JP7405964B2 - アミラーゼを含む自動食器洗浄用洗剤組成物 - Google Patents
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Description
i)91位の変異、及び残基6、7、40、96、98、100、229、230、231、262、263、285、286、287、288、322、323、324、325、362、363、及び364として規定される、α-アミラーゼTIMバレル構造の基部におけるアミノ酸残基の1つ以上の変異、並びに/又は
ii)172位の変異、及び288位若しくは324位の変異、並びに/又は
iii)Y364L、からなる群から選択されるアミノ酸置換をむ。
2.好ましくは、91位の変異は、自然に存在する残基の正電荷残基への置換である。
3.好ましくは、91位の変異は、自然に存在する残基のアルギニンへの置換である(すなわち、X91R)。
4.好ましくは、α-アミラーゼTIMバレル構造の基部における少なくとも1つの変異が、X40N、X40D、X100F、X100L、X263Y、X288D、X288K、X288Q、X324R、X324N、X324M、X364L、及びX364Mからなる群から選択され、より好ましくはT40N、T40D、Y100F、Y100L、F263Y、S288D、S288K、S288Q、I324R、I324N、I324M、Y364L、及びY364Mからなる群から選択される、段落1~3のいずれかの変異体α-アミラーゼ。
5.好ましくは、α-アミラーゼ変異体は、91位にアルギニンと、自然発生のα-アミラーゼ中に存在しない、40位のN若しくはD、100位のF若しくはL、263位のY、288位のD、K、若しくはQ、324位のR、N、若しくはM、又は364位のL若しくはMの特徴のうちの少なくとも1つと、を含む。
6.好ましくは、段落1~5のいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を参照して、表面露出残基167、169、171、172、及び176を含むループ内の残基に変異を更に含み、より好ましくは、X167F、X169H、X171Y、X172R、X172N、及びX176Sからなる群から、より好ましくは、W167F、Q169H、R171Y、Q172R、Q172N、及びR176Sからなる群からものである。
7.好ましくは、段落1~6のいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を参照して、167位のF、169位のH、171位のY、172位のR若しくはN、又は176位のSを更に含む。
8.好ましくは、変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を参照して、172位の変異及び288位の変異、より好ましくは、配列番号1の番号を参照して、172位のアルギニン又はアスパラギン及び288位のアスパラギン酸を含む。
9.好ましくは、段落1~8のいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を参照して、116位及び/又は281位の変異、より好ましくは、配列番号1の番号を参照して、116位のアルギニン又は281位のセリンを更に含む。
10.好ましくは、段落1~9のいずれかのいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を参照して、190位及び/又は244位の変異、より好ましくは、配列番号1の番号を参照して、190位のプロリン及び/又は244位のアラニン、グルタミン酸、若しくはグルタミンを更に含む。
11.好ましくは、段落1~10のいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を使用して、R181、G182、T183、及びG184に相当する少なくとも2つの残基の欠失、より好ましくは、R181及びG182又は残基T183及びG184に相当する残基のペアワイズ欠失を更に含む。
12.好ましくは、変異体α-アミラーゼであって、配列番号1の番号を使用して、
(i)
(a)X40N-X91R-X169H-X183M-X281N、
(b)X172R-X190P-X288D、
(c)X172R-X244E-X288D-X474R、
(d)X91R-X172R-X190P-X324M、
(e)X40N-X91R-X190P-X263Y、
(f)X40N-X91R-X244E-X364L、
(g)X91R-X172R-X190P-X324R、
(h)X91R-X116R-X172R-X244E-X281S-X288D、
(i)X40N-X91R-X100F-X116R-X172N-X244Q-X281S、
(j)X40N-X91R-X172R-X244Q-X263Y-X281S、
(k)X91R-X172R-X190P-X324N、
(l)X40D-X91R-X172R-X190P-X281S-X324R、及び
(m)X364L、からなる群から選択される置換と、
(ii)
181及び182、並びに
183及び184、に相当する残基からなる群から選択される残基のペアワイズ欠失と、を含む、変異体α-アミラーゼ、が提供される。
13.好ましくは、段落12の変異体α-アミラーゼは、配列番号1の番号を使用して、
(i)
(a)T40N-S91R-Q169H-T183M-H281N、
(b)Q172R-E190P-S288D、
(c)Q172R-S244E-S288D-S474R、
(d)S91R-Q172R-E190P-I324M、
(e)T40N-S91R-E190P-F263Y、
(f)T40N-S91R-S244E-Y364L、
(g)S91R-Q172R-E190P-I324R、
(h)S91R-W116R-Q172R-S244E-H281S-S288D、
(i)T40N-S91R-Y100F-W116R-Q172N-S244Q-H281S、
(j)T40N-S91R-Q172R-S244Q-F263Y-H281S、
(k)S91R-Q172R-E190P-I324N、
(l)T40D-S91R-Q172R-E190P-H281S-I324R、及び
(m)Y364L、からなる群から選択される置換と、
(ii)
R181及びG182、並びに
T183及びG184、からなる群から選択される残基のペアワイズ欠失と、を含む。
14.好ましくは、変異体α-アミラーゼは、全ての場合において配列番号1の番号を使用して、(a)40位のD若しくはN及び/又は91位のR、並びに、(b)100位のF、263位のY、288位のD、324位のM、N、若しくはR、及び/又は364位のLのうちの3つ以上の特徴を、任意に(c)169位のH、183M位のM、281位のN若しくはS、172位のN若しくはR、190位のP、244位のE、Q、若しくはR、474位のR、116位のRと組み合わせて、任意に181位及び182位又は183位及び184位のペアワイズ欠失と組み合わせて含む。
15.好ましくは、段落1~14のいずれかの変異体α-アミラーゼは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4のアミノ酸配列に対して、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、又は少なくとも95%のアミノ酸配列同一性を有する。
S3V、S9R、A13V、A15T、G20*、L21F、I35V、N60D、V66A、N74D、S85N/R、S97SE、S97AD、S97D/G、S99G/M/D/E、S101A、V102E/I、G116V/R、S126F/L、P127Q、S128A、S154D、G157S、Y161A、R164S、A188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、N212D、M216S/F、A222V、Q239R/F、T249R、N255D及びL256E、N、Q、Dからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
(i)X039E、X074D、X099R、X126A、X127E、及びX128Gからなる群から選択される少なくとも1つ、2つ、若しくは3つのアミノ酸置換と組み合わせた、X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、X207Q、X211Q/N、及びX212Qからなる群から選択される少なくとも1つ若しくは2つのアミノ酸置換、又は
(ii)X039E-X074D-X099R-X116R-X126A-X127E-X128G-X211Q、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q、又は
(iii)X242D及びX256Eから選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を更に含む、(i)及び(ii)のプロテアーゼのうちのいずれか、又は
(iv)X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E、からなる群から選択される、少なくとも1つのアミノ酸置換を、含む。
本発明の組成物は、変異体α-アミラーゼを含み、変異体α-アミラーゼは、好ましくは、基準α-アミラーゼ(配列番号1~4のα-アミラーゼ)に対して規定の同一性パーセンテージを有する。
T40-S91-Q169-ΔR181-ΔG182-T183-H281
Q172-ΔR181-ΔG182-E190-S288
Q172-ΔR181-ΔG182-S244-S288-S474
S91-Q172-ΔR181-ΔG182-E190-I324
T40-S91-ΔR181-ΔG182-E190-F263
T40-S91-ΔR181-ΔG182-S244-Y364
S91-Q172-ΔR181-ΔG182-E190-I324
S91-W116-Q172-ΔR181-ΔG182-S244-H281-S288
T40-S91-Y100-W116-Q172-ΔR181-ΔG182-S244-H281
T40-S91-Q172-ΔR181-ΔG182-S244-F263-H281
S91-Q172-ΔR181-ΔG182-E190-I324
T40-S91-Q172-ΔR181-ΔG182-E190-H281-I324
Y364-ΔR181-ΔG182
X172-ΔR181-ΔG182-X190-X288
X172-ΔR181-ΔG182-X244-X288-X474
X91-X172-ΔR181-ΔG182-X190-X324
X40-X91-ΔR181-ΔG182-X190-X263
X40-X91-ΔR181-ΔG182-X244-X364
X91-X172-ΔR181-ΔG182-X190-X324
X91-X116-X172-ΔR181-ΔG182-X244-X281-X288
X40-X91-X100-X116-X172-ΔR181-ΔG182-X244-X281
X40-X91-X172-ΔR181-ΔG182-X244-X263-X281
X91-X172-ΔR181-ΔG182-X190-X324
X40-X91-X172-ΔR181-ΔG182-X190-X281-X324
X364L-ΔR181-ΔG182
T40N-S91R-Q169H-ΔR181-ΔG182-T183M-H281N
Q172R-ΔR181-ΔG182-E190P-S288D
Q172R-ΔR181-ΔG182-S244E-S288D-S474R
S91R-Q172R-ΔR181-ΔG182-E190P-I324M
T40N-S91R-ΔR181-ΔG182-E190P-F263Y
T40N-S91R-ΔR181-ΔG182-S244E-Y364L
S91R-Q172R-ΔR181-ΔG182-E190P-I324R
S91R-W116R-Q172R-ΔR181-ΔG182-S244E-H281S-S288D
T40N-S91R-Y100F-W116R-Q172N-ΔR181-ΔG182-S244Q-H281S
T40N-S91R-Q172R-ΔR181-ΔG182-S244Q-F263Y-H281S
S91R-Q172R-ΔR181-ΔG182-E190P-I324N
T40D-S91R-Q172R-ΔR181-ΔG182-E190P-H281S-I324R
Y364L-ΔR181-ΔG182
自動食器洗浄組成物は、任意の物理的形態であり得る。組成物は、ルース粉末であっても、ゲルであっても、又は単位用量形態で提示されてもよい。好ましくは、組成物は、単位用量形態であり、単位用量形態には、圧縮錠剤及び水溶性パックが含まれる。本発明の自動食器洗浄組成物は、好ましくは、単位用量形態で提示され、固体、液体、及びゲル形態を含む任意の物理的形態であり得る。本発明の組成物は、多区画型パックの形態、より具体的には、異なる物理的形態の組成物を有する区画、例えば固体形態の組成物を含む区画と液体形態の組成物を含む別の区画とを含む多区画型パックでの提示に非常によく適している。組成物は、好ましくは、ポリビニルアルコールなどの水溶性フィルムに封入される。100μm未満、好ましくは20~90μmの厚さのポリビニルアルコールフィルムに包まれた単位用量形態の組成物が特に好ましい。本発明の洗剤組成物は、約8~約25グラム、好ましくは約10~約20グラムの重量を有する。この重量範囲は、食器洗浄機のディスペンサーに余裕をもって収まる。この範囲は、洗剤としては少ない量に相当するものであるが、洗剤は、上記に述べたような利点の全てを提供するように配合されている。
本発明の目的のために、「錯化剤」とは、カルシウム、マグネシウム、鉛、銅、亜鉛、カドミウム、水銀、マンガン、鉄、アルミニウム、及び他のカチオン性多価イオンなどの多価イオンと結合して水溶性の錯体を形成することが可能な化合物のことである。錯化剤は、Ca2+に対する対数安定性定数([log K])が少なくとも3である。安定性定数、log Kは、温度25℃でイオン強度0.1の溶液中で測定される。
分散剤ポリマーは、組成物の約0.1~約20重量%、好ましくは0.2~約15重量%、より好ましくは0.3~重量%の任意の好適な量で使用され得る。
本明細書で言及されるカルシウム結合能は、Mettler Toledo SevenMulti(商標)ベンチトップメータ及びPerfectION(商標)comb Ca組み合わせ電極などのpH/イオンメータを使用して、滴定によって判定される。結合能を測定するために、ビーカー又はターゴトメータポットに好適な加熱撹拌デバイスを25℃に設定し、メータ付イオン電極を製造元の指示に従って較正する。電極較正の標準濃度は試験濃度をブラケティングし、25℃で測定しなければならない。脱イオン水1Lに3.67gのCaCl2-2H2Oを添加することによって、1000mg/gのCaの原液を調製し、次いで、希釈を行ってそれぞれ100mg/g、10mg/g、及び1mg/g濃度のカルシウムを含む、各々100mLの3つの作用液を調製する。100mgのCa/gの作用液を、25℃で行われる滴定中の初期濃度として使用する。各作用液のイオン強度は、2.5g/LのNaClを各々に添加することによって調節する。100mgのCa/gの作用液100mLを加熱し、25℃に達するまで撹拌する。カルシウムイオン濃度の初期読み取りは、イオン電極を使用して溶液が25℃に達したときに行う。次いで、試験ポリマーをカルシウム作用液に徐々に添加し(0.01g/L間隔で)、各増分の添加後に5分間撹拌した後に測定する。滴定は、溶液が1mg/gのカルシウムに達したときに停止する。残りの2つのカルシウム濃度の作用液を使用して、滴定手順を繰り返す。試験ポリマーの結合能は、添加された試験ポリマーのグラム/Lに対して測定されたカルシウム濃度の直線勾配として計算される。
本発明の組成物は、好ましくは、高レベルの漂白剤、好ましくは過炭酸塩を、漂白活性化剤又は漂白触媒又はその両方と組み合わせて含む、漂白剤系を含む。好ましくは、漂白活性化剤は、TAEDであり、漂白触媒は、マンガン漂白触媒である。
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の約10~約20重量%、より好ましくは約12~約18重量%の漂白剤、好ましくは過炭酸塩を含む。
漂白活性化剤は、典型的には、60℃以下の温度での洗浄の過程で漂白作用を強化する有機過酸前駆体である。本明細書での使用に好適な漂白活性化剤には、過加水分解条件下で、好ましくは1~12個の炭素原子、特に2~10個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキソカルボン酸(peroxoycarboxylic acid)、及び/又は任意に置換された過安息香酸を与える化合物が含まれる。好適な物質は、炭素原子の数が指定されているO-アシル基及び/若しくはN-アシル基並び/又は任意に置換されたベンゾイル基を有する。ポリアシル化アルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン(TAED)、アシル化トリアジン誘導体、特に1,5-ジアセチル-2,4-ジオキソヘキサヒドロ-1,3,5-トリアジン(DADHT)、アシル化グリコールウリル、特にテトラアセチルグリコールウリル(TAGU)、N-アシルイミド、特にN-ノナノイルスクシンイミド(NOSI)、アシル化フェノールスルホネート、特にn-ノナノイル-又はイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート(n-又はイソ-NOBS)、デカノイルオキシ安息香酸(DOBA)、無水カルボン酸、特に無水フタル酸、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、二酢酸エチレングリコール及び2,5-ジアセトキシ-2,5-ジヒドロフラン、並びにクエン酸トリエチルアセチル(TEAC)も好まれる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の0.01~5、好ましくは0.2~2重量%の漂白活性化剤、好ましくはTAEDを含む。
本明細書での組成物は、好ましくは、漂白触媒、好ましくは金属含有漂白触媒を含有する。より好ましくは、金属含有漂白触媒は、遷移金属含有漂白触媒、特にマンガン又はコバルト含有漂白触媒である。
本発明の組成物は、好ましくは、無機ビルダーを含む。好適な無機ビルダーは、炭酸塩、ケイ酸塩、及びそれらの混合物からなる群から選択される。炭酸ナトリウムが、本明細書での使用に特に好ましい。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の5~60重量%、より好ましくは10~50重量%、及び特に15~45重量%の炭酸ナトリウムを含む。
本明細書での使用に好適な界面活性剤には、非イオン性界面活性剤が含まれ、好ましくは、組成物は、いかなる他の界面活性剤も含まない。従来的には、非イオン性界面活性剤は、表面修飾目的、特に膜形成及び斑点形成を回避し、かつ光沢を改善するためのシート化を目的として、自動食器洗浄において使用されてきた。非イオン性界面活性剤は、汚れの再付着の防止にも寄与することができることが判明している。
R1O[CH2CH(CH3)O]x[CH2CH2O]y[CH2CH(OH)R2] (I)
式中、R1は、4~18個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素ラジカルであり、R2は、2~26個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素ラジカルであり、xは、0.5~1.5、より好ましくは約1の平均値を有する整数であり、yは、少なくとも15、より好ましくは少なくとも20の値を有する整数である。
プロテアーゼ
本発明の組成物は、1つ以上のプロテアーゼを含み得る。2つ以上のプロテアーゼの混合物は、特に再付着防止剤及び/又はスルホン化ポリマーとともに使用されるとき、より広い温度、サイクル継続時間、及び/又は基質範囲にわたって洗浄の増強に貢献することができ、優れた光沢利点を提供することができる。
(a)サブチリシン(EC 3.4.21.62)、特に国際公開第2004/067737号、同第2015/091989号、同第2015/091990号、同第2015/024739号、同第2015/143360号、米国特許第6,312,936(B1)号、同第5,679,630号、同第4,760,025号、独国特許公開第102006022216(A1)号、同第102006022224(A1)号、国際公開第2015/089447号、同第2015/089441号、同第2016/066756号、同第2016/066757号、同第2016/069557号、同第2016/069563号、同第2016/069569号に記載されている、Bacillus sp.、B.lentus、B.alkalophilus、B.subtilis、B.amyloliquefaciens、B.pumilus、B.gibsonii、及びB.akibaiiなどのBacillusに由来するもの。
(b)国際公開第89/06270号に記載されているFusariumプロテアーゼ、並びに国際公開第05/052161号及び同第05/052146号に記載されているCellumonasに由来するキモトリプシンプロテアーゼを含むトリプシン(例えば、ブタ又はウシ起源)などのトリプシン型又はキモトリプシン型プロテアーゼ。
(c)メタロプロテアーゼ、特に国際公開第07/044993(A2)号に記載されているBacillus amyloliquefaciensに由来するもの、国際公開第2014/194032号、同第2014/194054号、及び同第2014/194117号に記載されている、Bacillus、Brevibacillus、Thermoactinomyces、Geobacillus、Paenibacillus、Lysinibacillus、又はStreptomyces spp.由来のもの、国際公開第2015/193488号に記載されているKribella alluminosa由来のもの、並びに国際公開第2016/075078号に記載されているStreptomyces及びLysobacter由来のもの。
(d)国際公開第92/17577号(Novozymes A/S)に記載されているBacillus sp.TY145、NCIMB 40339由来のサブチラーゼに対して少なくとも90%の同一性を有するプロテアーゼ、国際公開第2015/024739号及び同第2016/066757号に記載されているこのBacillus sp TY145サブチラーゼの変異体を含む。
S3V、S9R、A13V、A15T、G20*、L21F、I35V、N60D、V66A、N74D、S85N/R、S97SE、S97AD、S97D/G、S99G/M/D/E、S101A、V102E/I、G116V/R、S126F/L、P127Q、S128A、S154D、G157S、Y161A、R164S、A188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、N212D、M216S/F、A222V、Q239R/F、T249R、N255D、及びL256E/N/Q/D
S9R+A13V+A15T+l35V+N60D+Q239F、又は
S9R+A15T+G20*+L21F+N60D+Q239N、又は
S9R+A15T+V66A+S97G+A222V+Q239R+N255D、又は
S9R+A15T+V66A+N74D+Q239R、又は
S9R+A15T+V66A+N212D+Q239R、又は
S99SE、又は
S99AD、又は
N74D+S85R+G116R+S126L+P127Q+S128A、又は
N74D+S85R+G116R+S126L+P127Q+S128A+S182D+V238R、又は
G116V+S126L+P127Q+S128A、又は
S99M+G116V+S126L+P127Q+S128A。
S039E、I43V、A47V、P54T、T56Y、N074D、L80V、N085R、E087D、S099R、N114Q、M117I、S126A、D127E、F128G/D/E、G160Q、R179Q、N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、R207Q、M211Q/N/L、N212Q/S、N242D、N253P、及びQ256E。
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L-N242D、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q256E、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q200L、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q200L-M211L、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q200L-Q256E、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q200L-N242D-Q256E、又は
S039E-N074D-N085R-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L-N212S、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126D-D127S-F128A-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-T114Q-S126G-D127T-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127A-F128C-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99E-T114Q-S126T-F128A-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126V-D127A-F128T-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99E-T114Q-D127E-F128G-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126T-D127E-F128A-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-T114Q-D127P-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126G-D127E-F128D-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126T-D127E-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127G-F128P-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127G-F128E-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126A-F128G-N242D、又は
A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q-N212Q、又は
S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q-N212Q、又は
S039E-N074D-S099R-N116R-S126A-D127E-F128G-M211Q-N242D-Q256E
(a)Blaze(登録商標)、Ultimase(登録商標)、Everlase(登録商標)、Savinase(登録商標)、Savinase Evity(登録商標)、Savinase Ultra(登録商標)、Excellase(登録商標)、Extremase(登録商標)、Ovozyme(登録商標)、Coronase(登録商標)Blaze Evity(登録商標)、及びBlaze Pro(登録商標)からなる群から選択される商用プロテアーゼ、
(b)上記で指定された配列番号5に対して少なくとも95%の同一性を有するプロテアーゼ、のうちの1つ以上である。
本発明の組成物は、追加のアミラーゼを含み得る。好適な追加のアルファ-アミラーゼには、細菌又は真菌起源のものが含まれる。化学的又は遺伝的に修飾された変異体(変異体)が含まれる。好ましいアルカリ性アルファ-アミラーゼは、Bacillusの菌種、例えば、Bacillus licheniformis、Bacillus amyloliquefaciens、Bacillus stearothermophilus、Bacillus subtilis、又は他のBacillus sp.、例えば、Bacillus sp.NCBI 12289、NCBI 12512、NCBI 12513、DSM 9375(米国特許第7,153,818号)DSM 12368、DSMZ番号12649、KSM AP1378(国際公開第97/00324号)、KSM K36、又はKSM K38(欧州特許第1,022,334号)に由来する。好ましいアミラーゼには、以下が含まれる。
(a)国際公開第96/23873号、同第00/60060号、同第06/002643号、及び同第2017/192657号に記載されている変異体、特に国際公開第06/002643号において配列番号12に列挙されているAA560酵素に対して以下の位置に1つ以上の置換を有する変異体、
26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、202、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484、好ましくは、D183*及びG184*の欠失も含有するもの。
(b)国際公開第06/002643号の配列番号4、Bacillus SP722由来の野生型酵素と少なくとも90%の同一性を示す変異体、特に183及び184位に欠失を有する変異体、並びに参照により本明細書に組み込まれる国際公開第00/60060号、同第2011/100410号、及び同第2013/003659号に記載されている変異体。
(c)Bacillus sp.707(米国特許第6,093,562号の配列番号7)由来の野生型酵素と少なくとも95%の同一性を示す変異体、特に変異M202、M208、S255、R172、及び/又はM261のうちの1つ以上を含むもの。好ましくは、当該アミラーゼは、M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N、及び/又はR172Qのうちの1つ以上を含む。M202L又はM202Tの変異を含むものが、特に好ましい。
(d)国際公開第09/149130号に記載されている変異体、好ましくは同第09/149130号の配列番号1又は配列番号2、Geobacillus Stearophermophilus由来の野生型酵素又はその切断版と少なくとも90%の同一性を示すもの。
(e)国際公開第2016/091688号の配列番号1と少なくとも89%の同一性を示す変異体、特にH183位+G184位での欠失並びに更に405、421、422、及び/又は428位に1つ以上の変異を含むもの。
(f)Paenibacillus curdlanolyticus YK9由来の「PcuAmyl α-アミラーゼ」(国際公開第2014/099523号の配列番号3)と少なくとも60%のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
(g)Cytophaga sp.由来の「CspAmy2アミラーゼ」(国際公開第2014/164777号)の配列番号1)と少なくとも60%のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
(h)Bacillus subtilis由来のAmyE(国際公開第2009/149271号の配列番号1)と少なくとも85%の同一性を示す変異体。
(i)受託番号AB051102を有するBacillus sp.KSM-K38由来の野生型アミラーゼと少なくとも90%の同一性を示す変異体。
(j)Bacillus sp由来のAAI10の成熟アミノ酸配列(国際公開第2016/180748号の配列番号7)と少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、好ましくは少なくとも98%の同一性を示す変異体。
(k)Alicyclobacillus sp.アミラーゼの成熟アミノ酸配列(国際公開第2016/180748号の配列番号8)と少なくとも80%の同一性を示す変異体
結晶成長抑制剤は、炭酸カルシウム結晶に結合して、アラゴナイト及び方解石などの種の更なる成長を防止することができる材料である。
金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼、並びに銀及び銅などの非鉄金属を含む金属の曇り、腐食、又は酸化を、防止又は低減し得る。好ましくは、本発明の組成物は、製品の0.1~5重量%、より好ましくは0.2~4重量%、及び特に0.3~3重量%の金属ケア剤を含み、好ましくは、金属ケア剤はベンゾトリアゾール(BTA)である。
ガラスケア剤は、食器洗浄プロセス中にガラス製品の外観を保護する。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の0.1~5重量%、より好ましくは0.2~4重量%、及び特に0.3~3重量%の金属ケア剤を含み、好ましくは、ガラスケア剤は亜鉛含有材料、特に水亜鉛土である。他の好適なガラスケア剤は、ポリエチレンイミン(PEI)である。特に好ましいPEIは、BASFにより供給されるLupasol(登録商標)FGである。
i)組成物の10~20重量%の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム、
ii)TAED、
iii)任意であるが好ましくは組成物の5~50重量%の無機ビルダー、好ましくは炭酸ナトリウム、
iv)任意であるが好ましくは組成物の2重量%~10重量%の非イオン性界面活性剤、
v)他の任意選択の成分としては、結晶成長抑制剤、好ましくはHEDP、及びガラスケア剤が含まれる。
i)組成物の10~20重量%の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム、
ii)マンガン漂白触媒、好ましくは、1,4,7-トリメチル-1,4,7-トリアザシクロノナン(Me-TACN)及び1,2,4,7-テトラメチル-1,4,7-トリアザシクロノナン(Me/Me-TACN)、並びに任意にTAEDからなる群から選択される漂白触媒、
iii)任意ではあるが好ましくは組成物の5~50重量%の炭酸ナトリウム、
iv)任意ではあるが好ましくは1~10重量%のケイ酸ナトリウム、
v)任意ではあるが好ましくは組成物の2~10重量%の非イオン性界面活性剤、
vi)任意ではあるが好ましくはガラスケア剤。
タンパク質発現、精製、及び定量:
ΔR181及びΔG182におけるAA2560コンビナトリアル変異体(すなわち、ΔRG)バックグラウンドを合成遺伝子として作製し、標準的な手順を使用して好適なBacillus licheniformis細胞に導入した。全ての変異を、DNA配列決定によって確認した。細胞を、B.licheniformis宿主におけるタンパク質発現及び分泌に好適な培地中で72時間増殖させた。分泌タンパク質を遠心分離によって採取した。フェニルセファロース6高速流量樹脂(GE Healthcare)を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用によって、精製を達成した。精製されたタンパク質を、pH8の緩衝剤、塩化カルシウム、及びプロピレングリコールとしてHEPESを含有する標準的な配合物緩衝液中で安定化させた。タンパク質濃度を、アミノ酸分析、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、及び280nmでの吸光度の混合によって決定した。
α-アミラーゼの活性を、洗剤バックグラウンド中で白色メラミンタイルから染色されたデンプンの染みを除去することによって決定した。Center for Testmaterials(カタログ番号DM277及びDM71)から購入した、混合コーン/米着色デンプンのタイル及び食品着色剤を含む混合コーン/米デンプンのタイルをそれぞれ使用して、α-アミラーゼの洗浄活性を決定した。タイルを、水性緩衝液中の作用範囲に希釈したアミラーゼ溶液を含有する96ウェルプレートに固定し、WFKB洗剤の予備作製洗剤溶液(WFK Testgewebe GmbH,Bruggen,Deutschland)に添加し、その結果、総体積は300μLになった。次いで、着色されたデンプンの染みを有する事前に画像化されたメラミンタイルを96ウェルプレートの上部に固定し、その結果、アセンブリの撹拌は、デンプンの染みの表面上への酵素含有洗剤の飛散をもたらした。洗浄反応を250rpmで振とうしながら50℃で15分間行った。洗浄反応後、メラミンタイルを水で短時間すすぎ、乾燥させ、再び画像化した。α-アミラーゼの活性を、洗浄前及び洗浄後の画像のRGB(色)値の差として計算する。洗浄後の画像が白ければ白いほど、酵素活性が良好である。性能指数(PI)を以下のように計算する。
野生型変異体に対する性能指数に関する変異体の洗浄性能を表3に列挙する。多数の変異体を試験した。少なくとも1つの染みに対してPI>1のものについてのデータのみが示されている。DM277は染み1と指定され、DM71は染み2)と指定されている。
自動食器洗浄におけるアミラーゼ洗浄性能
表1:自動食器洗浄用(Automatic Dish Washing、ADW)組成物
以下のADW組成物は、酵素を含有しない。
Novozymesにより供給されるStainzyme(登録商標)Plus
アミラーゼAは、本明細書では、181位~182位で以下の2つの欠失を有し、かつ以下の置換を含むAA2560配列番号1と称される、Bacillus sp.由来の野生型の本発明の変異体である:T40N-S91R-Y100F-W116R-Q172N-S244Q-H281S。
アミラーゼBは、本明細書では、181位~182位で以下の2つの欠失を有し、かつ以下の置換を含むAA2560配列番号1と称される、Bacillus sp.由来の野生型の本発明の変異体である:T40N-S91R-Q172R-S244Q-F263Y-H281S。
アミラーゼCは、本明細書では、181位~182位で以下の2つの欠失を有し、かつ以下の置換を含むAA2560配列番号1と称される、Bacillus sp.由来の野生型の本発明の変異体である:Y364L。
表1及び2に記載されるADW組成物の自動食器洗浄(ADW)の洗浄性能を、Center For Testmaterials BV.(Stoomloggerweg 11,3133 KT Vlaardingen,the Netherlands)により供給された混合デンプンタイル(DM71、DM376、DM377、DM378)に対する洗浄性能によって測定し、評価した。表2に記載の1回用量の洗剤組成物17.32g(固体及び液体を合わせた成分)及び酵素添加量を、各サイクルのディスペンサー引き出しの開口部において各自動食器洗浄機に添加した。
Claims (20)
- 変異体α-アミラーゼを含む自動食器洗浄組成物であって、前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、
i)91位の負電荷残基への置換、及び残基40、100、及び229から選択されるアミノ酸残基の1つ以上の変異、
ii)172位の変異、及び288位若しくは324位の変異、並びに/又は
iii)Y364L、からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、
前記変異体α-アミラーゼが、R181、G182、T183、及びG184に相当する少なくとも2つの残基の欠失を更に含む、
自動食器洗浄組成物。 - 91位の負電荷残基への前記置換が、X91Rである、請求項1に記載の組成物。
- 選択肢i)が適用され、前記変異体α-アミラーゼが、X40N、及びX100Fからなる群から選択される1つ以上の変異を含む、請求項1又は2に記載の組成物。
- 選択肢i)が適用され、前記変異体α-アミラーゼが、T40N、及びY100Fからなる群から選択される1つ以上の変異を含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、Q172Nの変異を含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、172位の変異及び288位の変異を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、116位及び281位の変異を更に含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、116位のアルギニン及び281位のセリンを含む、請求項7に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、244位の変異を更に含む、請求項1~8のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、244位のグルタミンを含む、請求項9に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を参照して、R181及びG182又は残基T183及びG184に相当する残基のペアワイズ欠失を含む、請求項1~10のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を使用して、
(i)
(a)X40N-X91R-X169H-X183M-X281N、
(b)X172R-X190P-X288D、
(c)X172R-X244E-X288D-X474R、
(d)X91R-X172R-X190P-X324M、
(e)X40N-X91R-X190P-X263Y、
(f)X40N-X91R-X244E-X364L、
(g)X91R-X172R-X190P-X324R、
(h)X91R-X116R-X172R-X244E-X281S-X288D、
(i)X40N-X91R-X100F-X116R-X172N-X244Q-X281S、
(j)X40N-X91R-X172R-X244Q-X263Y-X281S、
(k)X91R-X172R-X190P-X324N、
(l)X40D-X91R-X172R-X190P-X281S-X324R、及び
(m)Y364L、からなる群から選択される置換と、
(ii)
181及び182、並びに
183及び184、に相当する残基からなる群から選択される残基のペアワイズ欠失と、を含む、請求項1に記載の組成物。 - 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1の番号を使用して、
(i)
(a)T40N-S91R-Q169H-T183M-H281N、
(b)Q172R-E190P-S288D、
(c)Q172R-S244E-S288D-S474R、
(d)S91R-Q172R-E190P-I324M、
(e)T40N-S91R-E190P-F263Y、
(f)T40N-S91R-S244E-Y364L、
(g)S91R-Q172R-E190P-I324R、
(h)S91R-W116R-Q172R-S244E-H281S-S288D、
(i)T40N-S91R-Y100F-W116R-Q172N-S244Q-H281S、
(j)T40N-S91R-Q172R-S244Q-F263Y-H281S、
(k)S91R-Q172R-E190P-I324N、
(l)T40D-S91R-Q172R-E190P-H281S-I324R、及び
(m)Y364L、からなる群から選択される置換の組み合わせと、
(ii)
R181及びG182からなる残基のペアワイズ欠失と、を含む、請求項12に記載の組成物。 - 前記変異体α-アミラーゼが、全ての場合において配列番号1の番号を使用して、
(a)40位のN及び91位のR、
(b)100位のF、
(c)281位のS、244位のQ、及び116位のR、並びに
181位及び182位のペアワイズ欠失を含む、請求項1に記載の組成物。 - 前記変異体α-アミラーゼが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4のアミノ酸配列に対して、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、又は少なくとも95%のアミノ酸配列同一性を有する、請求項1~14のいずれか一項に記載の組成物。
- プロテアーゼを更に含み、前記プロテアーゼが、配列番号5のアミノ酸配列又は配列番号6のアミノ酸配列と、少なくとも80%の同一性を有し、前記プロテアーゼが、
少なくとも1つのアミノ酸置換であって、配列番号6の番号を使用して、
(i)X039E、X074D、X099R、X126A、X127E、及びX128Gからなる群から選択される少なくとも3つのアミノ酸置換と組み合わせた、X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、X207Q、X211Q/N、及びX212Q、又は
(ii)X039E-X074D-X099R-X116R-X126A-X127E-X128G-X211Q、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q、
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q、又は
(iii)X242D及びX256Eから選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を更に含む、(i)及び(ii)の前記プロテアーゼのうちのいずれか、又は
(iv)X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E、からなる群から選択される、少なくとも1つのアミノ酸置換からなる群から選択される、アミノ酸置換を含む、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。 - プロテアーゼを更に含み、前記プロテアーゼが、配列番号6のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有し、前記プロテアーゼが、
S3V、S9R、A13V、A15T、G20*、L21F、I35V、N60D、V66A、N74D、S85N/R、S97SE、S97AD、S97D/G、S99G/M/D/E、S101A、V102E/I、G116V/R、S126F/L、P127Q、S128A、S154D、G157S、Y161A、R164S、A188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、N212D、M216S/F、A222V、Q239R/F、T249R、N255D、及びL256E、N、Q、D、からなる群から選択される、1つ以上、又は2つ以上、又は3つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項1~16のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記組成物の10重量%~50重量%の有機錯化剤系を含み、任意に、漂白剤系が、前記組成物の10重量%超の漂白剤及び漂白活性化剤及び/又は漂白触媒を含む、請求項1~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 漂白触媒を含み、前記漂白触媒が、1,4,7-トリメチル-1,4,7-トリアザシクロノナン(Me-TACN)、1,2,4,7-テトラメチル-1,4,7-トリアザシクロノナン(Me/Me-TACN)、及びそれらの混合物からなる群から選択されるマンガン漂白触媒である、請求項1~18のいずれか一項に記載の組成物。
- 汚れた食器を食器洗浄機において洗浄する方法であって、
i)前記汚れた食器を提供する工程と、
ii)少なくとも40℃の温度で15分間を超えて続く主洗浄サイクルを有する長時間の高温プログラムを使用する工程と、
iii)請求項1~19のいずれか一項に記載の洗浄組成物で前記食器を処理する工程と、
iv)任意に、前記食器をすすぐ工程と、を含む、方法。
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