位に及ぶ。両方の欠失は、ＦｕｓＡフサリシジンシンテタ
ーゼの第３モジュールのＡドメイン（すなわち、ＦｕｓＡ−Ａ３）内に入る。
上に説明したように、Ａドメインの各々は、基質認識および活性化に関与する１０個の
保存されたアミノ酸残基を含む（表１参照）。これらの保存されたアミノ酸残基を、図１
３に示されたアラインメントに概説する。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株
によって発現される変異型ＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼにおいて同定された欠失は
、最後の保存されたアミノ酸残基（すなわち、配列番号１１の３４８６位のＬｙｓ５１７
）以外のすべてを除去する。
変異型ＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼにおけるこれら２つの欠失は、本明細書にお
いてパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株と命名された安定なコロニー形態を有
する変異株を含むパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株由来の菌株に存在する。
野生型ＦｕｓＡ−Ａ３への復帰は広範囲に及ぶ欠失の性質のためにまず起こり得ないので
、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株に由来するランダム突然変異株は変異型
ＦｕｓＡ−Ａ３においてこの欠失を一般に維持すると思われる。
実施例１３．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ａ
株におけるフサリシジン産生の比較
変異型ＦｕｓＡ−Ａ３の効果を決定するために、フサリシジンおよびパエニセリンのパ
ネルを、実施例１４に記載の方法を用いてパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株
（変異型ＦｕｓＡ−Ａ３を発現する）およびパエニバチルス種Ａ株（野生型ＦｕｓＡ−Ａ
３を発現する）で定量した。各化合物の同一性は、その固有の保持時間および質量によっ
て決定した。スペクトルにおける各ピークの相対シグナル強度を表１５に示す。精製され
た標準物質がない場合、絶対定量は不可能であった。しかし、同様の量の各細胞抽出物を
注入し、化合物の相対量を得られたシグナル強度から推定することができる。
Figure 2021169507
野生型ＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼにおいて、ＦｕｓＡ−Ａ３はアミノ酸位置（
３）のフサリシジン化合物にＬ−Ｔｙｒ、Ｌ−Ｐｈｅ、Ｌ−Ｖａｌ、Ｌ−ＩｌｅまたはＬ
−ａｌｌｏ−Ｉｌｅを組み込む役割を果たす（表１参照）。パエニバチルス種ＮＲＲＬ
Ｂ−５０９７２株における変異型ＦｕｓＡ−Ａ３は、検出可能なフサリシジンＣ、フサリ
シジンＤ、ＬｉＦ０７ａ、またはＬｉＦ０７ｂを含まない抽出物をもたらした。フサリシ
ジンＣおよびフサリシジンＤは両方ともアミノ酸位置（３）にチロシンを有し、ＬｉＦ０
７ａおよびＬｉＦ０７ｂは両方ともアミノ酸位置（３）にフェニルアラニンを有する。こ
れらの実験データは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株によって発現される
ＦｕｓＡ−Ａ３の遺伝子変異が、アミノ酸位置（３）にチロシンまたはフェニルアラニン
を有するフサリシジンの生合成を阻害することを示す（図１４参照）。
したがって、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ｎ
ＲＲＬ Ｂ−５０９７２株由来の変異株は、アミノ酸位置（３）にチロシンまたはフェニ
ルアラニンを有する検出可能な量のフサリシジンまたはフサリシジン様化合物（例えば、
フサリシジンＣおよびＤまたはＬｉＦ０７ａおよびＬｉＦ０７ｂ）を生成することができ
ない。パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株における変異型ＦｕｓＡ−Ａ３の分
析は、この菌株およびその変異体が、アミノ酸位置（３）にチロシンアミノ酸またはフェ
ニルアラニンアミノ酸を含むペプチド環を有するフサリシジンまたはフサリシジン類似体
を遺伝的に産生することができないことを示す。
分析した２種のパエニセリンのうち、パエニバチルス種Ａ株に検出可能なものは１種だ
けであり、そのシグナル強度は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株抽出物で
観察された対応するシグナル強度の半分未満であった。いかなる理論にも拘束されること
を望まないが、ＦｕｓＡ−Ａ３における最初の９個の保存されたアミノ酸（すなわち、Ａ
ｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ２９９、Ａｌａ３０１
、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、およびＣｙｓ３３１）の１または複数は、フサ
リシジン化合物の位置（３）のチロシンおよびフェニルアラニンの認識および活性化を担
う。さらに、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株によって発現される変異型Ｆ
ｕｓＡ−Ａ３は、代謝中間体を特定のフサリシジンの産生から、より広い範囲のフサリシ
ジン様化合物（例えば、パエニセリン）の生合成にシフトさせることができる。
実施例１４．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ａ
株の生物活性の比較
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株（変異型ＦｕｓＡ−Ａ３を発現する）お
よびパエニバチルス種Ａ株（野生型ＦｕｓＡ−Ａ３を発現する）を大豆ベースの培地で培
養して、全ブロスを生成した。全ブロスを、水と有機溶媒の混合物で１０％、５％、２．
５％、および１．２５％の濃度に希釈した。希釈した全ブロスを、若い植物に施用し、続
いてプッキニア・トリシチナ（ＰＵＣＣＲＴ）、ボトリティス・シネリア（ＢＯＴＲＣＩ
）、またはフィトフトラ・インフェスタンス（ＰＨＹＴＩＮ）の接種物に曝露した。植物
病原菌の接種物に曝露して数日後、各植物を、未処理の対照植物と比較して病原体の防除
パーセントについてスコア化した。各処置を３回反復して評価し、平均防除パーセントを
記録した（表１６〜１８参照）。
各アッセイにおいて、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株はパエニバチルス
種Ａ株を上回る優れた防除を示した。これらの実験データは、変異型フサリシジンシンテ
ターゼならびにその結果生じるフサリシジンおよびフサリシジン様化合物の生合成におけ
る変化が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２による植物病原体の防除の強化を
もたらすことを示唆している。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
Figure 2021169507
実施例１５．パエニバチルス種の細胞抽出物におけるフサリシジンの同定
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはそれに由来する株を大豆
ベースの培地中で定常期に達するまで増殖させ、その時点で全ブロス培養物を収穫し、有
機溶媒で抽出して細胞抽出物を生成した。
高速液体クロマトグラフィー／質量分析法飛行時間型（ＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦ）を用
いたクロマトグラフィー法を開発し、多くのフサリシジン様分子を細胞抽出物から分離し
た：カラム：ＹＭＣ（商標）Ｂａｓｉｃ ４．６×２５０ｍｍ、５μｍ；水（０．１％Ｆ
Ａ）およびアセトニトリル（０．１％ギ酸（ＦＡ））；勾配（％Ｂ）：０〜９分２８〜３
０％；９〜１４分３０〜３３％；１４〜３４分３３〜５０％；洗浄
公知のフサリシジンが同定されている細胞抽出物からのクロマトグラムを図４Ｂに示す
。フサリシジンの一般構造を図４Ａに示す。各環式フサリシジンは、対応する非環式類似
体を有する。
細胞抽出物中の検出可能なすべてのフサリシジンは、それらの保持時間およびｍ／ｚ値
に基づき同定された（図４Ｃ参照）。興味深いことに、位置（３）のアミノ酸がチロシン
またはフェニルアラニンであるフサリシジンＣおよびＤならびに他のフサリシジンは、細
胞抽出物中で検出されなかった。
実施例１６．パエニバチルス種細胞抽出物中のパエニセリンｓの特徴付け
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれに由来する菌株の細
胞抽出物中の他の化合物を同定するために、超高速液体クロマトグラフィー／質量分析ト
リプル飛行時間型（ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦ）を用いたクロマトグラフィ
ー法を開発して、多数のフサリシジン様分子を断片化した：カラム：ＺＯＲＢＡＸ（商標
）Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ、２．１×１００ｍｍ、１．８μｍ；水（０．１％ＦＡ）お
よびアセトニトリル（０．１％ＦＡ）。勾配（％Ｂ）：０〜５分１０〜９５％；洗浄。
この方法を用いて、本出願人は、ＡＢ ＳＣＩＥＸ ＴＲＩＰＬＥ ＴＯＦ（登録商標
）質量分析計から得られた質量断片化パターンを調べることによって、ならびに公開され
た文献とスペクトルを比較することによって、フサリシジンの新規なパエニセリンファミ
リーを特徴付けた。出願人はこの新しいファミリーをパエニセリン（Ｐａｅｎｉｓｅｒｉ
ｎｅ）と名付けた。パエニセリン Ａ１およびパエニセリン Ｂ１の代表的なＵＰＬＣ／
ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦ断片化パターンおよび対応する化学構造をそれぞれ図５およ
び６に示す。同様の分析を、細胞抽出物中に検出された各パエニセリンについて行った。
パエニセリンは、１または複数のセリン置換を有するフサリシジン骨格からの重要な出
発のためにこのように命名した（図５Ａ参照）。歴史的には、フサリシジンは、（１）ス
レオニン、（４）スレオニン、および（６）アラニンの３つの保存されたアミノ酸を含む
ペプチド配列であると考えられる。しかし、パエニセリンは、（１）および（４）のスレ
オニン残基の一方または両方がセリンで置き換えられた、新しい置換を示す。出願人が特
徴付けしたパエニセリンにおいて、位置（２）および（３）のアミノ酸はいずれもバリン
である。パエニセリンに対応するピークが同定されたクロマトグラムを図５Ｂに示す。
出願人はまた、細胞抽出物中のセリン置換されたフサリシジン様化合物のファミリーを
、それらの保持時間およびｍ／ｚ値に基づいて特徴付けた（図５Ｃ参照）。パエニセリン
Ｃ４は検出できなかったが、以前に特徴付けられたフサリシジンの構造に基づいて産生
されると予想することが合理的である。フサリシジンと同様に、各環式パエニセリンは、
対応する非環式類似体を有する。
出願人が特徴付けたパエニセリンは、（２）および（３）残基にバリンアミノ酸を有す
るが、それらの位置に変異を有する化合物が存在する可能性があることに留意することが
重要である。これらの潜在的な変異は、（２）および（３）残基としてイソロイシン、フ
ェニルアラニンおよびチロシンなどのアミノ酸を有するフサリシジン／ＬｉＦ類似体と同
様であると思われる。さらに、ＧＨＰＤの尾部を上に記載しているが、尾部の長さにパエ
ニプロリキシンファミリーと同様の変化を有する化合物が存在する可能性が高い（実施例
１７参照）。
実施例１７．パエニバチルス種細胞抽出物中のパエニプロリキシンの特徴付け
パエニバチルス種のＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれに由来する株細胞
抽出物を、実施例１４に記載のクロマトグラフィー法でさらに分析した。フサリシジンの
新しいファミリーを、ＡＢ ＳＣＩＥＸ ＴＲＩＰＬＥ ＴＯＦ（登録商標）質量分析計
から得られた質量断片化パターンを調べることによって、ならびに公開された文献とスペ
クトルを比較することによって特徴付けた。出願人はこの新しいファミリーパエニプロリ
キシン（Ｐａｅｎｉｐｒｏｌｉｘｉｎ）と名付けた。パエニプロリキシン Ｃ１およびパ
エニプロリキシン Ｄ１の代表的なＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦ断片化パター
ンおよび対応する化学構造をそれぞれ図８および９に示す。同様の分析を、細胞抽出物中
に検出された各パエニプロリキシンについて行った。
パエニプロリキシンは、脂肪族尾部におけるフサリシジン骨格からの別の重要な出発点
に起因するラテン語のｐｒｏｌｉｘ（長いを意味する）から命名された。すなわち、パエ
ニプロリキシンは、フサリシジンより長い尾部を有する。歴史的に、フサリシジンは、特
有のＧＨＰＤ尾部を有することが観察されているに過ぎない。これは、本件に関する最新
の出版物（例えば、Ｖａｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃ
ｔｒｏｍ．，２０１５，２６，１１３０−１１４１）においても一貫していることが示さ
れており、この著者らは、「「ＧＨＰＤの尾部は厳密に保存されている」というこの発見
は、文献に報告されている他の多くのリポペプチドとは対照的であり、脂肪酸部分はサー
ファクチン、イタリン、フェンギシンなどの構造変化の主な標的である」と主張している
。出願人は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２の細胞抽出物中のより長い尾部
（すなわち、１７−グアニジノ−３−ヒドロキシヘプタデカン酸またはＧＨＰＤ＋２ＣＨ
２および１９−グアニジノ−３−ヒドロキシノナデカン酸またはＧＨＰＤ＋４ＣＨ２）フ
サリシジン様化合物のファミリーを同定した（図８Ａ参照）。パエニセリンとは異なり、
パエニプロリキシンは、位置（１）にＬ−スレオニン、位置（４）にＤ−ａｌｌｏ−スレ
オニンの保存されたアミノ酸残基を維持する。
出願人が特徴付けたパエニプロリキシンは、（２）および（３）残基にバリンまたはイ
ソロイシンのいずれかのアミノ酸を有するが、それらの位置に変異を有する化合物が存在
する可能性があることに留意することが重要である。これらの潜在的な変異は、（２）お
よび（３）残基としてバリン、イソロイシン、またはフェニルアラニンおよびチロシンな
どの他のアミノ酸の他の組み合わせなどのフサリシジン／ＬｉＦ類似体と同様であると思
われる。さらに、より長い長さの尾部を有する上記のパエニセリンとのハイブリッドの組
み合わせが存在する可能性がある。
パエニプロリキシンに対応するピークが同定されたクロマトグラムを図８Ｂに示す。よ
り長いＧＨＰＤ尾部を有するフサリシジン様化合物のこのファミリーも、これらの保持時
間およびｍ／ｚ値に基づいて特徴付けた（図８Ｃ参照）。パエニプロリキシン Ｃ２およ
びＤ２は検出できなかったが、以前に特徴付けられたフサリシジンの構造に基づいて産生
されると予想することが合理的である。フサリシジンの場合と同様に、各環式パエニプロ
リキシンは、対応する非環式類似体を有する。
実施例１８．パエニセリン、パエニプロリキシン、およびその他のフサリシジンの抗真
菌性生物活性プロファイル
表１９に示す試料は、パエニバチルス種細胞から単離した。発酵全ブロスを遠心分離し
て上清を除去した。次いで、得られたペレットをメタノールで抽出した。得られた抽出物
を逆相中圧液体クロマトグラフィーを用いて分画した。次いで、分画を、逆相分取高圧液
体クロマトグラフィーを用いてさらに精製した。
Figure 2021169507
インビトロ抗真菌９６ウェルプレートアッセイは、真菌増殖の指標としてレサズリンベ
ースの細胞生存性試薬ＰＲＥＳＴＯＢＬＵＥ（登録商標）を利用する。真菌胞子から出発
して、このアッセイは、真菌胞子の発芽および／または真菌細胞の増殖を阻害するための
試料の効力を測定する。このアッセイは、３種の農業関連真菌性病害、すなわちアルテル
ナリア・ソラニ（ＡＬＴＥＳＯ）、コレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）およ
びボトリティス・シネリア（ＢＯＴＲＣＩ）を用いて調製した。
表１９に概説されているすべての試料は、農業関連の真菌性病害に対して活性であるこ
とが証明されている（表２０の各試料に関する１００万分の１（ｐｐｍ）単位の８０％最
小発育阻害濃度（ＭＩＣ８０）値を参照）。興味深いことに、ある種の化合物は特定の病
害に対してさまざまな活性を有すると思われる。例えば、試料３のアスパラギン類似体は
ＡＬＴＥＳＯを防除する上で重要であると思われるが、試料４の同種の化合物のグルタミ
ン対応物はＣＯＬＬＬＡの防除により多く関与していた。試料６のより長い尾部の類似体
は、ＣＯＬＬＬＡの最も強力な阻害剤であった。このことは、すべてが自ら活性である一
方、これらの化学物質の組み合わせは、最終製品の病害防除の最終効力およびスペクトル
にとって重要であることを示唆している。
Figure 2021169507
実施例１９．パエニセリン、パエニプロリキシン、および他のフサリシジンの抗菌生理
活性プロファイル
インビトロ抗菌９６ウェルプレートアッセイは、細菌増殖の指標として吸光度を使用す
る。このアッセイは、未処理のウェルの吸光度を試料ウェルと比較することによって、細
菌増殖を阻害する試料の効力を測定する。細菌の増殖を阻害する最終希釈／濃度をＭＩＣ
（最小発育阻害濃度（ｍｉｎｉｍｕｍ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉ
ｏｎ））と呼び、この値を用いて異なる試料の効力を比較することができる。アッセイは
、キサントモナス・カンペストリス（ＸＡＮＴＡＶ）、シュードモナス・シリンゲ（ＰＳ
ＤＭＴＭ）、およびエルウィニア・カロトボーラ（ＥＲＷＩＣＡ）の３種の農業関連細菌
性病害を用いて評価した。
表１９に概要を示した試料を抗菌アッセイに適用して、各細菌病原体によるＭＩＣ８０
値を測定した。アッセイの結果を表２１に示す。試料１〜５は、農業関連の細菌性病害に
対して活性であることが判明した。興味深いことに、ある種の化合物は特定の病害に対し
てさまざまな活性を有すると思われる。例えば、パエニセリンは、フサリシジンＡの弱点
であるＰＳＤＭＴＭを防除することができるという点で、フサリシジンＡを補完する。一
方、フサリシジンＡは、パエニセリンで観察されるＥＲＷＩＣＡの防除における弱点を補
う。真菌アッセイと同様に、このことは、すべてがそれ自体で有効である一方、これらの
化学物質の組み合わせは、最終製品の最終的な効力および病害防除のスペクトルにとって
重要であることを示唆している。
Figure 2021169507
実施例２０．Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ抗生物質のディスク拡散アッセイによる相乗効果
の示唆
フサリシジン様化合物のさまざまなクラス間の相乗作用の初期評価を得るために、植物
病原体ＣＯＬＬＬＡを用いてバイオアッセイを実施した。バイオアッセイは、寒天上の古
典的なＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ抗生物質ディスク拡散アッセイであった（Ｂａｕｅｒ，Ａ
．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，１９６６ Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．３６：４９３−
４９６）。簡潔には、ＣＯＬＬＬＡ胞子の芝生を接種したペトリ皿上に、同様の量の種々
の試料を負荷したブランク無菌ディスクを置いた。このペトリ皿をインキュベートし、各
ディスクの周りに示された阻害ゾーンの直径の大きさとして活性を記録した。結果を図１
１に示す。
この予備アッセイの結果は、特定のパエニセリンおよびパエニプロリキシンを一緒に施
用すると、相乗効果が生じることを示唆している。別々に施用されたパエニセリン Ａ１
およびＢ１（「８６８」）またはパエニプロリキシン Ａ２およびＢ２（「９３８」）は
、このアッセイにおいて比較的小さな阻害ゾーンを示す。しかし、それらの組み合わせ（
「８６８／９３８」）は、８６８、９３８またはフサリシジンＡおよびＢ（「ＡＢ」）の
適用で得られた結果を超える阻害の最大かつ最も明確なゾーンを示す。ＡＢ、８６８、お
よび９３８の試料について、約０．１ｍｇの全材料を各無菌ディスクに適用した。８６８
および９３８の両方の試料を含むディスクは、８６８／９３８ディスク上の材料の総量が
約０．１ｍｇであるように、各試料を約０．０５ｍｇ含有した。
このアッセイの限界は、フサリシジン化合物を真菌の増殖を阻害するために寒天に拡散
しなければならないという要件である。相乗効果のこの初期の指標を、液体培地中のイン
ビトロ抗真菌アッセイを利用してさらに評価した。
実施例２１．フサリシジンの組み合わせの相乗作用を実証するためのインビトロ抗真菌
アッセイ
実施例１７に概説したフサリシジンの組合せに加えて、液体培地中のインビトロ抗真菌
アッセイを実施して、図１２に示すフサリシジンおよび／またはフサリシジン様化合物の
組み合わせの適用から生じる提案された相乗効果を実証する。図１２に示すグループの各
々を、最初に構造特性を評価するために個別に評価し、次に相乗効果に対処するために組
み合わせて評価する。二成分混合物と三元混合物の両方を評価する。
個々の化合物は殺真菌活性に関して弱点を示すかもしれないが、組み合わせは活性の単
純な添加を上回る活性を有するであろう。
殺真菌剤の相乗効果は、活性化合物の組み合わせの殺真菌活性が、個別に適用された場
合の活性化合物の活性の合計を超える場合、常に存在する。
２つまたは３つの活性化合物の所与の組合せについての予想される活性は、以下のよう
に計算することができる（Ｃｏｌｂｙ，Ｓ．Ｒ．，“Ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ Ｓｙｎｅ
ｒｇｉｓｔｉｃ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ Ｈｅ
ｒｂｉｃｉｄｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ，Ｗｅｅｄｓ １９６７，１５，２０−２２
）。
Ｘは、活性化合物Ａをｍ ｐｐｍ（またはｇ／ｈａ）の施用量で施用した場合の効力で
あり、
Ｙは、活性化合物Ｂを施用量ｎ ｐｐｍ（またはｇ／ｈａ）で施用した場合の効力であ
り、
Ｚは、活性化合物Ｂを施用量ｒ ｐｐｍ（またはｇ／ｈａ）で施用した場合の効力であ
り、
Ｅ１は、活性化合物ＡおよびＢを施用量ｍおよびｎ ｐｐｍ（またはｇ／ｈａ）で施用
した場合の抗力であり、
Ｅ２は、活性化合物Ａ、ＢおよびＣをそれぞれ施用量ｍ、ｎおよびｒ ｐｐｍ（または
ｇ／ｈａ）で施用した場合の効力であり、
この場合、二成分混合物に関しては：
Figure 2021169507
であり、および三成分混合物に関しては：
Figure 2021169507
である。
効力の程度は％で表される。０％は対照の効力に相当する効力を意味し、１００％の効
力は病害が観察されないことを意味する。
実際の殺真菌活性が計算値を超える場合、組み合わせの活性は超相加的であり、すなわ
ち相乗効果が存在する。この場合、実際に観察された効力は、上記の式から計算された予
想効力（Ｅ）の値よりも大きくなければならない。
相乗効果を実証するためのさらなる方法は、Ｔａｍｍｅｓの方法である（“Ｉｓｏｂｏ
ｌｅｓ，Ａ Ｇｒａｐｈｉｃ Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｅｒｇｉｓ
ｍ ｉｎ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ”ｉｎ Ｎｅｔｈ．Ｊ．Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈ．，１９
６４，７０，７３−８０参照）。
実施例２２．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の変異株の選択
標準的な実験室条件下では、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株は、固体寒
天培地上で複数のコロニー形態を産生する。いくつかの形態学的に異なるコロニーを同定
し、−８０℃でグリセロールストックとして保存した。液体培地培養物は、異なるコロニ
ー表現型に由来するストックを用いて接種し、液体培地中で数ラウンド増殖させた後、固
体寒天培地上に再接種した。ここから、試験された条件下で安定なコロニー表現型を有し
、耐熱胞子およびフサリシジン化学物質を依然として産生することができる、１つの単離
株を同定した。安定なコロニー形態を有する単離株は、さらなる株の改良のために望まし
い（実施例２３参照）。この単離株は、２０１５年９月１日にＮＲＲＬに寄託され、受託
番号ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９が割り当てられている。
実施例２３．改善されたパエニバチルス種突然変異体を生成するランダム突然変異誘発
化学的突然変異誘発
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株の遺伝的に多様な単離株のプールを作製
するために、菌株の液体培養培養物を遠心分離によりペレット化し、１−メチル−３−ニ
トロ−１−ニトログアニジン（ＮＴＧ）を含有する緩衝液中に最終濃度４００μｇ／ｍＬ
で再懸濁した。参照として、ＮＴＧを含まない第２の試料を調製した。試料を３０℃およ
び２２０ｒｐｍにおいて１時間インキュベートした。１時間後、試料を遠心分離によって
ペレット化し、ＮＴＧを含有しない緩衝液で洗浄し、最後に同じ容量の新鮮な緩衝液に再
懸濁した。希釈されていない培養物のアリコートをグリセロールストックとして−８０℃
で凍結させた。試料を希釈して、寒天プレート上にプレーティングしてコロニー形成単位
を決定し、ゲノムあたりの突然変異度の基準として死滅率を決定した。第１ラウンドのス
クリーニングから選択された改良された単離株を、上記のように１または複数回のＮＴＧ
処理に付し、フサリシジン産生のさらなる改善についてスクリーニングした。フサリシジ
ン産生は、フサリシジンＡ（ＬｉＦ０４ａまたは「ＦｕｓＡ」としても知られている）；
ＬｉＦ０８ａ；パエニセリン Ａ１およびＢ１（「Ｍ８６８」または「８６８」としても
知られている）；パエニプロリキシン Ａ２およびＢ２（「Ｍ９３８」または「９３８」
としても知られている）を含むいくつかの化合物の相対量によって決定した。
高スループットスクリーニングと分離特性
ＮＴＧ処理した試料を希釈し、寒天プレート上にプレーティングして単一のコロニーを
得た。単一コロニーを、種培地を含む９６ウェルディープウェルブロックに接種し、３０
℃において２日間振盪しながらインキュベートした。ここから、大豆ベースの生産培地を
含む新しい９６ウェルディープウェルブロックに接種し、３０℃において５日間振盪しな
がらインキュベートした。５日後、個々のウェル中の各試料からグリセロールストックを
調製し、−８０℃で保存し、試料を上記で特定した４種のフサリシジンバイオマーカーの
化学分析に供した。この一次スクリーニングにおいて、個々の単離株は、それらの「総フ
サリシジン値」（すなわち、野生型の値の平均に対する４つの分析されたフサリジジンバ
イオマーカーの合計）が野生型値の平均よりも野生型値の標準偏差の３倍高かった場合に
ヒットとみなした。この基準に基づいて選択された各単離株の８つの複製物を上記のよう
に増殖させて分析した。確認されたフサリシジン過剰産生体を次に２５０ｍＬの振盪フラ
スコ中で５０ｍＬ容量にスケールアップし、胞子形成、フサリシジン産生および生物活性
について特徴付けた。優先単離株をバイオリアクターにさらにスケールアップし、胞子形
成、粘性、フサリシジン産生、および生物活性について特徴付けた。ＮＴＧ処理およびス
クリーニングの第２ラウンドからいくつかの突然変異株が得られ、優れたフサリシジンバ
イオマーカー産生および生物活性を有することが判明した。
実施例２４．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の抗生物質感受性の特徴付
け
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株を、典型的な濃度の抗生物質を補充した
固形ｓＬＢ寒天培地およびｓＬＢ寒天培地に接種した。寒天プレートを３０℃においてイ
ンキュベートし、増殖を２４時間後、４８時間後および７２時間後に評価した。それぞれ
の被験抗生物質に対するパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の感受性を表２２
に示す。
Figure 2021169507
実施例２５．パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ｎ
ＲＲＬ Ｂ−６７１２９株におけるｓｐｏ０Ａの特徴付け
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−
６７１２９株のゲノムを配列決定した。２つのゲノム配列の比較により、２つの菌株にお
けるｓｐｏ０Ａ遺伝子の特徴的な相違を同定した。図１５の配列アラインメントに示され
るように、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種ＮＲＲ
Ｌ Ｂ−６７１２９株は、ｓｐｏ０Ａ遺伝子の３’末端に向かって１ヌクレオチド異なる
。単一ヌクレオチドの相違を同定して、図１５の配列の下に赤い矢印で示した。ｓｐｏ０
Ａ遺伝子の第１のヌクレオチドに対するヌクレオチド番号は、配列の上に示される。
内生胞形成細菌由来のＳｐｏ０Ａオルソログのアライメントは、パエニバチルス種ＮＲ
ＲＬ Ｂ−６７１２９株コード配列におけるヌクレオチド変化が、保存領域において単一
のアミノ酸置換をもたらすことを示した。（図１６参照）。パエニバチルス・テラエ由来
のＳｐｏ０Ａアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＷＰ＿０４４６４７６４４．１）、パエ
ニバチルス・ポリミキサＳＱＲ−２１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＨＭ６６６３０．１）、バチ
ルス・ズブチリス亜種ズブチリス株１６８（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅ：ＮＰ＿３９０３０２．１）、バチルス・セレウスＥ３３Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ａ
ＪＩ２６９２４．１）、およびクロストリジウム・パステリアヌムＤＳＭ ５２５（Ｇｅ
ｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８８８３．１）を、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株
およびパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株由来のＳｐｏ０Ａアミノ酸配列とア
ライメントさせた。図１６中の矢印は、パエニバチルス種ＮＲＲＬ株Ｂ−６７１２９株由
来のＳｐｏ０Ａにおける単一のアミノ酸置換を示す。
実施例２６．フサリシジン、パエニセリン、パエニプロリキシンとの構造活性関係研究
実施例１６に記載のインビトロアッセイを用いて、いくつかの精製されたフサリシジン
、パエニセリンおよびパエニプロリキシンの構造活性関係を調べた。第１の実験において
、最も一般的なフサリシジンの対を比較した。これらのフサリシジンの変異は、アスパラ
ギンまたはグルタミンのいずれかを有する環／鎖のアミノ酸位置（５）で生じる。この研
究において、植物病原体アルテルナリア・ソラニ（ＡＬＴＥＳＯ）に対してフサリシジン
ＡをフサリシジンＢと比較し、ＬｉＦ０８ａをＬｉＦ０８ｂと比較した。どちらの場合に
おいても、アスパラギン類似体は、その対応物のグルタミンより２倍以上強力であった（
図１７参照）。
別の実験において、環式対非環式形態のフサリシジンを比較した。フサリシジンの非環
式形態が最終化合物の前駆体または分解生成物であるかどうかは不明であるが、それらは
パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株の発酵ブロス中に偏在しており、この発酵
ブロス由来の精製フサリシジンに共通の混入物質である。フサリシジンＡの抗真菌活性を
、植物病原体ＡＬＴＥＳＯを用いたインビトロアッセイにおいて、ＬｉＦ０４ｃおよびＬ
ｉＦ０４ｄ（フサリシジンＡおよびＢの非環式類似体）の混合物と比較した。エステル結
合におけるペプチド開環の重要な影響がある。非環式類似体は、試験した最高濃度で不活
性であった（図１７参照）。これは構造的情報に関して重要であり、そうでなければ精製
されたフサリシジン中で典型的に混入物質を構成するこれらの化合物が、抗真菌活性に寄
与しない可能性が高いことを実証する。
環／鎖のアミノ酸位置（２）および（３）におけるアミノ酸置換もまた調査した。類似
体フサリシジンＡ、ＬｉＦ０５ａ、ＬｉＦ０６ａ、およびＬｉＦ０８ａは、それらの位置
にバリンまたはイソロイシンのいずれかの組み合わせを有することで異なる。これらを、
植物病原体ＡＬＴＥＳＯを用いたインビトロアッセイで試験した。２つの最も強力な類似
体は、フサリシジンＡ（バリン／バリン）およびＬｉＦ０８ａ（イソロイシン／イソロイ
シン）であった。バリン／イソロイシンの混合物を含む他の２つの類似体は、１／３未満
の効力を有していた（図１７参照）。
新規パエニセリンとの抗真菌活性の違いも調査した。この場合もまたＡＬＴＥＳＯに対
して試験し、環／鎖のアミノ酸位置（１）および（４）の違いを評価した。古典的なフサ
リシジンは、これらの位置がスレオニンに限定され、一方、パエニセリンはスレオニンと
セリンの間で交替することができる。パエニセリンは、このアッセイにおいてフサリシジ
ンＡと同様の抗真菌活性を示した（図１７参照）。
真菌病原体ＡＬＴＥＳＯおよびコレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）に対す
るインビトロアッセイを用いて、パエニプロリキシン（すなわち、異なる側鎖長を有する
類似体）の抗真菌活性も調査した。古典的なフサリシジンは、１５−グアニジノ−３−ヒ
ドロキシペンタデカン酸側鎖を含む。パエニプロリキシンは、鎖中に４つの追加のメチレ
ン基のうちの２つを有することが示されている。側鎖長は生物活性に顕著な効果を示し、
異なる真菌病原体には差異を示した。ＡＬＴＥＳＯに対して、長さの変化がないＧＨＰＤ
が最も強力であり、メチレン基が追加されるたびに低下していった。ＣＯＬＬＬＡに対し
て、最も強力な長さはＧＨＰＤ＋２ＣＨ２であった（図１７参照）。
実施例２７．フサリシジンＡとパエニセリン Ａ１またはパエニプロリキシン Ｃ１と
の混合物による相乗的抗真菌活性
レザズリンベースの細胞生存性試薬ＰＲＥＳＴＯＢＬＵＥ（登録商標）（実施例１８参
照）を用いたインビトロ抗真菌９６ウェルプレートアッセイを用いて、フサリシジン、パ
エニセリン、およびパエニプロリキシンの単独または双方向の組み合わせにおける抗真菌
活性を評価した。抗真菌活性は、以下の式を用いて未処理対照値との関連で計算した：
効力＝（１００−未処理対照に対する相対的増殖）
１００％効力は、未処理対照と比較して真菌増殖がないことを示し、０％効力は、未処
理対照と比較して真菌増殖の阻害がないことを示す。
表２３および２４は、本発明による活性化合物の組合せの観察された活性が、計算され
た活性よりも大きい、すなわち相乗効果が存在したことを明確に示している。
Figure 2021169507
Figure 2021169507
他に定義されない限り、本明細書におけるすべての技術的および科学的用語は、本発明
が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。引用され
たすべての刊行物、特許および特許公報は、あらゆる目的のためにその全体が参照により
本明細書に組み込まれる。
開示された発明は、記載された特定の方法論、プロトコルおよび材料に限定されず、変
更可能であると理解される。また、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明す
る目的のみのものであり、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の
特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解される。
当業者は、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を、日
常的な実験のみを用いて認識または確認することができると思われる。このような等価物
は、添付の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
トマト疫病（ＰＨＹＴＩＮ）、灰色かび病（ＢＯＴＲＣＩ）、およびコムギ葉さび病（ＰＵＣＣＲＴ）に対するパエニバチルス種株の全ブロスの植物体殺真菌活性を示す。 アルテルナリア・アルテルナータ（ＡＬＴＥＡＬ）、ボトリティス・シネリア（ＢＯＴＲＣＩ）、フサリウム・クルモルム（ＦＵＳＡＣＵ）、ファエオスフェリア・ノドラム（ＬＥＰＴＮＯ）、ジモセプトリア・トリシチ（ＳＥＰＰＴＲ）、フィトフトラ・クリプトゲア（ＰＨＹＴＣＲ）、フィトフトラ・インフェスタンス（ＰＨＹＴＩＮ）、ピシウム・ウルティムム（ＰＹＴＨＵＬ）マグネポルテ・オリゼ（ＰＹＲＩＯＲ）、タナテフォルス・ククメリス（ＲＨＩＺＳＯ）、ウスチラゴ・セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａｖｅｎａｅ）（ＵＳＴＩＡＶ）、およびウロミセス・アペンジクラツス（ＵＲＯＭＡＰ）に対するパエニバチルス種株の全ブロス由来フサリシジン抽出物のインビトロ抗真菌活性を示す。 非環式類似体、ＬｉＦ０４ｃを生成するためのＬｉＦ０４ａ（フサリシジンＡとしても知られている）の環構造の開裂を示す。フサリシジンおよびフサリシジン様化合物の各々の非環式類似体も同様の様式で生じる。 位置（１）、（４）および（６）において保存されたアミノ酸が同定され、アミノ酸の変化がＡＡ（アミノ酸）として示されている公知のフサリシジンの構造を概説する図を示す。１５−グアニジノ−３−ヒドロキシペンタデカン酸（ＧＨＰＤ）尾部は、位置（１）のＬ−スレオニンのＮ末端とアミド結合を形成する。位置（６）のＤ−アラニンのＣ末端は、「Ｏ」を指し示す矢印で示される位置（１）のＬ−スレオニンのヒドロキシル基とエステル結合を形成する。 公知のフサリシジンが同定されているパエニバチルス種の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能な公知のフサリシジンを示す。 パエニセリンの構造を概説する図を示す。この種の化合物は、位置（１）および位置（４）の保存スレオニンの一方または両方がセリンで置換されていることを除いて、前記フサリシジンと同様である。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された、その中にパエニセリンが同定された株由来の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能なパエニセリンを示す。検出されたすべての化合物について、ｍ／ｚ値および保持時間（ＲＴ）を示す。 図６Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニセリン Ａ１の化学構造を示す。 ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルを示す。 図７Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニセリン Ｂ１の化学構造を示す。 ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルを示す。 パエニプロリキシンの構造を概説する図を示す。この種の化合物は、ＧＨＰＤ尾部の長さが−（ＣＨ２）１２−から−（ＣＨ２）１４−または−（ＣＨ２）１６−に伸長される以外は、フサリシジンと同様である。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された、その中にパエニプロリキシンが同定された株由来の細胞抽出物のＨＰＬＣ／ＭＳ ＴＯＦクロマトグラムを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株および／またはこれから誘導された株由来の細胞抽出物において検出可能なパエニプロリキシンを示す。検出されたすべての化合物について、ｍ／ｚ値および保持時間（ＲＴ）を示す。 図９Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニプロリキシン Ｃ１の化学構造を示す。 ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルを示す。 図１０Ｂに示されるＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルから誘導されたパエニプロリキシン Ｄ１の化学構造を示す。 ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦスペクトルを示す。 フサリシジンＡおよびＢ（「ＡＢ」）、パエニセリン Ａ１およびＢ１（「８６８」）、パエニプロリキシン Ａ２およびＢ２（「９３８」）、または８６８および９３８の組み合わせを寒天プレート上全体に拡がったコレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）の胞子に適用した、Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ抗生物質ディスク拡散アッセイを示す。真菌増殖の阻害ゾーンを有する各ディスクの直径は、ミリメートルで示される。 図１２Ａは、フサリシジンＡの化学構造およびこの構造の単純化された描写を示す。図１２Ｂ〜１２Ｅは、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびこれから誘導された株によって産生されたフサリシジン、パエニセリンおよび／またはパエニプロリキシンの組み合わせの単純化された描写を示す。これらの組み合わせは、相乗的抗真菌効果を生じ、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびそれから誘導された株で観察される比較的高い効力および広域スペクトルの抗真菌活性に関与する。 以下のパニエバチルス種株：パニエバチルス、ペオリエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｏｒｉａｅ）Ａ（配列番号１）；パエニバチルス・ポリミキサＡ（配列番号２）；パエニバチルス・ポリミキサＰＫＢ１（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＢＱ９６３８４．２；配列番号３）；パエニバチルス・ポリミキサＥ６８１（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＤＭ６７９８５．１；配列番号４）；パエニバチルス・ポリミキサＢ（配列番号５）；パエニバチルス・ポリミキサＳＱＲ（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＨＭ６３８１２．１；配列番号６）；パエニバチルス・ポリミキサＣ（配列番号７）；パエニバチルス・ポリミキサＭ１（ＧｅｎＢａｎｋ ＣＣＣ８３０１５．１；配列番号８）；パエニバチルス・ポリミキサＳＣ２（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＣＡ０９７３３．２；配列番号９）；パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株（配列番号１０）；およびパエニバチルス種Ａ株（配列番号１１）によって発現されるＦｕｓＡフサリシジンシンテターゼのセグメントの多重配列アライメントを示す。基質特異性を決定するアミノ酸残基は、黒色の輪郭で識別される（表１も参照されたい）。これらのアミノ酸残基は、配列番号１〜５および１１の３２０３、３２０４、３２０７、３２４６、３２６７、３２６９、３２９０、３２９８、３２９９および３４８６位、ならびに配列番号６〜９の３２０４、３２０５、３２０８、３２４７、３２６８、３２７０、３２９１、３２９９、３３００、および３４８７位に位置する。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株およびパエニバチルス種Ａ株（「Ａ株」）におけるフサリシジン遺伝子クラスターを示す。矢印は、クラスター内の個々の遺伝子を表す（すなわち、ｆｕｓＧは矢印「Ｇ」で表され、ｆｕｓＦは矢印「Ｆ」によって表されるなど）。最大の矢印は、以下の略号および記号を有するｆｕｓＡフサリシジンシンテターゼ遺伝子を表す：Ａ＝アデニル化ドメイン（基質認識および活性化）；Ｃ＝縮合ドメイン（ペプチド結合形成）；Ｅ＝エピマー化ドメイン（基質ラセミ化）；ＴＥ＝チオエステラーゼドメイン（生成物放出）；文字のない楕円形＝チオール化（Ｔ）ドメイン（ペプチドキャリアタンパク質）。ｆｕｓＡ遺伝子は、各遺伝子クラスターの上または下のボックスに示されるアミノ酸を組み込む役割を果たす６つのモジュールを有する。Ａ株は典型的なフサリシジン遺伝子クラスターを有するが、パエニバチルス種ＮＲＲＬＢ−５０９７２株フサリシジン遺伝子クラスターは、モジュール３において機能的Ａドメインを欠いている。結果として、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株によって産生されるフサリシジンは、位置（３）にチロシンおよびフェニルアラニンを欠き、バリンまたはイソロイシンのみを組み込む。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株（配列番号１２）およびパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株（配列番号１３）におけるｓｐｏ０Ａ遺伝子の配列アライメントを示す。 パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株コード配列におけるヌクレオチド変化が、保存領域において単一のアミノ酸置換をもたらすことを示す、内生胞子形成細菌由来のＳｐｏ０Ａオルソログの配列アライメントを示す。アライメントされたＳｐｏ０Ａオルソログ配列は：パエニバチルス・テラエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒａｅ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１４）、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１５）、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１６）、パエニバチルス・ポリミキサＳｐｏ０Ａ（配列番号１７）、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１８）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号１９）およびクロストリジウム・パステリアヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）Ｓｐｏ０Ａ（配列番号２０）である。 真菌病原体アルテルナリア・ソラニ（ＡＬＴＥＳＯ）およびコレトトリカム・ラゲナリウム（ＣＯＬＬＬＡ）を用いたいくつかのフサリシジン、パエニセリンおよびパエニプロリキシンの８０％最小発育阻止濃度（ＭＩＣ８０）値を示す。

Claims (59)

  1. 第３モジュールの機能的アデニル化ドメイン（ＦｕｓＡ−Ａ３）を欠く変異型フサリシ
    ジンシンテターゼを含む殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋な培養物を含み、
    機能的ＦｕｓＡ−Ａ３の欠損が、野生型フサリシジンシンテターゼを含むパエニバチルス
    種株によるフサリシジンの合成と比較して、アミノ酸残基（３）においてチロシンまたは
    フェニルアラニンを含むフサリシジンの合成を阻害する組成物。
  2. 前記変異型フサリシジンシンテターゼが、ＦｕｓＡ−Ａ３において基質特異性を決定す
    るアミノ酸残基の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、
    少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、
    または１０個の欠失を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記アミノ酸残基が、Ａｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌ
    ｅｕ２９９、Ａｌａ３０１、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、Ｃｙｓ３３１、Ｌｙ
    ｓ５１７、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の組成
    物。
  4. 前記アミノ酸残基が、配列番号１１の３２０３、３２０４、３２０７、３２４６、３２
    ６７、３２６９、３２９０、３２９８、３２９９および／または３４８６位に位置する、
    請求項２または３に記載の組成物。
  5. 前記変異型フサリシジンシンテターゼが、ＦｕｓＡ−Ａ３においてＡｓｐ２３５、Ａｌ
    ａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌｅｕ２９９、Ａｌａ３０１、Ａｌａ／Ｇｌｙ
    ３２２、Ｖａｌ３３０、およびＣｙｓ３３１の欠失を含む、請求項１から４のいずれか１
    項に記載の組成物。
  6. 前記変異型フサリシジンシンテターゼが配列番号１０を含む、請求項５に記載の組成物
    。
  7. 前記殺真菌性パエニバチルス種株が、配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性を
    示すＤＮＡ配列を含む、請求項１に記載の組成物。
  8. 殺真菌性パエニバチルス種株の生物学的に純粋な培養物または少なくとも１種のパエニ
    セリン（Ｐａｅｎｉｓｅｒｉｎｅ）および少なくとも１種のパエニプロリキシン（Ｐａｅ
    ｎｉｐｒｏｌｉｘｉｎ）を含むこれらの無細胞抽出物を含む組成物。
  9. 少なくとも１つのパエニセリンが、パエニセリン Ａ１、パエニセリン Ａ２、パエニ
    セリン Ａ３、パエニセリン Ａ４、パエニセリン Ｂ１、パエニセリン Ｂ２、パエニ
    セリン Ｂ３、パエニセリン Ｂ４、パエニセリン Ｃ１、パエニセリン Ｃ２およびパ
    エニセリン Ｃ３からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
  10. 少なくとも１種のパエニプロリキシンが、パエニプロリキシン Ａ１、パエニプロリキ
    シン Ａ２、パエニプロリキシン Ｂ１、パエニプロリキシン Ｂ２、パエニプロリキシ
    ン Ｃ１、パエニプロリキシン Ｄ１、パエニプロリキシン Ｅ１、パエニプロリキシン
    Ｅ２、パエニプロリキシン Ｆ１、パエニプロリキシン Ｆ２、パエニプロリキシン
    Ｇ１およびパエニプロリキシン Ｇ２からなる群から選択される、請求項８または９に記
    載の組成物。
  11. フサリシジンＡ、ＬｉＦ０８ａ、パエニセリン Ａ１、パエニセリン Ｂ１、パエニプ
    ロリキシン Ａ２およびパエニプロリキシン Ｂ２を含む、請求項８から１０のいずれか
    １項に記載の組成物。
  12. ＬｉＦ０３ａ、ＬｉＦ０３ｂ、ＬｉＦ０３ｃ、ＬｉＦ０３ｄ、ＬｉＦ０７ａ、ＬｉＦ０
    ７ｂ、ＬｉＦ０７ｃおよび／またはＬｉＦ０７ｄを含まない、請求項８から１１のいずれ
    か１項に記載の組成物。
  13. 相乗的有効量で、パエニセリン Ａ１、パエニセリン Ｂ１、パエニプロリキシン Ａ
    ２およびパエニプロリキシン Ｂ２を含む、請求項８から１２のいずれか１項に記載の組
    成物。
  14. （ａ）パエニセリン Ａ１およびパエニセリン Ｂ１と（ｂ）パエニプロリキシン Ａ
    ２およびパエニプロリキシンＢ２との（ａ）：（ｂ）重量比が、約５００：１から約１：
    ５００の間、約２５０：１〜約１：２５０の間、約１００：１〜約１：１００の間、約５
    ０：１〜約１：５０の間、約１０：１〜約１：１０の間、または約５：１〜約１：５の間
    である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 前記（ａ）：（ｂ）重量比が約１：１である、請求項１３に記載の組成物。
  16. 前記パエニバチルス種株が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバ
    チルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺真菌性突然変異株である、請求
    項１から１５のいずれかに記載の組成物。
  17. パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−６７
    １２９株、またはこれらの殺真菌性突然変異株の発酵産物を含む、請求項１６に記載の組
    成物。
  18. 前記殺真菌性突然変異株が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２と約９０％を
    超える配列同一性を有するゲノム配列を有し、および／または前記殺真菌性突然変異株が
    、配列番号１２または配列番号１３を含むｓｐｏ０Ａ遺伝子を発現する、請求項１６また
    は１７に記載の組成物。
  19. 前記殺真菌性突然変異株が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２と同等または
    それ以上の殺真菌活性ならびに／またはフサリシジン、パエニセリンおよび／もしくはパ
    エニプロリキシンのレベルを有する、請求項１６から１８のいずれか１項に記載の組成物
    。
  20. 前記発酵産物がポリミキシンを含まない、請求項１７から１９のいずれか１項に記載の
    組成物。
  21. 前記発酵産物が液体製剤である、請求項１７から２０のいずれか１項に記載の組成物。
  22. 前記液体製剤が、懸濁濃縮液または油分散液である、請求項２１に記載の組成物。
  23. 少なくとも約１×１０４ＣＦＵの菌株／ｍＬ液体製剤を含む、請求項２１または２２に
    記載の組成物。
  24. 約１％〜約２５％の発酵固形物を含む、請求項２１から２３のいずれか１項に記載の組
    成物。
  25. 構造（Ｉ）：
    Figure 2021169507
     （式中、
    Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して−ＣＨ（ＣＨ３）２または−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２
    ＣＨ３であり、
    Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
    ｎは１３〜２０の整数である）
    を有する単離化合物、ならびにこれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、
    幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、非環式類似体、および混合物。
  26. ｎが１４または１６である、請求項２５に記載の単離化合物。
  27. Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    である、請求項２６に記載の単離化合物。
  28. 構造（ＩＩ）：
    Figure 2021169507
     （式中、
    Ｒ１は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３であり、
    Ｒ２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または−（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、ならび
    に
    Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり、
    ただし、Ｒ１が−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ２が−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である場合、Ｒ３
    はＨである）
    を有する単離化合物ならびにこれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾
    何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、非環式類似体、および混合物。
  29. Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    Figure 2021169507
    である、請求項２８に記載の単離化合物。
  30. 請求項２５から２９のいずれか１項に記載の単離化合物および農業上許容される担体を
    含む組成物。
  31. 前記化合物が少なくとも０．００１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶液中に存在する、請求項３０
    に記載の組成物。
  32. ａ）少なくとも１種のフサリシジン；
    ｂ）少なくとも１種のパエニセリンまたは少なくとも１種のパエニプロリキシン、
    を相乗的有効量で含む組成物。
  33. 前記フサリシジンがフサリシジンＡである、請求項３２に記載の組成物。
  34. 前記パエニセリンがパエニセリン Ａ１である、請求項３２または３３に記載の組成物
    。
  35. 前記パエニプロリキシンがパエニプロリキシン Ｃ１である、請求項３２または３３に
    記載の組成物。
  36. 植物を処理して病害を防除する方法であって、請求項１から２４のいずれか１項に記載
    の組成物または請求項２５から２９のいずれか１項に記載の単離化合物の有効量を、前記
    植物、前記植物の一部および／または前記植物の場所に施用することを含む、方法。
  37. 前記組成物が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲ
    ＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺真菌性突然変異株の発酵産物である、請求項
    ３６に記載の方法。
  38. 前記組成物または単離化合物を葉の植物部分に施用することを含む、請求項３６または
    ３７に記載の方法。
  39. 前記組成物が、約１×１０１０〜約１×１０１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ヘクタ
    ールのパエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−
    ６７１２９株、またはこれらの殺真菌性突然変異株で施用される、請求項３６または３７
    に記載の方法。
  40. 前記組成物が、約０．５ｋｇ〜約５ｋｇの発酵固形物／ヘクタールで施用される、請求
    項３６または３７に記載の方法。
  41. 前記植物病害が真菌により引き起こされる、請求項３６から４０のいずれか１項に記載
    の方法。
  42. 前記植物病害が、かび病またはさび病である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記かび病がうどんこ病またはべと病である、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記さび病が、コムギ葉さび病、オオムギの葉さび病、ライムギの葉さび病、赤さび病
    、冠さび病および黒さび病からなる群から選択される。請求項４２に記載の方法。
  45. 前記真菌が、アルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎ
    ａｔａ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）、ボトリテ
    ィス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリカム・ラゲナリウム
    （Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ）、フサリウム・クルモルム（
    Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ファエオスフェリア・ノドラム（Ｐｈａｅｏｓ
    ｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）、ジモセプトリア・トリシチ（Ｚｙｍｏｓｅｐｔｏｒ
    ｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、フィトフトラ・クリプトゲア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃ
    ｒｙｐｔｏｇｅａ）、フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉ
    ｎｆｅｓｔａｎｓ）、ピシウム・ウルティムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）、マ
    グネポルテ・オリゼ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ）、タナテフォルス・クク
    メリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、ウスチラゴ・セゲツム変
    種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａｖｅｎａｅ）、ウロミセス
    ・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）およびプッキ
    ニア・トリシチナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）からなる群から選択される
    、請求項４１に記載の方法。
  46. 前記組成物または単離化合物が、前記植物、前記植物の一部および／前記植物の場所へ
    の施用後、少なくとも５日、少なくとも１０日、または少なくとも１５日、前記真菌の防
    除をもたらす残留活性を有する、請求項４１から４５のいずれか１項に記載の方法。
  47. 前記植物病害が細菌によって引き起こされる、請求項３６から４０のいずれか１項に記
    載の方法。
  48. 前記細菌が、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅ
    ｓｔｒｉｓ）、シュードモナス・シリンゲ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ
    ）およびエルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）からな
    る群から選択される、請求項４７に記載の方法。
  49. 有用植物において植物病原性生物を防除するための、請求項１から２４のいずれか１項
    に記載の組成物または請求項２５から２９のいずれか１項に記載の単離化合物の使用。
  50. 前記組成物が、パエニバチルス種ＮＲＲＬ Ｂ−５０９７２株、パエニバチルス種ＮＲ
    ＲＬ Ｂ−６７１２９株、またはこれらの殺真菌性突然変異株の発酵産物を含む、請求項
    ４９に記載の使用。
  51. 前記植物病原性生物が、アルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａ
    ｌｔｅｒｎａｔａ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）
    、ボトリティス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリカム・ラ
    ゲナリウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ）、フサリウム・ク
    ルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ファエオスフェリア・ノドラム（Ｐ
    ｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）、ジモセプトリア・トリシチ（Ｚｙｍｏｓ
    ｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、フィトフトラ・クリプトゲア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ
    ｏｒａ ｃｒｙｐｔｏｇｅａ）、フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ
    ｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）、ピシウム・ウルティムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍ
    ｕｍ）、マグネポルテ・オリゼ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ）、タナテフォ
    ルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、ウスチラゴ・
    セゲツム変種アベナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｅｇｅｔｕｍ ｖａｒ．ａｖｅｎａｅ）、
    ウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）お
    よびプッキニア・トリシチナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）からなる群から
    選択される、請求項４９または５０に記載の使用。
  52. 前記植物病原性生物が、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
    ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、シュードモナス・シリンゲ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒ
    ｉｎｇａｅ）およびエルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒ
    ａ）からなる群から選択される、請求項４９または５０に記載の使用。
  53. 前記有用植物が、リンゴ、バナナ、柑橘類、キーウィー、メロン、桃、洋なし、パイナ
    ップル、仁果類、ザクロ、キャベツ、カリフラワー、キュウリ、ウリ科植物、トマト、ジ
    ャガイモ、コムギ、米および大豆からなる群から選択される、請求項４９から５２のいず
    れか１項に記載の使用。
  54. 広域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌性パエニバチルス種株を同定する方法であ
    って、ａ）前記パエニバチルス種株におけるＦｕｓＡ−Ａ３を配列決定して、変異型フサ
    リシジンシンテターゼを特徴付けること；ｂ）前記変異型フサリシジンシンテターゼを有
    する前記パエニバチルス種株の前記殺真菌活性をアッセイすること；ならびにｃ）前記パ
    エニバチルス種株が、前記変異型フサリシジンシンテターゼを含み、野生型フサリシジン
    シンテターゼを含む参照パエニバチルス種株と比較して殺真菌活性の増加を示す場合、広
    域スペクトルの抗真菌活性を有する殺真菌性パエニバチルス種株を選択すること、を含む
    方法。
  55. ｄ）前記殺真菌性パエニバチルス種株を培養して、殺真菌性発酵産物を産生することを
    さらに含む、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記変異型フサリシジンシンテターゼが、ＦｕｓＡ−Ａ３において基質特異性を決定す
    るアミノ酸残基の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、
    少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、
    または１０個の欠失を含む、請求項５４に記載の方法。
  57. 前記アミノ酸残基が、Ａｓｐ２３５、Ａｌａ２３６、Ｓｅｒ２３９、Ｔｈｒ２７８、Ｌ
    ｅｕ２９９、Ａｌａ３０１、Ａｌａ／Ｇｌｙ３２２、Ｖａｌ３３０、Ｃｙｓ３３１、Ｌｙ
    ｓ５１７、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５６に記載の方
    法。
  58. 前記アミノ酸残基が、配列番号１１の３２０３、３２０４、３２０７、３２４６、３２
    ６７、３２６９、３２９０、３２９８、３２９９および／または３４８６位に位置する、
    請求項５６または５７に記載の方法。
  59. 前記パエニバチルス種株によって産生されたパエニセリンおよび／またはパエニプロリ
    キシンを定量すること、ならびに前記パエニバチルス種株が、野生型フサリシジンシンテ
    ターゼを含む参照パエニバチルス種株と比較して増加レベルのパエニセリンおよび／また
    はパエニプロリキシンを産生する場合、広域スペクトルの抗真菌活性を有するパエニバチ
    ルス種株を選択すること、をさらに含む、請求項５４から５８のいずれか１項に記載の方
    法。
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