CN114917203A - 用于rna递送的可离子化阳离子脂质 - Google Patents

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CN114917203A CN202210319695.4A CN202210319695A CN114917203A CN 114917203 A CN114917203 A CN 114917203A CN 202210319695 A CN202210319695 A CN 202210319695A CN 114917203 A CN114917203 A CN 114917203A
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etoac
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约瑟夫·E·佩恩
帕玛纳·奇伍库拉
史蒂文·P·塔尼斯
普里亚·卡马利
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Arcturus Therapeutics Inc
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Abstract

一种用于RNA递送的可离子化阳离子脂质。本发明描述了式I的化合物
Figure DDA0003570003180000011
由一种化合物组成，其中R1为由10至31个碳组成的支链烷基；R2为由2至20个碳组成的直链烷基、烯基或炔基，或由10至31个碳组成的支链烷基；L1和L2相同或不同，各自为1至20个碳的直链亚烷基或2至20个碳的直链亚烯基；X1为S或O；R3为由1至6个碳组成的直链或支链亚烷基；并且R4和R5相同或不同，各自为氢或由1至6个碳组成的直链或支链烷基；或其药学上可接受的盐。

Description

用于RNA递送的可离子化阳离子脂质
本申请是申请日为2017年12月20日、申请号为201780086949.X、发明名称为“用于RNA递送的可离子化阳离子脂质”的中国发明专利申请的分案申请。
相关专利申请的交叉引用
本申请要求2016年12月21日提交的美国专利申请15/387,067的优先权。
背景技术
目前正在开发许多不同类型的核酸作为治疗许多疾病的治疗剂。随着这些分子的开发，已发展出需要以稳定且具有长货架期的形式制备它们，并且可容易地将其掺入到无水有机或无水极性非质子溶剂中，使得能够在极性水溶液或非极性溶剂中不会发生副反应的情况下包封核酸。
本文的描述涉及促进生物活性和治疗分子的细胞内递送的新型脂质组合物。本说明书还涉及包含此类脂质组合物并且可用于将治疗有效量的生物活性分子递送到患者细胞中的药物组合物。
治疗化合物向受试者的递送对于其治疗效果是重要的，并且通常其可因化合物到达靶细胞和组织的能力有限而受到阻碍。WO2016/081029中公开了各种阳离子脂质，包括化合物ATX-B-6、ATX-B-7和ATX-B-8。
Figure BDA0003570003160000011
Figure BDA0003570003160000021
改善此类化合物进入组织的靶细胞所凭借的各种递送方式是至关重要的。本文的描述涉及用于促进生物活性分子的靶向细胞内递送的新型脂质、组合物和制备方法。
通常不能有效靶向患者组织的生物活性分子的示例包括：多种蛋白质(包括免疫球蛋白蛋白质)、多核苷酸(诸如基因组DNA、cDNA或mRNA反义多核苷酸；以及许多低分子量化合物(无论是合成的还是天然存在的)，诸如肽激素和抗生素。
目前医疗从业者面临的一个基本挑战是，目前正在开发许多不同类型的核酸作为治疗许多疾病的治疗剂。这些核酸包括用于基因表达的mRNA、基因治疗中的DNA、质粒、小干扰核酸(siNA)、siRNA和用于RNA干扰(RNAi)的微RNA(miRNA)、反义分子、核糖酶、antagomirs和核酸配体。随着这些核酸的开发，需要生产易于制备并且可容易地递送至靶组织的脂质制剂。
发明内容
所描述的一个方面是式I的化合物
Figure BDA0003570003160000022
由一种化合物组成，其中
R1为由10至31个碳组成的支链烷基；
R2为由2至20个碳组成的直链烷基、烯基或炔基，或由10至31个碳组成的支链烷基；
L1和L2相同或不同，各自为1至20个碳的直链烷烃或2至20个碳的直链烯烃；
X1为S或O；
R3为由1至6个碳组成的直链或支链亚烷基；并且
R4和R5相同或不同，各自为氢或由1至6个碳组成的直链或支链烷基；或
其药学上可接受的盐。
所描述的另一个方面是式I的化合物
Figure BDA0003570003160000031
其中
R1为8、9、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L1为1至15个碳的直链亚烷基；
R2为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷基或烯基，或者8、9、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L2为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链亚烷基；
X为O或S；
R3为1、2、3、4、5或6个碳的直链亚烷基；并且
R4和R5相同或不同，各自为1、2、3、4、5或6个碳的直链或支链非环状烷基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一个实施方案中，R1具有8、9、10、11、12、13、14、16或17个碳。
在另一个实施方案中，R1包含两个相同的烷基或烯基基团。
在另一个实施方案中，R1包含烯基基团。
在另一个实施方案中，R2为烯基。
在另一个实施方案中，R2为支链非环状烷基。
在另一个实施方案中，L2具有4、5、6或7个碳。
优选地，该化合物选自由以下式的化合物构成的组：ATX-0082、ATX-0085、ATX-0083、ATX-0121、ATX-0091、ATX-0102、ATX-0098、ATX-0092、ATX-0084、ATX-0095、ATX-0125、ATX-0094、ATX-0109、ATX-0110、ATX-0118、ATX-0108、ATX-0107、ATX-0093、ATX-0097和ATX-0096
Figure BDA0003570003160000041
Figure BDA0003570003160000051
Figure BDA0003570003160000061
Figure BDA0003570003160000071
Figure BDA0003570003160000081
所描述的另一个方面是式I的化合物
Figure BDA0003570003160000091
其中
R1为12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链亚烷基；
R2为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷基或烯基，或者10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基；
L2为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链亚烷基
X为O或S；
R3为1、2、3、4、5或6个碳的直链亚烷基；
R4和R5相同或不同，各自为1、2、3、4、5或6个碳的直链或支链非环状烷基；
如通过6-(对甲苯胺基)-2-萘磺酸的荧光测量的，1mM的化合物溶液的pKa为5.6-7.0；并且
该化合物的c-LogD值在10到14之间；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一个实施方案中，R1具有12、13、14、16或17个碳。
在另一个实施方案中，R1包含两个相同的烷基或烯基基团。
在另一个实施方案中，R1包含烷基基团。
在另一个实施方案中，R2为烯基。
在另一个实施方案中，R2为支链非环状烷基。
在另一个实施方案中，L1和L2独立地具有1、2或3个碳。
在另一个实施方案中，L1和L2均具有3个碳。
在另一个实施方案中，R3为丙烯或丁烯。
在另一个实施方案中，化合物的c-LogD值为至少11，并且其测得的pKa基本大于6。
在另一个实施方案中，该化合物选自由以下式的化合物构成的组：ATX-0111、ATX-0132、ATX-0134、ATX-0100、ATX-0117、ATX-0114、ATX-0115、ATX-0101、ATX-0106、ATX-0116、ATX-0086、ATX-0058、ATX-0081、ATX-0123、ATX-0122、ATX-0057、ATX-0088、ATX-0087、ATX-0124、ATX-0126和ATX-0129。
Figure BDA0003570003160000101
Figure BDA0003570003160000111
Figure BDA0003570003160000121
Figure BDA0003570003160000131
Figure BDA0003570003160000141
Figure BDA0003570003160000151
所描述的另一个方面是式I的化合物
Figure BDA0003570003160000152
其中
R1为12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基；
L1为1、2或3个碳的直链亚烷基；
R2为8、9、10、11或12个碳的直链烯基，或者12、13、14、16或17个碳的支链非环状烷基；
L2为1、2或3个碳的直链亚烷基
X为O或S；
R3为2或3个碳的直链亚烷基；
R4和R5相同或不同，各自为1或2个碳的直链烷基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在另一个实施方案中，本文所述的阳离子脂质在药物组合物中。该药物组合物优选包含脂质纳米颗粒，该脂质纳米颗粒包含核酸，优选RNA多核苷酸。该脂质纳米颗粒优选增加循环中RNA的寿命。在另一个实施方案中，在施用药物组合物时，其中的脂质纳米颗粒将核酸递送至体内细胞。优选地，核酸具有抑制靶基因表达的活性。另选地，核酸具有增加蛋白质产量的活性，该蛋白质在体内细胞表达时进行编码。
本文还描述了通过使用上述任何组合物将核酸引入哺乳动物细胞的方法。细胞可在肝脏、肺、肾、脑、血液、脾或骨骼中。该组合物优选地通过静脉内、皮下、腹膜内注射或鞘内注射施用。优选地，本文所述的组合物用于治疗癌症或炎性疾病的方法中。该疾病可以是选自免疫障碍、癌症、肾病、纤维化疾病、遗传异常、炎症和心血管疾病的疾病。
附图说明
图1示出了来自己酸酯(SM 1)、4-氨基丁酸(SM 2)和4-溴丁酸(SM 3)的ATX-0043的合成途径。中间体(Ints)1-8和反应描述于实施例2中。
图2示出了来自辛酸酯(SM 1)、4-氨基丁酸(SM 2)和4-溴丁酸(SM 3)的ATX-0057的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例3中。
图3示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0058的与图2相同的合成途径。中间体1-7和反应描述于实施例4中。
图4示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0081的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例5中。
图5示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0082的与图2相同的合成途径。中间体1-7和反应描述于实施例6中。
图6示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0086的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例7中。
图7示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0087的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例8中。
图8示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0088的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例9中。
图9示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0083的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例10中。
图10示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0084的与图2相同的合成途径。中间体1-8和反应描述于实施例11中。
图11示出了来自SM 1和SM 2的ATX-0061的与图1相同的合成途径。中间体1-5和反应描述于实施例12中。
图12示出了来自SM 1和SM 2的ATX-0063的与图1相同的合成途径。中间体1-5和反应描述于实施例13中。
图13示出了来自SM 1和SM 2的ATX-0064的与图1相同的合成途径。中间体1-5和反应描述于实施例14中。
图14示出了ATX-0081合成途径。中间体1-6和反应描述于实施例15中。
图15示出了来自SM 1、SM 2和SM3的ATX-0085的与图2相同的合成途径。中间体1-11和反应描述于实施例16中。
图16示出了ATX-0134的合成途径。中间体1-6和反应描述于实施例17中。
图17示出了将纳米颗粒中的0.03mg/kg和0.1mg/kg mRNA注射到小鼠中之后的EPOmRNA水平(ng/ml)，该纳米颗粒包含ATX-002、ATX-0057、ATX-0081、ATX-0082、ATX-0083、ATX-0084、ATX-0085、ATX-0086或ATX-0087阳离子脂质。
图18示出了具有ATX-0057和ATX-0058的脂质体的抗因子VII敲除活性与ATX-002和对照(仅PBS)活性的对比。
图19示出了具有ATX-0057的脂质体的抗EPO敲除活性与ATX-002活性的对比。
具体实施方式
定义
“至少一个”意指一个或多个(例如，1-3、1-2或1)。
“组合物”意指包含特定量的特定成分的产品，以及直接或间接由特定量的特定成分的组合产生的任何产品。
“与…组合”意指在本发明的治疗方法中一起施用式I化合物与其他药物，意指式I化合物和其他药物以单独的剂型相继或同时施用，或者以相同的剂型同时施用。
“哺乳动物”意指人或其他哺乳动物，或意指人类。
“患者”意指人和其他哺乳动物，优选人。
“烷基”意指饱和或不饱和的直链或支链烃链。在各种实施方案中，烷基基团具有1-18个碳，即为C1-C18基团，或者为C1-C12基团、C1-C6基团或C1-C4基团。独立地，在各种实施方案中，烷基基团具有零个支链(即，为直链)、一个支链、两个支链或超过两个支链。“烯基”为可具有一个双键、两个双键或超过两个双键的不饱和烷基。“炔基”为可具有一个三键、两个三键或超过两个三键的不饱和烷基。烷基链可任选地被1个取代基(即，烷基基团是单取代的)、或1-2个取代基、或1-3个取代基，或1-4取代基等取代。取代基可选自由以下项构成的组：羟基、氨基、烷基氨基、硼基、羧基、硝基、氰基等。当烷基基团包含一个或多个杂原子时，该烷基基团在本文中被称之为杂烷基基团。当烷基基团上的取代基为烃时，则所得的基团简称为取代烷基。在各个方面，包括取代基的烷基基团具有少于25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8或7个碳。
“低级烷基”意指链中具有一至六个碳的基团，该链可以是直链或支链。合适的烷基基团的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和己基。
“烷氧基”意指烷基-O-基团，其中烷基如上所定义。烷氧基的非限制性示例包括：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。与母体部分的键合是通过醚氧。
“烷氧基烷基”意指烷氧基-烷基-基团，其中烷氧基和烷基如前所述。优选的烷氧基烷基包括低级烷基。与母体部分的键合是通过烷基。
“烷基芳基”意指烷基-芳基-基团，其中烷基和芳基如前所述。优选的烷基芳基包括低级烷基。与母体部分的键合是通过芳基。
“氨基烷基”意指NH2-烷基-基团，其中烷基如上所定义，通过烷基基团与母体部分结合。
“羧基烷基”意指HOOC-烷基-基团，其中烷基如上所定义，通过烷基基团与母体部分结合。
“可商购的化学品”和本文所述实施例中所使用的化学品可购自标准商业来源，其中此类来源包括：例如Acros Organics(Pittsburgh,Pa.)、Sigma-Adrich Chemical(Milwaukee,Wis.)、Avocado Research(Lancashire,U.K.)、Bionet(Cornwall,U.K.)、Boron Molecular(Research Triangle Park,N.C.)、Combi-Blocks(San Diego,Calif.)、Eastman Organic Chemicals,Eastman Kodak Company(Rochester,N.Y.)、FisherScientific Co.(Pittsburgh,Pa.)、Frontier Scientific(Logan,Utah)、ICNBiomedicals,Inc.(Costa Mesa,Calif.)、Lancaster Synthesis(Windham,N.H.)、Maybridge Chemical Co.(Cornwall,U.K.)、Pierce Chemical Co.(Rockford,Ill.)、Riedel de Haen(Hannover,Germany)、Spectrum Quality Product,Inc.(New Brunswick,N.J.)、TCI America(Portland,Oreg.)和Wako Chemicals USA,Inc.(Richmond,Va.)。
如本领域的普通技术人员所知，“化学文献中所述的化合物”可通过涉及化学化合物和化学反应的参考书籍和数据库来鉴定。详述可用于制备本文所公开的化合物的反应物的合成或提供描述本文所公开的化合物的制备的制品的参考书籍和论文包括：例如“Synthetic Organic Chemistry”，John Wiley and Sons,Inc.New York；S.R.Sandler等人，“Organic Functional Group Preparations”，第2版，Academic Press,New York,1983；H.O.House，“Modern Synthetic Reactions”，第2版，W.A.Benjamin,Inc.MenloPark,Calif.,1972；T.L.Glichrist，“Heterocyclic Chemistry”，第2版，John Wiley andSons,New York,1992；J.March，“Advanced Organic Chemistry:reactions,Mechanismsand Structure”，第5版，Wiley Interscience,New York,2001；具体和类似的反应物也可通过美国化学协会化学摘要服务社制备的已知化学品的索引来鉴定，这些索引可在大多数公共和大学图书馆以及通过在线数据库获得(可联系位于华盛顿特区的美国化学协会获取更多详细信息)。目录中已知但未商业化的化学品可通过定制化学合成公司制备，其中许多标准化学品供应商(诸如上文所列的那些)提供定制的合成服务。
“卤”意指氟、氯、溴或碘基团。优选的为氟、氯或溴，并且更优选的为氟和氯。
“卤素”意指氟、氯、溴或碘。优选的为氟、氯和溴。
“杂烷基”意指含有碳和至少一个杂原子的饱和或不饱和的直链或支链。在各种实施方案中，杂烷基可具有一个杂原子、或1-2个杂原子、或1-3个杂原子、或1-4个杂原子。在一个方面，杂烷基链含有1至18(即1-18)个成员原子(碳和杂原子)，并且在各种实施方案中含有1-12、或1-6或1-4个成员原子。独立地，在各种实施方案中，杂烷基具有零个支链(即，是直链)、一个支链、两个支链或超过两个支链。独立地，在一个实施方案中，杂烷基基团是饱和的。在另一个实施方案中，杂烷基基团是不饱和的。在各种实施方案中，不饱和的杂烷基可具有一个双键、两个双键、超过两个双键和/或一个三键、两个三键、或超过两个三键。杂烷基链可以是取代或未取代的。在一个实施方案中，杂烷基链是未取代的。在另一个实施方案中，杂烷基链是取代的。取代的杂烷基链可具有1个取代基(即，通过单取代)、或可具有例如1-2个取代基、或1-3个取代基、或1-4个取代基。示例性杂烷基取代基包括酯(—C(O)—O—R)和羰基(—C(O)—)。
“羟烷基”是指HO-烷基-基团，其中烷基先前被定义。优选的羟烷基含有低级烷基。合适的羟烷基的非限制性示例包括羟甲基和2-羟乙基。
“水合物”意指其中溶剂分子为H2O的溶剂化物。
“脂质”意指包含脂肪酸酯且其特征在于不溶于水但可溶于许多有机溶剂的有机化合物。脂质通常分成至少三类：(1)“简单脂质”，其包括脂肪和油以及蜡；(2)“复合脂质”，其包括磷脂、糖脂、阳离子脂质、非阳离子脂质、中性脂质和阴离子脂质，所有这些均在本文中更详细地描述；以及(3)“衍生脂质”，诸如类固醇。
“脂质颗粒”是指可用于将治疗性核酸(例如mRNA)递送至感兴趣的目标位点(例如，细胞、组织、器官等)的脂质制剂。在优选的实施方案中，脂质颗粒是核酸-脂质颗粒，其通常由阳离子脂质、非阳离子脂质(例如，磷脂)、防止颗粒聚集的缀合脂质(例如，PEG脂质)和任选的胆固醇形成。通常，可将治疗性核酸(例如，mRNA)包封在颗粒的脂质部分中，从而保护其免于酶促降解。
脂质颗粒的平均直径通常为30nm至150nm、40nm至150nm、50nm至150nm、60nm至130nm、70nm至110nm、70nm至100nm、80nm至100nm、90nm至100nm、70nm至90nm、80nm至90nm、70nm至80nm、或30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm或150nm，并且基本上无毒。此外，当存在于本发明的脂质颗粒中时，核酸在水溶液中对核酸酶的降解具有抗性。
“脂质包封的”意指提供具有完全包封、部分包封或两者的治疗性核酸诸如mRNA的脂质颗粒。在优选的实施方案中，核酸(例如mRNA)完全包封在脂质颗粒中。
“脂质缀合物”意指抑制脂质颗粒聚集的缀合脂质。此类脂质缀合物包括但不限于：PEG-脂质缀合物(例如与二烷氧基丙基偶联的PEG(例如，PEG-DAA缀合物))、与二酰基甘油偶联的PEG(例如，PEG-DAG缀合物)、与胆固醇偶联的PEG、与磷脂酰乙醇胺偶联的PEG以及与神经酰胺缀合的PEG、阳离子PEG脂质、聚恶唑烷酮(POZ)-脂质缀合物、聚酰胺低聚物、以及它们的混合物。PEG或POZ可直接缀合至脂质或可经由接头部分连接到脂质。可使用适于将PEG或POZ偶联至脂质的任何接头部分，包括例如含非酯的接头部分和含酯的接头部分。在某些优选的实施方案中，使用含非酯的接头部分，诸如酰胺或氨基甲酸酯。
“两亲性脂质”意指其中脂质材料的疏水部分朝疏水相取向而亲水部分朝向水相取向的材料。亲水性特征源于极性或带电基团诸如碳水化合物、磷酸根、羧基、硫酸根、氨基、巯基、硝基、羟基和其他类似基团的存在。疏水性可通过包括非极性基团来赋予，所述非极性基团包括但不限于长链饱和和不饱和脂族烃基以及被一个或多个芳族、脂环族或杂环基团取代的此类基团。两亲化合物的示例包括但不限于磷脂、氨基脂和鞘脂。
磷脂的代表性示例包括但不限于，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱和二亚油酰磷脂酰胆碱。其他缺乏磷的化合物诸如鞘脂、鞘糖脂家族、二酰基甘油和β-酰氧基酸，也在称为两亲性脂质的组中。另外，上述两亲性脂质可与其他脂质(包括甘油三酯和甾醇)混合。
“中性脂质”意指在选定的pH下以不带电或中性的两性离子形式存在的脂质物质。在生理pH下，此类脂质包括例如二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、神经酰胺、鞘磷脂、脑磷脂、胆固醇、脑苷脂和二酰基甘油。
“非阳离子脂质”意指两亲性脂质或中性脂质或阴离子脂质，并在下文更详细地描述。
“阴离子脂质”意指在生理pH下带负电的脂质。这些脂质包括但不限于磷脂酰甘油、心磷脂、二酰基磷脂酰丝氨酸、二酰基磷脂酸、N-十二烷酰基磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰基磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰基磷脂酰乙醇胺、赖氨酰基磷脂酰甘油、棕榈酰基磷脂酰甘油(POPG)和与中性脂质接合的其他阴离子修饰基团。
“疏水性脂质”意指具有非极性基团的化合物，所述极性基团包括但不限于长链饱和和不饱和脂族烃基以及任选被一个或多个芳族、脂环族或杂环基团取代的此类基团。合适的示例包括但不限于二酰基甘油、二烷基甘油、N-N-二烷基氨基、1,2-二酰氧基-3-氨基丙烷和1,2-二烷基-3-氨基丙烷。
“阳离子脂质”和“氨基脂质”可互换使用，意指具有一个、两个、三个或更多个脂肪酸或脂肪烷基链和可pH滴定的氨基头部基团(例如，烷基氨基或二烷基氨基头部基团)的那些脂质及其盐。阳离子脂质通常在低于阳离子脂质的pKa的pH下质子化(即带正电)，并且在高于pKa的pH下为基本上中性的。本发明的阳离子脂质也可称为可滴定的阳离子脂质。在一些实施方案中，阳离子脂质包含：可质子化的叔胺(例如，可pH滴定的)头部基团；C18烷基链，其中每个烷基链独立地具有0至3(例如，0、1、2或3)个双键；以及在头部基团与烷基链之间的醚键、酯键或缩酮键。此类阳离子脂质包括但不限于DSDMA、DODMA、DLinDMA、DLenDMA、γ-DLenDMA、DLin-K-DMA、DLin-K-C2-DMA(也称为DLin-C2K-DMA、XTC2和C2K)、DLin-K-C3-DMA、DLin-K-C4-DMA、DLen-C2K-DMA、γ-DLen-C2K-DMA、DLin-M-C2-DMA(也称为MC2)、DLin-M-C3-DMA(也称为MC3)和(DLin-MP-DMA)(也称为1-B11)。
“取代的”意指用氢以外的特定基团或者用一个或多个可相同或不同的基团、部分或自由基取代，其中例如独立地选择每个基团、部分或自由基。
“反义核酸”意指通过RNA-RNA或RNA-DNA或RNA-PNA(蛋白质核酸；Egholm等人，1993Nature 365,566)相互作用与目标RNA结合并改变目标RNA的活性的非酶促核酸分子(综述参见Stein和Cheng，1993Science 261,1004和Woolf等人，美国专利5,849,902)。通常，反义分子沿反义分子的单个连续序列与目标序列互补。然而，在某些实施方案中，反义分子可与底物结合使得底物分子形成环，以及/或者反义分子可结合使得反义分子形成环。因此，反义分子可与两个(或甚至更多个)非连续的底物序列互补，或反义分子的两个(或甚至更多个)非连续的序列部分可与目标序列互补，或两者。此外，反义DNA可用于通过DNA-RNA相互作用靶向RNA，从而激活RNA酶H，该酶消化双链体中的目标RNA。反义寡核苷酸可包含一个或多个RNA酶H激活区，其能够激活RNA酶H切割目标RNA。反义DNA可化学合成或通过使用单链DNA表达载体或其等同物表达。“反义RNA”是具有与目标基因mRNA互补的序列的RNA链，其可通过结合目标基因mRNA来诱导RNAi。“反义RNA”是具有与目标基因mRNA互补的序列的RNA链，并且被认为通过与目标基因mRNA结合来诱导RNAi。“有义RNA”具有与反义RNA互补的序列，并与其互补反义RNA退火以形成iNA。这些反义和有义RNA已常规地用RNA合成器合成。
“核酸”意指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸以及它们的聚合物。该术语涵盖含有已知核苷酸类似物或修饰的主链残基或连接的核酸，其是合成的、天然存在的和非天然存在的，其具有与参考核酸相似的结合性质并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的示例包括但不限于硫代磷酸酯、硫代磷酰胺、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2'-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。
“RNA”意指包含至少一个核糖核苷酸残基的分子。所谓“核糖核苷酸”是指在β-D-核糖-呋喃糖部分的2'位置具有羟基的核苷酸。这些术语包括双链RNA、单链RNA、分离的RNA，诸如部分纯化的RNA、基本上纯的RNA、合成的RNA、重组产生的RNA以及通过添加、缺失、取代和/或改变一个或多个核苷酸而不同于天然RNA的改变的RNA。此类改变可包括添加非核苷酸物质，例如添加到干扰RNA的一个或多个端部或内部，例如在RNA的一个或多个核苷酸处。本发明的RNA分子中的核苷酸还可包含非标准核苷酸，诸如非天然存在的核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些改变的RNA可被称为类似物或天然存在的RNA的类似物。如本文所用，术语“核糖核酸”和“RNA”是指含有至少一个核糖核苷酸残基的分子，包括siRNA、反义RNA、单链RNA、微RNA、mRNA、非编码RNA和多价RNA。核糖核苷酸是在β-D-核糖-呋喃糖部分的2'位置具有羟基的核苷酸。这些术语包括双链RNA、单链RNA、分离的RNA，诸如部分纯化的RNA、基本上纯的RNA、合成的RNA、重组产生的RNA以及通过添加、缺失、取代、修饰和/或改变一个或多个核苷酸而不同于天然RNA的修饰和改变的RNA。RNA的改变可包括添加非核苷酸材料，诸如添加到干扰RNA的一个或多个端部或内部(例如在RNA分子中RNA核苷酸的一个或多个核苷酸处)，包括非标准核苷酸，诸如作为非天然存在的核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些改变的RNA可被称为类似物。
“核苷酸”意指天然碱基(标准)和本领域熟知的修饰碱基。此类碱基通常位于核苷酸糖部分的1'位置。核苷酸通常包含碱基、糖和磷酸酯基团。核苷酸可未被修饰或在糖、磷酸酯和/或碱基部分处修饰(也可互换地称为核苷酸类似物、修饰的核苷酸、非天然核苷酸、非标准核苷酸等；参见例如Usman和McSwiggen，同上；Eckstein等人，国际PCT公布WO92/07065；Usman等人，国际PCT公布WO 93/15187；Uhlman和Peyman，同上)。存在本领域已知的修饰核酸碱基的若干示例，如Limbach等人，Nucleic Acids Res.22:2183,1994所汇总的。可引入核酸分子的碱基修饰的一些非限制性示例包括：肌苷、嘌呤、吡啶-4-酮、吡啶-2-酮、苯基、假尿嘧啶、2,4,6-三甲氧基苯、3-甲基尿嘧啶、二氢尿苷、萘基、氨基苯基、5-烷基胞苷(例如，5-甲基胞苷)、5-烷基尿苷(例如，核糖胸苷)、5-卤代尿苷(例如，5-溴尿苷)或6-氮杂嘧啶或6-烷基嘧啶(例如，6-甲基尿苷)、丙炔等(Burgin等人，Biochemistry 35:14090,1996；Uhlman和Peyman，同上)。在这方面，所谓“修饰碱基”意指在1'位置的腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶以外的核苷酸碱基或它们的等同物。
“互补核苷酸碱基”意指彼此形成氢键的一对核苷酸碱基。在RNA中，腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)配对，鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)配对。核酸的互补片段或链彼此杂交(即通过氢键合接合)。所谓“互补”意指核酸可通过传统的Watson-Crick或其他非传统结合模式与另一核酸序列形成一个或多个氢键。
“微RNA”(miRNA)意指长度为21-23个核苷酸的单链RNA分子，其调节由从DNA转录但未翻译成蛋白质的基因编码的基因表达miRNA(非编码RNA)；相反，它们从称为pri-miRNA的初级转录物加工成称为pre-miRNA的短茎环结构，并最后转化成功能性miRNA。成熟miRNA分子与一个或多个信使RNA(mRNA)分子部分互补，并且它们的主要功能是下调基因表达
“小干扰RNA(siRNA)”和“短干扰RNA”和“沉默RNA”意指在生物学中起多种作用的一类长度为16-40个核苷酸的双链RNA分子。最值得注意的是，siRNA参与RNA干扰(RNAi)途径，其中它干扰特定基因的表达。除了它们在RNAi途径中的作用外，siRNA还在RNAi相关途径中起作用，例如作为抗病毒机制或用于使基因组的染色质结构成型；这些途径的复杂性现在才被阐明。
“RNAi”意指RNA依赖性基因沉默过程，其由RNA诱导的沉默复合物(RISC)控制并由细胞中的短双链RNA分子启动，其中它们与催化RISC组分argonaute相互作用。当双链RNA或RNA样iNA或siRNA是外源的(来自具有RNA基因组的病毒感染或来自转染的iNA或siRNA)时，RNA或iNA被直接导入细胞质中并被dicer酶切割成短片段。起始dsRNA也可以是内源的(起源于细胞)，如在由基因组中的RNA编码基因表达的pre-microRNA中。首先处理来自这些基因的初级转录物以在细胞核中形成pre-miRNA的特征性茎环结构，然后将其输出到细胞质中以通过dicer酶切割。因此，外源和内源的两种dsRNA途径在RISC复合物处会聚。RNA诱导的沉默复合物(RISC)的活性组分是被称为argonaute蛋白的核酸内切酶，其切割与其结合的siRNA或iNA互补的目标mRNA链。由于dicer酶产生的片段是双链的，它们在理论上可各自产生功能性siRNA或iNA。然而，这两条链中的仅一条(称为引导链)结合argonaute蛋白并指导基因沉默。在RISC活化期间，另一抗引导链或过客链被降解。
式I的化合物
除非另外指明，否则本文提及的式I化合物应被理解为包括其盐。本文所用，术语“一种或多种盐”代表与无机和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。此外，当式I的化合物含有碱性部分(例如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不限于羧酸)，可以形成两性离子(“内盐”)并包括在如本文所用的术语“一种或多种盐”中。盐可以是药学上可接受的(即，无毒、生理学上可接受的)盐，但是其他盐也是可用的。式I的化合物的盐可例如通过使式I的化合物与一定量的酸或碱(诸如当量)在诸如盐沉淀的介质中或在水性介质中反应然后冻干而形成。
示例性的酸加成盐包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(诸如本文所述的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯磺酸盐(tosylates))、十一烷酸盐等。另外，通常认为适合于由碱性药物化合物形成药学上可用的盐的酸例如在以下文献中有所讨论：S.Berge等人，J.PharmaceuticalSciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,InternationalJ.Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等人，The Practice ofMedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York；以及The Orange Book(其网站上的Food&Drug Administration,Washington,D.C.)。
示例性碱性盐包括铵盐、碱金属盐(诸如钠盐、锂盐和钾盐)、碱土金属盐(诸如钙盐和镁盐)、具有有机碱(例如有机胺)(诸如苄星、二环己胺、羟胺(由N,N-双(脱氢枞基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁胺)的盐以及具有氨基酸(诸如精氨酸或赖氨酸)的盐。碱性含氮基团可用以下试剂进行季铵化，诸如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基、十四烷基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳基烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)及其他。
所有此类酸和碱盐均旨在为本公开范围内的药学上可接受的盐，并且出于本公开的目的，所有的酸和碱盐均被认为等同于对应的式I的化合物的游离形式。
式I的化合物能够以非溶剂化和溶剂化形式存在，包括水合形式。一般来讲，出于本公开的目的，具有药学上可接受的溶剂(诸如水、乙醇等)的溶剂化形式等同于非溶剂化形式。
式I的化合物及其盐、溶剂化物可以它们的互变异构形式(例如，作为酰胺或亚氨基醚)存在。本文设想所有此类互变异构形式作为本公开的一部分。
在本公开范围内的还有本公开化合物的多晶型物(即，式I的化合物的多晶型物在本公开的范围内)。
设想本发明化合物的所有立体异构体(例如，几何异构体、光学异构体等)(包括化合物的盐、溶剂化物和前药以及前药的盐和溶剂化物)，诸如由于各种取代基上的不对称碳可能存在的那些(包括对映体形式(即使在不存在不对称碳的情况下也可存在)、旋转形式、阻转异构形式和非对映形式)也包括在本公开的范围内。本公开的化合物的各种立体异构体可例如基本上不含其他异构体，或者可例如作为消旋体或与所有其他或其他选择的立体异构体混合。本文化合物的手性中心可具有如IUPAC 1974推荐所定义的S或R构型。术语“盐”、“溶剂化物”等的使用旨在同样适用于所公开化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、消旋体或前药的盐和溶剂化物。
可用作化学治疗剂(抗肿瘤剂)的化合物的类别包括：烷化剂、抗代谢物、天然产物及其衍生物、激素和类固醇(包括合成类似物)以及合成剂。以下给出了这些类别中的化合物的示例。
脂质颗粒
式I的化合物包括在脂质组合物中的其药学上可接受的盐，该脂质组合物包含纳米颗粒或脂质分子的双层。脂质双层优选还包含中性脂质或聚合物。脂质组合物优选包含液体介质。该组合物优选还包封核酸。核酸优选具有通过利用RNA干扰(RNAi)抑制目标基因表达的活性。脂质组合物优选还包含核酸和中性脂质或聚合物。脂质组合物优选包封核酸。
本说明书提供了包含一种或多种包封在脂质颗粒内的治疗性mRNA分子的脂质颗粒。
在一些实施方案中，mRNA完全包封在脂质颗粒的脂质部分内，使得脂质颗粒中的mRNA在水溶液中对核酸酶降解具有抗性。在其他实施方案中，本文所述的脂质颗粒对哺乳动物诸如人类基本上无毒。脂质颗粒的平均直径通常为30nm至150nm、40nm至150nm、50nm至150nm、60nm至130nm、70nm至110nm或70至90nm。本发明的脂质颗粒通常还具有1:1至100:1、1:1至50:1、2:1至25:1、3:1至20:1、5:1至15:1、或5:1至10:1、或10:1至14:1、或9:1至20:1的脂质：RNA比(质量/质量比)。在一个实施方案中，脂质颗粒具有12:1的脂质：RNA比(质量/质量比)。在另一个实施方案中，脂质颗粒具有13:1的脂质：mRNA比(质量/质量比)。
在优选的实施方案中，脂质颗粒包含mRNA、阳离子脂质(例如，本文所述的一种或多种阳离子脂质或其盐)、磷脂和抑制颗粒聚集的缀合脂质(例如，一种或多种PEG-脂质缀合物)。脂质颗粒也可包括胆固醇。脂质颗粒可包含表达一种或多种多肽的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个mRNA。
在核酸-脂质颗粒中，mRNA可完全包封在颗粒的脂质部分内，从而保护核酸免受核酸酶降解。在优选的实施方案中，包含mRNA的脂质颗粒被完全包封在颗粒的脂质部分内，从而保护核酸免受核酸酶降解。在某些情况下，在将颗粒暴露于37℃的核酸酶至少20、30、45或60分钟后，脂质颗粒中的mRNA基本上不降解。在某些其他情况下，将颗粒在血清中于37℃下孵育至少30、45或60分钟或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34或36小时后，脂质颗粒中的mRNA基本上不降解。在其他实施方案中，mRNA与颗粒的脂质部分复合。本发明制剂的一个益处是核酸-脂质颗粒组合物对哺乳动物诸如人类基本上无毒。
“完全包封”意指核酸-脂质颗粒中的核酸(例如mRNA)在暴露于将显著降解游离RNA的血清或核酸酶测定后不会显著降解。当完全包封时，颗粒中优选小于25％的核酸在通常降解100％的游离核酸的处理中降解，颗粒中更优选小于10％、最优选小于5％的核酸被降解。“完全包封”还意指核酸-脂质颗粒在体内施用时不会快速分解成其组成部分。
在核酸的情况下，可通过进行膜不可渗透的荧光染料排除测定来确定完全包封，所述测定使用当与核酸缔合时具有增强的荧光的染料。通过将染料添加到脂质体制剂中，测量所得荧光，并将其与添加少量非离子洗涤剂时观察到的荧光进行比较来确定包封。洗涤剂介导的脂质体双层的破坏释放包封的核酸，从而允许其与膜不可渗透的染料相互作用。核酸包封可计算为E＝(I0-I)/I0，其中/并且I0是指添加洗涤剂之前和之后的荧光强度。
在其他实施方案中，本发明提供了包含多个核酸-脂质颗粒的核酸-脂质颗粒组合物。
脂质颗粒包含完全包封在颗粒的脂质部分内的mRNA，使得30％至100％、40％至100％、50％至100％、60％至100％、70％至100％、80％至100％、90％至100％、30％至95％、40％至95％、50％至95％、60％至95％、70％至95％、80％至95％、85％至95％、90％至95％、30％至90％、40％至90％、50％至90％、60％至90％、70％至90％、80％至90％、或至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％(或其任何分数或其中的范围)的颗粒具有包封在其中的mRNA。
根椐脂质颗粒的预期用途，可改变组分的比例，并且可使用本领域已知的测定法测量特定制剂的递送效率。
阳离子脂质
本说明书包括某些阳离子脂质化合物的合成。该化合物特别适于将多核苷酸递送至细胞和组织，如后续章节所示。本文所述的脂环大环化合物可用于其他目的以及例如接受者和添加剂。
阳离子脂质化合物的合成方法可通过本领域的技术合成。本领域技术人员将认识到制备这些化合物的其他方法，并且还可制备本说明书的其他化合物。
阳离子脂质化合物可与试剂混合以形成微粒、纳米粒子、脂质体或胶束。由颗粒、脂质体或胶束递送的试剂可以是气体、液体或固体的形式，并且试剂可以是多核苷酸、蛋白质、肽或小分子。脂环大环化合物可与其他阳离子脂质化合物、聚合物(合成或天然的)、表面活性剂、胆固醇、碳水化合物、蛋白质或脂质混合以形成颗粒。然后可任选地将这些颗粒与药物赋形剂混合以形成药物组合物。
本说明书提供了基于使用此类阳离子脂质化合物的新型阳离子脂质化合物和药物递送系统。该系统可用于药物/药递送领域，以将多核苷酸、蛋白质、小分子、肽、抗原或药递送至患者、组织、器官或细胞。这些新化合物也可用作涂料层、添加剂、赋形剂、材料或生物工程的材料。
本说明书的阳离子脂质化合物在药物递送领域中提供了若干不同的用途。阳离子脂质化合物的含胺部分可用于复合多核苷酸，从而增强多核苷酸的递送并防止其降解。阳离子脂质化合物还可用于形成含有待递送试剂的超微粒子、纳米粒子、微粒、脂质体和胶束。优选地，阳离子脂质化合物是生物相容性的和可生物降解的，并且所形成的颗粒也是可生物降解的和生物相容性的，并且可用于提供待递送试剂的受控持续释放。这些及其对应的颗粒也可响应pH变化，只要这些颗粒在较低的pH下质子化。它们还可在向细胞递送试剂中起到质子海绵的作用，从而引起内体溶解。
在某些实施方案中，阳离子脂质化合物是相对无细胞毒性的。阳离子脂质化合物可以是生物相容性的和可生物降解的。阳离子脂质可具有约5.5至约7.5、更优选在约6.0至约7.0之间的范围内的测量的pKa(在制剂环境中)。其可被设计成具有在约3.0至约9.0之间、或在约5.0至约8.0之间的期望pKa。本文所述的阳离子脂质化合物对于药物递送特别有吸引力，若干原因如下：它们含有用于与DNA、RNA、其他多核苷酸和其他带负电的试剂相互作用、用于缓冲pH、用于引起内渗透、用于保护待递送的试剂的氨基，它们可由可商购获得的原料合成；和/或它们是pH响应性的，并且可工程化具有期望的pKa。
中性辅助脂质
非阳离子脂质的非限制性示例包括磷脂，诸如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(ESM)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、双十六烷基磷酸酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰-磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕榈酰油酰-磷脂酰甘油(POPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰-磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰-磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰乙醇胺(DSPE)、单甲基-磷脂酰乙醇胺、二甲基-磷脂酰乙醇胺、二乙酰-磷脂酰乙醇胺(DEPE)、硬脂酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)、溶血磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱、以及它们的混合物。也可以使用其他二酰基磷脂酰胆碱和二酰基磷脂酰乙醇胺磷脂。这些脂质中的酰基优选是衍生自具有C10-C24碳链的脂肪酸的酰基，例如月桂酰、肉豆蔻酰、棕榈酰、硬脂酰或油酰。
非阳离子脂质的其他示例包括甾醇，诸如胆固醇及其衍生物。胆固醇衍生物的非限制性示例包括：极性类似物，诸如5α-胆固烷醇、5α-粪固醇、胆固醇基-(2'-羟基)-乙基醚、胆固醇基-(4'-羟基)-丁基醚和6-酮胆甾烷醇；非极性类似物，诸如5α-胆甾烷、胆甾烯酮、5α-胆甾烯酮、5α-胆甾烯酮和癸酸胆固醇酯；以及它们的混合物。在优选的实施方案中，胆固醇衍生物为极性类似物，诸如胆固醇基-(4'-羟基)-丁基醚。
在一些实施方案中，存在于脂质颗粒中的非阳离子脂质包含一种或多种磷脂和胆固醇或其衍生物的混合物或由其组成。在其他实施方案中，存在于脂质颗粒中的非阳离子脂质包含一种或多种磷脂或由一种或多种磷脂组成，例如，不含胆固醇的脂质颗粒制剂。在其他实施方案中，存在于脂质颗粒中的非阳离子脂质包含胆固醇或其衍生物或由其组成，例如，不含磷脂的脂质颗粒制剂。
非阳离子脂质的其他示例包括不含磷的脂质，例如硬脂胺、十二烷基胺、十六烷基胺、乙酰基棕榈酸酯、甘油蓖麻油酸酯、硬脂酸十六烷酯、肉豆蔻酸异丙酯、两性丙烯酸类聚合物、三乙醇胺-十二烷基硫酸酯、烷基-芳基硫酸酯聚乙氧基化脂肪酸酰胺、双十八烷基二甲基溴化铵、神经酰胺和鞘磷脂。
在一些实施方案中，非阳离子脂质占存在于颗粒中的总脂质的10mol％至60mol％、20mol％至55mol％、20mol％至45mol％、20mol％至40mol％、25mol％至50mol％、25mol％至45mol％、30mol％至50mol％、30mol％至45mol％、30mol％至40mol％、35mol％至45mol％、37mol％至42mol％、或35mol％、36mol％、37mol％、38mol％、39mol％、40mol％、41mol％、42mol％、43mol％、44mol％或45mol％(或其任何分数或其中的范围)。
在脂质颗粒含有磷脂和胆固醇或胆固醇衍生物的混合物的实施方案中，该混合物可占存在于颗粒中的总脂质的至多40mol％、45mol％、50mol％、55mol％或60mol％。
在一些实施方案中，混合物中的磷脂组分可占存在于颗粒中的总脂质的2mol％至20mol％、2mol％至15mol％、2mol％至12mol％、4mol％至15mol％或4mol％至10mol％(或其任何分数或其中的范围)。在某些优选的实施方案中，混合物中的磷脂组分占存在于颗粒中的总脂质的5mol％至10mol％、5mol％至9mol％、5mol％至8mol％、6mol％至9mol％、6mol％至8mol％、或5mol％、6mol％、7mol％、8mol％、9mol％或10mol％(或其任何分数或其中的范围)。
在其他实施方案中，混合物中的胆固醇组分可占存在于颗粒中的总脂质的25mol％至45mol％、25mol％至40mol％、30mol％至45mol％、30mol％至40mol％、27mol％至37mol％、25mol％至30mol％或35mol％至40mol％(或其任何分数或其中的范围)。在某些优选的实施方案中，混合物中的胆固醇组分占存在于颗粒中的总脂质的25mol％至35mol％、27mol％至35mol％、29mol％至35mol％、30mol％至35mol％、30mol％至34mol％、31mol％至33mol％、或30mol％、31mol％、32mol％、33mol％、34mol％或35mol％。
在脂质颗粒不含磷脂的实施方案中，胆固醇或其衍生物可占存在于颗粒中的总脂质的至多25mol％、30mol％、35mol％、40mol％、45mol％、50mol％、55mol％或60mol％。
在一些实施方案中，不含磷脂的脂质颗粒制剂中的胆固醇或其衍生物可占存在于颗粒中的总脂质的25mol％至45mol％、25mol％至40mol％、30mol％至45mol％、30mol％至40mol％、31mol％至39mol％、32mol％至38mol％、33mol％至37mol％、35mol％至45mol％、30mol％至35mol％、35mol％至40mol％、或30mol％、31mol％、32mol％、33mol％、34mol％、35mol％、36mol％、37mol％、38mol％、39mol％或40mol％(或其任何分数或其中的范围)。
在其他实施方案中，非阳离子脂质占存在于颗粒中的总脂质的5mol％至90mol％、10mol％至85mol％、20mol％至80mol％、10mol％(例如仅磷脂)或60mol％(例如，磷脂和胆固醇或其衍生物)(或其任何分数或其中的范围)。
存在于脂质颗粒中的非阳离子脂质的百分比是目标量，并且制剂中存在的非阳离子脂质的实际量可变化例如±5mol％。
含有阳离子脂质化合物的组合物可以是30-70％阳离子脂质化合物、0-60％胆固醇、0-30％磷脂和1-10％聚乙二醇(PEG)。优选地，该组合物是30-40％阳离子脂质化合物、40-50％胆固醇和10-20％PEG。在其他优选的实施方案中，该组合物是50-75％阳离子脂质化合物、20-40％胆固醇和5-10％磷脂和1-10％PEG。该组合物可含有60-70％阳离子脂质化合物、25-35％胆固醇和5-10％PEG。该组合物可含有高达90％的阳离子脂质化合物和2-15％的辅助脂质。
制剂可以是脂质颗粒制剂，例如含有8-30％化合物、5-30％辅助脂质和0-20％胆固醇；4-25％阳离子脂质、4-25％辅助脂质、2-25％胆固醇、10-35％胆固醇-PEG和5％胆固醇胺；或2-30％阳离子脂质、2-30％辅助脂质、1-15％胆固醇、2-35％胆固醇-PEG和1-20％胆固醇胺；或高达90％的阳离子脂质和2-10％的辅助脂质，或甚至100％的阳离子脂质。
脂质缀合物
除阳离子外，本文所述的脂质颗粒还可包含脂质缀合物。缀合脂质是有用的，因为它可防止颗粒聚集。合适的缀合脂质包括但不限于PEG-脂质缀合物、阳离子-聚合物-脂质缀合物、以及它们的混合物。
在一个优选的实施方案中，脂质缀合物是PEG-脂质。PEG-脂质的示例包括但不限于与二烷氧基丙基偶联的PEG(PEG-DAA)、与二酰基甘油偶联的PEG(PEG-DAG)、与磷脂(诸如磷脂酰乙醇胺)偶联的PEG(PEG-PE)、与神经酰胺缀合的PEG、与胆固醇或其衍生物缀合的PEG、以及它们的混合物。
PEG是具有两个末端羟基的乙烯PEG重复单元的直链水溶性聚合物。PEG按其分子量分类；包括以下：单甲氧基聚乙二醇(MePEG-OH)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酸酯(MePEG-S)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(MePEG-S-NHS)、单甲氧基聚乙二醇-胺(MePEG-NH2)、单甲氧基聚乙二醇-甲苯磺酸酯(MePEG-TRES)、单甲氧基聚乙二醇-咪唑基-羰基(MePEG-IM)以及含有端部羟基而不是端部甲氧基的此类化合物(例如，HO-PEG-S、HO-PEG-S-NHS、HO-PEG-NH2)。
本文所述的PEG-脂质缀合物的PEG部分可具有550道尔顿至10,000道尔顿的平均分子量。在某些情况下，PEG部分的平均分子量为750道尔顿至5,000道尔顿(例如，1,000道尔顿至5,000道尔顿、1,500道尔顿至3,000道尔顿、750道尔顿至3,000道尔顿、750道尔顿至2,000道尔顿)。在优选的实施方案中，PEG部分的平均分子量为2,000道尔顿或750道尔顿。
在某些情况下，PEG可任选地被烷基、烷氧基、酰基或芳基取代。PEG可直接缀合至脂质，或者可经由接头部分连接到脂质。可使用适于将PEG偶联至脂质的任何接头部分，包括例如含非酯的接头部分和含酯的接头部分。在一个优选的实施方案中，接头部分为含非酯的接头部分。合适的含非酯的接头部分包括但不限于酰氨基(-C(O)NH-)、氨基(-NR-)、羰基(-C(O)-)、氨基甲酸酯(-NHC(O)O-)、脲(-NHC(O)NH-)、二硫基(-S-S-)、醚(-0-)、琥珀酰基(-(0)CCH2CH2C(0)-)、琥珀酰胺基(-NHC(0)CH2CH2C(0)NH-)、醚、二硫化物，以及它们的组合(诸如含有氨基甲酸酯接头部分和酰氨基接头部分的接头)。在一个优选的实施方案中，使用氨基甲酸酯接头将PEG偶联到脂质。
在其他实施方案中，使用含酯的接头部分将PEG偶联到脂质。合适的含酯接头部分包括例如碳酸酯(-OC(O)O-)、琥珀酰基、磷酸酯(-O-(O)POH-O-)、磺酸酯以及它们的组合。
具有不同链长和饱和度的多种酰基链基团的磷脂酰乙醇胺可缀合至PEG以形成脂质缀合物。此类磷脂酰乙醇胺是可商购获得的，或者可使用本领域技术人员已知的常规技术分离或合成。含有碳链长度在C10至C20范围内的饱和或不饱和脂肪酸的磷脂酰乙醇胺是优选的。也可以使用具有单-或二-不饱和脂肪酸的磷脂酰乙醇胺以及饱和和不饱和脂肪酸的混合物。合适的磷脂酰乙醇胺包括但不限于二肉豆蔻酰基-磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰基-磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(DOPE)和二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(DSPE)。
术语“二酰基甘油”或“DAG”包括具有2个脂肪酰基链R1和R2的化合物，两者均独立地具有通过酯键与甘油的1-和2-位键合的2至30个碳。酰基基团可以是饱和的或具有不同的不饱和度。合适的酰基基团包括但不限于月桂酰(C12)、肉豆蔻酰(C14)、棕榈酰(C16)、硬脂酰(C18)和二十烷酰(C20)。在优选的实施方案中，R1和R2是相同的，即，R1和R2均为肉豆蔻酰(即，二肉豆蔻酰)，R1和R2均为硬脂酰(即，二硬酯酰)。
术语“二烷氧基丙基”或“DAA”包括具有2个烷基链R1和R2的化合物，两者均独立地具有2至30个碳。烷基基团可以是饱和的或具有不同的不饱和度。
优选地，PEG-DAA缀合物是PEG-二癸氧基丙基(C10)缀合物、PEG-二月桂氧基丙基(C12)缀合物、PEG-二肉豆蔻氧基丙基(C14)缀合物，PEG-二棕榈氧基丙基(C16)缀合物或PEG-二硬脂氧基丙基(C18)缀合物。在这些实施方案中，PEG的平均分子量优选为750或2,000道尔顿。在特定实施方案中，PEG的端部羟基被甲基基团取代。
除前述之外，可使用其他亲水性聚合物代替PEG。可用于代替PEG的合适聚合物的示例包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基恶唑啉、聚乙基恶唑啉、聚羟丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚二甲基丙烯酰胺、聚乳酸、聚乙醇酸和衍生纤维素(诸如羟甲基纤维素或羟乙基纤维素)。
在一些实施方案中，脂质缀合物(例如，PEG-脂质)占存在于颗粒中的总脂质的0.1mol％至2mol％、0.5mol％至2mol％、1mol％至2mol％、0.6mol％至1.9mol％、0.7mol％至1.8mol％、0.8mol％至1.7mol％、0.9mol％至1.6mol％、0.9mol％至1.8mol％、1mol％至1.8mol％、1mol％至1.7mol％，1.2mol％至1.8mol％、1.2mol％至1.7mol％、1.3mol％至1.6mol％、或1.4mol％至1.5mol％(或其任何分数或其中的范围)。在其他实施方案中，脂质缀合物(例如，PEG-脂质)占存在于颗粒中的总脂质的0mol％至20mol％、0.5mol％至20mol％、2mol％至20mol％、1.5mol％至18mol％、2mol％至15mol％、4mol％至15mol％、2mol％至12mol％、5mol％至12mol％或2mol％(或其任何分数或其中的范围)。
在另一个实施方案中，脂质缀合物(例如，PEG-脂质)占存在于颗粒中的总脂质的4mol％至10mol％、5mol％至10mol％、5mol％至9mol％、5mol％至8mol％、6mol％至9mol％、6mol％至8mol％、或5mol％、6mol％、7mol％、8mol％、9mol％或10mol％(或其任何分数或其中的范围)。
存在于本发明的脂质颗粒中的脂质缀合物(例如，PEG-脂质)的百分比是目标量，并且制剂中存在的脂质缀合物的实际量可变化例如±2mol％。本领域普通技术人员将理解，脂质缀合物的浓度可根据所采用的脂质缀合物和脂质颗粒发生融合的速率而变化。
通过控制脂质缀合物的组成和浓度，可控制脂质缀合物从脂质颗粒中交换出的速率，继而控制脂质颗粒发生融合的速率。此外，其他变量，包括例如pH、温度或离子强度，可用于改变和/或控制脂质颗粒发生融合的速率。在阅读本公开内容后，可用于控制脂质颗粒发生融合的速率的其他方法对于本领域技术人员而言将变得显而易见。另外，通过控制脂质缀合物的组成和浓度，可控制脂质粒度。
用于施用的组合物和制剂
本公开的核酸-脂质组合物可通过各种途径施用，例如经由静脉内、肠胃外、腹膜内或局部途径实现全身递送。在一些实施方案中，siRNA可在细胞内递送，例如在目标组织(诸如肺或肝脏)的细胞中或在发炎的组织中。在一些实施方案中，本公开提供了用于体内递送siRNA的方法。核酸-脂质组合物可静脉内、皮下或腹膜内施用给受试者。在一些实施方案中，本公开提供了用于将干扰RNA体内递送至哺乳动物受试者的肺的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗哺乳动物受试者中的疾病或病症的方法。可将治疗有效量的含有核酸、阳离子脂质、两亲物、磷脂、胆固醇和PEG连接的胆固醇的本公开的组合物施用给患有与能够被该组合物还原、降低、下调或沉默的基因的表达或过表达相关的疾病或病症的受试者。
本发明的组合物和方法可通过各种粘膜给药方式给予受试者，包括通过口服、直肠、阴道、鼻内、肺内或透皮或皮肤递送，或通过局部递送至眼睛、耳朵、皮肤或其他粘膜表面。在本公开的一些方面，粘膜组织层包括上皮细胞层。上皮细胞可以是肺、气管、支气管、肺泡、鼻、口腔、表皮或胃肠。本公开的组合物可使用常规的致动器(诸如机械喷雾装置)以及加压、电激活或其他类型的致动器来施用。
本公开的组合物可作为鼻腔或肺部喷雾在水溶液中施用，并且可通过本领域技术人员已知的多种方法以喷雾形式分配。本公开的组合物的肺部递送通过以滴剂、颗粒或喷雾的形式施用组合物来实现，所述组合物可被例如烟雾化、雾化或喷雾化。组合物、喷雾剂或气溶胶的颗粒可为液体形式或固体形式。用于分配液体作为鼻喷剂的优选系统公开于美国专利4,511,069中。可通过将根据本公开的组合物溶解于水中以产生水溶液并使所述溶液无菌来方便地制备此类制剂。制剂可在多剂量容器中呈现，例如在美国专利4,511,069中公开的密封分配系统中。其他合适的鼻喷剂递送系统已在以下文献中有所描述：TRANSDERMAL SYSTEMIC MEDICATION，Y.W.Chien编辑，ElsevierPublishers,NewYork,1985；美国专利4,778,810。另外的气溶胶递送形式可包括例如压缩空气、喷射、超声和压电喷雾器，其递送溶解或悬浮在药物溶剂(例如水、乙醇或它们的混合物)中的生物活性剂。
本公开的鼻腔和肺部喷雾溶液通常包含任选地用表面活性剂诸如非离子表面活性剂(例如聚山梨酸酯-80)和一种或多种缓冲剂配制的药物或待递送的药物。在本公开的一些实施方案中，鼻喷雾溶液还包含推进剂。鼻喷雾溶液的pH可为pH 6.8至7.2。所采用的药物溶剂也可以是pH 4-6的微酸性含水缓冲液。可添加其他组分以增强或保持化学稳定性，包括防腐剂、表面活性剂、分散剂或气体。
在一些实施方案中，本公开是一种药物产品，其包括含有本公开的组合物的溶液和用于肺部、粘膜或鼻内喷雾或气溶胶的致动器。
本公开的组合物的剂型可以是液滴或乳液形式或者气溶胶形式的液体。
本公开的组合物的剂型可以是固体，其可在施用之前在液体中重构。固体可作为粉末施用。固体可以是胶囊、片剂或凝胶的形式。
为了在本公开中配制用于肺部递送的组合物，可将生物活性剂与各种药学上可接受的添加剂以及用于分散一种或多种活性剂的碱或载体混合。添加剂的示例包括pH控制剂，诸如精氨酸、氢氧化钠、甘氨酸、盐酸、柠檬酸、以及它们的混合物。其他的添加剂包括局部麻醉剂(例如苯甲醇)、等渗剂(例如氯化钠、甘露糖醇、山梨醇)、吸附抑制剂(例如吐温80)、溶解增强剂(例如环糊精及其衍生物)、稳定剂(例如血清白蛋白)和还原剂(例如谷胱甘肽)。当用于粘膜递送的组合物是液体时，如参考0.9％(w/v)生理盐水溶液的张力作为单位测量的，将制剂的张力通常调节至在施用部位的粘膜中不会引起实质的、不可逆的组织损伤的值。一般来讲，将溶液的张力调节至1/3至3、更典型地1/2至2、并且最通常的3/4至1.7的值。
生物活性剂可分散在碱或载体中，所述碱或载体可包含具有分散活性剂和任何期望添加剂的能力的亲水性化合物。碱可选自多种合适的载体，包括但不限于多元羧酸或其盐的共聚物、具有其他单体(例如，(甲基)丙烯酸甲酯、丙烯酸等)的羧酸酐(例如马来酸酐)、亲水性乙烯基聚合物(诸如聚醋酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮)、纤维素衍生物(诸如羟甲基纤维素、羟丙基纤维素等)以及天然聚合物(诸如壳聚糖、胶原、藻酸钠、明胶、透明质酸)以及它们的无毒金属盐。通常，可生物降解的聚合物被选择为碱或载体，例如聚乳酸、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚羟基丁酸、聚(羟基丁酸-乙醇酸)共聚物、以及它们的混合物。另选地或除此之外，合成脂肪酸酯诸如聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等可用作载体。亲水性聚合物和其他载体可单独使用或组合使用，并且可通过部分结晶、离子键合、交联等赋予载体增强的结构完整性。载体可以多种形式提供，包括流体或粘稠溶液、凝胶、糊剂、粉末、微球和膜，以用于直接施用于鼻粘膜。在该上下文中使用所选择的载体可导致促进生物活性剂的吸收。
用于粘膜、鼻腔或肺部递送的制剂可含有亲水性低分子量化合物作为基底或赋形剂。此类亲水性低分子量化合物提供了通道介质，水溶性活性剂(例如生理活性肽或蛋白质)可通过该通道介质扩散穿过基底至活性剂被吸收的身体表面。亲水性低分子量化合物任选地从粘膜或施用环境中吸收水分并溶解水溶性活性肽。亲水性低分子量化合物的分子量通常不超过10,000，并且优选不超过3,000。亲水性低分子量化合物的示例包括多元醇化合物，诸如低聚糖、二糖和单糖，包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、甘油、聚乙二醇、以及它们的混合物。亲水性低分子量化合物的其他示例包括N-甲基吡咯烷酮、醇(例如，低聚乙烯醇、乙醇、乙二醇、丙二醇等)、以及它们的混合物。
本公开的组合物可另选地包含根据需要以接近生理条件的作为药学上可接受的载体物质，诸如pH调节和缓冲剂、张力调节剂和润湿剂，例如乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、以及它们的混合物。对于固体组合物，可使用常规的无毒的药学上可接受的载体，其包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。
在本公开的某些实施方案中，生物活性剂可以定时释放制剂施用，例如在包含缓释聚合物的组合物中施用。活性剂可用防止快速释放的载体例如控释载体(诸如聚合物)、微胶囊化递送系统或生物粘附凝胶来制备。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝水凝胶和明胶)，可在本公开的各种组合物中实现活性剂的延长递送。
虽然已结合某些实施方案描述了本公开，并且出于说明的目的已阐述了许多细节，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，本公开包括另外的实施方案，并且在不脱离本公开的情况下可显著地改变本文所述的一些细节。本公开包括此类另外的实施方案、修改形式和等同形式。
实施例
实施例1：示例性脂质
式I的示例性化合物示于表1中。化合物的结构在第一列中示出。化合物的命名根据式I给出
Figure BDA0003570003160000391
第一对数字代表酯L1和L2中的碳数，包括羰基；括号中的数字对代表支链烷基的每个支链中的碳数，即R1或如果R2也是支链，则R1/R2(星号代表双键)；给出了R3中的碳数；并且最后一行代表对R4和R5的取代。本文给出了ATX编号以供参考。给出了计算LogD值(c-LogD)和计算pKa值(c-pKa)，以及括号中的测量pKa(在制剂环境中测量)。c-LogD和c-pKa值由ACDLabs Structure Designer v12.0生成。除非另外指明，否则生物活性是剂量为0.03mg/kg时体内因子VII敲除的百分比。
表1
Figure BDA0003570003160000392
Figure BDA0003570003160000401
Figure BDA0003570003160000411
Figure BDA0003570003160000421
Figure BDA0003570003160000431
Figure BDA0003570003160000441
Figure BDA0003570003160000451
Figure BDA0003570003160000461
Figure BDA0003570003160000471
Figure BDA0003570003160000481
Figure BDA0003570003160000491
Figure BDA0003570003160000501
Figure BDA0003570003160000511
实施例2：ATX-0043的合成
图1示出了如下进一步描述的ATX-0043的合成途径。
ATX-0043：步骤1
Figure BDA0003570003160000512
在500mL单颈圆底烧瓶中，取出溶于二氯甲烷(DCM；200mL)中的25g己酸(SM 1；1当量)，然后在0℃下缓慢加入27.6ml草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌，然后加入0.5ml二甲基甲酰胺(DMF；催化剂)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的1升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向31.4g N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(1.5当量)的DCM(200ml)溶液中加入89.8ml三乙胺(Et3N，3当量)，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(100ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过薄层色谱法(TLC)(20％乙酸乙酯(EtOAc)/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(300ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，20.0g；收率，58％。
ATX-0043：步骤2
Figure BDA0003570003160000521
取33g戊基溴化镁(1.5当量)的四氢呋喃(THF；100ml)溶液置于500ml双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入20g N-甲氧基-N-甲基己酰胺(1当量)溶液(溶于200ml THF中)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(150ml)猝灭，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，15.0g；收率，66％。
ATX-0043：步骤3
Figure BDA0003570003160000522
在0℃下向溶于25ml甲醇(MeOH)的15g十一烷-6-酮(1当量)的150ml THF溶液中加入4.9g硼氢化钠(1.5当量)并将所得溶液在室温下搅拌2小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(100ml)猝灭反应物料。在减压下去除溶剂，并且将所得粗产物在EtOAc(150ml)和水(150ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，14.0g；收率，93％。
ATX-0043：步骤4
Figure BDA0003570003160000531
相继使用另外的漏斗，各自隔15分钟的时间段，在0℃下向溶于150ml THF的15g4-氨基丁酸(1当量)溶液中加入145ml 1N NaOH水溶液(1当量)，之后加入43.4ml Boc酸酐(1.3当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的氯仿(CHCl3)溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(150ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(100ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到胶状液体。产量，20.0g；收率，68％。
ATX-0043：步骤5
Figure BDA0003570003160000532
向冷却至0℃以下的溶于DCM(200ml)的12g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1当量)溶液中加入14.7g 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC).HCl(1.3当量)、10.6mlEt3N(1.3当量)和0.72g 4-二甲氨基吡啶(DMAP；0.1当量)，在氮气氛下相继以10分钟的间隔顺序进行。在相同温度下，通过溶于DCM(50ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(100ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×50ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，然后用EtOAc(2×50ml)萃取。在减压下浓缩有机层，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8.5g；收率，48％。
ATX-0043：步骤6
Figure BDA0003570003160000541
在0℃下向溶于70ml DCM的8.5g十一烷-6-基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入三氟乙酸(TFA；10当量)并在氮气氛下于室温搅拌4小时。
通过TLC(70％EtOAc/己烷；Rf：0.2)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后用EtOAc(2×100ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，5.0g；收率，33％(相对于醇)。
ATX-0043：步骤7
Figure BDA0003570003160000542
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(100ml)的14g 4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入21g EDC.HCl(1.3当量)、15.2ml Et3N(1.3当量)和1g DMAP(0.1当量)。通过溶于50ml DCM中并在氮气氛下于室温搅拌16小时，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入8.3g(Z)-壬-2-烯-1-醇(0.7当量)。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(50ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×50ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，然后用EtOAc(2×50ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。
使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。产量，11.0g；收率，64％。
ATX-0043：步骤8
Figure BDA0003570003160000551
向250ml圆底烧瓶中加入2g十一烷-6-基4-氨基丁酸酯(1当量)和2.2g(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯(1当量)的DMF溶液、1.2g碳酸钾(1.2当量)，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。向反应物料中加入冰水，然后用EtOAc萃取、经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收起始的胺和溴化合物。产量，1.45g；收率，40％。
ATX-0043：步骤9
Figure BDA0003570003160000552
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于无水DCM的1.45g(Z)-壬-2-烯-1-基4-(4-氧代-4-(十一烷-6-基氧基)丁基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入1.29ml三乙胺(3当量)和360mg三光气(0.4当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(20ml)的360mg氢化钠(5.5当量)置于2颈250ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入2.1g 2-(二甲氨基)乙烷-1-硫醇盐酸盐(5.5当量)的THF(30ml)溶液并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，使用另外的漏斗缓慢加入溶于THF(50mL)中的上述碳酰氯约15分钟，加入到该所得溶液中并在室温下搅拌1小时。
将反应物料用饱和NH4Cl溶液(20mL)猝灭，然后加入EtOAc(20mL)。分离有机层，并且用EtOAc(2×20mL)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。
使用硅胶(100-200目；18％EtOAc/己烷)色谱法进行纯化。产量，500mg；收率，26％；通过1H NMR、HPLC、和质谱(Mass)进行确认。
ATX-0043/RL-43A：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.63(m,1),5.54(m,1),4.87(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.37(brs,4),3.03(t,J＝7.0,2),2.27(s,6),2.22-2.32(4),2.09(m,2),1.80-1.90(4),1.45-1.55(4),1.20-1.40(22),0.83-0.92(9)。
实施例3：ATX-0057的合成
图2示出了如下进一步描述的ATX-0057的合成途径。
ATX-0057：步骤1：N-甲氧基N-甲基辛酰胺
Figure BDA0003570003160000561
在2升双颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(300ml)的辛酸(1当量)，然后在0℃下缓慢加入1.5当量草酰氯，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的DCM(200ml)溶液中加入3当量三甲胺，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(150ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，85g；收率，65％。
ATX-0057：步骤2：十六烷-8-酮
Figure BDA0003570003160000571
取辛基溴化镁的THF(100ml)溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入N-甲氧基-N-甲基辛酰胺溶液(溶于200ml THF)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，65g；收率，63％。
ATX-0057：步骤3：十六烷-8-醇
Figure BDA0003570003160000572
在0℃下向溶于MeOH/THF的十六烷-8-酮(1当量)溶液中加入1当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1.5小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(150ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，60g；收率，91％。
ATX-0057：步骤4：4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸
Figure BDA0003570003160000581
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段，在0℃下向溶于THF的4-氨基丁酸溶液中加入1N NaOH水溶液，之后加入Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(250ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，80g；收率，81％。
ATX-0057：步骤5：十六烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯
Figure BDA0003570003160000582
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(200ml)的4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入EDC.HCl、Et3N和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在相同温度下，通过溶于DCM(150ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入1当量十六烷-8-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(200ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，80g(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0057：步骤6：十六烷-8-基4-氨基丁酸酯
Figure BDA0003570003160000591
在0℃下向溶于DCM的十六烷-8-基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯溶液中加入TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗制物用饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤，然后用EtOAc(2×200ml)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，40g；两步的收率为59％；通过质谱进行确认。
ATX-0057：步骤7：(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯
Figure BDA0003570003160000592
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(400ml)的4-溴丁酸溶液中相继加入EDC.HCl、Et3N和DMAP。通过溶于100ml DCM中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(300ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤，然后用EtOAc(150ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇。产量，27g；收率，51％。
ATX-0057：步骤8：十六烷-8-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨 基)丁酸酯
Figure BDA0003570003160000601
向十六烷-8-基4-氨基丁酸酯、(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的乙腈(ACN)溶液中加入碳酸钾，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料，胺和溴化合物。产量，20g；收率，40％；通过质谱进行确认。
ATX-0057：步骤9
Figure BDA0003570003160000602
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于无水DCM的十六烷-8-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨基)丁酸酯溶液中加入三甲胺和三光气。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(50ml)的氢化钠置于双颈100ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入2-(二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐，并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(80ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌6小时。
通过TLC(60％EtOAC/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将22g粗化合物吸附在60g硅胶上，并倒入500g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将7.5g粗化合物吸附在18g中性氧化铝上，并将所得物倒入130g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。收率，29％；通过1HNMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0057/RL-43C：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.63(m,1),5.51(m,1),4.68(m,1),4.83(d,J＝7.0,2),3.19(brs,4),3.22(m,2),2.52(m,2),2.23-2.37(4),2.18(s,6),2.08(m,2),1.84-1.93(4),1.46-1.54(4),1.20-1.40(30),0.83-0.91(9)。
实施例4：ATX-0058的合成
图3示出了如下进一步描述的ATX-0058的合成途径。
ATX-0058：步骤1
Figure BDA0003570003160000611
在N2气氛下，在500ml双颈圆底烧瓶中，取溶于200ml DCM的30g8-溴辛酸(1当量)，然后在0℃下缓慢加入26.7ml草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的1升双颈圆底烧瓶中，向40.5g N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(2当量)的300ml DCM溶液中加入87ml三甲胺(3当量)，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在减压下浓缩后，通过溶于500ml DCM中，使用加料漏斗滴加上述酰氯15分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(300ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，28g。
ATX-0058：步骤2
Figure BDA0003570003160000621
向28g己基溴化镁(1当量)的THF(100ml)溶液(在氮气氛下于0℃搅拌)中加入36.8gN-甲氧基-N-甲基辛酰胺(1.3当量)的200ml THF溶液，并将所得反应混合物在室温下搅拌5小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(100ml)猝灭反应物料。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120目硅胶；2％乙酸乙酯/己烷)将粗化合物进行柱层析。产量，24g；收率，77％。
ATX-0058：步骤3
Figure BDA0003570003160000622
在0℃下向溶于MeOH/THF的24g十四烷-7-酮(1当量)溶液中加入4.27g硼氢化钠(1当量)，并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(50ml)猝灭反应物料。在减压下减少甲醇。将所得粗品在EtOAc(200ml)和水之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(2×80ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得白色固体。产量，21.5g；收率，89％。
ATX-0058：步骤4
Figure BDA0003570003160000631
使用漏斗在0℃下向溶于140ml THF的20g 4-氨基丁酸溶液中加入196ml 1N NaOH水溶液，之后加入36.8g Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(100ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(200ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，30g；收率，76％。
ATX-0058：步骤5
Figure BDA0003570003160000632
以10分钟的间隔相继向冷却至0℃以下的溶于DCM(150ml)的10g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1当量)溶液中加入12.2g EDC.HCl(1.3当量)、20.4ml Et3N(3当量)和488mgDMAP(0.1当量)。通过溶于DCM中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(100ml)猝灭反应物料，并分离有机层。用DCM(2×50ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液洗涤，并加入EtOAc(100ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，12.7g(粗品)。
ATX-0058：步骤6
Figure BDA0003570003160000641
在0℃下向溶于100ml DCM中的12.5g十四烷-7-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入23.9ml TFA(10当量)并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，并加入EtOAc(100ml)。将有机层分离并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。两步的产量为7g；收率，47％；通过质谱进行确认。
ATX-0058：步骤7
Figure BDA0003570003160000642
以10分钟的间隔向冷却至0℃的溶于DCM(150ml)的20g 4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入1.5当量EDC.HCl、3当量Et3N和0.1当量DMAP。通过溶于100ml DCM中，使用漏斗向该所得溶液中加入0.7当量(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应进程。用水(100ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液洗涤，并加入EtOAc(150ml)。将有机层分离并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；5％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，17g；收率，69％；通过1H NMR进行确认。
ATX-0058：步骤8
Figure BDA0003570003160000651
向6g十四烷-7-基4-氨基丁酸酯(1当量)、5.8g(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯(1当量)的ACN(125ml)溶液中加入2.7g碳酸钾(1.2当量)，并将所得物在氮气氛下于90℃回流3小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)监测反应进程。过滤反应物料，并且将滤液在减压下浓缩。
使用(100-200目硅胶；15％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，4.5g；收率，44％；通过质谱进行确认。
ATX-0058：步骤9
Figure BDA0003570003160000652
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于30ml无水DCM的4.4g(Z)-壬-2-烯-1-基4-(4-氧代-4-(十四烷-7-基氧基)丁基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入0.83ml三甲胺(3当量)和418mg三光气(0.5当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(25ml)的192mg氢化钠(10当量)置于100毫升双颈圆底烧瓶中，在0℃下向该溶液中加入564mg 2-(二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐(5当量)，并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(35ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌4小时。
通过TLC(60％EtOAC/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl(30ml)猝灭，然后加入EtOAc(100ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×50ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将5.0g粗化合物吸附在9g硅胶上，并倒入90g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将1.5g粗化合物吸附在4g中性氧化铝上，并将所得物倒入40g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，21％；通过1H NMR、HPLC、质谱进行确认。
ATX-0058/RL-43B：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.65(m,1),5.52(m,1),4.86(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.37(brs,4),3.02(t,J＝6.0,2),2.53(t,J＝6.0,2),2.27-2.36(4),2.27(s,6),2.09(m,2),1.83-1.96(4),1.46-1.54(4),1.20-1.40(26),0.84-0.91(9)。
实施例5：ATX-0081的合成
图4示出了如下进一步描述的ATX-0081的合成途径。
ATX-0081：步骤1
Figure BDA0003570003160000661
在2升双颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的辛酸，然后在0℃下缓慢加入1.5当量草酰氯，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的DCM(200ml)溶液中加入3当量三甲胺，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(150ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，33g；收率，84％。
ATX-0081：步骤2
Figure BDA0003570003160000671
取22g庚基溴化镁(1.5当量)的THF(100ml)溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入N-甲氧基-N-甲基辛酰胺(1当量)溶液(溶于200ml THF)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，22g；收率，65％。
ATX-0081：步骤3
Figure BDA0003570003160000672
在0℃下向溶于MeOH/THF的22g十五烷-8-酮(1当量)溶液中加入1.5当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(150ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，20g；收率，90％。
ATX-0081：步骤4
Figure BDA0003570003160000681
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段，在0℃下向溶于350ml THF的50g 4-氨基丁酸溶液中加入490ml 1N NaOH水溶液，之后加入140ml Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(250ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，80g；收率，81％。
ATX-0081：步骤5
Figure BDA0003570003160000682
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(250ml)的10g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入1.3当量EDC.HCl、Et3N和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在相同温度下，通过溶于DCM(150ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入1当量十五烷-7-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(200ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8.5克(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0081：步骤6
Figure BDA0003570003160000683
在0℃下向溶于65ml DCM的8.5g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯溶液中加入10当量TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗制物用饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤，然后用EtOAc(2×200ml)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。两步的产量为4g；收率，25％；通过质谱进行确认。
ATX-0081：步骤7
Figure BDA0003570003160000691
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(300ml)的4-溴丁酸溶液中相继加入EDC.HCl、Et3N和DMAP。通过使用另外的漏斗溶于100ml DCM中，向该所得溶液中加入20g(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(300ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤，然后用EtOAc(150ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇。产量，19g；收率，55％。
ATX-0081：步骤8
Figure BDA0003570003160000692
向4.5g十五烷-8-基4-氨基丁酸酯、1当量(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的70ml乙腈(ACN)溶液中加入1.4当量碳酸钾，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料，胺和溴化合物。产量，2.1g；收率，27％；通过质谱进行确认。
ATX-0081：步骤9
Figure BDA0003570003160000701
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于150ml无水DCM的2.1g十五烷-8-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨基)丁酸酯溶液中加入3当量三乙胺和三光气。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(80ml)的7当量氢化钠置于双颈100ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入3.5当量(2-二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(80ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于0℃至室温搅拌过夜。
通过TLC(60％EtOAC/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将粗化合物吸附在60g硅胶上，并倒入500g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将粗化合物吸附在18g中性氧化铝上，并将所得物倒入130g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.5g；收率，45％；通过1HNMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0081/RL-48B：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.52(m,1),4.86(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.31-3.44(4),3.02(t,J＝7.0,2),2.52(t,J＝7.0,2),2.26-2.36(4),2.27(s,6),2.10(m,2),1.84-1.95(4),1.46-1.54(4),1.20-1.40(26),0.85-0.94(9)。
实施例6：ATX-0082的合成
图5示出了如下进一步描述的ATX-0082的合成途径。
ATX-0082：步骤1
Figure BDA0003570003160000711
在2升双颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的30g辛酸，然后在0℃下缓慢加入1.5当量草酰氯，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的DCM(200ml)溶液中加入3当量三甲胺，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(150ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，33g；收率，84％。
ATX-0082：步骤2
Figure BDA0003570003160000721
取庚基溴化镁(1.5当量)的THF(100ml)溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入28g N-甲氧基-N-甲基辛酰胺(1当量)溶液(溶于200ml THF)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，22g；收率，65％。
ATX-0082：步骤3
Figure BDA0003570003160000722
在0℃下向溶于MeOH/THF的22g十五烷-8-酮(1当量)溶液中加入1.5当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(150ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，20g；收率，90％。
ATX-0082：步骤4
Figure BDA0003570003160000731
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段，在0℃下向溶于120ml THF的15g 4-氨基丁酸溶液中加入185ml 1N NaOH水溶液，之后加入50ml Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(250ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，27g；收率，85％。
ATX-0082：步骤5
Figure BDA0003570003160000732
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(250ml)的10g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入1.3当量EDC.HCl、Et3N和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在相同温度下，通过溶于DCM(150ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入1当量十五烷-7-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(200ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8g(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0082：步骤6
Figure BDA0003570003160000733
在0℃下向溶于60ml DCM的8.0g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯溶液中加入10当量TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗制物用饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤，然后用EtOAc(2×200ml)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，4g；两步的收率为25％；通过质谱进行确认。
ATX-0082：步骤7
Figure BDA0003570003160000741
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(400ml)的4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入1.5当量EDC.HCl、3当量Et3N和DMAP。通过使用另外的漏斗溶于100mlDCM中，向该所得溶液中加入20g(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(300ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤，然后用EtOAc(150ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇。产量，18g；收率，55％。
ATX-0082：步骤8
Figure BDA0003570003160000742
向4.0g十五烷-8-基4-氨基丁酸酯、1当量(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的90ml(ACN)溶液中加入1.4当量碳酸钾，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料(胺和溴化合物)。产量，2.2g；收率，30％；通过质谱进行确认。
ATX-0082：步骤9
Figure BDA0003570003160000751
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于25ml无水DCM的2.2g十五烷-8-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨基)丁酸酯溶液中加入3当量三乙胺和三光气。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(100ml)的7当量氢化钠置于双颈100ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入3.5当量(2-二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(100ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于0℃至室温搅拌过夜。
通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将粗化合物吸附在60g硅胶上，并倒入500g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将粗化合物吸附在18g中性氧化铝上，并将所得物倒入130g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，43％；通过1HNMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0082/RL-47A：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.52(m,1),4.87(m,1),4.62(d,J＝7.0,2),3.61(t,J＝7.0,2),3.28-3.37(2),3.02(t,J＝7.0,2),2.61(m,2),2.52(t,J＝7.0,2),2.31(m,2),2.27(s,6),2.10(m,2),1.62-1.70(6),1.21-1.40(32),0.85-0.91(9)。
实施例7：ATX-0086的合成
图6示出了如下进一步描述的ATX-0086的合成途径。
ATX-0086：步骤1
Figure BDA0003570003160000761
在2升双颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的30g辛酸，然后在0℃下缓慢加入1.5当量草酰氯，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的DCM(200ml)溶液中加入3当量三甲胺，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(150ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，38g；收率，84％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤2
Figure BDA0003570003160000771
取己基溴化镁(1.5当量)的THF(100ml)溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入38g N-甲氧基-N-甲基辛酰胺(1当量)溶液(溶于200ml THF)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，44g；收率，65％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤3
Figure BDA0003570003160000772
在0℃下向溶于MeOH/THF的44g十三烷-7-酮(1当量)溶液中加入1.5当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(150ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，40g；收率，90％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤4
Figure BDA0003570003160000781
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段，在0℃下向溶于350ml THF的50g 4-氨基丁酸溶液中加入490ml 1N NaOH水溶液，之后加入140ml Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(250ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，80g；收率，81％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤5
Figure BDA0003570003160000782
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(250ml)的10g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入1.3当量EDC.HCl、Et3N和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在相同温度下，通过溶于DCM(150ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入1当量十五烷-7-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(200ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8g(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0086：步骤6
Figure BDA0003570003160000783
在0℃下向溶于60ml DCM的8.0g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯溶液中加入10当量TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗制物用饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤，然后用EtOAc(2×200ml)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1mL的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，3.5g；两步的收率为52％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤7
Figure BDA0003570003160000791
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(400ml)的4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入1.5当量EDC.HCl、2当量Et3N和DMAP。通过使用另外的漏斗溶于100mlDCM中，向该所得溶液中加入20g(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(300ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤，然后用EtOAc(150ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇。产量，18g；收率，55％。
ATX-0086：步骤8
Figure BDA0003570003160000792
向4.0g十三烷-7-基4-氨基丁酸酯、1当量(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的90ml(ACN)溶液中加入1.4当量碳酸钾，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料，胺和溴化合物。产量，2.2g；收率，30％；通过质谱进行确认。
ATX-0086：步骤9
Figure BDA0003570003160000801
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于25ml无水DCM的2.2g十三烷-7-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨基)丁酸酯溶液中加入3当量三乙胺和三光气。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(100ml)的7当量氢化钠置于双颈100ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入3.5当量(2-二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(100ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于0℃至室温搅拌过夜。
通过TLC(60％EtOAC/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将粗化合物吸附在60g硅胶上，并倒入500g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将粗化合物吸附在18g中性氧化铝上，并将所得物倒入130g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，43％；通过1HNMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0086/RL-48A：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),
5.51(m,10,4.87(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.30-3.44(4),3.02(t,J＝7.0,2),2.52(t,J＝7.0,2),2.26-2.36(4),2.27(s,6),2.09(m,2),1.82-1.96(4),1.46-1.54(4),1.21-1.40(24),0.84-0.91(9)。
实施例8：ATX-0087的合成
图7示出了涉及九个步骤的ATX-0087的合成途径。
ATX-0087：步骤1
Figure BDA0003570003160000811
在2升双颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的20g辛酸，然后在0℃下缓慢加入1.5当量草酰氯，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的DCM(200ml)溶液中加入3当量三甲胺，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(150ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；10％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，20g；收率，84％。
ATX-0087：步骤2
Figure BDA0003570003160000821
取己基溴化镁(1.5当量)的THF(100ml)溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入20g N-甲氧基-N-甲基辛酰胺(1当量)溶液(溶于200ml THF)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。使用(60-120目硅胶；2％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，25g；收率，65％。
ATX-0087：步骤3
Figure BDA0003570003160000822
在0℃下向溶于MeOH/THF的25g十三烷-7-酮(1当量)溶液中加入1.5当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(150ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，22g；收率，90％。
ATX-0087：步骤4
Figure BDA0003570003160000831
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段，在0℃下向溶于350ml THF的50g 4-氨基丁酸溶液中加入490ml 1N NaOH水溶液，之后加入140ml Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(250ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，80g；收率，81％。
ATX-0087：步骤5
Figure BDA0003570003160000832
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(250ml)的17g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入1.3当量EDC.HCl、Et3N和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在相同温度下，通过溶于DCM(150ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入1当量十三烷-7-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(200ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，15g(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0087：步骤6
Figure BDA0003570003160000833
在0℃下向溶于80ml DCM的15.0g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯溶液中加入10当量TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗制物用饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤，然后用EtOAc(2×200ml)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1mL的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，7g；两步的收率为24％；通过质谱进行确认。
ATX-0087：步骤7
Figure BDA0003570003160000841
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(400ml)的4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入1.5当量EDC.HCl、2当量Et3N和DMAP。通过使用另外的漏斗溶于100mlDCM中，向该所得溶液中加入20g(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(300ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×150ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤，然后用EtOAc(150ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用5％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇。产量，19g；收率，55％。
ATX-0087：步骤8
Figure BDA0003570003160000842
向4.0g十三烷-7-基4-氨基丁酸酯、1当量(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的90ml(ACN)溶液中加入1.4当量碳酸钾，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用15％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料，胺和溴化合物。产量，2.2g；收率，30％；通过质谱进行确认。
ATX-0087：步骤9
Figure BDA0003570003160000851
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于25ml无水DCM的2.2g十三烷-7-基(Z)-4-((4-(壬-2-烯-1-基氧基)-4-氧代丁基)氨基)丁酸酯溶液中加入3当量三乙胺和三光气。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(100ml)的7当量氢化钠置于双颈100ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入3.5当量(2-二甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(100ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于0℃至室温搅拌过夜。
通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(75ml)猝灭，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将粗化合物吸附在60g硅胶上，并倒入500g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将粗化合物吸附在18g中性氧化铝上，并将所得物倒入130g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，43％；通过1HNMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0087/RL-48C：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.52(m,1),4.87(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.30-3.44(4),3.02(t,J＝7.0,2),2.52(t,J＝7.0,2),2.26-2.36(4),2.27(s,6),2.09(m,2),1.83-1.96(4),1.46-1.54(4),1.21-1.40(32),0.85-0.90(9)。
实施例9：ATX-0088的合成
图8示出了如下进一步描述的ATX-0088的合成途径。
ATX-0088：步骤1
Figure BDA0003570003160000861
在N2气氛下，在500ml双颈圆底烧瓶中，取溶于200ml DCM的25g8-溴辛酸(1当量)，然后在0℃下缓慢加入草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的1升双颈圆底烧瓶中，向2当量N,O-二甲基羟基胺盐酸盐的300ml DCM溶液中加入3当量三甲胺并在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在减压下浓缩后，通过溶于500mlDCM中，使用加料漏斗滴加上述酰氯15分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(300ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120目硅胶；10％EtOAC/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，21g；收率，66％。
ATX-0088：步骤2
Figure BDA0003570003160000871
向1.3当量辛基溴化镁的THF(100ml)溶液(在氮气氛下于0℃搅拌)中加入20g N-甲氧基-N-甲基辛酰胺的100ml THF溶液，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(100ml)猝灭反应物料。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120目硅胶；2％乙酸乙酯/己烷)将粗化合物进行柱层析。产量、收率为17.4g、68％。
ATX-0088：步骤3
Figure BDA0003570003160000872
在0℃下向溶于135ml MeOH/THF的17g十六烷-7-酮(1当量)溶液中加入1.5当量硼氢化钠并将所得溶液在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(50ml)猝灭反应物料。在减压下减少甲醇。将所得粗品在EtOAc(200ml)和水之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(2×80ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得白色固体。产量，14.5g；收率，85％。
ATX-0088：步骤4
Figure BDA0003570003160000881
使用漏斗在0℃下向溶于350ml THF的50g 4-氨基丁酸溶液中加入490ml 1N NaOH水溶液，之后加入140ml Boc酸酐。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(100ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(200ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，获得胶状液体。产量，80g；收率，81％。
ATX-0088：步骤5
Figure BDA0003570003160000882
以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(200ml)的1当量4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸溶液中相继加入3当量EDC.HCl、Et3N(3当量)和DMAP(0.1当量)。通过溶于DCM中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(100ml)猝灭反应物料，并分离有机层。用DCM(2×50ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液洗涤，并加入EtOAc(100ml)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，19g(粗品)。
ATX-0088：步骤6
Figure BDA0003570003160000883
在0℃下向溶于140ml DCM的19g十六烷-7-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入10当量TFA，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，并加入EtOAc(100ml)。将有机层分离并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，9.4g；两步的收率为50％；通过质谱进行确认。
ATX-0088：步骤7
Figure BDA0003570003160000891
以10分钟的间隔向冷却至0℃的溶于DCM(500ml)的30g 4-溴丁酸(1当量)溶液中相继加入1.5当量EDC.HCl、3当量Et3N和0.1当量DMAP。通过溶于100ml DCM中，使用漏斗向该所得溶液中加入0.7当量(Z)-壬-2-烯-1-醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应进程。用水(100ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液洗涤，并加入EtOAc(150ml)。将有机层分离并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；5％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，27g；收率，51％；通过1H NMR进行确认。
ATX-0088：步骤8
Figure BDA0003570003160000892
向6g十六烷-8-基4-氨基丁酸酯(1当量)、1.5当量(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯的ACN(70ml)溶液中加入1.2当量碳酸钾，并将所得物在氮气氛下于90℃回流3小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)监测反应进程。过滤反应物料，并且将滤液在减压下浓缩。
使用(100-200目硅胶；15％EtOAc/己烷)对粗化合物进行柱层析。产量，4.5g；收率，44％；通过质谱进行确认。
ATX-0088：步骤9
Figure BDA0003570003160000901
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于30ml无水DCM的4.4g(Z)-壬-2-烯-1-基4-(4-氧代-4-(十四烷-7-基氧基)丁基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入0.83ml三甲胺(3当量)和418mg三光气(0.5当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取溶于无水THF(25ml)的192mg氢化钠(10当量)置于100毫升双颈圆底烧瓶中，在0℃下向该溶液中加入564mg 3-(二乙基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐(5当量)，并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(35ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌4小时。
通过TLC(60％EtOAC/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(30ml)猝灭，然后加入EtOAc(100ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×50ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(60-120目)进行第一次纯化。将5.0g粗化合物吸附在9g硅胶上，并倒入90g硅胶柱中。在35％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将1.5g粗化合物吸附在4g中性氧化铝上，并将所得物倒入40g中性氧化铝柱中。在10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，21％；通过1H NMR、HPLC、质谱进行确认。
ATX-0088/RL-48D：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.51(m,1),4.87(m,1),4.63(d,J＝7.0,2),3.30-3.44(4),2.90(t,J＝7.0,2),2.46-2.55(6),2.26-2.37(4),2.09(m,2),1.71-1.80(4),1.46-1.55(4),1.21-1.41(32),1.01(t,J＝7.0,6),00.85-0.91(9)。
实施例10：ATX-0083的合成
图9示出了如下进一步描述的ATX-0083的合成途径。
ATX-0083：步骤1
Figure BDA0003570003160000911
在500ml单颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的50克辛酸(1当量)，然后在0℃下通过另外的漏斗缓慢加入44.6ml草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌，然后加入1ml DMF(催化剂)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的2升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向67.4g N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(2当量)的DCM(300ml)溶液中加入144ml三乙胺(3当量)，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(350ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。用水(300ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用10％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。产量，55.0g；收率，84％
ATX-0083：步骤2
Figure BDA0003570003160000921
取55g庚基溴化镁(1当量)的醚溶液置于2升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入溶于400ml干醚的89.6g N-甲氧基-N-甲基辛酰胺溶液(1.5当量)，并将所得反应溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7；PMA炭化)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(250ml)猝灭反应物料。分离有机层，并且用醚(2×100ml)洗涤水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用2％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。产量，50.0g；收率，75％。
ATX-0083：步骤3
Figure BDA0003570003160000922
在0℃下向溶于290ml MeOH/THF的50g十五烷-8-酮(1当量)溶液中加入12.5g硼氢化钠(1.5当量)并将所得溶液在室温下搅拌2小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(80ml)猝灭反应物料。在减压下去除溶剂，并且将所得粗产物在EtOAc(250ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(3×80ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，在减压下浓缩并真空干燥，得到白色固体。产量，46.0g；收率，90％。
ATX-0083：步骤4
Figure BDA0003570003160000931
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段内，在0℃下向溶于THF的50g 4-氨基丁酸(1当量)溶液中加入490ml 1N NaOH水溶液(1当量)，之后加入140ml Boc酸酐(1.3当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(350ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到胶状液体。产量，77.0g；收率，78％。
ATX-0083：步骤5
Figure BDA0003570003160000932
合成分4批进行。在每一者中，在氮气氛下以10分钟的间隔相继向冷却至0℃以下的23g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1当量)的DCM(400ml)溶液中加入32.3g EDC.HCl(1.5当量)、47ml Et3N(3当量)和1.3g DMAP(0.1当量)。通过溶于DCM(200ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入20g十五烷-8-醇(0.77当量)并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.4)监测反应进程。用水(250ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将该所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后加入EtOAc(250ml)。将有机层分离、经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩，然后用粗产物进行下一步骤。产量，105g(粗品；所需化合物和醇)
ATX-0083：步骤6
Figure BDA0003570003160000941
在0℃下向溶于450ml DCM中的105g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入194ml TFA(10当量)并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。
在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(200ml)搅拌10分钟，然后用EtOAc(300ml)搅拌。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺对粗制化合物进行柱层析(硅胶60-120目)。两步的产量为60.0g；收率，54％。
ATX-0083：步骤7
Figure BDA0003570003160000942
反应分两批进行，在每一者中，在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(300ml)的20g 6-溴己酸(1当量)溶液中相继加入29.3g EDC.HCl(1.5当量)、42.8mlEt3N(3当量)和1.2g DMAP(0.1当量)。使用另外的漏斗向该所得溶液中加入14.5g(Z)-壬-2-烯-1-醇(1当量)(通过溶于100ml DCM中)，并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(200ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后用EtOAc(2×150ml)萃取。分离有机层，经无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。
使用4％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇反应物。产量，36.0g；收率，55％。
ATX-0083：步骤8
Figure BDA0003570003160000951
反应分六批进行。在每一者中，向10g十五烷-8-基4-氨基丁酸(中间体6，1当量)、10.1g(Z)-壬-2-烯-1-基6-溴己酸酯(中间体7，1当量)的120ml ACN溶液中加入6.1g无水碳酸钾(1.4当量)，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(2×20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。
使用20-80％EtOAc/己烷对粗制化合物进行柱层析(硅胶100-200目)。回收原料。产量，36.9g；收率，35％。
ATX-0083：步骤9
Figure BDA0003570003160000952
反应分三批进行。在每一者中，在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于100ml无水DCM的10g(Z)-壬-2-烯-1-基6-((4-氧代-4-(十五烷-8-基氧基)丁基)氨基)己酸酯(1当量)溶液中加入7.5ml三乙胺(3当量)和2.68g三光气(0.5当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取3g氢化钠(7当量)的无水THF(100ml)悬浮液置于2颈500ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入8.9g 2-(二甲氨基)乙烷-1-硫醇盐酸盐(3.5当量)并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向该所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于无水THF(200ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(100ml)猝灭，然后加入EtOAc(350ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×80ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用中性氧化铝进行第一次纯化。将溶于己烷中的粗化合物加载到中性氧化铝(700g加载在柱中)的顶部。在8-10％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用硅胶(100-200目)进行第二次纯化。将溶于己烷中的化合物加载到硅胶(500g加载在柱中)的顶部。在20-25％EtOAc/己烷下洗脱化合物。将最终化合物(溶于己烷中)进行活性炭处理(200mg/g)并通过硅藻土床过滤(搅拌20分钟后)，然后通过注射器端部膜过滤器(PTFE；0.2微米，25mm直径)。将所得滤液在减压下浓缩。产量，15.5g；收率，41％。
ATX-0083/RL-47B：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.52(m,1),4.87(m,1),4.62(d,J＝7.0,2),3.24-3.42(4),3.02(t,J＝7.0,2),2.53(t,J＝7.0,2),2.26-2.34(4),2.26(s,6),2.10(m,2),1.45-1.70(6),1.20-1.41(34),0.84-0.92(9)。
实施例11：ATX-0084的合成
图10示出了如下进一步描述的ATX-0084的合成途径。
ATX-0084：步骤1
Figure BDA0003570003160000961
在500ml单颈圆底烧瓶中，取出溶于DCM(200ml)的30g庚酸(1当量)，然后在0℃下缓慢加入26.7g草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌，然后加入1ml DMF(催化剂)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的1升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向40.5g N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(2当量)的DCM(250ml)溶液中加入86.6ml三乙胺(3当量)，在0℃下搅拌。向该所得溶液中，在氮气氛下通过溶于DCM(100ml)中，使用加料漏斗滴加在减压下浓缩后的上述酰基氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250ml)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(3×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120硅胶)10％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析。产量，38.0g；收率，84％。
ATX-0084：步骤2
Figure BDA0003570003160000971
取8g己基溴化镁(1当量)的250ml无水乙醚溶液置于1升双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入溶于250ml乙醚的2.3g N-甲氧基-N-甲基庚酰胺(0.5当量)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(200ml)猝灭反应物料。分离有机层，并且用醚(2×100ml)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶)2％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析。产量，30.8g；收率，71％。
ATX-0084：步骤3
Figure BDA0003570003160000972
在0℃下向溶于200ml MeOH/THF的30g十三烷-7-酮(1当量)溶液中加入8.5g硼氢化钠(0.5当量)，并将所得溶液在室温下搅拌2小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用饱和NH4Cl溶液(80ml)猝灭反应物料。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(200ml)和水(100ml)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(2×70ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，27.2g；收率，90％。
ATX-0084：步骤4
Figure BDA0003570003160000981
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段内，在0℃下向溶于120ml THF的5g 6-氨基己酸(1当量)溶液中加入125ml 1N NaOH水溶液，之后加入34ml Boc酸酐(1.3当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。用5％HCl(100ml)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(150ml)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到胶状液体。产量，22.4g；收率，85％。
ATX-0084：步骤5
Figure BDA0003570003160000982
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(200ml)的10g 6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(1当量)溶液中相继加入10.7g EDC.HCl(1.3当量)、18ml Et3N(3当量)和525mg DMAP(0.1当量)。在相同温度下，通过溶于DCM(50ml)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入6g十三烷-7-醇(中间体3，0.7当量)并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.4)监测反应进程。用水(150ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×75ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，然后加入EtOAc(2×100ml)萃取。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8.5克(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0084：步骤6
Figure BDA0003570003160000991
在0℃下向溶于65ml DCM中的10g十六烷-7-基6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸酯(1当量)溶液中加入18.5ml TFA(10当量)并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤，然后用EtOAc(3×100ml)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1ml的三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇起始材料。两步的产量为4.5g；收率，33％。
ATX-0084：步骤7
Figure BDA0003570003160000992
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(300ml)的20g 6-溴己酸(1当量)溶液中相继加入29.3g EDC.HCl(1.5当量)、42.8ml Et3N(3当量)和1.2g DMAP(0.1当量)。使用另外的漏斗向该所得溶液中加入溶于100ml DCM的14.5g(Z)-壬-2-烯-1-醇(1当量)，并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。用水(200ml)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100ml)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150ml)洗涤，然后用EtOAc(2×150ml)萃取。分离有机层，经无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。
使用4％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(60-120目硅胶)。回收醇原料。产量，18.0g；收率，55％。
ATX-0084：步骤8
Figure BDA0003570003160001001
向4.5g十六烷-7-基6-氨基己酸酯(中间体6，1当量)和4.5g(Z)-壬-2-烯-1-基6-溴己酸酯((中间体7，1当量)的90ml ACN溶液中加入2.7g碳酸钾(1.4当量)，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(2×20ml)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。
使用20％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料。产量，3.0g；收率，37％。
ATX-0084：步骤9
Figure BDA0003570003160001002
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于30ml无水DCM的2.5g(Z)-壬-2-烯-1-基6-((6-氧代-6-(十三烷-7-基氧基)己基)氨基)己酸酯(1当量)溶液中加入1.8ml三甲胺(3当量)和672mg三光气(0.5当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
取761mg氢化钠的无水THF(50ml)悬浮液置于2颈250ml圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入2.2g 2-(二甲氨基)乙烷-1-硫醇盐酸盐(3.5当量)并在氮气氛下持续搅拌5分钟。向所得溶液中，通过注射器缓慢加入溶于THF(60ml)的上述碳酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(60ml)猝灭，然后加入EtOAc(130ml)。分离有机层，并且用EtOAc(3×40ml)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。
使用硅胶(100-200目)进行第一次纯化。将4.6g粗化合物吸附在10.0g硅胶上，并倒入90.0g硅胶柱中。在50％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将2.0g粗化合物吸附在6.0g中性氧化铝上，并将所得物倒入40.0g中性氧化铝柱中。在20％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量，1.2g；收率，38％(300mg混合物)。
ATX-0084/RL-47C：1H-NMR(PPM,500MHz,CDCl3):δ＝5.64(m,1),5.52(m,1),4.86(m,1),4.62(d,J＝7.0,2),3.22-3.35(4),3.01(t,J＝7.0,2),2.53(t,J＝7.0,2),2.25-2.34(4),2.27(s,6),2.10(m,2),1.45-1-73(10),1.20-1.40(30),00.84-0.91(9)。
实施例12：ATX-0061的合成
图11示出了如下进一步描述的ATX-0061的合成途径
ATX-0061：步骤1
Figure BDA0003570003160001011
将12g甘氨酸酯(1当量)溶于THF(100ml)中并冷却至0℃以下。通过另外的漏斗向该溶液中相继加入24.2ml三乙胺(1.5当量)和38.11g Boc酸酐(1.5当量)。
通过TLC使用50％EtOAc/己烷；Rf：0.4监测反应进程。
用水猝灭反应物料，16小时后加入EtOAc(100ml)。分离有机层，用EtOAc(2×40ml)洗涤水层，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
将粗产物用60-120硅胶(25％EtOAc/己烷)处理。产量，20.8；收率，88％。
ATX-0061：步骤2
Figure BDA0003570003160001021
向溶于THF(130ml)的18.9g N-Boc甘氨酸酯(1当量)溶液中加入5.85g LiOH(1.5当量)的水溶液，并将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.3)监测反应，不存在SM。
浓缩反应物料，将粗物质用5％HCl(pH 3)猝灭，然后用EtOAc(4×80ml)萃取，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩得到化合物。产量，15g；收率，92％；通过质谱进行确认。
ATX-0061：步骤3
Figure BDA0003570003160001022
向冷却至0℃以下的溶于DCM(30ml)的5g N-Boc-甘氨酸酯(中间体1，1当量)溶液中加入4.5ml Et3N(1.2当量)和6.44g EDC.HCl(1.2当量)。向该反应溶液中加入5.12g七庚-9-醇(0.7当量)的20ml DCM溶液并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.6)观察到原料不存在。用饱和NaHCO3溶液稀释反应物料，分离有机层，用DCM(2×30ml)洗涤水层，以及经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。用粗品(6.8g；产物和醇的混合物)进行下一步。
ATX-0061：步骤4
Figure BDA0003570003160001031
将4g十七烷-9-基(叔丁氧基羰基)甘氨酸盐(中间体2，1当量)溶于DCM(40ml)中并冷却至0℃，加入7.4ml TFA(10当量)并在室温下搅拌1小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)在2小时内检查反应完成。
在减压下浓缩反应物料，将残余物料用饱和碳酸氢钠溶液(30ml)洗涤并用EtOAc(3×30ml)萃取，将有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到中间体3。
使用1-3％MeOH/CHCl3和2mL Et3N对粗产物进行柱层析(硅胶，60-120)。产量，1g；通过1HNMR和质谱进行确认。
ATX-0061：步骤5
Figure BDA0003570003160001032
向冷却至0℃以下的溶于DCM(35ml)的4g溴乙酸(1当量)溶液中加入4.7ml Et3N(1.2当量)和354mg DMAP(0.1当量)，之后加入13.23g HATU(1.2当量)。向该反应溶液中加入2.88g(Z)-壬-2-烯-1-醇(0.7当量)的20ml DCM溶液并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应。
用饱和NaHCO3溶液(80ml)稀释反应物料，分离有机层，用DCM(40ml)洗涤水层，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。通过硅胶(60-120)柱色谱(1.5％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，4g；收率，52％。
ATX-0061：步骤6
Figure BDA0003570003160001041
将1g十七烷-9-基甘氨酸盐(中间体3，1当量)溶于THF(25ml)中，加入0.5ml TEA(1.3当量)和1.08g(Z)-壬-2-烯-1-基2-溴乙酸酯衍生物(中间体4，1.3当量)，并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.4)监测反应进程。将反应混合物用水(30ml)稀释并用EtOAc(20ml×2)萃取，将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
通过柱(硅胶；100-200)色谱(2％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，700mg；收率，47％；通过质谱进行确认。
ATX-0061：步骤7
Figure BDA0003570003160001042
在10分钟内分批向冷却至5℃以下的溶于15ml DCM的700mg十七烷-9-基(Z)-(2-(壬-2-烯-1-基氧基)-2-氧代乙基)甘氨酸酯)(1当量)溶液中加入0.4ml Et3N(3当量)，然后加入209mg三光气(0.5当量)。
通过TLC监测反应混合物的进程，反应在0.5小时内完成，将反应物料在减压下浓缩。
在氮气氛下于0℃搅拌，向423mg N,N-二甲基乙硫醇盐酸盐(3当量)的无水THF(10ml)和DMF(3ml)溶液中加入144mg氢化钠(6当量)。10分钟后，通过溶解于THF(15ml)中，向该反应物料加入上述溶液。将所得溶液在室温下搅拌1小时。
1小时后，通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)观察到反应完成。
将反应物料用饱和NH4Cl溶液(20ml)猝灭，加入水(20ml)和EtOAc(30ml)。用EtOAc(2×20ml)洗涤水层，并用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用具有15％EtOAC/己烷的硅胶(100-200)对粗品进行柱层析，然后使用中性氧化铝和15％EtOAc/己烷，得到纯化合物。产量，520mg；收率，58％；通过1H-NMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0061/RL-42D：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.67(m,1),5.51(m,1),4.92(m,1),4.70(m,2),4.16-4.27(4),3.07(m,2),2.53(m,2),2.27(s,6),2.10(m,2),1-47-1.57(4),1.19-1.40(32),0.83-0.92(9)。
实施例13：ATX-0063的合成
图12示出了如下进一步描述的ATX-0063的合成途径。
ATX-0063：步骤1
Figure BDA0003570003160001051
将12g甘氨酸酯(1当量)溶于THF(100mL)中并冷却至0℃以下。通过另外的漏斗向该溶液中相继加入24.2ml三乙胺(1.5当量)和38.11g Boc酸酐(1.5当量)。
通过TLC使用50％EtOAc/己烷；Rf：0.4监测反应进程。
用水猝灭反应物料，16小时后加入EtOAc(100ml)。分离有机层，用EtOAc(2×40ml)洗涤水层，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
将粗产物用60-120硅胶(25％EtOAc/己烷)处理。产量，20.8；收率，88％。
ATX-0063：步骤2
Figure BDA0003570003160001061
向溶于THF(130ml)的18.9g N-Boc甘氨酸酯(1当量)溶液中加入5.85g LiOH(1.5当量)的水溶液，并将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.3)监测反应，反应产物中不存在原料。
浓缩反应物料，将粗物质用5％HCl(pH 3)猝灭，然后用EtOAc(4×80ml)萃取，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩得到化合物。产量，15g；收率，92％；通过质谱进行确认。
ATX-0063：步骤3
Figure BDA0003570003160001062
向冷却至0℃以下的溶于DCM(50ml)的5g N-Boc-甘氨酸酯(中间体1，1当量)溶液中加入4.5ml Et3N(1.2当量)和6.4g EDC.HCl(1.2当量)。向该反应溶液中加入3.4g十一烷-6-醇(0.7当量)的20ml DCM溶液并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(15％EtOAc/己烷；Rf：0.6)观察到原料不存在。用饱和NaHCO3溶液(20mL)稀释反应物料，分离有机层，用DCM(2×40mL)洗涤水层，以及经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。柱过滤后，用粗品(5.5g；产物和醇的混合物)进行下一步。
ATX-0063：步骤4
Figure BDA0003570003160001071
将3.3g粗十一烷-6-基(叔丁氧基羰基)甘氨酸盐(中间体2，1当量)溶于DCM(20ml)中并冷却至0℃，加入7.6ml TFA(10当量)并在室温下搅拌1小时。
通过TLC(210％MeOH/DCM；Rf：0.5)在2小时内检查反应完成。在减压下浓缩反应物料，将残余物料用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤并用EtOAc(3×25ml)萃取，将有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到中间体3。
使用1-3％MeOH/CHCl3和2ml Et3N对粗产物进行柱层析(硅胶，60-120)。产量，1.2g；收率，40％；通过1HNMR和质谱进行确认。
ATX-0063：步骤5
Figure BDA0003570003160001072
向冷却至0℃以下的溶于DCM(35mL)的4g溴乙酸(1当量)溶液中加入4.7ml Et3N(1.2当量)，之后加入13.23g HATU(1.2当量)和354mg DMAP(0.1当量)。向该反应溶液中加入2.88g(Z)-壬-2-烯-1-醇(0.7当量)的20mL DCM溶液，并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应。
用饱和NaHCO3溶液(80ml)稀释反应物料，分离有机层，用DCM(40ml)洗涤水层，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。通过硅胶(60-120)柱色谱(1.5％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，4g；收率，52％。
ATX-0063：步骤6
Figure BDA0003570003160001073
将1.2g十一烷-6-基甘氨酸盐(中间体3，1当量)溶于25ml THF中，加入0.9ml TEA(1.3当量)和1.37g(Z)-壬-2-烯-1-基2-溴乙酸盐(中间体4，1当量)，并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。将反应混合物用水(30ml)稀释并用EtOAc(20ml×2)萃取，将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
通过柱(硅胶；100-200)色谱(3％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，800mg；收率，37％；通过质谱进行确认。
ATX-0063：步骤7
Figure BDA0003570003160001081
在10分钟内分批向冷却至5℃以下的溶于DCM的800mg(Z)-壬-2-烯-1-基(2-氧代-2-(十一烷-6-基氧基)乙基)甘氨酸盐(1当量)溶液中加入0.4ml Et3N(3当量)，之后加入209mg三光气(0.5当量)。
通过TLC监测反应混合物的进程，反应在1小时内完成，将反应物料在减压下浓缩。
在氮气氛下于0℃搅拌，向423mg N,N-二甲基乙硫醇盐酸盐(3当量)的无水THF和DMF(分别为10ml和5ml)溶液中加入144mg氢化钠(6当量)。10分钟后，通过溶于THF中，向该反应物料加入上述溶液。将所得溶液在室温下搅拌1小时。
1小时后，通过TLC(70％EtOAc/己烷；Rf：0.4)观察到反应完成。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(25ml)猝灭，加入水(20ml)和EtOAc(20ml)。用EtOAc(2×20ml)洗涤水层，并用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用具有20％EtOAc/己烷的硅胶(100-200)对粗品进行柱层析，然后使用中性氧化铝和5％EtOAc/己烷，得到纯化合物。产量，510mg；收率，48％；通过1H-NMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0063/RL-42A：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.67(m,1),5.52(m,1),4.92(m,1),4.70(m,2),4.15-4.27(4),3.06(m,2),2.53(m,2),2.27(s,6),2.09(m,2),1.47-1.57(4),1.20-1.41(20),0.82-0.92(9)。
实施例14：ATX-0064的合成
图13示出了如下进一步描述的ATX-0064的合成途径。
ATX-0064：步骤1
Figure BDA0003570003160001091
将12g甘氨酸乙酯(1当量)溶于THF(100ml)中并冷却至0℃以下。向该所得溶液中，通过另外的漏斗相继加入24.2ml三乙胺(1.5当量)和38.11g Boc酸酐(1.5当量)。
通过TLC使用50％EtOAc/己烷；Rf：0.4监测反应进程。
16小时后，用水猝灭反应物料并加入EtOAc(100mL)。分离有机层，用EtOAc(2×40ml)洗涤水层，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
将粗产物用60-120硅胶(25％EtOAc/己烷)处理。产量，20.8；收率，88％。
ATX-0064：步骤2
Figure BDA0003570003160001092
向溶于THF(130ml)的18.9g N-Boc甘氨酸酯(1当量)溶液中加入5.85g LiOH(1.5当量)的水溶液，并将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(60％EtOAc/己烷；Rf：0.3)监测反应，反应产物中不存在原料。
浓缩反应物料，将粗物质用5％HCl(pH 3)猝灭，然后用EtOAc(4×80ml)萃取，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩得到化合物。产量，15g；收率，92％；通过质谱进行确认。
ATX-0064：步骤3
Figure BDA0003570003160001101
向冷却至0℃以下的溶于DCM(50mL)的5g N-Boc-甘氨酸酯(中间体1，1当量)溶液中加入4.5ml Et3N(1.2当量)和6.4g EDC.HCl(1.2当量)。向该反应溶液中加入4.84g十六烷-10-醇(0.7当量)的15ml DCM溶液，并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(15％EtOAc/己烷；Rf：0.6)观察到原料不存在。用饱和NaHCO3溶液稀释反应物料，分离有机层，用DCM(2×30ml)洗涤水层，以及经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
柱过滤后，用粗品(5.5g；产物和醇的混合物)进行下一步。
ATX-0064：步骤4
Figure BDA0003570003160001102
将3.85g粗十七烷-9-基(叔丁氧基羰基)甘氨酸盐(中间体2，1当量)溶于30ml DCM中并冷却至0℃，加入7.4ml TFA(10当量)，并在室温下搅拌1小时。
通过TLC(210％MeOH/DCM；Rf：0.5)在2小时内检查反应完成。
在减压下浓缩反应物料，将残余物料用饱和碳酸氢钠溶液(30ml)洗涤并用EtOAc(3×30ml)萃取，将有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，获得中间体3。
使用1-3％MeOH/CHCl3和2mL Et3N对粗产物进行柱层析(硅胶，60-120)。产量，2.2g；通过1H NMR和质谱进行确认。
ATX-0064：步骤5
Figure BDA0003570003160001111
向冷却至0℃以下的溶于DCM(35mL)的4g溴乙酸(1当量)溶液中加入4.7ml Et3N(1.2当量)，之后加入13.23g HATU(1.2当量)和354mg DMAP(0.1当量)。向该反应溶液中加入2.88g(Z)-壬-2-烯-1-醇(0.7当量)的20ml DCM溶液并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.7)监测反应。
用饱和NaHCO3溶液(80ml)稀释反应物料，分离有机层，用DCM(40ml)洗涤水层，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
通过硅胶(60-120)柱色谱(1.5％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，4g；收率，52％。
ATX-0064：步骤6
Figure BDA0003570003160001112
将2.1g十六烷-8-基甘氨酸盐(中间体3，1当量)溶于50ml THF中，加入1.2ml TEA(1.3当量)和2.39g(Z)-壬-2-烯-1-基2-溴乙酸盐(中间体4，1.3当量)，并在室温下搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。将反应混合物用水(30ml)稀释并用EtOAc(2×30ml)萃取，将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。
通过柱(硅胶；100-200)色谱(3％EtOAc/己烷)纯化残余物料。产量，2.2g；收率，65％；通过质谱进行确认。
ATX-0064：步骤7
Figure BDA0003570003160001121
在10分钟内分批向冷却至5℃以下的溶于15ml DCM的2.2g十七烷-9-基(Z)-(2-(壬-2-烯-1-基氧基)-2-氧代乙基)甘氨酸盐(1当量)溶液中加入1.6ml Et3N(3当量)，之后加入678mg三光气(0.5当量)。
通过TLC监测反应混合物的进程，反应在1小时内完成，将反应物料在减压下浓缩。
在氮气氛下于0℃搅拌，向3.94g N,N-二甲基乙硫醇盐酸盐(7当量)的无水THF和DMF(分别为35ml和15ml)溶液中加入672mg氢化钠(7当量)。10分钟后，通过溶于THF中，向该反应物料加入上述溶液。将所得溶液在室温下搅拌1小时。
1小时后，通过TLC(70％EtOAc/己烷；Rf：0.4)观察到反应完成。将反应物料用饱和NH4Cl溶液(25ml)猝灭，加入水(20ml)和EtOAc(20ml)。用EtOAc(20ml×2)洗涤水层，并且用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用硅胶(100-200)，用25％EtOAc/己烷然后用中性氧化铝和15-20％EtOAc/己烷对粗品进行柱层析，得到纯化合物。产量，1.0mg；收率，40％；通过1H-NMR、HPLC和质谱进行确认。
ATX-0064/RL-42C：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.67(m,1),5.50(m,1),4.92(m,1),4.70(t,J＝7.0,2),3.06(,m,2),2.53(m,2),2.27(s,6),1.47-1.57(4),1.17-1.40(30),0.82-0.93(9)。
实施例15：ATX-0081的合成
图14示出了如下进一步描述的ATX-0081的合成途径。
ATX-0081：步骤1
Figure BDA0003570003160001131
在氮气氛下，通过加料漏斗在20分钟内向冷却至-15℃的庚基溴化镁的370mL无水THF(原位产生)(1.5当量)溶液中滴加溶于80mL THF的乙酸甲酯(0.5当量)溶液，并将所得反应混合物温热至室温并搅拌过夜。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。
用饱和NH4Cl溶液(500mL)猝灭反应物料。分离有机层，并且用EtOAc(3×100mL)洗涤水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用20％EtOAc/己烷在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，169.0g；收率60％。
ATX-0081：步骤2
Figure BDA0003570003160001132
相继使用加料漏斗，在15分钟的时间段内，在冰浴中向100g 4-氨基丁酸(1当量)的THF溶液中加入1N NaOH水溶液(1.065升)(1.1当量)，之后加入1.3当量Boc酸酐。将所得溶液温热至室温并搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5)监测反应进程。
用5％HCl(1升)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300mL)。分离有机层，并且用EtOAc(3×200mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到胶状液体。
使用80-100％EtOAc/己烷在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，161.0g；收率，82％。
ATX-0081：步骤3
Figure BDA0003570003160001141
在氮气氛下以10分钟的间隔向在冰浴中冷却的3×17.8g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸的DCM(350mL)(1当量)溶液中相继加入2×25.1g EDC.HCl(1.5当量)、Et3N(2.0当量)和3×1.0g DMAP(0.1当量)。在相同温度下，通过另外的漏斗向该所得溶液中滴加3×20.0g醇(1.0当量)(溶于150mL DCM)，并将所得反应物料温热至室温并在氮气氛下搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的已烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。
用水(450mL)猝灭反应物料，并分离有机层。用DCM(3×100mL)洗涤水层。将合并的有机层在减压下浓缩。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(300mL)搅拌5分钟，并且用EtOAc(3×150mL)萃取水相。分离有机层，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并且用粗品进行下一步骤。产量，69.0g(粗品；所需的化合物和醇)；
ATX-0081：步骤4
Figure BDA0003570003160001142
在冰浴中向溶于DCM的69.0g十五烷-8-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入TFA(10当量)，并将所得反应溶液温热至室温并在氮气氛下搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(450mL)洗涤，然后用EtOAc(3×150mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1mL三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，47.0g；两步的收率为57％
ATX-0081：步骤5
Figure BDA0003570003160001151
取50.0g 4-溴丁酸的DCM(450mL)(1.0当量)溶液置于2L圆底烧瓶中，冷却至0℃以下，在氮气氛下以10分钟的间隔向该溶液中相继加入86.0g EDC.HCl(1.5当量)、83.3mLEt3N(2.0当量)和3.6g DMAP(0.1当量)。使用另外的漏斗向该所得溶液中加入42.5g醇(1.0当量)(通过溶于200mL DCM)，并将所得溶液温热至室温并在氮气氛下搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的已烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。
用水(250mL)猝灭反应物料，并分离有机层。用DCM(2×150mL)洗涤水层。将合并的有机层在减压下浓缩。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(150mL)洗涤，然后用EtOAc(2×150mL)萃取。将有机层分离并在减压下浓缩。
使用5％EtOAc/己烷在硅胶(60-120目硅胶)上对粗化合物进行柱层析。产量，55.0g；收率，63％
ATX-0081：步骤6
Figure BDA0003570003160001152
向2×20.0g十五烷-8-基4-氨基丁酸酯(1当量)、2×18.5g(Z)-壬-2-烯-1-基4-溴丁酸酯(1当量)的180ml ACN溶液中加入2×17.6g碳酸钾(2当量)，并将所得混合物在氮气氛下于70℃回流5小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.4)监测反应进程。将反应物料过滤、用ACN(2×20mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。
使用30％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料(胺)。产量，24.0g；收率，36％。
ATX-0081：步骤7
Figure BDA0003570003160001161
向溶于250ml无水DCM的24.0g(Z)-壬-2-烯-1-基4-((4-氧代-4-(十五烷-8-基氧基)丁基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入13.5g三光气(1当量)，并将反应混合物冷却至0℃，并在10分钟内滴加18.4mL吡啶(5当量)。将反应混合物在20℃下搅拌4小时。
在减压下去除DCM，并且将混合物吸收在吡啶(300mL)中。冷却至0℃后，分批加入32.3g二甲氨基乙硫醇盐酸盐(5当量)，并将所得溶液在氮气氛下于20℃搅拌过夜。
在TLC检查后，将反应物料在减压下浓缩至干。向该残余物中加入250mL EA和200mL(10％)柠檬酸。分离有机相，然后再次用10％柠檬酸(100mL)洗涤有机层一次，并且再次用10％盐水(200mL)洗涤一次。将所得有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到粗产物。
在硅胶(100-200目；500g)上进行第一次纯化。在梯度洗脱中，在70％EtOAc/己烷下洗脱化合物。浓缩后的化合物(22.0g)呈微红色。使用中性氧化铝(400g)和HPLC级溶剂进行第二次纯化。在15％EtOAc/己烷下洗脱化合物，并且在减压下浓缩纯级分，得到19.0g黄色液体。
将产物(14.0g)用200mL EtOH(HPLC级)稀释，然后向溶液中加入木炭(50％W/W)7.0g，并在室温下继续搅拌过夜。将所得溶液通过硅藻土垫过滤并浓缩滤液。最后，将化合物溶于120mL 50％EtOAc/己烷中，并且通过棉塞过滤(以除去氧化铝和二氧化硅颗粒)并在减压下浓缩。最终化合物(11.5g)呈浅黄色。
将第二批(5.0g)用80mL EtOH(HPLC级)稀释，然后向溶液中加入木炭(50％W/W)2.5g，并在室温下继续搅拌过夜。将所得溶液通过硅藻土垫过滤并浓缩滤液。最后，将化合物溶于60mL 50％EtOAc/己烷中，并且通过棉塞过滤(以除去氧化铝和二氧化硅颗粒)并在减压下浓缩。最终化合物(4.0g)呈红黄色。产量，15.5g；收率，51％。
ATX-0081：1H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝5.62(m,1),5.51(m,1),
4.86(m,1),4.62(d,J＝6.0Hz,2),3.37(brs,4),3.01(t,J＝7.1Hz,2),2.51(t,J＝7.1Hz,2),2.31(m,4),2.26(s,6),2.07(m,2),1.89(brs,4),1.42-1.57(4),1.16-1.40(28),0.82-0.91(9)
实施例15：ATX-0085的合成
图15示出了如下进一步描述的ATX-0085的合成途径。
ATX-0085：步骤1
Figure BDA0003570003160001171
在500mL单颈圆底烧瓶中，取溶于DCM(200mL)的30.0g庚酸(1当量)，然后在0℃下缓慢加入26.7mL草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌，然后加入1ml DMF(催化剂)。将所得反应混合物在室温下搅拌2h。
在单独的1升双颈圆底烧瓶中，使用另外的漏斗向40.5g N,O-二甲基羟胺盐酸盐(2当量)的DCM(250mL)溶液中加入86.6mL三甲胺(3当量)，在0℃下搅拌。在减压下浓缩后，在氮气氛下通过溶于DCM(100mL)中，使用加料漏斗滴加上述酰氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3h。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250mL)稀释反应物料。
分离有机层，并且用DCM(3×100mL)洗涤水层。将合并的有机层在减压下浓缩。
使用(60-120硅胶)用10％EtOAc/己烷对粗制化合物进行柱层析。产量，38.0g；收率，84％。
ATX-0085：步骤2
Figure BDA0003570003160001181
取62.3g己基溴化镁(1.5当量)的乙醚溶液置于1L双颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于0℃搅拌，向该溶液中加入溶于250mL乙醚的38.0g N-甲氧基-N-甲基庚酰胺(1当量)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。
用饱和NH4Cl溶液(200mL)猝灭反应物料。分离有机层，并且用醚(2×100mL)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。
使用(60-120目硅胶)用2％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析。产量，30.8g；收率，71％。
ATX-0085：步骤3
Figure BDA0003570003160001182
在0℃下向溶于200ml MeOH/THF(10:1，v:v)的30.0g十三烷-7-酮(1当量)溶液中加入8.5g硼氢化钠(1.5当量)，并将所得溶液在室温下搅拌2小时。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。
用饱和NH4Cl溶液(80mL)猝灭反应物料。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(200mL)和水(100mL)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(2×70mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，27.2g；收率，90％。
ATX-0085：步骤4
Figure BDA0003570003160001191
相继使用另外的漏斗，在15分钟的时间段内，在0℃下向溶于THF/NaOH水溶液(490mL)的50.0g 4-氨基丁酸(1当量)溶液中加入140mL Boc酸酐(1.3当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.5)监测反应进程。
用5％HCl(250mL)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(300mL)。分离有机层，并且用EtOAc(3×150mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到胶状液体。产量，80.0g；收率，81％。通过1H NMR进行确认。注：注意：由于Boc酸(中间体4)在1H NMR中观察到一些杂质(20-30％)，其反映在步骤5和步骤6的收率中
ATX-0085：步骤5
Figure BDA0003570003160001192
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(200mL)的10.0g 4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1当量)溶液中相继加入12.2g EDC.HCl(1.3当量)、20.4mL Et3N(3当量)和601mg DMAP(0.1当量)。在相同温度下，通过溶于DCM(150mL)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入醇并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的已烷溶液；Rf：0.5)监测反应进程。
用水(150mL)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×75mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，然后加入EtOAc(200mL)。将有机层分离、在减压下浓缩，并且用粗产物进行下一步骤。产量，8.0g(粗品；所需的化合物和醇)。
ATX-0085：步骤6
Figure BDA0003570003160001193
在0℃下向溶于65mL DCM的8.0g十三烷-7-基4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸酯(1当量)溶液中加入15.7mL TFA(10当量)，并在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(10％MeOH的CHCl3溶液；Rf：0.3)监测反应进程。
在减压下浓缩反应物料。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。分离有机层并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶；4％MeOH/CHCl3和1mL三乙胺)对粗化合物进行柱层析，并回收醇。产量，3.5g；两步的收率为25％。通过质谱进行确认。
ATX-0085：步骤7
Figure BDA0003570003160001201
在0℃下向溶于DCM(150mL)的20.0g己酸(1当量)中缓慢加入22.1mL草酰氯(1.5当量)，在氮气氛下搅拌，然后加入1mL DMF(催化剂)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。
在单独的烧瓶中，使用加料漏斗向33.5g N,O-二甲基羟胺盐酸盐(2当量)的DCM(250mL)溶液中加入71.7mL三甲胺(3当量)，在0℃下搅拌。在减压下浓缩后，在氮气氛下通过溶于DCM(100mL)中，使用加料漏斗滴加上述酰氯20分钟。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌3小时。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。用水(250mL)稀释反应物料。分离有机层，并且用DCM(2×100mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。
使用(60-120硅胶)用10％EtOAc/己烷对粗制化合物进行柱层析。产量，21.0g；收率，76％。
ATX-0085：步骤8
Figure BDA0003570003160001202
在氮气氛下于0℃向33.0g戊基溴化镁(1.5当量)的乙醚溶液中加入溶于220mL乙醚的20.0g N-甲氧基-N-甲基己酰胺(1当量)，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。
通过TLC(10％EtOAc的己烷溶液；Rf：0.6)监测反应进程。
用饱和NH4Cl溶液(200mL)猝灭反应物料。分离有机层，并且用醚(2×100mL)洗涤水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。使用(60-120目硅胶)用2％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析。产量，15.4g；收率，72％。
ATX-0085：步骤9
Figure BDA0003570003160001211
在0℃下向溶于100ml MeOH/15ml THF的15.0g十一烷-6-酮(1当量)溶液中加入4.9g硼氢化钠(1.5当量)，并将所得溶液在室温下搅拌2h。
通过TLC(10％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。
用饱和NH4Cl溶液(80mL)猝灭反应物料。在减压下去除溶剂，并且将所得粗品在EtOAc(200mL)和水(100mL)之间分配。分离有机层，并且用EtOAc(2×70mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层，得到白色固体。产量，13.9g；白色固体；收率，92％
ATX-0085：步骤10
Figure BDA0003570003160001212
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃以下的溶于DCM(300mL)的10.0g 5-溴戊酸(1当量)溶液中相继加入13.7g EDC.HCl(1.3当量)、23.0mL Et3N(3当量)和674mg DMAP。在相同温度下，通过溶于DCM(150mL)中，使用另外的漏斗向该所得溶液中加入9.5g醇(1当量)并在氮气氛下于室温搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的已烷溶液；Rf：0.7)监测反应进程。
用水(200mL)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×100mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，然后加入EtOAc(3×100mL)。分离有机层并在减压下浓缩，并且用粗品进行下一步骤。使用(60-120目硅胶)用5％EtOAc/己烷对粗制化合物进行柱层析，并且回收原料(醇)。生量，11.6g；收率，62％。
ATX-0085：步骤11
Figure BDA0003570003160001221
向4.5g十四烷-7-基4-氨基丁酸酯(1当量)、5.2g十一烷-6-基5-溴戊酸酯(1当量)的ACN溶液中加入3.0g碳酸钾(1.4当量)，并将所得混合物在氮气氛下于90℃回流4小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.45)监测反应进程。
将反应物料过滤、用ACN(2×20mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。使用20％EtOAc/己烷对粗化合物进行柱层析(100-200目硅胶)。回收原料(胺和溴化合物)。产量，2.2克纯化合物；收率，25％；和1.1克混合物。通过质谱进行确认。
ATX-0085：步骤12
Figure BDA0003570003160001222
在氮气氛下于0℃以5分钟的间隔向溶于无水DCM的2.2g十一烷-6-基5-((4-氧代-4-(十三烷-7-基氧基)丁基)氨基)戊酸酯(1当量)溶液中加入1.6mL三甲胺(3当量)和604mg三光气(0.5当量)。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌1小时。将所得反应物料在减压下浓缩，并且保持在氮气氛下。
在氮气氛下于0℃搅拌的烧瓶中，向684mg氢化钠(7当量)的无水THF(30mL)悬浮液中加入2.0g 2-(二甲基氨基)乙烷-1-硫醇盐酸盐(3.5当量)并在氮气氛下搅拌5分钟。通过注射器向该所得溶液中缓慢加入溶于THF(50mL)的上述氨基甲酰氯约10分钟。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌过夜。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。
用饱和NH4Cl(40mL)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(100mL)。分离有机层，并且用EtOAc(2×40mL)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并将所得粗品进行柱层析。使用硅胶(100-200目)进行第一次纯化。将5.0g粗化合物吸附在9.0g硅胶上，并倒入70g硅胶柱中。在50％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用中性氧化铝和HPLC级溶剂进行第二次纯化。将2.0g粗化合物吸附在7.0g中性氧化铝上，并将所得物倒入40g中性氧化铝柱中。在25％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量：1.4g；收率：51％。通过1H NMR进行确认。
ATX-00851H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝4.87(m,2),3.36(brs,4),3.02(t,J＝7.1Hz,2),2.52(t,J＝7.1Hz,2),2.31(m,4),2.27(s,6),1.88(brs,2),1.56-1.66(4),1.46-1.54(8),1.21-1.34(30),0.89(m,12)。
实施例15：ATX-0134的合成
图16示出了如下进一步描述的ATX-0134的合成途径。
ATX-0134：步骤1
Figure BDA0003570003160001231
在1L单颈圆底烧瓶中，在氮气氛下于冰浴温度向50.0g 2-溴乙酸甲酯(1当量)的400mL DMF搅拌溶液中加入90.3g碳酸钾(2当量)，之后加入17.5g苄胺(0.5当量)，并将所得反应混合物温热至室温并继续搅拌36h。
通过TLC(20％EtOAc/己烷；Rf：0.4；茚三酮炭化)监测反应进程。
用冰水(1L)稀释反应物料，然后加入EtOAc(250mL)。分离有机层，并且用EtOAc(3×100mL)洗涤水层。再次用冰水(500mL)洗涤合并的有机层，并且将所得有机层Na2SO4经无水干燥并在减压下浓缩。
使用15-20％EtOAc/十六烷在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，35.0g；收率，85％。
ATX-0134：步骤2
Figure BDA0003570003160001241
将10.5g 10％Pd/C加入到反应500mL氢化烧瓶中，其中含有35.0g2,2'-(苄基氮杂二基)二乙酸二乙酯的EtOAc溶液，并使用Parr摇动器(60psi)对反应物料进行氢化直至原料消失(2h)。
通过TLC(5％MeOH/CHCl3；Rf：0.5；茚三酮炭化)监测反应进程。
将反应物料通过硅藻土垫过滤，并且用EtOAc(2×60mL)洗涤。将合并的滤液在减压下浓缩。产量，30.0g(粗品)。
ATX-0134：步骤3
Figure BDA0003570003160001242
在冰浴温度下，相继使用加料漏斗向30.0g 2,2'-氮杂二乙酸二甲酯(1.0当量)的THF溶液中加入38.7mL三乙胺(1.5当量)，之后加入55.5mL Boc酸酐(1.3当量)。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌过夜。
通过TLC(40％EtOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。
用水(250mL)稀释反应物料，然后加入EtOAc(150mL)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100mL)洗涤水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。使用15％-20％EtOAc/十六烷在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，35.0g；收率，96％。
ATX-0134：步骤4
Figure BDA0003570003160001251
向在冰浴温度下搅拌的35.0g 2,2'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二乙酸二甲酯(1.0当量)的THF溶液中加入16.8g氢氧化锂(75mL，5.3M)(3当量)水溶液。将所得反应溶液在氮气氛下于室温搅拌5小时。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.2)监测反应进程。
用5％HCl(400mL)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(200mL)。分离有机层，并且用EtOAc(2×100mL)洗涤水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。使用100％EtOAc在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，29.0g；收率，93％。
ATX-0134：步骤5
Figure BDA0003570003160001252
1 2,2'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二乙酸233.220.0511.0
2醇228.420.1022.0
3 EDC.HCl 191.700.1543.0
4三乙胺1010.1543.0
5 DMAP 122.170.0020.1
6 DCM 400mL
在氮气氛下以10分钟的间隔向冷却至0℃至50℃(冰浴)的12.0g4,4'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二丁酸(1当量)的250mL DCM溶液中相继加入29.5g EDC.HCl(3当量)、21.4mL Et3N(3当量)和628mg DMAP(0.1当量)。在相同温度下，通过加料漏斗向该所得溶液中加入23.5g醇(溶于150mL DCM)(2当量)，并将所得反应物料温热至室温并在氮气氛下搅拌24小时。
通过TLC(10％EtOAc的已烷溶液；Rf：0.6；PMA炭化)监测反应进程。
用水(100mL)猝灭反应物料，然后分离有机层。用DCM(2×80mL)洗涤水层。在减压下浓缩合并的有机层。将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100mL)搅拌5分钟以除去未反应的酸，然后加入EtOAc(2×80mL)。将有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。使用2-3％EtOAc/己烷在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析。产量，15.0g；收率，44％。
ATX-0134：步骤6
Figure BDA0003570003160001261
在0℃至50℃(冰浴)之间向15.0g二(十五烷-8-基)2,2'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二乙酸酯(1当量)的120mL DCM溶液中加入17.7mL TFA(10当量)，并将反应物料温热至室温并在氮气氛下搅拌4小时。
通过TLC(10％ETOAc/己烷；Rf：0.5)监测反应进程。
在减压下浓缩反应物料，并将所得粗品用饱和NaHCO3溶液(100mL)搅拌5分钟(以除去痕量的TFA)，并用EtOAc(3×100mL)萃取水相。分离有机层并在减压下浓缩。在硅胶(60-120目)上对粗化合物进行柱层析，并且用10％EtOAc/己烷洗脱化合物。产量，10.4g；收率，82％。
ATX-0134：步骤7
Figure BDA0003570003160001262
在冰浴温度和氮气氛下以5分钟的间隔向1.5g二(十五烷-8-基)2,2'-氮杂二乙酸乙酯(1当量)的20mL无水DCM溶液中加入1.1mL三甲胺(3当量)和401mg三光气(0.5当量)。然后将所得溶液温热至室温并在氮气氛下搅拌1h。在原料完成后(通过TLC检查)，将所得反应物料在减压下浓缩并保持在氮气氛下。将溶于10mL THF的1.1g 3-(二乙基氨基)丙烷-1-硫醇(3当量)溶液加入到在氮气氛下冷却到0℃至50℃之间的129mg氢化钠(2当量)的无水THF(10mL)悬浮液中，并继续搅拌5分钟。在相同温度下，通过加料漏斗向该所得溶液中加入溶于THF(30mL)的上述氨基甲酰氯约5分钟。将所得溶液温热至室温并在氮气氛下继续搅拌过夜。
通过TLC(10％MeOH/CHCl3；Rf：0.5；PMA炭化)监测反应进程。
用饱和NH4Cl(30mL)猝灭反应物料，然后加入EtOAc(50mL)。分离有机层，并且用EtOAc(2×40mL)洗涤水层。浓缩合并的有机层，并且将所得粗产物进行柱层析。使用中性氧化铝(100g)进行第一次纯化。在梯度洗脱中，在20％EtOAc/己烷下洗脱化合物。使用硅胶(100-200目；80g)和HPLC级溶剂进行第二次纯化。在50％EtOAc/己烷下洗脱化合物。产量：680mg；收率：34％。
ATX-01341H-NMR(PPM,400MHz,CDCl3):δ＝4.91(m,2),4.21(s,2),4.16(s,2),2.95(t,J＝7.1Hz,2),2.54(m,6),1.79(m,2),1.46-1.52(8),1.17-1.36(40),1.03(t,J＝7.8Hz,6),0.87(t,J＝7.1Hz,12)。
实施例15：ATX-0044和ATX-0091至ATX-0133的合成。
使用前述实施例的方法合成ATX-0044、ATX-0085、ATX-0111、ATX-0132、ATX-0100、ATX-0117、ATX-0114、ATX-0115、ATX-0101、ATX-0106、ATX-0116、ATX-0122、ATX-0123、ATX-0124、ATX-0126、ATX-0129和ATX-0133。
实施例16：pKa值
通过Jayaraman,2012,Angew.Chem.Int.Ed.,51:8529-33中的方法测量LNP或胶束制剂中阳离子脂质的pKa。在0.06mg/mL 6-(对甲苯甲酰基)-2-萘磺酸钠盐(TNS)试剂(Sigma Aldrich)(pH敏感荧光探针)存在下，将脂质胶束或LNP在pH范围为3至12的通用缓冲液中稀释至1mM总脂质。阴离子TNS分子在与带正电的膜表面缔合时发荧光，但在溶液中游离时不发荧光，从而允许测量pKa。在光谱板读取器上测量TNS信号。将TNS信号绘制为pH的函数，并且使用非线性(Boltzman)分析以确定pKa。
测定中使用的试剂包括
·Hepes游离酸，CAS：7365-45-9(VWR，0511-1KG或等同物)
·MES，HPLC级：(Sigma 105228-100G或等同物)
·醋酸铵，HPLC级：(Sigma 90335-100mL或等同物)
·氯化钠，HPLC级(VWR EM-MX0475-1或等同物)
·TNS(Sigma-Aldrich T9792-250mg或等同物)
·盐酸
·DMSO
·不含钙和镁的DPBS(GE，SH30028.O2或等同物)
·H2O，HPLC级(OmniSolv，WX0004-1或等同物)
为了在聚苯乙烯无菌储存瓶中制备通用缓冲液(UB)的原液，使用下表制备1L。
组分 MW(g/mol) [最终](mM)
Hepes 238.3 10
MES 213.2 10
醋酸铵 77.1 10
NaCl 58.4 130
将试剂通过0.2μm过滤器无菌过滤。UB溶液的制备包括将5mL 1M HCl加入到350mL原液中。
为了制备pH梯度，使用具有20mL UB缓冲液的离心管(50mL)。(pH～3)和不同量的2N NaOH。以1mg/mL溶于DMSO的TNS原液。将60μL 1mg/mL的TNS加入到940μL水中，以达到0.06mg/mL的工作溶液浓度。每板分析五个测试样本、以1mM总脂质溶于PBS的1mL LNP样本和1个参考样本。在孔中制备不同pH值的样本，其中加入25μL的0.06mg/mL TNS。每孔加入15μL的测试样本。将微板在室温下于暗处温育15分钟。TNS模板可用于格式化读板器的数据。在OriginPro 8或同等软件中对样本进行非线性(Boltzman)回归分析。
结果示于表1中。一般来讲，通过可电离头部基团附近的酯来增加亲脂性降低了测量pKa，同时使计算pKa更偏碱性。增加醇的亲脂性同时缩短酯链的长度可对测量pKa产生重大影响。例如，当将醇的亲脂性増加到支链烷基基团时，将酯缩短成丁酸酯没有影响(参见：ATX-0057和ATX-0058对比ATX-0002)。当将酯缩短成乙酸酯时会产生重大影响，例如，与ATX-0002相比，对于1-支链/1-Z-2-壬烯醇酯的ATX-0061/ATX-0064(Δ＝-0.90)和ATX-0063(Δ＝-0.7)；以及对于具有ΔcLogP+4.0的乙酸酯/双支化酯的ATX-0062/ATX-0065(Δ＝-3.20)。
不考虑受理论的束缚，结果表明，与预期相比，增加亲脂性(通过cLogP测量)与链缩短相结合对降低测量pKa和增加脂质纳米颗粒的生物活性具有重要意义。
实施例17：体内EPO mRNA稳定性
测量血浆中mRNA的水平，并在注射包含不同阳离子脂质的纳米颗粒后进行比较。在注射脂质包封的小鼠epo mRNA之后，将雌性Balb/c小鼠(6-8周龄)用于评估体内血浆促红细胞生成素(epo)水平。所有制剂通过尾静脉注射以0.03mg/kg和0.1mg/kg的剂量、5ml/kg的剂量体积静脉内施用。在制剂注射后6小时，经由心脏穿刺在2％异氟烷下进行终端采血。将血液收集到0.109M柠檬酸盐缓冲管中，并通过以5000rpm离心10分钟进行处理。收集血清并分析epo mRNA水平。结果示于图17中。结果显示ATX-0057、ATX-0081、ATX-0082、ATX-0083、ATX-0084、ATX-0085、ATX-0086和ATX-0087比ATX-0002显著改善。
实施例18：体内小鼠因子VII沉默和EPO表达
使用脂质体文库的肝脏指导的体内筛选，测试了一系列化合物，所述化合物促进肝细胞中高水平的siRNA介导的基因沉默，所述细胞包含肝实质。因子VII(血凝血因子)是用于测定向肝脏递送功能性siRNA的合适目标基因。因为该因子是在肝细胞中特异性产生的，所以基因沉默表明成功递送至实质，而不是递送至网状内皮系统的细胞(例如Kupffer细胞)。此外，因子VII是可容易地在血清中测量的分泌蛋白，不需要对动物实施安乐死。通过测量蛋白质水平可容易地确定mRNA水平的沉默。这是因为蛋白质的半衰期较短(2-5小时)。用脂质和比较样本磷酸盐缓冲盐水(PBS)配制具有针对因子VIII的siRNA的组合物。将雌性C57BL/6小鼠(6-8周龄)用于FVII siRNA敲除(KD)实验。
所有制剂通过尾静脉注射以0.03mg/kg和0.1mg/kg的剂量、5mg/kg的剂量体积静脉内施用。在制剂注射后48小时，经由心脏穿刺在2％异氟烷下进行终端采血。将血液收集到0.109M柠檬酸盐缓冲管中，并通过在1200G下离心10分钟进行处理。收集血浆并通过显色测定法(Biophen FVII,Aniara Corporation)分析因子VII蛋白质水平。使用来自注射PBS的小鼠的样本构建标准曲线，并通过将处理组与未处理的PBS对照进行比较来确定相对因子VII表达。结果表明，ATX-0057和ATX-0058在0.03和0.1mg/kg下均比ATX-002显著更有效(图18)。
表1示出了由包含本文所公开的脂质的脂质纳米颗粒所导致的敲除。
测量使用包含本文所述脂质的脂质纳米颗粒递送mRNA之后的Epo表达。
在递送脂质包封的小鼠epo mRNA之后，将雌性Balb/c小鼠(6-8周龄)用于评估体内epo蛋白表达。所有制剂通过尾静脉注射以0.03mg/kg和0.1mg/kg的剂量、5mL/kg的剂量体积静脉内施用。在制剂注射后6小时，经由心脏穿刺在2％异氟烷下进行终端采血。将血液收集到0.109M柠檬酸盐缓冲管中，并通过以5000rpm离心10分钟进行处理。收集血清并通过epo ELISA测定法(R&D systems)分析epo蛋白水平。使用来自注射PBS的小鼠的样本构建标准曲线，并通过将处理组与未处理的PBS对照进行比较来确定相对因子VII表达。结果表明，在0.1mg/ml下，ATX-0057纳米颗粒中epo mRNA的表达量显著高于ATX-002(图19)。

Claims (41)

1.一种药物组合物，所述药物组合物包含脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包封核酸，其中所述脂质纳米颗粒包含式I的化合物的阳离子脂质
Figure FDA0003570003150000011
其中
R1为8、9、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L1为1至15个碳的直链烷烃；
R2为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷基或烯基，或者8、9、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L2为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷烃；
X为O或S；
R3为1、2、3、4、5或6个碳的直链烷烃；并且
R4和R5相同或不同，各自为1、2、3、4、5或6个碳的直链或支链非环状烷基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物选自由以下式的化合物构成的组：ATX-0082、ATX-0085、ATX-0083、ATX-0121、ATX-0091、ATX-0102、ATX-0098、ATX-0092、ATX-0084、ATX-0095、ATX-0125、ATX-0094、ATX-0109、ATX-0110、ATX-0118、ATX-0108、ATX-0107、ATX-0093、ATX-0097和ATX-0096
Figure FDA0003570003150000021
Figure FDA0003570003150000031
Figure FDA0003570003150000041
Figure FDA0003570003150000051
Figure FDA0003570003150000061
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中R1具有8、9、10、11、12、13、14、16或17个碳。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中R1包含两个相同的烷基或烯基基团。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中R1包含烯基基团。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中R2为烯基。
7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中R2为支链非环状烷基。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中L2具有4、5、6或7个碳。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包含脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包封核酸，其中所述脂质纳米颗粒包含式I的化合物的阳离子脂质
Figure FDA0003570003150000062
其中
R1为12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基或烯基；
L1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷烃；
R2为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷基或烯基，或者10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基；
L2为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳的直链烷烃；
X为O或S；
R3为1、2、3、4、5或6个碳的直链烷烃；
R4和R5相同或不同，各自为1、2、3、4、5或6个碳的直链或支链非环状烷基；
如通过6-(对甲苯胺基)-2-萘磺酸的荧光测量的，1mM的化合物溶液的pKa为5.6-7.0；并且
所述化合物的c-LogD值在10到14之间；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述化合物选自由以下式的化合物构成的组：ATX-0111、ATX-0132、ATX-0134、ATX-0100、ATX-0117、ATX-0114、ATX-0115、ATX-0101、ATX-0106、ATX-0116、ATX-0086、ATX-0058、ATX-0081、ATX-0123、ATX-0122、ATX-0057、ATX-0088、ATX-0087、ATX-0124、ATX-0126、ATX-0129和ATX-0123
Figure FDA0003570003150000071
Figure FDA0003570003150000081
Figure FDA0003570003150000091
Figure FDA0003570003150000101
Figure FDA0003570003150000111
Figure FDA0003570003150000121
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R1具有12、13、14、16或17个碳。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R1包含两个相同的烷基或烯基基团。
13.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R1包含烷基基团。
14.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R2为烯基。
15.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R2为支链非环状烷基。
16.根据权利要求9所述的药物组合物，其中L1和L2独立地具有1、2或3个碳。
17.根据权利要求9所述的药物组合物，其中L1和L2均具有3个碳。
18.根据权利要求9所述的药物组合物，其中R3为丙烯或丁烯。
19.根据权利要求9所述的药物组合物，其中其c-LogD值为至少11，并且其测量pKa大于6。
20.一种药物组合物，所述药物组合物包含脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包封核酸，其中所述脂质纳米颗粒包含式I的化合物的阳离子脂质
Figure FDA0003570003150000131
其中
R1为12、13、14、16、17、18、19、20、21或22个碳的支链非环状烷基；
L1为1、2或3个碳的直链烷烃；
R2为8、9、10、11或12个碳的直链烯基，或者12、13、14、16或17个碳的支链非环状烷基；
L2为1、2或3个碳的直链烷烃
X为O或S；
R3为2或3个碳的直链烷烃；
R4和R5相同或不同，各自为1或2个碳的直链或支链非环状烷基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述核酸是RNA或DNA。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述RNA选自小干扰RNA(siRNA)、反义RNA、单链RNA、微RNA、信使RNA(mRNA)、非编码RNA和多价RNA。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述RNA是mRNA。
24.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述RNA是siRNA。
25.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述脂质纳米颗粒还包含胆固醇。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述胆固醇占存在于所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约25mol％至约45mol％。
27.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述脂质纳米颗粒还包含辅助脂质。
28.根据权利要求27所述的药物组合物，其中，所述辅助脂质选自：卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(ESM)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、双十六烷基磷酸酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰-磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕榈酰油酰-磷脂酰甘油(POPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰-磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰-磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰乙醇胺(DSPE)、单甲基-磷脂酰乙醇胺、二甲基-磷脂酰乙醇胺、二乙酰-磷脂酰乙醇胺(DEPE)、硬脂酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)、溶血磷脂酰胆碱，以及二亚油酰磷脂酰胆碱。
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述辅助脂质是DSPC。
30.根据权利要求27所述的药物组合物，其中所述辅助脂质占存在于所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约2mol％至约30mol％。
31.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述脂质纳米颗粒还包含脂质缀合物。
32.根据权利要求31所述的药物组合物，其中所述脂质缀合物是聚乙二醇(PEG)-脂质缀合物。
33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中，所述PEG-脂质缀合物选自：二烷氧基丙基偶联的PEG(PEG-DAA)、与二酰基甘油偶联的PEG(PEG-DAG)、与磷脂偶联的PEG、与神经酰胺缀合的PEG，以及与甾醇缀合的PEG。
34.根据权利要求32的药物组合物，其中所述PEG-脂质缀合物的PEG的分子量为约750道尔顿至约5,000道尔顿。
35.根据根据权利要求31所述的药物组合物，其中所述脂质缀合物占存在于所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约0.1mol％至约2mol％。
36.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质占存在于所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约30mol％至约70mol％。
37.一种将核酸引入哺乳动物细胞的方法，所述方法包括对哺乳动物施用前述权利要求中任一项所述的药物组合物。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述药物组合物通过静脉内、皮下、腹膜内注射或鞘内注射施用。
39.根据权利要求37所述的方法，其中，所述药物组合物通过口服、直肠、阴道、鼻内、肺内、透皮或皮肤递送，或通过局部递送至眼睛、耳朵、皮肤或粘膜表面。
40.根据权利要求37所述的方法，其中所述细胞在肝脏、肺、肾、脑、血液、脾或骨骼中。
41.根据权利要求37所述的方法，其中所述细胞是上皮细胞。
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