JP2019505204A - 酵素変異体およびこれをコードするポリヌクレオチド - Google Patents

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Abstract

本発明は、αアミラーゼ活性を有するポリペプチドに関する。本発明はまた、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクターおよび宿主細胞；ならびに、このポリペプチドを用いる方法に関する。

Description

配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
本発明は、α−アミラーゼ変異体（すなわち、α−アミラーゼ活性を有するポリペプチド）、α−アミラーゼをコードする核酸、α−アミラーゼの生成方法、α−アミラーゼを含む組成物、および、α−アミラーゼの使用方法に関する。
α−アミラーゼ（α−１，４−グルカン−４−グルカノヒドロラーゼ、Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）は、デンプン、ならびに、他の直鎖および分岐１，４−グリコシドオリゴ糖および多糖類の加水分解を触媒する酵素群を構成する。
洗剤、製パン、醸造、例えば異性化糖の調製またはデンプンからのエタノール製造の一部におけるデンプン液化および糖化などの数々の公知の用途におけるα−アミラーゼの産業的な使用には長い歴史がある。α−アミラーゼのこれらの用途および他の用途は公知であり、特に細菌性α−アミラーゼといった微生物由来のα−アミラーゼが利用される。
Ｔｅｒｍａｍｙｌ、ＡＡ５６０（配列番号２；国際公開第２０００／０６００６０号パンフレットも参照のこと）およびＳＰ７０７（配列番号８；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１５１：２５−３１も参照のこと）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のα−アミラーゼは、洗剤において用途が見出されているα−アミラーゼの特定の群を形成する。これらのアミラーゼは、洗剤中における安定性を向上するために変性されている。例えば、国際公開第９６／２３８７３号パンフレットには、α−アミラーゼＳＰ６９０、ＳＰ７２２（配列番号５）およびＳＰ７０７（配列番号８）（国際公開第９６／２３８７３号パンフレットの配列番号：１、２および７も参照のこと）の安定性を向上するためのこれらのアミラーゼの欠失突然変異体が開示されている。国際公開第９６／２３８７３号パンフレットにはさらに、酸化に対してアミラーゼを安定化させるための置換突然変異体が開示されている。向上した特性を有する追加のα−アミラーゼ突然変異体が、国際公開第２００６／００２６４３号パンフレットおよび国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに開示されている。
それ故、天然アミラーゼを変性して一定の特性を向上させることは公知である。
本発明は、特に高い温度（例えば４０℃以上）で高い洗浄性能を有するα−アミラーゼ活性を有するポリペプチド（α−アミラーゼ）を提供することを目的とする。
本発明は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来するα−アミラーゼの変異体に相当するα−アミラーゼ活性を有するポリペプチドに関する。特に、本発明のポリペプチドは、ポリペプチドが高い洗浄性能（特に４０℃以上の温度）を示すよう、１つ以上のアミノ酸が突然変異化（例えば置換または欠失により）されている配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または、これから構成される。
本発明はまた、変異体α−アミラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；このポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクターおよび宿主細胞；ならびに、変異体α−アミラーゼポリペプチドを生成する方法に関する。
本発明はまた、変異体α−アミラーゼポリペプチドを含む洗剤組成物、ならびに、ランドリークリーニングおよび食器洗浄などの家庭および工業用クリーニングプロセスにおけるその使用に関する。
定義
α−アミラーゼ：「α−アミラーゼ」（α−１，４−グルカン−４−グルカノヒドロラーゼ、Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）という用語は、デンプンならびに他の直鎖および分岐１，４−グルコシドオリゴ糖および多糖類の加水分解を触媒する酵素群を構成する。本発明の目的のために、α−アミラーゼ活性は実施例１に記載の手法に従って測定される。一態様において、本発明の変異体は、配列番号１の成熟型ポリペプチドのα−アミラーゼ活性の、少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％を有する。
アミノ酸：本明細書において用いられるところ、「アミノ酸」という用語は、標準的な２０種の遺伝的にコードされたアミノ酸、および、「Ｄ」型（天然「Ｌ」型と比して）のその対応する立体異性体、ω−アミノ酸、他の天然アミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α，α二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸等）、ならびに、化学的に誘導されたアミノ酸を含む。１種以上のアミノ酸の化学的誘導体は、官能側基を伴う反応により達成され得る。このような誘導された分子は、例えば、遊離アミノ基が誘導されて、アミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基が形成されている分子を含む。遊離カルボキシル基は、誘導されて、塩、メチルおよびエチルエステル、または、他のタイプのエステルおよびヒドラジドを形成し得る。遊離ヒドロキシル基は、誘導されて、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成し得る。また、化学誘導体としては、２０種の標準的なアミノ酸の天然アミノ酸誘導体を含有するペプチドが含まれる。例えば：４−ヒドロキシプロリンがプロリンを置換し得；５−ヒドロキシリシンはリシンを置換し得；３−メチルヒスチジンがヒスチジンを置換し得；ホモセリンがセリンを置換し得、および、オルニチンがリシンを置換し得る。誘導体はまた、必要とされる活性が維持される限りにおいては、１つ以上の付加または欠失を含有するペプチドを含む。他の含まれる変性は、アミド化、アミノ末端アシル化（例えばアセチル化またはチオグリコール酸アミド化）、末端カルボキシルアミド化（例えば、アンモニアまたはメチルアミンを伴う）等といった末端変性である。
アミノ酸が「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」など特定的に列挙されている場合は、この用語は、他に明記されていない限り、Ｌ−アラニンおよびＤ−アラニンの両方を指す。他の非従来型アミノ酸はまた、所望の官能特性がポリペプチドによって保持される限りにおいては、本発明のポリペプチドの好適なコンポーネントであり得る。示されているペプチドについて、コードされたアミノ酸残基の各々は、適切な場合、従来のアミノ酸の慣用名に対応する１文字の記号によって表される。一実施形態において、本発明のポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸を含むかＬ−アミノ酸から構成される。
ｃＤＮＡ：「ｃＤＮＡ」という用語は、真核または原核細胞から得られる成熟したスプライシングされたｍＲＮＡ分子からの逆転写により調製されることが可能であるＤＮＡ分子を意味する。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡ中に存在し得るイントロン配列を欠いている。初期の一次ＲＮＡ転写物は、成熟型のスプライシングされたｍＲＮＡとして出現する前にスプライシングを含む一連のステップを介して処理されるｍＲＮＡの前駆体である。
コード配列：「コード配列」という用語は、変異体のアミノ酸配列を直接的に特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般にオープンリーディングフレームにより判定され、これは、ＡＴＧ、ＧＴＧまたはＴＴＧなどの開始コドンで開始され、ＴＡＡ、ＴＡＧまたはＴＧＡなどの終止コドンで終わる。コード配列は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡまたはこれらの組み合わせであり得る。
制御配列：「制御配列」という用語は、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドの発現に必要な核酸配列を意味する。各制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドに対して在来（すなわち、同一の遺伝子由来）もしくは外来（すなわち、異なる遺伝子由来）のものであっても、または、相互に在来もしくは外来のものであってもよい。このような制御配列としては、これらに限定されないが、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、および転写ターミネータが挙げられる。少なくとも、制御配列、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む。制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドのコード領域に対する制御配列の連結を促進させる特定の制限部位を導入する目的のためにリンカーを備えていてもよい。
高い洗浄性能：「高い洗浄性能」または「向上した洗浄性能」という用語は、配列番号１の親αアミラーゼと比較して、ランドリーまたは食器洗浄などの洗浄プロセスにおいて向上したクリーニング効果（例えば汚れの除去）をもたらす本発明のポリペプチドの能力を意味する。洗浄性能は、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）または自動食器洗浄（ＡＤＷ）（実施例２および３を参照のこと）などを用いる技術分野において周知である方法を用いて判定され得る。高い洗浄性能は、例えば４０℃以上（４０℃および／または５０℃など）の洗浄温度、および／または、漂白剤の存在もしくは不在といった、洗浄条件のいくつかのみ、もしくは、おそらくはそのすべてにおいて達成され得ることを当業者は認識するであろう。
発現：「発現」という用語は、特にこれらに限定されないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾および分泌を含む、変異体の産生に関与するいずれかのステップを含む。
発現ベクター：「発現ベクター」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ、その発現をもたらす制御配列作動可能にリンクされている直鎖または環状ＤＮＡ分子を意味する。
断片：「断片」という用語は、配列番号１の成熟型ポリペプチドのアミノおよび／またはカルボキシル末端に存在しない１つ以上（例えば数々の）のアミノ酸を有するポリペプチドを意味し；ここで、この断片はα−アミラーゼ活性を有する。一態様において、断片は、隣接する少なくとも２００の配列番号１のアミノ酸残基、例えば少なくとも３００の隣接する配列番号１のアミノ酸残基、または、少なくとも３５０の隣接するアミノ酸残基、または、少なくとも４００の隣接するアミノ酸残基、または、少なくとも４５０の隣接するアミノ酸残基を含有する。
宿主細胞：「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクターによる形質転換、形質移入、形質導入等に対する感受性を有するいずれかの細胞タイプを意味する。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異による親細胞とは等しくない親細胞の子孫のいずれかを包含する。
向上係数：「向上係数」という用語は、本発明に係る変異体の特定の特性の向上を定量的に算出するためのものを意味する。向上係数は、以下の式に従って算出し得る。
Figure 2019505204
他の式を用いて向上係数を算出し得る。ここに提示した本式、ならびに、向上係数を算出するための代わりの方法が当業者に知られている。
本発明によれば、１．０の値が、親α−アミラーゼについて観察され比活性に相当する。１．０を超える値は、親α−アミラーゼと比した、テストした変異体の比活性の向上を示す。従って、１．０を超えるいずれかの値が、親α−アミラーゼと比した変異体の比活性などの特性の向上の標示である。１．０の値は、変異体の特性が親α−アミラーゼと少なくとも同程度であることの標示である。
単離された：「単離された」という用語は、自然界においては生じない形態または環境にある物質を意味する。単離された物質の非限定的な例としては、（１）いずれかの非天然物質、（２）特にこれらに限定されないが、自然界において関連している天然構成成分の１種または複数種もしくはすべてが少なくとも部分的に除去されたいずれかの酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補助因子を含むいずれかの物質；（３）自然界において見出される物質と相対的に人工的に修飾されたいずれかの物質；または、（４）自然界においては関連している他の成分に対する物質の量を増やすことにより修飾されたいずれかの物質（例えば、物質をコードする遺伝子の複数のコピー；物質をコードする遺伝子と自然界で関連しているプロモータより強力なプロモータの使用）が挙げられる。単離された物質が発酵ブロスサンプルに存在していてもよい。
成熟型ポリペプチド：「成熟型ポリペプチド」という用語は、Ｎ末端プロセシング、Ｃ末端切断、グリコシル化、リン酸化等などの翻訳およびいずれかの翻訳後修飾後における、その最終形態にあるポリペプチドを意味する。宿主細胞が、同一のポリヌクレオチドから発現される、２種以上の異なる成熟型ポリペプチドの混合物（すなわち、異なるＣ−末端および／またはＮ−末端アミノ酸を伴う）を産生し得ることは技術分野において公知である。
成熟型ポリペプチドコード配列：「成熟型ポリペプチドコード配列」という用語は、α−アミラーゼ活性を有する成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
突然変異：「突然変異」という用語は、本発明のポリペプチドの文脈においては、基準アミノ酸配列（すなわち配列番号１）中の１つ以上アミノ酸が、異なるアミノ酸による置換または欠失により改変されていることを意味する。さらに、突然変異は、基準アミノ酸配列中への１つ以上の余剰アミノ酸の挿入に相当し得る。
核酸構築物：「核酸構築物」という用語は、一重螺旋または二重螺旋を有する核酸分子を意味し、これは、天然の遺伝子から単離されるか、もしくは、そうでなければ自然に存在しないであろう様式で核酸のセグメントを含有するよう修飾されるか、または、合成され、１つ以上制御配列を含む。
作動可能にリンク：「作動可能にリンクされた」という用語は、制御配列がコード配列を発現させるよう、ポリヌクレオチドのコード配列と相対的に適切な位置に制御配列が位置する構造を意味する。
親または親α−アミラーゼ：「親」または「親α−アミラーゼ」という用語は、配列番号１のα−アミラーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓにより商品名「Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ」で商品化されている；国際公開第２００６／００２６４３号パンフレットを参照のこと）を意味する。
配列同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性が、「配列同一性」というパラメータによって記載される。
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、好ましくはバージョン５．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳボージョン）置換マトリックスであり得る。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
あるいは、用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティ、および、ＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスであり得る。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等のデオキシリボヌクレオチド×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
サブ配列：「サブ配列」という用語は、成熟型ポリペプチドコード配列の５’および／または３’末端に不在である１つ以上（例えば数々の）ヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し；ここで、サブ配列はα−アミラーゼ活性を有する断片をコードする。
変異体：「変異体」という用語は、配列番号１の「親」α−アミラーゼに対して１つ以上の（例えば数々の）位置で突然変異（すなわち、置換、挿入および／または欠失）を含むα−アミラーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換とは、ある位置のアミノ酸の異なるアミノ酸による置き換えを意味し；欠失とは、ある位置のアミノ酸の除去を意味し；および、挿入とは、ある位置のアミノ酸に直に続くように隣接したアミノ酸の付加を意味する。本発明の変異体は、配列番号１の成熟型ポリペプチドのα−アミラーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも１００％の活性を有する。
野生型α−アミラーゼ：「野生型」α−アミラーゼという用語は、自然界において見出されるバクテリア、イースト菌または糸状真菌などの天然微生物によって発現されたα−アミラーゼを意味する。
従来の変異体の決定
本発明のα−アミラーゼ活性を有するポリペプチドは、配列番号１に示されているバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のα−アミラーゼの変異体に対応する（これは、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓによって、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ Ｐｌｕｓ（商標）の名称で市販されている）。
Figure 2019505204
本発明のポリペプチドにおける変異体（すなわち突然変異化）アミノ酸は、配列番号２のアミノ酸番号を基準として定義される（これは、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の成熟タンパク質ＡＡ５６０に対応する）。配列番号１を基準としたアミノ酸配列の差異を下線を付した太字で以下に示す。
Figure 2019505204
従って、配列番号２中のアミノ酸位置１〜１８２は配列番号１中の同一の番号に対応し、配列番号２のアミノ酸位置１８３および１８４は配列番号１において不在であり、配列番号２のアミノ酸位置１８５〜４８５はそれぞれ配列番号１の位置１８３〜４８３に対応する。
それ故、本発明の目的のために、配列番号２に開示されている成熟型ポリペプチドが、他のα−アミラーゼポリペプチド中の対応するアミノ酸残基の判定に用いられる。他のα−アミラーゼのアミノ酸配列が配列番号２に開示されている成熟型ポリペプチドとアラインされ、このアラインメントに基づいて、配列番号２に開示されている成熟型ポリペプチドにおけるいずれかのアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号が、好ましくはバージョン５．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）において実装されているＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて、判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。
他のα−アミラーゼにおける対応するアミノ酸残基の同定は、特にこれらに限定されないが、ＭＵＳＣＬＥ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｙ ｌｏｇ‐ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ；バージョン３．５以降；Ｅｄｇａｒ，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２：１７９２−１７９７）、ＭＡＦＦＴ（バージョン６．８５７以降；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｋｕｍａ，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０：３０５９−３０６６；Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３：５１１−５１８；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｔｏｈ，２００７，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３：３７２−３７４；Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５３７：３９−６４；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｔｏｈ，２０１０，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２６：１８９９−１９００）、および、ＣｌｕｓｔａｌＷを採用するＥＭＢＯＳＳ ＥＭＭＡ（１．８３以降；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２：４６７３−４６８０）を含む数々のコンピュータプログラムを、それぞれのデフォルトパラメータを利用して用いることで、複数のポリペプチド配列のアラインメントによって判定することが可能である。
配列番号２の成熟型ポリペプチドから他のα−アミラーゼが分化して、従来からの配列に基づく比較による関係の検出ができない場合（Ｌｉｎｄａｈｌ ａｎｄ Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９５：６１３−６１５）、他の対配列比較アルゴリズムを使用することが可能である。配列に基づくサーチにおける感度は、データベースのサーチにポリペプチドファミリー（プロファイル）の確率表現を利用するサーチプログラムを用いることで高めることが可能である。例えば、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムは、反復データベースサーチプロセスを介してプロファイルを生成し、離れた相同体を検出することが可能である（Ａｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）。ポリペプチドに係るファミリーまたはスーパーファミリーがタンパク質構造データベースにおいて１つ以上の表現を有する場合には、感度をさらに高めることが可能である。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲ（Ｊｏｎｅｓ，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：７９７−８１５；ＭｃＧｕｆｆｉｎ ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ，２００３，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １９：８７４−８８１）などのプログラムは、問い合わせ配列に係るフォールド構造を予想するニューラルネットワークに対する入力として、多様なソース（ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造アラインメントプロファイルおよび溶媒和ポテンシャル）からの情報を利用する。同様に、Ｇｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１３：９０３−９１９による方法が、アライン未知の構造の配列とＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとのアラインに用いられることが可能である。次いで、これらのアラインメントを用いてポリペプチドに係る相同性モデルを生成することが可能であり、このようなモデルは、その目的のために開発された多様なツールを用いて正確に評価可能である。
公知の構造のタンパク質に関して、数々のツールおよびリソースが、構造アラインメントの検索および生成のために使用可能である。例えばタンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーが構造的にアラインされており、これらのアラインメントはアクセスおよびダウンロードが可能である。２つ以上のタンパク質構造は距離アラインメントマトリックス（Ｈｏｌｍ ａｎｄ Ｓａｎｄｅｒ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ３３：８８−９６）または組み合わせ拡張法（Ｓｈｉｎｄｙａｌｏｖ ａｎｄ Ｂｏｕｒｎｅ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １１：７３９−７４７）などの多様なアルゴリズムを用いてアラインすることが可能であり、これらのアルゴリズムを、可能性のある構造相同体を発見するために、対象の構造と共に問い合わせ構造データベースに対して追加的に実行することが可能である（例えば、Ｈｏｌｍ ａｎｄ Ｐａｒｋ，２０００，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：５６６−５６７）。
本発明のα−アミラーゼ変異体の説明において、下記に記載の命名法が参照を容易とするために採用される。公認されているＩＵＰＡＣの１文字または３文字のアミノ酸略記が利用されている。
置換：アミノ酸置換に関しては、以下の命名法が用いられる：元のアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸。従って、アラニンによる位置２２６におけるスレオニンの置換は、「Ｔｈｒ２２６Ａｌａ」または「Ｔ２２６Ａ」と示されている。複数の突然変異は加算記号（「＋」）によって分けられており、例えば、「Ｇｌｙ２０５Ａｒｇ＋Ｓｅｒ４１１Ｐｈｅ」または「Ｇ２０５Ｒ＋Ｓ４１１Ｆ」はそれぞれ、位置２０５および４１１における、グリシン（Ｇ）のアルギニン（Ｒ）による置換、および、セリン（Ｓ）のフェニルアラニン（Ｆ）による置換を表している。
欠失：アミノ酸欠失に関しては、以下の命名法が用いられる：元のアミノ酸、位置、＊。位置１９５における従って、グリシンの欠失は、「Ｇｌｙ１９５＊」または「Ｇ１９５＊」と示される。複数の欠失は加算記号（「＋」）によって分けられており、例えば、「Ｇｌｙ１９５＊＋Ｓｅｒ４１１＊」または「Ｇ１９５＊＋Ｓ４１１＊」とされる。
挿入：アミノ酸挿入に関しては以下の命名法が用いられている：元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸。従って、位置１９５でのグリシンの後へのリシンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓ」または「Ｇ１９５ＧＫ」と示される。複数のアミノ酸の挿入は、［元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸１番、挿入されたアミノ酸２番；等］と示される。例えば、位置１９５でのグリシンの後へのリシンおよびアラニンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓＡｌａ」または「Ｇ１９５ＧＫＡ」と示される。
このような事例において、挿入されたアミノ酸残基には、挿入されたアミノ酸残基の前のアミノ酸残基に下付文字を付与することにより番号が付される。それ故、上記の例において配列は以下のとおりとなる。
Figure 2019505204
複数の改変：複数の改変を含む変異体は加算記号（「＋」）によって分けられており、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ＋Ｇｌｙ１９５Ｇｌｕ」または「Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅ」はそれぞれ、チロシンおよびグルタミン酸による位置１７０および１９５におけるアルギニンおよびグリシンの置換を表している。
異なる改変：異なる改変がある位置で導入可能である場合、異なる改変はコンマによって分けられており、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ，Ｇｌｕ」は、チロシンまたはグルタミン酸による位置１７０におけるアルギニンの置換を表している。それ故、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ，Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ，Ａｌａ」は以下の変異体を示す：
「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」、「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」および「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」。
α−アミラーゼ活性を有するポリペプチド
本発明は、配列番号１の成熟型ポリペプチドのアミノ酸配列中の１つ以上（例えば数々の）の位置に突然変異を含む変異体α−アミラーゼポリペプチドに関し、ここで、変異体は配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す。
一実施形態において、本発明は、配列番号１の変異体アミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、ここで、ポリペプチドはα−アミラーゼ活性を有すると共に、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す。
一実施形態においては、変異体アミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸位置１６７において突然変異を含む。
それ故、一実施形態においては、変異体アミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸位置１６７においてＷ１６７Ｙなどの置換を含む。
親α−アミラーゼのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2019505204
本発明のポリペプチドは配列番号１の親αアミラーゼの変異体を表し、この変異体は、ランドリークリーニングならびに食器洗浄などの家庭用および／または工業用クリーニングプロセスにおいて高い洗浄性能を示す。洗浄性能は、自動食器洗浄（ＡＤＷ）（実施例２を参照のこと）または自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）（実施例３を参照のこと）などの技術分野において周知である方法を用いて判定され得る。
一実施形態においては、ポリペプチドは、高温での洗浄の最中に高い洗浄性能を示し、例えば温度は、少なくとも４５℃など、少なくとも５０℃など、少なくとも５５℃など、および、少なくとも６０℃などの少なくとも４０℃である。
一実施形態においては、高い洗浄性能は、デンプンで汚したメラミン製タイルを用いて自動食器洗浄（ＡＤＷ）アッセイにおいて評価する。本発明のポリペプチドのこのような高い洗浄性能を判定するための例示的な洗浄条件は以下を含み：
ａ．４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；
ｂ．４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
ｃ．５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；ならびに
ｄ．５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
ここで、前記モデルＡＤＷ洗剤は、メチルグリシン二酢酸の三ナトリウム塩（Ｔｒｉｌｏｎ Ｍ ｇｒａｎｕｌｅｓ ＳＧなど）、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、ポリリン酸およびケイ酸塩スケール防止剤（Ａｃｕｓｏｌ ５８８Ｇなど）およびＳｕｒｆａｃ２３−６．５を含む。
高い洗浄性能に追加して、本発明のポリペプチドはまた、配列番号１の親αアミラーゼと比して、以下の特性の１つ以上において向上を示し得ることを当業者は認識するであろう。
（ｉ）基質特異性；
（ｉｉ）基質結合性；
（ｉｉｉ）比活性；
（ｉｖ）熱安定性
（ｖ）ｐＨ安定性プロファイル；
（ｖｉ）Ｃａ２＋依存性；
（ｖｉｉ）酸化安定性；
（ｖｉｉｉ）高い／低いｐＩ；および／または
（ｉｘ）界面活性剤に対する感受性。
ポリペプチドの上記の特性を測定するためのアッセイは、国際公開第２００６／００２６４３号パンフレット、国際公開第２００１／０６６７１２号パンフレットおよび欧州特許第２ ２６４ ４６０ Ａ号明細書に記載されている。
本発明のポリペプチドは、配列番号１の親α−アミラーゼよりも長くても短くてもよい。それ故、ポリペプチドは、１０００以下のアミノ酸長、例えば９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１７５、１５０、１２５、１００以下のアミノ酸長であり得る。一実施形態においては、ポリペプチドは４００〜６００アミノ酸長であり、例えば４５０〜５００、４６０〜５００または４７０〜４９０アミノ酸長である。
本発明の変異体ポリペプチドは、配列番号１の「親」α−アミラーゼに対して１つ以上のアミノ酸位置で突然変異（すなわち、置換、挿入および／または欠失）を含む。
アミノ酸変異は、副次的な性質のものであり得、すなわち、タンパク質の折り畳みおよび／もしくは活性に顕著に影響しない保存的アミノ酸置換もしくは挿入；典型的には１〜３０アミノ酸の小さな欠失；アミノ−端子メチオニン残基などの小さなアミノ−もしくはカルボキシル−末端伸長；２０〜２５個以下の残基の小さなリンカーペプチド；または、ポリヒスチジン配列、抗原性エピトープもしくは結合性ドメインなどの変異もしくは他の機能を変化させることによって精製を促進させる小さな伸長である。
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、および、小さいアミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、スレオニンおよびメチオニン）の群の範囲内である。特異活性を一般に改変しないアミノ酸置換は当技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ ａｎｄ Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｉｎ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。一般的な置換はＡｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／ＧｌｕおよびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
あるいは、アミノ酸変異は、ポリペプチドの物理化学的特性が改変されるような性質のものである。例えば、アミノ酸変異は、ポリペプチドの熱安定性を向上させ、基質特異性を改変し、至適ｐＨを変化させることであり得る。
ポリペプチドにおける必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５）などの技術分野において公知である手法に従って同定することが可能である。後者の技術においては、単一のアラニン突然変異が分子中のすべての残基に導入され、得られたミュータント分子が、分子の活性に重要であるアミノ酸残基を同定するためにαアミラーゼ活性についてテストされる。また、Ｈｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８を参照のこと。酵素の活性部位または他の生物学的相互作用は、推定上の接触部位アミノ酸の突然変異が併用される、核磁気共嗚、結晶構造解析、電子回折または光親和性標識などの技術によって判定される、構造の物理的分析によって判定されることも可能である。例えば、ｄｅ Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照のこと。必須アミノ酸のアイデンティティは、関連するポリペプチドとのアラインメントから推測されることも可能である。
１つの代替的な実施形態またはさらなる実施形態において、本発明のポリペプチドは、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において、突然変異（置換、欠失および／または挿入など）を有する配列番号１のα−アミラーゼの変異体であり、ここで、番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
それ故、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を基準として以下の置換を１つ以上含み得る；Ｍ１０Ｌ，Ｎ２５Ｋ，Ｄ３０Ｎ，Ｋ３７Ｈ，Ｋ３７Ｌ，Ｋ３７Ｍ，Ｋ３７Ｒ，Ｋ３７Ｖ，Ｓ４０Ｔ，Ｗ４８Ｆ，Ａ５１Ｑ，Ａ５１Ｔ，Ｎ５４Ｓ，Ｙ６４Ｗ，Ｔ８１Ｓ，Ｑ８６Ｈ，Ｑ８６Ｉ，Ｑ８６Ｌ，Ｋ９３Ｈ，Ｋ９３Ｒ，Ｑ９８Ｒ，Ｍ１０５Ｙ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｍ１０５Ｌ，Ｋ１０８Ｒ，Ｇ１０９Ａ，Ｇ１０９Ｍ，Ａ１１３Ｅ，Ｍ１１６Ｉ，Ｍ１１６Ｌ，Ｍ１１６Ａ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｋ１１８Ｎ，Ｋ１１８Ｒ，Ｅ１２１Ｈ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｙ１３５Ｈ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ１４２Ｒ，Ｋ１４２Ｑ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｈ，Ｎ１７４Ｑ，Ｎ１７４＊，Ｎ１７５Ｑ，Ｙ１７８Ｗ，Ｔ１８２Ｇ，Ａ１８６Ｄ，Ａ１８６Ｇ，Ｗ１８７Ｙ，Ｗ１８９Ｈ，Ｆ１９５Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｌ２０２Ｍ，Ｙ２０３Ｈ，Ｙ２０３Ｎ，Ｙ２０３Ｇ，Ｙ２０３Ｆ，Ｉ２０６Ｌ，Ｍ２０８Ｆ，Ｍ２０８Ｌ，Ｍ２０８Ｖ，Ｈ２１０Ｎ，Ｖ２１４Ｒ，Ｖ２１４Ｔ，Ｖ２１４Ｉ，Ｒ２１８Ｎ，Ｉ２３５Ｖ，Ｉ２３５Ｌ，Ｉ２３５Ｍ，Ｖ２３８Ｔ，Ｖ２３８Ａ，Ｋ２４２Ｐ，Ｙ２４３Ｆ，Ｙ２４３Ｍ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｍ，Ｒ２４７Ｋ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｓ２５５Ｋ，Ｉ２５７Ａ，Ｋ２５９Ｎ，Ｎ２６０Ｄ，Ｍ２６１Ｌ，Ｍ２６１Ａ，Ａ２６５Ｇ，Ｆ２６７Ｙ，Ｋ２６９Ｓ，Ｋ２６９Ｎ，Ｎ２７０Ｇ，Ａ２７４Ｋ，Ｉ２７５Ｌ，Ｅ２７６Ｑ，Ｋ２８１Ｈ，Ｆ２９５Ｙ，Ｆ２９５Ｗ，Ｙ２９８Ｗ，Ｙ２９８Ｆ，Ｙ２９９Ｗ，Ｙ２９９Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｋ３２０Ｈ，Ｋ３２０Ｒ，Ｓ３３４Ｔ，Ｓ３３９Ａ，Ｅ３６０Ｆ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３６５Ｃ，Ｖ３６６Ｉ，Ｋ３８３Ｑ，Ｋ３８３Ｒ，Ｓ３８４Ｅ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｑ３９４Ｋ，Ｙ３９８Ｗ，Ｎ４０２Ｙ，Ｙ４０４Ｗ，Ｅ４１６Ｌ，Ａ４３４Ｄ，Ｇ４６０Ｅ，Ｗ４６９Ｆ，Ｖ４７４ＣおよびＷ４８２Ｙ。
例えば、本発明のポリペプチドは、以下の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列のポリペプチド；Ｅ３６０Ｆ＋Ｓ３６５Ｃ（すなわち、配列番号１に基づいているが、突然変異Ｅ３６０ＦおよびＳ３６５Ｃを含むアミノ酸配列を有するポリペプチド）、Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｖ４７４Ｃ，Ｇ４６０Ｅ，Ｔ８１Ｓ，Ｋ２６９Ｓ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ａ２７４Ｋ，Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ３８３Ｑ，Ｋ３２０Ｈ，Ｋ３２０Ｒ，Ｅ２７６Ｑ，Ｋ９３Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｑ９８Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｋ１１８Ｎ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ１４２Ｒ，Ｋ１４２Ｑ，Ｅ４１６Ｌ，Ｑ３９４Ｋ，Ｓ３８４Ｅ，Ｙ６４Ｗ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｆ２９５Ｙ，Ｙ２４３Ｍ，Ｙ１７８Ｗ，Ｋ２８１Ｈ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ａ４３４Ｄ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｎ１７４＊，Ｉ２３５Ｖ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｋ３７Ｖ，Ｋ３７Ｍ，Ｋ３７Ｌ，Ｙ２０３Ｈ，Ｓ４０Ｔ，Ｗ１８７Ｙ，Ｖ２３８Ｔ，Ｍ１０５Ｙ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｉ２０６Ｌ，Ｔ１８２Ｇ，Ｍ１１６Ｉ，Ｙ１３５Ｈ，Ｙ２０３Ｎ，Ｙ２０３Ｇ，Ｎ２５Ｋ，Ｍ１１６Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｆ２９５Ｙ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ２４２Ｐ，Ｖ２１４Ｒ，Ｍ２０８Ｆ，Ｙ１９８Ｆ，Ｗ４８２Ｙ，Ｖ２１４Ｔ，Ｖ２１４Ｉ，Ｍ２６１Ａ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ２０８Ｌ，Ｍ１１６Ａ，Ｎ１７４Ｑ，Ｎ１７４＊＋Ｎ１７５Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｍ１０５Ｌ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｗ４６９Ｆ，Ｙ２０３Ｆ，Ｇ１０９Ａ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｆ２９５Ｗ，Ｙ２９８Ｗ，Ｍ２０８Ｖ，Ｍ２０８Ｆ，Ｍ１０Ｌ＋Ｍ２６１Ｌ，Ｗ１８７Ｙ＋Ｍ２０８Ｌ，Ｙ２９８Ｆ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｈ，Ｗ１８９Ｈ，Ｆ２９５Ｙ，Ｉ２３５Ｍ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｆ２６７Ｙ，Ｋ３７Ｖ＋Ｐ４５Ｒ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２４３Ｆ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｗ４８Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｍ１１６Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ＋Ｗ４８２Ｙ，Ａ５１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ５４Ｓ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ａ５１Ｑ＋Ｇ１０９Ｍ＋Ｙ２０３Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ３９８Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｎ４０２Ｙ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｙ３９８Ｗ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｙ２９９Ｗ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ４７４Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２３５Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｅ４１６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｇ４６０Ｅ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｌ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１１３Ｅ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ２６９Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ２５５Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２５７Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２１４Ｉ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１２１Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｇ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片からなる群から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
一実施形態においては、ポリペプチドは、漂白剤を含む洗剤による４０℃で１０分間のＡＤＷアッセイにおいてポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２の向上係数（ＩＦ）に相当する高い洗浄性能を示す（例えば、実施例２を参照のこと）。好適なポリペプチドは、位置３７、５１、９３、９８、１０８、１１８、１６７、１８６、２０２、２１０、２３５、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５９、２６０、２６１、２７０、２９９、３１１、３１９、３３４、３３９、３６５、３８５、３９８および４０４に対応する１つ以上の位置で突然変異を有する配列番号１の変異体であり得、ここで、アミノ酸位置の番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。例えば、ポリペプチドは、以下の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列のポリペプチド；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｍ２６１Ｌ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｑ９８Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｓ２５５Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｓ３３９Ａ，Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９ＡまたはＷ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片からなる群から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
他の実施形態において、ポリペプチドは、漂白剤を含む洗剤による５０℃で２０分間のＡＤＷアッセイにおいてポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２のＩＦに相当する高い洗浄性能を示す（例えば、実施例２を参照のこと）。好適なポリペプチドは、位置３０、３３、３７、４０、４８、５１、８１、８６、９３、１０５、１０８、１１６、１１８、１３０、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１８２、１８６、１９５、１９８、２０２、２０６、２１０、２３５、２３８、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６６、２６７、２６９、２７０、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８５、４０２、４１６、４７４ならびに４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を有する配列番号１の変異体であり得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。例えば、ポリペプチドは、以下の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列のポリペプチド；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｅ３６０Ｆ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｖ４７４Ｃ，Ｔ８１Ｓ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｎ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｋ３７Ｍ，Ｓ４０Ｔ，Ｖ２３８Ｔ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｉ２０６Ｌ，Ｔ１８２Ｇ，Ｍ１１６Ｉ，Ｍ１１６Ｌ，Ｎ１７４Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ＋Ｗ４８２Ｙ，Ａ５１Ｔ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５ＣまたはＡ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片からなる群から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
さらなる実施形態において、ポリペプチドは、漂白剤を伴わない洗剤による４０℃で１０分間のＡＤＷアッセイにおいてポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２の向上係数（ＩＦ）に相当する高い洗浄性能を示す（例えば、実施例２を参照のこと）。好適なポリペプチドは、位置３７、４８、５１、６４、８１、１０８、１１６、１６７、１７４、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０８、２１０、２３５、２３８、２４３、２４６、２５０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７５、３１１、３１９、３３４、３３９、３６５、３６６、３８５、４６０ならびに４７４に対応する１つ以上の位置において突然変異を有する配列番号１の変異体であり得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。例えば、ポリペプチドは、以下の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列のポリペプチド；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｇ４６０Ｅ，Ｔ８１Ｓ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｒ，Ｙ６４Ｗ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１８７Ｙ＋Ｍ２０８Ｌ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１８９Ｈ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９ＡまたはＷ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片からなる群から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
さらなる実施形態において、ポリペプチドは、漂白剤を伴わない洗剤による５０℃で２０分間のＡＤＷアッセイにおいてポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２のＩＦに相当する高い洗浄性能を示す（例えば、実施例２を参照のこと）。好適なポリペプチドは、位置３０、３３、３７、４０、４８、５１、８６、９３、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１８２、１８６、１９５、１９８、２０２、２０３、２１０、２１８、２３５、２３８、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６５、３６６、３８３、３８５、３９８、４０２、４１６、４０４、４６０、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を有する配列番号１の変異体であり得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。例えば、ポリペプチドは、以下の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列のポリペプチド；Ｋ２６９Ｓ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ａ２７４Ｋ，Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｋ１１８Ｑ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｎ１７４＊，Ｋ３７Ｌ，Ｓ４０Ｔ，Ｔ１８２Ｇ，Ａ２６５Ｇ，Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ａ，Ｎ１７４Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｗ４８Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ａ５１Ｑ＋Ｇ１０９Ｍ＋Ｙ２０３Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ３９８Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｎ４０２Ｙ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｙ３９８Ｗ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｙ２９９Ｗ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ４７４Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２３５Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｅ４１６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｇ４６０Ｅ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｌ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１１３Ｅ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ２６９Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ２５５Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２５７Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２１４Ｉ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１２１Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５ＣまたはＡ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片からなる群から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
本発明のポリペプチドの特定の一サブセットにおいて、ポリペプチドは、位置４８、１１８、１６７、１８６、２１０、２３５、２３８、２４３、２４６、２５０、２９９、３３４、３３９、３６６および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を有する配列番号１の変異体であり、ここで、番号は配列番号２に従う。それ故、ポリペプチドは、Ｗ４８Ｆ、Ｋ１１８Ｈ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｉ２３５Ｌ、Ｖ２３８Ａ、Ｙ２４３Ｆ、Ｔ２４６Ｍ、Ｉ２５０Ｌ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３４Ｔ、Ｓ３３９Ａ、Ｖ３６６ＩおよびＷ４８２Ｙからなる群から選択される１つ以上の突然変異を有する配列番号１のアミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。例えば、ポリペプチドは、以下から選択されるアミノ酸配列：
（ａ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１；
（ｂ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
（ｃ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
（ｄ）突然変異Ｗ４８ＦおよびＷ１６７Ｙを有する配列番号１；
（ｅ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１；
（ｆ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
（ｇ）突然変異Ｖ２３８Ａ、Ｓ３３４ＴおよびＷ４８２Ｙを有する配列番号１；
（ｈ）突然変異Ｙ２４３ＦおよびＳ３３４Ｔを有する配列番号１；
（ｉ）突然変異Ｗ４８Ｆを有する配列番号１；
（ｊ）突然変異Ｋ１１８Ｈを有する配列番号１；
（ｋ）突然変異Ｗ１６７Ｙを有する配列番号１；
（ｌ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｖ２３８ＡおよびＳ３３４Ｔを有する配列番号１；
（ｍ）突然変異Ｉ２３４Ｌ、Ｔ２４６Ｍ、およびＩ２５０Ｌを有する配列番号１；
（ｎ）突然変異Ｓ３３９Ａ中の配列番号１；ならびに
（ｏ）突然変異Ｓ３３４Ｔを有する配列番号１；
および、αアミラーゼ活性を有するその断片を含み得るか、または、これらから構成され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
本発明のポリペプチドは親α−アミラーゼのアミノ酸配列（配列番号１）の変異体を表し、これは、高い洗浄性能（例えば、４０℃以上の温度で）を示す。本発明のポリペプチドの異なる例は、配列番号１の配列と異なる程度のアミノ酸配列の同一性を有するであろうことを当業者は認識するであろう。それ故、ポリペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列番号１に対する配列同一性を共有するアミノ酸配列を含み得るか、または、これらから構成され得る。一実施形態において、配列番号１のアミノ酸配列に対するポリペプチド中の突然変異の数は、１〜２０、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の突然変異などの、１〜１０の突然変異または１〜５の突然変異である。
本発明のα−アミラーゼポリペプチドの例が表１に示されている（ここで、ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１の親α−アミラーゼの配列を基準として表記されている）。
Figure 2019505204
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特定の実施形態において、本発明の変異体α−アミラーゼは、４０℃および５０℃の両方の温度で高い洗浄性能を有する。このような変異体α−アミラーゼは、
（ａ）突然変異Ｖ２３８Ａ、Ｓ３３４ＴおよびＷ４８２Ｙを有する配列番号１；
（ｂ）突然変異Ｙ２４３ＦおよびＳ３３４Ｔを有する配列番号１；
（ｃ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９Ａ、およびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
（ｄ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｆ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１；
（ｅ）突然変異Ｗ４８Ｆを有する配列番号１；および
（ｆ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１、
ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片から選択され得、ここで、アミノ酸位置の番号は配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
本発明のポリペプチドの調製
本発明の変異体α−アミラーゼは、部位特異的突然変異誘発、合成遺伝子構築、半合成遺伝子構築、ランダム突然変異誘発、シャッフリング等などの技術分野において公知であるいずれかの突然変異誘発法を用いて調製可能である。
部位特異的突然変異誘発は、親をコードするポリヌクレオチドにおける１つ以上の定義された部位に１つ以上（例えば、数々）の突然変異を導入する技術である。
部位特異的突然変異誘発は、所望される突然変異を含有するオリゴヌクレオチドプライマーを用いるＰＣＲによりインビトロで達成可能である。部位特異的突然変異誘発はまた、親をコードするポリヌクレオチドを含むプラスミド中における部位での制限酵素による開裂を含むカセット突然変異誘発により、および、その後の、ポリヌクレオチド中に突然変異を含有するオリゴヌクレオチドの連結により、インビトロで行うことが可能である。通常、プラスミドおよびオリゴヌクレオチドを消化する制限酵素は同一であり、プラスミドの付着末端と、インサートとの互いの連結が可能とされる。例えば、Ｓｃｈｅｒｅｒ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ，１９７９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：４９４９−４９５５；および、Ｂａｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：７３４９−４９６６を参照のこと。
部位特異的突然変異誘発はまた、当技術分野において公知である方法によってインビボで達成可能である。例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７１１５４号明細書；Ｓｔｏｒｉｃｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：７７３−７７６；Ｋｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４：２８５−２９０；および、Ｃａｌｉｓｓａｎｏ ａｎｄ Ｍａｃｉｎｏ，１９９６，Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔ．Ｎｅｗｓｌｅｔｔ．４３：１５−１６を参照のこと。
部位特異的突然変異誘発法のいずれかを本発明において用いることが可能である。変異体の調製に用いることが可能である多数の市販キットが入手可能である。
合成遺伝子構築には、対象のポリペプチドをコードするための設計されたポリヌクレオチド分子のインビトロ合成が伴う。遺伝子合成は、Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２００４，Ｎａｔｕｒｅ ４３２：１０５０−１０５４）により記載されている多重マイクロチップ系テクノロジー、ならびに、オリゴヌクレオチドが合成されると共に光による制御が可能なマイクロ流体チップにアセンブルされる同様のテクノロジーなどの多数の技術を利用して行うことが可能である。
単一もしくは複数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入は、Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：５３−５７；Ｂｏｗｉｅ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２１５２−２１５６；国際公開第９５／１７４１３号パンフレット；または、国際公開第９５／２２６２５号パンフレットにより開示されているものなどの公知の突然変異誘発方法、組み換え法、および／または、シャッフリング法、これに続く関連するスクリーニング法を用いて行い、テストすることが可能である。用いられることが可能である他の方法としては、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０８３２−１０８３７；米国特許第５，２２３，４０９号明細書；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット）、および、領域特異的突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ ４６：１４５；Ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ ７：１２７）が挙げられる。
突然変異誘発／シャッフリング法は、宿主細胞によって発現されたクローン化突然変異誘発ポリペプチドの活性を検出するために、高スループット自動スクリーニング法と組み合わせることが可能である（Ｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １７：８９３−８９６）。活性ポリペプチドをコードする突然変異誘発ＤＮＡ分子は、宿主細胞から回収可能であり、当技術分野における標準的な方法を用いて直ぐに配列決定されることが可能である。これらの方法では、ポリペプチドにおける個別のアミノ酸残基の重要性を直ぐに判定することが可能である。
半合成遺伝子構築は、合成遺伝子構築および／または部位特異的突然変異誘発および／またはランダム突然変異誘発および／またはシャッフリングの態様を組み合わせることにより達成される。半合成構築は、ＰＣＲ技術と組み合わされる、合成されたポリヌクレオチド断片を利用するプロセスに代表される。それ故、遺伝子の定義された領域が新たに合成され得、一方で、他の領域が部位特異的突然変異誘発性プライマーを用いて増幅され得、一方で、さらに他の領域がエラープローンＰＣＲまたは非エラープローンＰＣＲ増幅に供され得る。次いで、ポリヌクレオチドサブ配列がシャッフルされ得る。
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドに関する。従って、本発明は、α−アミラーゼ活性を有し、および、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。特に、本発明は、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含む変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関し、ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
核酸構築物
本発明はまた、制御配列に適用する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された、本発明の変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。従って、本発明は、制御配列に適用する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された、変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（α−アミラーゼ活性を有すると共に、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す）を含む核酸構築物に関する。特に、本発明は、制御配列に適用する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含む（ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う）変異体ポリペプチドをコードする核酸構築物に関する。
ポリヌクレオチドは、多様な方法で処置されて変異体の発現がもたらされ得る。ベクターへ挿入される前のポリヌクレオチドの処置が、発現ベクターに応じて、望ましいか、または、必要であり得る。組み換えＤＮＡ法を利用するポリヌクレオチドを修飾するための技術は当技術分野において周知である。
制御配列は、ポリヌクレオチドの発現のための宿主細胞によって認識されるポリヌクレオチドであるプロモータであり得る。プロモータは、変異体の発現を媒介する転写制御配列を含有する。プロモータは、ミュータント、切断およびハイブリッドプロモータを含む宿主細胞において転写活性を示すいずれかのポリヌクレオチドであり得、ならびに、宿主細胞に対して相同性または非相同性である細胞外または細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られ得る。
細菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらす好適なプロモータの例は、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＱ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ペニシリナーゼ遺伝子（ｐｅｎＰ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）マルトジェニックアミラーゼ遺伝子（ａｍｙＭ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）レバンスクラーゼ遺伝子（ｓａｃＢ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｘｙｌＡおよびｘｙｌＢ遺伝子、バチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（Ａｇａｉｓｓｅ ａｎｄ Ｌｅｒｅｃｌｕｓ， １９９４， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １３：９７−１０７）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃオペロン、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｔｒｃプロモータ（Ｅｇｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）アガラーゼ遺伝子（ｄａｇＡ）および原核β−ラクタマーゼ遺伝子（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１）、ならびに、ｔａｃプロモータ（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１−２５）から得られるプロモータである。さらなるプロモータが、「Ｕｓｅｆｕｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ」，Ｇｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ ２４２：７４−９４；および、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９に記載されている。タンデムプロモータの例は国際公開第９９／４３８３５号パンフレットに開示されている。
糸状真菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらす好適なプロモータの例は、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アセトアミダーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）酸安定α−アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）またはアスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）アルカリ性タンパク分解酵素、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様タンパク分解酵素（国際公開第９６／００７８７号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）アミログルコシダーゼ（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ Ｄａｒｉａ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ Ｑｕｉｎｎ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−グルコシダーゼ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＶ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＶ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−キシロシダーゼ、ならびに、ＮＡ２−ｔｐｉプロモータ（非翻訳リーダーがアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーにより置き換えられた、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）中性α−アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータ；非限定的な例としては、非翻訳リーダーがアスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーにより置き換えられた、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータが挙げられる）の遺伝子から得られたプロモータ；ならびに、そのミュータント、切断およびハイブリッドプロモータである。
イースト菌宿主において、有用なプロモータは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２／ＧＡＰ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）メタロチオネイン（ＣＵＰ１）およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞に対する他の有用なプロモータは、Ｒｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｙｅａｓｔ ８：４２３−４８８により記載されている。
制御配列はまた、宿主細胞によって認識されて転写を終結させる転写ターミネータであり得る。ターミネータ配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドの３’−末端に作動可能にリンクする。宿主細胞において機能するいずれかのターミネータが用いられ得る。
細菌性宿主細胞に好ましいターミネータは、バチルスクラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）アルカリ性プロテアーゼ（ａｐｒＨ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ（ａｍｙＬ）および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）リボソーム性ＲＮＡ（ｒｒｎＢ）の遺伝子から入手される。
糸状真菌宿主細胞の好ましいターミネータは、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびフザリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様タンパク分解酵素の遺伝子から得られる。
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）チトクロムＣ（ＣＹＣ１）およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素の遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の他の有用なターミネータが、前述のＲｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２に記載されている。
制御配列はまた、プロモータの下流および遺伝子のコード配列の上流における、遺伝子の発現を高めるｍＲＮＡスタビライザ領域であり得る。
好適なｍＲＮＡスタビライザ領域の例は、バチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（国際公開第９４／２５６１２号パンフレット）および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＳＰ８２遺伝子（Ｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １７７：３４６５−３４７１）から得られる。
制御配列はまた、宿主細胞による翻訳に重要であるｍＲＮＡの非翻訳領域であるリーダーであり得る。リーダー配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドの５’−末端に作動可能にリンクする。宿主細胞において機能するいずれかのリーダーが用いられ得る。
糸状真菌宿主細胞の好ましいリーダーは、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびアスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）トリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られる。
イースト菌宿主細胞の好適なリーダーは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）の遺伝子から得られる。
制御配列はまた、変異体コーディング配列の３’−末端に作動可能にリンクし、転写された場合に、ポリアデノシン残基を転写ｍＲＮＡに負荷するシグナルとして宿主細胞により認識される配列であるポリアデニル化配列であり得る。宿主細胞において機能するポリアデニル化配列のいずれかが用いられ得る。
糸状真菌宿主細胞に好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびフザリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様プロテアーゼの遺伝子から得られる。
イースト菌宿主細胞の有用なポリアデニル化配列が、Ｇｕｏ ａｎｄ Ｓｈｅｒｍａｎ，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．１５：５９８３−５９９０に記載されている。
制御配列はまた、変異体のＮ−末端にリンクしたシグナルペプチドをコードし、および、変異体を細胞の分泌経路に送るシグナルペプチドコード領域であり得る。ポリヌクレオチドのコード配列の５’−末端は、変異体をコードするコード配列のセグメントと共に、翻訳読み枠に元々リンクしたシグナルペプチドコード配列を本質的に含有し得る。または、コード配列の５’−末端は、コード配列に対して外来性のシグナルペプチドコード配列を含有し得る。コード配列がシグナルペプチドコード配列を元々含有していない場合には、外来性のシグナルペプチドコード配列が必要とされる場合がある。または、外来性のシグナルペプチドコード配列は単に、変異体の分泌を増強するために天然シグナルペプチドコード配列を置き換えてもよい。しかしながら、発現変異体を宿主細胞の分泌経路に送るいずれかのシグナルペプチドコード配列が用いられてもよい。
細菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＮＣＩＢ１１８３７マルトジェニックアミラーゼ、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）サブチリシン、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）β−ラクタマーゼ、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）α−アミラーゼ、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中性プロテアーゼ（ｎｐｒＴ、ｎｐｒＳ、ｎｐｒＭ）および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｐｒｓＡの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。さらなるシグナルペプチドが、Ｓｉｍｏｎｅｎ ａｎｄ Ｐａｌｖａ，１９９３，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５７：１０９−１３７に記載されている。
糸状真菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）セルラーゼ、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）エンドグルカナーゼＶ、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼおよびリゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。
イースト菌宿主細胞の有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）インベルターゼの遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列が、前述のＲｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２により記載されている。
制御配列はまた、変異体のＮ−末端でプロペプチド位置をコードするプロペプチドコード配列であり得る。得られたポリペプチドは、酵素原またはプロポリペプチド（または、いくつかの場合においてチモーゲン）として公知である。プロポリペプチドは、一般に非活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒または自己触媒切断によって活性ポリペプチドに転換されることが可能である。プロペプチドコード配列は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）アルカリ性タンパク分解酵素（ａｐｒＥ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中性タンパク分解酵素（ｎｐｒＴ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）ラッカーゼ（国際公開第９５／３３８３６号パンフレット）、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼおよびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子の遺伝子から得られ得る。
シグナルペプチドおよびプロペプチド配列の両方が存在する場合、プロペプチド配列は変異体のＮ−末端に隣接して位置されており、また、シグナルペプチド配列は、プロペプチド配列のＮ−末端に隣接して位置されている。
宿主細胞の増殖に対した変異体の発現を調節する調節配列を付加することが望ましい場合もあり得る。調節系の例は、調節化合物の存在を含む化学的または物理的刺激に応じて、遺伝子の発現をオンオフさせるものである。原核系における調節系としては、ｌａｃ、ｔａｃ、およびｔｒｐオペレータ系が挙げられる。イースト菌においては、ＡＤＨ２系またはＧＡＬ１系が用いられ得る。糸状菌においては、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼプロモータ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡα−アミラーゼプロモータおよびアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）グルコアミラーゼプロモータが用いられ得る。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能とするものである。真核系において、これらの調節配列は、メトトレキセートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、および、重金属を伴って増幅されるメタロチオネイン遺伝子を含む。これらの事例において、変異体をコードするポリヌクレオチドは、調節配列と作動可能にリンクしているであろう。
発現ベクター
本発明はまた、本発明の変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む組み換え型発現ベクターに関する。従って、本発明は、α−アミラーゼ活性を有すると共に配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む組み換え型発現ベクターに関する。特に、本発明は、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含む変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う）、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止コドンを含む組み換え型発現ベクターに関する。
種々のヌクレオチドおよび制御配列が一緒になって、このような部位で変異体をコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能とするために１つまたは複数の好都合な制限部位を含み得る組み換え発現ベクターが生成される。または、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む核酸構築物を発現に適切なベクターに挿入することにより発現され得る。発現ベクターの形成において、コード配列は、コード配列が、発現に適切な制御配列と作動可能にリンクするようベクター中に位置されている。
組み換え発現ベクターは、組み換えＤＮＡ法に簡便に供されることが可能であり、ポリヌクレオチドの発現をもたらすことが可能であるいずれかのベクター（例えば、プラスミドまたはウイルス）であり得る。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞に対するベクターの親和性に応じることとなる。ベクターは、直鎖または閉鎖された環状プラスミドであり得る。
ベクターは、例えばプラスミド、染色体外要素、微小染色体または人工染色体といった、自己複製ベクター（すなわち、染色体外のエンティティとして存在し、その複製が染色体複製とは無関係なベクター）であり得る。ベクターは、自己複製を確実とするための何らかの手段を含有し得る。または、ベクターは、宿主細胞に導入された際に、ゲノム中に統合され、および、中に統合された染色体と一緒に複製されるものであり得る。しかも、単一のベクターもしくはプラスミド、または、一緒になって、宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡを含有する２つ以上のベクターもしくはプラスミド、または、トランスポゾンが用いられてもよい。
ベクターは、形質転換、形質移入、形質導入等された細胞の選択を容易とする１つまたは複数の選択マーカーを含有することが好ましい。選択マーカーは、その生成物が、殺生剤またはウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性等をもたらす遺伝子である。
細菌性選択マーカーの例は、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）もしくは枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｄａｌ遺伝子、または、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシンもしくはテトラサイクリン耐性などの抗生物質耐性を与えるマーカーである。イースト菌宿主細胞の好適なマーカーとしては、これらに限定されないが、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１およびＵＲＡ３が挙げられる。糸状真菌宿主細胞において使用される選択マーカーとしては、これらに限定されないが、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ）、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）およびｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、ならびに、これらの均等物が挙げられる。アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ａｍｄＳおよびｐｙｒＧ遺伝子、ならびに、ストレプトマイセスハイグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ｂａｒ遺伝子がアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞における使用に好ましい。
ベクターは、宿主細胞のゲノムへのベクターの統合、または、ゲノムとは無関係の細胞中のベクターの自律複製を許容する要素を含有することが好ましい。
宿主細胞ゲノムへの統合に関して、ベクターは、変異体をコードするポリヌクレオチドの配列、または、相同的もしくは非相同的組み換えによるゲノムへの統合に係るベクターのいずれかの他の要素に依存し得る。または、ベクターは、染色体における正確な位置での宿主細胞のゲノムへの相同的組み換えによる統合をもたらす追加のポリヌクレオチドを含有していてもよい。正確な位置で統合される可能性を高めるために、統合要素は、相同的組み換えの確率を高めるために対応する標的配列に対して高度の配列同一性を有する、１００〜１０，０００塩基対、４００〜１０，０００塩基対および８００〜１０，０００塩基対などの十分な数の核酸を含有しているべきである。統合要素は、宿主細胞のゲノム中の標的配列と相同的であるいずれかの配列であり得る。さらに、統合要素は、非コーディングまたはコーディングポリヌクレオチドであり得る。他方で、ベクターは、非相同的組み換えにより宿主細胞のゲノムに統合され得る。
自律複製に関して、ベクターは、対象の宿主細胞におけるベクターの自律的な複製を可能とする複製起点をさらに含んでいてもよい。複製起点は、細胞において機能する自律複製を媒介するいずれかのプラスミドレプリケータであり得る。「複製起点」または「プラスミドレプリケータ」という用語は、インビボでのプラスミドまたはベクターの複製を可能とするポリヌクレオチドを意味する。
細菌性複製起点の例は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における複製を許容するプラスミドｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＡＣＹＣ１７７およびｐＡＣＹＣ１８４の複製起点、ならびに、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における複製を許容するｐＵＢ１１０、ｐＥ１９４、ｐＴＡ１０６０およびｐＡＭβ１の複製起点である。
イースト菌宿主細胞において用いられる複製起点の例は、２ミクロン複製起点、ＡＲＳ１、ＡＲＳ４、ＡＲＳ１とＣＥＮ３との組み合わせ、および、ＡＲＳ４とＣＥＮ６との組み合わせである。
糸状真菌細胞において有用な複製起点の例は、ＡＭＡ１およびＡＮＳ１（Ｇｅｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｇｅｎｅ ９８：６１−６７；Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：９１６３−９１７５；国際公開第００／２４８８３号パンフレット）である。ＡＭＡ１遺伝子の単離およびＡＭＡ１遺伝子を含むプラスミドまたはベクターの構築は、国際公開第００／２４８８３号パンフレットに開示されている方法に従って達成可能である。
本発明のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーが宿主細胞に挿入されて、変異体の生成が高められてもよい。ポリヌクレオチドのコピーの数は、配列の少なくとも１つの追加のコピーを宿主細胞ゲノムに統合することにより、または、増幅可能な選択マーカー遺伝子をポリヌクレオチドに含めることにより増加させることが可能であり、ここで、選択マーカー遺伝子の増幅されたコピー、従って、ポリヌクレオチドの追加のコピーを含有する細胞は、適切な選択可能な薬剤中で細胞を培養することにより選択可能である。
上記の要素を連結して本発明の組み換え発現ベクターを構築するために用いられる手法は、当業者に周知である（例えば、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９を参照のこと）。
宿主細胞
本発明はまた、本発明の変異体ポリペプチドを産生させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された本発明の変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組み換え型宿主細胞に関する。従って、本発明は、変異体ポリペプチドを産生させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された、変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（α−アミラーゼ活性を有すると共に配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す）を含む組み換え型宿主細胞に関する。特に、本発明は、変異体ポリペプチドを産生させる１つ以上の制御配列に作動的に結合された、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異（ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う）を含む変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組み換え型宿主細胞に関する。
ポリヌクレオチドを含む構築物もしくはベクターは、構築物もしくはベクターが染色体性組み込み体として、もしくは、既述の自己複製余剰−染色体性ベクターとして維持されるよう宿主細胞に導入される。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異により親細胞と同等ではない親細胞のいずれかの子孫を包含する。宿主細胞の選択は、変異体をコードする遺伝子およびそのソースに大きく依存することとなる。
宿主細胞は、例えば、原核生物または真核生物といった、変異体の組み換え生成において有用ないずれかの細胞であり得る。
原核宿主細胞は、グラム陽性またはグラム陰性バクテリアのいずれかであり得る。グラム陽性バクテリアとしては、これらに限定されないが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）およびストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。グラム陰性バクテリアとしては、これらに限定されないが、カムピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ネイッセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）が挙げられる。
細菌宿主細胞は、特にこれらに限定されないが、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルスブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルスシルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスクラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルスコアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バシラスフィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルスラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｕｔｕｓ）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルスプミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびバチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）細胞を含むいずれかのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞であり得る。
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトコッカスエクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカスウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ）、およびストレプトコッカスズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）細胞のいずれかのストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞を含むいずれかのストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞であり得る。
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトマイセスアウロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトマイセスグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）、およびストレプトマイセスリビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ）細胞を含むいずれかのストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞であり得る。
バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃｈａｎｇ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ，１９７９，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１１−１１５を参照のこと）、コンピテント細胞形質転換（例えば、Ｙｏｕｎｇ ａｎｄ Ｓｐｉｚｉｚｅｎ，１９６１，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．８１：８２３−８２９、またはＤｕｂｎａｕ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｏｆｆ−Ａｂｅｌｓｏｎ，１９７１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５６：２０９−２２１を参照のこと）、電気穿孔法（例えば、Ｓｈｉｇｅｋａｗａ ａｎｄ Ｄｏｗｅｒ，１９８８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：７４２−７５１を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｅ，１９８７，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：５２７１−５２７８を参照のこと）行われ得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｈａｎａｈａｎ，１９８３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６６：５５７−５８０を参照のこと）または電気穿孔法により（例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：６１２７−６１４５を参照のこと）行われ得る。ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換、電気穿孔法（例えば、Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｆｏｌｉａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（Ｐｒａｈａ）４９：３９９−４０５を参照のこと）、接合（例えば、Ｍａｚｏｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７１：３５８３−３５８５を参照のこと）、または、形質導入により（例えば、Ｂｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：６２８９−６２９４を参照のこと）行われ得る。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、電気穿孔法（例えば、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６４：３９１−３９７を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｐｉｎｅｄｏ ａｎｄ Ｓｍｅｔｓ，２００５，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７１：５１−５７を参照のこと）行われ得る。ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、天然コンピテンス（例えば、Ｐｅｒｒｙ ａｎｄ Ｋｕｒａｍｉｔｓｕ，１９８１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３２：１２９５−１２９７を参照のこと）、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃａｔｔ ａｎｄ Ｊｏｌｌｉｃｋ，１９９１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ ６８：１８９−２０７を参照のこと）、電気穿孔法（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３８００−３８０４を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｃｌｅｗｅｌｌ，１９８１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．４５：４０９−４３６を参照のこと）行われ得る。しかしながら、ＤＮＡを宿主細胞に導入するための技術分野において公知である方法のいずれかを用いることが可能である。
宿主細胞はまた、植物または真菌細胞などの真核生物であり得る。
宿主細胞は真菌細胞であり得る。本明細書において用いられるところ、「真菌」は、子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）、担子菌門（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、ツボカビ門（Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）および接合菌門（Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ）ならびに、卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）およびすべての栄養胞子形成真菌（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ，Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ，８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ＣＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫに定義されているとおり）を含む。
真菌宿主細胞はイースト菌細胞であり得る。本明細書において用いられるところ、「イースト菌」は、子嚢菌酵母（エンドミセス目（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ））、担子菌イースト菌を含み、イースト菌は、不完全菌類（不完全酵母菌類（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｔｅｓ））に属する。イースト菌の分類は将来において変更される可能性があるため、本発明の目的について、イースト菌は、Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｙｅａｓｔ（Ｓｋｉｎｎｅｒ，Ｐａｓｓｍｏｒｅ，ａｎｄ Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｓｏｃ．Ａｐｐ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．９，１９８０）に記載されているとおりに定義されるものとする。
イースト菌宿主細胞は、クルイベロマイセスラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、サッカロマイセスカルスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセスジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセスドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロマイセスクルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセスノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスオビホルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）またはヤロウイアリポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）細胞などのカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）またはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）細胞であり得る。
真菌宿主細胞は糸状真菌細胞であり得る。「糸状菌」は、真菌植物門（Ｅｕｍｙｃｏｔａ）および卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）亜門（前述のＨａｗｋｓｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９５で定義されているとおり）のすべてのフィラメント形を含む。糸状菌は、一般に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナンおよび他の複雑な多糖類から組成される菌糸体壁によって特徴付けられる。栄養成長は菌糸の伸展によるものであり、および、炭素異化は絶対好気性である。対照的に、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのイースト菌による栄養成長は単細胞葉状体の出芽によるものであり、および、炭素異化は発酵性であり得る。
糸状真菌宿主細胞は、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ブエルカンデラ属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、コリオルス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、プレウロツス属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞であり得る。
例えば、糸状真菌宿主細胞は、アスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルスフォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルスフミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルスジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、ヤケイロタケ（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ ａｄｕｓｔａ）、セリポリオプシスアネイリナ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ａｎｅｉｒｉｎａ）、セリポリオプシスカレギエア（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｃａｒｅｇｉｅａ）、セリポリオプシスギルベスセンス（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｇｉｌｖｅｓｃｅｎｓ）、セリポリオプシスパンノシンタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｐａｎｎｏｃｉｎｔａ）、セリポリオプシスリブロサ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｒｉｖｕｌｏｓａ）、セリポリオプシススブルファ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｒｕｆａ）、セリポリオプシススブベルミスポラ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｖｅｒｍｉｓｐｏｒａ）、クリソスポリウムイノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウムケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウムルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウムメルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウムパンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウムクイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウムトロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウムゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｚｏｎａｔｕｍ）、コプリヌスシネレウス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、クリオルスヒルスツス（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｈｉｒｓｕｔｕｓ）、フザリウムバクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムセレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウムクロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウムクルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウムグラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウムヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムレチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウムサムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウムサルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウムスポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムスルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウムトルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウムトリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、ムコールミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウムプルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテクリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フレビアラジアタ（Ｐｈｌｅｂｉａ ｒａｄｉａｔａ）、プレウロツスエリンギイ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、チエラビアテルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トラメテスビロサ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｉｌｌｏｓａ）、トラメテスベルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、トリコデルマハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）またはトリコデルマビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）細胞であり得る。
真菌細胞は、それ自体公知の様式でのプロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および、細胞壁の再生を含むプロセスにより形質転換され得る。アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）宿主細胞の形質転換に好適な手法は、欧州特許第２３８０２３号明細書、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：１４７０−１４７４およびＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１４１９−１４２２に記載されている。フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種の形質転換に好適な方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７８：１４７−１５６および国際公開第９６／００７８７号パンフレットに記載されている。イースト菌は、Ｂｅｃｋｅｒ ａｎｄ Ｇｕａｒｅｎｔｅ，Ｉｎ Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．ａｎｄ Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １９４，ｐｐ １８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３；および、Ｈｉｎｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：１９２０に記載の手法を用いて形質転換され得る。
生成方法
本発明はまた、変異体α−アミラーゼを生成する方法に関し、これは：（ａ）変異体ポリペプチドの発現に好適な条件下で本発明の宿主細胞を培養するステップと；（ｂ）変異体ポリペプチドを回収するステップとを含む。
宿主細胞は、当技術分野において公知である方法を用いて変異体の生成に好適な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、好適な培地中ならびに変異体の発現および／または単離が許容される条件下で行われる、振盪フラスコ培養により、または、実験用もしくは産業用発酵槽における小規模もしくは大規模発酵（連続式、バッチ式、フェドバッチ式または固体状発酵を含む）により培養され得る。培養は、炭素および窒素源および無機塩を含む好適な栄養培地において、当技術分野において公知である手法を用いて行われる。好適な媒体は、商業的な供給者から入手可能であるか、または、公開された組成に従って調製され得る（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）。変異体が栄養培地に分泌される場合、変異体は培地から直接回収可能である。変異体が分泌されない場合、細胞ライセートから回収可能である。
変異体は、当技術分野において公知である方法を用いて検出され得る。好適な検出方法は、これらに限定されないが、特定の抗体の使用、酵素産生物の形成、または、酵素基質の消失を含む。例えば、酵素アッセイを用いて変異体のαアミラーゼ活性を判定してもよい（実施例を参照のこと）。
変異体は当技術分野において公知である方法を用いて回収され得る。例えば、変異体は、特にこれらに限定されないが、採取、遠心分離、ろ過、抽出、噴霧乾燥、蒸発または沈殿を含む従来の手法により栄養培地から回収され得る。
変異体は、実質的に純粋な変異体を得るために、特にこれらに限定されないが、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシングおよびサイズ排除）、電気泳動的手法（例えば、分取等電点電気泳動）、較差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈殿）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または、抽出（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｊａｎｓｏｎ ａｎｄ Ｒｙｄｅｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）を含む技術分野において公知である多様な手法によって精製され得る。
代替的な態様においては、変異体は回収されず、変異体を発現する本発明の宿主細胞が変異体のソースとして用いられ得る。
組成物
本発明のα−アミラーゼポリペプチドを添加してもよく、それ故、洗剤組成物のコンポーネントとなる。従って、本発明は、α−アミラーゼ活性を有すると共に、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示す変異体ポリペプチドを含む組成物に関する。特に、本発明は、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含む変異体ポリペプチドを含む組成物に関し、ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う。
それ故、本発明のさらなる態様は、本発明のポリペプチド、および、界面活性剤（アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤および／または両性界面活性剤など）を含む洗剤組成物を提供する。このような洗剤組成物を形成するための濃縮物もしくは添加剤もまた提供されており、この濃縮物もしくは添加剤は、本発明のポリペプチド、および、任意選択により界面活性剤を含む。
以下に詳細に考察されているとおり、洗剤組成物は、酸化剤、漂白活性化剤、充填剤、ビルダー、緩衝剤、構造化剤、金属イオン封鎖剤、光学増白剤、消泡剤、酵素、芳香剤、再付着防止剤、皮膚コンディショニング剤、柔軟性増強剤、乳化剤および着色剤からなる群から選択される１種以上の追加のコンポーネントをさらに含んでいてもよい。
一実施形態においては、組成物は、液体または粉末ランドリー洗剤組成物である。
さらなる実施形態において、組成物は、液体または粉末自動食器洗浄（ＡＤＷ）洗剤組成物である。
本発明の洗剤組成物は、例えば、汚れた布地の前処理に好適なランドリー添加剤組成物およびリンスが追加された布地軟化剤組成物を含む手洗い用もしくは機械洗い用ランドリー洗剤組成物として配合され得、または、通所の家庭での硬質面クリーニング作業で使用される洗剤組成物として配合され得、または、手洗いもしくは機械洗いでの皿洗い作業用に配合され得る。
特定の態様において、本発明は、本発明のα−アミラーゼポリペプチドを含む洗剤濃縮物／添加剤を提供する。洗剤濃縮物／添加剤、ならびに、洗剤組成物は、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、他のデンプン分解酵素、例えば、他のα−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、マルトース生成アミラーゼ、ＣＧＴａｓｅおよび／またはセルラーゼ、マンナナーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ，Ｄｅｎｍａｒｋ製のＭＡＮＮＡＷＡＹ（商標）など））、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、クチナーゼおよび／またはラッカーゼなどの１種以上の他の酵素を含み得る。
普通、選択される酵素の特性は選択される洗剤と適合性であるべきであり（すなわち、他の酵素処方成分および非酵素処方成分等と最適で親和性のｐＨ）、および、この酵素は有効量で存在しているべきである。
プロテアーゼ：好適なプロテアーゼは、動物、野菜または微生物性由来のものを含む。微生物性由来のものが好ましい。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼ、好ましくはアルカリ性微生物性プロテアーゼまたはトリプシン−様プロテアーゼであり得る。アルカリ性プロテアーゼの例は、サブチリシンであって、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から誘導されたもの、例えば、サブチリシンＮｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７およびサブチリシン１６８（国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載）である。トリプシン−様プロテアーゼの例は、国際公開第８９／０６２７０号パンフレットおよび国際公開第９４／２５５８３号パンフレットに記載のトリプシン（例えば、ブタまたはウシ由来）およびフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼである。
有用なプロテアーゼの例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレットおよび国際公開第９８／３４９４６号パンフレットに記載の変異体であって、特に、以下の１つ以上の位置に置換を伴う変異体である：２７、３６、５７、７６、８７、９７、１０１、１０４、１２０、１２３、１６７、１７０、１９４、２０６、２１８、２２２、２２４、２３５および２７４。好ましい市販されているプロテアーゼ酵素としては、ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）（配列番号３）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）およびＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ製）、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ、ＭＡＸＡＰＥＭ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ ＯＸＰ（登録商標）、ＦＮ２（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）が挙げられる。
リパーゼ：好適なリパーゼは、細菌性または真菌性由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。有用なリパーゼの例としては、例えば、欧州特許第２５８ ０６８号明細書および欧州特許第３０５ ２１６号明細書に記載のＨ．ラヌギノサ（Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）（Ｔ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ））または国際公開第９６／１３５８０号パンフレットに記載のＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）といったフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）（同義語、テルモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ））由来のリパーゼ；例えば、Ｐ．アルカリ（Ｐ．ａｌｃａｌｉ）遺伝子またはＰ．シュードアルカリ（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉ）遺伝子（欧州特許第２１８ ２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１ ３７６号明細書）、Ｐ．スツツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（英国特許第１，３７２，０３４号明細書）、Ｐ．フルオレッセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属の一種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）ＳＤ７０５株（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）といったシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼ；例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１１３１：２５３−３６０）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（特開昭６４／７４４９９２号公報）またはＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（国際公開第９１／１６４２２号パンフレット）といったバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼが挙げられる。
好ましい市販されているリパーゼ酵素としては、ＬＩＰＯＬＡＳＥ（商標）およびＬＩＰＯＬＡＳＥ ＵＬＴＲＡ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ、配列番号４本明細書において）が挙げられる。
アミラーゼ：好適なアミラーゼ（αおよび／またはβ）は、細菌性または真菌性由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。アミラーゼとしては、例えば、英国特許第１，２９６，８３９号明細書により詳細に記載されているバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特別な系統といった、例えばバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から得られるα−アミラーゼが挙げられる。有用なアミラーゼの例は、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレットおよび国際公開第９７／４３４２４号パンフレットに記載の変異体であって、特に、以下の１つ以上の位置に置換を伴う変異体である：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８および４４４。市販されているα−アミラーゼは、ＤＵＲＡＭＹＬ（商標）、ＬＩＱＵＥＺＹＭＥ（商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（商標）およびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｓ１００、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｓ１１０、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｓ１０００、Ｅｘｃｅｌｌｅｎｚ Ｓ１１０、Ｅｘｃｅｌｌｅｎｚ Ｓ１０００、Ｅｘｃｅｌｌｅｎｚ Ｓ２０００、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（商標）およびＰＵＲＡＳＴＡＲ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．製）である。それ故、好適なアミラーゼは、本明細書において配列番号：５、６、７、８、９、１０および１１として列挙されているもののいずれか１種、ならびに、その変異体であり得る。
セルラーゼ：好適なセルラーゼは、細菌性または真菌性由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。好適なセルラーゼとしては、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）およびフザリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）から生成された真菌セルラーゼといった、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）由来のセルラーゼが挙げられる。特に好適なセルラーゼは、色の取り扱いに関する有益性を有するアルカリ性または中性セルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許第０ ４９５ ２５７、欧州特許第０ ５３１ ３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０ ５３１ ３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレットおよび国際特許出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号パンフレットに記載されているものなどのセルラーゼ変異体である。
市販されているセルラーゼとしては、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）およびＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、ＣＬＡＺＩＮＡＳＥ（登録商標）およびＰＵＲＡＤＡＸ ＨＡ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）およびＫＡＣ−５００（Ｂ）（登録商標）（花王株式会社）が挙げられる。
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼは、植物、細菌性または真菌性由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、例えば、Ｃ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）といったコプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）由来のペルオキシダーゼ、および、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレットおよび国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されているものなどのその変異体が挙げられる。市販されているペルオキシダーゼとしては、ＧＵＡＲＤＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
レキナーゼ（Ｌｅｃｈｉｎａｓｅ）：好適なレキナーゼは細菌性または真菌性由来のものを含む。これらは、化学的に修飾されているか、または、タンパク質改変されていてもよい。有用なレキナーゼの例としては、配列番号３、４および５に提示されているもの（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、および、国際公開第９９／０６５１６号パンフレット（Ｈｅｎｋｅｌ ＫＧＡＡ）に提示されているものが挙げられる。化学的に修飾されているか、または、タンパク質改変されていてもよい他の好適なレキナーゼの例は、本明細書中の配列番号：１２、１３、１４および１５として示されているものである。
洗剤酵素は、１種以上の酵素を含有する個別の添加剤を添加することにより、または、これらの酵素のすべてを含む複合添加剤を添加することにより洗剤組成物中に含まれていてもよい。本発明の洗剤添加剤、すなわち、個別の添加剤または複合添加剤は、例えば、粒質物、液体、スラリー等として配合可能である。好ましい洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非発塵性粒質物、液体、特に安定化された液体、または、スラリーである。
非発塵性粒質物は、例えば、米国特許第４，１０６，９９１号明細書および米国特許第４，６６１，４５２号明細書に開示のとおり生成され得、任意により、当技術分野において公知である方法によりコーティングされてもよい。ワックス状コーティング材の例は、１０００〜２００００の平均モル重量を有するポリ（エチレンオキシド）生成物（ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０個のエチレンオキシドユニットを有するエトキシル化ノニルフェノール；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含有し、および、１５〜８０個のエチレンオキシドユニットが存在するエトキシル化脂肪族アルコール；脂肪族アルコール；脂肪酸；ならびに、脂肪酸のモノ−およびジ−およびトリグリセリドである。流動床技術による用途に対して好適なフィルム形成性コーティング材の例は英国特許第１４８３５９１号明細書に記載されている。液体酵素調製物は、例えば、確立された方法に従って、プロピレングリコールなどのポリオール、糖または糖アルコール、乳酸またはホウ酸を添加することにより安定化され得る。保護された酵素は、欧州特許第２３８ ２１６号明細書に開示されている方法に従って調製され得る。
本発明の洗剤組成物は、例えば、バー、錠剤、粉末、顆粒、ペーストまたは液体といったいずれかの簡便な形態であり得る。液体洗剤は水性であり得、典型的には、７０％以下の水および０〜３０％の有機溶剤を含有し、または、非水性であり得る。
洗剤組成物は、半極性を含むノニオン性および／またはアニオン性および／またはカチオン性および／または両性イオン性であり得る１種以上の界面活性剤を含む。界面活性剤は、典型的には、０．１％〜６０重量％のレベルで存在する。
含まれている場合、洗剤は通常、直鎖アルキルベンゼンスルホネート、α−オレフィンスルホネート、アルキル硫酸エステル（脂肪族アルコール硫酸エステル）、アルコールエトキシ硫酸エステル、第２級アルカンスルホン酸、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル−もしくはアルケニルコハク酸またはセッケンなどのアニオン性界面活性剤を約１％〜約４０％で含んでいるであろう。
含まれている場合、洗剤は通常、アルコールエトキシレート、ノニル−フェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミン−オキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノール−アミド、脂肪酸モノ−エタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、または、グルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（「グルカミド」）などのノニオン性界面活性剤を約０．２％〜約４０％で含んでいるであろう。
洗剤は、ゼオライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホネート、カーボネート、クエン酸、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、アルキル−もしくはアルケニルコハク酸、可溶性ケイ酸または層状ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製のＳＫＳ−６）などの洗剤ビルダーまたは錯化剤を０〜６５％で含み得る。他の錯化剤はメチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）およびグルタミン酸二酢酸（ＧＬＤＡ）であり得、これらは、リン酸塩を含まない自動食器洗浄用洗剤において特に用いられ得る。
洗剤は１種以上のポリマーを含んでいてもよい。例は、スルホン化ポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−オキシド）、ポリ（ビニルイミダゾール）、ポリアクリレートなどのポリカルボキシレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマーおよびラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーである。
洗剤は、テトラアセチルエチレンジアミンまたはノナノイルオキシベンゼンスルホネートなどの過酸形成漂白剤活性化剤と組み合わされ得る、過ホウ酸塩または過炭酸塩などのＨ２Ｏ２供給源を含み得る漂白剤系を含有していてもよい。さらに、漂白触媒は、Ｍｎおよび／またはＣｏ系コンポーネントであり得る。あるいは、漂白剤系は、例えば、アミド、イミドまたはスルホンタイプの過酸を含み得る。
本発明の洗剤組成物の酵素は、例えば、プロピレングリコールもしくはグリセロールなどのポリオール、糖質もしくは糖質アルコール、乳酸、ホウ酸、もしくは、例えば芳香族ホウ酸エステルといったホウ酸誘導体、または、４−ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体といった従来の安定化剤を用いて安定化され得、および、組成物は、例えば、国際公開第９２／１９７０９号パンフレットおよび国際公開第９２／１９７０８号パンフレットに記載されているとおり配合され得る。
洗剤はまた、クレイ、気泡増強剤、泡抑制剤、耐食剤、汚れ沈殿防止剤、再付着防止剤、染料、殺菌剤、光学増白剤、ヒドロトロープ、色あせ防止剤または芳香剤を含む例えば布コンディショナーなどの他の従来の洗剤処方成分を含有し得る。
洗剤組成物中においては、いずれかの酵素、特に本発明のαアミラーゼポリペプチドが、０．０１〜１００ｍｇの酵素タンパク質／１リットルの洗浄液、好ましくは０．０５〜５ｍｇの酵素タンパク質／１リットルの洗浄液、特に０．１〜１ｍｇの酵素タンパク質／１リットルの洗浄液に相当する量で添加され得ることがここでは予期される。
本発明のαアミラーゼポリペプチドは、本明細書において参照として援用されている国際公開第２００６／００２６４３号パンフレットに開示されている洗剤配合物に追加的に組み込まれてもよい。
本発明の食器洗浄用洗剤組成物の例
本発明のα−アミラーゼポリペプチドはまた、食器洗浄用洗剤組成物において用いられ得、以下が含まれる。
（ａ）粉末自動食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 ０．４〜２．５％
メタケイ酸ナトリウム ０〜２０％
二ケイ酸ナトリウム ３〜２０％
三リン酸ナトリウム ２０〜４０％
炭酸ナトリウム ０〜２０％
過ホウ酸ナトリウム ２〜９％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） １〜４％
硫酸ナトリウム ５〜３３％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
（ｂ）粉末自動食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 １〜２％
二ケイ酸ナトリウム ２〜３０％
炭酸ナトリウム １０〜５０％
リン酸ナトリウム ０〜５％
クエン酸三ナトリウム二水和物 ９〜３０％
ニトリロ三酢酸ナトリウム（ＮＴＡ） ０〜２０％
過ホウ酸ナトリウム一水和物 ５〜１０％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） １〜２％
ポリアクリレートポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー） ６〜２５％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
芳香剤 ０．１〜０．５％
水 ５〜１０％
（ｃ）粉末自動食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 ０．５〜２．０％
二ケイ酸ナトリウム ２５〜４０％
クエン酸ナトリウム ３０〜５５％
炭酸ナトリウム ０〜２９％
重炭酸ナトリウム ０〜２０％
過ホウ酸ナトリウム一水和物 ０〜１５％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） ０〜６％
マレイン酸／アクリル酸コポリマー ０〜５％
クレイ １〜３％
ポリアミノ酸 ０〜２０％
ポリアクリル酸ナトリウム ０〜８％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
（ｄ）粉末自動食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 １〜２％
ゼオライトＭＡＰ １５〜４２％
二ケイ酸ナトリウム ３０〜３４％
クエン酸ナトリウム ０〜１２％
炭酸ナトリウム ０〜２０％
過ホウ酸ナトリウム一水和物 ７〜１５％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） ０〜３％
ポリマー ０〜４％
マレイン酸／アクリル酸コポリマー ０〜５％
有機ホスホネート ０〜４％
クレイ １〜２％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
硫酸ナトリウム 残量
（ｅ）粉末自動食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 １〜７％
二ケイ酸ナトリウム １８〜３０％
クエン酸三ナトリウム １０〜２４％
炭酸ナトリウム １２〜２０％
モノパーサルフェート（２ＫＨＳＯ５．ＫＨＳＯ４．Ｋ２ＳＯ４） １５〜２１％
漂白剤安定剤 ０．１〜２％
マレイン酸／アクリル酸コポリマー ０〜６％
ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム ０〜２．５％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
硫酸ナトリウム、水 残量
（ｆ）クリーニング界面活性剤系を含む粉末および液体食器洗浄組成物
ノニオン性界面活性剤 ０〜１．５％
オクタデシルジメチルアミンＮ−オキシド二水和物 ０〜５％
オクタデシルジメチルアミンの８０：２０ ｗｔ．Ｃ１８／Ｃ１６ブレンド
Ｎ−オキシド二水和物およびヘキサデシルジメチルアミン
Ｎ−オキシド二水和物 ０〜４％
無水オクタデシルビス（ヒドロキシ−エチル）アミンＮ−オキシドおよび無水ヘキサデシルビス（ヒドロキシエチル）アミンＮ−オキシドの７０：３０ ｗｔ．Ｃ１８／Ｃ１６ブレンド ０〜５％
３の平均エトキシル化度を有するＣ１３〜Ｃ１５アルキルエトキシサルフェート ０〜１０％
３の平均エトキシル化度を有するＣ１２〜Ｃ１５アルキルエトキシサルフェート ０〜５％
１２の平均エトキシル化度を有するＣ１３〜Ｃ１５エトキシル化アルコール ０〜５％
９の平均エトキシル化度を有するＣ１２〜Ｃ１５エトキシル化アルコールのブレンド ０〜６．５％
３０の平均エトキシル化度を有するＣ１３〜Ｃ１５エトキシル化アルコールのブレンド ０〜４％
二ケイ酸ナトリウム ０〜３３％
三ポリリン酸ナトリウム ０〜４６％
クエン酸ナトリウム ０〜２８％
クエン酸 ０〜２９％
炭酸ナトリウム ０〜２０％
過ホウ酸ナトリウム一水和物 ０〜１１．５％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） ０〜４％
マレイン酸／アクリル酸コポリマー ０〜７．５％
硫酸ナトリウム ０〜１２．５％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
（ｐ）非水性液体自動食器洗浄組成物
液体ノニオン性界面活性剤（例えば、アルコールエトキシレート） ２．０〜１０．０％
アルカリ金属ケイ酸塩 ３．０〜１５．０％
アルカリ金属リン酸塩 ２０．０〜４０．０％
高級グリコール、ポリグリコール、ポリオキシド、グリコールエーテルから選択される液体キャリア ２５．０〜４５．０％
安定剤（例えば、リン酸の部分エステルおよびＣ１６〜Ｃ１８アルカノール） ０．５〜７．０％
泡抑制剤（例えば、シリコーン） ０〜１．５％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
（ｑ）非水性液体食器洗浄組成物
液体ノニオン性界面活性剤（例えばアルコールエトキシレート） ２．０〜１０．０％
ケイ酸ナトリウム ３．０〜１５．０％
アルカリ金属炭酸塩 ７．０〜２０．０％
クエン酸ナトリウム ０．０〜１．５％
安定化系（例えば微粉シリコーンおよび低分子量ジアルキルポリグリコールエーテルの混合物） ０．５〜７．０％
低分子量ポリアクリレートポリマー ５．０〜１５．０％
クレイゲル増粘剤（例えばベントナイト） ０．０〜１０．０％
ヒドロキシプロピルセルロースポリマー ０．０〜０．６％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
高級グリコール、ポリグリコール、ポリオキシドおよびグリコールエーテルから選択される液体キャリア 残量
（ｒ）チキソトロープ性液体自動食器洗浄組成物
Ｃ１２〜Ｃ１４脂肪酸 ０〜０．５％
ブロックコポリマー界面活性剤 １．５〜１５．０％
クエン酸ナトリウム ０〜１２％
三ポリリン酸ナトリウム ０〜１５％
炭酸ナトリウム ０〜８％
トリステアリン酸グリセリンアルミニウム０〜０．１％
クメンスルホン酸ナトリウム ０〜１．７％
ポリアクリレート増粘剤 １．３２〜２．５％
ポリアクリル酸ナトリウム ２．４〜６．０％
硼酸 ０〜４．０％
ギ酸塩ナトリウム ０〜０．４５％
ギ酸塩カルシウム ０〜０．２％
ｎ−デシジフェニルオキシドジスルホン酸ナトリウム ０〜４．０％
モノエタノールアミン（ＭＥＡ） ０〜１．８６％
水酸化ナトリウム（５０％） １．９〜９．３％
１，２−プロパンジオール ０〜９．４％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
泡抑制剤、染料、芳香剤、水 残量
（ｓ）液体自動食器洗浄組成物
アルコールエトキシレート ０〜２０％
脂肪酸エステルスルホン酸塩 ０〜３０％
ドデシル硫酸ナトリウム ０〜２０％
アルキルポリグリコシド ０〜２１％
オレイン酸 ０〜１０％
二ケイ酸ナトリウム一水和物 １８〜３３％
クエン酸ナトリウム二水和物 １８〜３３％
ステアリン酸ナトリウム ０〜２．５％
過ホウ酸ナトリウム一水和物 ０〜１３％
テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ） ０〜８％
マレイン酸／アクリル酸コポリマー ４〜８％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
（ｔ）保護された漂白剤粒子を含有する液体自動食器洗浄組成物
ケイ酸ナトリウム ５〜１０％
ピロリン酸カリウム １５〜２５％
三リン酸ナトリウム ０〜２％
炭酸カリウム ４〜８％
保護された漂白剤粒子、例えば塩素 ５〜１０％
高分子増粘剤 ０．７〜１．５％
水酸化カリウム ０〜２％
酵素（例えばα−アミラーゼポリペプチド） ０．０００１〜０．１％
水 残量
（ｕ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｊ）に記載の自動食器洗浄組成物であって、過ホウ酸塩が過炭酸塩で置き換えられたもの。
（ｖ）（ａ）〜（ｆ）に記載の自動食器洗浄組成物であって、マンガン触媒を追加的に含有するもの。マンガン触媒は、例えば“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍａｎｇａｎｅｓｅ ｃａｔａｌｙｓｔｓ ｆｏｒ ｌｏｗ−ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｂｌｅａｃｈｉｎｇ”，Ｎａｔｕｒｅ ３６９，１９９４，ｐｐ．６３７−６３９に記載の化合物の１種であり得る。
使用
本発明はまた、洗剤、特にランドリー洗剤組成物および食器洗浄用洗剤組成物中において本発明のα−アミラーゼポリペプチドを用いる方法に関する。
それ故、本発明は、家庭用または工業用クリーニングプロセスにおける本発明のα−アミラーゼポリペプチドまたは組成物の使用を提供する。
一実施形態において、使用は、布のクリーニング、例えばランドリーである。
他の実施形態において、使用は、セラミック、塑性材料またはガラス材料のクリーニング、例えば食器洗浄である。
従って、本発明のα−アミラーゼポリペプチドは、洗浄、食器洗浄および硬質面クリーニング洗剤組成物（家庭用または工業用の設定のいずれか）におけるコンポーネントとして適用可能である。
本発明のα−アミラーゼ変異体は、多様な他の工業用用途を可能とする価値のある特性を有する。例えば、本発明のα−アミラーゼポリペプチドは、デンプンの加工、特にデンプンの転化、特にデンプンの液化に用いられ得る（例えば、米国特許第３，９１２，５９０号明細書、欧州特許出願第２５２ ７３０号明細書、欧州特許出願第６３ ９０９号明細書、国際公開第９９／１９４６７号パンフレット、ならびに、国際公開第９６／２８５６７号パンフレットを参照のこと（すべての文献は本明細書における参照により援用されている））。本発明の変異体に加えて、グルコアミラーゼ、プルラナーゼおよび他のα−アミラーゼをも含み得る、デンプンの転化を目的とした組成物もまた予期される。
さらに、本発明のα−アミラーゼ変異体はまた、デンプンまたは全穀粒から甘味料ならびに燃料、飲用エタノールおよび工業用エタノールなどのエタノール（例えば、本明細書において参照により援用されている米国特許第５，２３１，０１７号明細書を参照のこと）を生産する場合に特に有用である。
本発明のα−アミラーゼ変異体はまた、生地、布および衣服の糊抜き（例えば、本明細書において参照により援用されている国際公開第９５／２１２４７号パンフレット、米国特許第４，６４３，７３６号明細書、欧州特許第１１９，９２０号明細書を参照のこと）、ビール製造または醸造、パルプおよび紙製造に有用であり得る。
デンプンの転化
液化および糖化プロセスなどの従来のデンプン転化プロセスは、例えば米国特許第３，９１２，５９０号明細書および欧州特許出願第２５２，７３０号明細書および欧州特許出願第６３，９０９号明細書（これにより、参照により援用されている）に記載されている。
一実施形態において、糖または脂肪代替物などの低分子量炭水化物成分にデンプンを分解するデンプンの転化プロセスは、脱分枝ステップを含む。
デンプンを糖に転化する場合においては、デンプンは解重合される。このような解重合プロセスは、前処理ステップ、および、２つまたは３つの連続する加工ステップ（すなわち、液化プロセス、糖化プロセス、ならびに、所望される最終生成物に応じて、任意選択により、異性化プロセス）から構成され得る。
（ｉ）天然デンプンの前処理
天然デンプンは、室温では水に不溶性である非常に小さな顆粒から構成されている。水性デンプンスラリーを加熱すると、これらの顆粒が膨潤し、最終的には破裂して、デンプン分子が溶液中に分散される。この「糊化」プロセスの最中には、粘度が著しく高くなる。典型的な工業用プロセスにおける固形分レベルは３０〜４０％であるため、デンプンは、取り扱いが可能であるように、希釈されるか、または、「液化」される必要がある。今日において、この粘度の低減はほとんどの場合酵素分解によって行われる。
（ｉｉ）液化
液化ステップの最中、長鎖デンプンは、α−アミラーゼによって、分岐および直鎖のより短鎖のユニット（マルトデキストリン）に分解される。液化プロセスは、１０５〜１１０℃で５〜１０分間、続いて、９５℃で１〜２時間実施される。ｐＨは５．５〜６．２である。これらの条件下における最適な酵素安定性を確保するため、１ｍＭのカルシウムが添加される（４０ｐｐｍ遊離カルシウムイオン）。この処理の後、液化デンプンは１０〜１５の「ブドウ糖当量」（ＤＥ）を有することとなる。
（ｉｉｉ）糖化
液化プロセス後、マルトデキストリンは、グルコアミラーゼ（例えば、ＡＭＧ）、および、イソアミラーゼ（米国特許第４，３３５，２０８号明細書）またはプルラナーゼ（例えば、Ｐｒｏｍｏｚｙｍｅ（商標））（米国特許第４，５６０，６５１号明細書）などの脱分枝酵素を添加することによりブドウ糖に転換される。このステップの前に、ｐＨは４．５未満の値に低下させ、高温（９５℃超）に維持して液化α−アミラーゼを不活性化させて、脱分枝酵素による適当な加水分解が不可能である「パノース前駆体」と呼ばれる単鎖オリゴ糖の形成が低減される。
温度を６０℃に下げ、グルコアミラーゼおよび脱分枝酵素が添加される。糖化プロセスは２４〜７２時間行われる。
通常、液化ステップ後にα−アミラーゼを変性する場合、約０．２〜０．５％の糖化生成物は分岐三糖６＜２＞−α−グルコシルマルトース（パノース）であり、これは、プルラナーゼによる分解が不可能である。液化ステップからの活性アミラーゼが糖化中に存在している場合（すなわち、変性無し）、このレベルは１〜２％もの高さであることが可能であり、これは、糖化収率を顕著に低下させるためにきわめて望ましくない。
（ｉｖ）異性化
所望される最終的な糖生成物が例えば異性化糖である場合、ブドウ糖シロップ剤はフルクトースに転換され得る。糖化プロセスの後、ｐＨは６〜８の範囲内の値、好ましくはｐＨ７．５に高められると共に、カルシウムがイオン交換により除去される。次いで、ブドウ糖シロップ剤が、例えば、固定化グルコースイソメラーゼ（Ｓｗｅｅｔｚｙｍｅ（商標）ＩＴなど）を用いて異性化糖に転換される。
エタノール製造
通常、全穀粒からのアルコール製造（エタノール）は、４つの主なステップに分けることが可能である。
−製粉
−液化
−糖化
−発酵
（ｉ）製粉
穀粒は、構造を開放し、さらなる加工を可能とするために製粉される。湿式または乾式製粉の２つのプロセスが用いられる。乾式製粉においては、全穀粒が製粉され、プロセスの残りの部分で用いられる。湿式製粉は胚とあら粉（デンプン顆粒およびタンパク質）をきわめて良好に分離させ、および、数少ない例外を伴ってシロップ剤の製造が並行して行われている現場で適用される。
（ｉｉ）液化
液化プロセスにおいては、デンプン顆粒は、ほとんどの場合４を超えるＤＰのマルトデキストリンに加水分解されることにより可溶化される。加水分解は、酸処理により、または、α−アミラーゼにより酵素的に実施され得る。酸加水分解は限定的に用いられる。原料は、製粉された全穀粒、または、デンプン加工由来の副生成物であることが可能である。
酵素による液化は典型的には、３つのステップのホットスラリープロセスとして実施される。スラリーは、６０〜９５℃、好ましくは８０〜８５℃に加熱され、および、酵素が添加される。次いで、スラリーが９５〜１４０℃、好ましくは１０５〜１２５℃でジェット処理（ｊｅｔ ｃｏｏｋｅｄ）され、６０〜９５℃に冷却され、さらなる量の酵素を添加して最終的な加水分解が達成される。液化プロセスはｐＨ４．５〜６．５、典型的には５〜６のｐＨで実施される。製粉され、液化された穀粒はマッシュとしても知られている。
（ｉｉｉ）糖化
イースト菌によって代謝可能である低分子糖ＤＰ１〜３を生成するために、液化からのマルトデキストリンはさらに加水分解されなければならない。加水分解は典型的にはグルコアミラーゼにより酵素的に行われるが、あるいは、α−グルコシダーゼまたは酸α−アミラーゼを用いることが可能である。完全な糖化ステップは最長で７２時間継続し得るが、しかしながら、典型的には４０〜９０分間の前糖化のみを行い、次いで、発酵（ＳＳＦ）中に糖化を完了させることが一般的である。糖化は、典型的には、３０〜６５℃、典型的には約６０℃の温度、および、ｐＨ４．５で実施される。
（ｉｖ）発酵
典型的にはサッカロミセス属の一種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）由来のイースト菌がマッシュに添加され、発酵が、典型的には３５〜６０時間などの２４〜９６時間行われる。温度は２６〜３４℃、典型的には約３２℃であり、ｐＨはｐＨ３〜６、好ましくは約ｐＨ４〜５である。
最も広範に用いられているプロセスでは糖化および発酵（ＳＳＦ）プロセスが同時に行われ、ここでは、糖化に係る保持ステージがなく、これは、イースト菌および酵素が一緒に添加されることを意味していることに注意すべきである。ＳＳＦを行う場合、５０℃超の温度における前糖化ステップを発酵の直前に導入することが一般的である。
（ｖ）蒸留
発酵に続いて、マッシュを蒸留してエタノールが抽出される。
本発明のプロセスに従って得られたエタノールは、例えば、燃料エタノール；飲用エタノール、すなわち、飲料用の中性スピリッツ；または、工業用エタノールとして使用され得る。
（ｖｉ）副生成物
発酵においては穀粒が残されるが、これは典型的には、液体形態で、または、乾燥させて動物の給餌に用いられる。
液化、糖化、発酵、蒸留およびエタノールの回収をどのように行うかに関するさらなる詳細は当業者に周知である。
本発明のプロセスによれば、糖化および発酵は、同時にまたは別々に実施され得る。
パルプおよび紙の製造
本発明のアルカリα−アミラーゼポリペプチドはまた、デンプンで強化された廃紙および厚紙からのパルプ、紙および厚紙などのリグノセルロース系材料の製造であって、特に、再パルプ化が７超のｐＨで行われ、および、アミラーゼが、強化用のデンプンの分解を介して廃棄材料の砕解を促進させる場合に用いられ得る。本発明のα−アミラーゼは、印刷されたデンプン塗工紙から製紙用パルプを製造するためのプロセスにおいて特に有用である。このプロセスは国際公開第９５／１４８０７号パンフレットに記載されているとおり行われ得、以下のステップを含む。
ａ）紙を砕解してパルプを製造するステップ
ｂ）ステップａ）の前後またはその最中にデンプン分解性酵素で処理するステップ、および
ｃ）ステップａ）およびｂ）の後にパルプからインク粒子を分離させるステップ。
本発明のα−アミラーゼはまた、製紙において、炭酸カルシウム、カオリンおよびクレイなどのアルカリ性充填材と一緒に酵素的に改質されたデンプンが用いられるデンプンの改質においてきわめて有用であり得る。本発明のアルカリα−アミラーゼでは、充填材の存在下でデンプンの改質が可能となり、それ故、よりシンプルで一貫的なプロセスが可能となる。
生地、布および衣服の糊抜き
本発明のα−アミラーゼはまた、生地、布または衣服の糊抜きにおいてきわめて有用であり得る。生地加工産業において、α−アミラーゼは、製織中における横糸の保護用コーティングとされるデンプンを含有する織物用糊の除去を促進させる糊抜きプロセスにおける助剤として、伝統的に用いられている。布がスカーリングに供され、漂白され、および、染色されるその後のプロセスにおいて最適な結果を実現するために、製織後に織物用糊コートを完全に除去することが重要である。繊維材料に対して悪影響を全くおよぼさないために、酵素によるデンプンの分解が好ましい。加工コストを低減するために、および、ミルスループットを高めるために、糊抜き加工は時々、スカーリングおよび漂白ステップと組み合わされる。このような事例においては、従来のα−アミラーゼは、高いｐＨレベルおよび漂白剤に対する適合性が高くないため、典型的には、アルカリまたは酸化剤などの非酵素性助剤がデンプンの分解に用いられている。薬剤の攻撃性が高いために、デンプン織物用糊の非酵素性分解によりいくらかの繊維の損傷がもたらされてしまう。従って、アルカリ性の溶液中において向上した性能を有するために、本発明のα−アミラーゼを用いることが望ましいであろう。α−アミラーゼは単独で用いられても、または、セルロース含有布もしくは生地の糊抜きを行う際にはセルラーゼと組み合わせて用いられてもよい。
糊抜きおよび漂白プロセスは当技術分野において周知である。例えば、このようなプロセスは、本明細書において参照により援用されている、国際公開第９５／２１２４７号パンフレット、米国特許第４，６４３，７３６号明細書、欧州特許第１１９，９２０号明細書に記載されている。
市販されている糊抜き用の製品としては、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ製のＡＱＵＡＺＹＭＥ（登録商標）およびＡＱＵＡＺＹＭＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡが挙げられる。
ビール製造
本発明のα−アミラーゼはまたビール形成プロセスにおいてきわめて有用であり得；α−アミラーゼは典型的には、マッシュ化プロセスの最中に添加されることとなる。
本発明をさらに以下の実施例により説明するが、これは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
本明細書に記載され、特許請求されている本発明は、本明細書において開示されている特定の態様は本発明の数々の態様の例示であることが意図されているため、これらの態様によってその範囲が限定されるものではない。いずれかの均等な態様は本発明の範囲内であることが意図されている。実際に、本明細書に表示され記載されているものに追加した本発明の種々の変更は、前述の記載から当業者に明らかになるであろう。このような変更もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に属することが意図されている。競合する場合には、定義を含む本開示が優先されることとなる。
実施例
実施例１：α−アミラーゼ活性に対するアッセイ
１．Ｐｈａｄｅｂａｓアッセイ
α−アミラーゼ活性は、Ｐｈａｄｅｂａｓ（登録商標）錠剤を基質として利用する方法により判定し得る。Ｐｈａｄｅｂａｓ錠剤（Ｐｈａｄｅｂａｓ（登録商標）アミラーゼテスト、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃにより提供されている）は、架橋された不溶性青色のデンプンポリマーを含有し、これは、ウシ血清アルブミンおよび緩衝剤物質と混合され、タブレット化されている。
すべての各計測で、１つの錠剤を、５ｍｌの５０ｍＭのブリトン−ロビンソン緩衝剤（５０ｍＭの酢酸、５０ｍＭのリン酸、５０ｍＭの硼酸、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、ＮａＯＨで目標値にｐＨを調節済）を含むチューブ中に懸濁させる。このテストは目標温度の水浴中で行われる。テストされるα−アミラーゼは、ｘｍｌの５０ｍＭのブリトン−ロビンソン緩衝剤中で希釈される。このα−アミラーゼ溶液１ｍｌを５ｍｌの５０ｍＭのブリトン−ロビンソン緩衝剤に添加する。デンプンをα−アミラーゼにより加水分解して可溶性の青色の断片を得る。分光測光法的に６２０ｎｍと計測される得られる青色の溶液の吸光度は、α−アミラーゼ活性の機能によるものである。
インキュベーションの１０または１５分後（テスト時間）に計測される６２０ｎｍの吸光度が６２０ｎｍで０．２〜２．０吸光度単位の範囲内であることが重要である。この吸光度範囲内においては、活性と吸光度との間には直線性が存在している（ランバート−ベールの法則）。従って、この判定基準に沿うよう酵素の希釈率を調節する必要性がある。特定の条件設定下（温度、ｐＨ、反応時間、緩衝剤条件）では、１ｍｇの所与のα−アミラーゼは一定の量の基質を加水分解し、青色が呈色されることとなる。色強度を６２０ｎｍで計測する。計測した吸光度は、所与の条件設定下で、対象のα−アミラーゼの比活性（活性／１ｍｇの純粋なα−アミラーゼタンパク質）と正比例する。
２．代替的方法
α−アミラーゼ活性は、ＰＮＰ−Ｇ７基質を利用する方法により測定される。ｐ−ニトロフェニル−α，Ｄ−マルトヘプタオシドの略記であるＰＮＰ−Ｇ７は、エンド−アミラーゼによって開裂可能であるブロックされたオリゴ糖である。開裂に続いて、キットに含まれるα−グルコシダーゼが基質を消化して黄色を呈色する遊離ＰＮＰ分子を遊離させ、これにより、λ＝４０５ｎｍ（４００〜４２０ｎｍ）での可視分光測光による計測が可能である。ＰＮＰ−Ｇ７基質およびα−グルコシダーゼを含有するキットは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ製である（ｃａｔ．Ｎｏ．１０５４６３５）。
試薬溶液を調製するために、製造業者により推奨されているとおり、１０ｍｌの基質／緩衝剤溶液を５０ｍｌの酵素／緩衝剤溶液に添加する。２０μｌのサンプルを９６ウェルマイクロタイタープレートに移し、２５℃でインキュベートすることによりアッセイを行う。予め２５℃に平衡化した２００μｌの試薬溶液を添加する。溶液を混合し、１分間予備インキュベートし、ＥＬＩＳＡリーダー中において４分間にわたってＯＤ４０５ｎｍで３０秒毎に吸収を計測する。
時間依存吸収曲線の傾きは、所与の条件設定下で、対象のα−アミラーゼの活性に正比例である。
ＬＡＳ感受性の判定
変異体を、異なる濃度のＬＡＳ（直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩；Ｎａｎｓａ １１６９／Ｐ）で１０分間の間４０℃でインキュベートする。
残存活性を、Ｐｈａｄｅｂａｓ（登録商標）アッセイ方法、または、ＰＮＰ−Ｇ７基質を利用する代替的な方法を用いて判定する。
ＬＡＳを０．１Ｍリン酸塩緩衝剤ｐＨ７．５中において希釈する。
以下の濃度を用いる：５００ｐｐｍ、２５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、２５ｐｐｍおよび１０ｐｐｍまたはＬＡＳ無し。異なるＬＡＳ緩衝剤中で、１０ｍｌの総体積で０．０１〜５ｍｇ／ｌの濃度に変異体を希釈し、１０分間、温度制御した水浴中でインキュベートする。少量を冷やしたアッセイ緩衝剤に移すことによりインキュベーションを停止する。活性計測の最中には、活性計測に影響を及ぼさないようにＬＡＳ濃度が１ｐｐｍ未満であることが重要である。
次いで、残存活性を、上記のＰｈａｄｅｂａｓ（登録商標）アッセイまたは代替的な方法を用いて反復で測定する。活性はブランクを差し引いた後に計測する。ＬＡＳを伴わない活性は１００％である。
実施例２：フルスケール自動食器洗浄（ＡＤＷ）を用いた本発明のα−アミラーゼポリペプチドの洗浄性能のアセスメント
洗剤系組成物における本発明のポリペプチドの洗浄性能を評価するために、洗浄実験を、フルスケール自動食器洗浄（ＡＤＷ）を用いて実施し得る。ポリペプチドの洗浄性能のテストのために、フルスケールＡＤＷの設定を、一般的な、消費者による設定を模したテスト条件で用いる。
本研究において、テスト条件は、Ｍｉｅｌｅ Ｄｉｓｈｗａｓｈｅｒ Ｍｉｅｌｅ Ｇ４３００ ＳＣＵマシンを用いる、一般的な５０℃の洗浄プログラムおよび短時間の４０℃プログラムであった。
一般的な洗浄性能の説明。
デンプンで汚したメラミン製タイル（Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｔｅｓｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＢＶ（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １２０，３１３３ ＫＴ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）製のＤＭ−７７／ＤＭ−１７７／ＤＭ−２７７／ＤＭ−３７７）をテスト材料として用い、４０℃および５０℃で、１９〜２０°ｄＨの水道水を用いて、下記に特定されているようにプログラムで設定したとおり洗浄した（表２、３および４を参照のこと）。食器洗浄器における洗剤ディスペンサの蓋を開けてから、洗剤およびα−アミラーゼを、４０℃での洗浄については１．５ｍｇのポリペプチド／洗浄もしくは３ｍｇのポリペプチド／洗浄、または５０℃での洗浄については０．５ｍｇのポリペプチド／洗浄もしくは１ｍｇのポリペプチド／洗浄の濃度で添加した。０ｍｇポリペプチド／Ｌでのテストをブランクとして用い、洗剤からの寄与に相当させた。フルスケール洗浄性能実験は、以下に明記した実験条件で行った。
Figure 2019505204
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洗浄した後、メラミン製タイルを乾燥させた。
洗浄性能は、洗浄したタイルおよび未洗浄のタイル間の規約反射率の差として計測した。規約反射率の計測は、Ｃｏｌｏｒ−Ｅｙｅ７０００（ＣＥ７０００）を用いてスペクトルを得、規約反射率の計算を行うことにより実施した。規約反射率は、ＵＶ光を含まない光源により４６０ｎｍで計測した。
上記に列挙した条件の１つ以上において向上係数（ＩＦ）が少なくとも１．０、好ましくは少なくとも１．２であれば洗浄性能は向上したものとみなした（すなわち、４０℃または５０℃のいずれかで、変異体濃度が、４０℃での洗浄については１．５ｍｇのポリペプチド／洗浄または３ｍｇのポリペプチド／洗浄、および、０．５ｍｇのポリペプチド／洗浄または１ｍｇのポリペプチド／洗浄であった場合）。
フルスケール洗浄によって得られる本発明の例示的なポリペプチドの洗浄性能が、表５ａ（４０℃）および表５ｂ（５０℃）に示されている（ここで、洗浄性能スコアは、配列番号１の親α−アミラーゼの洗浄性能を基準としている）。
Figure 2019505204
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実施例３：フルスケール自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）を用いた本発明のα−アミラーゼポリペプチドの洗浄性能のアセスメント
洗剤系組成物における本発明のポリペプチドの洗浄性能を評価するために、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）を用いても洗浄実験を行い得る。ＡＭＳＡテストでは、大量の小体積酵素−洗剤溶液の洗浄性能を試験することが可能である。ＡＭＳＡプレートはテスト溶液用のスロットを多数有しており、蓋によって、すべてのスロットの開口に対して洗浄される生地見本がしっかりとはさまれている。洗浄時間の間、プレート、テスト溶液、生地および蓋を激しく振盪させて、テスト溶液と生地とを接触させると共に、規則正しい周期的な振盪で機械的応力を適用させる。さらなる詳細については、国際公開第０２／４２７４０号パンフレット（特に、第２３〜２４ページの段落「特別な方法の実施形態」、その開示は本明細書において参照により援用されている）を参照のこと。
一般的な洗浄性能の説明
水（２１°ｄＨ）、３．９４ｇ／Ｌの漂白剤を伴うＡＤＷモデル洗剤または３．４５ｇ／Ｌの漂白剤を伴わないＡＤＷモデル洗剤（以下に特定されているとおり（表６、７および８を参照のこと））、ならびに、本発明のポリペプチドを０．０３、０．０６、０．１２および０．２４ｍｇのポリペプチドタンパク質／Ｌ（４０℃）、または、０．０１、０．０３、０．０６および０．１２ｍｇのポリペプチドタンパク質／Ｌ（５０℃）の濃度で含むテスト溶液を調製した。デンプンで汚した布（Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｔｅｓｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＢＶ（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １２０，３１３３ ＫＴ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）製のＣＳ−２８）を加え、以下に明記のとおり、１０または２０分間の間、４０℃および５０℃で洗浄した。水道からの流水で完全にすすいだ後、暗中で乾燥させ、その後、汚した布の光強度値を洗浄性能の尺度として計測した。酵素タンパク質０ｍｇ／Ｌのテストをブランクとして用い、洗剤による寄与と対応させた。例えば洗浄溶液と布およびタイルとを振盪、回転または攪拌させる形態で、洗浄ステップ中に機械的な作用を適用することが好ましい。ＡＭＳＡ洗浄性能実験を以下に特定した実験条件下で実施した。
Figure 2019505204
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ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２およびＮａＨＣＯ３（Ｃａ２＋：Ｍｇ２＋：ＨＣＯ３−＝４：１：１０）をテスト系に添加することにより、水硬度を２１°ｄＨに調節した。洗浄した後、生地を水道水中で洗い、乾燥させた。
洗浄性能は、白色の光を照射した際のサンプルからの反射光の強度として表される輝度として計測された。サンプルが汚れていた場合、きれいなサンプルのものよりも反射光の強度は低かった。従って、反射光の強度を用いて洗浄性能を計測することが可能である。
色の計測は、洗浄した生地のイメージを撮像するために用いられるプロ用の平面スキャナ（ＥＰＳＯＮ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １００００ＸＬ，ＥＰＳＯＮ）で行われた。
スキャンしたイメージからの光強度の値を抽出するために、イメージからの４８ ２４ビットカラーピクセル値をレッド、グリーンおよびブルー（ＲＧＢ）の値に変換した。強度値（Ｉｎｔ）は、ＲＧＢ値をベクターとして一緒に加算し、次いで、得られるベクターの長さから算出される。
Figure 2019505204
ＡＭＳＡにより得た本発明に係る変異体の洗浄性能は以下である。
Figure 2019505204
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Claims (46)

  1. 配列番号１の変異体アミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドはα−アミラーゼ活性を有すると共に、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示すポリペプチド。
  2. 前記変異体アミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸位置１６７において突然変異を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 前記変異体アミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸位置１６７においてＷ１６７Ｙなどの置換を含む、請求項２に記載のポリペプチド。
  4. 前記高い洗浄性能が、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）アッセイを用いて評価される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  5. 前記高い洗浄性能を高温での洗浄の最中に示す、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  6. 前記高温が、少なくとも４５℃など、少なくとも５０℃など、少なくとも５５℃など、および、少なくとも６０℃などの少なくとも４０℃である、請求項５に記載のポリペプチド。
  7. 前記ポリペプチドが、以下からなる群から選択される条件の１つ以上：
    （ａ）４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；
    （ｂ）４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
    （ｃ）５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；ならびに
    （ｄ）５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
    において高い洗浄性能を示し、前記モデルＡＤＷ洗剤が、メチルグリシン二酢酸の三ナトリウム塩（Ｔｒｉｌｏｎ Ｍ ｇｒａｎｕｌｅｓ ＳＧなど）、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、ポリリン酸およびケイ酸塩スケール防止剤（Ａｃｕｓｏｌ ５８８Ｇなど）ならびにＳｕｒｆａｃ２３−６．５を含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む。
  8. 前記ポリペプチドが、１０００以下のアミノ酸長、例えば９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１７５、１５０、１２５、１００以下のアミノ酸である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  9. 前記ポリペプチドが、４００〜６００のアミノ酸長、例えば４５０〜５００、４６０〜５００、または、４７０〜４９０のアミノ酸長である、請求項８に記載のポリペプチド。
  10. 位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う、請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  11. １つ以上の位置における前記突然変異が、置換、欠失および／または挿入である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  12. 前記ポリペプチドが、配列番号２の前記アミノ酸配列を基準として以下の置換；Ｍ１０Ｌ，Ｎ２５Ｋ，Ｄ３０Ｎ，Ｋ３７Ｈ，Ｋ３７Ｌ，Ｋ３７Ｍ，Ｋ３７Ｒ，Ｋ３７Ｖ，Ｓ４０Ｔ，Ｗ４８Ｆ，Ａ５１Ｑ，Ａ５１Ｔ，Ｎ５４Ｓ，Ｙ６４Ｗ，Ｔ８１Ｓ，Ｑ８６Ｈ，Ｑ８６Ｉ，Ｑ８６Ｌ，Ｋ９３Ｈ，Ｋ９３Ｒ，Ｑ９８Ｒ，Ｍ１０５Ｙ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｍ１０５Ｌ，Ｋ１０８Ｒ，Ｇ１０９Ａ，Ｇ１０９Ｍ，Ａ１１３Ｅ，Ｍ１１６Ｉ，Ｍ１１６Ｌ，Ｍ１１６Ａ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｋ１１８Ｎ，Ｋ１１８Ｒ，Ｅ１２１Ｈ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｙ１３５Ｈ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ１４２Ｒ，Ｋ１４２Ｑ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｈ，Ｎ１７４Ｑ，Ｎ１７４＊，Ｎ１７５Ｑ，Ｙ１７８Ｗ，Ｔ１８２Ｇ，Ａ１８６Ｄ，Ａ１８６Ｇ，Ｗ１８７Ｙ，Ｗ１８９Ｈ，Ｆ１９５Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｌ２０２Ｍ，Ｙ２０３Ｈ，Ｙ２０３Ｎ，Ｙ２０３Ｇ，Ｙ２０３Ｆ，Ｉ２０６Ｌ，Ｍ２０８Ｆ，Ｍ２０８Ｌ，Ｍ２０８Ｖ，Ｈ２１０Ｎ，Ｖ２１４Ｒ，Ｖ２１４Ｔ，Ｖ２１４Ｉ，Ｒ２１８Ｎ，Ｉ２３５Ｖ，Ｉ２３５Ｌ，Ｉ２３５Ｍ，Ｖ２３８Ｔ，Ｖ２３８Ａ，Ｋ２４２Ｐ，Ｙ２４３Ｆ，Ｙ２４３Ｍ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｍ，Ｒ２４７Ｋ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｓ２５５Ｋ，Ｉ２５７Ａ，Ｋ２５９Ｎ，Ｎ２６０Ｄ，Ｍ２６１Ｌ，Ｍ２６１Ａ，Ａ２６５Ｇ，Ｆ２６７Ｙ，Ｋ２６９Ｓ，Ｋ２６９Ｎ，Ｎ２７０Ｇ，Ａ２７４Ｋ，Ｉ２７５Ｌ，Ｅ２７６Ｑ，Ｋ２８１Ｈ，Ｆ２９５Ｙ，Ｆ２９５Ｗ，Ｙ２９８Ｗ，Ｙ２９８Ｆ，Ｙ２９９Ｗ，Ｙ２９９Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｋ３２０Ｈ，Ｋ３２０Ｒ，Ｓ３３４Ｔ，Ｓ３３９Ａ，Ｅ３６０Ｆ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３６５Ｃ，Ｖ３６６Ｉ，Ｋ３８３Ｑ，Ｋ３８３Ｒ，Ｓ３８４Ｅ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｑ３９４Ｋ，Ｙ３９８Ｗ，Ｎ４０２Ｙ，Ｙ４０４Ｗ，Ｅ４１６Ｌ，Ａ４３４Ｄ，Ｇ４６０Ｅ，Ｗ４６９Ｆ，Ｖ４７４ＣおよびＷ４８２Ｙを１つ以上含み、ここで、番号は、配列番号２に記載の前記アミノ酸配列に従う、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  13. 前記ポリペプチドが；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｅ３６０Ｆ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｖ４７４Ｃ，Ｇ４６０Ｅ，Ｔ８１Ｓ，Ｋ２６９Ｓ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ａ２７４Ｋ，Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ３８３Ｑ，Ｋ３２０Ｈ，Ｋ３２０Ｒ，Ｅ２７６Ｑ，Ｋ９３Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｑ９８Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｋ１１８Ｎ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ１４２Ｒ，Ｋ１４２Ｑ，Ｅ４１６Ｌ，Ｑ３９４Ｋ，Ｓ３８４Ｅ，Ｙ６４Ｗ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｆ２９５Ｙ，Ｙ２４３Ｍ，Ｙ１７８Ｗ，Ｋ２８１Ｈ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ａ４３４Ｄ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｎ１７４＊，Ｉ２３５Ｖ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｋ３７Ｖ，Ｋ３７Ｍ，Ｋ３７Ｌ，Ｙ２０３Ｈ，Ｓ４０Ｔ，Ｗ１８７Ｙ，Ｖ２３８Ｔ，Ｍ１０５Ｙ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｉ２０６Ｌ，Ｔ１８２Ｇ，Ｍ１１６Ｉ，Ｙ１３５Ｈ，Ｙ２０３Ｎ，Ｙ２０３Ｇ，Ｎ２５Ｋ，Ｍ１１６Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｆ２９５Ｙ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ２４２Ｐ，Ｖ２１４Ｒ，Ｍ２０８Ｆ，Ｙ１９８Ｆ，Ｗ４８２Ｙ，Ｖ２１４Ｔ，Ｖ２１４Ｉ，Ｍ２６１Ａ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ２０８Ｌ，Ｍ１１６Ａ，Ｎ１７４Ｑ，Ｎ１７４＊＋Ｎ１７５Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｍ１０５Ｌ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｗ４６９Ｆ，Ｙ２０３Ｆ，Ｇ１０９Ａ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｆ２９５Ｗ，Ｙ２９８Ｗ，Ｍ２０８Ｖ，Ｍ２０８Ｆ，Ｍ１０Ｌ＋Ｍ２６１Ｌ，Ｗ１８７Ｙ＋Ｍ２０８Ｌ，Ｙ２９８Ｆ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｈ，Ｗ１８９Ｈ，Ｆ２９５Ｙ，Ｉ２３５Ｍ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｆ２６７Ｙ，Ｋ３７Ｖ＋Ｐ４５Ｒ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２４３Ｆ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｗ４８Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｍ１１６Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ＋Ｗ４８２Ｙ，Ａ５１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ５４Ｓ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ａ５１Ｑ＋Ｇ１０９Ｍ＋Ｙ２０３Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ３９８Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｎ４０２Ｙ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｙ３９８Ｗ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｙ２９９Ｗ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ４７４Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２３５Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｅ４１６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｇ４６０Ｅ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｌ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１１３Ｅ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ２６９Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ２５５Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２５７Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２１４Ｉ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１２１Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｇ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５ＣもしくはＡ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔからなる群から選択される突然変異を有する配列番号２の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  14. 前記高い洗浄性能が、漂白剤を含む洗剤による４０℃で１０分間のＡＤＷアッセイにおいて前記ポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２の向上係数（ＩＦ）に相当する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  15. 前記ポリペプチドが、位置３７、５１、９３、９８、１０８、１１８、１６７、１８６、２０２、２１０、２３５、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５９、２６０、２６１、２７０、２９９、３１１、３１９、３３４、３３９、３６５、３８５、３９８および４０４に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項１４に記載のポリペプチド。
  16. 前記ポリペプチドが；Ｍ２６１Ｌ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｑ９８Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｈ，Ｓ２５５Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｓ３３９Ａ，Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９ＡおよびＷ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉからなる群から選択される突然変異を有する配列番号２の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項１４または１５に記載のポリペプチド。
  17. 前記高い洗浄性能が、漂白剤を含む洗剤による５０℃で２０分間のＡＤＷアッセイにおいて前記ポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２のＩＦに相当する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  18. 前記ポリペプチドが、位置３０、３３、３７、４０、４８、５１、８１、８６、９３、１０５、１０８、１１６、１１８、１３０、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１８２、１８６、１９５、１９８、２０２、２０６、２１０、２３５、２３８、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６６、２６７、２６９、２７０、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８５、４０２、４１６、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項１７に記載のポリペプチド。
  19. 前記ポリペプチドが；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｅ３６０Ｆ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｖ４７４Ｃ，Ｔ８１Ｓ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｑ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｒ，Ｋ１１８Ｑ，Ｋ１１８Ｎ，Ｅ１３０Ｈ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｑ３１１Ｔ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｉ２５０Ｌ，Ｉ２５０Ｖ，Ｋ３７Ｍ，Ｓ４０Ｔ，Ｖ２３８Ｔ，Ｍ１０５Ｆ，Ｍ１０５Ｉ，Ｉ２０６Ｌ，Ｔ１８２Ｇ，Ｍ１１６Ｉ，Ｍ１１６Ｌ，Ｎ１７４Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｋ３８３Ｒ＋Ｗ４８２Ｙ，Ａ５１Ｔ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｖ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５ＣおよびＡ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔからなる群から選択される突然変異を有する配列番号２の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項１７または１８に記載のポリペプチド。
  20. 前記高い洗浄性能が、漂白剤を伴わない洗剤による４０℃で１０分間のＡＤＷアッセイにおいて前記ポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２の向上係数（ＩＦ）に相当する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  21. 前記ポリペプチドが、位置３７、４８、５１、６４、８１、１０８、１１６、１６７、１７４、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０８、２１０、２３５、２３８、２４３、２４６、２５０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７５、３１１、３１９、３３４、３３９、３６５、３６６、３８５、４６０および４７４に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項２０に記載のポリペプチド。
  22. 前記ポリペプチドが；Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｍ２６１Ｌ，Ｈ２１０Ｎ，Ｙ２４３Ｆ，Ｋ１０８Ｒ，Ｇ４６０Ｅ，Ｔ８１Ｓ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｒ，Ｙ６４Ｗ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１８７Ｙ＋Ｍ２０８Ｌ，Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１８９Ｈ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９ＡおよびＷ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉからなる群から選択される突然変異を有する配列番号の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項２０または２１に記載のポリペプチド。
  23. 前記高い洗浄性能が、漂白剤を伴わない洗剤による５０℃で２０分間のＡＤＷアッセイにおいて前記ポリペプチドを評価した場合に、少なくとも１．２のＩＦに相当する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  24. 前記ポリペプチドが、位置３０、３３、３７、４０、４８、５１、８６、９３、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１８２、１８６、１９５、１９８、２０２、２０３、２１０、２１８、２３５、２３８、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６５、３６６、３８３、３８５、３９８、４０２、４１６、４０４、４６０、４７４ならびに４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項２３に記載のポリペプチド。
  25. 前記ポリペプチドが；Ｋ２６９Ｓ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ａ２７４Ｋ，Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３８５Ｈ，Ｋ３８５Ｒ，Ｋ９３Ｈ，Ｋ１１８Ｑ，Ｅ１３０Ｑ，Ｅ１３８Ｑ，Ｋ３７Ｒ，Ｄ３０Ｎ，Ｙ２４３Ｍ，Ｋ２６９Ｎ，Ｙ１９８Ｆ，Ｆ１９５Ｎ，Ｉ２５７Ａ，Ｓ２５５Ｋ，Ｒ２４７Ｋ，Ｙ４０４Ｗ，Ｙ３９８Ｗ，Ｑ３１９Ｈ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３１１Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｙ２９９Ｗ，Ｎ２６０Ｄ，Ｋ２５９Ｎ，Ｙ２９９Ｆ，Ｖ３６６Ｉ，Ｓ３６５Ｍ，Ｓ３３９Ａ，Ｎ１７４＊，Ｋ３７Ｌ，Ｓ４０Ｔ，Ｔ１８２Ｇ，Ａ２６５Ｇ，Ｗ４８２Ｙ，Ｍ１１６Ａ，Ｎ１７４Ｑ，Ｉ２３５Ｌ，Ａ２６５Ｇ，Ｋ３７Ｈ，Ｑ３１１Ｒ，Ｎ１７５Ｑ，Ｗ４８Ｆ，Ｍ１１６Ｖ，Ｍ１１６Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｙ２９９Ｆ，Ｗ１６７Ｙ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ３８３Ｒ，Ｄ３０Ｎ＋Ｎ３３Ｄ＋Ｋ３７Ｖ＋Ｗ４８Ｆ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ，Ｓ３３４Ｔ，Ｔ２４６Ｍ，Ｔ２４６Ｌ，Ｔ２４６Ｉ，Ａ１８６Ｇ，Ａ５１Ｑ＋Ｇ１０９Ｍ＋Ｙ２０３Ｇ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｉ２３５Ｌ＋Ｔ２４６Ｍ＋Ｉ２５０Ｌ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ１８６Ｄ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３９Ａ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１９Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｑ３１１Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ３９８Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ，Ｋ３７Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｅ４１６Ｌ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｎ４０２Ｙ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｄ３０Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｆ１９５Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１９Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｙ３９８Ｗ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｈ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｙ２９９Ｗ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｋ３２０Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｖ４７４Ｃ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｇ４６０Ｅ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２３５Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｍ２６１Ｌ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２７５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｍ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｅ４１６Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｎ４０２Ｙ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｖ４７４Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｇ４６０Ｅ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｌ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｑ８６Ｉ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１１３Ｅ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ９３Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｋ２６９Ｎ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｙ２４３Ｆ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２４７Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ２５５Ｋ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｉ２５７Ａ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２１４Ｉ＋Ｒ２１８Ｎ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｑ３１１Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｈ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｙ２９９Ｗ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３２０Ｒ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｋ３８３Ｑ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１４２Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３０Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１３８Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ａ５１Ｔ＋Ｅ１２１Ｈ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ，Ｋ３７Ｈ＋Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｋ３７Ｖ＋Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｎ１７４Ｑ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ａ２６５Ｇ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｆ２６７Ｙ＋Ｑ３１１Ｒ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５Ｌ，Ａ５１Ｔ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３６５Ｃ，Ａ５１Ｔ＋Ｋ１０８Ｒ＋Ｌ２０２Ｍ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｍ１１６Ｆ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｗ４８２Ｙ，Ｙ２４３Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｋ１１８Ｈ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ｗ４８Ｆ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｖ２３８Ａ＋Ｓ３３４Ｔ，Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３６５Ｃ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｗ４８Ｆ＋Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｓ３３９Ａ，Ｗ１６７Ｙ＋Ａ１８６Ｎ＋Ｈ２１０Ｎ＋Ｙ２９９Ｆ＋Ｓ３３９Ａ＋Ｖ３６６Ｉ，Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔ＋Ｓ３６５ＣおよびＡ１８６Ｎ＋Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｖ＋Ｎ２７０Ｇ＋Ｓ３３４Ｔからなる群から選択される突然変異を有する配列番号２の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項２３または２４に記載のポリペプチド。
  26. 前記ポリペプチドが、位置４８、１６７、２１０、２９９、３３９、３６６に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  27. 前記ポリペプチドが、Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉからなる群から選択される１つ以上の突然変異を有する配列番号２の前記アミノ酸配列、または、αアミラーゼ活性を有するその断片から構成される、請求項２６に記載のポリペプチド。
  28. 前記ポリペプチドが、以下：
    （ａ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１；
    （ｂ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
    （ｃ）突然変異Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
    （ｄ）突然変異Ｗ４８ＦおよびＷ１６７Ｙを有する配列番号１；
    （ｅ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０ＮおよびＳ３３９Ａを有する配列番号１；
    （ｆ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｗ１６７Ｙ、Ｈ２１０Ｎ、Ｙ２９９Ｆ、Ｓ３３９ＡおよびＶ３６６Ｉを有する配列番号１；
    （ｇ）突然変異Ｖ２３８Ａ、Ｓ３３４ＴおよびＷ４８２Ｙを有する配列番号１；
    （ｈ）突然変異Ｙ２４３ＦおよびＳ３３４Ｔを有する配列番号１；
    （ｉ）突然変異Ｗ４８Ｆを有する配列番号１；
    （ｊ）突然変異Ｋ１１８Ｈを有する配列番号１；
    （ｋ）突然変異Ｗ１６７Ｙを有する配列番号１；
    （ｌ）突然変異Ｗ４８Ｆ、Ｖ２３８ＡおよびＳ３３４Ｔを有する配列番号１；
    （ｍ）突然変異Ｉ２３４Ｌ、Ｔ２４６Ｍ、およびＩ２５０Ｌを有する配列番号１；
    （ｎ）突然変異Ｓ３３９Ａを有する配列番号１；および
    （ｏ）突然変異Ｓ３３４Ｔを有する配列番号１；
    から選択されるアミノ酸配列、ならびに、αアミラーゼ活性を有するその断片を含むか、または、これらから構成され、ここで、番号は配列番号２に従う、請求項２６または２７に記載のポリペプチド。
  29. 前記ポリペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列番号１に対する配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むか、または、これらから構成される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  30. 配列番号１に対する前記突然変異の数が、１〜２０、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０などの、１〜１０および１〜５の突然変異である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  31. 前記ポリペプチドが、表１中のポリペプチドの群から選択される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  32. 請求項１〜３１のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  33. 請求項３２に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。
  34. 請求項３２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
  35. 請求項３２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
  36. （ａ）前記ポリペプチドの発現に好適な条件下で請求項３５に記載の前記宿主細胞を培養するステップと；
    （ｂ）前記ポリペプチドを回収するステップと
    を含むα−アミラーゼポリペプチドを生成する方法。
  37. 前記ポリペプチドが、位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は、配列番号２に記載の前記アミノ酸配列に従う、請求項３６に記載の方法。
  38. 請求項１〜３１のいずれか一項に記載のポリペプチド、および、界面活性剤を含む洗剤組成物、または、これを形成するための濃縮物もしくは添加剤。
  39. 前記界面活性剤が、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤および両性界面活性剤からなる群から選択される、請求項３８に記載の組成物。
  40. 酸化剤、漂白活性化剤、キレート化剤、充填剤、ビルダー、緩衝剤、構造化剤、金属イオン封鎖剤、光学増白剤、消泡剤、酵素、芳香剤、再付着防止剤、皮膚コンディショニング剤、柔軟性増強剤、乳化剤および着色剤からなる群から選択される１種以上の追加のコンポーネントをさらに含む、請求項３８または３９に記載の組成物。
  41. 前記組成物が、液体または粉末ランドリー洗剤組成物である、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
  42. 前記組成物が、液体または粉末自動食器洗浄（ＡＤＷ）洗剤組成物である、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
  43. 前記組成物が、液体の手洗い用食器洗浄用洗剤組成物である、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
  44. 家庭用または工業用クリーニングプロセスにおける、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の変異体または請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  45. 例えばランドリーといった布のクリーニングに係る、請求項４４に記載の使用。
  46. 例えば食器洗浄といった、セラミック、塑性材料またはガラス材料のクリーニングに係る、請求項４４に記載の使用。
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