KR20170129921A - 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법 - Google Patents

신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20170129921A
KR20170129921A KR1020177030448A KR20177030448A KR20170129921A KR 20170129921 A KR20170129921 A KR 20170129921A KR 1020177030448 A KR1020177030448 A KR 1020177030448A KR 20177030448 A KR20177030448 A KR 20177030448A KR 20170129921 A KR20170129921 A KR 20170129921A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
glu
ala
val
ile
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020177030448A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102629565B1 (ko
Inventor
제레미 부
다니엘 엠. 주
패트릭 슈빈테크
콜린 에스. 테일러
비욘 에이. 트래그
Original Assignee
바이엘 크롭사이언스 엘피
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이엘 크롭사이언스 엘피 filed Critical 바이엘 크롭사이언스 엘피
Priority to KR1020247002482A priority Critical patent/KR20240015158A/ko
Publication of KR20170129921A publication Critical patent/KR20170129921A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102629565B1 publication Critical patent/KR102629565B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/25—Paenibacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A01N37/46—N-acyl derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides
    • A01N47/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides containing —N=CX2 groups, e.g. isothiourea
    • A01N47/44—Guanidine; Derivatives thereof
    • A01N63/02—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P1/00—Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/10—Enterobacteria
    • C12R1/01—
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 제3 모듈에서의 기능적 아데닐화 도메인이 결여된 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 적어도 하나의 파에니세린 및 적어도 하나의 파에니프롤릭신을 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물 또는 그의 무세포 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다. 단리된 화합물 및 식물 질병을 방제하기 위해 개시된 조성물 및 화합물로 식물을 처리하는 방법이 또한 제공된다.

Description

신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원을 2015년 3월 26일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/138,765, 및 2015년 9월 24일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/232,205를 우선권 주장하며, 이들은 둘 다 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
서열 목록의 공식 사본은 2016년 3월 21일에 생성되고 68 킬로바이트의 크기를 갖는 파일명 "BCS159002WO_ST25.txt"의 ASCII-포맷화 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출되며, 본 명세서와 함께 출원된다. 이러한 ASCII-포맷화 문서에 담긴 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 발명은 박테리아 균주 및 식물 질병을 방제하는 그의 능력의 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 비교적 높은 수준의 광역 항진균 활성을 갖는 파에니바실루스(Paenibacillus) 종 균주에 관한 것이다.
살진균제는 작물 보호용; 식품, 사료, 및 화장품 보존제; 및 인간 및 수의학적 적용 둘 다를 위한 치료제를 포함하는 무수한 용도를 갖는다. 작물 수확량 감소, 식품매개 질병 및 인간 및 동물 둘 다의 진균 감염은 선진국 및 개발도상국 둘 다에서 문제이다.
합성 살곤충제 또는 살진균제는 종종 비-특이적이고 따라서 다른 자연 발생 유익 유기체를 포함하는, 표적 유기체 이외의 다른 유기체에 대해서도 작용할 수 있다. 그들은 그의 화학적 성질 때문에 또한 독성일 수 있고 비-생체분해성일 수 있다. 전세계 소비자는 특히 식품에서의 화학물질의 잔류물과 연관된 잠재적인 환경 및 건강 문제를 점점 의식하고 있다. 이는 화학적 (즉, 합성) 살충제의 사용 또는 적어도 그의 양을 감소시키도록 하는 소비자 압박을 증가시켰다. 따라서, 효과적인 해충 방제를 여전히 가능하게 하면서 먹이 사슬 요건을 관리할 필요가 있다.
합성 살곤충제 또는 살진균제의 사용과 함께 발생하는 추가의 문제는 살곤충제 또는 살진균제의 반복적 및 독점적 적용이 종종 저항성 병원성 미생물의 선택을 일으킨다는 것이다. 통상적으로, 이러한 균주는 또한 동일한 작용 방식을 갖는 다른 활성 성분에 대해 교차-저항성이다. 그러면 상기 활성 화합물을 사용한 병원체의 효과적인 방제는 더 이상 가능하지 않다. 그러나, 새로운 작용 메카니즘을 갖는 활성 성분을 개발하는 것은 어렵고 고비용이다.
병원체 집단에서의 저항성 발생의 위험뿐만 아니라 환경 및 인간 건강에 대한 관심은 식물 질병을 관리하기 위한 합성 살곤충제 및 살진균제에 대한 대안을 확인하는 것에 대한 관심을 조성하였다. 생물학적 방제제의 사용이 하나의 대안이다.
비-리보솜 펩티드, 예컨대 푸사리시딘은 그의 항미생물 특성에 대해 널리 인식되어 있고 작물 보호의 분야에서 사용되어 왔다. 그의 작용 방식 때문에, 그들은 또한 생물제약 및 다른 생물공학 적용에 있어서의 잠재적인 용도를 갖는다. 푸사리시딘은 파에니바실루스 종으로부터 단리되고 15-구아니디노-3-히드록시펜타데칸산에 더하여 6개의 아미노산 잔기로 구성된 고리 구조를 가질 수 있다. 파에니바실루스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa)로부터 단리된 푸사리시딘은 LI-F03, LI- F04, LI-F05, LI-F07 및 LI-F08을 포함하고 (Kurusu K, Ohba K, Arai T and Fukushima K., J. Antibiotics, 40:1506-1514, 1987) 추가의 푸사리시딘 A, B, C 및 D가 보고된 바 있다 (Kajimura Y and Kaneda M., J. Antibiotics, 49:129-135, 1996; Kajimura Y and Kaneda M., J. Antibiotics, 50:220-228, 1997).
특정 푸사리시딘은 식물 병원성 진균 예컨대 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae) 및 페니실리움 토미이(Penicillium thomii)에 대한 살균 활성을 갖는 것으로 공지되어 있다. 일부 푸사리시딘은 또한 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 포함하는 그람-양성 박테리아에 대한 살균 활성을 갖는다 (Kajimura Y and Kaneda M., J. Antibiotics, 49:129-135, 1996; Kajimura Y and Kaneda M., J. Antibiotics, 50:220-228, 1997). 또한, 특정한 푸사리시딘은 카놀라의 검은뿌리썩음병을 유발하는 렙토스파에리아 마쿨란스(Leptosphaeria maculans)에 대한 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀진 바 있다 (Beatty PH and Jensen SE., Can. J. Microbiol., 48:159-169, 2002). 추가로 푸사리시딘 화합물을 특징화하고, 비교적 낮은 적용률로 광역 항진균 활성을 제공하는 푸사리시딘을 생산하는 파에니바실루스 종의 균주를 확인할 필요가 있다.
푸사리시딘 및 다른 항진균 대사물은 파에니바실루스 종의 발효를 통해 수득될 수 있다. 그러나, 많은 파에니바실루스 종 균주는 또한 폴리믹신으로 공지된 항생제를 생산한다. 폴리믹신은 그람-음성 박테리아에 대해 선택적으로 독성이고 인간 환자에게 주어지는 경우에 신경독성 또는 신독성 효과를 가질 수 있다. 폴리믹신으로 인한 항미생물제 저항성 및 상대적 독성을 진행시키는 전반적 문제는 이들 항생제의 신중한 사용 및 투여를 요구한다. 이러한 이유로 농업에서의 사용을 위해 개발된 파에니바실루스 종 균주가 비교적 높은 수준의 푸사리시딘을 발현하고 검출가능한 폴리믹신을 발현하지 않는 것이 매우 바람직하다. 이러한 균주는 작업자 및 소비자에게 위험을 거의 또는 전혀 제시하지 않을 것이다. 또한, 광역 활성을 나타내는 파에니바실루스 종 균주를 확인할 필요가 있다. 기존 살진균제의 효능의 개선, 특히 진균의 저항성의 발생이 용이하지 않은 것이 고도로 바람직하다.
본 발명은 제3 모듈에서의 기능적 아데닐화 도메인 (FusA-A3)이 결여된 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물을 포함하는 조성물이며, 여기서 기능적 FusA-A3의 결여가 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 파에니바실루스 종 균주에 의한 푸사리시딘의 합성에 비해 아미노산 잔기 (3)에서 티로신 또는 페닐알라닌을 갖는 푸사리시딘의 합성을 억제하는 것인 조성물에 관한 것이다. 특정 측면에서, 변이체 푸사리시딘 신테타제는 FusA-A3에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 10개의 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기의 결실을 포함한다. 다른 측면에서, 아미노산 잔기는 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, Cys331, Lys517, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 아미노산 잔기는 서열식별번호: 11의 위치 3203, 3204, 3207, 3246, 3267, 3269, 3290, 3298, 3299, 및/또는 3486에 위치한다. 또 다른 실시양태에서, 변이체 푸사리시딘 신테타제는 FusA-A3에서 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, 및 Cys331의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 푸사리시딘 신테타제는 서열식별번호: 10을 포함한다.
본 발명은 또한 적어도 하나의 파에니세린 및 적어도 하나의 파에니프롤릭신을 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물 또는 그의 무세포 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
특정 측면에서, 적어도 하나의 파에니세린은 파에니세린 A1, 파에니세린 A2, 파에니세린 A3, 파에니세린 A4, 파에니세린 B1, 파에니세린 B2, 파에니세린 B3, 파에니세린 B4, 파에니세린 C1, 파에니세린 C2, 및 파에니세린 C3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 적어도 하나의 파에니프롤릭신은 파에니프롤릭신 A1, 파에니프롤릭신 A2, 파에니프롤릭신 B1, 파에니프롤릭신 B2, 파에니프롤릭신 C1, 파에니프롤릭신 D1, 파에니프롤릭신 E1, 파에니프롤릭신 E2, 파에니프롤릭신 F1, 파에니프롤릭신 F2, 파에니프롤릭신 G1, 및 파에니프롤릭신 G2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 조성물은 푸사리시딘 A, LiF08a, 파에니세린 A1, 파에니세린 B1, 파에니프롤릭신 A2, 및 파에니프롤릭신 B2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 LiF03a, LiF03b, LiF03c, LiF03d, LiF07a, LiF07b, LiF07c, 및/또는 LiF07d를 포함하지 않는다. 다른 실시양태에서, 조성물은 파에니세린 A1, 파에니세린 B1, 파에니프롤릭신 A2, 및 파에니프롤릭신 B2를 상승작용적 유효량으로 포함한다.
특정 측면에서, 본 발명은 파에니바실루스 종 균주가 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주인 조성물에 관한 것이다. 조성물은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주의 발효 생성물을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 살진균 돌연변이체 균주는 파에니바실루스 종 NRRL B-50972에 대해 약 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 게놈 서열을 갖는다. 다른 실시양태에서, 살진균 돌연변이체 균주는 파에니바실루스 종 NRRL B-50972의 수준과 대등하거나 또는 보다 우수한 살진균 활성 및/또는 푸사리시딘, 파에니세린, 및/또는 파에니프롤릭신의 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 폴리믹신을 포함하지 않는다.
일부 측면에서, 발효 생성물은 액체 제제이다. 액체 제제는 현탁액 농축물 또는 오일 분산액일 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 약 1 x 104 CFU 균주/mL 액체 제제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 약 1% 내지 약 25%의 발효 고형물을 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은: a) 적어도 하나의 푸사리시딘; 및 b) 적어도 하나의 파에니세린 또는 적어도 하나의 파에니프롤릭신을 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 파에니세린은 파에니세린 A1, 파에니세린 A2, 파에니세린 A3, 파에니세린 A4, 파에니세린 B1, 파에니세린 B2, 파에니세린 B3, 파에니세린 B4, 파에니세린 C1, 파에니세린 C2, 및 파에니세린 C3 중 적어도 하나이다. 또 다른 실시양태에서, 파에니프롤릭신은 파에니프롤릭신 A1, 파에니프롤릭신 A2, 파에니프롤릭신 B1, 파에니프롤릭신 B2, 파에니프롤릭신 C1, 파에니프롤릭신 D1, 파에니프롤릭신 E1, 파에니프롤릭신 E2, 파에니프롤릭신 F1, 파에니프롤릭신 F2, 파에니프롤릭신 G1, 및 파에니프롤릭신 G2 중 적어도 하나이다.
특히, 한 실시양태에서 적어도 하나의 푸사리시딘 및 적어도 하나의 파에니세린 또는 적어도 하나의 파에니프롤릭신의 상승작용적 비는 1:1000 내지 1000:1의 범위, 바람직하게는 1:500 내지 500:1의 범위, 보다 바람직하게는 1:250 내지 250:1의 범위 내에 있다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 푸사리시딘 및 적어도 하나의 파에니세린 또는 적어도 하나의 파에니프롤릭신의 상승작용적 중량비는 1:100 내지 100:1의 범위, 바람직하게는 1:100 내지 10:1의 범위 또는 심지어 1:50 내지 25:1의 범위 내에 있다. 한 측면에서, 푸사리시딘은 푸사리시딘 A이다. 또 다른 측면에서, 파에니세린은 파에니세린 A1이다. 또 다른 측면에서, 파에니프롤릭신은 파에니프롤릭신 C1이다.
다른 측면에서, 본 발명은 구조 (I)을 갖는 단리된 화합물 및 그의 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 기하 이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 비시클릭(acyclic) 유사체, 및 혼합물에 관한 것이다:
Figure pct00001
여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 -CH(CH3)2 또는 -CH(CH3)CH2CH3이고;
R3은 -CH2C(O)NH2 또는 -(CH2)2C(O)NH2이고;
n은 13내지 20의 정수이다.
일부 실시양태에서, R3은 -CH2C(O)NH2이다. 다른 실시양태에서, R3은 -(CH2)2C(O)NH2이다. 한 측면에서, R1은 -CH(CH3)2이다. 또 다른 측면에서, R1은 -CH(CH3)CH2CH3이다. 한 측면에서, R2는 -CH(CH3)2이다. 또 다른 측면에서, R2는 -CH(CH3)CH2CH3이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 구조 (II)를 갖는 단리된 화합물 및 그의 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 기하 이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 비시클릭 유사체, 및 혼합물에 관한 것이다:
Figure pct00002
여기서
R1은 -CH2OH 또는 -CH(OH)CH3이고;
R2는 -CH2C(O)NH2 또는 -(CH2)2C(O)NH2이고;
R3은 H 또는 CH3이고;
단 R1이 -CH2OH이고 R2가 -CH2C(O)NH2인 경우에 R3은 H이다.
일부 실시양태에서, R3은 CH3이다. 다른 실시양태에서, R3은 H이다. 한 측면에서, R1은 -CH2OH이다. 또 다른 측면에서, R1은 -CH(OH)CH3이다. 한 측면에서, R2는 -CH2C(O)NH2이다. 또 다른 측면에서, R2는 -(CH2)2C(O)NH2이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 단리된 화합물 및 농업상 허용되는 담체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 구조 (I)의 화합물을 포함하는 용액에 관한 것이며 여기서 화합물의 농도는 적어도 0.001 mg/mL, 적어도 0.01 mg/mL, 또는 적어도 0.1 mg/mL이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 구조 (II)의 화합물을 포함하는 용액에 관한 것이며 여기서 화합물의 농도는 적어도 0.001 mg/mL, 적어도 0.01 mg/mL, 또는 적어도 0.1 mg/mL이다. 특정 측면에서, 개시된 용액은 농업상 허용되는 담체를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물, 식물의 부분 및/또는 식물의 생육지에 유효량의 본원에 개시된 조성물을 적용하는 것을 포함하는, 질병을 방제하기 위해 식물을 처리하는 방법에 관한 것이다. 특정 측면에서, 조성물은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주의 발효 생성물이다. 다른 측면에서, 방법은 잎 식물 부분에 조성물을 적용하는 것을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 헥타르당 약 1 x 1010 내지 약 1 x 1012 콜로니 형성 단위 (CFU)의 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주로 적용된다. 한 실시양태에서, 조성물은 헥타르당 약 0.5 kg 내지 약 5 kg의 발효 고형물로 적용된다.
일부 측면에서, 식물 질병은 진균에 의해 유발된다. 다른 측면에서 식물 질병은 밀듀균병 또는 녹병이다. 한 실시양태에서, 밀듀균병은 흰가루병 또는 노균병이다. 또 다른 실시양태에서, 녹병은 밀 잎 녹병, 보리 잎 녹병, 호밀 잎 녹병, 갈색 잎 녹병, 관녹병, 및 줄기녹병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 진균은 알테르나리아 알테르나타(Alternaria alternata), 알테르나리아 솔라니(Alternaria solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 라게나리움(Colletotrichum lagenarium), 푸사리움 쿨모룸(Fusarium culmorum), 파에오스파에리아 노도룸(Phaeosphaeria nodorum), 지모세프토리아 트리티시(Zymoseptoria tritici), 피토프토라 크립토게아(Phytophthora cryptogea), 피토프토라 인페스탄스(Phytophthora infestans), 피티움 울티뭄(Pythium ultimum), 마그나포르테 오리자에(Magnaporthe oryzae), 타나테포루스 쿠쿠메리스(Thanatephorus cucumeris), 우스틸라고 세게툼(Ustilago segetum) 변종 아베나에(avenae), 우로미세스 아펜디쿨라투스(Uromyces appendiculatus), 및 푹시니아 트리티시나(Puccinia triticina)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 실시양태에서, 식물 질병은 박테리아에 의해 유발된다. 한 측면에서, 박테리아는 크산토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris), 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae), 및 에르위니아 카로토보라(Erwinia carotovora)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 유용 식물에서 식물병원성 유기체를 방제하기 위한 개시된 조성물의 용도에 관한 것이다. 특정 측면에서, 식물병원성 유기체는 알테르나리아 알테르나타, 알테르나리아 솔라니, 보트리티스 시네레아, 콜레토트리쿰 라게나리움, 푸사리움 쿨모룸, 파에오스파에리아 노도룸, 지모세프토리아 트리티시, 피토프토라 크립토게아, 피토프토라 인페스탄스, 피티움 울티뭄, 마그나포르테 오리자에, 타나테포루스 쿠쿠메리스, 우스틸라고 세게툼 변종 아베나에, 우로미세스 아펜디쿨라투스, 및 푹시니아 트리티시나로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 측면에서, 식물병원성 유기체는 크산토모나스 캄페스트리스, 슈도모나스 시린가에, 및 에르위니아 카로토보라로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 유용 식물은 사과, 바나나, 시트러스, 키위, 멜론, 복숭아, 배, 파인애플, 인과류, 석류, 양배추, 콜리플라워, 오이, 호로과, 토마토, 감자, 밀, 벼 및 대두로 이루어진 군으로부터 선택된다.
도 1은 토마토 역병 (PHYTIN), 잿빛곰팡이병 (BOTRCI), 및 밀 잎 녹병 (PUCCRT)에 대한 파에니바실루스 종 균주의 전체 브로쓰의 식물내 살진균 활성을 도시한다.
도 2는 알테르나리아 알테르나타 (ALTEAL), 보트리티스 시네레아 (BOTRCI), 푸사리움 쿨모룸 (FUSACU), 파에오스파에리아 노도룸 (LEPTNO), 지모세프토리아 트리티시 (SEPPTR), 피토프토라 크립토게아 (PHYTCR), 피토프토라 인페스탄스 (PHYTIN), 피티움 울티뭄 (PYTHUL), 마그나포르테 오리자에 (PYRIOR), 타나테포루스 쿠쿠메리스 (RHIZSO), 우스틸라고 세게툼 변종 아베나에 (USTIAV), 및 우로미세스 아펜디쿨라투스 (UROMAP)에 대한 파에니바실루스 종 균주의 전체 브로쓰로부터의 푸사리시딘 추출물의 시험관내 항진균 활성을 도시한다.
도 3은 비시클릭 유사체인 LiF04c를 생성하기 위한 LiF04a (푸사리시딘 A로 또한 공지됨)에서의 고리 구조의 개방을 제시한다. 각각의 푸사리시딘 및 푸사리시딘-유사 화합물의 비시클릭 유사체는 유사한 방식으로 발생한다.
도 4a는 위치 (1), (4), 및 (6)에서 확인된 보존된 아미노산 및 AA (아미노산)로 표시된 달라지는 아미노산을 갖는 공지된 푸사리시딘의 구조를 약술하는 다이어그램을 제시한다. 15-구아니디노-3-히드록시펜타데칸산 (GHPD) 꼬리는 위치 (1)에서의 L-트레오닌의 N-말단과 아미드 결합을 형성한다. 위치 (6)에서의 D-알라닌의 C-말단은 "O"를 가리키는 화살표로 표시된, 위치 (1)에서의 L-트레오닌의 히드록실 기와 에스테르 연결을 형성한다. 도 4b는 공지된 푸사리시딘이 확인되는 파에니바실루스 종 세포 추출물로부터의 HPLC/MS TOF 크로마토그램을 제시한다. 도 4c는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주로부터의 세포 추출물에서 검출가능한 공지된 푸사리시딘을 도시한다.
도 5a는 파에니세린의 구조를 약술하는 다이어그램을 제시한다. 이 부류의 화합물은 위치 (1) 및 (4)에서의 보존된 트레오닌 중 1개 또는 둘 다가 세린으로 치환된 것을 제외하고는 푸사리시딘과 유사하다. 도 5b는 파에니세린이 확인되는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주로부터의 세포 추출물의 HPLC/MS TOF 크로마토그램을 제시한다. 도 5c는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주로부터의 세포 추출물에서 검출가능한 파에니세린을 도시한다. m/z 값 및 체류 시간 (RT)이 모든 검출된 화합물에 대해 제시된다.
도 6a는 도 6b에 제시된 UPLC/MS 삼중 TOF 스펙트럼으로부터 유래된 파에니세린 A1의 화학 구조를 도시한다.
도 7a는 도 7b에 제시된 UPLC/MS 삼중 TOF 스펙트럼으로부터 유래된 파에니세린 B1의 화학 구조를 도시한다.
도 8a는 파에니프롤릭신의 구조를 약술하는 다이어그램을 제시한다. 이들 부류의 화합물은 GHPD 꼬리의 길이가 -(CH2)12- 내지 -(CH2)14- 또는 -(CH2)16-로 연장된 것을 제외하고는 푸사리시딘과 유사하다. 도 8b는 파에니프롤릭신이 확인되는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주로부터의 세포 추출물의 HPLC/MS TOF 크로마토그램을 제시한다. 도 8c는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주로부터의 세포 추출물에서 검출가능한 파에니프롤릭신을 도시한다. m/z 값 및 체류 시간 (RT)은 모든 검출된 화합물에 대해 제시된다.
도 9a는 도 9b에 제시된 UPLC/MS 삼중 TOF 스펙트럼으로부터 유래된 파에니프롤릭신 C1의 화학 구조를 도시한다.
도 10a는 도 10b에 제시된 UPLC/MS 삼중 TOF 스펙트럼으로부터 유래된 파에니프롤릭신 D1의 화학 구조를 도시한다.
도 11은 한천 플레이트 상에서 콜레토트리쿰 라게나리움 (COLLLA)의 포자의 론에 적용된 푸사리시딘 A 및 B ("AB"), 파에니세린 A1 및 B1 ("868"), 파에니프롤릭신 A2 및 B2 ("938"), 또는 868 및 938의 조합을 사용한 커비-바우어 항생제 디스크 확산 검정을 도시한다. 그의 진균 성장의 억제 구역을 갖는 각각의 디스크의 직경은 밀리미터로 표시된다.
도 12a는 푸사리시딘 A의 화학 구조 및 이 구조의 단순화된 도시를 제시한다. 도 12b-12e는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 그로부터 유래된 균주에 의해 생산되는 푸사리시딘, 파에니세린, 및/또는 파에니프롤릭신의 조합의 단순화된 도시를 도시한다. 이들과 같은 조합은 상승작용적 항진균 효과를 생성할 수 있고 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 그로부터 유래된 균주에서 관찰되는 비교적 높은 효능 및 광역 항진균 활성을 담당한다.
도 13은 하기 파에니바실루스 균주에 의해 발현되는 FusA 푸사리시딘 신테타제의 절편의 다중 서열 정렬을 제시한다: 파에니바실루스 페오리아에(Paenibacillus peoriae) A (서열식별번호: 1); 파에니바실루스 폴리믹사 A (서열식별번호: 2); 파에니바실루스 폴리믹사 PKB1 (진뱅크(GenBank) ABQ96384.2; 서열식별번호: 3); 파에니바실루스 폴리믹사 E681 (진뱅크 ADM67985.1; 서열식별번호: 4); 파에니바실루스 폴리믹사 B (서열식별번호: 5); 파에니바실루스 폴리믹사 SQR (진뱅크 AHM63812.1; 서열식별번호: 6); 파에니바실루스 폴리믹사 C (서열식별번호: 7); 파에니바실루스 폴리믹사 M1 (진뱅크 CCC83015.1; 서열식별번호: 8); 파에니바실루스 폴리믹사 SC2 (진뱅크 ACA09733.2; 서열식별번호: 9); 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 (서열식별번호: 10); 및 파에니바실루스 종 균주 A (서열식별번호: 11). 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기는 흑색 윤곽선으로 식별된다 (또한 표 1 참조). 이들 아미노산 잔기는 서열식별번호: 1-5 및 11의 위치 3203, 3204, 3207, 3246, 3267, 3269, 3290, 3298, 3299, 및 3486 및 서열식별번호: 6-9의 위치 3204, 3205, 3208, 3247, 3268, 3270, 3291, 3299, 3300, 및 3487에 위치한다.
도 14는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A ("균주 A")에서의 푸사리시딘 유전자 클러스터를 도시한다. 화살표는 클러스터 내의 개별 유전자를 나타낸다 (즉, fusG는 "G" 화살표에 의해 나타내어지고, fusF는 "F" 화살표에 의해 나타내어지는 등임). 가장 큰 화살표는 하기 약어 및 기호를 사용하여 fusA 푸사리시딘 신테타제 유전자를 나타낸다: A=아데닐화 도메인 (기질 인식 및 활성화); C=축합 도메인 (펩티드 결합 형성); E=에피머화 도메인 (기질 라세미화); TE=티오에스테라제 도메인 (생성물 방출); 문자 없는 타원형 =티올화 (T) 도메인 (펩티드 담체 단백질). fusA 유전자는 각각의 유전자 클러스터 위 또는 아래의 박스에 표시된 아미노산을 혼입시키는 것을 담당하는 6개의 모듈을 갖는다. 균주 A는 전형적인 푸사리시딘 유전자 클러스터를 갖는 반면에 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 푸사리시딘 유전자 클러스터는 모듈 3에서의 기능적 A 도메인이 누락되어 있다. 그 결과, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 의해 생산되는 푸사리시딘은 위치 (3)에 티로신 및 페닐알라닌이 결여되어 있고 단지 발린 또는 이소류신만을 혼입시킨다.
도 15는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 (서열식별번호: 12) 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129 (서열식별번호: 13)에서의 spo0A 유전자의 서열 정렬을 도시한다.
도 16은 내생포자-형성 박테리아로부터의 Spo0A 오르토로그의 서열 정렬을 도시하며 이는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129 코딩 서열에서의 뉴클레오티드 변화가 보존된 영역에서 단일 아미노산 치환을 일으킨다는 것을 나타낸다. 정렬된 Spo0A 오르토로그 서열은: 파에니바실루스 테라에(Paenibacillus terrae) Spo0A (서열식별번호: 14), 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 Spo0A (서열식별번호: 15), 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129 Spo0A (서열식별번호: 16), 파에니바실루스 폴리믹사 Spo0A (서열식별번호: 17), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) Spo0A (서열식별번호: 18), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) Spo0A (서열식별번호: 19), 및 클로스트리디움 파스테우리아눔(Clostridium pasteurianum) Spo0A (서열식별번호: 20)이다.
도 17은 진균 병원체 알테르나리아 솔라니 (ALTESO) 및 콜레토트리쿰 라게나리움 (COLLLA)에 대한 여러 푸사리시딘, 파에니세린, 및 파에니프롤릭신의 80% 최소 억제 농도 (MIC80) 값을 도시한다.
본 발명은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그로부터 유래된 살진균 돌연변이체 (균주)를 제공한다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972가 식물병원체에 대해 광역 활성을 갖는다는 것이 밝혀진 바 있다.
본원에 기재된 미생물 및 특정한 균주는, 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 모두 자연에서 분리되고 인공 조건 하에 예컨대 진탕 플라스크 배양에서 또는 스케일-업 제조 공정을 통해, 예컨대 예를 들어 생물활성 대사물 생산을 최대화하는 생물반응기에서 성장시킨다. 이러한 조건 하에서의 성장은 균주 "사육"을 일으킨다. 일반적으로, 이러한 "사육된" 균주는 자연 환경에서 발견되는 선택 압박이 아니라 오히려 인공적인 선택 압박을 받는 동종 집단으로서 배양된다는 점에서 자연에서 발견되는 그의 대응물과 상이하다.
본원에 사용된 용어 "단리된"은 전체 브로쓰 또는 발효 생성물 중에 풍부화 또는 농축되었거나 또는 부분적으로 또는 실질적으로 전체 브로쓰 또는 발효 생성물로부터 정제된 화합물을 지칭한다.
한 실시양태에서, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 돌연변이체 균주가 제공된다. 용어 "돌연변이체"는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터 유래된 유전자 변이체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 돌연변이체는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 하나 이상의 또는 모든 식별 (기능적) 특징을 갖는다. 특정한 경우에서, 모 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972뿐만 아니라 돌연변이체 또는 그의 발효 생성물은 (기능적 식별 특징으로서) 적어도 진균, 난균류 및/또는 박테리아를 방제한다. 이러한 돌연변이체는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 대해 약 85% 초과의, 약 90% 초과의, 약 95% 초과의, 약 98% 초과의, 또는 약 99% 초과의 서열 동일성을 갖는 게놈 서열을 갖는 유전자 변이체일 수 있다. 돌연변이체는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 세포를 화학물질 또는 조사로 처리함으로써 또는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 세포의 집단으로부터 자발적 돌연변이체 (예컨대 파지 저항성 또는 항생제 저항성 돌연변이체)를 선택함으로써 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 다른 수단에 의해 수득될 수 있다.
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 그의 돌연변이체는 광범위한 식물 병원체에 대한 활성을 갖는다. 한 측면에서, 균주는 진균, 예컨대 오이 탄저병, 오이 흰가루병, 밀 잎 녹병, 보리 흰가루병 및 보트리티스; 난균류, 예컨대 토마토 역병, 오이 노균병 및 브라시카 노균병; 및/또는 박테리아, 예컨대 슈도모나스, 크산토모나스, 및 에르위니아에 대한 활성을 갖는다.
특정 측면에서, 파에니바실루스 종 균주는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 75%의 서열 동일성, 적어도 80%의 서열 동일성, 적어도 90%의 서열 동일성, 적어도 95%의 서열 동일성, 적어도 96%의 서열 동일성, 적어도 97%의 서열 동일성, 적어도 98%의 서열 동일성, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 나타내는 DNA 서열을 포함한다.
특정 측면에서, 본 발명은 푸사리시딘, 파에니세린, 및/또는 파에니프롤릭신을 생산하는 파에니바실루스 종 균주를 포함하는 발효 생성물에 관한 것이다. 푸사리시딘은 15-구아니디노-3-히드록시펜타데칸산 (GHPD) 꼬리를 갖는 뎁시펩티드뿐만 아니라 그의 선형 대응물의 패밀리이다. 푸사리시딘의 특정한 보존된 특징은 이 GHPD 꼬리뿐만 아니라 서열에서의 6개의 아미노산 중 3개: (1) 트레오닌, (4) 트레오닌, 및 (6) 알라닌이다.
원래 70년대 중반에 문헌 [Nakajima et al. (J. Antibiot. 1972, 25, 243-247)]에 의해 발견되었지만 특징화되지 않은, 푸사리시딘은 1980년대 후반에 문헌 [Kurusu et al. (J. Antibiot., 1987, 40, 1506-1514)]에 의해 기재되었다. 이들은 문헌 [Kajimura et al. (J. Antibiot., 1996, 49, 129-135; J. Antibiot., 1997 50, 220-228), Kuroda et al. (Heterocycles, 2000, 53, 1533-1549; J. Mass Spectrom., 2001, 36, 30-37), 및 Beatty et al. (Can. J. Microbiol., 2002, 48, 159-169)]에 의해 1990년대 중반 내지 2000년대 초반에 걸쳐 추가로 연구되었다. 이 많은 연구 기간 동안 이들 화합물은 저자에 따라 수회 재명명되었다 (푸사리시딘 A는 LiF04a, 가타발린, 또는 심지어 KT-6291A로 또한 공지됨). 화제가 된 많은 공개가 있긴 하지만, 24종의 공지된 푸사리시딘의 동일한 군으로부터 화합물을 선택하는 것이 매번 기재되어 있다.
화제가 되고 다소 조용한 기간 후에, 문헌 [Vater et al. (J. Am. Soc. Mass Spectrom., 2015, 26, 1130-1141)]은 질량 분광측정법에 의한 푸사리시딘의 구조적 규명을 기재하고 패밀리의 여러 유사체를 기재하였다. 문헌 [Vater et al.]은 7개의 아미노산을 갖는 새로운 부류의 푸사리시딘-유사 화합물 (즉, 펩티드 서열에서 (4) 트레오닌 잔기에 추가의 알라닌이 연결됨)을 확인하였다. 본원에 사용된 용어 "비시클릭 유사체"는 푸사리시딘 또는 푸사리시딘-유사 화합물 (예를 들어, 파에니세린 또는 파에니프롤릭신)에 해당되지만 에스테르 결합이 결여되어, 선형 구조를 생성하는 화합물을 지칭한다.
푸사리시딘의 아미노산 쇄는 함께 연결되고 비-리보솜 펩티드 신테타제 (NRPS)에 의해 변형된다. 다중-도메인 NRPS는 최대 15,000개의 아미노산으로 이루어지고 따라서 자연에서 가장 긴 단백질로 간주된다 (Schwarzer et al., (2003) Nonribosomal Peptides: From Genes to Products. Nat. Prod. Rep. 20, 275-287). NRPS 혼입은 리보솜에 의해 번역된 21개의 표준 아미노산으로 제한되지 않고, 이 무차별성은 비-리보솜 펩티드의 큰 구조적 다양성 및 생물학적 활성에 기여한다 (Li and Jensen, (2008). Nonribosomal biosynthesis of fusaricidins by Paenibacillus polymyxa PKB1 involves direct activation of a d-amino acid. Chem. Biol. 15, 118-127).
피. 폴리믹사 E68에서, 푸사리시딘 생합성 유전자 클러스터 (fusGFEDCBA)가 특징화되었고, 클러스터에서 가장 큰 코딩 DNA 서열 (CDS)인 NRPS 코딩 서열이 6개-모듈 펩티드를 코딩하는 것으로 관찰되었다 (Choi et al., Identification and Functional Analysis of the Fusaricidin Biosynthetic Gene of Paenibacillus polymyxa E681. Biochem. Biophys. Res. Commun. 365, 89-95; Li and Jensen, Identification and Functional Analysis of the Fusaricidin Biosynthetic Gene of Paenibacillus polymyxa E681. Biochem. Biophys. Res. Commun. 365, 89-95; Li et al., (2013). Promoter Analysis and Transcription Regulation of fus Gene Cluster Responsible for Fusaricidin Synthesis of Paenibacillus polymyxa SQR-21. Appl. Microbiol. Biotechnol. 97, 9479-9489). 생합성 클러스터는 지질 모이어티의 생합성을 담당하는 다른 CDS를 포함하지만 수송체 유전자를 함유하지 않는다 (Li and Jensen, (2008). Nonribosomal Biosynthesis of Fusaricidins by Paenibacillus polymyxa PKB1 Involves Direct Activation of a d-amino acid. Chem. Biol. 15, 118-127). 피. 폴리믹사에서, fus 오페론을 위한 프로모터가 확인되고 이전 연구가 포자형성의 조절제로서 연루시킨 전사 리프레서 (AbrB)에 의해 결합되는 것으로 제시되었으며; 이는 푸사리시딘이 포자형성 동안 합성되고, 따라서 미생물의 2차 대사를 그의 생활 주기와 함께 조정하는 것으로 관찰되었기 때문에 관심 대상이다 (Li et al., (2013). Promoter Analysis and Transcription Regulation of fus Gene Cluster Responsible for Fusaricidin Synthesis of Paenibacillus polymyxa SQR-21. Appl. Microbiol. Biotechnol. 97, 9479-9489).
대립유전자 다양성은 전형적으로 화학적 다양성의 생성을 담당하는 것으로 생각된다. 그러나, fus 클러스터의 흥미로운 특색은 그의 혼입된 아미노산 (Tyr, Val, Ile, 알로-Ile, Phe)이 상이한 푸사리시딘의 다양성이 fusA의 단일 대립유전자에 의해 생성될 수 있다는 것; 기저 메카니즘이 아미노산의 인식을 담당하는 NRPS A-도메인이 기질 특이성을 완화시킨다는 것이다 (Han et al., (2012). Site-Directed Modification of the Adenylation Domain of the Fusaricidin Nonribosomal Peptide Synthetase for Enhanced Production of Fusaricidin Analogs. Biotechnol. Lett.34, 1327-1334; Mousa et al., (2015) Biodiversity of Genes Encoding Anti-Microbial Traits within Plant Associated Microbes, Front Plant Sci. 2015; 6: 231).
fusA 유전자에서 기질 인식 및 활성화를 담당하는 A-도메인의 구조는 X선 결정학을 사용하여 GrsA로부터 결정되었고, 기질 특이성을 결정하는 10개의 아미노산 잔기 (Asp235, Ala236, Trp239, Thr278, Ile299, Ala301, Ala322, Ile330, Cys331, 및 Lys517)가 확인된 바 있다 (Challis et al., (2000) Predictive, Structure-Based Model of Amino Acid Recognition by Nonribosomal Peptide Synthetase Adenylation Domains. Chem Biol 7:211-224; Stachelhaus et al., (1999) The Specificity Conferring Code of Adenylation Domains in Nonribosomal Peptide Synthetases. Chem Biol 6:493-505). 이들 10개의 서명 잔기는 기질 결합 부위 내의 그의 기능에 기초하여 3개의 하위군으로 분류될 수 있다. Asp235 및 Lys517은 각각 기질의 카르복실 및 아미노 말단과 상호작용하고, 서열 분석은 NRPS의 A-도메인에서의 그의 위치가 불변이라는 것을 밝혀냈다. Ala236, Ala301 및 Ile330은 지방족 측쇄를 갖는 아미노산 기질에 특이적인 A-도메인 내에서 중간 정도로 가변적이다. Trp239, Thr278, Ile299, Ala322 및 Cys331은 매우 가변적인 위치이고 상이한 기질의 판별 및 선택에 중요한 것으로 생각된다 (Challis et al., (2000) Predictive, Structure-Based Model of Amino Acid Recognition by Nonribosomal Peptide Synthetase Adenylation Domains. Chem Biol 7:211-224; Stachelhaus et al., (1999) The Specificity Conferring Code of Adenylation Domains in Nonribosomal Peptide Synthetases. Chem Biol 6:493-505). Ile299는 기질 특이성을 부여하는 서열 내에 모두 중 가장 가변적인 위치였다 (Stachelhaus et al., (1999) The Specificity Conferring Code of Adenylation Domains in Nonribosomal Peptide Synthetases. Chem Biol 6:493-505).
푸사리시딘 신테타제에서 기질 특이성을 결정하는 10개의 아미노산 잔기는 표 1에 제시된다. 신테타제에서 각각의 6개의 모듈에 대한 아데닐화 도메인 (A 도메인)은 제1 모듈에 대해 FusA-A1, 제2 모듈에 대해 FusA-A2, 제3 모듈에 대해 FusA-A3 등으로 공지되어 있다. 이들 10개의 아미노산 잔기는 또한 도 13에 제시된 다양한 파에니바실루스 종 균주로부터의 FusA의 다중 서열 정렬에서 확인된다.
표 1
Figure pct00003
특정 측면에서, 살진균 파에니바실루스 종 균주는 FusA-A3에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 10개 모두의 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 변이체 푸사리시딘 신테타제를 발현한다. 다른 측면에서, 살진균 파에니바실루스 종 균주는 FusA-A3에서 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, Cys331, Lys517, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 푸사리시딘 신테타제를 발현한다.
본원에 개시된 FusA-A3에서의 결실은 푸사리시딘 또는 푸사리시딘-유사 화합물에서의 펩티드 고리의 아미노산 위치 (3)에 특정한 아미노산을 혼입시키는 푸사리시딘 신테타제의 능력에 영향을 미친다. 예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972는 FusA-A3에서의 결실을 포함하고 아미노산 위치 (3)에서 티로신 아미노산 또는 페닐알라닌 아미노산을 갖는 푸사리시딘 화합물을 생산할 수 없다. 임의의 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, FusA-A3에서의 결실은 전형적 푸사리시딘의 생합성으로부터 푸사리시딘-유사 화합물 예컨대 파에니세린 및 파에니프롤릭신의 생합성을 향해 대사를 이동시키는 것일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 제3 모듈에서의 기능적 아데닐화 도메인 (FusA-A3)이 결여된 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물을 포함하는 조성물에 관한 것이며, 적어도 하나의 파에니세린 및 적어도 하나의 파에니프롤릭신을 추가로 포함한다. 특정 측면에서, 적어도 하나의 파에니세린 및 적어도 하나의 파에니프롤릭신은 조성물 중에서 단리되거나 또는 풍부화된다.
일부 실시양태에서, 단리된 화합물 또는 파에니프롤릭신은
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
이다.
일부 실시양태에서, 단리된 화합물 또는 파에니세린은
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
이다.
다른 측면에서, 본 발명은 살진균 파에니바실루스 종 균주를 확인하고/거나 상응하는 발효 생성물을 생산하는 방법에 관한 것이다. 방법은 파에니바실루스 종 균주에서의 FusA-A3을 서열분석하여 변이체 푸사리시딘 신테타제를 특징화하는 것 및 파에니바실루스 종 균주의 살진균 활성을 검정하는 것을 포함한다. 특정 측면에서, FusA-A3은 도 13 (즉, 서열식별번호: 1-11)에 제시된 하나 이상의 서열에 기초한 프라이머를 사용하여 서열분석된다. 일부 실시양태에서, 세포를 성장시키고 하기 특징: 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 (즉, 기능적 FusA-A3을 발현하는) 참조 파에니바실루스 종 균주에서 정량화된 푸사리시딘에 비해 감소된 또는 검출불가능한 수준의 아미노산 잔기 (3)에서 티로신 또는 페닐알라닌을 갖는 푸사리시딘 (예를 들어, LiF03a, LiF03b, LiF03c, LiF03d, LiF07a, LiF07b, LiF07c, 및/또는 LiF07d); 및/또는 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 (즉, 기능적 FusA-A3을 발현하는) 참조 파에니바실루스 종 균주에서 정량화된 것에 비해 증가된 수준의 파에니세린 (예를 들어, 파에니세린 A1 및/또는 파에니세린 B1) 및/또는 파에니프롤릭신 중 하나 이상을 갖는 세포를 선택하는 것이 스크리닝에 선행한다.
한 측면에서, 본 발명은 변이체 푸사리시딘 신테타제를 갖는 파에니바실루스 종 균주를 배양하여 포자를 형성하는 것을 포함하는, 광역 항진균 활성을 갖는 발효 생성물을 생산하는 방법을 포괄한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 a) 파에니바실루스 종 균주에서의 FusA-A3을 서열분석하여 변이체 푸사리시딘 신테타제를 특징화하는 것; b) 변이체 푸사리시딘 신테타제를 갖는 파에니바실루스 종 균주의 살진균 활성을 검정하는 것; 및 c) 파에니바실루스 종 균주가 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하고 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 참조 파에니바실루스 종 균주에 비해 증가된 살진균 활성을 입증하는 경우에 살진균 파에니바실루스 종 균주를 광역 항진균 활성을 갖는 것으로서 선택하는 것을 포함하는, 광역 항진균 활성을 갖는 살진균 파에니바실루스 종 균주를 확인하는 방법에 관한 것이다. 방법은 파에니바실루스 종 균주에 의해 생산된 파에니세린 및/또는 파에니프롤릭신을 정량화하고 파에니바실루스 종 균주가 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 참조 파에니바실루스 종 균주에 비해 증가된 수준의 파에니세린 및/또는 파에니프롤릭신을 생산하는 경우에 파에니바실루스 종 균주를 광역 항진균 활성을 갖는 것으로서 선택하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 측면에서, 방법은 살진균 파에니바실루스 종 균주를 배양하여 살진균 발효 생성물을 생산하는 것을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 a) 파에니바실루스 종 균주에서의 FusA-A3을 서열분석하여 변이체 푸사리시딘 신테타제를 특징화하는 것; b) 변이체 푸사리시딘 신테타제를 갖는 파에니바실루스 종 균주의 살진균 활성을 검정하는 것; c) 파에니바실루스 종 균주가 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하고 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 참조 파에니바실루스 종 균주에 비해 증가된 살진균 활성을 입증하는 경우에 살진균 파에니바실루스 종 균주를 광역 항진균 활성을 갖는 것으로서 선택하는 것; 및 d) 살진균 파에니바실루스 종 균주를 배양하여 살진균 발효 생성물을 생산하는 것을 포함하는, 광역 항진균 활성을 갖는 살진균 파에니바실루스 종 균주를 포함하는 항진균 발효물을 생산하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 변이체 푸사리시딘 신테타제는 FusA-A3에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 10개 모두의 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기의 결실을 포함한다. 다른 측면에서, 변이체 푸사리시딘 신테타제는 FusA-A3에서 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, Cys331, Lys517, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 아미노산 잔기의 결실을 포함한다.
본 발명은 또한 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 돌연변이체, 또는 그의 무세포 제제 또는 그의 대사물을 식물 또는 식물 부분, 예컨대 잎, 줄기, 꽃, 과실, 뿌리, 또는 종자에 투여함으로써 또는 식물 또는 식물 부분이 성장하는 생육지, 예컨대 토양에 적용함으로써, 식물 질병을 방제하기 위해 식물을 처리하는 방법을 포괄한다.
본 발명에 따른 방법에서 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체를 함유하는 조성물은 식물을 성장시키는 데 사용된 임의의 유형의 배지 (예를 들어, 토양, 버미큘라이트, 절단된 카드보드, 및 물)에서 성장된 임의의 식물 또는 임의의 식물의 임의의 부분에 적용될 수 있거나 또는 난초 또는 박쥐난과 같은 공중에서 성장된 식물 또는 식물의 부분에 적용될 수 있다. 조성물은 예를 들어 분무, 분무화, 기화, 산란, 살분, 급수, 분출, 살포, 투하 또는 훈증에 의해 적용될 수 있다. 상기 이미 나타낸 바와 같이, 적용은 관심 식물이 위치한 임의의 목적하는 위치, 예컨대 농업, 원예, 산림, 플랜테이션, 과수원, 육묘, 유기적 성장 작물, 잔디 및 도시 환경에서 수행될 수 있다.
본 발명의 조성물은 배지를 사용하는 것 및 아래 실시예에 기재된 다른 방법을 포함하는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 따라 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그로부터 유래된 살진균 돌연변이체 (균주)를 배양함으로써 수득될 수 있다. 통상적인 대규모 미생물 배양 공정은 액내 발효, 고체 상태 발효, 또는 액체 표면 배양을 포함한다. 발효의 종료 무렵에, 영양분이 고갈되면서, 세포는 발효의 최종 생성물이 대체로 포자, 대사물 및 잔류 발효 배지이도록 성장기로부터 포자형성기로의 전이를 시작한다. 포자형성은 파에니바실루스 천연 생활 주기의 일부이고 일반적으로 영양 제한에 반응하여 세포에 의해 개시된다. 발효는 높은 수준의 콜로니 형성 단위를 수득하고 포자형성을 촉진하도록 구성된다. 발효로부터 생성되는 배양 배지에서의 박테리아 세포, 포자 및 대사물은 직접 사용되거나 또는 통상적인 산업적 방법, 예컨대 원심분리, 접선-흐름 여과, 심층 여과, 및 증발에 의해 농축될 수 있다.
본 발명의 조성물은 발효 생성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 농축된 발효 브로쓰는, 예를 들어, 투석여과 공정을 통해 세척되어, 잔류 발효 브로쓰 및 대사물이 제거된다. 본원에 사용된 용어 "브로쓰 농축물"은 상기 기재된 바와 같이 통상적인 산업용 방법에 의해 농축되지만, 액체 형태로 남아있는 전체 브로쓰 (발효 브로쓰)를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "발효 고형물"은 발효 브로쓰가 건조된 후에 남아있는 고체 물질을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "발효 생성물"은 전체 브로쓰, 브로쓰 농축물 및/또는 발효 고형물을 지칭한다. 본 발명의 조성물은 발효 생성물을 포함한다.
발효 브로쓰 또는 브로쓰 농축물은 담체의 첨가와 함께 또는 담체의 첨가 없이 통상적인 건조 공정 또는 방법 예컨대 분무 건조, 동결 건조, 트레이 건조, 유동층 건조, 드럼 건조, 또는 증발을 사용하여 건조시킬 수 있다.
생성된 건조 생성물은 예컨대 밀링 또는 과립화에 의해 추가로 처리되어 특정한 입자 크기 또는 물리적 포맷을 달성할 수 있다. 아래 기재된 담체는 또한 건조후 첨가될 수 있다.
본 발명의 균주의 발효 브로쓰의 무세포 제제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단, 예컨대 발효 브로쓰의 추출, 원심분리 및/또는 여과에 의해 수득될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 소위 무세포 제제는 세포가 전혀 없을 수 있는 것이 아니라 오히려 세포를 제거하는 데 사용된 기술 (예를 들어, 원심분리의 속도)에 따라 대체로 무세포이거나 또는 본질적으로 무세포라는 것을 이해할 것이다. 생성된 무세포 제제는 건조되고/거나 식물 또는 식물 성장 배지에의 그의 적용을 보조하는 성분과 함께 제제화될 수 있다. 발효 브로쓰에 대해 상기 기재된 농축 방법 및 건조 기술은 또한 무세포 제제에 적용가능하다.
한 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 104 콜로니 형성 단위 (CFU)의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 105 콜로니 형성 단위 (CFU)의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 106 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 107 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 108 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 109 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 1010 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발효 생성물은 적어도 약 1 x 1011 CFU의 미생물 (예를 들어, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주)/mL 브로쓰를 포함한다.
본 발명의 조성물은 그대로 또는, 그의 특정한 물리적 및/또는 화학적 특성에 따라, 그의 제제 형태 또는 그로부터 제조된 사용 형태, 예컨대 에어로졸, 캡슐 현탁액, 냉-연무 농축물, 온-연무 농축물, 캡슐화 과립, 미세 과립, 종자 처리용 액상수화제 농축물, 즉시 사용가능한 용액, 살분성 분말, 유화성 농축물, 수중유 에멀젼, 유중수 에멀젼, 거대과립, 미세과립, 오일-분산성 분말, 오일-혼화성 액상수화제 농축물, 오일-혼화성 액체, 기체 (압력 하), 기체 생성 제품, 발포체, 페이스트, 살충제 코팅된 종자, 현탁액 농축물, 오일 분산액, 유현탁액 농축물, 가용성 농축물, 현탁액, 습윤성 분말, 가용성 분말, 분진 및 과립, 수용성 및 수분산성 과립 또는 정제, 종자 처리용 수용성 및 수분산성 분말, 습윤성 분말, 활성 성분이 함침된 천연 생성물 및 합성 물질, 및 또한 중합체 물질 내의 마이크로캡슐화 및 종자 코팅 물질, 및 또한 ULV 냉-연무 및 온-연무 제제로 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 액체 제제이다. 액체 제제의 비제한적 예는 현탁액 농축물 및 오일 분산액을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 고체 제제이다. 고체 제제의 비제한적 예는 동결-건조 분말 및 분무-건조 분말을 포함한다.
본 발명의 조성물은 효능, 안정성, 및 유용성을 개선시키고/거나 가공, 포장 및 최종-사용 적용을 용이하게 하는, 세포, 무세포 제제 또는 대사물을 포함하는 조성물에 첨가된 제제 불활성 물질을 포함할 수 있다. 이러한 제제 불활성 물질 및 성분은 개별적으로 또는 조합되어 첨가될 수 있는 담체, 안정화제, 영양분, 또는 물리적 특성 개질제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 담체는 액체 물질 예컨대 물, 오일, 및 다른 유기 또는 무기 용매 및 고체 물질 예컨대 미네랄, 중합체, 또는 생물학적으로 유래된 또는 화학적 합성에 의한 중합체 복합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 담체는 조성물의 식물 부분, 예컨대 종자 또는 뿌리에의 부착을 용이하게 하는 결합제 또는 접착제이다. 예를 들어, 문헌 [Taylor, A.G., et al., "Concepts and Technologies of Selected Seed Treatments", Annu. Rev. Phytopathol. 28: 321-339 (1990)]을 참조한다. 안정화제는 케이킹방지제, 항-산화제, 건조제, 보호제 또는 보존제를 포함할 수 있다. 영양분은 탄소, 질소, 및 인 공급원 예컨대 당, 폴리사카라이드, 오일, 단백질, 아미노산, 지방산 및 포스페이트를 포함할 수 있다. 물리적 특성 개질제는 벌킹제, 습윤제, 증점제, pH 조절제, 레올로지 개질제, 분산제, 보조제, 계면활성제, 동결방지제 또는 착색제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 발효에 의해 생산되는 세포, 무세포 제제 또는 대사물을 포함하는 조성물은 직접 임의의 다른 제제 제조물 없이 희석제로서 물과 함께 또는 물 없이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제제 불활성 물질은 발효 브로쓰를 농축시킨 후 및 건조 동안 및/또는 건조 후에 첨가된다.
모든 식물 및 식물 부분은 본 발명에 따라 처리될 수 있다. 본 문맥에서, 식물은 모든 식물 및 식물 집단, 예컨대 목적하는 및 목적하지 않는 야생 식물 또는 작물 식물 (자연 발생 작물 식물을 포함함)을 의미하는 것으로 이해된다. 작물 식물은 전통적인 육종 및 최적화 방법 또는 생명공학적 및 재조합 방법, 또는 이들 방법의 조합에 의해 수득될 수 있는 식물일 수 있으며, 트랜스제닉 식물을 포함하고 식물 육종가의 권리에 의해 보호될 수 있거나 또는 보호될 수 없는 식물 품종을 포함한다. 식물 부분은 식물의 모든 공중 및 지하 부분 및 기관, 예컨대 싹, 잎, 꽃 및 뿌리를 의미하는 것으로 이해되며, 언급될 수 있는 예는 잎, 가시, 대, 줄기, 꽃, 과실체, 과실 및 종자, 및 또한 뿌리, 괴경 및 근경이다. 식물 부분은 또한 작물 물질 및 영양 및 생식 번식 물질, 예를 들어 절단, 괴경, 근경, 자른 가지 및 종자를 포함한다.
상기 이미 언급된 바와 같이, 모든 식물 및 그의 부분은 본 발명에 따라 처리될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 야생에서 성장하거나 또는 전통적인 생물학적 육종 방법 예컨대 혼성화 또는 원형질체 융합에 의해 수득된 식물 종 및 식물 품종, 및 그의 부분이 처리된다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 재조합 방법에 의해, 적절한 경우에 전통적인 방법 (유전자 변형 미생물)과 조합하여 수득된 트랜스제닉 식물 및 식물 품종, 및 그의 부분이 처리된다. 용어 "부분" 또는 "식물의 부분" 또는 "식물 부분"은 상기 본원에 설명된 바 있다. 각각의 경우에 상업적으로 입수가능하거나 또는 사용 중인 식물 품종의 식물은 본 발명에 따라 특히 바람직하게 처리된다. 식물 품종은 전통적인 육종, 돌연변이유발 또는 재조합 DNA 기술 둘 다에 의해 육종된 신규 형질을 갖는 식물을 의미하는 것으로 이해된다. 이들은 품종, 씨족, 생물형 및 유전자형의 형태를 취할 수 있다.
본 발명의 따른 조성물을 사용한 식물 및 식물 부분의 처리는 예를 들어 침지, 분무, 분무화, 미스팅, 증발, 살분, 연무, 산란, 발포, 페인팅, 확산, 주입, 드렌칭, 세류 관개 및, 번식 물질의 경우에, 특히 종자의 경우에, 또한 건식 종자 처리 방법, 습식 종자 처리 방법, 슬러리 처리 방법, 외피화, 하나 이상의 코트로의 코팅 등에 의해, 통상의 처리 방법을 사용하여 직접 또는 환경, 서식지 또는 저장 공간 상에 작용시킴으로써 수행된다. 활성 물질을 초저부피 방법에 의해 적용하거나 또는 활성 물질 제제 또는 활성 물질 그 자체로 토양 내에 주입하는 것이 또한 가능하다.
식물의 바람직한 직접 처리는 잎 적용 처리이고, 즉, 본 발명에 따른 조성물이 잎에 적용되며, 이는 처리 빈도 및 적용률이 해당 병원체의 감염 압박에 매칭되도록 하는 것이 가능하다.
전체 활성 화합물의 경우에, 본 발명에 따른 조성물은 뿌리계를 통해 식물에 도달한다. 이 경우에, 식물의 처리는 본 발명에 따른 조성물이 식물의 환경에 작용하도록 함으로써 실시된다. 이는 예를 들어 드렌칭에 의해, 토양 또는 영양 용액 내로의 혼입에 의해, 즉, 식물의 위치 (예를 들어 토양 또는 수경재배 시스템)가 본 발명에 따른 조성물의 액체 형태로 함침되고, 또는 토양 적용에 의해, 즉, 본 발명에 따른 조성물이 고체 형태로 (예를 들어 과립 형태로) 식물의 위치 내에 혼입되어 수행될 수 있다. 논벼 경작의 경우에, 이는 또한 본 발명에 따른 조성물을 고체 사용 형태로 (예를 들어 과립 형태로) 담수논에 계량투입함으로써 수행될 수 있다.
바람직한 식물은 유용 식물, 관상식물, 잔디, 공중 및 가정 부문에서 관상식물로서 사용되는 일반적으로 사용되는 나무, 및 산림 나무의 군으로부터의 것이다. 산림 나무는 목재, 셀룰로스, 종이 및 나무의 부분으로부터 만들어진 제품의 생산을 위한 나무를 포함한다.
본 문맥에 사용된 용어 "유용 식물"은 식품, 사료, 연료을 획득하기 위한 또는 산업적 목적을 위한 식물로서 사용된 작물 식물을 지칭한다.
본 발명의 조성물 및 방법으로 처리되고/거나 개선될 수 있는 유용 식물은 예를 들어 하기 유형의 식물을 포함한다: 잔디, 덩굴, 곡류, 예를 들어 밀, 보리, 호밀, 귀리, 벼, 메이즈 및 기장/수수; 비트, 예를 들어 사탕무 및 사료용 비트; 과실, 예를 들어 인과류, 핵과류 및 장과류, 예를 들어 사과, 배, 자두, 복숭아, 아몬드, 체리 및 장과류, 예를 들어 딸기, 라즈베리, 블랙베리; 콩과식물, 예를 들어 콩, 렌틸, 완두 및 대두; 오일 작물, 예를 들어 유지종자 평지, 겨자, 양귀비, 올리브, 해바라기, 코코넛, 피마자 오일 식물, 카카오 및 땅콩; 호로과, 예를 들어 호박/스쿼시, 오이 및 멜론; 섬유 식물, 예를 들어 목화, 아마, 대마 및 황마; 감귤류, 예를 들어 오렌지, 레몬, 그레이프프루트 및 탄제린; 채소, 예를 들어 시금치, 상추, 아스파라거스, 양배추 종, 당근, 양파, 토마토, 감자 및 벨 페퍼; 녹나무과, 예를 들어 아보카도, 신나모뭄, 캄포르, 또는 다른 식물 예컨대 담배, 넛, 커피, 가지, 사탕수수, 차, 페퍼, 포도덩굴, 홉, 바나나, 라텍스 식물 및 관상식물, 예를 들어 꽃, 관목, 낙엽수 및 침엽수. 이 열거는 비제한적이다.
하기 식물은 본 발명의 조성물 및 방법을 적용하는 데 특히 적합한 표적 작물인 것으로 간주된다: 목화, 가지, 잔디, 인과류, 핵과류, 장과류, 메이즈, 밀, 보리, 오이, 담배, 덩굴, 벼, 곡류, 배, 콩, 대두, 유지종자 평지, 토마토, 벨 페퍼, 멜론, 양배추, 감자 및 사과.
본 발명에 따른 방법에 따라 개선될 수 있는 나무의 예는: 아비에스(Abies) 종, 유칼립투스(Eucalyptus) 종, 피세아(Picea) 종, 피누스(Pinus) 종, 아에스쿨루스(Aesculus) 종, 플라타너스(Platanus) 종, 틸리아(Tilia) 종, 에이서(Acer) 종, 츠가(Tsuga) 종, 프락시누스(Fraxinus) 종, 소르부스(Sorbus) 종, 베툴라(Betula) 종, 크라타에구스(Crataegus) 종, 울무스(Ulmus) 종, 퀘르쿠스(Quercus) 종, 파구스(Fagus) 종, 살릭스(Salix) 종, 포풀루스(Populus) 종이다.
본 발명에 따른 방법에 따라 개선될 수 있는 바람직한 나무는: 나무 종 아에스쿨루스로부터: 에이. 히포카스타눔(A. hippocastanum), 에이. 파리플로라(A. pariflora), 에이. 카르네아(A. carnea); 나무 종 플라타너스로부터: 피. 아세리플로라(P. aceriflora), 피. 옥시덴탈리스(P. occidentalis), 피. 라세모사(P. racemosa); 나무 종 피세아로부터: 피. 아비에스; 나무 종 피누스로부터: 피. 라디아타(P. radiata), 피. 폰데로사(P. ponderosa), 피. 콘토르타(P. contorta), 피. 실베스트레(P. sylvestre), 피. 엘리오티이(P. elliottii), 피. 몬테콜라(P. montecola), 피. 알비카울리스(P. albicaulis), 피. 레시노사(P. resinosa), 피. 팔루스트리스(P. palustris), 피. 타에다(P. taeda), 피. 플렉실리스(P. flexilis), 피. 제프레기(P. jeffregi), 피. 바크시아나(P. baksiana), 피. 스토르부스(P. strobus); 나무 종 유칼립투스로부터: 이. 그란디스(E. grandis), 이. 글로불루스(E. globulus), 이. 카마덴티스(E. camadentis), 이. 니텐스(E. nitens), 이. 오블리쿠아(E. obliqua), 이. 레그난스(E. regnans), 이. 필룰라루스(E. pilularus)이다.
본 발명에 따른 방법에 따라 개선될 수 있는 특히 바람직한 나무는: 나무 종 피누스로부터: 피. 라디아타, 피. 폰데로사, 피. 콘토르타, 피. 실베스트레, 피. 스토르부스; 나무 종 유칼립투스로부터: 이. 그란디스, 이. 글로불루스, 이. 카마덴티스이다.
본 발명에 따른 방법에 따라 개선될 수 있는 매우 특히 바람직한 나무는: 침엽수, 버즘나무과, 보리수 나무, 단풍 나무이다.
본 발명은 또한 한지형 잔디 및 난지형 잔디를 포함하는 임의의 잔디에 적용될 수 있다. 한지형 잔디의 예는 블루그래스 (포아 종(Poa spp)), 예컨대 켄터기 블루그래스 (포아 프라텐시스 엘.(Poa pratensis L.)), 러프 블루그래스 (포아 트리비알리스 엘.(Poa trivialis L.)), 캐나다 블루그래스 (포아 콤프레사 엘.(Poa compressa L.)), 애뉴얼 블루그래스 (포아 안누아 엘.(Poa annua L.)), 업랜드 블루그래스 (포아 글라우칸타 가우딘(Poa glaucantha Gaudin)), 우드 블루그래스 (포아 네모랄리스 엘. (Poa nemoralis L.)) 및 불보스 블루그래스 (포아 불보사 엘.(Poa bulbosa L.)); 벤트그래스 (아그로스티스(Agrostis) 종) 예컨대 크리핑 벤트그래스 (아그로스티스 팔루스트리스 허드스.(Agrostis palustris Huds.)), 콜로니얼 벤트그래스 (아그로스티스 테누이스 시브스.(Agrostis tenuis Sibth.)), 벨벳 벤트그래스 (아그로스티스 카니나 엘.(Agrostis canina L.)), 사우스 저먼 믹스 벤트그래스 (아그로스티스 테누이스 시브스., 아그로스티스 카니나 엘., 및 아그로스티스 팔루스트리스 허드스.를 포함하는 아그로스티스 종), 및 레드톱 (아그로스티스 알바 엘.(Agrostis alba L.));
페스큐 (페스투카 종(Festuca)), 예컨대 레드 페스큐 (페스투카 루브라 엘.(Festuca rubra L.) 종 루브라(rubra)), 크리핑 페스큐 (페스투카 루브라 엘.), 츄잉 페스큐 (페스투카 루브라 콤뮤타타 가우드.(Festuca rubra commutata Gaud.)), 쉽 페스큐 (페스투카 오비나 엘.(Festuca ovina L.)), 하드 페스큐 (페스투카 롱기폴리아 투일.(Festuca longifolia Thuill.)), 헤어 페스큐 (페스투쿠 카필라타 람.(Festucu capillata Lam.)), 톨 페스큐 (페스투카 아룬디나세아 쉬렙.(Festuca arundinacea Schreb.)) 및 매도우 페스큐 (페스투카 엘라노르 엘.( Festuca elanor L.));
라이그래스 (롤리움(Lolium) 종), 예컨대 일년생 라이그래스 (롤리움 물티플로룸 람.(Lolium multiflorum Lam.)), 통년성 라이그래스 (롤리움 페렌네 엘.(Lolium perenne L.)) 및 이탈리안 라이그래스 (롤리움 물티플로룸 람.(Lolium multiflorum Lam.));
및 위트그래스 (아그로피론(Agropyron) 종), 예컨대 페어웨이 위트그래스 (아그로피론 크리스타툼 (엘.) 가에르튼.(Agropyron cristatum (L.) Gaertn.)), 크레스티드 위트그래스 (아그로피론 데세르토룸 (피스.) 슐트.(Agropyron desertorum (Fisch.) Schult.)) 및 웨스턴 위트그래스 (아그로피론 스미티이 리드브.(Agropyron smithii Rydb.))이다.
추가의 한지형 잔디의 예는 비치그래스 (암모필라 브레빌리굴라타 페른.(Ammophila breviligulata Fern.)), 스무스 브롬그래스 (브로무스 이네르미스 리스.(Bromus inermis Leyss.)), 부들 예컨대 티모시 (플레움 프라텐세 엘.(Phleum pratense L.)), 샌드 부들 (플레움 수불라툼 엘.(Phleum subulatum L.)), 오차드그래스 (닥틸리스 글로메라타 엘.(Dactylis glomerata L.)), 위핑 알칼리그래스 (푹시넬리아 디스탄스 (엘.) 파를.(Puccinellia distans (L.) Parl.)) 및 크레스티드 독스-테일 (시노수루스 크리스타투스 엘.(Cynosurus cristatus L.))이다.
난지형 잔디의 예는 버뮤다 그래스 (시노돈(Cynodon) 종 엘. 씨. 리크(L. C. Rich)), 조이시아 그래스 (조이시아(Zoysia) 종 윌드.(Willd.)), 세인트 어거스틴 그래스 (스테노타프룸 세쿤다툼 왈트 쿤체(Stenotaphrum secundatum Walt Kuntze)), 센티피드 그래스 (에레모클로아 오피우로이데스 몬로 핵.(Eremochloa ophiuroides Munro Hack.)), 카펫그래스 (악소노푸스 아피니스 체이스(Axonopus affinis Chase)), 바이아 그래스 (파스팔룸 노나툼 플루게(Paspalum notatum Flugge)), 키쿠유그래스 (펜니세툼 클란데스티눔 후크스트. ex 키오브.(Pennisetum clandestinum Hochst. ex Chiov.)), 버팔로 그래스 (부크로에 닥틸로이드스 (누트.) 엥겔름.(Buchloe dactyloids (Nutt.) Engelm.)), 블루 그라마 (보우텔로우아 그라실리스 (H.B.K.) 래그. ex 그리피스(Bouteloua gracilis (H.B.K.) Lag. ex Griffiths)), 해안 파스팔룸 (파스팔룸 바기나툼 스와츠(Paspalum vaginatum Swartz)) 및 사이드오트 그라마(보우텔로우아 쿠르티펜둘라(Bouteloua curtipendula) (미크스 토르.(Michx. Torr.))이다. 한지형 잔디는 일반적으로 본 발명에 따른 사용에 바람직하다. 블루그래스, 벤치그래스 및 레드톱, 페스큐 및 라이그래스가 특히 바람직하다. 벤트그래스가 특히 바람직하다.
본 발명의 조성물은 강력한 살미생물 활성을 갖고 작물 보호 및 물질 보호에 있어서 원치 않는 미생물, 예컨대 진균 및 박테리아의 방제에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 조성물이 식물병원성 진균, 식물병원성 박테리아 및/또는 그의 서식지에 적용된다는 점을 특징으로 하는, 원치 않는 미생물을 방제하는 방법에 관한 것이다.
살진균제는 작물 보호에 있어서 식물병원성 진균의 방제에 사용될 수 있다. 이들은 특히 부플라스모디오포로미세테스(Plasmodiophoromycetes), 페로노스포로미세테스(Peronosporomycetes) (동의어 난균류), 키트리디오미세테스(Chytridiomycetes), 지고미세테스(Zygomycetes), 아스코미세테스(Ascomycetes), 바시디오미세테스(Basidiomycetes) 및 듀테로미세테스(Deuteromycetes) (동의어 불완전 균류) 부류의 구성원인, 토양 매개 병원체를 포함하는 광역 식물병원성 진균에 대한 탁월한 효능을 특징으로 한다. 일부 살진균제는 전체 활성이고 식물 보호에 있어서 잎, 종자 드레싱 또는 토양 살진균제로서 사용될 수 있다. 또한, 이들은 특히 식물의 목재 또는 뿌리에 침입하는 진균을 퇴치하는 데 적합하다.
살박테리아제는 작물 보호에 있어서 슈도모나다세아에(Pseudomonadaceae), 리조비아세아에(Rhizobiaceae), 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 코리네박테리아세아에(Corynebacteriaceae) 및 스트렙토미세타세아에(Streptomycetaceae)의 방제에 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 처리될 수 있는 진균성 질병의 병원체의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
하기에 의해 유발된 질병: 흰가루병 병원체, 예를 들어 블루메리아(Blumeria) 종, 예를 들어 블루메리아 그라미니스(Blumeria graminis); 포도스파에라(Podosphaera) 종, 예를 들어 포도스파에라 류코트리카(Podosphaera leucotricha); 스파에로테카(Sphaerotheca) 종, 예를 들어 스파에로테카 풀리기네아(Sphaerotheca fuliginea); 운시눌라(Uncinula) 종, 예를 들어 운시눌라 네카토르(Uncinula necator);
하기에 의해 유발된 질병: 녹병 병원체, 예를 들어 김노스포란기움(Gymnosporangium) 종, 예를 들어 김노스포란기움 사비나에(Gymnosporangium sabinae); 헤밀레이아(Hemileia) 종, 예를 들어 헤밀레이아 바스타트릭스(Hemileia vastatrix); 파코프소라(Phakopsora) 종, 예를 들어 파코프소라 파키리지(Phakopsora pachyrhizi) 및 파코프소라 메이보미아에(Phakopsora meibomiae); 푹시니아 종, 예를 들어 푹시니아 레콘디테(Puccinia recondite), 피. 트리티시나, 피. 그라미니스 또는 피. 스트리이포르미스(P. striiformis); 우로미세스 종, 예를 들어 우로미세스 아펜디쿨라투스;
하기에 의해 유발된 질병: 난균류, 예를 들어 알부고(Albugo) 종, 예를 들어 알부고 칸디다(Albugo candida); 브레미아(Bremia) 종, 예를 들어 브레미아 락투카에(Bremia lactucae); 페로노스포라(Peronospora) 종, 예를 들어 페로노스포라 피시(Peronospora pisi) 또는 피. 브라시카에(P. brassicae); 피토프토라 종, 예를 들어 피토프토라 인페스탄스; 플라스모파라(Plasmopara) 종, 예를 들어 플라스모파라 비티콜라(Plasmopara viticola); 슈도페로노스포라(Pseudoperonospora) 종, 예를 들어 슈도페로노스포라 휴물리(Pseudoperonospora humuli) 또는 슈도페로노스포라 쿠벤시스(Pseudoperonospora cubensis); 피티움 종, 예를 들어 피티움 울티뭄의 군으로부터의 병원체;
하기에 의해 유발되는 잎무늬병 및 잎시들음병: 예를 들어, 알테르나리아 종, 예를 들어 알테르나리아 솔라니; 세르코스포라(Cercospora) 종, 예를 들어 세르코스포라 베티콜라(Cercospora beticola); 클라디오스포리움(Cladiosporium) 종, 예를 들어 클라디오스포리움 쿠쿠메리눔(Cladiosporium cucumerinum); 코클리오볼루스(Cochliobolus) 종, 예를 들어 코클리오볼루스 사티부스(Cochliobolus sativus) (분생포자 형태: 드레크슬레라(Drechslera), 동의어: 헬민토스포리움(Helminthosporium)), 코클리오볼루스 미야베아누스(Cochliobolus miyabeanus); 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 종, 예를 들어 콜레토트리쿰 린데무타니움(Colletotrichum lindemuthanium); 시클로코니움(Cycloconium) 종, 예를 들어 시클로코니움 올레아기눔(Cycloconium oleaginum); 디아포르테(Diaporthe) 종, 예를 들어 디아포르테 시트리(Diaporthe citri); 엘시노에(Elsinoe) 종, 예를 들어 엘시노에 파우세티이(Elsinoe fawcettii); 글로에오스포리움(Gloeosporium) 종, 예를 들어 글로에오스포리움 라에티콜로르(Gloeosporium laeticolor); 글로메렐라(Glomerella) 종, 예를 들어 글로메렐라 신굴라타(Glomerella cingulata); 구이그나르디아(Guignardia) 종, 예를 들어 구이그나르디아 비드웰리(Guignardia bidwelli); 렙토스파에리아 종, 예를 들어 렙토스파에리아 마쿨란스, 렙토스파에리아 노도룸(Leptosphaeria nodorum); 마그나포르테(Magnaporthe) 종, 예를 들어 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea); 마르소니아(Marssonina) 종, 예를 들어 마르소니나 코로나리아(Marssonina coronaria); 미크로도키움(Microdochium) 종, 예를 들어 미크로도키움 니발레(Microdochium nivale); 미코스파에렐라(Mycosphaerella) 종, 예를 들어 미코스파에렐라 그라미니콜라(Mycosphaerella graminicola), 엠. 아라키디콜라(M. arachidicola) 및 엠. 피지엔시스(M. fijiensis); 파에오스파에리아 종, 예를 들어 파에오스파에리아 노도룸; 피레노포라(Pyrenophora) 종, 예를 들어 피레노포라 테레스(Pyrenophora teres), 피레노포라 트리티시 레펜티스(Pyrenophora tritici repentis); 라물라리아(Ramularia) 종, 예를 들어 라물라리아 콜로-시그니(Ramularia collo-cygni), 라물라리아 아레올라(Ramularia areola); 린코스포리움(Rhynchosporium) 종, 예를 들어 린코스포리움 세칼리스(Rhynchosporium secalis); 세프토리아(Septoria) 종, 예를 들어 세프토리아 아피이(Septoria apii), 세프토리아 리코페르시이(Septoria lycopersii); 티풀라(Typhula) 종, 예를 들어 티풀라 인카르나타(Typhula incarnata); 벤투리아(Venturia) 종, 예를 들어 벤투리아 이나에쿠알리스(Venturia inaequalis);
하기에 의해 유발된 뿌리 및 줄기병: 예를 들어, 코르티시움(Corticium) 종, 예를 들어 코르티시움 그라미네아룸(Corticium graminearum); 푸사리움 종, 예를 들어 푸사리움 옥시스포룸; 가에우만노미세스(Gaeumannomyces) 종, 예를 들어 가에우만노미세스 그라미니스(Gaeumannomyces graminis); 리족토니아(Rhizoctonia) 종, 예컨대, 예를 들어 리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani); 예를 들어 사로클라디움 오리자에(Sarocladium oryzae)에 의해 유발된 사로클라디움 질병; 예를 들어 스클레로티움 오리자에(Sclerotium oryzae)에 의해 유발된 스클레로티움 질병; 타페시아(Tapesia) 종, 예를 들어 타페시아 아쿠포르미스(Tapesia acuformis); 티엘라비옵시스(Thielaviopsis) 종, 예를 들어 티엘라비옵시스 바시콜라(Thielaviopsis basicola);
하기에 의해 유발된 이삭 및 원추화서 질병 (옥수수 속대를 포함함): 예를 들어, 알테르나리아 종, 예를 들어 알테르나리아 종; 아스페르길루스 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus); 클라도스포리움(Cladosporium) 종, 예를 들어 클라도스포리움 클라도스포리오이데스(Cladosporium cladosporioides); 클라비셉스(Claviceps) 종, 예를 들어 클라비셉스 푸르푸레아(Claviceps purpurea); 푸사리움(Fusarium) 종, 예를 들어 푸사리움 쿨모룸; 지베렐라(Gibberella) 종, 예를 들어 지베렐라 제아에(Gibberella zeae); 모노그라펠라(Monographella) 종, 예를 들어 모노그라펠라 니발리스(Monographella nivalis); 세프토리아(Septoria) 종, 예를 들어 세프토리아 노도룸(Septoria nodorum);
하기에 의해 유발된 질병: 깜부기병 진균, 예를 들어 스파셀로테카(Sphacelotheca) 종, 예를 들어 스파셀로테카 레일리아나(Sphacelotheca reiliana); 틸레티아(Tilletia) 종, 예를 들어 틸레티아 카리에스(Tilletia caries), 티. 콘트로베르사(T. controversa); 우로시스티스(Urocystis) 종, 예를 들어 우로시스티스 오쿨타(Urocystis occulta); 우스틸라고(Ustilago) 종, 예를 들어 우스틸라고 누다(Ustilago nuda), 유. 누다 트리티시(U. nuda tritici);
하기에 의해 유발된 과실썩음병: 예를 들어, 아스페르길루스 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스; 보트리티스 종, 예를 들어 보트리티스 시네레아; 페니실리움 종, 예를 들어 페니실리움 엑스판숨((Penicillium expansum) 및 피. 푸르푸로게눔(P. purpurogenum); 스클레로티니아(Sclerotinia) 종, 예를 들어 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum); 베르티실리움(Verticilium) 종, 예를 들어 베르티실리움 알보아트룸(Verticilium alboatrum);
하기에 의해 유발된 종자 및 토양 매개 부패병, 곰팡이병, 시들음병, 썩음병 및 모잘록병: 예를 들어, 알테르나리아 종에 의해 유발된, 예를 들어 알테르나리아 브라시시콜라(Alternaria brassicicola)에 의해 유발된; 아파노미세스(Aphanomyces) 종, 예를 들어 아파노미세스 에우테이케스(Aphanomyces euteiches)에 의해 유발된; 아스코키타(Ascochyta) 종, 예를 들어 아스코키타 렌티스(Ascochyta lentis)에 의해 유발된; 아스페르길루스 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스에 의해 유발된; 클라도스포리움(Cladosporium) 종, 예를 들어 클라도스포리움 헤르바룸(Cladosporium herbarum)에 의해 유발된; 코클리오볼루스(Cochliobolus) 종, 예를 들어 코클리오볼루스 사티부스(Cochliobolus sativus)에 의해 유발된; (분생포자형태: 드레크슬레라(Drechslera), 비폴라리스(Bipolaris) 동의어: 헬민토스포리움(Helminthosporium)); 콜레토트리쿰 종, 예를 들어 콜레토트리쿰 콕코데스(Colletotrichum coccodes)에 의해 유발된; 푸사리움 종, 예를 들어 푸사리움 쿨모룸에 의해 유발된; 지베렐라 (Gibberella) 종, 예를 들어 지베렐라 제아에(Gibberella zeae)에 의해 유발된; 마크로포미나(Macrophomina) 종, 예를 들어 마크로포미나 파세올리나(Macrophomina phaseolina)에 의해 유발된; 모노그라펠라(Monographella) 종, 예를 들어 모노그라펠라 니발리스(Monographella nivalis)에 의해 유발된; 페니실리움종, 예를 들어 페니실리움 엑스판숨에 의해 유발된; 포마(Phoma) 종, 예를 들어 포마 린감(Phoma lingam)에 의해 유발된; 포몹시스(Phomopsis) 종, 예를 들어 포몹시스 소자에(Phomopsis sojae)에 의해 유발된; 피토프토라종, 예를 들어 피토프토라 칵토룸(Phytophthora cactorum)에 의해 유발된; 피레노포라(Pyrenophora) 종, 예를 들어 피레노포라 그라미네아(Pyrenophora graminea)에 의해 유발된; 피리쿨라리아(Pyricularia) 종, 예를 들어 피리쿨라리아 오리자에(Pyricularia oryzae)에 의해 유발된; 피티움 종, 예를 들어 피티움 울티뭄에 의해 유발된; 리족토니아(Rhizoctonia) 종, 예를 들어 리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)에 의해 유발된; 리조푸스(Rhizopus) 종, 예를 들어 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)에 의해 유발된; 스클레로티움(Sclerotium) 종, 예를 들어 스클레로티움 롤프시이(Sclerotium rolfsii)에 의해 유발된; 세프토리아(Septoria) 종, 예를 들어 세프토리아 노도룸(Septoria nodorum)에 의해 유발된; 티풀라(Typhula) 종, 예를 들어 티풀라 인카르나타(Typhula incarnata)에 의해 유발된; 베르티실리움(Verticillium) 종, 예를 들어 베르티실리움 달리아에(Verticillium dahliae)에 의해 유발됨;
하기에 의해 유발된 암, 벌레혹 및 빗자루병: 예를 들어, 넥트리아(Nectria) 종, 예를 들어 넥트리아 갈리게나(Nectria galligena);
하기에 의해 유발된 시들음병: 예를 들어, 모닐리니아(Monilinia) 종, 예를 들어 모닐리니아 락사(Monilinia laxa);
하기에 의해 유발된 잎수포병 또는 잎말림병: 예를 들어 엑소바시디움(Exobasidium) 종, 예를 들어 엑소바시디움 벡산스(Exobasidium vexans);
타프리나(Taphrina) 종, 예를 들어 타프리나 데포르만스(Taphrina deformans);
하기에 의해 유발된 목본 식물의 쇠퇴병: 예를 들어, 예를 들어 파에모니엘라 클라미도스포라(Phaemoniella clamydospora), 파에오아크레모니움 알레오필룸(Phaeoacremonium aleophilum) 및 포미티포리아 메디테라네아(Fomitiporia mediterranea)에 의해 유발된 에스카 질병; 예를 들어 유티파 라타(Eutypa lata)에 의해 유발된 유티파 가지마름병; 예를 들어 가노더마 보니넨세(Ganoderma boninense)에 의해 유발된 가노더마 질병; 예를 들어 리기도포루스 리그노수스(Rigidoporus lignosus)에 의해 유발된 리기도포루스 질병;
하기에 의해 유발된 꽃 및 종자의 질병: 예를 들어, 보트리티스 종, 예를 들어 보트리티스 시네레아;
하기에 의해 유발된 식물 괴경의 질병: 예를 들어, 리족토니아(Rhizoctonia) 종, 예를 들어 리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani); 헬민토스포리움(Helminthosporium) 종, 예를 들어 헬민토스포리움 솔라니(Helminthosporium solani);
하기에 의해 유발된 뿌리혹병: 예를 들어, 플라스모디오포라(Plasmodiophora) 종, 예를 들어 플라모디오포라 브라시카에(Plamodiophora brassicae);
하기에 의해 유발된 질병: 박테리아 병원체, 예를 들어 크산토모나스종, 예를 들어 크산토모나스 캄페스트리스 병원체변종 오리자에; 슈도모나스 종, 예를 들어 슈도모나스 시린가에 병원체변종 라크리만스(Pseudomonas syringae pv. lachrymans); 에르위니아 종, 예를 들어 에르위니아 아밀로보라(Erwinia amylovora).
하기 대두의 질병이 우선적으로 방제될 수 있다:
하기에 의해 유발된 잎, 줄기, 꼬투리 및 종자 상의 진균성 질병: 예를 들어, 알테르나리아 점무늬병 (알테르나리아 종 아트란스 테누이시마(Alternaria spec. atrans tenuissima)), 탄저병 (콜레토트리쿰 글로에오스포로이데스 데마티움 변종 트룬카툼(Colletotrichum gloeosporoides dematium var. truncatum)), 갈색점무늬병 (세프토리아 글리시네스(Septoria glycines)), 세르코스포라 점무늬병 및 마름병 (세르코스포라 키쿠키이(Cercospora kikuchii)), 코아네포라 잎마름병 (코아네포라 인푼디불리페라 트리스포라(Choanephora infundibulifera trispora) (동의어)), 닥툴리오포라 점무늬병 (닥툴리오포라 글리시네스(Dactuliophora glycines)), 노균병 (페로노스포라 만슈리카(Peronospora manshurica)), 드레크슬레라 마름병 (드레크슬레라 글리시니(Drechslera glycini)), 콩점무늬병 (세르코스포라 소지나(Cercospora sojina)), 레프토스파에룰리나 점무늬병 (레프토스파에룰리나 트리폴리이(Leptosphaerulina trifolii)), 필로스티카 점무늬병 (필로스티카 소자에콜라(Phyllosticta sojaecola)), 흑점병 (포몹시스 소자에(Phomopsis sojae)), 흰가루병 (미크로스파에라 디푸사(Microsphaera diffusa)), 피레노카에타 점무늬병 (피레노카에타 글리시네스(Pyrenochaeta glycines)), 리족토니아 지상부, 잎 및 거미줄 마름병 (리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)), 녹병 (파코프소라 파키리지(Phakopsora pachyrhizi), 파코프소라 메이보미아에(Phakopsora meibomiae)), 흑성병 (스파셀로마 글리시네스(Sphaceloma glycines)), 스템필리움 잎마름병 (스템필리움 보트리오숨(Stemphylium botryosum)), 갈색무늬병 (코리네스포라 카시이콜라(Corynespora cassiicola)).
하기에 의해 유발된 뿌리 및 간기 상의 진균성 질병: 예를 들어, 검은뿌리썩음병 (칼로넥트리아 크로탈라리아에(Calonectria crotalariae)), 검은썩음병 (마크로포미나 파세올리나(Macrophomina phaseolina)), 푸사리움 마름병 또는 시들음병, 뿌리썩음병 및 꼬투리 및 지제부 썩음병 (푸사리움 옥시스포룸, 푸사리움 오르토세라스(Fusarium orthoceras), 푸사리움 세미텍툼(Fusarium semitectum), 푸사리움 에퀴세티(Fusarium equiseti)), 미콜렙토디스쿠스 뿌리썩음병 (미콜렙토디스쿠스 테레스트리스(Mycoleptodiscus terrestris)), 네오코스모스포라 (네오코스모스포라 바신펙타(Neocosmospora vasinfecta)), 흑점병 (디아포르테 파세올로룸(Diaporthe phaseolorum)), 줄기 동고병 (디아포르테 파세올로룸 변종 카울리보라(Diaporthe phaseolorum var. caulivora)), 피토프토라 썩음병 (피토프토라 메가스페르마(Phytophthora megasperma)), 갈색줄기썩음병 (피알로포라 그레가타(Phialophora gregata)), 피티움 썩음병 (피티움 아파니더마툼(Pythium aphanidermatum), 피티움 이레굴라레(Pythium irregulare), 피티움 데바리아눔(Pythium debaryanum), 피티움 미리오틸룸(Pythium myriotylum), 피티움 울티뭄)), 리족토니아 뿌리썩음병, 줄기부패병, 및 모잘록병 (리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)), 스클레로티니아 줄기부패병 (스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum)), 스클레로티니아 백견병 (스클레로티니아 롤프시이(Sclerotinia rolfsii)), 티엘라비옵시스 뿌리썩음병 (티엘라비옵시스 바시콜라(Thielaviopsis basicola)).
본 발명의 살진균 조성물은 식물병원성 진균의 치유적 또는 보호적/예방적 방제에 사용될 수 있다. 본 발명은 따라서 또한 종자, 식물 또는 식물 부분, 과실 또는 식물이 성장하는 토양에 적용되는 본 발명의 조성물의 사용에 의해 식물병원성 진균을 방제하는 치유적 및 보호적 방법에 관한 것이다.
조성물이 식물 질병을 방제하는 데 요구되는 농도에서 식물에 의해 잘 허용된다는 사실은 식물의 지상부 부분, 번식 스톡 및 종자, 및 토양의 처리를 가능하게 한다.
본 발명에 따라 모든 식물 및 식물 부분은 재배품종 및 식물 품종 (식물 품종 또는 식물 육종가의 권리에 의해 보호가능하든지 아니든지 간에)을 포함하여 처리될 수 있다. 재배품종 및 식물 품종은 하나 이상의 생명공학적 방법, 예컨대 이중 반수체, 원형질체 융합, 무작위 및 지정 돌연변이유발, 분자 또는 유전자 마커의 사용에 의해 또는 생체공학 및 유전 공학 방법에 의해 보조되거나 또는 보충될 수 있는 통상적인 번식 및 육종 방법에 의해 수득된 식물일 수 있다.
특정 측면에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 1 x 108 내지 약 1 x 1014 콜로니 형성 단위 (CFU)의 살진균 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주로 적용된다. 다른 측면에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 1 x 109 내지 약 1 x 1013 콜로니 형성 단위 (CFU)의 살진균 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주로 적용된다. 또 다른 측면에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 1 x 1010 내지 약 1 x 1012 콜로니 형성 단위 (CFU)의 살진균 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주로 적용된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 0.1 kg 내지 약 10 kg 발효 고형물로 적용된다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 0.25 kg 내지 약 7.5 kg 발효 고형물로 적용된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 0.5 kg 내지 약 5 kg의 발효 고형물로 적용된다. 본 발명의 조성물은 헥타르당 약 1 kg 또는 약 2 kg 발효 고형물로 적용될 수 있다.
본 발명의 조성물은, 이들이 식물에 의해 잘 허용되는 경우에, 유리한 항온동물 독성을 갖고 환경에 의해 잘 허용되고, 식물 및 식물 기관을 보호하고, 수확량을 증진시키고, 수확된 물질의 품질을 개선시키는 데 적합하다. 이들은 바람직하게는 작물 보호 조성물로서 사용될 수 있다. 이들은 통상적으로 감수성이고 저항성 종에 대해 발달의 모든 또는 일부 단계에 대해 활성이다.
본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물은 하기 주요 작물 식물을 포함한다: 메이즈, 대두, 알팔파, 목화, 해바라기, 브라시카(Brassica) 오일 종자, 예컨대 브라시카 나푸스(Brassica napus) (예를 들어 카놀라, 평지씨), 브라시카 라파(Brassica rapa), 비. 준세아(B. juncea) (예를 들어 (필드) 머스타드) 및 브라시카 카리나타(Brassica carinata), 아레카세아에(Arecaceae) 종 (예를 들어 기름야자, 코코넛), 벼, 밀, 사탕무, 사탕수수, 귀리, 호밀, 보리, 기장 및 수수, 트리티케일, 아마, 견과, 포도 및 덩굴 및 다양한 식물 분류군으로부터의 다양한 과실 및 채소, 예를 들어 로사세아에(Rosaceae) 종 (예를 들어 인과류, 예컨대 사과 및 배, 뿐만 아니라 핵과류, 예컨대 살구, 체리, 아몬드, 자두 및 복숭아, 및 장과류 예컨대 딸기, 라즈베리, 레드 및 블랙 커런트 및 구스베리), 리베시오이다에(Ribesioidae) 종, 주글란다세아에(Juglandaceae) 종, 베툴라세아에(Betulaceae) 종, 아나카르디아세아에(Anacardiaceae) 종, 파가세아에(Fagaceae) 종, 모라세아에(Moraceae) 종, 올레아세아에(Oleaceae) 종 (예를 들어 올리브 나무), 악티니다세아에(Actinidaceae) 종, 라우라세아에(Lauraceae) 종 (예를 들어 아보카도, 시나몬, 캄포르), 무사세아에(Musaceae) 종 (예를 들어 바나나 나무 및 플랜테이션), 루비아세아에(Rubiaceae) 종 (예를 들어 커피), 테아세아에(Theaceae) 종 (예를 들어 차나무), 스테르쿨리세아에(Sterculiceae) 종, 루타세아에(Rutaceae) 종 (예를 들어 레몬, 오렌지, 만다린 및 그레이프프루트); 솔라나세아에(Solanaceae) 종 (예를 들어 토마토, 감자, 페퍼, 캅시쿰, 가지, 담배), 릴리아세아에(Liliaceae) 종, 콤포시타에(Compositae) 종 (예를 들어 상추, 아티초크 및 치커리 - 뿌리 치커리, 엔디브 또는 일반 치커리 포함), 움벨리페라에(Umbelliferae) 종 (예를 들어 당근, 파슬리, 셀러리 및 셀러리악), 쿠쿠르비타세아에(Cucurbitaceae) 종 (예를 들어 오이 - 게르킨, 호박, 수박, 조롱박 및 멜론 포함), 알리아세아에(Alliaceae) 종 (예를 들어 리크 및 양파), 크루시페라에(Cruciferae) 종 (예를 들어 백색 양배추, 적색 양배추, 브로콜리, 콜리플라워, 브뤼셀 스프라우트, 청경채, 콜라비, 무, 양고추냉이, 크레스 및 배추), 레구미노사에(Leguminosae) 종 (예를 들어 땅콩, 완두, 렌틸 및 콩 - 예를 들어 강낭콩 및 잠두), 케노포디아세아에(Chenopodiaceae) 종 (예를 들어 근대, 사료용 비트, 시금치, 비트루트), 리나세아에(Linaceae) 종 (예를 들어 대마), 칸나베아세아(Cannabeacea) 종 (예를 들어 칸나비스), 말바세아에(Malvaceae) 종 (예를 들어 오크라, 코코아), 파파베라세아에(Papaveraceae) (예를 들어 양귀비), 아스파라가세아에(Asparagaceae) (예를 들어 아스파라거스); 정원 및 목재에서의 유용 식물 및 관상 식물, 예컨대 잔디, 잔디밭, 그래스 및 스테비아 레바우디아나(Stevia rebaudiana); 및 각각의 경우에서의 이들 식물의 유전자 변형 유형.
특정 측면에서, 발효 생성물은 제제화 성분을 추가로 포함한다. 제제화 성분은 습윤제, 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제, 및/또는 보조제일 수 있다. 한 실시양태에서, 제제화 성분은 습윤제이다. 다른 측면에서, 발효 생성물은 동결-건조 분말 또는 분무-건조 분말이다.
본 발명의 조성물은 회수, 효능, 또는 물리적 특성을 개선시키고/거나 가공, 포장 및 투여를 돕기 위해 본 발명의 조성물에 첨가된 제제화 성분을 포함할 수 있다. 이러한 제제화 성분은 개별적으로 또는 조합되어 첨가될 수 있다.
제제화 성분은 세포, 무세포 제제, 단리된 화합물, 및/또는 대사물을 포함하는 조성물에 첨가되어 효능, 안정성, 및 물리적 특성, 유용성을 개선시키고/거나 가공, 포장 및 최종 사용 적용을 용이하게 할 수 있다. 이러한 제제화 성분은 개별적으로 또는 조합되어 첨가될 수 있는 농업상 허용되는 담체, 불활성물질, 안정화제, 보존제, 영양분, 또는 물리적 특성 개질제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 담체는 액체 물질 예컨대 물, 오일, 및 다른 유기 또는 무기 용매 및 고체 물질 예컨대 미네랄, 중합체, 또는 생물학적으로 또는 화학적 합성에 의해 유래된 중합체 복합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제제화 성분은 조성물의 식물 부분, 예컨대 잎, 종자, 또는 뿌리에의 부착을 용이하게 하는 결합제, 보조제, 또는 접착제이다. 예를 들어, 문헌 [Taylor, A.G., et al., "Concepts and Technologies of Selected Seed Treatments," Annu. Rev. Phytopathol., 28: 321-339 (1990)]을 참조한다. 안정화제는 케이킹방지제, 항-산화제, 침강방지제, 소포제, 건조제, 보호제 또는 보존제를 포함할 수 있다. 영양분은 탄소, 질소, 및 인 공급원 예컨대 당, 폴리사카라이드, 오일, 단백질, 아미노산, 지방산 및 포스페이트를 포함할 수 있다. 물리적 특성 개질제는 벌킹제, 습윤제, 증점제, pH 조절제, 레올로지 개질제, 분산제, 보조제, 계면활성제, 필름-형성제, 굴수성제, 빌더, 동결방지제 또는 착색제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 발효에 의해 생산되는 세포, 무세포 제제 및/또는 대사물을 포함하는 조성물은 직접 임의의 다른 제제 제조물 없이 희석액으로서 물과 함께 또는 물 없이 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 습윤제, 또는 분산제는, 발효 고형물, 예컨대 동결-건조 또는 분무-건조 분말에 첨가된다. 습윤제는 확산 및 침투 특성을 증가시키거나, 또는 분산제는 표면에 적용된 경우에 (희석되면) 활성 성분의 분산성 및 용해도를 증가시킨다. 예시적인 습윤제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고 술포숙시네이트 및 유도체, 예컨대 멀티웨트™ 모-70R(MULTIWETTM MO-70R) (크로다 인크.(Croda Inc.), 뉴저지주 에디슨); 실록산 예컨대 브레이크-스루(BREAK-THRU)® (에보닉(Evonik), 독일); 비이온성 화합물, 예컨대 알톡스(ATLOX)TM 4894 (크로다 인크., 뉴저지주 에디슨); 알킬 폴리글루코시드, 예컨대 테르우트(TERWET)® 3001 (헌츠만 인터내셔널 엘엘씨(Huntsman International LLC), 텍사스주 더 우드랜드); C12-C14 알콜 에톡실레이트, 예컨대 테르기톨(TERGITOL)® 15-S-15 (더 다우 케미칼 캄파니(The Dow Chemical Company),미시간주 미들랜드); 포스페이트 에스테르, 예컨대 로다팍(RHODAFAC)® BG-510 (로디아, 인크,(Rhodia, Inc.)); 및 알킬 에테르 카르복실레이트, 예컨대 에멀소겐(EMULSOGEN)TM LS (클라리언트 코포레이션(Clariant Corporation), 노스 캐롤라이나)를 포함한다.
기탁 정보
본 발명의 파에니바실루스 종 균주의 샘플은 2014년 8월 28일자로 부다페스트 조약 하에 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815 소재 미국 농무부, 농업 연구소, 국립 농업 이용 연구 센터에 위치한 아그리컬쳐럴 리서치 서비스 컬쳐 콜렉션(Agricultural Research Service Culture Collection) (NRRL)에 기탁되었고, 하기 수탁 번호: NRRL B-50972를 할당받았다.
안정한 콜로니 형태를 나타내는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터 유래된 파에니바실루스 종 균주의 샘플은 2015년 9월 1일자로 부다페스트 조약 하에 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815 소재 미국 농무부, 농업 연구소, 국립 농업 이용 연구 센터에 위치한 아그리컬쳐럴 리서치 서비스 컬쳐 콜렉션 (NRRL)에 기탁되었고, 하기 수탁 번호: NRRL B-67129를 할당받았다
37 C.F.R. §1.14 및 35 U.S.C. §122 하에 자격이 부여된 특허상표청장에 의해 결정된 사람에게 본 특허 출원의 계류 동안 배양물에 대한 접근이 이용가능할 것임을 보장하는 조건 하에 파에니바실루스 종 균주가 기탁되었다. 그러나, 기탁의 이용가능성이 정부 행위에 의해 승인된 특허권의 부분적 개폐로 본 대상 발명을 실시할 권한이 되는 것이 아니라는 것이 이해되어야 한다.
하기 실시예는 본 발명을 순수하게 예시하기 위해 비제한적인 목적으로 제공된다.
실시예
실시예 1. 파에니바실루스 종 NRRL B-50972의 선택
여러 파에니바실루스 종 균주의 게놈을 서열분석하였다. 게놈 데이터를 분석하여 푸사리시딘 생합성 유전자 클러스터를 갖지만 폴리믹신 신테타제 유전자 클러스터가 결여된 균주를 확인하였다. 푸사리시딘 생합성을 담당하는 유전자 클러스터 (fusA)는 이전에 폴리믹신 신테타제 유전자 클러스터를 갖는 것으로 확인 및 특징화된 바 있다. 예를 들어, 문헌 [Li et al., "Nonribosomal Biosynthesis of Fusaricidins by Paenibacillus polymyxa PKB1 Involves Direct Activation of a D-Amino Acid," Chemistry & Biology, 15:118-127 (2008); Li et al., "Promoter Analysis and Transcription Regulation of fus Gene Cluster Responsible for Fusaricidin Synthesis of Paenibacillus polymyxa SQR-21," Applied Microbiol Biotechnol, 97:9479-9489 (2013); 및 Choi et al., "Identification of a Polymyxin Synthetase Gene Cluster of Paenibacillus polymyxa and Heterologous Expression of the Gene in Bacillus subtilis," Journal of Bacteriology, 191(10):3350-3358 (2009)]을 참조한다.
이 분석으로 확인된 균주를 추가로 평가하여 푸사리시딘 생산을 확인하였다. 간략하게, 각각의 균주를 대두-기반 배지에서 배양하고 전체 브로쓰의 친지성 분획을 추출하였다. 전체 브로쓰 추출물을 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 통해 분석하고 푸사리시딘 A의 존재를 푸사리시딘 A를 함유하는 표준 샘플로 생성된 HPLC 프로파일에 기초하여 확인하였다.
실시예 2. 파에니바실루스 종 균주 전체 브로쓰의 식물내 항진균 활성
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972를 포함하는 선택된 파에니바실루스 종 균주를 대두-기반 배지에서 성장시켜 전체 브로쓰 배양물을 생산하였다. 증류수를 각각의 전체 브로쓰에 첨가하여 10%의 최종 희석액을 제조하였다.
희석된 전체 브로쓰를 어린 식물에 잎에 적용하고 이를 후속적으로 토마토 역병 (PHYTIN), 잿빛곰팡이병 (BOTRCI), 또는 밀 잎 녹병 (PUCCRT)의 진균 접종물에 노출시켰다. 비처리된 대조군이 각각의 검정에서 비교의 목적을 위해 포함되었다. 진균 접종물에의 노출로부터 수일 후, 각각의 식물을 비처리된 대조군 식물에 대한 병원체의 퍼센트 방제로 점수화하였다. 각각의 처리를 3회 반복으로 평가하고 각각의 파에니바실루스 종 균주의 전체 브로쓰의 평균 퍼센트 방제를 도 1에 제시하였다.
PHYTIN, BOTRCI, 및 PUCCRT에 대한 항진균 활성에 대해 시험된 23개의 균주 중 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972는 3개 모두의 진균 병원체에 대해 상대적으로 높은 수준의 활성을 갖는 몇 개의 균주 중 하나이다.
실시예 3. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 푸사리시딘 추출물의 시험관내 생물학적 효능
파에니바실루스 종 NRRL B-50972를 포함하는 여러 파에니바실루스 종 균주의 전체 브로쓰 배양물을 대두-기반 배지를 사용하여 제조하였다. 푸사리시딘을 함유하는 친지성 분획을 전체 브로쓰로부터 추출하였다. 다양한 푸사리시딘 및 항진균 대사물을 함유하는 3개의 개별 분획을 제1 파에니바실루스 종 균주로부터의 전체 브로쓰의 추출물로부터 제조하였다 (즉, 분획 1, 분획 2, 및 분획 3). 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터의 추출물은 추가로 분리되지 않았다.
각각의 균주로부터의 푸사리시딘-함유 분획을 하기 12개의 진균 병원체에 대해 시험하였다: 알테르나리아 알테르나타 (ALTEAL), 보트리티스 시네레아 (BOTRCI), 푸사리움 쿨모룸 (FUSACU), 파에오스파에리아 노도룸 (LEPTNO), 지모세프토리아 트리티시 (SEPPTR), 피토프토라 크립토게아 (PHYTCR), 피토프토라 인페스탄스 (PHYTIN), 피티움 울티뭄 (PYTHUL), 마그나포르테 오리자에 (PYRIOR), 타나테포루스 쿠쿠메리스 (RHIZSO), 우스틸라고 세게툼 변종 아베나에 (USTIAV), 및 우로미세스 아펜디쿨라투스 (UROMAP). 상이한 분획에 의한 진균 세포 성장의 억제를 대두-기반 배지에서 평가하고 비처리된 대조군의 성장과 비교하였다. 각각의 분획의 8개 용량을 0.005 ppm 내지 100 ppm의 범위로 시험하였다. 50% 억제 (ED50) 및 80% 억제 (ED80)를 생성하는 유효 용량이 도 2에서의 표에 보고되어 있다.
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 푸사리시딘-함유 분획은 12개의 검정에 걸쳐 다른 파에니바실루스 종 균주로부터의 분획에서는 관찰되지 않은 광역 항진균 활성을 나타냈다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 분획은 또한 검정에서 다른 파에니바실루스 종 균주로부터의 분획에서 관찰된 것보다 훨씬 더 큰 활성을 입증하였다 (도 2 참조).
실시예 4. 피토프토라에 감염된 토마토에 대한 생체내 예방적 시험
이 식물 병원체 온실 검정에서 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 발효 생성물을 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한 3개의 다른 파에니바실루스 종 균주와 비교하여 시험하였다. 적합한 화합물의 제제를 제조하기 위해, 대두-기반 배지에서 배양된 각각의 균주로부터의 전체 브로쓰의 분무 건조 분말의 1 중량부를 물 및 0.1 중량부의 유화제 (알킬아릴 폴리글리콜 에테르)와 혼합하고 후속적으로 물로 목적하는 농도로 희석하였다.
예방적 활성에 대해 시험하기 위해, 어린 식물에 화합물 제제를 언급된 적용률로 분무하였다. 분무 코팅이 건조된 후에, 식물에 피토프토라 인페스탄스의 수성 포자 현탁액을 접종하였다. 이어서 식물을 대략 20℃ 및 100%의 상대 대기 습도에서 인큐베이션 캐비닛에 두었다.
시험을 접종 3일 후에 평가하였다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에, 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않음을 의미한다.
표 2: 피토프토라 (토마토)에 대한 생체내 예방적 시험
Figure pct00012
실시예 5. 플라스모파라에 감염된 포도덩굴에 대한 생체내 예방적 시험
이 식물 병원체 온실 검정에서 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 발효 생성물을 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한 3개의 다른 파에니바실루스 종 균주와 비교하여 시험하였다. 적합한 화합물의 제제를 제조하기 위해, 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조된 분무 건조 분말의 1 중량부를 물 및 0.1 중량부의 유화제 (알킬아릴 폴리글리콜 에테르)와 혼합하고 후속적으로 물로 목적하는 농도로 희석하였다.
예방적 활성에 대해 시험하기 위해, 어린 식물에 화합물 제제를 언급된 적용률로 분무하였다. 분무 코팅이 건조된 후에, 식물에 플라스모파라 비티콜라의 수성 포자 현탁액을 접종하고 이어서 1일 동안 대략 20℃ 및 100%의 상대 대기 습도에서 인큐베이션 캐비닛에 유지시켰다. 후속적으로 식물을 4일 동안 대략 21℃ 및 대략 90%의 상대 대기 습도에서 온실에 두었다. 이어서 식물에 분무하고 1일 동안 인큐베이션 캐비닛에 두었다.
시험을 접종 6일 후에 평가하였다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에, 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않음을 의미한다.
표 3: 플라스모파라 (포도덩굴)에 대한 생체내 예방적 시험
Figure pct00013
실시예 6. 우로미세스에 감염된 콩에 대한 생체내 예방적 시험
이 식물 병원체 온실 검정에서 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 발효 생성물을 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한 3개의 다른 파에니바실루스 종 균주와 비교하여 시험하였다. 적합한 화합물의 제제를 제조하기 위해, 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조된 분무 건조 분말의 1 중량부를 물 및 0.1 중량부의 유화제 (알킬아릴 폴리글리콜 에테르)와 혼합하고 후속적으로 물로 목적하는 농도로 희석하였다.
예방적 활성에 대해 시험하기 위해, 어린 식물에 화합물 제제를 언급된 적용률로 분무하였다. 분무 코팅이 건조된 후에, 식물에 콩녹병의 병원체 (우로미세스 아펜디쿨라투스)의 수성 포자 현탁액을 접종하고 이어서 1일 동안 대략 20℃ 및 100%의 상대 대기 습도에서 인큐베이션 캐비닛에 유지시켰다.
이어서 식물을 대략 21℃ 및 대략 90%의 상대 대기 습도에서 온실에 두었다.
시험을 접종 10일 후에 평가하였다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에, 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않음을 의미한다.
표 4: 우로미세스 (콩)에 대한 생체내 예방적 시험
Figure pct00014
실시예 7. 흰가루병 (스파에로테카 풀리기네아)에 감염된 주키니 현장 시험에서의 파에니바실루스 균주의 비교
인공적으로 스파에로테카 풀리기네아를 접종한 주키니를 사용한 2회의 현장 시험을 수행하였다. 대두-기반 배지에서 배양된 각각의 파에니바실루스 종 균주로부터의 전체 브로쓰의 분무 건조 분말을 사용한 5개 처리물을 물 중에 1000 L/ha의 적용 부피로 재현탁시키고 7월 15일과 8월 8일 사이에 BBCH59 내지 BBCH72의 성장 단계에서 표 6에 약술된 바와 같이 4 내지 8일 간격으로 식물에 적용하였다. 표 5에 제시된 퍼센트 질병 방제는 질병 증상의 육안 관찰에 의해 수행된, 최종 적용 10일 후에 이루어진 최종 평가의 결과이다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않았음을 의미한다.
표 5
Figure pct00015
표 6
Figure pct00016
표 4에서의 결과는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 관찰된 활성이 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한, 이 현장 시험에서 시험된 다른 균주에 비해 보다 우월하다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 8. 흰가루병 (운시눌라 네카토르)에 감염된 포도덩굴 현장 시험에서의 파에니바실루스 균주의 비교
자연적으로 운시눌라 네카토르에 감염된 포도덩굴을 사용한 2회의 현장 시험을 수행하였다. 실시예 8에 기재된 분무 건조 분말을 사용한 6개 처리물을 물 중에 1000 L/ha의 적용 부피로 재현탁시키고 6월 3일과 7월 1일 사이에 BBCH57 내지 BBCH75의 성장 단계에서 표 8에 약술된 바와 같이 5 내지 7일 간격으로 식물에 적용하였다. 표 7에 제시된 퍼센트 질병 방제는 질병 증상의 육안 관찰에 의해 수행된, 최종 적용 15일 후에 이루어진 최종 평가의 결과이다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않았음을 의미한다.
표 7
Figure pct00017
표 8
Figure pct00018
표 7에서의 결과는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 관찰된 활성이 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한, 이 현장 시험에서 시험된 다른 균주에 비해 보다 우월하다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 9. 하역병 (알테르나리아 솔라니)에 감염된 토마토 현장 시험에서의 파에니바실루스 균주의 비교
인공적으로 알테르나리아 솔라니를 접종한 토마토 식물을 사용한 2회의 현장 시험을 수행하였다. 실시예 8에 기재된 분무 건조 분말을 사용한 3개 처리물을 물 중에 1000 L/ha의 적용 부피로 재현탁시키고 6월 26일과 7월 10일 사이에 BBCH51 내지 BBCH59의 성장 단계에서 표 10에 약술된 바와 같이 6 내지 8일 간격으로 식물에 적용하였다. 표 9에 제시된 퍼센트 질병 방제는 질병 증상의 육안 관찰에 의해 수행된, 최종 적용 8일 후에 이루어진 최종 평가의 결과이다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않았음을 의미한다.
표 9
Figure pct00019
표 10
Figure pct00020
표 9에서의 결과는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 관찰된 활성이 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한, 이 현장 시험에서 시험된 다른 균주에 비해 보다 우월하다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 10. 하역병 (알테르나리아 솔라니)에 감염된 감자 현장 시험에서의 파에니바실루스 균주의 비교
인공적으로 알테르나리아 솔라니를 접종한 감자 식물을 사용한 현장 시험을 수행하였다. 실시예 8에 기재된 분무 건조 분말을 사용한 5개 처리물을 물 중에 500 L/ha의 적용 부피로 재현탁시키고 6월 26일과 7월 19일 사이에 BBCH37 내지 BBCH55의 성장 단계에서 표 12에 약술된 바와 같이 4 내지 8일 간격으로 식물에 적용하였다. 표 11에 제시된 퍼센트 질병 방제는 질병 증상의 육안 관찰에 의해 수행된, 최종 적용 6일 후에 이루어진 최종 평가의 결과이다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않았음을 의미한다.
표 11
Figure pct00021
표 12
Figure pct00022
표 11에서의 결과는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 관찰된 활성이 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한, 이 현장 시험에서 시험된 다른 균주에 비해 보다 우월하다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 11. 하역병 (알테르나리아 솔라니)에 감염된 감자 현장 시험에서의 파에니바실루스 균주의 비교
인공적으로 알테르나리아 솔라니를 접종한 감자 식물을 사용한 현장 시험을 수행하였다. 실시예 8에 기재된 분무 건조 분말을 사용한 3개 처리물을 물 중에 500 L/ha의 적용 부피로 재현탁시키고 7월 24일과 8월 5일 사이에 BBCH37 내지 BBCH51의 성장 단계에서 표 14에 약술된 바와 같이 6일 간격으로 식물에 적용하였다. 표 13에 제시된 퍼센트 질병 방제는 질병 증상의 육안 관찰에 의해 수행된, 최종 적용 6일 후에 이루어진 최종 평가의 결과이다. 0%는 비처리된 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않았음을 의미한다.
표 13
Figure pct00023
표 14
Figure pct00024
표 13에서의 결과는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 관찰된 활성이 이전 스크리닝 검정에서 상대적으로 높은 항진균 활성을 입증한, 이 현장 시험에서 시험된 다른 균주에 비해 보다 우월하다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 12. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에서의 fusA 변이의 확인
추가로 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972를 특징화하기 위해 FusA 푸사리시딘 신테타제를 코딩하는 fusA 유전자의 게놈 서열을 표준 서열분석 방법으로 결정하고, 관련 아미노산 서열을 확인하였다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 의해 발현되는 FusA로부터의 아미노산 서열을 하기 공개에 기재된 것을 포함하는 여러 다른 파에니바실루스 균주의 것과 비교하였다:
Li S., et al., (2014). "Complete Genome Sequence of Paenibacillus polymyxa SQR-21, a Plant Growth-Promoting Rhizobacterium with Antifungal Activity and Rhizosphere Colonization Ability," Genome Announc, 2(2):HASH(0x743db288);
Niu B., et al., (2011). "The Genome of the Plant Growth-Promoting Rhizobacterium Paenibacillus polymyxa M-1 Contains Nine Sites Dedicated to Nonribosomal Synthesis of Lipopeptides and Polyketides," J. Bacteriol. 193(20):5862-3;
Ma M., et al., (2011) "Complete Genome Sequence of Paenibacillus polymyxa SC2, A Strain of Plant Growth-Promoting Rhizobacterium with Broad-Spectrum Antimicrobial Activity," J. Bacteriol. 193(1):311-2; 및
Li and Jensen, (2008). Nonribosomal Biosynthesis of Fusaricidins by Paenibacillus polymyxa PKB1 Involves Direct Activation of a d-amino Acid. Chem. Biol. 15, 118-127.
도 13에 제시된 정렬은 파에니바실루스 종 NRRL B-50972에 의해 발현된 변이체 FusA 푸사리시딘 신테타제에서의 유의한 결실을 밝혀냈다. 제1 결실은 파에니바실루스 종 균주 A에서 상응하는 서열 (서열식별번호: 11)의 위치 3009에서 위치 3037에 이른다. 제2 결실은 파에니바실루스 종 균주 A에서 상응하는 서열 (서열식별번호: 11)의 위치 3047에서 위치 3317에 이른다. 결실 둘 다는 FusA 푸사리시딘 신테타제의 제3 모듈의 A 도메인 (즉, FusA-A3) 내에 속한다.
상기 설명된 바와 같이, 각각의 A 도메인은 기질 인식 및 활성화를 담당하는 10개의 보존된 아미노산 잔기를 함유한다 (표 1 참조). 이들 보존된 아미노산 잔기는 도 13에 제시된 정렬에 약술된다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 의해 발현되는 변이체 FusA 푸사리시딘 신테타제에서 확인된 결실은 최종 보존된 아미노산 잔기 (즉, 서열식별번호: 11의 위치 3486에 위치한 Lys517)를 제외하고 모두 제거한다.
변이체 FusA 푸사리시딘 신테타제에서의 이들 2개의 결실은 본원에서 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129로 지칭된 안정한 콜로니 형태를 갖는 변이체 균주를 포함하는, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터 유래된 균주에 존재한다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터 유래된 무작위 돌연변이체 균주는 야생형 FusA-A3으로의 복귀가 결실이 광범위하다는 특성으로 인해 극도로 어려울 것이기 때문에 일반적으로 변이체 FusA-A3에서의 결실을 유지할 것이다.
실시예 13. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A에서의 푸사리시딘 생산의 비교
변이체 FusA-A3의 효과를 결정하기 위해 푸사리시딘 및 파에니세린의 패널을 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 (변이체 FusA-A3 발현) 및 파에니바실루스 종 균주 A (야생형 FusA-A3 발현)에서 실시예 14에 기재된 방법을 사용하여 정량화하였다. 각각의 화합물의 정체성을 그의 특유한 체류 시간 및 질량에 의해 결정하였다. 스펙트럼에서의 각각의 피크의 상대 신호 강도가 표 15에 제시된다. 절대 정량화는 정제된 표준의 부재 하에 가능하지 않았다. 그러나, 유사한 양의 각각의 세포 추출물을 주입하였고 화합물의 상대량은 생성된 신호 강도로부터 추정될 수 있다.
표 15
Figure pct00025
야생형 FusA 푸사리시딘 신테타제에서, FusA-A3은 L-Tyr, L-Phe, L-Val, L-Ile, 또는 L-알로-Ile를 아미노산 위치 (3)에서 푸사리시딘 화합물 내에 혼입시키는 것을 담당한다 (표 1 참조). 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에서의 변이체 FusA-A3은 임의의 검출가능한 푸사리시딘 C, 푸사리시딘 D, LiF07a, 또는 LiF07b가 없는 추출물을 생성하였다. 푸사리시딘 C 및 푸사리시딘 D 둘 다는 아미노산 위치 (3)에서 티로신을 갖는 반면에 LiF07a 및 LiF07b 둘 다는 아미노산 위치 (3)에서 페닐알라닌을 갖는다. 이들 실험 데이터는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 의해 발현되는 FusA-A3에서의 유전자 변이가 아미노산 위치 (3)에서 티로신 또는 페닐알라닌을 갖는 푸사리시딘의 생합성을 억제한다는 것을 입증한다 (도 14 참조).
따라서, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972로부터 유래된 돌연변이체 균주는 검출가능한 양의, 아미노산 위치 (3)에서 티로신 또는 페닐알라닌을 갖는 푸사리시딘 또는 푸사리시딘-유사 화합물 (예를 들어, 푸사리시딘 C 및 D 또는 LiF07a 및 LiF07b)을 생산할 수 없다. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에서의 변이체 FusA-A3의 분석은 이 균주 및 그의 돌연변이체가 유전적으로 아미노산 위치 (3)에서 티로신 아미노산 또는 페닐알라닌 아미노산을 포함하는 펩티드 고리를 갖는 푸사리시딘 또는 푸사리시딘 유사체를 생산할 수 없다는 것을 나타낸다.
분석된 2개의 파에니세린 중, 단지 1개가 파에니바실루스 종 균주 A에서 검출가능하였고, 그의 신호 강도는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 추출물에서 관찰된 상응하는 신호 강도의 절반 미만이다. 임의의 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, FusA-A3에서 처음 9개의 보존된 아미노산 (즉, Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, 및 Cys331) 중 1개 이상이 푸사리시딘 화합물에서 위치 (3)에서의 티로신 및 페닐알라닌의 인식 및 활성화를 담당하는 것으로 보인다. 또한, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972에 의해 발현되는 변이체 FusA-A3은 특정 푸사리시딘의 생산으로부터 보다 넓은 범위의 푸사리시딘-유사 화합물 (예를 들어, 파에니세린)의 생합성을 향해 대사 중간체를 이동시킬 수 있다.
실시예 14. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A의 생물활성의 비교
(변이체 FusA-A3을 발현하는) 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 (야생형 FusA-A3을 발현하는) 파에니바실루스 종 균주 A를 대두-기반 배지에서 배양하여 전체 브로쓰를 생산하였다. 전체 브로쓰를 물 및 유기 용매의 혼합물 중에 10%, 5%, 2.5%, 및 1.25%의 농도로 희석하였다. 희석된 전체 브로쓰를 어린 식물에 적용하고 이를 후속적으로 푹시니아 트리티시나 (PUCCRT), 보트리티스 시네레아 (BOTRCI), 또는 피토프토라 인페스탄스 (PHYTIN)의 접종물에 노출시켰다. 식물 병원체의 접종물에의 노출로부터 수일 후, 각각의 식물을 비처리된 대조군 식물에 대한 병원체의 퍼센트 방제로 점수화하였다. 각각의 처리를 3회 반복으로 평가하고 평균 퍼센트 방제를 보고하였다 (표 16-18 참조).
각각의 검정에서, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972는 파에니바실루스 종 균주 A보다 우월한 방제를 입증하였다. 이들 실험 데이터는 변이체 푸사리시딘 신테타제 및 푸사리시딘 및 푸사리시딘-유사 화합물의 생합성에서 생성된 변화가 파에니바실루스 종 NRRL B-50972에 의한 식물 병원체의 증진된 방제를 일으킨다는 것을 시사한다.
표 16. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A로 10%, 5%, 2.5%, 및 1.25%의 희석율에서 달성된 푹시니아 트리티시나 (PUCCRT)의 방제.
Figure pct00026
표 17. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A로 10%, 5%, 2.5%, 및 1.25%의 희석율에서 달성된 보트리티스 시네레아 (BOTRCI)의 방제.
Figure pct00027
표 18. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 A로 10%, 5%, 2.5%, 및 1.25%의 희석율에서 달성된 피토프토라 인페스탄스 (PHYTIN)의 방제.
Figure pct00028
실시예 15. 파에니바실루스 종 세포 추출물에서의 푸사리시딘
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주를 고정상에 도달할 때까지 대두-기반 배지에서 성장시키고 이 때 전체 브로쓰 배양물을 수거하고 유기 용매로 추출하여 세포 추출물을 수득하였다.
고성능 액체 크로마토그래피/비행 시간 질량 분광측정법 (HPLC/MS TOF)을 사용한 크로마토그래피 방법이 세포 추출물로부터 많은 푸사리시딘-유사 분자를 분리하도록 개발되었다: 칼럼: YMCTM 베이직 4.6 x 250 mm, 5μm; 물 (0.1% FA) 및 아세토니트릴 (0.1% 포름산 (FA)); 구배 (%B): 0-9분 28-30%; 9-14분 30-33%; 14-34분 33-50%; 세척.
공지된 푸사리시딘이 확인된 세포 추출물로부터의 크로마토그램이 도 4b에 제시된다. 푸사리시딘의 일반 구조가 도 4a에 제시된다. 각각의 시클릭 푸사리시딘은 상응하는 비시클릭 유사체를 갖는다.
세포 추출물에서의 모든 검출가능한 푸사리시딘을 그의 체류 시간 및 m/z 값에 기초하여 확인하였다 (도 4c 참조). 흥미롭게도, 위치 (3)에서의 아미노산이 티로신 또는 페닐알라닌인 푸사리시딘 C 및 D 및 다른 푸사리시딘은 세포 추출물에서 검출가능하지 않았다.
실시예 16. 파에니바실루스 종 세포 추출물에서의 파에니세린 특징화
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주의 세포 추출물에서 다른 화합물을 확인하기 위해 초고성능 액체 크로마토그래피/삼중 비행 시간 질량 분광측정법 (UPLC/MS 삼중 TOF)을 사용한 크로마토그래피 방법이 많은 푸사리시딘-유사 분자를 단편화하도록 개발되었다: 칼럼: 조르박스(ZORBAX)TM 이클립스 플러스(Eclipse Plus), 2.1 x 100 mm, 1.8 μm; 물 (0.1% FA) 및 아세토니트릴 (0.1% FA); 구배 (%B): 0-5분 10-95%; 세척.
이 방법으로 본 출원인은 푸사리시딘의 새로운 파에니세린 패밀리를 에이비 사이엑스(AB SCIEX) 삼중 TOF® 질량 분광계로부터 획득한 질량 단편화 패턴을 검사할 뿐만 아니라 스펙트럼을 공개된 문헌과 비교함으로써 특징화하였다. 본 출원인은 이 새로운 패밀리를 파에니세린으로 명명하였다. 파에니세린 A1 및 파에니세린 B1에 대한 대표적인 UPLC/MS 삼중 TOF 단편화 패턴 및 상응하는 화학 구조가 각각 도 5 및 6에 제시된다. 유사한 분석을 세포 추출물에서 검출되는 각각의 파에니세린에 대해 수행하였다.
파에니세린은 1개 이상의 세린 치환을 갖는 푸사리시딘 골격으로부터의 중요한 출발로 인해 이와 같이 명명하였다 (도 5a 참조). 전통적으로, 푸사리시딘으로 간주되기 위해 펩티드 서열은 3개의 보존된 아미노산: (1) 트레오닌, (4) 트레오닌, 및 (6) 알라닌을 함유하였다. 그러나, 파에니세린은 (1) 및 (4) 트레오닌 잔기 중 1개 또는 둘 다가 세린으로 대체된 새로운 치환을 나타냈다. 위치 (2) 및 (3)에서 아미노산은 본 출원인이 특징화한 파에니세린에서 둘 다 발린이다. 파에니세린에 상응하는 피크가 확인된 크로마토그램이 도 5b에 제시된다.
본 출원인은 또한 그의 체류 시간 및 m/z 값에 기초하여 세포 추출물에서의 세린-치환된 푸사리시딘-유사 화합물의 패밀리를 특징화하였다 (도 5c 참조). 파에니세린 C4가 검출가능하지는 않았지만 이전에 특징화된 푸사리시딘의 구조에 기초하여 이것이 생산되는 것을 예상하는 것은 합리적이다. 푸사리시딘과 같이, 각각의 시클릭 파에니세린은 상응하는 비시클릭 유사체를 갖는다.
본 출원인이 특징화한 파에니세린은 (2) 및 (3) 잔기에서 발린 아미노산을 갖지만 이들 위치에서 변이를 갖는 화합물이 존재할 가능성이 있다는 것에 유의하는 것은 중요하다. 이들 잠재적 변이는 (2) 및 (3) 잔기로서 이소류신, 페닐알라닌, 및 티로신과 같은 아미노산을 갖는 푸사리시딘/LiF 유사체와 유사할 것이다. 추가로, GHPD 꼬리가 상기 기재되어 있지만, 파에니프롤릭신 패밀리와 유사한 꼬리 길이에서의 변이를 갖는 화합물이 존재할 가능성이 있다 (실시예 17 참조).
실시예 17. 파에니바실루스 종 세포 추출물에서의 파에니프롤릭신의 특징화
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및/또는 그로부터 유래된 균주의 세포 추출물을 실시예 14에 기재된 크로마토그래피 방법으로 추가로 분석하였다. 푸사리시딘의 새로운 패밀리를 에이비 사이엑스 삼중 TOF® 질량 분광계로부터 획득한 질량 단편화 패턴을 검사할 뿐만 아니라 스펙트럼을 공개된 문헌과 비교함으로써 특징화하였다. 본 출원인은 이 새로운 패밀리를 파에니프롤릭신으로 명명하였다. 파에니프롤릭신 C1 및 파에니프롤릭신 D1에 대한 대표적인 UPLC/MS 삼중 TOF 단편화 패턴 및 상응하는 화학 구조가 각각 도 8 및 9에 제시된다. 유사한 분석을 세포 추출물에서 검출되는 각각의 파에니프롤릭신에 대해 수행하였다.
파에니프롤릭신은 지방족 꼬리에서 푸사리시딘 골격으로부터의 또 다른 중요한 출발로 인해 라틴어 prolix (장황한 의미)로부터 명명되었고, 즉, 파에니프롤릭신은 푸사리시딘보다 더 긴 꼬리를 갖는다. 전통적으로, 푸사리시딘은 단지 특정한 GHPD 꼬리만을 갖는 것으로 관찰되었다. 이는 저자가, "이 발견 [엄격하게 보존된 GHPD 꼬리]은 문헌에 보고된 다수의 다른 리포펩티드와 상반되며, 여기서 지방산 부분이 서팩틴, 이투린 및 펜기신[에서와 같이] 구조적 변이의 주요 표적이다"라고 주장하는 문제의 가장 최근 공개 (즉, Vater et al., J. Am. Soc. Mass Spectrom., 2015, 26, 1130-1141)에서도 일관된 것으로 밝혀졌다. 본 출원인은 파에니바실루스 종 NRRL B-50972의 세포 추출물에서 보다 긴 꼬리 (즉, 17-구아니디노-3-히드록시헵타데칸산 또는 GHPD + 2CH2 및 19-구아니디노-3-히드록시노나데칸산 또는 GHPD + 4CH2) 푸사리시딘-유사 화합물의 패밀리를 확인하였다 (도 8a 참조). 파에니세린과 달리, 파에니프롤릭신은 위치 (1)에서의 L-트레오닌 및 위치 (4)에서의 D-알로-트레오닌의 보존된 아미노산 잔기를 유지한다.
본 출원인이 특징화한 파에니프롤릭신은 (2) 및 (3) 잔기에서 발린 또는 이소류신 아미노산을 갖지만 이들 위치에서 변이를 갖는 화합물이 존재할 가능성이 있다는 것에 유의하는 것이 중요하다. 이들 잠재적 변이는 (2) 및 (3) 잔기로서 예컨대 발린, 이소류신, 또는 다른 아미노산 예컨대 페닐알라닌, 및 티로신의 다른 조합을 갖는 푸사리시딘/LiF 유사체와 유사할 것이다. 추가로, 보다 긴 꼬리 길이를 갖는 상기 기재된 파에니세린과의 하이브리드 조합이 존재할 가능성이 있다.
파에니프롤릭신에 상응하는 피크가 확인된 크로마토그램이 도 8b에 제시된다. 보다 긴 GHPD 꼬리를 갖는 푸사리시딘-유사 화합물의 이 패밀리는 또한 그의 체류 시간 및 m/z 값에 기초하여 특징화하였다 (도 8c 참조). 파에니프롤릭신 C2 및 D2가 검출가능하지는 않았지만 이전에 특징화된 푸사리시딘의 구조에 기초하여 이것이 생산되는 것을 예상하는 것은 합리적이다. 푸사리시딘과 같이, 각각의 시클릭 파에니프롤릭신은 상응하는 비시클릭 유사체를 갖는다.
실시예 18. 파에니세린, 파에니프롤릭신, 및 다른 푸사리시딘의 항진균 생물활성 프로파일
표 19에 제시된 샘플을 파에니바실루스 종 세포로부터 단리하였다. 발효 전체 브로쓰를 원심분리하여 상청액을 제거하였다. 이어서 수득한 펠릿을 메탄올 중에서 추출하였다. 생성된 추출물을 역상 중압 액체 크로마토그래피를 사용하여 분획화하였다. 이어서 분획을 역상 정제용 고압 액체 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제하였다.
표 19
Figure pct00029
시험관내 항진균 96-웰 플레이트 검정은 진균 성장에 대한 지시자로서 레자주린-기반 세포 생존율 시약 프레스토블루(PRESTOBLUE)®를 이용한다. 진균 포자에서 시작하여, 검정은 진균 포자의 발아 및/또는 진균 세포의 성장을 억제하는 샘플의 효력을 측정한다. 검정을 3개의 농업-관련 진균성 질병: 알테르나리아 솔라니 (ALTESO), 콜레토트리쿰 라게나리움 (COLLLA)과 보트리티스 시네레아 (BOTRCI)로 준비하였다.
표 19에 약술된 모든 샘플은 농업-관련 진균성 질병에 대해 활성인 것으로 증명되었다 (표 20에서의 각각의 샘플에 대해 백만분율 (ppm)의 단위로 주어진 80% 최소 억제 농도 (MIC80) 값 참조). 흥미롭게도, 특정 화합물은 특정 질병에 대해 다양한 활성을 갖는 것으로 보인다. 예를 들어 샘플 3에서의 아스파라긴 유사체는 ALTESO를 방제하는 데 중요한 것으로 보이는 한편, 샘플 4에서의 동일한 유형의 화합물의 글루타민 대응물은 COLLLA의 방제에 보다 더 관련되었다. 샘플 6에서의 보다 긴-꼬리 유사체는 가장 강력한 COLLLA의 억제제이다. 이는 모두가 그 자체로 활성인 반면에, 이들 화학 물질의 조합은 최종 생성물의 질병 방제의 최종 효력 및 스펙트럼에 중요하다는 것을 시사한다.
표 20
Figure pct00030
실시예 19. 파에니세린, 파에니프롤릭신, 및 다른 푸사리시딘의 항박테리아 생물 활성 프로파일
시험관내 항박테리아 96-웰 플레이트 검정은 흡광도를 박테리아 성장에 대한 지시자로서 사용한다. 검정은 비처리된 웰의 흡광도를 샘플 웰과 비교함으로써 박테리아 성장을 억제하는 샘플의 효력을 측정한다. 박테리아 성장을 억제하는 최종 희석액/농도는 MIC (최소 억제 농도)로 불리고 이 값은 상이한 샘플의 효능을 비교하는 데 사용될 수 있다. 검정은 3개의 농업-관련 박테리아성 질병: 크산토모나스 캄페스트리스 (XANTAV), 슈도모나스 시린가에 (PSDMTM), 및 에르위니아 카로토보라 (ERWICA)로 평가하였다.
표 19에 약술된 샘플을 항박테리아 검정에 적용하여 각각의 박테리아 병원체의 MIC80 값을 결정하였다. 검정의 결과는 표 21에 제시된다. 샘플 1-5가 농업-관련 박테리아성 질병에 대해 활성인 것으로 증명되었다. 흥미롭게도, 특정 화합물은 특정한 질병에 대해 다양한 활성을 갖는 것으로 보인다. 예를 들어 파에니세린은 푸사리시딘 A의 약점인 PSDMTM을 방제할 수 있다는 점에서 푸사리시딘 A를 잘 보충한다. 다른 한편으로는, 푸사리시딘 A는 파에니세린에서 관찰되는 ERWICA를 방제하는 데 있어서 약점을 보상한다. 진균 검정에서와 같이, 이는 모두가 그 자체로 활성인 반면에, 이들 화학 물질의 조합이 최종 생성물의 질병 방제의 최종 효력 및 스펙트럼에 중요하다는 것을 제시한다
표 21
Figure pct00031
*NDR: 검출가능한 결과 없음 (즉, 시험된 가장 높은 농도에서 박테리아 성장의 억제 없음)
**샘플은 미생물 배지에서 불용성이었고, 시험될 수 없었다.
실시예 20. 커비-바우어 항생제 디스크 확산 검정을 사용한 상승작용의 지표
다양한 부류의 푸사리시딘-유사 화합물 사이의 상승작용의 초기 평가를 얻기 위해 생물검정을 식물 병원체 COLLLA를 사용하여 수행하였다. 생물검정은 한천 상의 전형적 커비-바우어 항생제 디스크 확산 검정이었다 (Bauer, A. W., et al., 1966 Am. J. Clin. Pathol. 36:493-496). 간략하게, 유사한 양의 다양한 샘플로 로딩된 블랭크 멸균 디스크를 COLLLA 포자의 론으로 접종된 페트리 디쉬에 두었다. 페트리 디쉬를 인큐베이션하고 활성을 각각의 디스크 주위에 나타난 억제 구역의 직경의 크기로서 기록하였다. 결과는 도 11에 설명되어 있다.
이 예비 검정으로부터의 결과는 특정 파에니세린 및 파에니프롤릭신이 함께 적용된 경우에 상승작용적 효과 결과를 시사한다. 개별적으로 적용된 파에니세린 A1 및 B1 ("868") 또는 파에니프롤릭신 A2 및 B2 ("938")는 이 검정에서 비교적 작은 억제 구역을 나타낸다. 그러나, 그의 조합 ("868/938")은 868, 938, 또는 푸사리시딘 A 및 B ("AB")의 적용으로 획득된 결과를 초과한 가장 크고 가장 깨끗한 억제 구역을 나타낸다. 약 0.1 mg의 총 물질을 AB, 868, 및 938 샘플에 대하여 각각의 멸균 디스크에 적용하였다. 868 및 938 샘플 둘 다를 함유하는 디스크는 868/938 디스크 상의 물질의 총량이 약 0.1 mg이도록 약 0.05 mg의 각각의 샘플을 함유하였다.
본 검정의 제한은 푸사리시딘 화합물이 진균 성장을 억제하기 위해 한천을 통해 확산하여야만 하는 요건이다. 상승작용적 효과의 초기 지표는 액체 배지에서의 시험관내 항진균 검정을 이용하여 추가로 평가될 것이다.
실시예 21. 푸사리시딘 조합의 상승작용을 입증하기 위한 시험관내 항진균 검정
실시예 17에 약술된 푸사리시딘의 조합 이외에도, 액체 배지에서의 시험관내 항진균 검정을 수행하여 도 12에 제시된 푸사리시딘 및/또는 푸사리시딘-유사 화합물의 조합의 적용으로부터 생성된 제안된 상승작용을 입증할 것이다. 도 12에 제시된 각각의 군을 개별적으로 평가하여 먼저 구조적 특징을 평가하고 이어서 조합하여 상승작용을 다룰 것이다. 2원 및 3원 혼합물 둘 다가 평가될 것이다.
개별 화합물이 살진균 활성과 관련하여 약한 것으로 나타날 수 있는 반면에, 조합은 활성물질의 단순 첨가를 초과하는 활성을 가질 것이다.
살진균제의 상승작용적 효과는 활성 화합물 조합의 살진균 활성이 개별적으로 적용되는 경우의 활성 화합물의 총 활성을 초과하는 경우에 항상 존재한다.
2 또는 3종의 활성 화합물의 주어진 조합에 대한 기대 활성은 하기와 같이 계산될 수 있다 (문헌 [Colby, S.R., "Calculating Synergistic and Antagonistic Responses of Herbicide Combinations, Weeds 1967, 15, 20-22] 참조):
X가 활성 화합물 A가 m ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용되는 경우의 효능이고,
Y가 활성 화합물 B가 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용되는 경우의 효능이고,
Z가 활성 화합물 B가 r ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용되는 경우의 효능이고,
E1이 활성 화합물 A 및 B가 각각 m 및 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용되는 경우의 효능이고,
E2가 활성 화합물 A, B 및 C가 각각 m, n 및 r ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용되는 경우의 효능인 경우에
2원 혼합물에 대해:
Figure pct00032
및 3원 혼합물에 대해:
Figure pct00033
%로 표현된 효능 정도가 표시된다. 0%는 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하는 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않음을 의미한다.
실제 살진균 활성이 계산된 값을 초과하는 경우에, 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다. 이 경우에, 실제로 관찰된 효능은 상기 언급된 식으로부터 계산된 기대 효능 (E)에 대한 값보다 더 커야 한다.
상승작용적 효과를 입증하는 추가의 방식은 타메스(Tammes)의 방법이다 (문헌 ["Isoboles, A Graphic Representation of Synergism in Pesticides" in Neth. J. Plant Path., 1964, 70, 73-80] 참조).
실시예 22. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 변이체 균주의 선택
표준 실험실 조건 하에 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972는 고체 한천 배지 상에 다중 콜로니 형태를 생산한다. 여러 형태학상 별개의 콜로니를 확인하고 글리세롤 스톡으로서 -80℃에서 저장하였다. 액체 배지 배양물을 상이한 콜로니 표현형으로부터 유래된 스톡을 사용하여 접종하고, 액체 배지에서 여러 라운드의 성장 후에, 고체 한천 배지 상으로 재접종하였다. 이로부터, 여전히 내열성 포자 및 푸사리시딘 화학물질을 생산할 수 있으면서, 시험된 조건 하에 안정한 콜로니 표현형을 갖는 하나의 단리물이 확인되었다. 안정한 콜로니 형태를 갖는 단리물은 추가의 균주 개선에 대해 바람직하다 (실시예 23 참조). 이 단리물을 2015년 9월 1일에 NRRL에 기탁하였고, 하기 수탁 번호를 할당받았다: NRRL B-67129.
실시예 23. 개선된 파에니바실루스 종 돌연변이체를 생성하기 위한 무작위 돌연변이유발
화학적 돌연변이유발
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129의 유전적으로 다양한 단리물의 풀을 생성하기 위해, 균주의 액체-성장 배양물을 원심분리에 의해 펠릿화하고, 1-메틸-3-니트로-1-니트로구아니딘 (NTG)을 함유하는 완충제 중에 400μg/mL의 최종 농도로 재현탁시켰다. 참조로서, NTG가 없는 제2 샘플을 제조하였다. 샘플을 1시간 동안 30℃ 및 220 rpm에서 인큐베이션하였다. 1시간 후, 샘플을 원심분리에 의해 펠릿화하고, NTG를 함유하지 않은 완충제로 세척하고, 최종적으로 동일한 부피의 새로운 완충제 중에 재현탁시켰다. 희석되지 않은 배양물의 분취물을 글리세롤 스톡으로서 -80℃에서 동결시켰다. 샘플을 희석하고 한천 플레이트 상에 플레이팅하여 콜로니-형성 단위를 결정하였고, 사멸 백분율을 게놈당 돌연변이 정도에 대한 참조로서 결정하였다. 제1 라운드의 스크리닝으로부터 선택된 개선된 단리물을 상기 기재된 바와 같이 NTG 처리의 1회 이상의 후속 라운드에 적용하고 푸사리시딘 생산에 있어서 추가의 개선에 대해 스크리닝하였다. 푸사리시딘 생산을 푸사리시딘 A (LiF04a 또는 "Fus A"로 또한 공지된); LiF08a; 파에니세린 A1 및 B1 ("M868" 또는 "868"로 또한 공지됨); 및 파에니프롤릭신 A2 및 B2 ("M938" 또는 "938"로 또한 공지됨)을 포함하는 여러 화합물의 상대량에 의해 결정하였다.
고처리량 스크리닝 및 단리물 특징화
NTG-처리 샘플을 희석하고 한천 플레이트 상에 플레이팅하여 단일 콜로니를 수득하였다. 단일 콜로니를 시드 배지를 함유하는 96-웰 깊은 웰 블록에 접종하였으며, 이를 교반하면서 2일 동안 30℃에서 인큐베이션하였다. 이로부터, 대두-기반 생산 배지를 함유하는 새로운 96-웰 깊은 웰 블록을 접종하고 교반하면서 5일 동안 30℃에서 인큐베이션하였다. 5일 후에, 글리세롤 스톡을 개별 웰에서의 각각의 샘플로부터 제조하고 -80℃에서 저장하고, 샘플을 상기 확인된 4개의 푸사리시딘 바이오마커의 화학적 분석에 적용하였다. 이 1차 스크리닝에서, 개별 단리물은 그의 "총 푸사리시딘 값" (즉, 야생형 값의 평균에 대한 4개의 분석된 푸사리시딘 바이오마커의 합계)이 야생형 값의 평균 값 + 3x 야생형 값의 표준 편차 보다 높은 경우에 히트로서 간주되었다. 이 기준에 기초하여 선택된 각각의 단리물의 8개의 복제물을 성장시키고 상기 기재된 바와 같이 분석하였다. 다음에 확인된 푸사리시딘 과다생산자를 250 mL 진탕 플라스크에서 50 mL 부피로 스케일 업하고, 포자형성, 푸사리시딘 생산, 및 생물활성에 대해 특징화하였다. 우선순위 단리물을 생물반응기 내에 추가로 스케일 업하고 다시 포자형성, 점도, 푸사리시딘 생산, 및 생물활성에 대해 특징화하였다. 여러 돌연변이체 균주를 NTG-처리의 제2 라운드로부터 수득하고 스크리닝하였으며 우월한 푸사리시딘 바이오마커 생산 및 생물활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
실시예 24. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 항생제 감수성의 특징화
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972를 전형적 농도의 항생제로 보충된 고체 sLB 한천 배지 및 sLB 한천 배지 상에 접종하였다. 한천 플레이트를 30℃에서 인큐베이션하고, 성장을 24, 48, 및 72시간 후에 평가하였다. 시험된 각각의 항생제에 대한 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 감수성이 표 22에 제시된다.
표 22. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 항생제 감수성.
Figure pct00034
실시예 25. 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129에서의 spo0A의 특징화
파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129의 게놈을 서열분석하였다. 2개의 게놈 서열의 비교는 2개의 균주에서의 spo0A 유전자에 있어서 특징적 차이를 확인시켜 주었다. 도 15에서의 서열 정렬에 제시된 바와 같이, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129는 spo0A 유전자의 3'-말단을 향한 1개의 뉴클레오티드에서 상이하다. 단일 뉴클레오티드 차이를 확인하였고 도 15에서의 서열 아래 적색 화살표에 의해 표시된다. spo0A 유전자의 제1 뉴클레오티드에 대한 뉴클레오티드 번호는 서열 위에 표시된다.
내생포자-형성 박테리아로부터의 Spo0A 오르토로그의 정렬은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129 코딩 서열에서의 뉴클레오티드 변화가 보존된 영역에서 단일 아미노산 치환을 일으킨다는 것을 나타냈다 (도 16 참조). 파에니바실루스 테라에 (NCBI 참조 서열: WP_044647644.1), 파에니바실루스 폴리믹사 SQR-21 (진뱅크: AHM66630.1), 바실루스 서브틸리스 아종 서브틸리스 균주 168 (NCBI 참조 서열: NP_390302.1), 바실루스 세레우스 E33L (진뱅크: AJI26924.1), 및 클로스트리디움 파스테우리아눔 DSM 525 (진뱅크: AAA18883.1)로부터의 Spo0A 아미노산 서열은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972 및 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129로부터의 Spo0A 아미노산 서열과 정렬되었다. 도 16에서의 화살표는 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129로부터의 Spo0A에서 단일 아미노산 치환을 나타낸다.
실시예 26. 푸사리시딘, 파에니세린, 및 파에니프롤릭신과의 구조 활성 관계 연구
여러 정제된 푸사리시딘, 파에니세린, 및 파에니프롤릭신의 구조 활성 관계를 실시예 16에 기재된 시험관내 검정을 사용하여 조사하였다. 제1 실험에서, 가장 흔한 푸사리시딘의 쌍을 비교하였다. 이들 푸사리시딘에서의 변이는 아스파라긴 또는 글루타민을 갖는 고리/쇄의 아미노산 위치 (5)에서 발생한다. 이 연구에서 푸사리시딘 A를 푸사리시딘 B와 비교하고, LiF08a를 식물 병원체 알테르나리아 솔라니 (ALTESO)에 대해 LiF08b와 비교하였다. 둘 다의 경우에 아스파라긴 유사체는 그의 글루타민 대응물보다 2배 더 강력하였다 (도 17 참조).
또 다른 실험에서, 푸사리시딘의 시클릭 대 비시클릭 형태를 비교하였다. 푸사리시딘의 비시클릭 형태가 최종 화합물의 전구체인지 또는 분해 생성물인지는 불분명하지만; 이들은 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972의 발효 브로쓰 및 이 발효 브로쓰로부터 정제된 푸사리시딘의 통상 오염물 중에 편재되어 있다. 푸사리시딘 A의 항진균 활성을 식물 병원체 ALTESO를 사용한 시험관내 검정에서 LiF04c 및 LiF04d (푸사리시딘 A 및 B의 비시클릭 유사체)의 혼합물과 비교하였다. 에스테르 결합에서의 펩티드 고리 개방의 유의한 영향이 있다. 비시클릭 유사체는 시험된 가장 높은 농도에서 불활성이었다 (도 17 참조). 이는 구조적 정보와 관련하여 중요하며 정제된 푸사리시딘에서와 달리 전형적으로 불순물을 구성하는 이들 화합물이 항진균 활성에 기여하지 않을 가능성을 입증한다.
고리/쇄의 아미노산 위치 (2)과 (3)에서의 아미노산 치환을 또한 조사하였다. 유사체 푸사리시딘 A, LiF05a, LiF06a, 및 LiF08a는 발린 또는 이소류신 조합을 갖는 그의 위치에서 상이하다. 이를 식물 병원체 ALTESO를 사용한 시험관내 검정에서 시험하였다. 2개의 강력한 유사체는 푸사리시딘 A (발린/발린) 및 LiF08a (이소류신/이소류신)였다. 발린/이소류신의 혼합물을 포함하는 다른 2개의 유사체는 3배 덜 강력하였다 (도 17 참조).
신규 파에니세린에 의한 항진균 활성에서의 차이를 또한 조사하였다. 다시 ALTESO에 대해 시험하여, 고리/쇄의 아미노산 위치 (1)과 (4)에서의 차이를 평가하였다. 파에니세린이 트레오닌과 세린을 교대로 가질 수 있는 반면에 전형적 푸사리시딘은 그 위치에서 트레오닌으로 제한된다. 파에니세린은 본 검정에서 푸사리시딘 A에 대해 유사한 항진균 활성을 나타냈다 (도 17 참조).
파에니프롤릭신 (즉, 상이한 측쇄 길이를 갖는 유사체)의 항진균 활성을 또한 진균 병원체 ALTESO 및 콜레토트리쿰 라게나리움 (COLLLA)에 대한 시험관내 검정으로 조사하였다. 전형적 푸사리시딘은 15-구아니디노-3-히드록시펜타데칸산 측쇄를 포함한다. 파에니프롤릭신은 쇄에서 2 또는 4개의 추가의 메틸렌 기를 갖는 것으로 나타났다. 측쇄 길이는 생물활성에 대한 현저한 효과를 나타내고 별개의 진균 병원체와의 차이를 나타냈다. 변경되지 않은 길이의 GHPD가 ALTESO에 대해 가장 강력하며, 메틸렌 기가 각각 추가됨에 따라 감소하였다. COLLLA에 대해, 가장 강력한 길이는 GHPD + 2CH2이다 (도 17 참조).
실시예 27. 푸사리시딘 A의 파에니세린 A1 또는 파에니프롤릭신 C1과의 혼합물의 상승작용적 항진균 활성
레자주린-기반 세포 생존율 시약 PRESTOBLUE®을 사용한 시험관내 항진균 96-웰 플레이트 검정 (실시예 18 참조)을 푸사리시딘, 파에니세린, 및 파에니프롤릭신 단독 및 2원 조합의 항진균 활성을 평가하는 데 사용하였다. 항진균 활성을 비처리된 대조군 값과 관련하여 하기 방정식으로 계산하였다:
효능 = (100- 비처리된 대조군의 성장)
100% 효능은 비처리된 대조군에 비해 진균 성장 없음을 나타내고, 0% 효능은 비처리된 대조군에 비해 진균 성장의 억제를 나타냈다.
표 23 및 24는 본 발명에 따른 활성 화합물 조합의 관찰된 활성이 계산된 활성 보다 더 크다는 것, 즉, 상승작용적 효과가 존재한다는 것을 명백하게 나타낸다.
표 23: 푸사리시딘 A 단독, 파에니세린 A1 단독, 및 푸사리시딘 A + 파에니세린 A1의 알테르나리아 솔라니에 대한 항진균 활성
Figure pct00035
표 24: 푸사리시딘 A 단독, 파에니프롤릭신 단독, 및 푸사리시딘 A + 파에니프롤릭신 C1의 알테르나리아 솔라니에 대한 항진균 활성
Figure pct00036
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해된 바와 같이 동일한 의미를 갖는다. 인용된 모든 공개, 특허 및 특허 공개는 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
개시된 발명이 특정한 방법론, 프로토콜 및 방법으로 제한되지 않으며 기재된 바와 같이 달라질 수 있다는 것이 이해된다. 또한 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하는 목적을 위한 것이고 단지 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상용 실험에 지나지 않는 것을 사용하여, 본원에 기재된 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 많은 등가물을을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
기탁기관명 : 애그리컬쳐럴 리서치 컬쳐 (NRRL)
수탁번호 : NRRLB-67129
수탁일자 : 20150901
기탁기관명 : 애그리컬쳐럴 리서치 컬쳐 (NRRL)
수탁번호 : NRRLB-50972
수탁일자 : 20140828
SEQUENCE LISTING <110> Bayer CropScience LP <120> A NOVEL PAENIBACILLUS STRAIN, ANTIFUNGAL COMPOUNDS, AND METHODS FOR THEIR USE <130> BCS159002 WO <150> US 62/138,765 <151> 2015-03-26 <150> US 62/232,205 <151> 2015-09-24 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus peoriae <400> 1 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Val Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asn Thr Lys Gly Ile Tyr Glu His Cys Asn Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Trp Phe Glu Asp Glu Ser Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Thr Gln Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Glu Arg Ser Leu Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Ile Leu Thr Gln Ala His Phe Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Ser Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Pro Asn Leu Ser Asp Val Tyr Gly Ala His Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Gly Val Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Glu Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Val Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Asp Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Ala Ser Val Glu Leu Ile Glu Glu Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Glu Ala Thr Asp Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Ser Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Gln Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Ala Glu Gly Glu Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 2 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 2 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Gln Val Thr Ile Gly Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asn Met Lys Gly Ile Tyr Glu His Cys Asn Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Trp Phe Glu Asp Glu Ser Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Thr Gln Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Glu Arg Ser Leu Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Ile Leu Thr Gln Ala His Leu Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Ser Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Pro Asn Leu Ser Asn Val Tyr Gly Ala His Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Gly Val Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Glu Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Asp Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Ala Ser Val Glu Leu Ile Glu Glu Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Glu Ala Thr Asp Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Ser Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Ile Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 3 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 3 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Val Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asn Thr Lys Gly Ile Tyr Glu His Cys Asn Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Trp Phe Glu Asp Glu Ser Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Thr Gln Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Glu Arg Ser Leu Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Ile Leu Thr Gln Ala His Leu Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Ser Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Pro Asn Leu Ser Asp Val Tyr Gly Thr His Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Gly Val Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Asp Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Ala Ser Val Glu Leu Ile Glu Glu Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Glu Ala Thr Asp Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Ser Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Lys 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 4 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 4 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Val Thr Ile Gly Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Ile Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asn Thr Lys Ala Ile Tyr Glu His Tyr Asn Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Ala Ala Ile 65 70 75 80 Trp Phe Glu Asp Glu Ser Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Thr Gln Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Glu Arg Ser Leu Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Gln Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Ile Leu Thr Gln Ala His Leu Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Ser Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Pro Asn Leu Ser Asp Val Tyr Gly Ala His Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Gly Val Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Ala Gln Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Asp Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Thr Ala Ser Ile Glu Leu Ile Glu Glu Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Glu Ala Thr Asn Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Ser Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Asn Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Leu Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 5 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 5 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Gln Val Thr Ile Glu Gln Ile Lys Glu His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Ile Glu Asn Pro Ala Thr Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asn Thr Asn Val Cys Tyr Glu His Asn Ser Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Leu 65 70 75 80 Leu Phe Gly Asp Glu Met Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Thr Gln Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Glu Arg Ser Leu Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Ile Leu Thr Gln Ala His Leu Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Ser Val Leu Leu Leu Asp Glu Ser Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Lys Leu Glu Asp Thr Ala Gly Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Pro Asn Leu Ser Asp Val Tyr Gly Ala His Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Gly Val Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Asp Ile Leu Asp His Val Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Asp Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Ala Ser Val Glu Leu Ile Glu Glu Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Gly Ala Thr Asp Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Gln Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Ile Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Asp 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Val Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 6 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 6 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Ala Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Phe His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Ser 35 40 45 Val Trp Gly Glu Thr Glu Ala Ser Ser Lys His Arg Thr Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Ala Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Leu Phe Glu Asn Glu Met Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Ala Glu Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Leu Val Glu Arg Ser Thr Asp Met Ile Val Gly Met 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Asn Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Thr Lys 145 150 155 160 Met Ile Leu Thr Gln Ala His Leu Leu Glu His Ile Gly Trp Met Gly 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Glu Glu Pro Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Glu Ser 180 185 190 Asn Leu Lys Asp Thr Ala Asp Ser Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Arg Asn Leu Ser Asp Val Tyr Arg Gly Leu Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Ile Thr Ala Leu Ser His Gly Ala Thr Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Ser Lys Ala Ile Thr Ile Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ile Ile 290 295 300 His Leu Glu Pro Glu Arg Leu Pro Ala Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Thr Ser Val Glu Leu Ile Glu Lys Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Gln Tyr Phe Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Met Trp Thr Val Pro Asp Ser Glu Glu Thr Met Glu Arg Val Ser Ile 355 360 365 Gly Gln Pro Ile Ala Asn His Arg Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Val Leu Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Gln Pro Ala Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Thr Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asp Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala His Met Leu Arg Val Pro Phe Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Leu Ala Val Glu Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Val Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Gln Gly Trp Ala 545 550 <210> 7 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 7 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Ser Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Phe His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Glu Thr Glu Ala Ser Ser Lys His Arg Thr Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Ala Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Leu Phe Glu Asn Glu Met Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Ala Glu Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Leu Val Glu Arg Ser Thr Asp Met Ile Val Gly Met 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Met Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Asn Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Thr Lys 145 150 155 160 Met Ile Leu Ala Gln Ala His Leu Leu Glu His Ile Asp Trp Met Gly 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Glu Glu Pro Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Glu Ser 180 185 190 Asn Leu Lys Asp Thr Ala Asn Ser Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Arg Asn Leu Ser Asp Val Tyr Arg Gly Leu Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Ile Thr Ala Leu Ser His Gly Ala Thr Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Asp Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Ser Lys Ala Ile Thr Ile Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ile Ile 290 295 300 His Leu Glu Pro Glu Arg Leu Pro Ala Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Thr Ser Val Glu Leu Ile Glu Lys Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Gln Tyr Phe Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Met Trp Thr Val Pro Asp Ser Glu Glu Thr Met Glu Arg Val Ser Ile 355 360 365 Gly Gln Pro Ile Ala Asn His Arg Val Tyr Ile Leu Asp Asp His Phe 370 375 380 Arg Val Leu Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Gln Pro Ala Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Phe Thr Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asp Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala His Met Leu Arg Val Pro Phe Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Leu Ala Val Glu Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Val Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Gln Gly Trp Ala 545 550 <210> 8 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 8 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Ala Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Phe His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asp Thr Gly Ala Ser Ser Lys His Arg Thr Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Val Phe Glu Asn Glu Val Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Ala Glu Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Val Glu Arg Ser Thr Asp Met Ile Val Gly Met 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Asn Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Thr Lys 145 150 155 160 Met Ile Leu Ala Gln Ala His Leu Leu Glu His Arg Gly Trp Thr Gly 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Pro Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Lys Asp Thr Ala Asp Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Arg Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Gln Asn Leu Ser Asp Val Tyr Arg Gly Leu Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Thr Leu Ser His Gly Ala Thr Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Glu Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Glu Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Thr Ser Val Glu Leu Ile Glu Lys Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Gln Tyr Phe Asn Ala Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Asn Ala Gln Asn Ser Glu Glu Thr Val Gly Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Gln Pro Ile Ala Asn His Arg Val Tyr Ile Leu Asp Glu His Phe 370 375 380 Arg Leu Leu Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Tyr Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Ser Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala His Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Val 465 470 475 480 Leu Ala Val Glu Ser Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Asp Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 9 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 9 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Pro Ala Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Phe His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Gln Ile Leu Asn 35 40 45 Val Trp Gly Asp Thr Gly Ala Ser Ser Lys His Arg Thr Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Asp Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Val Phe Glu Asn Glu Val Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Arg Leu Arg Ala Glu Gly Ile Lys Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Val Glu Arg Ser Thr Asp Met Ile Val Gly Met 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Asn Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Thr Lys 145 150 155 160 Met Ile Leu Ala Gln Ala His Leu Leu Glu His Arg Gly Trp Thr Gly 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Pro Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Lys Asp Thr Ala Asp Pro Asp Asp Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Arg Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Gln Asn Leu Ser Asp Val Tyr Arg Gly Leu Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Ile Leu Thr Thr Leu Ser His Gly Ala Thr Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Glu Ile Leu Asp His Ala Leu Phe Glu Gln Phe Met 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Glu Pro Glu Arg Leu Pro Thr Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Thr Ser Val Glu Leu Ile Glu Lys Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Gln Tyr Phe Asn Ala Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Val Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Asn Ala Gln Asn Ser Glu Glu Thr Val Gly Ile Val Ser Ile 355 360 365 Gly Gln Pro Ile Ala Asn His Arg Val Tyr Ile Leu Asp Glu His Phe 370 375 380 Arg Leu Leu Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Glu Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Asp Asn Pro Tyr Ala Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Ser Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Leu Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala His Met Leu Arg Val Pro Ser Val Gln Glu Val Val Val 465 470 475 480 Leu Ala Val Glu Ser Asp Asp Gly Tyr Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Gln Lys Leu Glu Val Ser Glu Leu Arg Ala Asp Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asp Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 10 <211> 250 <212> PRT <213> Paenibacillus sp. <400> 10 Asn Thr Leu Val Tyr Asp Ser Ser Asn Ile Glu Arg Ile Arg Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Lys Asn Pro Gly Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Asp His Ile Leu Asn 35 40 45 Ile Trp Lys Asp Ile Ala Val Pro Tyr Glu His Tyr Ala Glu Leu His 50 55 60 Ala Gln Ala Gln Thr Ala Pro Ile Gly Gln Pro Asn Val Tyr Ile Val 65 70 75 80 Asp Asp His Phe Arg Leu Leu Pro Val Gly Val Ala Gly Glu Leu Cys 85 90 95 Ile Ala Gly Val Gly Phe Thr Arg Glu His His Asn His Pro Glu Leu 100 105 110 Thr Asp Glu Lys Phe Val Asp Asn Pro Phe Ala Pro Gly Glu Arg Met 115 120 125 Tyr Arg Thr Gly Asp Leu Ala Arg Trp Leu Pro Asp Gly Thr Ile Gln 130 135 140 Tyr Leu Gly Arg Val Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Val 145 150 155 160 Glu Leu Ser Glu Val Glu Ala Gln Met Leu Lys Val Gln Ser Val Gln 165 170 175 Asp Val Val Val Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly His Lys Asp Leu 180 185 190 Phe Ala Tyr Phe Val Ala Asp Gln Thr Ile Glu Ile Ser Glu Leu Arg 195 200 205 Ala Val Leu Ser Glu Leu Leu Pro Val Tyr Met Ile Pro Ser His Phe 210 215 220 Val Gln Leu Glu Asn Pro Leu Leu Thr Pro Ser Gly Lys Ile Asp Arg 225 230 235 240 Lys Ala Leu Gln Gly Glu Arg Gly Trp Ala 245 250 <210> 11 <211> 550 <212> PRT <213> Paenibacillus sp. <400> 11 Asn Ala Leu Val Tyr Asp Gln Val Thr Ile Glu Gln Ile Lys Gly His 1 5 10 15 Leu Val His Leu Met Glu Gln Ile Val Glu Asn Pro Ala Ile Ser Val 20 25 30 Asp Ala Leu Glu Leu Val Thr Pro Gln Glu Arg Glu Leu Ile Leu Asp 35 40 45 Val Trp Gly Asn Thr Lys Val Ser Tyr Glu His Cys Asn Thr Phe His 50 55 60 Gly Leu Leu Glu Glu Gln Ala Gly Arg Thr Pro Glu Ala Thr Ala Ile 65 70 75 80 Val Phe Glu Asp Glu Met Leu Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Ala Lys Ala 85 90 95 Asn Gly Leu Ala Arg Lys Leu Arg Asn Gln Gly Ile Gln Thr Gly Asp 100 105 110 Leu Val Gly Leu Ile Ala Asp Arg Ser Ser Glu Met Ile Val Gly Ile 115 120 125 Tyr Gly Ile Met Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu 130 135 140 Tyr Pro Lys Glu Arg Ile Ser Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gly Ala Lys 145 150 155 160 Leu Val Leu Thr Gln Ala Arg Leu Leu Glu His Leu Gly Trp Thr Glu 165 170 175 Asn Val Leu Leu Leu Asp Glu Pro Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Thr Ser 180 185 190 Asn Leu Lys Asp Thr Val Gly Pro Asp Asn Leu Ala Tyr Val Ile Tyr 195 200 205 Thr Ser Gly Thr Thr Gly Gln Pro Lys Gly Val Leu Val Glu His Arg 210 215 220 Gly Leu Gln Asn Leu Ser Asp Val Tyr Gly Thr Tyr Phe Glu Val Thr 225 230 235 240 Pro Gln Asp Arg Ile Val Gln Phe Ala Ser Leu Ser Phe Asp Ala Ser 245 250 255 Val Ser Glu Val Leu Thr Ala Leu Ser His Gly Ala Ala Leu Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Thr Gln Asp Ile Leu Asp Tyr Ala Leu Phe Glu Gln Phe Ile 275 280 285 Asn Asp Lys Gly Ile Thr Ile Ala Thr Leu Pro Pro Ala Tyr Ala Ile 290 295 300 His Leu Glu Pro Glu Arg Leu Pro Ala Leu Arg Cys Leu Leu Thr Ala 305 310 315 320 Gly Ser Ala Ala Ser Val Glu Leu Ile Glu Lys Trp Arg Lys His Val 325 330 335 Arg Tyr Ser Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Asp Ser Ile Cys Thr Thr 340 345 350 Ile Trp Ser Val Pro Asp Ser Glu Glu Thr Leu Glu Thr Val Ser Ile 355 360 365 Gly Arg Pro Ile Ala Asn His Ser Val Tyr Val Leu Asp Glu His Leu 370 375 380 Arg Leu Gln Pro Val Gly Val Val Gly Glu Leu Cys Ile Ser Gly Ile 385 390 395 400 Gly Leu Ala Arg Gly Tyr His Asn Arg Pro Ala Leu Met Asp Glu Lys 405 410 415 Phe Val Glu Asn Pro Phe Thr Pro Gly Glu Arg Met Tyr Arg Thr Gly 420 425 430 Asp Leu Val Arg Trp Leu Pro Asn Gly Thr Ile Glu Tyr Val Gly Arg 435 440 445 Ile Asp His Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly Glu 450 455 460 Val Glu Ala Gln Met Leu Arg Val Gln Ser Val Gln Glu Val Val Ala 465 470 475 480 Met Ala Val Glu Gly Asp Asp Gly Gln Lys Asp Leu Val Ala Tyr Phe 485 490 495 Val Ala Ala Arg Glu Leu Glu Val Ser Glu Leu Gln Thr Val Leu Ser 500 505 510 Glu Met Leu Pro Gly Tyr Met Ile Pro Ser Arg Phe Ile Gln Leu Glu 515 520 525 Asp Met Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Ile Asn Arg Lys Ala Leu Gln 530 535 540 Gly Glu Arg Gly Trp Ala 545 550 <210> 12 <211> 804 <212> DNA <213> Paenibacillus sp. <400> 12 ttgcaaaaaa ttgaggtatt gttggctgat gacaaccggg aatttacgaa tctgcttgcc 60 gaatatattt ccgatcagga gcatatggaa gttacaggaa tcgcctataa tggtgaagaa 120 gtgctccaac acatcgcaga atcccgcaac gtacctgatg tacttatttt agatattatc 180 atgcctcatc tggatggtct cggcgtattg gagcgcttga gagaaatgaa cctgtctcca 240 cagccgaaaa tcattatgct gactgcattc ggtcaagaaa atattacgca aagagccgta 300 cagctcgggg catcttatta tattttgaag ccgtttgaca tggaagtgct tcccaaccgt 360 gttcgtcaat tggtgggacc acaattagtc agcagcagtc cggtgacggt ttcttccatg 420 cggtctaatg tggtgccaat cggcaaaacg aaaaacctgg atgccagtat tacggccatt 480 atccatgaaa tcggtgtgcc agctcatatt aagggctatc aatatttacg cgaagccatt 540 actatcgtgt acaataatat cgaaattttg ggtgccatca ccaaaacatt atatcccgca 600 atcgccgaaa aatttaaaac gacggcatcc cgcgtggaac gcgccattcg tcatgccatc 660 gaggtagcat ggacacgtgg caacatcgac agcatctctc atctgttcgg ctacaccatt 720 aatatctcca aatccaagcc gaccaactca gagtttattg cgatggtagc tgacaagctt 780 cggattgaga ataaggtgtc ctga 804 <210> 13 <211> 804 <212> DNA <213> Paenibacillus sp. <400> 13 ttgcaaaaaa ttgaggtatt gttggctgat gacaaccggg aatttacgaa tctgcttgcc 60 gaatatattt ccgatcagga gcatatggaa gttacaggaa tcgcctataa tggtgaagaa 120 gtgctccaac acatcgcaga atcccgcaac gtacctgatg tacttatttt agatattatc 180 atgcctcatc tggatggtct cggcgtattg gagcgcttga gagaaatgaa cctgtctcca 240 cagccgaaaa tcattatgct gactgcattc ggtcaagaaa atattacgca aagagccgta 300 cagctcgggg catcttatta tattttgaag ccgtttgaca tggaagtgct tcccaaccgt 360 gttcgtcaat tggtgggacc acaattagtc agcagcagtc cggtgacggt ttcttccatg 420 cggtctaatg tggtgccaat cggcaaaacg aaaaacctgg atgccagtat tacggccatt 480 atccatgaaa tcggtgtgcc agctcatatt aagggctatc aatatttacg cgaagccatt 540 actatcgtgt acaataatat cgaaattttg ggtgccatca ccaaaacatt atatcccgca 600 atcgccgaaa aatttaaaac gacggcatcc cgcgtggaac gcgccattcg tcatgccatc 660 gaggtagcat ggacacgtgg caacatcgac agcatctctc atctgttcgg ctacaccatt 720 aatatctcca aatccaagcc gaccaactca gagtttattg cgatggtagt tgacaagctt 780 cggattgaga ataaggtgtc ctga 804 <210> 14 <211> 267 <212> PRT <213> Paenibaciluss terrae <400> 14 Met Gln Lys Ile Glu Val Leu Leu Ala Asp Asp Asn Arg Glu Phe Thr 1 5 10 15 Asn Leu Leu Ala Glu Tyr Ile Ser Asp Gln Glu Asp Met Glu Val Thr 20 25 30 Gly Ile Ala Tyr Asn Gly Glu Glu Val Leu Gln His Ile Ala Glu Ser 35 40 45 Arg Asn Val Pro Asp Val Leu Ile Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu 50 55 60 Asp Gly Leu Gly Val Leu Glu Arg Leu Arg Glu Met Asn Leu Ser Pro 65 70 75 80 Gln Pro Lys Ile Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asn Ile Thr 85 90 95 Gln Arg Ala Val Gln Leu Gly Ala Ser Tyr Tyr Ile Leu Lys Pro Phe 100 105 110 Asp Met Glu Val Leu Ala Asn Arg Val Arg Gln Leu Val Gly Pro Gln 115 120 125 Leu Val Ser Ser Ser Pro Leu Thr Val Ser Ser Met Arg Ser Asn Val 130 135 140 Val Pro Met Gly Lys Thr Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ala Ile 145 150 155 160 Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Gln Tyr Leu 165 170 175 Arg Glu Ala Ile Thr Met Val Tyr Asn Asn Ile Glu Ile Leu Gly Ala 180 185 190 Ile Thr Lys Thr Leu Tyr Pro Ala Ile Ala Glu Lys Phe Lys Thr Thr 195 200 205 Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp 210 215 220 Thr Arg Gly Asn Ile Asp Ser Ile Ser His Leu Phe Gly Tyr Thr Ile 225 230 235 240 Asn Ile Ser Lys Ser Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val 245 250 255 Ala Asp Lys Leu Arg Ile Glu Asn Lys Val Ser 260 265 <210> 15 <211> 267 <212> PRT <213> Paenibacillus sp. <400> 15 Leu Gln Lys Ile Glu Val Leu Leu Ala Asp Asp Asn Arg Glu Phe Thr 1 5 10 15 Asn Leu Leu Ala Glu Tyr Ile Ser Asp Gln Glu Asp Met Glu Val Thr 20 25 30 Gly Ile Ala Tyr Asn Gly Glu Glu Val Leu Gln His Ile Ala Glu Ser 35 40 45 Arg Asn Val Pro Asp Val Leu Ile Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu 50 55 60 Asp Gly Leu Gly Val Leu Glu Arg Leu Arg Glu Met Asn Leu Ser Pro 65 70 75 80 Gln Pro Lys Ile Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asn Ile Thr 85 90 95 Gln Arg Ala Val Gln Leu Gly Ala Ser Tyr Tyr Ile Leu Lys Pro Phe 100 105 110 Asp Met Glu Val Leu Ala Asn Arg Val Arg Gln Leu Val Gly Pro Gln 115 120 125 Leu Val Ser Ser Ser Pro Val Thr Val Ser Ser Met Arg Ser Asn Val 130 135 140 Val Pro Met Gly Lys Thr Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ala Ile 145 150 155 160 Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Gln Tyr Leu 165 170 175 Arg Glu Ala Ile Thr Met Val Tyr Asn Asn Ile Glu Ile Leu Gly Ala 180 185 190 Ile Thr Lys Thr Leu Tyr Pro Ala Ile Ala Glu Lys Phe Lys Thr Thr 195 200 205 Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp 210 215 220 Thr Arg Gly Asn Ile Asp Ser Ile Ser His Leu Phe Gly Tyr Thr Ile 225 230 235 240 Asn Ile Ser Lys Ser Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val 245 250 255 Ala Asp Lys Leu Arg Ile Glu Asn Lys Val Ser 260 265 <210> 16 <211> 267 <212> PRT <213> Paenibacillus sp. <400> 16 Leu Gln Lys Ile Glu Val Leu Leu Ala Asp Asp Asn Arg Glu Phe Thr 1 5 10 15 Asn Leu Leu Ala Glu Tyr Ile Ser Asp Gln Glu Asp Met Glu Val Thr 20 25 30 Gly Ile Ala Tyr Asn Gly Glu Glu Val Leu Gln His Ile Ala Glu Ser 35 40 45 Arg Asn Val Pro Asp Val Leu Ile Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu 50 55 60 Asp Gly Leu Gly Val Leu Glu Arg Leu Arg Glu Met Asn Leu Ser Pro 65 70 75 80 Gln Pro Lys Ile Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asn Ile Thr 85 90 95 Gln Arg Ala Val Gln Leu Gly Ala Ser Tyr Tyr Ile Leu Lys Pro Phe 100 105 110 Asp Met Glu Val Leu Ala Asn Arg Val Arg Gln Leu Val Gly Pro Gln 115 120 125 Leu Val Ser Ser Ser Pro Val Thr Val Ser Ser Met Arg Ser Asn Val 130 135 140 Val Pro Met Gly Lys Thr Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ala Ile 145 150 155 160 Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Gln Tyr Leu 165 170 175 Arg Glu Ala Ile Thr Met Val Tyr Asn Asn Ile Glu Ile Leu Gly Ala 180 185 190 Ile Thr Lys Thr Leu Tyr Pro Ala Ile Ala Glu Lys Phe Lys Thr Thr 195 200 205 Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp 210 215 220 Thr Arg Gly Asn Ile Asp Ser Ile Ser His Leu Phe Gly Tyr Thr Ile 225 230 235 240 Asn Ile Ser Lys Ser Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val 245 250 255 Val Asp Lys Leu Arg Ile Glu Asn Lys Val Ser 260 265 <210> 17 <211> 267 <212> PRT <213> Paenibacillus polymyxa <400> 17 Met Gln Lys Ile Glu Val Leu Leu Ala Asp Asp Asn Arg Glu Phe Thr 1 5 10 15 Asn Leu Leu Ala Glu Tyr Ile Ser Asp Gln Glu Asp Met Glu Val Thr 20 25 30 Gly Ile Ala Tyr Asn Gly Glu Glu Val Leu Gln Arg Ile Ala Glu Ser 35 40 45 Arg Asn Val Pro Asp Val Leu Ile Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu 50 55 60 Asp Gly Leu Gly Val Leu Glu Arg Leu Arg Glu Met Asn Leu Thr Pro 65 70 75 80 Gln Pro Lys Ile Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asn Ile Thr 85 90 95 Gln Arg Ala Val Gln Leu Gly Ala Ser Tyr Tyr Ile Leu Lys Pro Phe 100 105 110 Asp Met Glu Val Leu Ala Asn Arg Val Arg Gln Leu Val Gly Pro Gln 115 120 125 Leu Val Ser Ser Ser Pro Val Thr Val Ser Ser Met Arg Ser Asn Val 130 135 140 Val Pro Met Gly Lys Thr Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ala Ile 145 150 155 160 Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Gln Tyr Leu 165 170 175 Arg Glu Ala Ile Thr Met Val Tyr Asn Asn Ile Glu Ile Leu Gly Ala 180 185 190 Ile Thr Lys Thr Leu Tyr Pro Ala Ile Ala Glu Lys Phe Lys Thr Thr 195 200 205 Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp 210 215 220 Thr Arg Gly Asn Ile Asp Ser Ile Ser His Leu Phe Gly Tyr Thr Ile 225 230 235 240 Asn Ile Ser Lys Ser Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val 245 250 255 Val Asp Lys Leu Arg Ile Glu Asn Lys Val Ser 260 265 <210> 18 <211> 267 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <400> 18 Met Glu Lys Ile Lys Val Cys Val Ala Asp Asp Asn Arg Glu Leu Val 1 5 10 15 Ser Leu Leu Ser Glu Tyr Ile Glu Gly Gln Glu Asp Met Glu Val Ile 20 25 30 Gly Val Ala Tyr Asn Gly Gln Glu Cys Leu Ser Leu Phe Lys Glu Lys 35 40 45 Asp Pro Asp Val Leu Val Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu Asp Gly 50 55 60 Leu Ala Val Leu Glu Arg Leu Arg Glu Ser Asp Leu Lys Lys Gln Pro 65 70 75 80 Asn Val Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asp Val Thr Lys Lys 85 90 95 Ala Val Asp Leu Gly Ala Ser Tyr Phe Ile Leu Lys Pro Phe Asp Met 100 105 110 Glu Asn Leu Val Gly His Ile Arg Gln Val Ser Gly Asn Ala Ser Ser 115 120 125 Val Thr His Arg Ala Pro Ser Ser Gln Ser Ser Ile Ile Arg Ser Ser 130 135 140 Gln Pro Glu Pro Lys Lys Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ser Ile 145 150 155 160 Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Leu Tyr Leu 165 170 175 Arg Glu Ala Ile Ser Met Val Tyr Asn Asp Ile Glu Leu Leu Gly Ser 180 185 190 Ile Thr Lys Val Leu Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Lys Phe Asn Thr Thr 195 200 205 Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp 210 215 220 Ser Arg Gly Asn Ile Asp Ser Ile Ser Ser Leu Phe Gly Tyr Thr Val 225 230 235 240 Ser Met Thr Lys Ala Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val 245 250 255 Ala Asp Lys Leu Arg Leu Glu His Lys Ala Ser 260 265 <210> 19 <211> 264 <212> PRT <213> Bacillus cereus <400> 19 Met Glu Lys Ile Lys Val Cys Leu Val Asp Asp Asn Lys Glu Leu Val 1 5 10 15 Ser Met Leu Glu Ser Tyr Val Ala Ala Gln Asp Asp Met Glu Val Ile 20 25 30 Gly Thr Ala Tyr Asn Gly Gln Glu Cys Leu Asn Leu Leu Lys Asp Lys 35 40 45 Gln Pro Asp Val Leu Val Leu Asp Ile Ile Met Pro His Leu Asp Gly 50 55 60 Leu Ala Val Leu Glu Lys Met Arg His Ile Glu Arg Leu Arg Gln Pro 65 70 75 80 Ser Val Ile Met Leu Thr Ala Phe Gly Gln Glu Asp Val Thr Lys Lys 85 90 95 Ala Val Asp Leu Gly Ala Ser Tyr Phe Ile Leu Lys Pro Phe Asp Met 100 105 110 Glu Asn Leu Thr Ser His Ile Arg Gln Val Ser Gly Lys Ala Asn Ala 115 120 125 Thr Ile Lys Arg Pro Leu Pro Ser Phe Arg Ser Ala Thr Thr Val Asp 130 135 140 Gly Lys Pro Lys Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Ser Ile Ile His Glu 145 150 155 160 Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Met Tyr Leu Arg Glu Ala 165 170 175 Ile Ser Met Val Tyr Asn Asp Ile Glu Leu Leu Gly Ser Ile Thr Lys 180 185 190 Val Leu Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Lys Tyr Asn Thr Thr Ala Ser Arg 195 200 205 Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val Ala Trp Ser Arg Gly 210 215 220 Asn Ile Asp Ser Ile Ser Ser Leu Phe Gly Tyr Thr Val Ser Met Ser 225 230 235 240 Lys Ala Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala Met Val Ala Asp Lys 245 250 255 Leu Arg Leu Glu His Lys Ala Ser 260 <210> 20 <211> 273 <212> PRT <213> Clostridium pasteurianum <400> 20 Met Glu Tyr Ser Lys Ile Ser Val Leu Ile Ala Asp Asp Asn Lys Glu 1 5 10 15 Phe Cys Asn Ile Leu Asn Asp Tyr Leu Leu Asn Gln Ser Asp Ile Val 20 25 30 Val Val Gly Ile Ala Lys Asp Gly Ile Glu Ala Leu Lys Leu Ile Glu 35 40 45 Glu Lys Lys Pro Asp Leu Val Ile Leu Asp Ile Ile Met Pro Asn Met 50 55 60 Asp Gly Leu Val Val Leu Glu Lys Leu Ala Asn Ile Asn Ile Asp Pro 65 70 75 80 Val Pro Asn Val Ile Val Leu Ser Ala Val Gly Gln Asp Lys Ile Thr 85 90 95 Gln Arg Ala Ile Thr Leu Gly Ala Asp Tyr Tyr Val Val Lys Pro Phe 100 105 110 Asp Met Asp Val Phe Thr Lys Arg Ile Arg Gln Met Phe Asn Asn Thr 115 120 125 Ile Leu Asp Ser Glu Thr Lys Lys Thr Met Pro Ile Ser Glu Lys Ala 130 135 140 Ala Asp Val Lys Ile Ser Gln Ser Val Pro Leu Asp Leu Glu Asp Glu 145 150 155 160 Ser Ile Ile His Glu Ile Gly Val Pro Ala His Ile Lys Gly Tyr Met 165 170 175 Tyr Leu Arg Glu Ala Ile Asn Met Val Val Asp Asn Ile Glu Leu Leu 180 185 190 Ser Ala Val Thr Lys Glu Leu Tyr Pro Ser Ile Ala Lys Lys Tyr Asn 195 200 205 Thr Thr Ala Ser Arg Val Glu Arg Ala Ile Arg His Ala Ile Glu Val 210 215 220 Ala Trp Ser Arg Gly Gln Val Asp Thr Ile Asn Lys Leu Phe Gly Tyr 225 230 235 240 Thr Ile His Asn Gly Lys Gly Lys Pro Thr Asn Ser Glu Phe Ile Ala 245 250 255 Met Ile Ala Asp Lys Leu Arg Leu Lys Asn Lys Val Lys Asn Val Ala 260 265 270 Gln

Claims (59)

  1. 제3 모듈에서의 기능적 아데닐화 도메인 (FusA-A3)이 결여된 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 살진균 파에니바실루스(Paenibacillus) 종 균주의 생물학적 순수 배양물을 포함하는 조성물이며,
    여기서 기능적 FusA-A3의 결여가 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 파에니바실루스 종 균주에 의한 푸사리시딘의 합성에 비해 아미노산 잔기 (3)에서 티로신 또는 페닐알라닌을 갖는 푸사리시딘의 합성을 억제하는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 변이체 푸사리시딘 신테타제가 FusA-A3에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 10개의 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 것인 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 아미노산 잔기가 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, Cys331, Lys517, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 아미노산 잔기가 서열식별번호: 11의 위치 3203, 3204, 3207, 3246, 3267, 3269, 3290, 3298, 3299, 및/또는 3486에 위치하는 것인 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 변이체 푸사리시딘 신테타제가 FusA-A3에서 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, 및 Cys331의 결실을 포함하는 것인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 변이체 푸사리시딘 신테타제가 서열식별번호: 10을 포함하는 것인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 살진균 파에니바실루스 종 균주가 서열식별번호: 10에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 나타내는 DNA 서열을 포함하는 것인 조성물.
  8. 적어도 하나의 파에니세린 및 적어도 하나의 파에니프롤릭신을 포함하는 살진균 파에니바실루스 종 균주의 생물학적 순수 배양물 또는 그의 무세포 추출물을 포함하는 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 적어도 하나의 파에니세린이 파에니세린 A1, 파에니세린 A2, 파에니세린 A3, 파에니세린 A4, 파에니세린 B1, 파에니세린 B2, 파에니세린 B3, 파에니세린 B4, 파에니세린 C1, 파에니세린 C2, 및 파에니세린 C3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 적어도 하나의 파에니프롤릭신이 파에니프롤릭신 A1, 파에니프롤릭신 A2, 파에니프롤릭신 B1, 파에니프롤릭신 B2, 파에니프롤릭신 C1, 파에니프롤릭신 D1, 파에니프롤릭신 E1, 파에니프롤릭신 E2, 파에니프롤릭신 F1, 파에니프롤릭신 F2, 파에니프롤릭신 G1, 및 파에니프롤릭신 G2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 푸사리시딘 A, LiF08a; 파에니세린 A1, 파에니세린 B1, 파에니프롤릭신 A2, 및 파에니프롤릭신 B2를 포함하는 조성물.
  12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, LiF03a, LiF03b, LiF03c, LiF03d, LiF07a, LiF07b, LiF07c, 및/또는 LiF07d를 포함하지 않는 조성물.
  13. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 파에니세린 A1, 파에니세린 B1, 파에니프롤릭신 A2, 및 파에니프롤릭신 B2를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물.
  14. 제13항에 있어서, (a) 파에니세린 A1 및 파에니세린 B1 및 (b) 파에니프롤릭신 A2 및 파에니프롤릭신 B2가 약 500:1 내지 약 1:500, 약 250:1 내지 약 1:250, 약 100:1 내지 약 1:100, 약 50:1 내지 약 1:50, 약 10:1 내지 약 1:10, 또는 약 5:1 내지 약 1:5의 (a):(b) 중량비로 존재하는 것인 조성물.
  15. 제13항에 있어서, (a):(b) 중량비가 약 1:1인 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 파에니바실루스 종 균주가 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주인 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주의 발효 생성물을 포함하는 조성물.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 살진균 돌연변이체 균주가 파에니바실루스 종 NRRL B-50972에 대해 약 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 게놈 서열을 갖고/거나 살진균 돌연변이체 균주가 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 13을 포함하는 spo0A 유전자를 발현하는 것인 조성물.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 살진균 돌연변이체 균주가 파에니바실루스 종 NRRL B-50972의 수준과 대등하거나 또는 보다 우수한 살진균 활성 및/또는 푸사리시딘, 파에니세린, 및/또는 파에니프롤릭신의 수준을 갖는 것인 조성물.
  20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 발효 생성물이 폴리믹신을 포함하지 않는 것인 조성물.
  21. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 발효 생성물이 액체 제제인 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 액체 제제가 현탁액 농축물 또는 오일 분산액인 조성물.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 적어도 약 1 x 104 CFU 균주/mL 액체 제제를 포함하는 조성물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 내지 약 25%의 발효 고형물을 포함하는 조성물.
  25. 구조 (I)을 갖는 단리된 화합물 및 그의 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 기하 이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 비시클릭(acyclic) 유사체, 및 혼합물.
    Figure pct00037

    여기서
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 -CH(CH3)2 또는 -CH(CH3)CH2CH3이고;
    R3은 -CH2C(O)NH2 또는 -(CH2)2C(O)NH2이고;
    n은 13내지 20의 정수이다.
  26. 제25항에 있어서, n이 14 또는 16인 단리된 화합물.
  27. 제26항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00038

    Figure pct00039

    Figure pct00040

    Figure pct00041

    Figure pct00042

    인 단리된 화합물.
  28. 구조 (II)를 갖는 단리된 화합물 및 그의 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 기하 이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 비시클릭 유사체, 및 혼합물.
    Figure pct00043

    여기서
    R1은 -CH2OH 또는 -CH(OH)CH3이고;
    R2는 -CH2C(O)NH2 또는 -(CH2)2C(O)NH2이고;
    R3은 H 또는 CH3이고;
    단 R1이 -CH2OH이고 R2가 -CH2C(O)NH2인 경우에 R3은 H이다.
  29. 제28항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00044

    Figure pct00045

    Figure pct00046

    인 단리된 화합물.
  30. 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 단리된 화합물 및 농업상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  31. 제30항에 있어서, 화합물이 적어도 0.001 mg/mL의 농도로 용액 중에 존재하는 것인 조성물.
  32. a) 적어도 하나의 푸사리시딘; 및
    b) 적어도 하나의 파에니세린 또는 적어도 하나의 파에니프롤릭신
    을 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 푸사리시딘이 푸사리시딘 A인 조성물.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 파에니세린이 파에니세린 A1인 조성물.
  35. 제32항 또는 제33항에 있어서, 파에니프롤릭신이 파에니프롤릭신 C1인 조성물.
  36. 식물, 식물의 부분 및/또는 식물의 생육지에 유효량의 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 단리된 화합물을 적용하는 것을 포함하는, 질병을 방제하기 위해 식물을 처리하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 조성물이 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주의 발효 생성물인 방법.
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 잎 식물 부분에 조성물 또는 단리된 화합물을 적용하는 것을 포함하는 방법.
  39. 제36항 또는 제37항에 있어서, 조성물이 헥타르당 약 1 x 1010 내지 약 1 x 1012 콜로니 형성 단위 (CFU)의 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주로 적용되는 것인 방법.
  40. 제36항 또는 제37항에 있어서, 조성물이 헥타르당 약 0.5 kg 내지 약 5 kg의 발효 고형물로 적용되는 것인 방법.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 질병이 진균에 의해 유발되는 것인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 식물 질병이 밀듀균병 또는 녹병인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 밀듀균병이 흰가루병 또는 노균병인 방법.
  44. 제42항에 있어서, 녹병이 밀 잎 녹병, 보리 잎 녹병, 호밀 잎 녹병, 갈색 잎 녹병, 관녹병, 및 줄기녹병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  45. 제41항에 있어서, 진균이 알테르나리아 알테르나타(Alternaria alternata), 알테르나리아 솔라니(Alternaria solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 라게나리움(Colletotrichum lagenarium), 푸사리움 쿨모룸(Fusarium culmorum), 파에오스파에리아 노도룸(Phaeosphaeria nodorum), 지모세프토리아 트리티시(Zymoseptoria tritici), 피토프토라 크립토게아(Phytophthora cryptogea), 피토프토라 인페스탄스(Phytophthora infestans), 피티움 울티뭄(Pythium ultimum), 마그나포르테 오리자에(Magnaporthe oryzae), 타나테포루스 쿠쿠메리스(Thanatephorus cucumeris), 우스틸라고 세게툼(Ustilago segetum) 변종 아베나에(avenae), 우로미세스 아펜디쿨라투스(Uromyces appendiculatus), 및 푹시니아 트리티시나(Puccinia triticina)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  46. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 또는 단리된 화합물이 식물, 식물의 부분, 및/또는 식물의 생육지에의 적용으로부터 적어도 5일, 적어도 10일, 또는 적어도 15일 후에 진균의 방제를 일으키는 잔효 활성을 갖는 것인 방법.
  47. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 질병이 박테리아에 의해 유발되는 것인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 박테리아가 크산토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris), 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae), 및 에르위니아 카로토보라(Erwinia carotovora)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  49. 유용 식물에서 식물병원성 유기체를 방제하기 위한 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 단리된 화합물의 용도.
  50. 제49항에 있어서, 조성물이 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-50972, 파에니바실루스 종 균주 NRRL B-67129, 또는 그의 살진균 돌연변이체 균주의 발효 생성물을 포함하는 것인 용도.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 식물병원성 유기체가 알테르나리아 알테르나타, 알테르나리아 솔라니, 보트리티스 시네레아, 콜레토트리쿰 라게나리움, 푸사리움 쿨모룸, 파에오스파에리아 노도룸, 지모세프토리아 트리티시, 피토프토라 크립토게아, 피토프토라 인페스탄스, 피티움 울티뭄, 마그나포르테 오리자에, 타나테포루스 쿠쿠메리스, 우스틸라고 세게툼 변종 아베나에, 우로미세스 아펜디쿨라투스, 및 푹시니아 트리티시나로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  52. 제49항 또는 제50항에 있어서, 식물병원성 유기체가 크산토모나스 캄페스트리스, 슈도모나스 시린가에, 및 에르위니아 카로토보라로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 유용 식물이 사과, 바나나, 시트러스, 키위, 멜론, 복숭아, 배, 파인애플, 인과류, 석류, 양배추, 콜리플라워, 오이, 호로과, 토마토, 감자, 밀, 벼 및 대두로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  54. a) 살진균 파에니바실루스 종 균주에서의 FusA-A3을 서열분석하여 변이체 푸사리시딘 신테타제를 특징화하는 것;
    b) 변이체 푸사리시딘 신테타제를 갖는 파에니바실루스 종 균주의 살진균 활성을 검정하는 것; 및
    c) 파에니바실루스 종 균주가 변이체 푸사리시딘 신테타제를 포함하고 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 참조 파에니바실루스 종 균주에 비해 증가된 살진균 활성을 입증하는 경우에 살진균 파에니바실루스 종 균주를 광역 항진균 활성을 갖는 것으로서 선택하는 것
    을 포함하는, 광역 항진균 활성을 갖는 살진균 파에니바실루스 종 균주를 확인하는 방법.
  55. 제54항에 있어서,
    d) 살진균 파에니바실루스 종 균주를 배양하여 살진균 발효 생성물을 생산하는 것
    을 추가로 포함하는 방법.
  56. 제54항에 있어서, 변이체 푸사리시딘 신테타제가 FusA-A3에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 10개의 기질 특이성을 결정하는 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 아미노산 잔기가 Asp235, Ala236, Ser239, Thr278, Leu299, Ala301, Ala/Gly322, Val330, Cys331, Lys517, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 아미노산 잔기가 서열식별번호: 11의 위치 3203, 3204, 3207, 3246, 3267, 3269, 3290, 3298, 3299, 및/또는 3486에 위치하는 것인 방법.
  59. 제54항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 파에니바실루스 종 균주에 의해 생산된 파에니세린 및/또는 파에니프롤릭신을 정량화하고, 파에니바실루스 종 균주가 야생형 푸사리시딘 신테타제를 포함하는 참조 파에니바실루스 종 균주에 비해 증가된 수준의 파에니세린 및/또는 파에니프롤릭신을 생산하는 경우에 파에니바실루스 종 균주를 광역 항진균 활성을 갖는 것으로서 선택하는 것을 추가로 포함하는 방법.
KR1020177030448A 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법 Active KR102629565B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020247002482A KR20240015158A (ko) 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562138765P 2015-03-26 2015-03-26
US62/138,765 2015-03-26
US201562232205P 2015-09-24 2015-09-24
US62/232,205 2015-09-24
PCT/US2016/023760 WO2016154297A1 (en) 2015-03-26 2016-03-23 A novel paenibacillus strain, antifungal compounds, and methods for their use

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247002482A Division KR20240015158A (ko) 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170129921A true KR20170129921A (ko) 2017-11-27
KR102629565B1 KR102629565B1 (ko) 2024-01-29

Family

ID=55646922

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247002482A Pending KR20240015158A (ko) 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법
KR1020177030448A Active KR102629565B1 (ko) 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247002482A Pending KR20240015158A (ko) 2015-03-26 2016-03-23 신규 파에니바실루스 균주, 항진균 화합물, 및 그의 사용 방법

Country Status (20)

Country Link
US (5) US9883676B2 (ko)
EP (3) EP3838914A1 (ko)
JP (3) JP6916737B2 (ko)
KR (2) KR20240015158A (ko)
CN (2) CN107995925B (ko)
AU (2) AU2016235208B2 (ko)
BR (4) BR122021017017B1 (ko)
CA (1) CA2980723A1 (ko)
CL (3) CL2017002425A1 (ko)
CO (1) CO2017009663A2 (ko)
ES (2) ES2900458T3 (ko)
HU (2) HUE049475T2 (ko)
MX (2) MX387529B (ko)
PE (2) PE20221728A1 (ko)
PH (1) PH12017501757A1 (ko)
PL (2) PL3594225T3 (ko)
PT (2) PT3594225T (ko)
RU (2) RU2763542C2 (ko)
UA (1) UA120642C2 (ko)
WO (1) WO2016154297A1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019142963A1 (ko) * 2018-01-22 2019-07-25 안동대학교 산학협력단 신규한 페니바실러스 엘기 ＡＭ-67 균주 및 이를 함유한 배추무름병 Ｅｒｗｉｎｉａ．ｓｐ．제어용 친환경생물농약 조성물
WO2021182885A1 (ko) * 2020-03-13 2021-09-16 동아대학교산학협력단 플라보박테리움 속 tch3-2 균주를 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도
US11800871B2 (en) 2018-01-22 2023-10-31 Andong National University Industry-Academic Cooperation Foundation Paenibacillus elgii AM-67 strain and biopesticide composition containing same

Families Citing this family (168)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3838914A1 (en) * 2015-03-26 2021-06-23 Bayer Cropscience LP A paenibacillus strain, antifungal compounds, and methods for their use
GB201622086D0 (en) 2016-12-23 2017-02-08 Scientia Terrae Vzw And Katholieke Univ Leuven And Proefstation Groenteteelt And Proefcentrum Hoogst Biocontrol organism
CN107012106B (zh) * 2017-02-21 2019-07-26 北京农学院 对百合镰刀菌有拮抗作用的邻苯二甲酸降解菌及其应用
US12274732B2 (en) 2017-03-27 2025-04-15 Tenfold Technologies, LLC Anti-pathogen composition and methods of use thereof
AU2018246232B2 (en) 2017-03-27 2023-12-07 Tenfold Technologies, LLC Methods and agricultural compositions for preventing or controlling plant diseases
TWI782983B (zh) 2017-04-27 2022-11-11 德商拜耳廠股份有限公司 雜芳基苯基胺基喹啉及類似物
EP3618632A1 (en) 2017-05-03 2020-03-11 Bayer Aktiengesellschaft Trisubstitutedsilylheteroaryloxyquinolines and analogues
WO2018202715A1 (en) 2017-05-03 2018-11-08 Bayer Aktiengesellschaft Trisubstitutedsilylbenzylbenzimidazoles and analogues
WO2018202712A1 (en) 2017-05-03 2018-11-08 Bayer Aktiengesellschaft Trisubstitutedsilylmethylphenoxyquinolines and analogues
CN111629592A (zh) 2017-08-17 2020-09-04 拜耳作物科学有限合伙公司 液体肥料分散性组合物及其方法
EP3710432A1 (en) 2017-11-13 2020-09-23 Bayer Aktiengesellschaft Tetrazolylpropyl derivatives and their use as fungicides
CN111630172A (zh) 2017-11-16 2020-09-04 拜耳作物科学有限合伙公司 基于类芽孢杆菌属的内生孢子呈现平台、产品和方法
TW201927768A (zh) 2017-12-21 2019-07-16 德商拜耳廠股份有限公司 三取代矽基甲基雜芳氧基喹啉及類似物
CN108192846B (zh) * 2018-02-06 2019-10-01 沈阳农业大学 一种用于防治小麦叶锈病菌的多粘类芽孢杆菌及其应用
CN111836802A (zh) 2018-02-12 2020-10-27 拜耳公司 杀真菌的*二唑
WO2019162228A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Bayer Aktiengesellschaft 1-(5-substituted imidazol-1-yl)but-3-en derivatives and their use as fungicides
US20210147371A1 (en) 2018-04-10 2021-05-20 Bayer Aktiengesellschaft Oxadiazoline derivatives
CN112739815B (zh) * 2018-05-14 2024-04-26 拜耳作物科学有限合伙公司 类芽孢杆菌属的突变体及其使用方法
US20210204550A1 (en) 2018-05-17 2021-07-08 Bayer Cropscience Lp Stabilized fungicidal composition
CN112601744B (zh) 2018-07-05 2024-03-29 拜耳公司 作为抗菌剂的取代的噻吩甲酰胺及类似物
EP3823447A1 (en) 2018-07-17 2021-05-26 Bayer S.A.S. Biological methods for controlling phytopathogenic fungi
WO2020020813A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Bayer Aktiengesellschaft Fungicidal active compound combinations
CA3107822A1 (en) * 2018-07-25 2020-01-30 Regents Of The University Of Minnesota Platform for developing soil-borne plant pathogen inhibiting microbial consortia
WO2020020816A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Bayer Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
CN109136132B (zh) * 2018-08-27 2021-05-14 田璨熙 一株假单胞菌Pseudomonas sp.KXJ-B7及其培养方法和应用
AU2019343273A1 (en) 2018-09-17 2021-05-13 Bayer Aktiengesellschaft Use of the fungicide Isoflucypram for controlling Claviceps purpurea and reducing sclerotia in cereals
WO2020061140A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Bayer Cropscience Lp Methods of controlling animal pests with paenibacillus terrae
WO2020070050A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 Bayer Aktiengesellschaft Fungicidal 5-substituted imidazol-1-yl carbinol derivatives
EP3867240A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 Bayer Aktiengesellschaft Heteroarylaminoquinolines and analogues
US20210386069A1 (en) 2018-10-18 2021-12-16 Bayer Aktiengesellschaft Pyridylphenylaminoquinolines and analogues
TW202028193A (zh) 2018-10-20 2020-08-01 德商拜耳廠股份有限公司 氧雜環丁基苯氧基喹啉及類似物
AR117169A1 (es) 2018-11-28 2021-07-14 Bayer Ag (tio)amidas de piridazina como compuestos fungicidas
CN109456921B (zh) * 2018-11-30 2021-06-08 郝志敏 一种多粘类芽孢杆菌、应用及微生物菌剂、粉剂和颗粒剂
EP3620052A1 (en) 2018-12-12 2020-03-11 Bayer Aktiengesellschaft Use of phenoxypyridinyl-substituted (1h-1,2,4-triazol-1-yl)alcohols for controlling fungicidal diseases in maize
US20230064576A1 (en) 2018-12-20 2023-03-02 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyridazine as fungicidal compounds
EP3669652A1 (en) 2018-12-21 2020-06-24 Bayer AG Active compound combination
AR117487A1 (es) 2018-12-21 2021-08-11 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazoles y derivados de éstos como agentes fungicidas
EP3679789A1 (en) 2019-01-08 2020-07-15 Bayer AG Active compound combinations
EP3679793A1 (en) 2019-01-08 2020-07-15 Bayer AG Active compound combinations
EP3679790A1 (en) 2019-01-08 2020-07-15 Bayer AG Active compound combinations
EP3679791A1 (en) 2019-01-08 2020-07-15 Bayer AG Active compound combinations
EP3679792A1 (en) 2019-01-08 2020-07-15 Bayer AG Active compound combinations
CA3114256C (en) 2019-02-01 2021-10-12 Kontzamanis Graumann Smith Macmillan Inc. Bacterial strain having anti-fungal properties and uses thereof
WO2020178307A1 (en) 2019-03-05 2020-09-10 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
CN113766833A (zh) * 2019-03-07 2021-12-07 拜耳作物科学有限合伙公司 类芽孢杆菌属(Paenibacillus)菌株及其使用方法
WO2020182929A1 (en) 2019-03-13 2020-09-17 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
CN109917048B (zh) * 2019-04-18 2022-03-08 江阴天江药业有限公司 一种秦皮药材的uplc特征图谱的构建方法及其应用
CN113840533A (zh) 2019-05-08 2021-12-24 拜耳公司 活性化合物结合物
CA3139524A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
CN110229856B (zh) * 2019-06-19 2022-09-23 光明乳业股份有限公司 一种环脂肽类抗生素Fusaricidin B的制备方法
BR112021025333A2 (pt) 2019-06-21 2022-05-24 Bayer Ag Benzilfenil hidróxi-isoxazolinas e análogos como novos agentes antifúngicos
EP3986888A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Bayer Aktiengesellschaft Thienylhydroxyisoxazolines and derivatives thereof
EP3986889A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Bayer Aktiengesellschaft Fungicidal oxadiazoles
EP3986891A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxyisoxazolines and derivatives thereof
WO2020254492A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxyisoxazolines and derivatives thereof
EP3986875A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Bayer Aktiengesellschaft Phenoxyphenyl hydroxyisoxazolines and analogues as new antifungal agents
BR112021025700A2 (pt) 2019-06-21 2022-02-08 Bayer Ag Hidróxi-isoxazolinas e derivados das mesmas
WO2020254488A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxyisoxazolines and use thereof as fungicides
CN114302953B (zh) 2019-06-24 2024-06-11 奥本大学 一种芽孢杆菌属菌株及其用于促进植物生长的方法
PL3994130T3 (pl) 2019-07-03 2024-11-18 Bayer Aktiengesellschaft Podstawione tiofenokarboksyamidy i ich pochodne jako mikrobiocydy
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
KR20220070282A (ko) 2019-10-02 2022-05-30 바이엘 악티엔게젤샤프트 지방산을 포함하는 활성 화합물 조합물
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
CR20220294A (es) 2019-12-20 2022-08-03 Bayer Ag Tiofenocarboxamidas sustituidas y sus derivados
BR112022010333A2 (pt) 2019-12-20 2022-08-16 Bayer Ag Tieniloxazolonas e análogos
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
CN111378780B (zh) * 2020-04-09 2022-05-10 中国科学院微生物研究所 柱锈菌科多基因谱系筛查方法
CN111454860B (zh) * 2020-04-09 2022-01-18 广西乐土生物科技有限公司 一种多粘芽孢杆菌菌剂及其制备方法
CN115551354B (zh) 2020-04-16 2024-08-13 拜耳公司 活性化合物组合和包含它们的杀真菌剂组合物
HUE069153T2 (hu) 2020-04-16 2025-02-28 Bayer Ag Hatóanyag-kombinációk és azokat tartalmazó fungicid készítmények
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
LT4135521T (lt) 2020-04-16 2025-01-10 Bayer Aktiengesellschaft Veikliųjų medžiagų deriniai ir juos apimančios fungicidų kompozicijos
CA3180168A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
HUE069569T2 (hu) 2020-04-16 2025-03-28 Bayer Ag Hatóanyag-kombinációk és azokat tartalmazó fungicid készítmények
JP2023538713A (ja) 2020-05-06 2023-09-11 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 殺真菌性化合物としてのピリジン（チオ）アミド
CN115605462A (zh) 2020-05-12 2023-01-13 拜耳公司（De） 作为杀真菌化合物的三嗪和嘧啶(硫代)酰胺
BR112022023550A2 (pt) 2020-05-19 2023-01-03 Bayer Cropscience Ag (tio)amidas azabicíclicas como compostos fungicidas
BR112022024086A2 (pt) 2020-05-27 2022-12-27 Bayer Ag Combinações de compostos ativos
US20230278994A1 (en) 2020-06-04 2023-09-07 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
EP4165038A1 (en) 2020-06-10 2023-04-19 Bayer Aktiengesellschaft Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides
WO2021255071A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 3-(pyridazin-4-yl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine derivatives as fungicides for crop protection
JP2023532222A (ja) 2020-06-18 2023-07-27 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 活性化合物組み合わせ
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
UY39277A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Combinación de compuestos activos, método y uso de las mismas para controlar microorganismos dañinos y semilla tratada
BR112022025710A2 (pt) 2020-06-19 2023-03-07 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
BR112022025692A2 (pt) 2020-06-19 2023-02-28 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas
CA3174140A1 (en) 2020-07-31 2022-02-03 Ulrike Malang New agrochemical formulations for fusaricidin producing bacteria
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3915371A1 (en) 2020-11-04 2021-12-01 Bayer AG Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
USD1077859S1 (en) 2020-11-17 2025-06-03 Milwaukee Electric Tool Corporation Blower
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
CN116669555A (zh) 2020-12-17 2023-08-29 巴斯夫欧洲公司 孢子组合物、其生产和用途
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
AU2021408365A1 (en) 2020-12-23 2023-07-06 Basf Se Mixtures and compositions comprising fusaricidin a, fusaricidin b and fungicides
WO2022147300A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Milwaukee Electric Tool Corporation Handheld blower
CN112795507A (zh) * 2021-01-07 2021-05-14 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的多粘类芽孢杆菌及其应用
CN116783193A (zh) 2021-01-21 2023-09-19 先正达农作物保护股份公司 具有含硫取代基的杀有害生物活性的杂环衍生物
CN112760258B (zh) * 2021-01-27 2022-02-01 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其在防治黄瓜细菌性软腐病中的应用
BR112023019788A2 (pt) 2021-03-30 2023-11-07 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
BR112023019400A2 (pt) 2021-03-30 2023-12-05 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
AR125342A1 (es) 2021-04-16 2023-07-05 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos de amina cíclica activos como plaguicidas
CN113278601B (zh) * 2021-05-17 2022-07-08 浙江工业大学 一种腺苷酰化蛋白a6突变体及其编码基因与应用
US20240287047A1 (en) 2021-06-09 2024-08-29 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active diazine-amide compounds
CN113354718B (zh) * 2021-06-21 2023-06-02 重庆市畜牧科学院 一种哌尼生素前体、表达盒及其制备方法
CR20240002A (es) 2021-06-24 2024-02-13 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de 2-[3-[1 [(quinazolin-4-il)amino]etil]pirazin-2-il]tiazol-5-carbonitrilo y compuestos similares como plaguicidas
WO2023006634A1 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Syngenta Crop Protection Ag Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor
WO2023012081A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Syngenta Crop Protection Ag Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor
AR126729A1 (es) 2021-08-10 2023-11-08 Syngenta Crop Protection Ag Mezcla fungicida
AR126700A1 (es) 2021-08-10 2023-11-01 Syngenta Crop Protection Ag Derivados heterocíclicos activos como plaguicidas con sustituyentes que contienen azufre
EP4384016A1 (en) 2021-08-13 2024-06-19 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
EP4388078A1 (en) 2021-08-20 2024-06-26 Basf Se Paenibacillus strains producing low amounts of exopolysaccarides
JP2024535770A (ja) 2021-09-10 2024-10-02 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 菌体外多糖生成微生物及びその使用
MX2024004237A (es) 2021-10-14 2024-04-24 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de imidazo[1,2-a]piridina.
CN118556051A (zh) 2021-10-25 2024-08-27 先正达农作物保护股份公司 具有含硫取代基的杀有害生物活性的杂环衍生物
US20250042875A1 (en) 2021-10-27 2025-02-06 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active pyridazinone compounds
US20250064060A1 (en) 2021-11-03 2025-02-27 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
US20250008961A1 (en) * 2021-11-22 2025-01-09 Basf Se Paenibacillus strains producing low amounts of dab comprising compounds
US20250042886A1 (en) 2021-11-30 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4444712A1 (en) 2021-12-10 2024-10-16 Syngenta Crop Protection AG Pesticidally active pyridazinone compounds
WO2023110710A1 (en) 2021-12-13 2023-06-22 Syngenta Crop Protection Ag Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor
EP4197333A1 (en) 2021-12-15 2023-06-21 Syngenta Crop Protection AG Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor
WO2023148368A1 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents
WO2023148369A1 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents
US12352274B2 (en) 2022-03-21 2025-07-08 Milwaukee Electric Tool Corporation Axial blower
WO2023187191A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents
CN119522219A (zh) 2022-05-03 2025-02-25 拜耳公司 (5s)-3-[3-(3-氯-2-氟苯氧基)-6-甲基哒嗪-4-基]-5-(2-氯-4-甲基苄基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪的晶型
IL316251A (en) 2022-05-03 2024-12-01 Bayer Ag Use of (5S)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-6,5-dihydro-4H-4,2,1-oxadiazine for the control of undesirable microorganisms
EP4543873A1 (en) 2022-06-21 2025-04-30 Syngenta Crop Protection AG Pesticidally active fused bicyclic heteroaromatic compounds
IL318101A (en) 2022-07-22 2025-02-01 Syngenta Crop Protection Ag Solid form of a heterocyclic amide derivative
WO2024022910A1 (en) 2022-07-26 2024-02-01 Syngenta Crop Protection Ag 1-[1-[2-(pyrimidin-4-yl)-1,2,4-triazol-3-yl]ethyl]-3-[2,4-dichloro-5-phenyl]urea derivatives and similar compounds as pesticides
WO2024033374A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 Syngenta Crop Protection Ag Novel arylcarboxamide or arylthioamide compounds
CN119816490A (zh) 2022-09-16 2025-04-11 先正达农作物保护股份公司 杀有害生物活性的环胺化合物
GB202214202D0 (en) 2022-09-28 2022-11-09 Syngenta Crop Protection Ag Agricultural methods
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
GB202214203D0 (en) 2022-09-28 2022-11-09 Syngenta Crop Protection Ag Fungicidal compositions
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024089023A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents
CN120112528A (zh) 2022-10-31 2025-06-06 先正达农作物保护股份公司 具有含硫取代基的杀有害生物活性的杂环衍生物
WO2024104643A1 (en) 2022-11-17 2024-05-23 Bayer Aktiengesellschaft Use of isotianil for controlling plasmodiophora brassica
WO2024110215A1 (en) 2022-11-24 2024-05-30 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active cyclic amine compounds
CN117051144B (zh) * 2022-12-06 2025-03-28 中南林业科技大学 一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记、引物、试剂盒及应用
WO2024126388A1 (en) 2022-12-12 2024-06-20 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents
WO2024126404A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Syngenta Crop Protection Ag Imidazo[1,2-a]pyridine derivatives
AU2023393591A1 (en) 2022-12-16 2025-06-05 Syngenta Crop Protection Ag Benzimidazole derivatives
WO2024133426A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Syngenta Crop Protection Ag Method for controlling diamide resistant pests and compounds therefor
WO2024133551A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active pyridazine compounds
AR131541A1 (es) 2023-01-07 2025-04-09 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos de carboxamida novedosos
WO2024170339A1 (en) 2023-02-13 2024-08-22 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active bicyclic compounds
AR132351A1 (es) 2023-04-13 2025-06-18 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de imidazo[1,2-a]pirazina
AR132352A1 (es) 2023-04-13 2025-06-18 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de imidazo[1,2-a]pirazina
AR132353A1 (es) 2023-04-13 2025-06-18 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de pirazolo[1,5-a]piridina
AR132358A1 (es) 2023-04-13 2025-06-18 Syngenta Crop Protection Ag Derivados bicíclicos de imidazo
CN116925967B (zh) * 2023-07-18 2024-12-24 青岛大学 一株海洋链霉菌及其寡霉素类产物在抗农业致病菌中的应用
WO2025022007A1 (en) 2023-07-27 2025-01-30 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active quinazoline compounds
CN116694652B (zh) * 2023-08-01 2023-10-27 中国农业科学院生物技术研究所 大丽轮枝菌VdNRPS4基因抗病原菌靶基因片段及干扰载体和应用
EP4501112A1 (en) 2023-08-01 2025-02-05 Globachem NV Plant defense elicitors
WO2025032129A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Syngenta Crop Protection Ag Novel aminoindane and aminotetraline compounds
WO2025031668A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Bayer Aktiengesellschaft Azaheterobiaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
WO2025032038A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-4-yloxadiazines as novel fungicides
WO2025045837A1 (en) 2023-08-31 2025-03-06 Syngenta Crop Protection Ag Pesticidally active indazole compounds
CN116926088B (zh) * 2023-09-14 2023-12-12 中国农业科学院生物技术研究所 大丽轮枝菌VdNRPS6基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用
WO2025078128A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-3-one-4-yloxadiazines as novel fungicides

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070052752A (ko) * 2004-08-09 2007-05-22 가켄 세야쿠 가부시키가이샤 신규 페니바실러스 속 균주 및 이들 균주 또는 이의 배양물질을 이용한 식물 병해 방제
KR20110120020A (ko) * 2010-04-28 2011-11-03 한국생명공학연구원 푸자리시딘을 이용한 식물 보호 방법
KR20120018027A (ko) * 2010-08-20 2012-02-29 고려대학교 산학협력단 푸자리시딘 유도체 ｌｉ－ｆ０７의 생산량이 증가된 패니바실러스 폴리믹사 디비비１７０９의 변이균주와 이의 제조방법

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2384967A1 (en) * 1999-09-15 2001-03-22 Monsanto Technology Llc Lepidopteran-active bacillus thuringiensis .delta.-endotoxin compositions and methods of use
DE60323103D1 (de) * 2002-06-28 2008-10-02 Dow Agrosciences Llc Pestizid wirksame proteine und polynukleotide, die aus paenibazillus-spezies gewonnen werden können
KR100762315B1 (ko) * 2006-01-24 2007-10-04 한국생명공학연구원 푸자리시딘 생합성 효소 및 이를 코딩하는 유전자
WO2009003222A1 (en) * 2007-06-29 2009-01-08 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Methods for degrading toxic compounds
US9809865B2 (en) 2009-12-09 2017-11-07 Best Environmental Technologies, Inc. Anti-microbial agent from Paenibacillus sp. and methods and uses thereof
CN101962401B (zh) * 2010-09-01 2012-06-13 浙江大学 一种多肽菌素及其制备与应用
CN102168053B (zh) * 2011-02-13 2013-09-25 南京农业大学 一株联产li–f类抗生素和邻苯二甲酸二丁酯的多粘类芽孢杆菌菌株及其应用
MX2013012045A (es) * 2011-04-12 2014-05-27 Uniao Brasiliense De Educacao E Cultura Ubec Péptidos con actividad antimicrobiana, composiciones farmacéuticas para la profilaxis y el tratamiento de animales, composiciones para la profilaxis y el tratamiento de vegetales, usos de esos péptidos y usos del extracto de paenibacillus elgii ourofinensis.
KR101541446B1 (ko) 2012-12-11 2015-08-06 한국생명공학연구원 푸자리시딘 생산 균주 및 이를 이용한 푸자리시딘의 대량 생산방법
RU2529958C1 (ru) * 2013-08-20 2014-10-10 Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") Штамм азотфиксирующих бактерий pseudomonas sp. для получения биопрепарата против заболеваний пшеницы, вызываемых фитопатогенными грибами, и повышения урожайности
RU2539738C1 (ru) * 2013-08-20 2015-01-27 Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") ШТАММ БАКТЕРИЙ Paenibacillus sp. ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПШЕНИЦЫ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ФИТОПАТОГЕННЫМИ ГРИБАМИ
EP3320776A1 (en) * 2014-05-28 2018-05-16 Bayer CropScience LP Compositions and methods for controlling fungal and bacterial diseases in plants
AU2015299053B2 (en) 2014-08-04 2021-10-21 Basf Se Antifungal Paenibacillus strains, fusaricidin-type compounds, and their use
CL2014002101A1 (es) 2014-08-08 2015-01-30 Univ Santiago Chile Cepa bacteriana paenibacilus polymyxa schc33, agente de control biologico para hongos fitopatogenos tales como botrytis cinerea y uso para combatir tales hongos en frutas, hortalizas o plantas ornamentales, en condiciones de pre- post cosecha.
BR112017005381B1 (pt) * 2014-09-17 2023-02-14 Basf Corporation Composição, semente revestida e método de tratamento de uma planta
EP3838914A1 (en) * 2015-03-26 2021-06-23 Bayer Cropscience LP A paenibacillus strain, antifungal compounds, and methods for their use
CN112739815B (zh) * 2018-05-14 2024-04-26 拜耳作物科学有限合伙公司 类芽孢杆菌属的突变体及其使用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070052752A (ko) * 2004-08-09 2007-05-22 가켄 세야쿠 가부시키가이샤 신규 페니바실러스 속 균주 및 이들 균주 또는 이의 배양물질을 이용한 식물 병해 방제
KR20110120020A (ko) * 2010-04-28 2011-11-03 한국생명공학연구원 푸자리시딘을 이용한 식물 보호 방법
KR20120018027A (ko) * 2010-08-20 2012-02-29 고려대학교 산학협력단 푸자리시딘 유도체 ｌｉ－ｆ０７의 생산량이 증가된 패니바실러스 폴리믹사 디비비１７０９의 변이균주와 이의 제조방법

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Biotechnol Lett.,34(7):1327-1334(2012.3.27.) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019142963A1 (ko) * 2018-01-22 2019-07-25 안동대학교 산학협력단 신규한 페니바실러스 엘기 ＡＭ-67 균주 및 이를 함유한 배추무름병 Ｅｒｗｉｎｉａ．ｓｐ．제어용 친환경생물농약 조성물
US11800871B2 (en) 2018-01-22 2023-10-31 Andong National University Industry-Academic Cooperation Foundation Paenibacillus elgii AM-67 strain and biopesticide composition containing same
WO2021182885A1 (ko) * 2020-03-13 2021-09-16 동아대학교산학협력단 플라보박테리움 속 tch3-2 균주를 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도
KR20210115423A (ko) * 2020-03-13 2021-09-27 동아대학교 산학협력단 플라보박테리움 속 tch3-2 균주를 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
JP6916737B2 (ja) 2021-08-11
RU2763542C2 (ru) 2021-12-30
JP7369741B2 (ja) 2023-10-26
AU2016235208A1 (en) 2017-10-19
CL2018002899A1 (es) 2019-02-01
JP2018517396A (ja) 2018-07-05
KR20240015158A (ko) 2024-02-02
KR102629565B1 (ko) 2024-01-29
US10499656B2 (en) 2019-12-10
BR112017020604A2 (pt) 2018-07-17
BR122021017017B1 (pt) 2022-11-29
MX387529B (es) 2025-03-18
PL3274443T3 (pl) 2020-09-21
UA120642C2 (uk) 2020-01-10
US20230234988A1 (en) 2023-07-27
PT3274443T (pt) 2020-07-08
EP3838914A1 (en) 2021-06-23
BR122021017060B1 (pt) 2022-12-06
HUE056482T2 (hu) 2022-02-28
EP3274443B1 (en) 2020-04-22
US20180146682A1 (en) 2018-05-31
PE20221728A1 (es) 2022-11-04
JP2021169507A (ja) 2021-10-28
EP3594225A1 (en) 2020-01-15
AU2022203326A1 (en) 2022-06-09
EP3274443A1 (en) 2018-01-31
NZ735632A (en) 2021-05-28
MX2017012305A (es) 2018-01-18
CO2017009663A2 (es) 2017-12-15
PE20181360A1 (es) 2018-08-22
PT3594225T (pt) 2021-12-07
EP3594225B1 (en) 2021-09-15
US20190069557A1 (en) 2019-03-07
US20200054023A1 (en) 2020-02-20
RU2021135364A (ru) 2021-12-28
WO2016154297A1 (en) 2016-09-29
US9883676B2 (en) 2018-02-06
RU2017135499A3 (ko) 2020-01-27
US20160278388A1 (en) 2016-09-29
US10159257B2 (en) 2018-12-25
HUE049475T2 (hu) 2020-09-28
PL3594225T3 (pl) 2022-01-31
CL2017002425A1 (es) 2018-05-11
CN107995925A (zh) 2018-05-04
BR112017020604B1 (pt) 2022-09-27
CN114292799A (zh) 2022-04-08
BR122021017006B1 (pt) 2022-11-16
US11623944B2 (en) 2023-04-11
MX2021011119A (es) 2021-10-13
CN107995925B (zh) 2022-04-29
RU2017135499A (ru) 2019-04-26
ES2804732T3 (es) 2021-02-09
CA2980723A1 (en) 2016-09-29
JP2023153947A (ja) 2023-10-18
CL2019001810A1 (es) 2019-11-29
PH12017501757A1 (en) 2018-04-23
AU2016235208B2 (en) 2022-06-09
ES2900458T3 (es) 2022-03-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7369741B2 (ja) 新規なパエニバチルス（ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）株、抗真菌化合物、およびそれらの使用のための方法
JP7695788B2 (ja) パエニバシラスの突然変異体およびその使用方法
JP7541529B2 (ja) パエニバシラス株およびその使用法
NZ735632B2 (en) A novel paenibacillus strain, antifungal compounds, and methods for their use

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20171023

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20210319

Comment text: Request for Examination of Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20230420

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20231019

A107 Divisional application of patent
GRNT Written decision to grant
PA0104 Divisional application for international application

Comment text: Divisional Application for International Patent

Patent event code: PA01041R01D

Patent event date: 20240122

PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20240122

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20240123

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration