JP2020504728A - Ｒｎａ送達のためのイオン化可能なカチオン性脂質 - Google Patents

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Abstract

Ｒ１が、１０〜３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり；Ｒ２が、２〜２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；Ｌ１およびＬ２が、同一または異なる、それぞれ、１〜２０個の炭素の直鎖アルキレン、または２〜２０個の炭素の直鎖アルケニレンであり；Ｘ１が、ＳまたはＯであり；Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり；Ｒ４およびＲ５が、同一または異なる、それぞれ、水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルである、化合物からなる、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が記載されている。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１６年１２月２１日に出願された米国特許出願第１５／３８７，０６７号の優先権を主張し、その内容全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
２０１５年５月８日に出願された米国特許出願第１４／７０７，８７６号（現在は、２０１６年６月１４日に発行された米国特許第９，３６５，６１０号）、２０１５年５月８日に出願された米国特許出願第１４／７０７，７９６号（現在は、２０１７年２月１４日に発行された米国特許第９，５６７，２９６号）；２０１４年１１月１８日に出願された米国特許出願第１４／５４６，１０５号（現在は、２０１７年３月１４日に発行された米国特許第９，５９３，０７７号）；および２０１３年１１月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／９０５，７２４号の開示全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
いくつかの異なる種類の核酸が現在、いくつかの疾患の処置のための治療薬として開発されている。これらの分子が開発されているので、安定で長い貯蔵寿命を有し、極性水溶液または非極性溶媒中で起こり得る副反応を伴わずに、無水有機または無水極性非プロトン性溶媒に容易に組み入れて核酸のカプセル化を可能にすることができる形態でそれらを製造する必要性が生じてきた。
本明細書における記載は、生物学的に活性な治療用分子の細胞内送達を促進する新規な脂質組成物に関する。本記載はまた、そのような脂質組成物を含み、治療有効量の生物学的に活性な分子を患者の細胞に送達するのに有用である医薬組成物に関する。
被験体への治療用化合物の送達は、その治療効果にとって重要であり、通常それは標的とする細胞および組織に到達する化合物の限られた能力によって妨げられ得る。そのような化合物を様々な送達手段により組織の、標的とする細胞に進入させるための改良が重要である。本明細書の記載は、生物活性分子の、標的化された細胞内送達を促進する組成物および調製方法における新規な脂質に関する。
患者の組織への有効な標的化がしばしば達成されない生物学的に活性な分子の例には、免疫グロブリン（immunoglobin）タンパク質を含む多数のタンパク質、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡアンチセンスポリヌクレオチドなどのポリヌクレオチド；ならびに、合成であろうと天然に存在するものであろうと、ペプチドホルモンおよび抗生物質などの多くの低分子量化合物が含まれる。
現在医師が直面している基本的な課題の１つは、いくつかの異なる種類の核酸が、現在、いくつかの疾患の処置のための治療薬として開発されていることである。これらの核酸には、遺伝子発現のためのｍＲＮＡ、遺伝子療法におけるＤＮＡ、プラスミド、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）において使用するための低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンス分子、リボザイム、アンタゴミア（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、ならびにアプタマーが含まれる。これらの核酸が開発されているので、作製が容易であり、標的組織に容易に送達することができる脂質製剤を製造する必要がある。
式Ｉ
（式中、
Ｒ１は、１０〜３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり、
Ｒ２は、２〜２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
Ｌ１およびＬ２は、同一または異なる、それぞれ、１〜２０個の炭素の直鎖アルキレン、または２〜２０個の炭素からなる直鎖アルケニレンであり、
Ｘ１は、ＳまたはＯであり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり、
Ｒ４およびＲ５は、同一または異なる、それぞれ、水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルである）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が記載される。
一実施形態では、以下：
の通りの式ＡＴＸ−４３、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−５８、ＡＴＸ−６１、ＡＴＸ−６３、ＡＴＸ−６４、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８６、ＡＴＸ−８７、およびＡＴＸ−８８の化合物からなる群より選択される。
一実施形態では、本明細書で記載されるものは、Ｒ１が、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり；Ｒ２が、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；Ｌ１およびＬ２が、同一または異なる、それぞれ、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０個の炭素の直鎖アルキレン、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０個の炭素からなる直鎖アルケニレンであり；Ｘ１が、ＳまたはＯであり；Ｒ３が、１、２、３、４、５、６、または６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり；Ｒ４およびＲ５が、同一または異なる、それぞれ、水素、または１、２、３、４、５、もしくは６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルである、化合物からなる。
好ましい実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ（（ＣＨ２）ｎＣＨ３）２であり、式中、ｎは、４、５、６、または７個の炭素であり；Ｒ２は、直鎖アルケニルであり；Ｌ１は、１、２、３、または５個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｌ２は、１、３、または５個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｘ１はＳであり；Ｒ３は、２または３個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｒ４およびＲ５は、同一または異なる、それぞれ、１または２個の炭素である。
一実施形態では、本明細書に記載されるカチオン性脂質は、医薬組成物中に存在する。医薬組成物は、好ましくは、核酸、好ましくはＲＮＡポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子を含む。脂質ナノ粒子は、好ましくは、循環中のＲＮＡの平均寿命を増大させる。別の実施形態では、医薬組成物の投与の際、その中の脂質ナノ粒子は核酸を体内の細胞に送達する。好ましくは、核酸は、標的遺伝子の発現を抑制する活性を有する。あるいは、核酸は、体の細胞内での発現の際、それがコードするタンパク質の産生を増加させる活性を有する。
また、本明細書に記載されているものは、上記の組成物のいずれかを使用することによる、哺乳動物の細胞に核酸を導入するための方法である。細胞は、肝臓、肺、腎臓、脳、血液、脾臓、または骨の中に存在し得る。組成物は、好ましくは、静脈内、皮下、腹腔内、または髄腔内に投与される。好ましくは、本明細書に記載される組成物は、がんまたは炎症性疾患を処置するための方法において使用される。疾患は、免疫障害、がん、腎疾患、線維症性疾患、遺伝的異常、炎症、および心血管障害からなる群より選択されるものであり得る。
図１は、ヘキサノエート（ＳＭ１）、４−アミノブタン酸（ＳＭ２）、および４−ブロモ酪酸（ＳＭ３）からのＡＴＸ−４３（ＲＬ−４３Ａ）の合成経路を示す。中間体（Ｉｎｔ）１〜８および反応は、実施例２に記載されている。
図２は、オクタノエート（ＳＭ１）、４−アミノブタン酸（ＳＭ２）、および４−ブロモ酪酸（ＳＭ３）からのＡＴＸ−５７（ＲＬ−４３Ｃ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例３に記載されている。
図３は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−５８（ＲＬ−４３Ｂ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜７および反応は、実施例４に記載されている。
図４は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８１（ＲＬ−４８Ｂ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例５に記載されている。
図５は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８２（ＲＬ−４７Ａ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜７および反応は、実施例６に記載されている。
図６は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８６（ＲＬ−４８Ａ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例７に記載されている。
図７は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８７（ＲＬ−４８Ｃ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例８に記載されている。
図８は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８８（ＲＬ−４８Ｄ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例９に記載されている。
図９は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８３（ＲＬ−４７Ｂ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例１０に記載されている。
図１０は、図２におけるものと同一であるＳＭ１、ＳＭ２、およびＳＭ３からのＡＴＸ−８４（ＲＬ−４７Ｃ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜８および反応は、実施例１１に記載されている。
図１１は、図１におけるものと同一であるＳＭ１、およびＳＭ２からのＡＴＸ−６１（ＲＬ−４２Ｄ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜５および反応は、実施例１２に記載されている。
図１２は、図１におけるものと同一であるＳＭ１、およびＳＭ２からのＡＴＸ−６３（ＲＬ−４２Ａ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜５および反応は、実施例１３に記載されている。
図１３は、図１におけるものと同一であるＳＭ１、およびＳＭ２からのＡＴＸ−６４（ＲＬ−４２Ｃ）の合成経路を示す。Ｉｎｔ１〜５および反応は、実施例１４に記載されている。
図１４は、ＡＴＸ−２、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８５、ＡＴＸ−８６、またはＡＴＸ−８７カチオン性脂質を含むナノ粒子中の０．０３ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡの、マウスへの注射後の、ＥＰＯのｍＲＮＡレベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す。
図１５は、ＡＴＸ−５７およびＡＴＸ−５８を有するリポソームの抗第ＶＩＩ因子ノックダウン活性 対 ＡＴＸ−２および対照（ＰＢＳ単独）の活性を示す。
図１６は、ＡＴＸ−５７を有するリポソームの抗ＥＰＯノックダウン活性 ＡＴＸ−２の活性を示す。
定義
「少なくとも１つ」は、１つまたは複数（例えば、１〜３、１〜２、または１）を意味する。
「組成物」は、特定の成分を特定の量で含む生成物、および特定の成分を特定の量で組み合わせることから直接的または間接的にもたらされる任意の生成物を意味する。
「〜と組み合わせて」は、本発明の処置方法において式Ｉの化合物を他の医薬と一緒に投与することを意味し、式Ｉの化合物と他の医薬を別々の剤形で逐次的にもしくは同時に投与すること、または同一の剤形で同時に投与することを意味する。
「哺乳動物」は、ヒトもしくは他の哺乳動物を意味するか、または人間を意味する。
「患者」は、ヒトと他の哺乳動物の両方、好ましくはヒトを意味する。
「アルキル」は、飽和または不飽和の、直鎖または分岐状の、炭化水素鎖を意味する。様々な実施形態では、アルキル基は１〜１８個の炭素を有し、すなわち、Ｃ１〜Ｃ１８基であるか、または、Ｃ１〜Ｃ１２基、Ｃ１〜Ｃ６基、もしくはＣ１〜Ｃ４基である。独立して、様々な実施形態では、アルキル基は、０個の分岐（すなわち直鎖）、１個の分岐、２個の分岐、または２個より多い分岐を有する。「アルケニル」は、１つの二重結合、２つの二重結合、または２つより多い二重結合を有し得る不飽和アルキルである。「アルキニル」は、１つの三重結合、２つの三重結合、または２つより多い三重結合を有し得る不飽和アルキルである。アルキル鎖は、１個の置換基（すなわち、アルキル基が一置換されている）、または１〜２個の置換基、または１〜３個の置換基、または１〜４個の置換基などで必要に応じて置換され得る。置換基は、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ボロニル、カルボキシ、ニトロ、シアノなどからなる群より選択され得る。アルキル基が１個または複数のヘテロ原子を組み込んでいる場合、アルキル基は本明細書においてヘテロアルキル基と呼ばれる。アルキル基上の置換基が炭化水素である場合には、結果として得られる基は単に置換アルキルと呼ばれる。様々な態様では、置換基を含むアルキル基は、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７個未満の炭素を有する。
「低級アルキル」は、鎖中に１〜６個の炭素を有する基を意味し、その鎖は直鎖でも分岐状でもよい。適切なアルキル基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基を意味し、アルキルは上で定義した通りである。アルコキシ基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、およびヘプトキシが含まれる。親部分への結合は、エーテル酸素を介する。
「アルコキシアルキル」は、アルコキシ−アルキル基を意味し、アルコキシおよびアルキルは、上述の通りである。好ましいアルコキシアルキルは、低級アルキル基を含む。親部分への結合は、アルキルを介する。
「アルキルアリール」は、アルキル−アリール基を意味し、アルキルおよびアリールは、上述の通りである。好ましいアルキルアリールは、低級アルキル基を含む。親部分への結合は、アリールを介する。
「アミノアルキル」は、アルキル基を介して親部分に結合している、ＮＨ２−アルキル基を意味し、アルキルは上で定義した通りである。
「カルボキシアルキル」は、アルキル基を介して親部分に結合している、ＨＯＯＣ−アルキル基を意味し、アルキルは上で定義した通りである。
「市販の化学物質」および本明細書に記載の実施例で使用される化学物質は、標準的な商業的供給源から得ることができ、そのような供給源は、例えば、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）、Ｓｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）、Ａｖｏｃａｄｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｌａｎｃａｓｈｉｒｅ、Ｕ．Ｋ．）、Ｂｉｏｎｅｔ（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｕ．Ｋ．）、Ｂｏｒｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ、Ｎ．Ｃ．）、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｅａｓｔｍａｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、Ｎ．Ｙ．）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ．（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ．）、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）、ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｎ．Ｈ．）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｕ．Ｋ．）、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）、Ｒｉｅｄｅｌ ｄｅ Ｈａｅｎ（Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、Ｎ．Ｊ．）、ＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ、Ｏｒｅｇ．）、およびＷａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｖａ．）を含む。
「化学文献に記載されている化合物」は、当業者に公知であるように、化学化合物および化学反応に関する参考書およびデータベースによって同定することができる。本明細書に開示される化合物の調製に有用な反応物の合成を詳述するか、または本明細書に開示される化合物の調製を記載する論文への参照を提供する適切な参考書および専門書は、例えば、「Synthetic Organic Chemistry」、John Wiley and Sons, Inc. New York；S. R. Sandlerら、「Organic Functional Group Preparations」、第２版、Academic Press、New York、１９８３年；H. O. House、「Modern Synthetic Reactions」、第２版、W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park、Calif.、１９７２年；T. L. Glichrist、「Heterocyclic Chemistry」、第２版、John Wiley and Sons、New York、１９９２年；J. March、「Advanced Organic Chemistry: reactions, Mechanisms and Structure」、第５版、Wiley Interscience、New York、２００１年を含む。特定のおよび類似の反応物はまた、ほとんどの公共および大学の図書館で、ならびにオンラインデータベースにより入手できる米国化学会のＣｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｒｖｉｃｅによって調製された公知の化学物質のインデックスによって同定され得る（詳細については、米国化学会、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃに問い合わせください）。カタログでは公知であるが市販されていない化学物質は、カスタム化学合成会社によって調製することができ、多くの標準的な化学物質供給会社（上に列挙したものなど）がカスタム合成サービスを提供する。
「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード基を意味する。フルオロ、クロロ、またはブロモが好ましく、フルオロおよびクロロがより好ましい。
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。フッ素、塩素、および臭素が好ましい。
「ヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、飽和または不飽和の、直鎖または分岐状の、鎖を意味する。ヘテロアルキル基は、様々な実施形態では、１個のヘテロ原子、または１〜２個のヘテロ原子、または１〜３個のヘテロ原子、または１〜４個のヘテロ原子を有し得る。一態様では、ヘテロアルキル鎖は、１〜１８個（すなわち、１〜１８）の構成原子（炭素およびヘテロ原子）を含有し、様々な実施形態では、１〜１２個、または１〜６個、または１〜４個の構成原子を含有する。独立して、様々な実施形態では、ヘテロアルキル基は、０個の分岐（すなわち直鎖）、１個の分岐、２個の分岐、または２個より多い分岐を有する。独立して、一実施形態では、ヘテロアルキル基は飽和している。別の実施形態では、ヘテロアルキル基は不飽和である。様々な実施形態では、不飽和ヘテロアルキルは、１つの二重結合、２つの二重結合、２つより多い二重結合、および／または１つの三重結合、２つの三重結合、または２つより多い三重結合を有し得る。ヘテロアルキル鎖は、置換または非置換であり得る。一実施形態では、ヘテロアルキル鎖は非置換である。別の実施形態では、ヘテロアルキル鎖は置換されている。置換ヘテロアルキル鎖は、１個の置換基（すなわち、一置換による）を有していてもよく、または例えば１〜２個の置換基、もしくは１〜３個の置換基、もしくは１〜４個の置換基を有し得る。例示的なヘテロアルキル置換基には、エステル（−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびカルボニル（−Ｃ（Ｏ）−）が含まれる。
「ヒドロキシアルキル」は、ＨＯ−アルキル基を意味し、アルキルは先に定義されている。好ましいヒドロキシアルキルは、低級アルキルを含有する。適切なヒドロキシアルキル基の非限定的な例には、ヒドロキシメチルおよび２−ヒドロキシエチルが含まれる。
「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物を意味する。
「脂質」は、脂肪酸のエステルを含む有機化合物を意味し、水に不溶であるが多くの有機溶媒には可溶であることにより特徴付けられる。脂質は通常、少なくとも３つのクラス：（１）脂肪および油ならびにワックスを含む「単純脂質」、（２）リン脂質および糖脂質を含む「複合脂質」、ならびに（３）ステロイドなどの「誘導脂質」、に分けられる。
「脂質粒子」は、目的の標的部位（例えば、細胞、組織、臓器など）に治療用核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を送達するために使用することができる脂質製剤を意味する。好ましい実施形態では、脂質粒子は核酸−脂質粒子であり、典型的にはカチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、粒子の凝集を防止するコンジュゲート脂質（例えば、ＰＥＧ−脂質）、および必要に応じてコレステロールから形成される。典型的には、治療用核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、粒子の脂質部分にカプセル化され、それによって酵素的分解から保護し得る。
脂質粒子は、典型的には、３０ｎｍ〜１５０ｎｍ、４０ｎｍ〜１５０ｎｍ、５０ｎｍ〜１５０ｎｍ、６０ｎｍ〜１３０ｎｍ、７０ｎｍ〜１１０ｎｍ、７０ｎｍ〜１００ｎｍ、８０ｎｍ〜１００ｎｍ、９０ｎｍ〜１００ｎｍ、７０〜９０ｎｍ、８０ｎｍ〜９０ｎｍ、７０ｎｍ〜８０ｎｍ、または３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、もしくは１５０ｎｍの平均直径を有し、実質的に非毒性である。さらに、核酸は、本発明の脂質粒子中に存在する場合、ヌクレアーゼによる分解に対して水溶液中で耐性がある。
「溶媒和物」は、本開示の化合物と１つまたは複数の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的会合は、水素結合を含む様々な程度のイオン結合および共有結合的結合を含む。ある特定の場合には、溶媒和物は、例えば１つまたは複数の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に組み込まれている場合、単離することが可能である。「溶媒和物」は、溶液相溶媒和物と単離可能溶媒和物の両方を包含する。適切な溶媒和物の非限定的な例には、エタノレート、メタノレートなどが含まれる。
「カプセル化された脂質」は、完全なカプセル化、部分的なカプセル化、またはその両方を伴うｍＲＮＡなどの治療用核酸を提供する脂質粒子を意味する。好ましい実施形態では、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、脂質粒子に完全にカプセル化されている。
「脂質コンジュゲート」は、脂質粒子の凝集を阻害するコンジュゲート脂質を意味する。そのような脂質コンジュゲートには、例えば、ジアルキルオキシプロピルにカップリングしたＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＡコンジュゲート）、ジアシルグリセロールにカップリングしたＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＧコンジュゲート）、コレステロールにカップリングしたＰＥＧ、ホスファチジルエタノールアミンにカップリングしたＰＥＧ、およびセラミドにコンジュゲートしたＰＥＧ、カチオン性ＰＥＧ脂質、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）−脂質コンジュゲート、ポリアミドオリゴマー、ならびにそれらの混合物などのＰＥＧ−脂質コンジュゲートが含まれるが、これらに限定されない。ＰＥＧまたはＰＯＺは、脂質に直接コンジュゲートすることができるか、またはリンカー部分を介して脂質に連結し得る。例えば、エステル非含有リンカー部分およびエステル含有リンカー部分を含む、ＰＥＧまたはＰＯＺを脂質にカップリングするのに適した任意のリンカー部分を使用することができる。ある特定の好ましい実施形態では、アミドまたはカルバメートなどのエステル非含有リンカー部分が使用される。
「両親媒性脂質」は、脂質物質の疎水性部分が疎水性相に配向し、親水性部分が水相に配向する物質を意味する。親水性の特徴は、炭水化物、ホスフェート、カルボン酸、スルファト、アミノ、スルフヒドリル、ニトロ、ヒドロキシル、および他の類似の基などの極性基または荷電基の存在に由来する。疎水性は、長鎖飽和および不飽和脂肪族炭化水素基、ならびに１つまたは複数の芳香族、脂環式、または複素環式基（複数可）により置換されたそのような基を含むが、これらに限定されない無極性基を含むことによって与えられ得る。両親媒性化合物の例には、リン脂質、アミノ脂質、およびスフィンゴ脂質が含まれるが、これらに限定されない。
リン脂質の代表例には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、およびジリノレオイルホスファチジルコリンが含まれるが、これらに限定されない。スフィンゴ脂質、スフィンゴ糖脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、およびβ−アシルオキシ酸などのリンを欠く他の化合物もまた、両親媒性脂質として指定される群内にある。さらに、上述の両親媒性脂質は、トリグリセリドおよびステロールを含む他の脂質と混合することができる。
「中性脂質」は、選択されたｐＨにおいて、非荷電または中性双性イオン形態のいずれかで存在する脂質種を意味する。生理学的ｐＨにおいて、そのような脂質には、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド、およびジアシルグリセロールが含まれる。
「非カチオン性脂質」は、両親媒性脂質または中性脂質もしくはアニオン性脂質を意味し、以下により詳細に記載される。
「アニオン性脂質」は、生理学的ｐＨにおいて、負に荷電している脂質を意味する。これらの脂質には、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、および中性脂質に繋がれている他のアニオン性修飾基が含まれるが、これらに限定されない。
「疎水性脂質」は、長鎖飽和および不飽和脂肪族炭化水素基、ならびに１つまたは複数の芳香族、脂環式、または複素環式基（複数可）により必要に応じて置換されたそのような基を含むが、これらに限定されない無極性基を有する化合物を意味する。適切な例には、ジアシルグリセロール、ジアルキルグリセロール、Ｎ−Ｎ−ジアルキルアミノ、１，２−ジアシルオキシ−３−アミノプロパン、および１，２−ジアルキル−３−アミノプロパンが含まれるが、これらに限定されない。
「カチオン性脂質」および「アミノ脂質」は交換可能に使用され、１、２、３、またはそれよりも多い脂肪酸または脂肪アルキル鎖、およびｐＨ滴定可能なアミノ頭部基（例えば、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ頭部基）を有する脂質およびその塩を意味する。カチオン性脂質は、典型的には、カチオン性脂質のｐＫａ未満のｐＨにおいてプロトン化（すなわち、正に荷電）され、ｐＫａを超えるｐＨにおいて実質的に中性である。本発明のカチオン性脂質はまた、滴定可能なカチオン性脂質とも称される。一部の実施形態では、カチオン性脂質は：プロトン化可能な第３級アミン（例えば、ｐＨ滴定可能）頭部基；各アルキル鎖が独立して０〜３つ（例えば、０、１、２、または３つ）の二重結合を有するＣ１８アルキル鎖；および、頭部基とアルキル鎖との間のエーテル、エステル、またはケタール連結を含む。そのようなカチオン性脂質には、ＤＳＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｅｎＤＭＡ、γ−ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ２−ＤＭＡ（ＤＬｉｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ＸＴＣ２、およびＣ２Ｋとしても公知）、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ４−ＤＭＡ、ＤＬｅｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ｙ−ＤＬｅｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ２−ＤＭＡ（ＭＣ２としても知られる）、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ３−ＤＭＡ（ＭＣ３としても公知）、および（ＤＬｉｎ−ＭＰ−ＤＭＡ）（１−Ｂｌ １としても公知）が含まれるが、これらに限定されない。
「置換された」は、水素以外の特定の基、または同一でも異なっていてもよい、例えばそれぞれ独立して選択される、１個または複数の基、部分、またはラジカルでの置換を意味する。
「アンチセンス核酸」は、ＲＮＡ−ＲＮＡまたはＲＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ−ＰＮＡ（タンパク質核酸；Egholmら、１９９３年、Nature、３６５巻、５６６頁）相互作用によって標的ＲＮＡに結合し、標的ＲＮＡの活性を改変する（総説として、SteinおよびCheng、１９９３年、Science、２６１巻、１００４頁、ならびにWoolfら、米国特許第５，８４９，９０２号を参照されたい）非酵素的核酸分子を意味する。典型的には、アンチセンス分子は、アンチセンス分子の単一の連続配列に沿って標的配列と相補的である。しかしながら、ある特定の実施形態では、アンチセンス分子は、基質分子がループを形成するように基質に結合することができ、および／またはアンチセンス分子は、アンチセンス分子がループを形成するように結合することができる。したがって、アンチセンス分子は、２つ（またはさらにそれよりも多く）の非連続基質配列に相補的であり得るか、またはアンチセンス分子の２つ（またはさらにそれよりも多く）の非連続配列部分は、標的配列に相補的であり得るか、またはその両方であり得る。さらに、アンチセンスＤＮＡは、ＤＮＡ−ＲＮＡ相互作用によってＲＮＡを標的化するために使用され得、それによって、二重鎖である標的ＲＮＡを消化するＲＮａｓｅ Ｈを活性化する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡのＲＮＡｓｅ Ｈ切断を活性化することが可能である１つまたは複数のＲＮＡｓｅ Ｈ活性化領域を含み得る。アンチセンスＤＮＡは化学的に合成する、または一本鎖ＤＮＡ発現ベクターもしくはその等価物の使用によって発現させることができる。「アンチセンスＲＮＡ」は、標的遺伝子のｍＲＮＡに結合することによってＲＮＡｉを誘導することができる、標的遺伝子のｍＲＮＡに相補的な配列を有するＲＮＡ鎖である。「アンチセンスＲＮＡ」は、標的遺伝子のｍＲＮＡに相補的な配列を有し、標的遺伝子のｍＲＮＡに結合することによってＲＮＡｉを誘導すると考えられているＲＮＡ鎖である。「センスＲＮＡ」は、アンチセンスＲＮＡに相補的な配列を有し、その相補的なアンチセンスＲＮＡにアニールされてｉＮＡを形成する。これらのアンチセンスおよびセンスＲＮＡは、従来、ＲＮＡ合成機で合成されてきた。
「核酸」は、一本鎖または二本鎖の形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーを意味する。用語は、合成、天然に存在する、および天然に存在しない、公知のヌクレオチド類似体または修飾骨格残基または連結を含有する核酸を包含し、これらは参照核酸と同様の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと同様の様式で代謝される。そのような類似体の例には、非制限的に、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が含まれる。
「ＲＮＡ」は、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」は、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分精製ＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え産生されたＲＮＡ、ならびに１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／または改変によって天然に存在するＲＮＡと異なる改変ＲＮＡを含む。そのような改変は、例えば、干渉性ＲＮＡの末端（複数可）への、または内部的に、例えばＲＮＡの１つまたは複数のヌクレオチドでの、非ヌクレオチド物質の付加を含み得る。本発明のＲＮＡ分子中のヌクレオチドはまた、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。これらの改変ＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と呼ぶことができる。本明細書中で使用される場合、「リボ核酸」および「ＲＮＡ」という用語は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｍＲＮＡ、非コードＲＮＡ、および多価ＲＮＡを含む、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含有する分子を指す。リボヌクレオチドは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドである。これらの用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分精製ＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え産生されたＲＮＡ、ならびに１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換、修飾、改変によって天然に存在するＲＮＡと異なる修飾ＲＮＡおよび改変ＲＮＡを含む。ＲＮＡの改変は、例えば、干渉性ＲＮＡの末端（複数可）への、または内部的な、例えばＲＮＡ分子中のＲＮＡヌクレオチドの１つまたは複数のヌクレオチドでの、非ヌクレオチド物質の付加を含み、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。これらの改変ＲＮＡは、類似体と呼ぶことができる。
「ヌクレオチド」は、当該技術分野において周知の天然塩基（標準）および修飾塩基を意味する。そのような塩基は一般に、ヌクレオチド糖部分の１’位に位置する。ヌクレオチドは一般に、塩基、糖、およびリン酸基を含む。ヌクレオチドは、糖、ホスフェート、および／または塩基部分（ヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどとも交換可能に呼ばれる、例えば、全てが本明細書での参照により本明細書に組み込まれる、UsmanおよびMcSwiggen、前出；Ecksteinら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０７０６５号；Usmanら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１５１８７号；UhlmanおよびPeyman、前出を参照されたい）において修飾されないかまたは修飾することができる。Limbachら、Nucleic Acids Res.、２２巻、２１８３頁、１９９４年によって要約されているように、当該技術分野において公知の修飾核酸塩基のいくつかの例がある。核酸分子に導入することができる塩基修飾の非限定的な例の一部には：イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）、または６−アザピリミジン、または６−アルキルピリミジン（例えば６−メチルウリジン）、プロピン、および他のもの（Burginら、Biochemistry、３５巻：１４０９０頁、１９９６年；UhlmanおよびPeyman、前出）が含まれる。この態様における「修飾塩基」は、１’位にあるアデニン、グアニン、シトシン、およびウラシル以外のヌクレオチド塩基またはそれらの等価物を意味する。
「相補的ヌクレオチド塩基」は、互いに水素結合を形成する一対のヌクレオチド塩基を意味する。アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）またはＲＮＡ中のウラシル（Ｕ）と対形成し、グアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と対形成する。核酸の相補的セグメントまたは鎖は、互いにハイブリダイズする（すなわち、水素結合により繋がれる）。「相補的」は、伝統的なワトソン−クリックまたは他の非伝統的な結合モードのいずれかによって、核酸が別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成できることを意味する。
「マイクロＲＮＡ」（ｍｉＲＮＡ）は、遺伝子発現を調節する２１〜２３ヌクレオチド長の一本鎖ＲＮＡ分子を意味する。ｍｉＲＮＡは、ＤＮＡから転写されるがタンパク質に翻訳されない遺伝子によってコードされ（非コードＲＮＡ）；その代わりに、それらは、プリｍｉＲＮＡとして公知の一次転写物からプレｍｉＲＮＡと呼ばれる短いステムループ構造へ、そして最後に機能的ｍｉＲＮＡへとプロセシングされる。成熟ｍｉＲＮＡ分子は、１つまたは複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子と部分的に相補的であり、その主な機能は遺伝子発現を下方制御することである。
「低分子干渉（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）」および「低分子干渉（ｓｈｏｒｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）ＲＮＡ」および「サイレンシングＲＮＡ」は、１６〜４０ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ分子のクラスを意味し、生物学において様々な役割を果たす。最も注目すべきことに、ｓｉＲＮＡは、それが特定の遺伝子の発現と干渉するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与している。ＲＮＡｉ経路におけるそれらの役割に加えて、ｓｉＲＮＡはまた、例えば抗ウイルス機構としてのＲＮＡｉ関連経路において、またはゲノムのクロマチン構造を形作る上でも作用するが、これらの経路の複雑さは今になってやっと解明されつつある。
「ＲＮＡｉ」は、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって制御され、触媒ＲＩＳＣ構成成分アルゴノートと相互作用する細胞内の短い二本鎖ＲＮＡ分子によって開始されるＲＮＡ依存性遺伝子サイレンシングプロセスを意味する。二本鎖ＲＮＡまたはＲＮＡ様ｉＮＡまたはｓｉＲＮＡが外因性（ＲＮＡゲノムを有するウイルスによる感染、またはトランスフェクトされたｉＮＡもしくはｓｉＲＮＡに由来する）である場合、ＲＮＡまたはｉＮＡは細胞質に直接移入され、酵素ｄｉｃｅｒによって短い断片に切断される。開始ｄｓＲＮＡはまた、ゲノム中のＲＮＡコード遺伝子から発現するプレマイクロＲＮＡの場合のように、内因性（細胞に由来する）であり得る。そのような遺伝子からの一次転写物は、最初に核内でプレｍｉＲＮＡの特徴的なステムループ構造を形成するようにプロセシングされ、次いで細胞質に輸送されてｄｉｃｅｒによって切断される。したがって、外因性および内因性の２つのｄｓＲＮＡ経路は、ＲＩＳＣ複合体に集中する。ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）の活性構成成分は、アルゴノートタンパク質と呼ばれるエンドヌクレアーゼであり、これはそれらの結合したｓｉＲＮＡまたはｉＮＡに相補的な標的ｍＲＮＡ鎖を切断する。ｄｉｃｅｒによって産生される断片は二本鎖であるので、それらは理論的にはそれぞれ機能的なｓｉＲＮＡまたはｉＮＡを産生することができる。しかしながら、ガイド鎖として知られている２本の鎖のうち１本だけがアルゴノートタンパク質に結合し、遺伝子サイレンシングを導く。他のアンチガイド鎖またはパッセンジャー鎖は、ＲＩＳＣ活性化中に分解される。
式Ｉの化合物
本明細書中の式Ｉの化合物への言及は、他に示さない限り、その塩への言及を含むと理解される。本明細書で用いられる場合、「塩（複数可）」という用語は、無機および／または有機酸と形成された酸性塩、ならびに無機および／または有機塩基と形成された塩基性塩を意味する。さらに、式Ｉの化合物が、ピリジンまたはイミダゾールなどであるがこれらに限定されない塩基性部分と、カルボン酸などであるがこれらに限定されない酸性部分との両方を含有する場合、双性イオン（「分子内塩」）が形成され得、本明細書で使用される場合、「塩（複数可）」という用語内に含まれる。塩は薬学的に許容される（すなわち、非毒性の、生理学的に許容される）塩であり得るが、他の塩もまた有用である。式Ｉの化合物の塩は、例えば、式Ｉの化合物を、塩が沈殿するような媒体中で、または水性媒体中で、当量などの量の酸または塩基と反応させた後、凍結乾燥することによって形成することができる。
例示的な酸付加塩（acid addition salt）には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩（本明細書に記載されたものなど）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシレートとしても公知）、ウンデカン酸塩などが含まれる。さらに、塩基性医薬化合物から薬学的に有用な塩を形成するのに適していると一般に考えられている酸が、例えば、S. Bergeら、J. Pharmaceutical Sciences（１９７７年）６６巻（１号）１〜１９頁；P. Gould、International J. Pharmaceutics（１９８６年）３３巻、２０１〜２１７頁；Andersonら、The Practice of Medicinal Chemistry（１９９６年）、Academic Press、New Yorkにより；およびThe Orange Book（Food & Drug Administration、Washington、D.C.、ウェブサイト上にて）で論じられている。これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
例示的な塩基性塩には、アンモニウム塩；ナトリウム塩、リチウム塩、およびカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩およびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ベンザチン、ジシクロヘキシルアミン、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ−ビス（デヒドロアビエチル）エチレンジアミンと形成される）、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミド、ｔ−ブチルアミンなどの有機塩基との塩（例えば有機アミン）；ならびにアルギニンまたはリシンなどのアミノ酸との塩が含まれる。塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル）、硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、ジアミル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル）、ハロゲン化アリールアルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）、およびその他などの作用物質で四級化することができる。
全てのそのような酸および塩基の塩は、本開示の範囲内の薬学的に許容される塩であることが意図され、本開示の目的では、全ての酸および塩基の塩は対応する式Ｉの化合物の遊離形態と同等であるとみなされる。
式Ｉの化合物は、水和形態を含む非溶媒和形態および溶媒和形態で存在し得る。一般に、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態は、本開示の目的では、非溶媒和形態と同等である。
式Ｉの化合物およびその塩、溶媒和物は、それらの互変異性型で（例えば、アミドまたはイミノエーテルとして）存在し得る。全てのそのような互変異性型は、本開示の一部として本明細書中で企図される。
本開示の化合物の多形体もまた本開示の範囲内である（すなわち、式Ｉの化合物の多形体は本開示の範囲内である）。
エナンチオマー型（不斉炭素の非存在下でも存在し得る）、回転異性体型、アトロプ異性体、およびジアステレオマー型を含む、様々な置換基上の不斉炭素のために存在し得るものなどの、本化合物の全ての立体異性体（例えば、幾何異性体、光学異性体など）（化合物の塩、溶媒和物、およびプロドラッグのもの、ならびにプロドラッグの塩および溶媒和物を含む）は、本開示の範囲内であると企図される。本開示の化合物の個々の立体異性体は、例えば、他の異性体を実質的に含まないか、あるいは例えばラセミ体として、または他の全てのもしくは他の選択された立体異性体と混ぜられ得る。本明細書中の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ １９７４ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓによって定義されるようにＳまたはＲ配置を有することができる。「塩」、「溶媒和物」などの用語の使用は、開示された化合物のエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ラセミ体、またはプロドラッグの塩および溶媒和物に等しく適用されることを意図している。
化学療法剤（抗新生物剤）として使用できる化合物のクラスには、アルキル化剤、代謝拮抗剤、天然物およびそれらの誘導体、ホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）、ならびに合成物が含まれる。これらのクラス内の化合物の例を以下に挙げる。
脂質粒子
式Ｉの化合物は、ナノ粒子または脂質分子の二重層を含む脂質組成物中に、その薬学的に許容される塩を含む。脂質二重層は、好ましくは、中性脂質またはポリマーをさらに含む。脂質組成物は、好ましくは、液体媒体を含む。組成物は、好ましくは核酸をさらにカプセル化する。核酸は、好ましくは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を利用して標的遺伝子の発現を抑制する活性を有する。脂質組成物は、好ましくは、核酸および中性脂質またはポリマーをさらに含む。脂質組成物は、好ましくは核酸をカプセル化する。
記載は、脂質粒子内にカプセル化された１つまたは複数の治療用ｍＲＮＡ分子を含む脂質粒子を提供する。
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、脂質粒子中のｍＲＮＡがヌクレアーゼ分解に対して水溶液中で耐性があるように、脂質粒子の脂質部分内に完全にカプセル化されている。他の実施形態では、本明細書に記載される脂質粒子は、ヒトなどの哺乳動物に対して実質的に非毒性である。脂質粒子は、典型的には、３０ｎｍ〜１５０ｎｍ、４０ｎｍ〜１５０ｎｍ、５０ｎｍ〜１５０ｎｍ、６０ｎｍ〜１３０ｎｍ、７０ｎｍ〜１１０ｎｍ、または７０〜９０ｎｍの平均直径を有する。本発明の脂質粒子はまた、典型的には、１：１〜１００：１、１：１〜５０：１、２：１〜２５：１、３：１〜２０：１、５：１〜１５：１、または５：１〜１０：１、または１０：１〜１４：１、または９：１〜２０：１の脂質：ＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。一実施形態では、脂質粒子は、１２：１の脂質：ＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。別の実施形態では、脂質粒子は、１３：１の脂質：ｍＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。
好ましい実施形態では、脂質粒子は、ｍＲＮＡ、カチオン性脂質（例えば、本明細書に記載される１つまたは複数のカチオン性脂質またはその塩）、リン脂質、および粒子の凝集を阻害するコンジュゲート脂質（例えば、１つまたは複数のＰＥＧ−脂質コンジュゲート）を含む。脂質粒子はコレステロールも含み得る。脂質粒子は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれよりも多い、１つまたは複数のポリペプチドを発現するｍＲＮＡを含み得る。
核酸−脂質粒子において、ｍＲＮＡは粒子の脂質部分内に完全にカプセル化され得、それによって核酸をヌクレアーゼ分解から保護する。好ましい実施形態では、ｍＲＮＡを含む脂質粒子は、粒子の脂質部分内に完全にカプセル化され、それによって核酸をヌクレアーゼ分解から保護する。ある特定の例では、脂質粒子中のｍＲＮＡは、粒子をヌクレアーゼに３７℃で少なくとも２０、３０、４５、または６０分間曝露した後、実質的に分解されない。ある特定の他の例では、脂質粒子中のｍＲＮＡは、３７℃で少なくとも３０、４５、もしくは６０分間、または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、もしくは３６時間、血清中で粒子をインキュベートした後、実質的に分解されない。他の実施形態では、ｍＲＮＡは粒子の脂質部分と複合体を形成している。本発明の製剤の利点の１つは、核酸−脂質粒子組成物が、ヒトなどの哺乳動物に対して実質的に非毒性であるということである。
「完全にカプセル化された」は、核酸−脂質粒子中の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）が、血清への曝露または遊離ＲＮＡを顕著に分解するであろうヌクレアーゼアッセイ後に、顕著に分解されないことを意味する。完全にカプセル化される場合、通常は１００％の遊離核酸を分解するであろう処理において、好ましくは２５％未満の粒子中の核酸、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満の粒子中の核酸が分解される。「完全にカプセル化された」はまた、ｉｎ ｖｉｖｏ投与時に核酸−脂質粒子がそれらの構成成分部分に急速に分解しないことを意味する。
核酸の文脈では、完全なカプセル化は、核酸と会合したときに蛍光を増強する色素を使用する膜不透過性蛍光色素排除アッセイを実施することによって決定することができる。カプセル化は、色素をリポソーム製剤に添加し、得られた蛍光を測定し、そしてそれを少量の非イオン性洗浄剤の添加時に観察された蛍光と比較することにより決定される。リポソーム二重層の洗浄剤媒介性破壊は、カプセル化された核酸を放出し、それが膜不透過性色素と相互作用することを可能にする。核酸カプセル化は、Ｅ＝（Ｉ０−Ｉ）／Ｉ０として計算することができ、Ｉ０は、洗浄剤の添加前後の蛍光強度を指す。
他の実施形態では、本発明は、複数の核酸−脂質粒子を含む核酸−脂質粒子組成物を提供する。
脂質粒子は、粒子の脂質部分内に完全にカプセル化されたｍＲＮＡを含み、その結果、３０％〜１００％、４０％〜１００％、５０％〜１００％、６０％〜１００％、７０％〜１００％、８０％〜１００％、９０％〜１００％、３０％〜９５％、４０％〜９５％、５０％〜９５％、６０％〜９５％、７０％〜９５％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、３０％〜９０％、４０％〜９０％、５０％〜９０％、６０％〜９０％、７０％〜９０％、８０％〜９０％、または少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％（またはその任意の割合もしくはその範囲）の粒子が、その中にカプセル化されたｍＲＮＡを有する。
脂質粒子の意図される使用に応じて、構成成分の割合を変えることができ、特定の製剤の送達効率は、当該技術分野において公知のアッセイを使用して測定することができる。
カチオン性脂質
記載は、ある特定のカチオン性脂質化合物の合成を含む。化合物は、後続のセクションに示されるように、ポリヌクレオチドを細胞および組織に送達するのに特に適している。本明細書に記載されるリポ大環状化合物は、他の目的、ならびに例えばレシピエントおよび添加剤のために使用され得る。
カチオン性脂質化合物の合成方法は、当該技術分野の技術によって合成することができる。当業者であれば、これらの化合物を産生するための、および記載の他の化合物も産生するための他の方法を認識するであろう。
カチオン性脂質化合物は、微粒子、ナノ粒子、リポソーム、またはミセルを形成するための作用物質と組み合わせることができる。粒子、リポソーム、またはミセルによって送達される作用物質は、気体、液体、または固体の形態であり得、作用物質は、ポリヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、または小分子であり得る。リポ大環状化合物を、他のカチオン性脂質化合物、ポリマー（合成または天然）、界面活性剤、コレステロール、炭水化物、タンパク質、または脂質と組み合わせて粒子を形成し得る。次いでこれらの粒子は、必要に応じて薬学的賦形剤と組み合わせて医薬組成物を形成することができる。
本明細書は、新規なカチオン性脂質化合物およびそのようなカチオン性脂質化合物の使用に基づく薬物送達システムを提供する。システムは、ポリヌクレオチド、タンパク質、小分子、ペプチド、抗原、または薬物を患者、組織、臓器、または細胞に送達するために薬学的／薬物送達分野で使用され得る。これらの新規な化合物はまた、コーティング用の物質、添加剤、賦形剤、物質、または生物工学としても使用され得る。
本明細書のカチオン性脂質化合物は、薬物送達分野におけるいくつかの異なる使用を提供する。カチオン性脂質化合物のアミン含有部分は、ポリヌクレオチドを複合体化し、それによってポリヌクレオチドの送達を増強し、それらの分解を防止するために使用され得る。カチオン性脂質化合物はまた、送達される作用物質を含有するピコ粒子、ナノ粒子、微粒子、リポソーム、およびミセルの形成において使用され得る。好ましくは、カチオン性脂質化合物は生体適合性かつ生分解性であり、形成された粒子もまた生分解性かつ生体適合性であり、送達される作用物質の制御された持続放出を提供するために使用され得る。これらの粒子およびそれらの対応する粒子はまた、これらがより低いｐＨでプロトン化されていることを考慮すると、ｐＨ変化に応答し得る。それらはまた、エンドソーム溶解を引き起こすための作用物質の細胞への送達においてプロトンスポンジ（proton sponge）として作用し得る。
ある特定の実施形態では、カチオン性脂質化合物は比較的細胞非傷害性である。カチオン性脂質化合物は、生体適合性かつ生分解性であり得る。カチオン性脂質は、約５．５〜約７．５、より好ましくは約６．０〜約７．０の間の範囲のｐＫａを有し得る。それは、約３．０〜約９．０の間、または約５．０〜約８．０の間の所望のｐＫａを有するように設計され得る。本明細書に記載されるカチオン性脂質化合物は、いくつかの理由で薬物送達に特に魅力的である：それらは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、他のポリヌクレオチド、および他の負荷電の作用物質と相互作用するため、ｐＨを緩衝するため、内部浸透圧溶解（endo-osmolysis）を引き起こすため、送達される作用物質を保護するためのアミノ基を含有する；それらは市販の出発物質から合成することができる；かつ／または、それらはｐＨ応答性であり、所望のｐＫａで操作することができる。
中性ヘルパー脂質
非カチオン性脂質の非限定的な例には、リン脂質、例えば、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、セレブロシド、ジセチルホスフェート、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジエライドイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ステアロイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、リゾホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、およびそれらの混合物が含まれる。他のジアシルホスファチジルコリンおよびジアシルホスファチジルエタノールアミンリン脂質もまた使用され得る。これらの脂質中のアシル基は、好ましくはＣ１０〜Ｃ２４炭素鎖を有する脂肪酸から誘導されたアシル基、例えば、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、またはオレオイルである。
非カチオン性脂質のさらなる例には、コレステロールおよびその誘導体などのステロールが含まれる。コレステロール誘導体の非限定的な例には、５α−コレスタノール、５α−コプロスタノール、コレステリル−（２’−ヒドロキシ）−エチルエーテル、コレステリル−（４’−ヒドロキシ）−ブチルエーテル、および６−ケトコレスタノールなどの極性類似体；５α−コレスタン、コレステノン、５α−コレスタノン、５α−コレスタノン、およびコレステリルデカノエートなどの非極性類似体；ならびにそれらの混合物が含まれる。好ましい実施形態では、コレステロール誘導体は、コレステリル−（４’−ヒドロキシ）−ブチルエーテルなどの極性類似体である。
一部の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、１つもしくは複数のリン脂質およびコレステロールまたはその誘導体の混合物を含むかまたはそれからなる。他の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、１つまたは複数のリン脂質、例えば、コレステロールを含まない脂質粒子製剤を含むかまたはそれからなる。さらに他の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、コレステロールまたはその誘導体、例えばリン脂質を含まない脂質粒子製剤を含むかまたはそれからなる。
非カチオン性脂質の他の例には、非リン含有脂質、例えば、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、アセチルパルミテート、グリセロールリシノレート、ヘキサデシルステアレート、イソプロピルミリステート、両性アクリルポリマー、トリエタノールアミン−ラウリルサルフェート、アルキル−アリールサルフェートポリエチルオキシ化脂肪酸アミド（ａｌｋｙｌ−ａｒｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｏｘｙｌａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ａｍｉｄｅ）、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド、セラミド、およびスフィンゴミエリンなどが含まれる。
一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、粒子中に存在する全脂質の、１０モル％〜６０モル％、２０モル％〜５５モル％、２０モル％〜４５モル％、２０モル％〜４０モル％、２５モル％〜５０モル％、２５モル％〜４５モル％、３０モル％〜５０モル％、３０モル％〜４５モル％、３０モル％〜４０モル％、３５モル％〜４５モル％、３７モル％〜４２モル％、または３５モル％、３６モル％、３７モル％、３８モル％、３９モル％、４０モル％、４１モル％、４２モル％、４３モル％、４４モル％、もしくは４５モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
脂質粒子がリン脂質およびコレステロールまたはコレステロール誘導体の混合物を含有する実施形態では、混合物は、粒子中に存在する全脂質の、最大４０モル％、４５モル％、５０モル％、５５モル％、または６０モル％を構成し得る。
一部の実施形態では、混合物中のリン脂質構成成分は、粒子中に存在する全脂質の、２モル％〜２０モル％、２モル％〜１５モル％、２モル％〜１２モル％、４モル％〜１５モル％、または４モル％〜１０モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成し得る。ある特定の好ましい実施形態では、混合物中のリン脂質構成成分は、粒子中に存在する全脂質の、５モル％〜１０モル％、５モル％〜９モル％、５モル％〜８モル％、６モル％〜９モル％、６モル％〜８モル％、または５モル％、６モル％、７モル％、８モル％、９モル％、もしくは１０モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
他の実施形態では、混合物中のコレステロール構成成分は、粒子中に存在する全脂質の、２５モル％〜４５モル％、２５モル％〜４０モル％、３０モル％〜４５モル％、３０モル％〜４０モル％、２７モル％〜３７モル％、２５モル％〜３０モル％、または３５モル％〜４０モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成し得る。ある特定の好ましい実施形態では、混合物中のコレステロール構成成分は、粒子中に存在する全脂質の、２５モル％〜３５モル％、２７モル％〜３５モル％、２９モル％〜３５モル％、３０モル％〜３５モル％、３０モル％〜３４モル％、３１モル％〜３３モル％、または３０モル％、３１モル％、３２モル％、３３モル％、３４モル％、もしくは３５モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
脂質粒子が、リン脂質を含まない実施形態では、コレステロールまたはその誘導体は、粒子中に存在する全脂質の、最大２５モル％、３０モル％、３５モル％、４０モル％、４５モル％、５０モル％、５５モル％、または６０モル％を構成し得る。
一部の実施形態では、リン脂質を含まない脂質粒子製剤中のコレステロールまたはその誘導体は、粒子中に存在する全脂質の、２５モル％〜４５モル％、２５モル％〜４０モル％、３０モル％〜４５モル％、３０モル％〜４０モル％、３１モル％〜３９モル％、３２モル％〜３８モル％、３３モル％〜３７モル％、３５モル％〜４５モル％、３０モル％〜３５モル％、３５モル％〜４０モル％、または３０モル％、３１モル％、３２モル％、３３モル％、３４モル％、３５モル％、３６モル％、３７モル％、３８モル％、３９モル％、もしくは４０モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成し得る。
他の実施形態では、非カチオン性脂質は、粒子中に存在する全脂質の、５モル％〜９０モル％、１０モル％〜８５モル％、２０モル％〜８０モル％、１０モル％（例えば、リン脂質のみ）、または６０モル％（例えば、リン脂質およびコレステロールまたはその誘導体）（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質の百分率は目標量であり、製剤中に存在する非カチオン性脂質の実際の量は、例えば±５モル％で変動し得る。
カチオン性脂質化合物を含有する組成物は、３０〜７０％のカチオン性脂質化合物、０〜６０％のコレステロール、０〜３０％のリン脂質、および１〜１０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。好ましくは、組成物は、３０〜４０％のカチオン性脂質化合物、４０〜５０％のコレステロール、および１０〜２０％のＰＥＧである。他の好ましい実施形態では、組成物は、５０〜７５％のカチオン性脂質化合物、２０〜４０％のコレステロール、および５〜１０％のリン脂質、および１〜１０％のＰＥＧである。組成物は、６０〜７０％のカチオン性脂質化合物、２５〜３５％のコレステロール、および５〜１０％のＰＥＧを含有し得る。組成物は、最大９０％のカチオン性脂質化合物および２〜１５％のヘルパー脂質（helper lipid）を含有し得る。
製剤は脂質粒子製剤であり得、例えば、８〜３０％の化合物、５〜３０％のヘルパー脂質、および０〜２０％のコレステロール；４〜２５％のカチオン性脂質、４〜２５％のヘルパー脂質、２〜２５％のコレステロール、１０〜３５％のコレステロール−ＰＥＧ、および５％のコレステロール−アミン；または、２〜３０％のカチオン性脂質、２〜３０％のヘルパー脂質、１〜１５％のコレステロール、２〜３５％のコレステロール−ＰＥＧ、および１〜２０％のコレステロール−アミン；または、最大９０％のカチオン性脂質、および２〜１０％のヘルパー脂質、もしくは１００％でさえもあるカチオン性脂質を含有する。
脂質コンジュゲート
カチオン性に加えて、本明細書に記載される脂質粒子は、脂質コンジュゲートをさらに含み得る。コンジュゲート脂質は、粒子の凝集を防止するという点で有用である。適切なコンジュゲート脂質には、ＰＥＧ−脂質コンジュゲート、カチオン性ポリマー−脂質コンジュゲート、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
好ましい実施形態では、脂質コンジュゲートはＰＥＧ−脂質である。ＰＥＧ−脂質の例には、ジアルキルオキシプロピルにカップリングしたＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＡ）、ジアシルグリセロールにカップリングしたＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ホスファチジルエタノールアミンなどのリン脂質にカップリングしたＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）、セラミドにコンジュゲートしたＰＥＧ、コレステロールまたはその誘導体にコンジュゲートしたＰＥＧ、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
ＰＥＧは、２つの末端ヒドロキシル基を有するエチレンＰＥＧ繰り返し単位の直鎖状の水溶性ポリマーである。ＰＥＧはそれらの分子量によって分類され、以下を含む：モノメトキシポリエチレングリコール（ＭｅＰＥＧ−ＯＨ）、モノメトキシポリエチレングリコール−スクシネート（ＭｅＰＥＧ−Ｓ）、モノメトキシポリエチレングリコール−スクシンイミジルスクシネート（ＭｅＰＥＧ−Ｓ−ＮＨＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール−アミン（ＭｅＰＥＧ−ＮＨ２）、モノメトキシポリエチレングリコール−トレシレート（ＭｅＰＥＧ−ＴＲＥＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール−イミダゾリル−カルボニル（ＭｅＰＥＧ−ＩＭ）、および末端メトキシ基の代わりに末端ヒドロキシル基を含有するそのような化合物（例えば、ＨＯ−ＰＥＧ−Ｓ、ＨＯ−ＰＥＧ−Ｓ−ＮＨＳ、ＨＯ−ＰＥＧ−ＮＨ２）。
本明細書に記載されるＰＥＧ−脂質コンジュゲートのＰＥＧ部分は、５５０ダルトン〜１０，０００ダルトンの範囲の平均分子量を含み得る。ある特定の例では、ＰＥＧ部分は、７５０ダルトン〜５，０００ダルトン（例えば、１，０００ダルトン〜５，０００ダルトン、１，５００ダルトン〜３，０００ダルトン、７５０ダルトン〜３，０００ダルトン、７５０ダルトン〜２，０００ダルトン）の平均分子量を有する。好ましい実施形態では、ＰＥＧ部分は、２，０００ダルトンまたは７５０ダルトンの平均分子量を有する。
ある特定の例では、ＰＥＧは、アルキル、アルコキシ、アシル、またはアリール基により必要に応じて置換され得る。ＰＥＧは、脂質に直接コンジュゲートすることができるか、またはリンカー部分を介して脂質に連結することができる。例えば、エステル非含有リンカー部分およびエステル含有リンカー部分を含む、ＰＥＧを脂質にカップリングするのに適した任意のリンカー部分を使用することができる。好ましい実施形態では、リンカー部分は、エステル非含有リンカー部分である。適切なエステル非含有リンカーには、アミド（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、アミノ（−ＮＲ−）、カルボニル（−Ｃ（Ｏ）−）、カルバメート（−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−）、尿素（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）、ジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）、エーテル（−０−）、スクシニル（−（０）ＣＣＨ２ＣＨ２Ｃ（０）−）、スクシンアミジル（−ＮＨＣ（０）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（０）ＮＨ−）、エーテル、ジスルフィド、およびそれらの組み合わせ（カルバメートリンカー部分とアミドリンカー部分の両方を含有するリンカーなど）が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、カルバメートリンカーを使用してＰＥＧを脂質にカップリングする。
他の実施形態では、エステル含有リンカー部分を使用してＰＥＧを脂質にカップリングする。適切なエステル含有リンカー部分には、例えば、カーボネート（−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−）、スクシノイル、リン酸エステル（−Ｏ−（Ｏ）ＰＯＨ−Ｏ−）、スルホン酸エステル、およびそれらの組み合わせが含まれる。
様々な鎖長および飽和度の様々なアシル鎖基を有するホスファチジルエタノールアミンを、ＰＥＧにコンジュゲートして脂質コンジュゲートを形成することができる。そのようなホスファチジルエタノールアミンは市販されているか、または当業者に公知の従来の技術を使用して単離もしくは合成することができる。Ｃ１０〜Ｃ２０の範囲の炭素鎖長を有する飽和または不飽和脂肪酸を含有するホスファチジルエタノールアミンが好ましい。モノ−またはジ−不飽和脂肪酸、ならびに飽和および不飽和脂肪酸の混合物を有するホスファチジルエタノールアミンもまた使用することができる。適切なホスファチジルエタノールアミンには、ジミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
「ジアシルグリセロール」または「ＤＡＧ」という用語は、両方ともエステル連結によってグリセロールの１位および２位に結合した２〜３０個の間の炭素を独立して有する、２つの脂肪アシル鎖、Ｒ１およびＲ２を有する化合物を含む。アシル基は飽和していても、様々な不飽和度を有していてもよい。適切なアシル基には、ラウロイル（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）、ステアロイル（Ｃ１８）、およびイコソイル（Ｃ２０）が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ２は同一であり、すなわち、Ｒ１およびＲ２は、両方ともミリストイルであり（すなわち、ジミリストイル）、Ｒ１およびＲ２は、両方ともステアロイルである（すなわち、ジステアロイル）。
「ジアルキルオキシプロピル」または「ＤＡＡ」という用語は、２つのアルキル鎖、ＲおよびＲを有し、それらは両方とも独立して２〜３０個の間の炭素を有する化合物を含む。アルキル基は飽和していても、様々な不飽和度を有していてもよい。
好ましくは、ＰＥＧ−ＤＡＡコンジュゲートは、ＰＥＧ−ジデシルオキシプロピル（Ｃ１０）コンジュゲート、ＰＥＧ−ジラウリルオキシプロピル（Ｃ１２）コンジュゲート、ＰＥＧ−ジミリスチルオキシプロピル（Ｃ１４）コンジュゲート、ＰＥＧ−ジパルミチルオキシプロピル（Ｃ１６）コンジュゲート、またはＰＥＧ−ジステアリルオキシプロピル（Ｃ１８）コンジュゲートである。これらの実施形態では、ＰＥＧは、好ましくは７５０または２，０００ダルトンの平均分子量を有する。特定の実施形態では、ＰＥＧの末端ヒドロキシル基は、メチル基で置換されている。
上述に加えて、他の親水性ポリマーを、ＰＥＧの代わりに使用することができる。ＰＥＧの代わりに使用できる適切なポリマーの例には、ポリビニルピロリドン、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、およびポリジメチルアクリルアミド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ならびにヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロースが含まれるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の、０．１モル％〜２モル％、０．５モル％〜２モル％、１モル％〜２モル％、０．６モル％〜１．９モル％、０．７モル％〜１．８モル％、０．８モル％〜１．７モル％、０．９モル％〜１．６モル％、０．９モル％〜１．８モル％、１モル％〜１．８モル％、１モル％〜１．７モル％、１．２モル％〜１．８モル％、１．２モル％〜１．７モル％、１．３モル％〜１．６モル％、または１．４モル％〜１．５モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。他の実施形態では、脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の、０モル％〜２０モル％、０．５モル％〜２０モル％、２モル％〜２０モル％、１．５モル％〜１８モル％、２モル％〜１５モル％、４モル％〜１５モル％、２モル％〜１２モル％、５モル％〜１２モル％、または２モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
さらなる実施形態では、脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の、４モル％〜１０モル％、５モル％〜１０モル％、５モル％〜９モル％、５モル％〜８モル％、６モル％〜９モル％、６モル％〜８モル％、または５モル％、６モル％、７モル％、８モル％、９モル％、もしくは１０モル％（またはその任意の割合もしくはその範囲）を構成する。
本発明の脂質粒子中に存在する脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）の百分率は目標量であり、製剤中に存在する脂質コンジュゲートの実際の量は、例えば±２モル％で変動し得る。当業者は、脂質コンジュゲートの濃度は、用いられる脂質コンジュゲートおよび脂質粒子が膜融合性になる速度に応じて変動し得ることを理解するであろう。
脂質コンジュゲートの組成および濃度を制御することによって、脂質コンジュゲートが脂質粒子から交換される速度、ひいては脂質粒子が膜融合性になる速度を制御することができる。さらに、例えば、ｐＨ、温度、またはイオン強度を含む他の変数を使用して、脂質粒子が膜融合性になる速度を変更および／または制御することができる。脂質粒子が膜融合性になる速度を制御するために使用することができる他の方法は、本開示を読めば当業者には明らかになるであろう。また、脂質コンジュゲートの組成および濃度を制御することによって、脂質粒子のサイズを制御することができる。
投与のための組成物および製剤
本開示の核酸−脂質組成物は、例えば、静脈内、非経口、腹腔内、または局所経路を介して全身送達をもたらすために、様々な経路によって投与することができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、例えば肺または肝臓などの標的組織の細胞内で、あるいは炎症組織内で細胞内に送達されてもよい。一部の実施形態では、本開示はｉｎ ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡを送達するための方法を提供する。核酸−脂質組成物は、被験体に、静脈内、皮下または腹腔内で投与することができる。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物被験体の肺への干渉ＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ送達のための方法を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物被験体における疾患または障害を処置する方法を提供する。核酸、カチオン性脂質、両親媒性物質、リン脂質、コレステロール、およびＰＥＧ連結コレステロールを含有する治療有効量の本開示の組成物は、組成物によって減少、低下、下方制御、またはサイレンシングされ得る遺伝子の発現または過剰発現に関連する疾患または障害を有する被験体に投与され得る。
本開示の組成物および方法は、経口、直腸、膣、鼻腔内、肺内、または経皮的もしくは皮膚送達によるもの、あるいは目、耳、皮膚、または他の粘膜表面への局所送達によるものを含む、様々な粘膜投与モードによって被験体に投与することができる。本開示の一部の態様では、粘膜組織層は上皮細胞層を含む。上皮細胞は、肺、気管、気管支、肺胞、鼻、頬、表皮、または胃腸のものであり得る。本開示の組成物は、機械式スプレー装置などの従来のアクチュエーター、および加圧式、電気作動式、または他の種類のアクチュエーターを使用して投与することができる。
本開示の組成物は、鼻用または肺用スプレーとして水溶液中で投与され得、当業者に公知の種々の方法によってスプレー形態で投薬され得る。本開示の組成物の肺送達は、滴、粒子、またはスプレーの形態で組成物を投与することによって達成され、それらは、例えば、エアロゾル化、霧化、または噴霧化することができる。組成物、スプレー、またはエアロゾルの粒子は、液体または固体のいずれかの形態であり得る。鼻用スプレーとして液体を投薬するための好ましいシステムは、米国特許第４，５１１，０６９号に開示されている。そのような製剤は、本開示による組成物を水中に溶解させて水溶液を生成し、前記溶液を無菌にすることによって都合よく調製することができる。製剤は、例えば、米国特許第４，５１１，０６９号に開示される密封投薬システムの複数回用量容器で提示することができる。他の適切な鼻用スプレー送達システムは、TRANSDERMAL SYSTEMIC MEDICATION、Y. W. Chien編、Elsevier Publishers、New York、１９８５年；および米国特許第４，７７８，８１０号に記載されている。追加のエアロゾル送達形態には、例えば、水、エタノール、またはそれらの混合物などの薬学的溶媒に溶解または懸濁した生物活性剤を送達する、例えば圧縮空気、ジェット、超音波、および圧電の、ネブライザーが含まれ得る。
本開示の鼻用および肺用スプレー溶液は、典型的には、必要に応じて非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート−８０）などの表面活性剤および１つまたは複数の緩衝液と共に製剤化された薬物または送達される薬物を含む。本開示の一部の実施形態では、鼻用スプレー溶液は噴霧体をさらに含む。鼻用スプレー溶液のｐＨは、ｐＨ６．８〜７．２であり得る。用いられる薬学的溶媒はまた、ｐＨ４〜６のわずかに酸性の水性緩衝液であり得る。保存剤、界面活性剤、分散剤、またはガスを含む他の構成成分を添加して化学的安定性を増強または維持することができる。
一部の実施形態では、本開示は、本開示の組成物を含有する溶液、および肺用、粘膜用、または鼻腔内用のスプレーまたはエアロゾルのためのアクチュエーターを含む医薬製品である。
本開示の組成物の剤形は、液体であり得るか、液滴もしくはエマルジョンの形態であり得るか、またはエアロゾルの形態であり得る。
本開示の組成物の剤形は固体であり得、これは投与前に液体中において再構成され得る。固体は散剤として投与することができる。固体は、カプセル剤、錠剤、またはゲル剤の形態であり得る。
本開示の範囲内の肺送達のための組成物を製剤化するために、生物活性剤は、様々な薬学的に許容される添加剤、および活性剤（複数可）を分散させるための基剤または担体と組み合わせることができる。添加剤の例には、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸、およびそれらの混合物などのｐＨ調整剤が含まれる。他の添加剤には、局部麻酔薬（例えば、ベンジルアルコール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着防止剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０）、溶解度促進剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定剤（例えば、血清アルブミン）、および還元剤（例えば、グルタチオン）が含まれる。粘膜送達用組成物が液体である場合、一致するとみなした０．９％（ｗ／ｖ）の生理食塩水の張度を参照して測定するときの製剤の張度は、典型的には、投与部位の粘膜に、実質的に、不可逆的な組織損傷が誘導されないであろう値に調整される。一般に、溶液の張度は、１／３〜３、より典型的には１／２〜２、最も頻繁には３／４〜１．７の値に調整される。
生物活性剤は、活性剤を分散させる能力を有する親水性化合物および任意の所望の添加剤を含み得る基剤またはビヒクル中に分散され得る。基剤は、ポリカルボン酸またはその塩、カルボン酸無水物（例えば、無水マレイン酸）と他のモノマー（例えば、メチル（メタ）アクリレート、アクリル酸など）とのコポリマー；ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの親水性ビニルポリマー；ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体；およびキトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸などの天然ポリマー；ならびにそれらの非毒性金属塩を含むが、これらに限定されない広範囲の適切な担体から選択できる。しばしば、例えばポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）コポリマー、およびそれらの混合物の生分解性ポリマーが、基剤または担体として選択される。あるいは、またはさらに、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステルなどの合成脂肪酸エステルを担体として用いることができる。親水性ポリマーおよび他の担体は、単独でまたは組み合わせて使用することができ、部分的結晶化、イオン結合、架橋などによって、増強された構造的完全性を担体に付与することができる。担体は、鼻粘膜への直接適用のために、流体または粘性溶液、ゲル、ペースト、粉末、ミクロスフェア、およびフィルムを含む様々な形態で提供することができる。この文脈での選択された担体の使用は、生物活性剤の吸収を促進し得る。
粘膜、鼻、または肺送達のための製剤は、基剤または賦形剤として親水性低分子量化合物を含有し得る。そのような親水性低分子量化合物は、それを通して生理活性ペプチドまたはタンパク質などの水溶性活性剤が、活性剤が吸収される体表面へと基剤を通って拡散することができる通過媒体（passage medium）を提供する。親水性低分子量化合物は、必要に応じて、粘膜または投与雰囲気から水分を吸収し水溶性活性ペプチドを溶解する。親水性低分子量化合物の分子量は、一般に、１０，０００以下、好ましくは３，０００以下である。親水性低分子量化合物の例には、スクロース、マンニトール、ラクトース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−エリトロース、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、ラクツロース、セロビオース、ゲンチオビオース、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物を含むオリゴサッカリド、ジサッカリドおよびモノサッカリドなどのポリオール化合物が含まれる。親水性低分子量化合物のさらなる例には、Ｎ−メチルピロリドン、アルコール（例えば、オリゴビニルアルコール、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコールなど）、およびそれらの混合物が含まれる。
本開示の組成物は、代替的に、ｐＨ調整剤および緩衝化剤、張度調整剤、ならびに湿潤剤、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、およびそれらの混合物などの生理学的条件に近づけるために必要とされるような物質を、薬学的に許容される担体として含有し得る。固体組成物の場合、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどを含む、従来の非毒性の薬学的に許容される担体を使用することができる。
本開示のある特定の実施形態では、生物活性剤は、時限放出製剤(time release formulation)で、例えば緩徐放出ポリマーを含む組成物で投与することができる。活性剤は、急速放出に対して保護する担体、例えばポリマー、マイクロカプセル化送達システム、または生体接着性ゲルなどの制御放出ビヒクルを用いて調製することができる。本開示の様々な組成物中の活性剤の長期送達は、吸収を遅らせる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
本開示はある特定の実施形態に関して記載され、例示の目的で多くの詳細が述べられてきたが、本開示が追加の実施形態を含み、本明細書に記載された詳細の一部が本開示から逸脱することなく大幅に変更され得ることは当業者に明らかであろう。本開示は、そのような追加の実施形態、修正形態、および均等物を含む。特に、本開示は、様々な例示的な構成成分および例の特色、用語、または要素の任意の組み合わせを含む。
（実施例１：例示的な脂質）
式Ｉの例示的な化合物は、表１に提示される。
（実施例２：ＡＴＸ−４３の合成）
図１は、ＡＴＸ−４３（ＲＬ−４３Ａ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−４３：ステップ１
５００ｍＬの一口丸底フラスコ中に、ジクロロメタン（ＤＣＭ；２００ｍＬ）中に溶解した２５ｇのヘキサン酸（ＳＭ１；１当量）を入れ、次いで０℃で２７．６ｍＬの塩化オキサリル（１．５当量）をゆっくりと添加し、窒素雰囲気下で撹拌し、次いで０．５ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；触媒）を添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。
別の１リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の３１．４ｇのＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．５当量）に、添加漏斗を使用して８９．８ｍｌのトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、３当量）を添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（２０％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊（reaction mass）を水（３００ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０シリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２０．０ｇ；収率、５８％。
ＡＴＸ−４３：ステップ２
５００ｍｌの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ；１００ｍｌ）中の３３ｇの臭化ペンチルマグネシウム（１．５当量）の溶液に、２０ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルヘキサンアミド（１当量）溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、１５．０ｇ；収率、６６％。
ＡＴＸ−４３：ステップ３
１５０ｍｌのＴＨＦ中の２５ｍｌのメタノール（ＭｅＯＨ）中に溶解した１５ｇのウンデカン−６−オン（１当量）の溶液に、４．９ｇの水素化ホウ素ナトリウム（１．５当量）を０℃で添加し、得られた溶液を室温で２時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１００ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、１４．０ｇ；収率、９３％。
ＡＴＸ−４３：ステップ４
１５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した１５ｇの４−アミノブタン酸（１当量）の溶液に、それぞれ１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、１４５ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液（１当量）を０℃で、続いて４３．４ｍｌのＢｏｃ無水物（１．３当量）を添加した。得られた溶液を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（クロロホルム（ＣＨＣｌ３）中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、２０．０ｇ；収率、６８％。
ＡＴＸ−４３：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した１２ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１４．７ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）・ＨＣｌ（１．３当量）、１０．６ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．３当量）、および０．７２ｇの４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解することによりアルコールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８．５ｇ；収率、４８％。
ＡＴＸ−４３：ステップ６
７０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した８．５ｇのウンデカン−６−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１０当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．２）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、５．０ｇ；収率、３３％（アルコールに対して）。
ＡＴＸ−４３：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（１００ｍｌ）中に溶解した１４ｇの４−ブロモ酪酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、２１ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．３当量）、１５．２ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．３当量）、および１ｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、８．３ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（０．７当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で１６時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。生成量、１１．０ｇ；収率、６４％。
ＡＴＸ−４３：ステップ８
２５０ｍｌの丸底フラスコに、ＤＭＦ中の２ｇのウンデカン−６−イル４−アミノブタノエート（１当量）および２．２ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエート（１当量）、１．２ｇの炭酸カリウム（１．２当量）を添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。氷水を反応塊に添加し、次いでＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発アミンおよびブロモ化合物を回収した。生成量、１．４５ｇ；収率、４０％。
ＡＴＸ−４３：ステップ９
乾燥ＤＣＭ中に溶解した１．４５ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−（（４−オキソ−４−（ウンデカン−６−イルオキシ）ブチル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で、１．２９ｍｌのトリエチルアミン（３当量）および３６０ｍｇのトリホスゲン（０．４当量）を添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口２５０ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中に溶解した３６０ｍｇの水素化ナトリウム（５．５当量）に、ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の２．１ｇの２−（ジメチルアミノ）エタン−１−チオール塩酸塩（５．５当量）を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解した上述の塩化カルボニルを、添加漏斗を使用して約１５分間ゆっくりと添加し、この得られた溶液に添加し、室温で１時間撹拌した。
反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。
シリカゲル（１００〜２００メッシュ；１８％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）クロマトグラフィーを使用して精製を行った。生成量、５００ｍｇ；収率、２６％；１Ｈ ＮＭＲ；ＨＰＬＣ；および質量分析（Ｍａｓｓ）によって確認された。
（実施例３：ＡＴＸ−５７の合成）
図２は、ＡＴＸ−５７（ＲＬ−４３Ｃ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−５７：ステップ１：Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド
２リットルの二口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（３００ｍｌ）中に溶解したオクタン酸（１当量）を入れ、次いで１．５当量の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃でゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、添加漏斗を使用して３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、８５ｇ；収率、６５％。
ＡＴＸ−５７：ステップ２：ヘキサデカン−８−オン
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したＴＨＦ（１００ｍｌ）中の臭化オクチルマグネシウムの溶液に、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、６５ｇ；収率、６３％。
ＡＴＸ−５７：ステップ３：ヘキサデカン−８−オール
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解したヘキサデカン−８−オン（１当量）の溶液に、１当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１．５時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、６０ｇ；収率、９１％。
ＡＴＸ−５７：ステップ４：４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸
ＴＨＦ中に溶解した４−アミノブタン酸の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いてＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、８０ｇ；収率、８１％。
ＡＴＸ−５７：ステップ５：ヘキサデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、ＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解することにより１当量のヘキサデカン−８−オールアルコールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８０ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−５７：ステップ６：ヘキサデカン−８−イル４−アミノブタノエート
ＤＣＭ中に溶解したヘキサデカン−８−イル−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエートの溶液に、０℃でＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、４０ｇ；収率、２ステップに対し５９％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−５７：ステップ７：（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエート
０℃未満に冷却したＤＣＭ（４００ｍｌ）中に溶解した４−ブロモ酪酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、ＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコールを回収した。生成量、２７ｇ；収率、５１％。
ＡＴＸ−５７：ステップ８：ヘキサデカン−８−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエート
アセトニトリル（ＡＣＮ）中のヘキサデカン−８−イル４−アミノブタノエート、（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、炭酸カリウムを添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質である、アミンおよびブロモ化合物を回収した。生成量、２０ｇ；収率、４０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−５７：ステップ９
乾燥ＤＣＭ中に溶解したヘキサデカン−８−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエートの溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔でトリメチルアミンおよびトリホスゲンを添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）中に溶解した水素化ナトリウムに、２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（８０ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で６時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して第１の精製を行った。２２ｇの粗化合物を６０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた５００ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。７．５ｇの粗化合物を１８ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた１３０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。収率、２９％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例４：ＡＴＸ−５８の合成）
図３は、ＡＴＸ−５８（ＲＬ−４３Ｂ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−５８：ステップ１
Ｎ２雰囲気下、５００ｍｌの二口丸底フラスコ中に、２００ｍｌのＤＣＭ中に溶解した３０ｇの８−ブロモオクタン酸（１当量）を入れ、次いで窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃で２６．７ｍｌの塩化オキサリル（１．５当量）にゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。
別の１リットルの二口丸底フラスコ中で、３００ｍｌのＤＣＭ中の４０．５ｇのＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２当量）に、０℃で撹拌した８７ｍｌのトリメチルアミン（３当量）を添加した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮後、５００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、添加漏斗を使用して１５分間、上述の酸塩化物を滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２８ｇ。
ＡＴＸ−５８：ステップ２
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の２８ｇの臭化ヘキシルマグネシウム（１当量）の溶液に、２００ｍｌのＴＨＦ中の３６．８ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド（１．３当量）を添加し、得られた反応混合物を室温で５時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１００ｍｌ）でクエンチした。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％酢酸エチル／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２４ｇ；収率、７７％。
ＡＴＸ−５８：ステップ３
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した２４ｇのテトラデカン−７−オン（１当量）の溶液に、４．２７ｇの水素化ホウ素ナトリウム（１当量）を０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍｌ）でクエンチした。メタノールを減圧下で減らした。得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）と水との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×８０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、２１．５ｇ；収率、８９％。
ＡＴＸ−５８：ステップ４
１４０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した２０ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、１９６ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて漏斗を使用して３６．８ｇのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（１００ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、３０ｇ；収率、７６％。
ＡＴＸ−５８：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解した１０ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（１当量）の溶液に、１０分間隔で逐次的に、１２．２ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．３当量）、２０．４ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、および４８８ｍｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ中に溶解することによりアルコールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１００ｍｌ）でクエンチし、有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、１２．７ｇ（粗製）。
ＡＴＸ−５８：ステップ６
１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解した１２．５ｇのテトラデカン−７−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、０℃で２３．９ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、２ステップに対し７ｇ；収率、４７％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−５８：ステップ７
０℃に冷却したＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解した２０ｇの４−ブロモ酪酸（１当量）の溶液に、１０分間隔で逐次的に、１．５当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、３当量のＥｔ３Ｎ、および０．１当量のＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、０．７当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（１００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、１７ｇ；収率、６９％；１Ｈ ＮＭＲによって確認された。
ＡＴＸ−５８：ステップ８
ＡＣＮ（１２５ｍｌ）中の６ｇのテトラデカン−７−イル４−アミノブタノエート（１当量）、５．８ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエート（１当量）の溶液に、２．７ｇの炭酸カリウム（１．２当量）を添加し、得られたものを窒素雰囲気下、９０℃で３時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（１００〜２００メッシュシリカゲル；１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、４．５ｇ；収率、４４％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−５８：ステップ９
３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した４．４ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−（（４−オキソ−４−（テトラデカン−７−イルオキシ）ブチル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で、０．８３ｍｌのトリメチルアミン（３当量）および４１８ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（２５ｍｌ）中に溶解した１９２ｍｇの水素化ナトリウム（１０当量）に、５６４ｍｇの２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩（５当量）を０℃で添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（３５ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ（３０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して第１の精製を行った。５．０ｇの粗化合物を９ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた９０ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。１．５ｇの粗化合物を４ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた４０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、２１％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、Ｍａｓｓによって確認された。
（実施例５：ＡＴＸ−８１の合成）
図４は、ＡＴＸ−８１（ＲＬ−４８Ｂ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８１：ステップ１
２リットルの二口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解したオクタン酸を入れ、次いで１．５当量の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃でゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、添加漏斗を使用して３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、３３ｇ；収率、８４％。
ＡＴＸ−８１：ステップ２
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下０℃で撹拌したＴＨＦ（１００ｍｌ）中の２２ｇの臭化ヘプチルマグネシウム（１．５当量）の溶液に、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド（１当量）溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２２ｇ；収率、６５％。
ＡＴＸ−８１：ステップ３
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した２２ｇのペンタデカン−８−オン（１当量）の溶液に、１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、２０ｇ；収率、９０％。
ＡＴＸ−８１：ステップ４
３５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した５０ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、４９０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて１４０ｍｌのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、８０ｇ；収率、８１％。
ＡＴＸ−８１：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２５０ｍｌ）中に溶解した１０ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．３当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解することにより１当量のペンタデカン−７−オールアルコールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８．５ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８１：ステップ６
６５ｍｌのＤＣＭ中に溶解した８．５ｇのペンタデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエートの溶液に、０℃で１０当量のＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、２ステップに対し４ｇ；収率、２５％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８１：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（３００ｍｌ）中に溶解した４−ブロモ酪酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、ＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、２０ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコールを回収した。生成量、１９ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８１：ステップ８
７０ｍｌのアセトニトリル（ＡＣＮ）中の４．５ｇのペンタデカン−８−イル４−アミノブタノエート、１当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、１．４当量の炭酸カリウムを添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質である、アミンおよびブロモ化合物を回収した。生成量、２．１ｇ；収率、２７％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８１：ステップ９
１５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した２．１ｇのペンタデカン−８−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエートの溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で３当量のトリエチルアミンおよびトリホスゲンを添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（８０ｍｌ）中に溶解した７当量の水素化ナトリウムに、３．５当量の２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（８０ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、０℃〜室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
粗化合物の第１の精製は、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して行い、６０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた５００ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。粗化合物を１８ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた１３０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．５ｇ；収率、４５％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例６：ＡＴＸ−８２の合成）
図５は、ＡＴＸ−８２（ＲＬ−４７Ａ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８２：ステップ１
２リットルの二口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した３０ｇのオクタン酸を入れ、次いで１．５当量の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃でゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、添加漏斗を使用して３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、３３ｇ；収率、８４％。
ＡＴＸ−８２：ステップ２
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したＴＨＦ（１００ｍｌ）中の臭化ヘプチルマグネシウム（１．５当量）の溶液に、２８ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド（１当量）溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２２ｇ；収率、６５％。
ＡＴＸ−８２：ステップ３
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した２２ｇのペンタデカン−８−オン（１当量）の溶液に、１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、２０ｇ；収率、９０％。
ＡＴＸ−８２：ステップ４
１２０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した１５ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、１８５ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて５０ｍｌのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、２７ｇ；収率、８５％。
ＡＴＸ−８２：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２５０ｍｌ）中に溶解した１０ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．３当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解することにより１当量のペンタデカン−７−オールアルコールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８２：ステップ６
６０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した８．０ｇのペンタデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエートの溶液に、０℃で１０当量のＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、４ｇ；収率、２ステップに対し２５％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８２：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（４００ｍｌ）中に溶解した４−ブロモ酪酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．５当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、３当量のＥｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、２０ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコールを回収した。生成量、１８ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８２：ステップ８
９０ｍｌのＡＣＮ中の４．０ｇのペンタデカン−８−イル４−アミノブタノエート、１当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、１．４当量の炭酸カリウムを添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質（アミンおよびブロモ化合物）を回収した。生成量、２．２ｇ；収率、３０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８２：ステップ９
２５ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した２．２ｇのペンタデカン−８−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエートの溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で３当量のトリエチルアミンおよびトリホスゲンを添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した７当量の水素化ナトリウムに、３．５当量の２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、０℃〜室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
粗化合物の第１の精製は、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して行い、６０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた５００ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。粗化合物を１８ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた１３０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、４３％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例７：ＡＴＸ−８６の合成）
図６は、ＡＴＸ−８６（ＲＬ−４８Ａ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８６：ステップ１
２リットルの二口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した３０ｇのオクタン酸を入れ、次いで１．５当量の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃でゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、添加漏斗を使用して３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、３８ｇ；収率、８４％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ２
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したＴＨＦ（１００ｍｌ）中の臭化ヘキシルマグネシウム（１．５当量）の溶液に、３８ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド（１当量）溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、４４ｇ；収率、６５％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ３
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した４４ｇのトリデカン−７−オン（１当量）の溶液に、１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、４０ｇ；収率、９０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ４
３５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した５０ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、４９０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて１４０ｍｌのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、８０ｇ；収率、８１％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２５０ｍｌ）中に溶解した１０ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．３当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解することにより１当量のペンタデカン−７−オールアルコールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８６：ステップ６
６０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した８．０ｇのペンタデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエートの溶液に、０℃で１０当量のＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍＬのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、３．５ｇ；収率、２ステップに対し５２％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（４００ｍｌ）中に溶解した４−ブロモ酪酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．５当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、２当量のＥｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、２０ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコールを回収した。生成量、１８ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８６：ステップ８
９０ｍｌのＡＣＮ中の４．０ｇのトリデカン−７−イル４−アミノブタノエート、１当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、１．４当量の炭酸カリウムを添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質である、アミンおよびブロモ化合物を回収した。生成量、２．２ｇ；収率、３０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８６：ステップ９
２５ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した２．２ｇのトリデカン−７−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエートの溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で３当量のトリエチルアミンおよびトリホスゲンを添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した７当量の水素化ナトリウムに、３．５当量の２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、０℃〜室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
粗化合物の第１の精製は、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して行い、６０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた５００ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。粗化合物を１８ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた１３０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、４３％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例８：ＡＴＸ−８７の合成）
図７は、９つのステップを含むＡＴＸ−８７（ＲＬ−４８Ｃ）の合成経路を示す。
ＡＴＸ−８７：ステップ１
２リットルの二口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した２０ｇのオクタン酸を入れ、次いで１．５当量の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃でゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、添加漏斗を使用して３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２０ｇ；収率、８４％。
ＡＴＸ−８７：ステップ２
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したＴＨＦ（１００ｍｌ）中の臭化ヘキシルマグネシウム（１．５当量）の溶液に、２０ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド（１当量）溶液（２００ｍｌのＴＨＦ中に溶解）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２５ｇ；収率、６５％。
ＡＴＸ−８７：ステップ３
ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した２５ｇのトリデカン−７−オン（１当量）の溶液に、１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、２２ｇ；収率、９０％。
ＡＴＸ−８７：ステップ４
３５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した５０ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、４９０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で添加し、続いて１４０ｍｌのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、８０ｇ；収率、８１％。
ＡＴＸ−８７：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２５０ｍｌ）中に溶解した１７ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．３当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解することにより１当量のトリデカン−７−オールを同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、１５ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８７：ステップ６
８０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した１５．０ｇのペンタデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエートの溶液に、０℃で１０当量のＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍＬのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、７ｇ；収率、２ステップに対し２４％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８７：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（４００ｍｌ）中に溶解した４−ブロモ酪酸の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１．５当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、２当量のＥｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、２０ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコールを回収した。生成量、１９ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８７：ステップ８
９０ｍｌのＡＣＮ中の４．０ｇのトリデカン−７−イル４−アミノブタノエート、１当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、１．４当量の炭酸カリウムを添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質である、アミンおよびブロモ化合物を回収した。生成量、２．２ｇ；収率、３０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８７：ステップ９
２５ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した２．２ｇのトリデカン−７−イル（Ｚ）−４−（（４−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−４−オキソブチル）アミノ）ブタノエートの溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で３当量のトリエチルアミンおよびトリホスゲンを添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した７当量の水素化ナトリウムに、３．５当量の２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、０℃〜室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（７５ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
粗化合物の第１の精製は、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して行い、６０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた５００ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。粗化合物を１８ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた１３０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、４３％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例９：ＡＴＸ−８８の合成）
図８は、ＡＴＸ−８８（ＲＬ−４８Ｄ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８８：ステップ１
Ｎ２雰囲気下の５００ｍｌの二口丸底フラスコ中に、２００ｍｌのＤＣＭ中に溶解した２５ｇの８−ブロモオクタン酸（１当量）を入れ、次いで窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃で塩化オキサリル１．５当量にゆっくりと添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。
別の１リットルの二口丸底フラスコ中で、３００ｍｌのＤＣＭ中の２当量のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩に、３当量のトリメチルアミンを添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮後、５００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、添加漏斗を使用して１５分間、上述の酸塩化物を滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２１ｇ；収率、６６％。
ＡＴＸ−８８：ステップ２
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の１．３当量の臭化オクチルマグネシウムの溶液に、１００ｍｌのＴＨＦ中の２０ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミドを添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１００ｍｌ）でクエンチした。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；２％酢酸エチル／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。収量は１７．４ｇ；６８％であった。
ＡＴＸ−８８：ステップ３
１３５ｍｌのＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した１７ｇのヘキサデカン−７−オン（１当量）の溶液に、１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムを０℃で添加し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍｌ）でクエンチした。メタノールを減圧下で減らした。得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）と水との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×８０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、１４．５ｇ；収率、８５％。
ＡＴＸ−８８：ステップ４
３５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した５０ｇの４−アミノブタン酸の溶液に、４９０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて漏斗を使用して１４０ｍｌのＢｏｃ無水物を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（１００ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、８０ｇ；収率、８１％。
ＡＴＸ−８８：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した１当量の４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の溶液に、１０分間隔で逐次的に、３当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、Ｅｔ３Ｎ（３当量）、およびＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ中に溶解することによりアルコールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（１００ｍｌ）でクエンチし、有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、１９ｇ（粗製）。
ＡＴＸ−８８：ステップ６
１４０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した１９ｇのヘキサデカン−７−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、０℃で１０当量のＴＦＡを添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコールを回収した。生成量、９．４ｇ；収率、２ステップに対し５０％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８８：ステップ７
０℃に冷却したＤＣＭ（５００ｍｌ）中に溶解した３０ｇの４−ブロモ酪酸（１当量）の溶液に、１０分間隔で逐次的に、１．５当量のＥＤＣ・ＨＣｌ、３当量のＥｔ３Ｎ、および０．１当量のＤＭＡＰを添加した。この得られた溶液に、漏斗を使用して、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより、０．７当量の（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オールを添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（１００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、２７ｇ；収率、５１％；１Ｈ ＮＭＲによって確認された。
ＡＴＸ−８８：ステップ８
ＡＣＮ（７０ｍｌ）中の６ｇのヘキサデカン−８−イル４−アミノブタノエート（１当量）、１当量の５（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−ブロモブタノエートの溶液に、１．２当量の炭酸カリウムを添加し、得られたものを窒素雰囲気下、９０℃で３時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（１００〜２００メッシュシリカゲル；１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、４．５ｇ；収率、４４％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−８８：ステップ９
３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した４．４ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル４−（（４−オキソ−４−（テトラデカン−７−イルオキシ）ブチル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で、０．８３ｍｌのトリメチルアミン（３当量）および４１８ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
二口１００ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（２５ｍｌ）中に溶解した１９２ｍｇの水素化ナトリウム（１０当量）に、５６４ｍｇの２−（ジメチルアミノ）プロパン−１−チオール塩酸塩（５当量）を０℃で添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、ＴＨＦ（３５ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（３０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して第１の精製を行った。５．０ｇの粗化合物を９ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた９０ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。１．５ｇの粗化合物を４ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた４０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、２１％；１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、Ｍａｓｓによって確認された。
（実施例１０：ＡＴＸ−８３の合成）
図９は、ＡＴＸ−８３（ＲＬ−４７Ｂ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８３：ステップ１
５００ｍｌの一口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍＬ）中に溶解した５０ｇのオクタン酸（１当量）を入れ、次いで０℃で４４．６ｍｌの塩化オキサリル（１．５当量）を、添加漏斗を介してゆっくりと添加し、窒素雰囲気下で撹拌し、次いで１ｍｌのＤＭＦ（触媒）を添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。
別の２リットルの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（３００ｍｌ）中の６７．４ｇのＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２当量）に、添加漏斗を使用して１４４ｍｌのトリエチルアミン（３当量）を添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液にし、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（３５０ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を水（３００ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。生成量、５５．０ｇ；収率、８４％。
ＡＴＸ−８３：ステップ２
２ｌの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌したエーテル中の５５ｇの臭化ヘプチルマグネシウム（１当量）の溶液に、４００ｍｌの乾燥エーテル中に溶解した８９．６ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルオクタンアミド溶液（１．５当量）を添加し、得られた反応溶液を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５０ｍｌ）でクエンチした。有機層を分離し、水層をエーテル（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。生成量、５０．０ｇ；収率、７５％。
ＡＴＸ−８３：ステップ３
２９０ｍｌのＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した５０ｇのペンタデカン−８−オン（１当量）の溶液に、１２．５ｇの水素化ホウ素ナトリウム（１．５当量）を０℃で添加し、得られた溶液を室温で２時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（８０ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（２５０ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×８０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、白色の固体を得た。生成量、４６．０ｇ；収率、９０％。
ＡＴＸ−８３：ステップ４
ＴＨＦ中に溶解した５０ｇの４−アミノブタン酸（１当量）の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、４９０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液（１当量）を０℃で、続いて１４０ｍｌのＢｏｃ無水物（１．３当量）を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（３５０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、７７．０ｇ；収率、７８％。
ＡＴＸ−８３：ステップ５
合成は４バッチで行った。それぞれにおいて、０℃未満に冷却したＤＣＭ（４００ｍｌ）中の２３ｇの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、３２．３ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．５当量）、４７ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）および１．３ｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶解することにより２０ｇのペンタデカン−８−オール（０．７７当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．４）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。この得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、次いで粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、１０５ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８３：ステップ６
４５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解した１０５ｇのペンタデカン−８−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート（１当量）の溶液に、０℃で１９４ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。
反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）と共に１０分間、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）と共に撹拌した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミンを使用するカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ）に供した。生成量、２ステップに対し６０．０ｇ；収率、５４％。
ＡＴＸ−８３：ステップ７
反応を２バッチで行い、それぞれにおいて、０℃未満に冷却したＤＣＭ（３００ｍｌ）中に溶解した２０ｇの６−ブロモヘキサン酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、２９．３ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．５当量）、４２．８ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、および１．２ｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して（１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解することにより）、１４．５ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（１当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（２００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、４％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコール反応物を回収した。生成量、３６．０ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８３：ステップ８
反応は６バッチで行った。それぞれにおいて、１２０ｍｌのＡＣＮ中の１０ｇのペンタデカン−８−イル４−アミノブタノエート（Ｉｎｔ ６、１当量）、１０．１ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル６−ブロモヘキサノエート（Ｉｎｔ ７、１当量）の溶液に、６．１ｇの無水炭酸カリウム（１．４当量）を添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２×２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、２０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）に供した。出発物質を回収した。生成量、３６．９ｇ；収率、３５％。
ＡＴＸ−８３：ステップ９
反応は３バッチで行った。それぞれにおいて、１００ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した１０ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル６−（（４−オキソ−４−（ペンタデカン−８−イルオキシ）ブチル）アミノ）ヘキサノエート（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で、７．５ｍｌのトリエチルアミン（３当量）および２．６８ｇのトリホスゲン（０．５当量）を添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口５００ｍｌのＲＢフラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の３ｇの水素化ナトリウム（７当量）の懸濁物に、８．９ｇの２−（ジメチルアミノ）エタン−１−チオール塩酸塩（３．５当量）を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。この得られた溶液に、乾燥ＴＨＦ（２００ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１００ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×８０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
中性アルミナを使用して第１の精製を行った。ヘキサン中に溶解した粗化合物を中性アルミナ（７００ｇをカラムにロードした）の頂部にロードした。化合物を８〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。シリカゲル（１００〜２００メッシュ）を使用して第２の精製を行った。ヘキサン中に溶解した化合物をシリカゲル（５００ｇをカラムにロードした）の頂部にロードした。化合物を２０〜２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。最終化合物（ヘキサンに溶解）を木炭処理（２００ｍｇ／ｇ）に供し、（２０分間撹拌した後に）セライトベッドを通して濾過し、次いでシリンジエンドメンブレンフィルター（ｓｙｒｉｎｇｅ ｅｎｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒ）（ＰＴＦＥ；０．２ミクロン、直径２５ｍｍ）に通した。得られた濾液を減圧下で濃縮した。生成量、１５．５ｇ；収率、４１％。
（実施例１１：ＡＴＸ−８４の合成）
図１０は、ＡＴＸ−８４（ＲＬ−４７Ｃ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−８４：ステップ１
５００ｍｌの一口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２００ｍＬ）中に溶解した３０ｇのヘプタン酸（１当量）を入れ、次いで窒素雰囲気下で撹拌しながら、０℃で２６．７ｇの塩化オキサリル（１．５当量）をゆっくりと添加し、次いで１ｍｌのＤＭＦ（触媒）を添加した。得られた反応混合物を、室温で２時間撹拌した。
別の１ｌの二口丸底フラスコ中で、ＤＣＭ（２５０ｍｌ）中の４０．５ｇのＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２当量）に、添加漏斗を使用して８６．６ｍｌのトリメチルアミン（３当量）を添加し、０℃で撹拌した。この得られた溶液に、減圧下で濃縮した後の上述の酸塩化物を、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中に溶解することにより、添加漏斗を使用して２０分間、窒素雰囲気下で滴下添加した。得られた反応溶液を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を水（２５０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用する（６０〜１２０シリカゲル）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、３８．０ｇ；収率、８４％。
ＡＴＸ−８４：ステップ２
１リットルの二口丸底フラスコ中に入れ、窒素雰囲気下、０℃で撹拌した２５０ｍｌの乾燥エーテル中の８ｇの臭化ヘキシルマグネシウム（１当量）の溶液に、２５０ｍｌのエーテル中に溶解した２．３ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルヘプタンアミド（０．５当量）を添加し、得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２００ｍｌ）でクエンチした。有機層を分離し、水層をエーテル（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用する（６０〜１２０メッシュシリカゲル）を使用するカラムクロマトグラフィーに供した。生成量、３０．８ｇ；収率、７１％。
ＡＴＸ−８４：ステップ３
２００ｍｌのＭｅＯＨ／ＴＨＦ中に溶解した３０ｇのトリデカン−７−オン（１当量）の溶液に、８．５ｇの水素化ホウ素ナトリウム（０．５当量）を０℃で添加し、得られた溶液を室温で２時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（８０ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×７０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。生成量、２７．２ｇ；収率、９０％。
ＡＴＸ−８４：ステップ４
１２０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した５ｇの６−アミノヘキサン酸（１当量）の溶液に、１５分間かけて、添加漏斗を使用して逐次的に、１２５ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を０℃で、続いて３４ｍｌのＢｏｃ無水物（１．３当量）を添加した。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を５％ＨＣｌ（１００ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、粘着性の液体を得た。生成量、２２．４ｇ；収率、８５％。
ＡＴＸ−８４：ステップ５
０℃未満に冷却したＤＣＭ（２００ｍｌ）中に溶解した１０ｇの６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、１０．７ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．３当量）、１８ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、および５２５ｍｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、ＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解することにより６ｇのトリデカン−７−オール（Ｉｎｔ ３、０．７当量）を同一の温度で添加し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．４）によりモニターした。反応塊を水（１５０ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×７５ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）を添加して抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮し、粗製物を用いて次のステップに進んだ。生成量、８．５ｇ（粗製；必要な化合物およびアルコール）。
ＡＴＸ−８４：ステップ６
６５ｍｌのＤＣＭ中に溶解した１０ｇのトリデカン−７−イル６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノエート（１当量）の溶液に、０℃で１８．５ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応塊を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、（６０〜１２０メッシュシリカゲル；４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および１ｍｌのトリエチルアミン）を使用するカラムクロマトグラフィーに供し、アルコール出発物質を回収した。数量、２ステップに対し４．５ｇ；収率、３３％。
ＡＴＸ−８４：ステップ７
０℃未満に冷却したＤＣＭ（３００ｍｌ）中に溶解した２０ｇの６−ブロモヘキサン酸（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下で、１０分間隔で逐次的に、２９．３ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．５当量）、４２．８ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、および１．２ｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この得られた溶液に、添加漏斗を使用して、１４．５ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（１当量）を添加し、１００ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、窒素雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応塊を水（２００ｍｌ）でクエンチし、次いで有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗製物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗化合物を、４％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）に供した。アルコール出発物質を回収した。生成量、１８．０ｇ；収率、５５％。
ＡＴＸ−８４：ステップ８
９０ｍｌのＡＣＮ中の４．５ｇのトリデカン−７−イル６−アミノヘキサノエート（Ｉｎｔ ６、１当量）、および４．５ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル６−ブロモヘキサノエート（Ｉｎｔ ７、１当量）の溶液に、２．７ｇの炭酸カリウム（１．４当量）を添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で４時間還流した。
反応の進行を、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３中１０％ＭｅＯＨ；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応塊を濾過し、ＡＣＮ（２×２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。
粗化合物を、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）に供した。出発物質を回収した。生成量、３．０ｇ；収率、３７％。
ＡＴＸ−８４：ステップ９
３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中に溶解した２．５ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル６−（（６−オキソ−６−（トリデカン−７−イルオキシ）ヘキシル）アミノ）ヘキサノエート（１当量）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃で、５分間隔で、１．８ｍｌのトリエチルアミン（３当量）および６７２ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を添加した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた反応塊を減圧下で濃縮し、窒素雰囲気下で維持した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した二口２５０ｍｌの丸底フラスコ中の、乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の７６１ｍｇの水素化ナトリウムの懸濁物に、２．２ｇの２−（ジメチルアミノ）エタン−１−チオール塩酸塩（３．５当量）を添加し、窒素雰囲気下で５分間撹拌し続けた。得られた溶液に、ＴＨＦ（６０ｍｌ）中に溶解した上述の塩化カルバモイルをシリンジで約１０分間ゆっくりと添加した。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５；ＰＭＡ炭化）によりモニターした。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（６０ｍｌ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１３０ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、得られた粗製物をカラムクロマトグラフィーに供した。
シリカゲル（１００〜２００メッシュ）を使用して第１の精製を行った。４．６ｇの粗化合物を１０．０ｇのシリカゲルに吸着させ、カラムに入れた９０．０ｇのシリカゲルに注いだ。化合物を５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。ＨＰＬＣグレードの溶媒と共に中性アルミナを使用して第２の精製を行った。２．０ｇの粗化合物を６．０ｇの中性アルミナに吸着させ、得られたものをカラムに入れた４０．０ｇの中性アルミナに注いだ。化合物を２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。生成量、１．２ｇ；収率、３８％（３００ｍｇ混合物）。
（実施例１２：ＡＴＸ−６１の合成）
図１０は、ＡＴＸ−６１（ＲＬ−４２Ｄ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−６１：ステップ１
１２ｇのグリシンエステル（１当量）をＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した。この溶液に、添加漏斗を通して、２４．２ｍｌのトリエチルアミン（１．５当量）および３８．１１ｇのＢｏｃ無水物（１．５当量）を逐次的に添加した。
反応の進行を、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４を使用するＴＬＣによりモニターした。
１６時間後、反応塊を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で洗浄し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗生成物を６０〜１２０シリカゲル（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供した。生成量、２０．８ｇ；収率、８８％。
ＡＴＸ−６１：ステップ２
ＴＨＦ（１３０ｍｌ）中に溶解した１８．９ｇのＮ−Ｂｏｃグリシンエステル（１当量）の溶液に、５．８５ｇのＬｉＯＨ（１．５当量）の水溶液を添加し、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．３）によりモニターし、ＳＭは存在していない。
反応塊を濃縮し、粗製塊を５％ＨＣｌ（ｐＨ３）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（４×８０ｍｌ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物を得た。生成量、１５ｇ；収率、９２％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６１：ステップ３
ＤＣＭ（３０ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した５ｇのＮ−Ｂｏｃ−グリシンエステル（Ｉｎｔ １、１当量）の溶液に、４．５ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）および６．４４ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．２当量）を添加した。この反応溶液に、２０ｍｌのＤＣＭ中の５．１２ｇのヘプタデン−９−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
出発物質はＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．６）により存在しないことが観察された。反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×３０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物（６．８ｇ；生成物とアルコールの混合物）を用いて次のステップに進んだ。
ＡＴＸ−６１：ステップ４
４ｇのヘプタデカン−９−イル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシネート（Ｉｎｔ ２、１当量）をＤＣＭ（４０ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却し、７．４ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、室温で１時間撹拌した。
ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）により反応の完了を２時間で確認した。
反応塊を減圧下で濃縮し、残留塊を飽和重炭酸ナトリウム溶液（３０ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、Ｉｎｔ ３を得た。
粗生成物を、１〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および２ｍＬのＥｔ３Ｎを使用するカラムクロマトグラフィー（シリカ、６０〜１２０）に供した。生成量、１ｇ；１Ｈ−ＮＭＲおよびＭａｓｓによって確認された。
ＡＴＸ−６１：ステップ５
ＤＣＭ（３５ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した４ｇのブロモ酢酸（１当量）の溶液に、４．７ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）および３５４ｍｇのＤＭＡＰ（０．１当量）、続いて１３．２３ｇのＨＡＴＵ（１．２当量）を添加した。この反応溶液に、２０ｍｌのＤＣＭ中の２．８８ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。
反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（４０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留塊をシリカゲル（６０〜１２０）カラムクロマトグラフィー（１．５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、４ｇ；収率、５２％。
ＡＴＸ−６１：ステップ６
１ｇのヘプタデカン−９−イルグリシネート（Ｉｎｔ ３、１当量）をＴＨＦ（２５ｍｌ）中に溶解し、０．５ｍｌのＴＥＡ（１．３当量）および１．０８ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル２−ブロモアセテート誘導体（Ｉｎｔ ４、１．３当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４）によりモニターした。反応混合物を水（３０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×２）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
残留塊をカラム（シリカゲル；１００〜２００）クロマトグラフィー（２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、７００ｍｇ；収率、４７％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６１：ステップ７
１５ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、５℃未満に冷却した７００ｍｇのヘプタデカン−９−イル（Ｚ）−（２−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−２−オキソエチル）グリシネート）（１当量）の溶液に、０．４ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、続いて２０９ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を１０分間にわたって小分けして添加した。
反応混合物の進行をＴＬＣによりモニターし、反応を０．５時間完了させ、反応塊を減圧下で濃縮した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）およびＤＭＦ（３ｍｌ）中の４２３ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチルエタンチオール塩酸塩（３当量）の溶液に、１４４ｍｇの水素化ナトリウム（６当量）を添加した。１０分後、この反応塊に、ＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解することによって上述の溶液を添加した。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。
１時間後、反応の完了をＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３；Ｒｆ：０．５）により観察した。
反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２０ｍｌ）でクエンチし、水（２０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）を添加した。水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で洗浄し、合わせた有機層をブライン溶液（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗製物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲル（１００〜２００）、次いで１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いる中性アルミナを使用するカラムクロマトグラフィーに供して、純粋な化合物を得た。生成量、５２０ｍｇ；収率、５８％；１Ｈ−ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例１３：ＡＴＸ−６３の合成）
図１２は、ＡＴＸ−６３（ＲＬ−４２Ａ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−６３：ステップ１
１２ｇのグリシンエステル（１当量）をＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した。この溶液に、添加漏斗を通して、２４．２ｍｌのトリエチルアミン（１．５当量）および３８．１１ｇのＢｏｃ無水物（１．５当量）を逐次的に添加した。
反応の進行を、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４を使用するＴＬＣによりモニターした。
１６時間後、反応塊を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で洗浄し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗生成物を６０〜１２０シリカゲル（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供した。生成量、２０．８ｇ；収率、８８％。
ＡＴＸ−６３：ステップ２
ＴＨＦ（１３０ｍｌ）中に溶解した１８．９ｇのＮ−Ｂｏｃグリシンエステル（１当量）の溶液に、５．８５ｇのＬｉＯＨ（１．５当量）の水溶液を添加し、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．３）によりモニターし、出発物は反応生成物に存在していなかった。
反応塊を濃縮し、粗製塊を５％ＨＣｌ（ｐＨ３）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（４×８０ｍｌ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物を得た。生成量、１５ｇ；収率、９２％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６３：ステップ３
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した５ｇのＮ−Ｂｏｃ−グリシンエステル（Ｉｎｔ １、１当量）の溶液に、４．５ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）および６．４ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．２当量）を添加した。この反応溶液に、２０ｍｌのＤＣＭ中の３．４ｇのウンデカン−６−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
出発物質はＴＬＣ（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．６）により存在しないことが観察された。反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×４０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。カラム濾過後、粗製物（５．５ｇ；生成物とアルコールの混合物）を用いて次のステップに進んだ。
ＡＴＸ−６３：ステップ４
３．３ｇの粗製ウンデカン−６−イル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシネート（Ｉｎｔ ２、１当量）をＤＣＭ（２０ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却し、７．６ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、室温で１時間撹拌した。
ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ；Ｒｆ：０．５）により反応の完了を２時間で確認した。反応塊を減圧下で濃縮し、残留塊を飽和重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、Ｉｎｔ ３を得た。
粗生成物を、１〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および２ｍＬのＥｔ３Ｎを使用するカラムクロマトグラフィー（シリカ、６０〜１２０）に供した。生成量、１．２ｇ；収率、４０％；１Ｈ−ＮＭＲおよびＭａｓｓによって確認された。
ＡＴＸ−６３：ステップ５
ＤＣＭ（３５ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した４ｇのブロモ酢酸（１当量）の溶液に、４．７ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）、続いて１３．２３ｇのＨＡＴＵ（１．２当量）および３５４ｍｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この反応溶液に、２０ｍＬのＤＣＭ中の２．８８ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。
反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（４０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留塊をシリカゲル（６０〜１２０）カラムクロマトグラフィー（１．５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、４ｇ；収率、５２％。
ＡＴＸ−６３：ステップ６
１．２ｇのウンデカン−６−イルグリシネート（Ｉｎｔ ３、１当量）を２５ｍｌのＴＨＦ中に溶解し、０．９ｍｌのＴＥＡ（１．３当量）および１．３７ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル２−ブロモアセテート（Ｉｎｔ ４、１当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応混合物を水（３０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×２）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
残留塊をカラム（シリカゲル；１００〜２００）クロマトグラフィー（３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、８００ｍｇ；収率、３７％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６３：ステップ７
ＤＣＭ中に溶解し、５℃未満に冷却した８００ｍｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル（２−オキソ−２−（ウンデカン−６−イルオキシ）エチル）グリシネート（１当量）の溶液に、０．４ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、続いて２０９ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を１０分間にわたって小分けして添加した。
反応混合物の進行をＴＬＣによりモニターし、反応を１時間完了させ、反応塊を減圧下で濃縮した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した乾燥ＴＨＦおよびＤＭＦ（それぞれ、１０ｍｌおよび５ｍｌ）中の４２３ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチルエタンチオール塩酸塩（３当量）の溶液に、１４４ｍｇの水素化ナトリウム（６当量）を添加した。１０分後、この反応塊に、ＴＨＦに溶解することによって上述の溶液を添加した。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。
１時間後、反応の完了をＴＬＣ（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４）により観察した。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５ｍｌ）でクエンチし、水（２０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を添加した。水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で洗浄し、合わせた有機層をブライン溶液（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗製物を、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲル（１００〜２００）、次いで５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いる中性アルミナを使用するカラムクロマトグラフィーに供して、純粋な化合物を得た。生成量、５１０ｍｇ；収率、４８％；１Ｈ−ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例１４：ＡＴＸ−６４の合成）
図１３は、ＡＴＸ−６４（ＲＬ−４２Ｃ）の合成経路を示し、これは以下のようにさらに記載される。
ＡＴＸ−６４：ステップ１
１２ｇのエチルグリシネート（１当量）をＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した。この得られた溶液に、添加漏斗を通して、２４．２ｍｌのトリエチルアミン（１．５当量）および３８．１１ｇのＢｏｃ無水物（１．５当量）を逐次的に添加した。
反応の進行を、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４を使用するＴＬＣによりモニターした。
１６時間後、反応塊を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で洗浄し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗生成物を６０〜１２０シリカゲル（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供した。生成量、２０．８；収率、８８％。
ＡＴＸ−６４：ステップ２
ＴＨＦ（１３０ｍｌ）中に溶解した１８．９ｇのＮ−Ｂｏｃグリシンエステル（１当量）の溶液に、５．８５ｇのＬｉＯＨ（１．５当量）の水溶液を添加し、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．３）によりモニターし、出発物質は反応生成物に存在していなかった。
反応塊を濃縮し、粗製塊を５％ＨＣｌ（ｐＨ３）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（４×８０ｍｌ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物を得た。生成量、１５ｇ；収率、９２％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６４：ステップ３
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した５ｇのＮ−Ｂｏｃ−グリシンエステル（Ｉｎｔ １、１当量）の溶液に、４．５ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）および６．４ｇのＥＤＣ・ＨＣｌ（１．２当量）を添加した。この反応溶液に、１５ｍｌのＤＣＭ中の４．８４ｇのヘキサデカン−１０−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
出発物質はＴＬＣ（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．６）により存在しないことが観察された。反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×３０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
カラム濾過後、粗製物（５．５ｇ；生成物とアルコールの混合物）を用いて次のステップに進んだ。
ＡＴＸ−６４：ステップ４
３．８５ｇの粗製ヘプタデカン−９−イル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシネート（Ｉｎｔ ２、１当量）を３０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、０℃に冷却し、７．４ｍｌのＴＦＡ（１０当量）を添加し、室温で１時間撹拌した。
ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ；Ｒｆ：０．５）により反応の完了を２時間で確認した。
反応塊を減圧下で濃縮し、残留塊を飽和重炭酸ナトリウム溶液（３０ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、Ｉｎｔ ３を得た。
粗生成物を、１〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３および２ｍＬのＥｔ３Ｎを使用するカラムクロマトグラフィー（シリカ、６０〜１２０）に供した。生成量、２．２ｇ；１Ｈ−ＮＭＲおよびＭａｓｓによって確認された。
ＡＴＸ−６４：ステップ５
ＤＣＭ（３５ｍｌ）中に溶解し、０℃未満に冷却した４ｇのブロモ酢酸（１当量）の溶液に、４．７ｍｌのＥｔ３Ｎ（１．２当量）、続いて１３．２３ｇのＨＡＴＵ（１．２当量）および３５４ｍｇのＤＭＡＰ（０．１当量）を添加した。この反応溶液に、２０ｍｌのＤＣＭ中の２．８８ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−オール（０．７当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．７）によりモニターした。
反応塊を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（４０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
残留塊をシリカゲル（６０〜１２０）カラムクロマトグラフィー（１．５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、４ｇ；収率、５２％。
ＡＴＸ−６４：ステップ６
２．１ｇのヘキサデカン−８−イルグリシネート（Ｉｎｔ ３、１当量）を５０ｍｌのＴＨＦ中に溶解し、１．２ｍｌのＴＥＡ（１．３当量）および２．３９ｇの（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル２−ブロモアセテート（Ｉｎｔ ４、１．３当量）を添加し、室温で一晩撹拌した。
反応の進行を、ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応混合物を水（３０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
残留塊をカラム（シリカゲル；１００〜２００）クロマトグラフィー（３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。生成量、２．２ｇ；収率、６５％；Ｍａｓｓにより確認された。
ＡＴＸ−６４：ステップ７
１５ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、５℃未満に冷却した２．２ｇのヘプタデカン−９−イル（Ｚ）−（２−（ノナ−２−エン−１−イルオキシ）−２−オキソエチル）グリシネート）（１当量）の溶液に、１．６ｍｌのＥｔ３Ｎ（３当量）、続いて６７８ｍｇのトリホスゲン（０．５当量）を１０分間にわたって小分けして添加した。
反応混合物の進行をＴＬＣによりモニターし、反応を１時間完了させ、反応塊を減圧下で濃縮した。
窒素雰囲気下、０℃で撹拌した乾燥ＴＨＦおよびＤＭＦ（それぞれ、３５ｍｌおよび１５ｍｌ）中の３．９４ｇのＮ，Ｎ−ジメチルエタンチオール塩酸塩（７当量）の溶液に、６７２ｍｇの水素化ナトリウム（７当量）を添加した。１０分後、この反応塊に、ＴＨＦに溶解することによって上述の溶液を添加した。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。
１時間後、反応の完了をＴＬＣ（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；Ｒｆ：０．４）により観察した。反応塊を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２５ｍｌ）でクエンチし、水（２０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を添加した。水層をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×２）で洗浄し、合わせた有機層をブライン溶液（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。
粗製物を、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲル（１００〜２００）、次いで１５〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いる中性アルミナを使用するカラムクロマトグラフィーに供して、純粋な化合物を得た。生成量、１．０ｍｇ；収率、４０％；１Ｈ−ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭａｓｓによって確認された。
（実施例１５：ｐＫａ値）
脂質を滴定してそれらのｐＫａ値を測定した。結果を以下の表に示す。
（実施例１６：ｉｎ ｖｉｖｏでのＥＰＯ ｍＲＮＡ安定性）
異なるカチオン性脂質を含むナノ粒子の注射後に血漿中のｍＲＮＡのレベルを測定し、比較した。脂質でカプセル化されたマウスｅｐｏ ｍＲＮＡの注射後のｉｎ ｖｉｖｏでの血漿エリスロポエチン（ｅｐｏ）レベルの評価のために、メスのＢａｌｂ／ｃマウス（６〜８週齢）を使用した。全ての製剤は、５ｍｌ／ｋｇの投薬体積で０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射を介して静脈内投与した。製剤注射の６時間後に、２％イソフルラン下で心臓穿刺を介して最終採血を行った。血液を０．１０９Ｍクエン酸緩衝液チューブに採取し、５０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離により処理した。血清を採取し、ｅｐｏ ｍＲＮＡレベルを分析した。結果を図１４に示す。結果は、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８５、ＡＴＸ−８６、およびＡＴＸ−８７について、ＡＴＸ−２を超える実質的な改善を示す。
（実施例１７：ｉｎ ｖｉｖｏでのマウス第ＶＩＩ因子サイレンシングおよびＥＰＯ発現）
リポソームライブラリーの肝臓指向のｉｎ ｖｉｖｏでのスクリーニングを使用して、肝実質を構成する細胞である肝細胞における高レベルのｓｉＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシングを促進する一連の化合物を試験した。血液凝固因子である第ＶＩＩ因子は、肝臓への機能的ｓｉＲＮＡ送達をアッセイするための適切な標的遺伝子である。この因子は肝細胞において特異的に産生されるので、遺伝子サイレンシングは、細網内皮系の細胞（例えば、クッパー細胞）への送達ではなく、実質への送達の成功を示す。さらに、第ＶＩＩ因子は血清中で容易に測定することができる分泌タンパク質であり、動物を安楽死させる必要性を排除する。ｍＲＮＡレベルでのサイレンシングは、タンパク質のレベルを測定することによって容易に決定することができる。これは、タンパク質の半減期が短い（２〜５時間）ためである。第ＶＩＩＩ因子を対象とするｓｉＲＮＡを有する組成物を、ＡＴＸ−ＡＴＸ−００２、ＡＴＸ−５７、およびＡＴＸ−５８、ならびに比較例試料のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて製剤化した。メスのＣ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢）を、ＦＶＩＩ ｓｉＲＮＡノックダウン（ＫＤ）実験に使用した。
全ての製剤は、５ｍｇ／ｋｇの投薬体積で０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射を介して静脈内投与した。製剤注射の４８時間後に、２％イソフルラン下で心臓穿刺を介して最終採血を行った。血液を０．１０９Ｍクエン酸緩衝液チューブに採取し、１２００Ｇで１０分間の遠心分離により処理した。血漿を採取し、第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを発色アッセイ（Ｂｉｏｐｈｅｎ ＦＶＩＩ、Ａｎｉａｒａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により分析した。ＰＢＳ注射マウスからの試料を使用して標準曲線を構築し、処置群を未処置のＰＢＳ対照と比較することにより相対的な第ＶＩＩ因子発現を決定した。結果は、ＡＴＸ−５７およびＡＴＸ−５８が、０．０３と０．１ｍｇ／ｋｇの両方でＡＴＸ−００２よりも実質的に有効であることを示した（図１５）。
脂質でカプセル化されたマウスｅｐｏ ｍＲＮＡの送達後のｉｎ ｖｉｖｏでのｅｐｏタンパク質発現の評価のために、メスのＢａｌｂ／ｃマウス（６〜８週齢）を使用した。全ての製剤は、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射を介して静脈内投与した。製剤注射の６時間後に、２％イソフルラン下で心臓穿刺を介して最終採血を行った。血液を０．１０９Ｍクエン酸緩衝液チューブに採取し、５０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離により処理した。血清を採取し、ｅｐｏタンパク質レベルをｅｐｏ ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）により分析した。ＰＢＳ注射マウスからの試料を使用して標準曲線を構築し、処置群を未処置のＰＢＳ対照と比較することにより相対的な第ＶＩＩ因子発現を決定した。結果は、ｅｐｏ ｍＲＮＡが、０．１ｍｇ／ｍｌで、ＡＴＸ−２よりもＡＴＸ−５７ナノ粒子において実質的に高い量で発現することを示した（図１６）。
被験体への治療用化合物の送達は、その治療効果にとって重要であり、通常それは標的とする細胞および組織に到達する化合物の限られた能力によって妨げられ得る。ＡＴＸ−Ｂ−６、ＡＴＸ−Ｂ−７、およびＡＴＸ−Ｂ−８を含む多様なカチオン性脂質が、ＷＯ２０１６／０８１０２９において開示されている。

そのような化合物を様々な送達手段により組織の、標的とする細胞に進入させるための改良が重要である。本明細書の記載は、生物活性分子の、標的化された細胞内送達を促進する組成物および調製方法における新規な脂質に関する。
式Ｉ

（式中、
Ｒ１は、−ＣＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＨ ３ ） ２ または−ＣＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＨ ３ ）（（ＣＨ ２ ） ｎ−１ ＣＨ ３ ）であり、式中、ｎは、４、５、６、７、または８であり、
Ｒ２は、２〜２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
Ｌ１およびＬ２は、同一または異なる、それぞれ、直鎖アルキレン、または２〜２０個の炭素からなる直鎖アルケニレンであり、
Ｘ１は、ＳまたはＯであり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり、
Ｒ４およびＲ５は、同一または異なる、それぞれ、水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルである）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が記載される。
一実施形態では、以下：



の通りの式ＡＴＸ−４３、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−５８、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８６、およびＡＴＸ−８７の化合物からなる群より選択される。
一実施形態では、本明細書で記載されるものは、Ｒ１が、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり；Ｒ２が、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；Ｌ１およびＬ２が、同一または異なる、それぞれ、直鎖アルキレン、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０個の炭素からなる直鎖アルケニレンであり；Ｘ１が、ＳまたはＯであり；Ｒ３が、１、２、３、４、５、または６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり；Ｒ４およびＲ５が、同一または異なる、それぞれ、水素、または１、２、３、４、５、もしくは６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルである、化合物からなる。
好ましい実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ（（ＣＨ２）ｎＣＨ３）２であり、式中、ｎは、４、５、６、７、または８個の炭素であり；Ｒ２は、直鎖アルケニルであり；Ｌ１は、２、３、または５個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｌ２は、３、または５個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｘ１はＳであり；Ｒ３は、２または３個の炭素の直鎖アルキレンであり；Ｒ４およびＲ５は、同一または異なる、それぞれ、１または２個の炭素である。
（実施例１：例示的な脂質）
式Ｉの例示的な化合物は、表１に提示される。



脂質でカプセル化されたマウスｅｐｏ ｍＲＮＡの送達後のｉｎ ｖｉｖｏでのｅｐｏタンパク質発現の評価のために、メスのＢａｌｂ／ｃマウス（６〜８週齢）を使用した。全ての製剤は、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射を介して静脈内投与した。製剤注射の６時間後に、２％イソフルラン下で心臓穿刺を介して最終採血を行った。血液を０．１０９Ｍクエン酸緩衝液チューブに採取し、５０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離により処理した。血清を採取し、ｅｐｏタンパク質レベルをｅｐｏ ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）により分析した。ＰＢＳ注射マウスからの試料を使用して標準曲線を構築し、処置群を未処置のＰＢＳ対照と比較することにより相対的な第ＶＩＩ因子発現を決定した。結果は、ｅｐｏ ｍＲＮＡが、０．１ｍｇ／ｍｌで、ＡＴＸ−２よりもＡＴＸ−５７ナノ粒子において実質的に高い量で発現することを示した（図１６）。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
式Ｉ：

の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物であって、式中、
Ｒ １ は、１０〜３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり、
Ｒ ２ は、２〜２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
Ｒ ３ は、１〜６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり、
Ｒ ４ およびＲ ５ は、同一または異なる、それぞれ、水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルであり、
Ｌ １ およびＬ ２ は、同一または異なる、それぞれ、１〜２０個の炭素の直鎖アルキレン、または２〜２０個の炭素の直鎖アルケニレンであり、
Ｘ １ は、ＳまたはＯである、
化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
（項目２）
Ｘ １ が、Ｓからなる、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ ３ が、エチレンまたはプロピレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ ４ およびＲ ５ が、別々にメチルまたはエチルである、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｌ ２ が、１、３、または５個の炭素からなるアルケニルである、項目１に記載の化合物。
（項目６）
Ｌ １ が、１、２、３、または５個の炭素からなるアルケニルである、項目５に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ ２ が、アルケニルである、項目１に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ ２ が、９個の炭素からなるアルケニルである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ １ が、−ＣＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＨ ３ ） ２ からなり、式中、ｎは４、５、６、または７である、項目７に記載の化合物。
（項目１０）
ｎが５であり、Ｌ １ が、１または３個の炭素からなるアルケニルである、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
ｎが６であり、Ｌ １ が、３または５個の炭素からなるアルケニルである、項目９に記載の化合物。
（項目１２）
ｎが７であり、Ｌ １ が、１、２、または３個の炭素からなるアルケニルである、項目９に記載の化合物。
（項目１３）
ｎが８であり、Ｌ １ が、１または３個の炭素からなるアルケニルである、項目９に記載の化合物。
（項目１４）
Ｒ １ が、−ＣＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＨ ３ ）（（ＣＨ ２ ） ｎ＋１ ＣＨ ３ ）からなり、式中、ｎは６または７である、項目７に記載の化合物。
（項目１５）
式ＡＴＸ−４３、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−５８、ＡＴＸ−６１、ＡＴＸ−６３、ＡＴＸ−６４、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８６、ＡＴＸ−８７、およびＡＴＸ−８８：



の化合物からなる群より選択される、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
項目１に記載の化合物を含む医薬組成物。
（項目１７）
脂質ナノ粒子中の項目１に記載の化合物を含む、項目１に記載の医薬組成物。
（項目１８）
前記脂質ナノ粒子が、中性脂質およびコンジュゲート脂質をさらに含む、項目１７に記載の医薬組成物。
（項目１９）
前記脂質ナノ粒子が、ｍＲＮＡをカプセル化している、項目１７に記載の医薬組成物。
（項目２０）
生物学的に活性なタンパク質をコードするｍＲＮＡをさらに含む、項目１７に記載の医薬組成物。
（項目２１）
標的細胞中のｍＲＮＡと相同なヌクレオチド配列を含むＲＮＡをさらに含む、項目１７に記載の医薬組成物。

Claims (21)

  1. 式Ｉ：
    の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物であって、式中、
    Ｒ１は、１０〜３１個の炭素からなる分岐鎖アルキルであり、
    Ｒ２は、２〜２０個の炭素からなる直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
    Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖または分岐状のアルキレンであり、
    Ｒ４およびＲ５は、同一または異なる、それぞれ、水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐状のアルキルであり、
    Ｌ１およびＬ２は、同一または異なる、それぞれ、１〜２０個の炭素の直鎖アルキレン、または２〜２０個の炭素の直鎖アルケニレンであり、
    Ｘ１は、ＳまたはＯである、
    化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
  2. Ｘ１が、Ｓからなる、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ３が、エチレンまたはプロピレンからなる、請求項１に記載の化合物。
  4. Ｒ４およびＲ５が、別々にメチルまたはエチルである、請求項１に記載の化合物。
  5. Ｌ２が、１、３、または５個の炭素からなるアルケニルである、請求項１に記載の化合物。
  6. Ｌ１が、１、２、３、または５個の炭素からなるアルケニルである、請求項５に記載の化合物。
  7. Ｒ２が、アルケニルである、請求項１に記載の化合物。
  8. Ｒ２が、９個の炭素からなるアルケニルである、請求項７に記載の化合物。
  9. Ｒ１が、−ＣＨ（（ＣＨ２）ｎＣＨ３）２からなり、式中、ｎは４、５、６、または７である、請求項７に記載の化合物。
  10. ｎが５であり、Ｌ１が、１または３個の炭素からなるアルケニルである、請求項９に記載の化合物。
  11. ｎが６であり、Ｌ１が、３または５個の炭素からなるアルケニルである、請求項９に記載の化合物。
  12. ｎが７であり、Ｌ１が、１、２、または３個の炭素からなるアルケニルである、請求項９に記載の化合物。
  13. ｎが８であり、Ｌ１が、１または３個の炭素からなるアルケニルである、請求項９に記載の化合物。
  14. Ｒ１が、−ＣＨ（（ＣＨ２）ｎＣＨ３）（（ＣＨ２）ｎ＋１ＣＨ３）からなり、式中、ｎは６または７である、請求項７に記載の化合物。
  15. 式ＡＴＸ−４３、ＡＴＸ−５７、ＡＴＸ−５８、ＡＴＸ−６１、ＡＴＸ−６３、ＡＴＸ−６４、ＡＴＸ−８１、ＡＴＸ−８２、ＡＴＸ−８３、ＡＴＸ−８４、ＡＴＸ−８６、ＡＴＸ−８７、およびＡＴＸ−８８：
    の化合物からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
  16. 請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
  17. 脂質ナノ粒子中の請求項１に記載の化合物を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  18. 前記脂質ナノ粒子が、中性脂質およびコンジュゲート脂質をさらに含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
  19. 前記脂質ナノ粒子が、ｍＲＮＡをカプセル化している、請求項１７に記載の医薬組成物。
  20. 生物学的に活性なタンパク質をコードするｍＲＮＡをさらに含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
  21. 標的細胞中のｍＲＮＡと相同なヌクレオチド配列を含むＲＮＡをさらに含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
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