JP2018524321A - 酵素開裂性基を有する抗体薬物複合体（ａｄｃ）および抗体プロドラッグ複合体（ａｐｄｃ） - Google Patents

酵素開裂性基を有する抗体薬物複合体（ａｄｃ）および抗体プロドラッグ複合体（ａｐｄｃ） Download PDF

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Abstract

本発明は、抗体がキネシンスピンドルタンパク質阻害剤の不活性前駆体化合物を結合している新規な抗体プロドラッグ複合体（ＡＤＣ）、ならびに抗体薬物複合体（ＡＤＣ）および当該ＡＰＤＣもしくはＡＤＣの製造方法に関するものである。
【選択図】図３

Description

緒言および最新技術
本発明は、バインダーがキネシン紡錘体タンパク質阻害剤の不活性前駆体化合物と複合体化している新規なバインダー−プロドラッグ複合体（ＡＤＣ類）、ならびにバインダー−薬物複合体ＡＤＣ、これらのバインダー−プロドラッグ複合体およびバインダー−薬物複合体の活性代謝物、これらのＡＰＤＣ類およびＡＤＣ類の製造方法、疾患の治療および／または予防のためのこれら複合体の使用、および疾患、特に過剰増殖性および／または血管新生障害、例えば癌疾患の治療および／または予防のための医薬を製造するためのこれら複合体の使用に関する。そのような治療は、単独療法として、または他の医薬もしくはさらなる治療手段と組み合わせて行うことができる。本発明によれば、バインダーは好ましくは、抗体である。
癌は、最も多様な組織の制御されない細胞増殖の結果である。多くの場合、新たな細胞が既存の組織に侵入し（浸潤性増殖）、またはそれらは離れた臓器に転移する。癌は、非常に多様な異なる臓器で生じ、多くの場合、組織特異的経過を辿る。従って、一般名称として「癌」という用語は、各種臓器、組織および細胞型の所定の疾患の大きい群を説明するものである。
早期の一部腫瘍は、外科手段および放射線療法手段によって摘出することができる。転移腫瘍は基本的に、化学療法によって対症的に治療可能なだけである。この場合の目的は、生活の質の向上および寿命延長の至適な組み合わせを達成することにある。
バインダータンパク質の１以上の薬物分子との複合体は、特に腫瘍関連抗原に向かうインターナライジング抗体がリンカーを介して細胞毒性薬に共有結合的に結合している抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の形態で知られている。腫瘍細胞へのＡＤＣの導入と次に複合体の解離に続いて、細胞毒性薬自体またはそれから形成される細胞毒性代謝物が腫瘍細胞内で放出され、直接および選択的にそれの作用を発揮することができる。このようにして、従来の化学療法と対照的に、正常組織への損傷は、かなり狭い範囲に抑えられる［例えば、Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５）； Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５）； Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． １３， ２３５−２４４ （２００９）； Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．参照］。従って、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、複数の担毒体分子が高分子リンカーを介して抗体に結合しているＡＤＣが記載されている。可能な担毒体として、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、特に、物質ＳＢ７４３９２１、ＳＢ７１５９９２（イスピネシブ）、ＭＫ−０３７１、ＡＺＤ８４７７、ＡＺ３１４６およびＡＲＲＹ−５２０が挙げられている。
ＷＯ２０１２／１７１０２０
Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５） Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５） Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． １３， ２３５−２４４ （２００９） Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．
最後に挙げた物質は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤である。キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ、Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１またはＫＩＦ１１とも称される）は、双極性有糸分裂紡錘体が機能するのに必須のキネシン様モータータンパク質である。ＫＳＰの阻害によって有糸分裂停止となり、比較的長期間かけてアポトーシスに至る（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２００５ Ｊｕｌ ８（１）， ３９−５９）。最初の細胞透過性ＫＳＰ阻害剤であるモナストロール発見後、ＫＳＰ阻害剤は新たな化学療法剤の種類として確立され（Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９７１−９７４， １９９９）、多くの特許出願のテーマとなっている（例えばＷＯ２００６／０４４８２５；ＷＯ２００６／００２２３６；ＷＯ２００５／０５１９２２；ＷＯ２００６／０６０７３７；ＷＯ０３／０６００６４；ＷＯ０３／０４０９７９；およびＷＯ０３／０４９５２７）。しかしながら、ＫＳＰは、有糸分裂期の比較的短期間中にのみ活性であることから、ＫＳＰ阻害剤は、この相中に十分に高い濃度で存在していなければならない。ＷＯ２０１４／１５１０３０には、ある種のＫＳＰ阻害剤を含むＡＤＣが開示されている。
レグマインは、腫瘍関連のアスパラギニルエンドペプチダーゼであり（Ｓ． Ｉｓｈｉｉ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １９９４， ２４４， ６０４； Ｊ． Ｍ． Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９７， ２７２， ８０９０）であり、細胞傷害性小分子、例えば特にドキソルビシンおよびエトポシド誘導体のプロドラッグの処理に利用されている（Ｗ． Ｗｕ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００６， ６６， ９７０； Ｌ．Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００９， ２０， ５００；Ｋ． Ｍ． Ｂａｊｊｕｒｉ ｅｔ ａｌ． ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ ２０１１， ６， ５４）。
他のリソソーム酵素は、例えば、カテプシンまたはグリコシダーゼ類、例えばβ−グルクロニダーゼ類であり、それらもプロドラッグの酵素的開裂による有効成分の放出に利用されてきた。イン・ビボで酵素的に開裂可能な基は、特別には２から８−オリゴペプチド基またはグリコシド類である。ペプチド開裂部位は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００２、１３、８５５−８６９およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８ （１９９８）３３４１−３３４６、さらにはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９９８， ９， ６１８−６２６に開示されている。これらには、例えば、バリン−アラニン、バリン−リジン、バリン−シトルリン、アラニン−リジンおよびフェニルアラニン−リジン（適宜に別のアミド基と）などがある。
ＡＤＣ類およびそれの代謝物の腫瘍選択性をさらに高めるため、バインダー複合体に、レグマインまたはカテプシンなどの腫瘍関連酵素によって放出され得るペプチド誘導体が提供されている。従って、腫瘍選択性は、抗体の選択によってだけでなく、ペプチド誘導体の酵素的開裂によっても、例えば腫瘍関連酵素レグマインによっても確認される。
本発明によれば、ペプチド誘導体は、バインダーをＫＳＰ阻害剤につなぐリンカーに存在し得る。これらは、本発明によるバインダー−薬物複合体（ＡＤＣ類）である。
本発明に従って使用されるキネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、その効果に必須であるアミノ基を有する。このアミノ基をペプチド誘導体で修飾することで、キネシン紡錘体タンパク質に関する効果が遮断され、従って、細胞傷害効果の発症も阻害される。しかしながら、このペプチド残基がレグマインなどの腫瘍関連酵素によって放出可能である場合、その効果は、腫瘍組織で制御された形で再確立され得る。この場合のアミノ基の修飾は、リンカーの一部ではない。従って、本発明は、腫瘍関連リソソームエンドペプチダーゼレグマインによってのみ腫瘍で処理されて活性代謝物を与えることで、腫瘍においてやはり制御された形で細胞傷害活性を示すことができる、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤の不活性前駆体分子を有するバインダー複合体に関するものである。遊離アミノ基が相応に遮断されているＫＳＰ阻害剤とのバインダー複合体は、本発明に従って、ＡＰＤＣとも称される。ＡＰＤＣ類が特に好ましい。
従って、本発明は、下記式Ｉのバインダーもしくはそれの誘導体の１以上の薬物分子もしくはそれの１以上のプロドラッグとの複合体、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーを提供する。
Figure 2018524321
式中、ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体（好ましくは抗体）を表し、Ｌはリンカーを表し、ｎは１から５０、好ましくは１．２から２０、より好ましくは２から８の数字を表し、ＫＳＰはキネシン紡錘体タンパク質阻害剤もしくはそれのプロドラッグを表し、Ｌ−ＫＳＰは下記式（ＩＩａ）：
Figure 2018524321
を有し、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２、または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）、または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し；Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５は−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５は−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
または、Ｒ４は式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−もしくはＲ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン−開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸（従って、複数のＰ３が存在する場合、Ｐ３は異なる意味を有することができる。）から選択されるアミノ酸であり；
またはＲ２およびＲ４が一緒に、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し（ピロリジン環を形成）、Ｒ１０はＨ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン（特別にはＦまたはＣｌ）、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−ハロアルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ１−４−アルキル）、−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−ＣＯ−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く、ＳＩＧはＣＯ−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、または置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、
それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ、１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、ｎは０、１または２を表し、Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８のうちの一つは、−Ｌ−＃１を表すか、（Ｒ８の場合）含み、
−Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０はＨ、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐のヒドロカルビル基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−、（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−（ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ２）、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）基の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、存在する場合に側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し；
−ＭＯＤ基は好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有し；
下記の条件（ｉ）から（ｉｉｉ）のうちの１以上が満足され、
（ｉ）−Ｌ−＃１が、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−の基を含み、
Ｘは−ＮＨ２または−ＣＯＯＨ、好ましくは−ＮＨ２を表し；Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
（ｉｉ）Ｒ４が、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、およびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
（ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ４が一緒に、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し（ピロリジン環を形成）、ピロリジン環の２級アミノ基の２級水素原子がＲ２１−ＣＯ−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−ＳＩＧ−によって置き換わっており、ＳＩＧはＣＯ−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表す。
本発明によるＡＤＣ類において、−Ｌ−＃１−は、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−の基を含むかその基である。特に好ましいものは、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基であり、従ってそれは実験の部に記載のレグマインアッセイで開裂可能であることが認められている。より好ましくは、Ｒ１、Ｒ３またはＲ４置換基のうちの一つが−Ｌ−＃１である。Ｒ４が−Ｌ−＃１を表す場合、アスパラギンまたはアスパラギン酸のカルボニル基が上記式でＲ４に結合している窒素原子に直接結合している。
本発明によるＡＰＤＣ類において、Ｒ４はＲ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基であるか、ピロリジン環におけるＮＨの水素原子がＲ２１−ＣＯ−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−ＳＩＧ−によって置き換わっている。
Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−およびＲ２１−ＣＯ−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−ＳＩＧ−基は、恐らくはレグマイン酵素によってイン・ビボで開裂される。従って、これらの基は、以下において、「レグマイン−開裂性基」とも称される。レグマイン−開裂性基は、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＸ）−ＣＯ−を有する。本発明によるＡＰＤＣ類において、その基は好ましくは、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−＃を有し、それは、レグマイン−開裂性基が一端にＲ２１基を有し、他端で（−＃）、それが式ＩＩａにおける位置Ｒ４に相当するアミノ基に結合していることを意味する。
この場合、ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−（すなわち、アスパラギンまたはアスパラギン酸）は、天然のＬ配置で存在する。特に好ましいものは、実験の部に記載のレグマインアッセイで開裂可能であることが認められている基である。本発明によるＡＰＤＣ類は、レグマイン−またはカテプシン−開裂性Ｒ４基に加えて、レグマイン−またはカテプシン−開裂性基を有するリンカー−Ｌ−＃１を有することができる。
レグマイン−開裂性基における−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−はアスパラギンであり；レグマイン−開裂性基における−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−ＣＯ−はアスパラギン酸である。ここで、アスパラギンおよびアスパラギン酸は、それぞれＬ（−）−アスパラギンおよびＬ−アスパラギン酸として存在する。レグマイン−開裂性基は、アスパラギンまたはアスパラギン酸だけでなく、１から３個の別のアミノ酸（すなわち、アスパラギンの場合、−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−；−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ；−（Ｐ３）（２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−）を有し、従ってジ−、トリ−またはテトラペプチドまたはそれの誘導体（ジペプチド：−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−；トリペプチド：−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ；テトラペプチド：−（Ｐ３）２−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−（二つのアミノ酸Ｐ３は異なっていても良い）を有する。
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり、好ましくはＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、シトルリンおよびＡｓｎから選択される。Ｐ２は通常は、天然のＬ配置である。特に好ましいものは、Ｌ−Ａｌａである。
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、または個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である。Ｐ３は好ましくは、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、シトルリンおよびＧｌｎから選択される。Ｐ３は通常は天然のＬ配置である。特に好ましいものは、Ｌ−Ａｌａである。複数のアミノ酸Ｐ３が存在する場合、これらのアミノ酸は、上記の定義の範囲内で異なっていても良い。
より好ましくは、レグマイン−開裂性基は−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−である（すなわち、ＡＰＤＣ類の場合、Ｒ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−＃）。
Ｒ２１は好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−５−アルキル−、Ｃ５−１０−アラルキル−、Ｃ１−５−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ基、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシまたはＣ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、そのそれぞれは−−ＣＯＯＨ、ＣＯＯアルキル、ＣＯＯＮＨ２、ＮＨ２またはＮ（アルキル）２、または−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２である。）によって置換されていても良い。「アルキル」はここで、２０個以下の炭素原子を有するアルキル基を指し、好ましくはＣ１−１２−アルキルである。
カテプシン−開裂性基は式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を有する。本発明によるＡＰＤＣ類において、その基は式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−＃を有し、それは、カテプシン−開裂性基が一端にＲ２１基を有し、他端で（−＃）、それが式ＩＩａにおける位置Ｒ４に相当するアミノ基に結合していることを意味する。この場合、Ｒ２１、Ｐ２およびＰ３はレグマイン−開裂性基について定義の通りである。式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−−＃の基がカテプシンによって開裂可能であるか否かは、実験の部に記載のカテプシンアッセイに基づいて決定することができる。特に好ましいカテプシン−開裂性基は、Ｐ２がアラニン、リジンおよびシトルリンから選択され、Ｐ３がバリン、アラニンおよびフェニルアラニンから選択されるものであり、特別には式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−Ｐ３−Ｐ２−のものである。
図１は、各種生物種のＴＷＥＡＫＲシステイン豊富ドメイン（アミノ酸３４から６８）の配列（数字は、シグナル配列；配列番号１６９を含む全長構築物におけるアミノ酸位置を示す。）。
図２Ａは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の構造の模式図である。その図は、システイン豊富ドメイン（３６から６７）を含む細胞外ドメイン（アミノ酸２８から８０）（配列番号１６８）、膜貫通ドメイン−ＴＭ（８１から１０１）および細胞内ドメイン（１０２から１２９）を示している。ＴＰＰ−２２０２−完全細胞外ドメイン（２８から８０）は、ｈＩｇＧ１のＦｃドメインに融合している。ＴＰＰ−２２０３−Ｎ末端およびＣ末端切断（３４から６８）のある細胞外ドメインは、ｈＩｇＧ１のＦｃドメインに融合している。ジスルフィド架橋Ｃｙｓ３６−Ｃｙｓ４９、Ｃｙｓ５２−Ｃｙｓ６７およびＣｙｓ５５−Ｃｙｓ６４は、黒色棒線で示されている。ＴＰＰ−２２０３は、純粋なシステイン豊富ドメインと比較して、Ｎ末端でアミノ酸を２個多く、そしてＣ末端でアミノ酸を１個多く受けることで、妥当な折り畳みが確保されている。ＴＰＰ−１９８４−Ｃ末端切断を有する細胞外ドメイン（２８から６８）は、ＨＩＳ６標識に融合している。３種類全ての構築物は、本発明による抗体およびＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）に対して同等の結合を示す。Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）は、全長細胞外ドメイン（ＴＰＰ−２２０２）にのみ結合する。
図２Ｂは、細胞外ドメインのアミノ酸配列であり：アミノ酸６４がＴＷＥＡＫリガンド結合に必須であり；およびアミノ酸４７が、本明細書で確認されているように本発明による抗体の結合に必須であることが公開されている。
図３は、脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合部位特異的官能化の模式図である。
図４は、Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４， ２７３５によるヒストンデアセチラーゼおよびカテプシンＬによる薬物放出のための連続酵素段階の図である。
各種生物種のＴＷＥＡＫＲシステイン豊富ドメイン（アミノ酸３４から６８）の配列（数字は、シグナル配列；配列番号１６９を含む全長構築物におけるアミノ酸位置を示す。）である。 ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の構造の模式図である。 細胞外ドメインのアミノ酸配列である。 脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合部位特異的官能化の模式図である。 Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４， ２７３５によるヒストンデアセチラーゼおよびカテプシンＬによる薬物放出のための連続酵素段階の図である。
本発明は、バインダーもしくはそれの誘導体と１以上の薬物分子もしくはそれのプロドラッグとの複合体であって、当該薬物分子がキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）である複合体を提供する。
以下、本発明に従って使用可能なバインダー、本発明に従って使用可能なＫＳＰ阻害剤またはそれのプロドラッグ、および本発明に従って使用可能なリンカー（これらは制限なく組み合わせて用いることができる。）について説明する。詳細には、各場合で好ましいまたは特に好ましいと記載されているバインダーを、各場合で好ましいまたは特に好ましいと記載されているＫＳＰ阻害剤またはプロドラッグと組み合わせて、適宜に各場合で好ましいまたは特に好ましいと記載されているリンカーと組み合わせて使用することが可能である。
ＫＳＰ阻害剤およびそれのバインダー複合体
本発明によれば、式ＩにおけるＫＳＰ−Ｌは、下記式（ＩＩａ）を有し、そしてそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ２、ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５は−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５は−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
または、Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−またはＲ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い。）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
またはＲ２およびＲ４が一緒に、（ピロリジン環を形成）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０はＨ、ＮＨ２、ＳＯ３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特別にはＦまたはＣｌ）、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−ハロアルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ１−４−アルキル）、ＯＨまたはＲ２１−ＣＯ−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−ＳＩＧ−を表し、ＳＩＧはＣＯ−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、または置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、
それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ、１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、ｎは０、１または２を表し、Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３はＨ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ、を表し
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８のうちの一つは、−Ｌ−＃１を表すか、（Ｒ８の場合）含み、
−Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれはＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）基の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ２）、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し；
−ＭＯＤ基は好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有し；
下記の条件（ｉ）から（ｉｉｉ）のうちの１以上が満足され、
（ｉ）−Ｌ−＃１が、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ−の基を含み、
Ｘは−ＮＨ２または−ＣＯＯＨ、好ましくは−ＮＨ２を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
（ｉｉ）Ｒ４が、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、およびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
（ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ４が一緒に、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し（ピロリジン環を形成）、ピロリジン環の２級アミノ基の２級水素原子がＲ２１−ＣＯ−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−ＳＩＧ−によって置き換わっており、ＳＩＧはＣＯ−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表す。
定義
「置換された」という用語は、指定の原子もしくは指定の基上の１以上の水素が、言及されている基からの選択によって置き換わっていることを意味するが、ただし、所定の状況下で、対象の原子の通常の価数を超えるものではない。置換基および／または可変要素の組み合わせが許容される。
「置換されていても良い」という用語は、置換基の数がゼロに等しいかゼロ以外であることができることを意味する。別段の断りがない限り、置換されていても良い基は、いずれか利用可能な炭素もしくは窒素もしくは硫黄原子で水素原子に代えて非水素置換基とすることで収容できるだけの数の適宜の置換基によって置換されていても良い。通常、適宜の置換基（存在する場合）の数は、１、２、３、４または５、特別には１、２または３であることができる。
本明細書で使用される場合、「モノ−または多−」という表現は、例えば本発明の一般式の化合物の置換基の定義において「１、２、３、４または５、好ましくは１、２、３または４、より好ましくは１、２または３、最も好ましくは１または２」を意味する。
本発明による化合物における基が置換されている場合、その基は、別段の断りがない限り、モノ置換または多置換されていることができる。本発明の保護の範囲内において、複数ある全ての基の定義は、互いに独立である。１個、２個もしくは３個の同一もしくは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換が特に好ましい。
アルキル
アルキルは、１から１０個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ１０−アルキル）、通常は１から６（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）、好ましくは１から４（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびより好ましくは１から３個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）を有する直鎖もしくは分岐の飽和１価炭化水素基である。
好ましい例には、メチル−、エチル−、プロピル−、ブチル−、ペンチル−、ヘキシル−、イソプロピル−、イソブチル−、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル−、イソペンチル−、２−メチルブチル−、１−メチルブチル−、１−エチルプロピル−、１，２−ジメチルプロピル−、ネオペンチル−、１，１−ジメチルプロピル−、４−メチルペンチル−、３−メチルペンチル−、２−メチルペンチル−、１−メチルペンチル−、２−エチルブチル−、１−エチルブチル−、３，３−ジメチルブチル−、２，２−ジメチルブチル−、１，１−ジメチルブチル−、２，３−ジメチルブチル−、１，３−ジメチルブチル−および１，２−ジメチルブチル−などがある。
特に好ましいものは、メチル−、エチル−、プロピル−、イソプロピル−またはｔｅｒｔ−ブチル基である。
ヘテロアルキル
ヘテロアルキルは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐の炭化水素鎖であって、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む前記炭化水素鎖がある場合、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖である。
この文脈で、Ｒｙは各場合で、−Ｈ、フェニル−、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル−、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニル−またはＣ２−Ｃ１０−アルキニル−であり、それは、次に、各場合で、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈で、Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル−またはフェニル−である。
アルケニル
アルケニルは、１個もしくは２個の二重結合および２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ１０−アルケニル）、特別には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ３−アルケニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖であり、明らかなように、アルケニル基が複数の二重結合を含む場合、それらの二重結合は、互いに離れているか、互いに共役していることができる。アルケニル基は、例えば、エテニル（またはビニル）、プロパ−２−エン−１−イル（または「アリル」）、プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−３−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−１−エニル、ペンタ−４−エニル、ペンタ−３−エニル、ペンタ−２−エニル、ペンタ−１−エニル、ヘキサ−５−エニル、ヘキサ−４−エニル、ヘキサ−３−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−１−エニル、プロパ−１−エン−２−イル（または「イソプロペニル」）、２−メチルプロパ−２−エニル、１−メチルプロパ−２−エニル、２−メチルプロパ−１−エニル、１−メチルプロパ−１−エニル、３−メチルブタ−３−エニル、２−メチルブタ−３−エニル、１−メチルブタ−３−エニル、３−メチルブタ−２−エニル、２−メチルブタ−２−エニル、１−メチルブタ−２−エニル、３−メチルブタ−１−エニル、２−メチルブタ−１−エニル、１−メチルブタ−１−エニル、１，１−ジメチルプロパ−２−エニル、１−エチルプロパ−１−エニル、１−プロピルビニル、１−イソプロピルビニル、４−メチルペンタ−４−エニル、３−メチルペンタ−４−エニル、２−メチルペンタ−４−エニル、１−メチルペンタ−４−エニル、４−メチルペンタ−３−エニル、３−メチルペンタ−３−エニル、２−メチルペンタ−３−エニル、１−メチルペンタ−３−エニル、４−メチルペンタ−２−エニル、３−メチルペンタ−２−エニル、２−メチルペンタ−２−エニル、１−メチルペンタ−２−エニル、４−メチルペンタ−１−エニル、３−メチルペンタ−１−エニル、２−メチルペンタ−１−エニル、１−メチルペンタ−１−エニル、３−エチルブタ−３−エニル、２−エチルブタ−３−エニル、１−エチルブタ−３−エニル、３−エチルブタ−２−エニル、２−エチルブタ−２−エニル、１−エチルブタ−２−エニル、３−エチルブタ−１−エニル、２−エチルブタ−１−エニル、１−エチルブタ−１−エニル、２−プロピルプロパ−２−エニル、１−プロピルプロパ−２−エニル、２−イソプロピルプロパ−２−エニル、１−イソプロピルプロパ−２−エニル、２−プロピルプロパ−１−エニル、１−プロピルプロパ−１−エニル、２−イソプロピルプロパ−１−エニル、１−イソプロピルプロパ−１−エニル、３，３−ジメチルプロパ−１−エニル、１−（１，１−ジメチルエチル）エテニル、ブタ−１，３−ジエニル、ペンタ−１，４−ジエニルまたはヘキサ−１−５−ジエニル基である。詳細には、その基はビニルまたはアリルである。
アルキニル
アルキニルは１個の三重結合を有し、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ１０−アルキニル）、特別には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ３−アルキニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖である。Ｃ２−Ｃ６−アルキニル基は、例えば、エチニル、プロパ−１−イニル、プロパ−２−イニル（またはプロパルギル）、ブタ−１−イニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニル、ペンタ−１−イニル、ペンタ−２−イニル、ペンタ−３−イニル、ペンタ−４−イニル、ヘキサ−１−イニル、ヘキサ−２−イニル、ヘキサ−３−イニル、ヘキサ−４−イニル、ヘキサ−５−イニル、１−メチルプロパ−２−イニル、２−メチルブタ−３−イニル、１−メチルブタ−３−イニル、１−メチルブタ−２−イニル、３−メチルブタ−１−イニル、１−エチルプロパ−２−イニル、３−メチルペンタ−４−イニル、２−メチルペンタ−４−イニル、１−メチルペンタ−４−イニル、２−メチルペンタ−３−イニル、１−メチルペンタ−３−イニル、４−メチルペンタ−２−イニル、１−メチルペンタ−２−イニル、４−メチルペンタ−１−イニル、３−メチルペンタ−１−イニル、２−エチルブタ−３−イニル、１−エチルブタ−３−イニル、１−エチルブタ−２−イニル、１−プロピルプロパ−２−イニル、１−イソプロピルプロパ−２−イニル、２，２−ジメチルブタ−３−イニル、１，１−ジメチルブタ−３−イニル、１，１−ジメチルブタ−２−イニル−または３，３−ジメチルブタ−１−イニル基である。詳細には、アルキニル基はエチニル、プロパ−１−イニルまたはプロパ−２−イニルである。
シクロアルキル
シクロアルキルは、３から１２個の炭素原子を有する飽和の１価単環式もしくは二環式ヒドロカルビル基（Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル）である。
この文脈において、単環式ヒドロカルビル基は、通常は３から１０個（Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル）、好ましくは３から８個（Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル）、より好ましくは３か７個（Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル）の炭素原子を有する１価ヒドロカルビル基である。
単環式ヒドロカルビル基の好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルなどがある。
特に好ましいものは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルである。
この文脈において、二環式ヒドロカルビル基は、２個の直接隣接する原子を一緒に共有する二つの飽和環系の縮合を意味するものと理解されるべき、通常は３から１２個の炭素原子を有するヒドロカルビル基（Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル）である。二環式ヒドロカルビル基の好ましい例には、ビシクロ［２．２．０］ヘキシル、ビシクロ［３．３．０］オクチル、ビシクロ［４．４．０］デシル、ビシクロ［５．４．０］ウンデシル、ビシクロ［３．２．０］ヘプチル、ビシクロ［４．２．０］オクチル、ビシクロ［５．２．０］ノニル、ビシクロ［６．２．０］デシル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、ビシクロ［５．３．０］デシルおよびビシクロ［６．３．０］ウンデシルなどがある。
複素環アルキル
複素環アルキルは、同一であるか異なっていることができる１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する非芳香族単環式もしくは二環式環系である。そのヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。
本発明による単環式環系は、３から８個、好ましくは４から７個、より好ましくは５個もしくは６個の環原子を有することができる。
９
３個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、アジリジニルなどがある。
４個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、アゼチジニル、オキセタニルなどがある。
５個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ジオキソラニルおよびテトラヒドロフラニルなどがある。
６個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホニル、ジオキサニル、テトラヒドロピラニルおよびチオモルホニルなどがある。
７個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、アゼパニル、オキセパニル、１，３−ジアゼパニル、１，４−ジアゼパニルなどがある。
８個の環原子を有する複素環アルキルの好ましい例には、オキソカニル、アゾカニルなどがある。
単環式複素環アルキルの中で、好ましいものは、Ｏ、ＮおよびＳの群からの２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の飽和複素環基である。
特に好ましいものは、モルホニル、ピペリジニル、ピロリジニルおよびテトラヒドロフラニルである。
同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する二環式環系は、本発明によれば、６から１２個、好ましくは６から１０個の環原子を有することができ、１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子がＯ、ＮおよびＳの群からの同一もしくは異なるヘテロ原子によって置き換わっていることができる。
例としては、アザビシクロ［３．３．０］オクチル、アザビシクロ［４．３．０］ノニル、ジアザビシクロ［４．３．０］ノニル、オキサザビシクロ［４．３．０］ノニル、チアザビシクロ［４．３．０］ノニルまたはアザビシクロ［４．４．０］デシル、そして定義によるさらなる可能な組み合わせから誘導される基などがある。
特に好ましいものは、パーヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、パーヒドロフロ［３，２−ｃ］ピリジニル、パーヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、パーヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリルおよび３，４−メチレンジオキシフェニルである。
アリール
アリールは、炭素原子からなる１価単環式もしくは二環式芳香族環系である。例としては、ナフチルおよびフェニルがあり、好ましいものはフェニルまたはフェニル基である。
Ｃ ６ −Ｃ １０ −アラルキル
本発明の文脈におけるＣ６−１０−アラルキルは、Ｃ１−Ｃ４−アルキル基が結合している単環式芳香族アリール、例を挙げるとフェニルである。
例示的Ｃ６−１０−アラルキル基はベンジルである。
ヘテロアリール
ヘテロアリールは、５、６、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個の環原子（「５から１４員ヘテロアリール」基）、特別には５、６、９または１０個の環原子を有し、少なくとも１個の環ヘテロ原子および適宜に１個、２個もしくは３個のＮ、ＯおよびＳの群からのさらなる環ヘテロ原子を含み、環炭素原子を介してまたは適宜に（価数が許す場合）環窒素原子を介して結合している１価の単環式、二環式もしくは三環式芳香族環系である。
ヘテロアリール基は、５員ヘテロアリール基、例えば、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリルまたはテトラゾリル；または６員ヘテロアリール基、例えば、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルまたはトリアジニル；または三環式ヘテロアリール基、例えばカルバゾリル、アクリジニルもしくはフェナジニル；または９員ヘテロアリール基、例えばベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、インドリジニルもしくはプリニル；または１０員ヘテロアリール基、例えばキノリニル、キナゾリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キノキサリニルまたはプテリジニルであることができる。
概して、そして別段の断りがなければ、ヘテロアリール基は、それの全ての可能な異性体型、例えば互変異体および分子の残りの部分への結合箇所に関しての位置異性体を含む。従って、例示的な非限定的例として、ピリジニルという用語は、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イルおよびピリジン−４−イルを包含し、またはチエニルという用語はチエン−２−イルおよびチエン−３−イルを包含する。
Ｃ ５ −Ｃ １０ −ヘテロアリール
本発明の文脈でのＣ５−１０−ヘテロアリールは、同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する単環式もしくは二環式芳香族環系である。あり得るヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）および／またはＳ（＝Ｏ）２である。結合価は、いずれの芳香族炭素原子または窒素原子にあっても良い。
本発明による単環式ヘテロアリール基は、５または６個の環原子を有する。好ましいものは、１個もしくは２個のヘテロ原子を有するヘテロアリール基である。特に好ましいのは、この場合、１個もしくは２個の窒素原子である。
５個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：チエニル、チアゾリル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルおよびチアジアゾリルなどがある。
６個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびトリアジニルなどがある。
本発明による二環式ヘテロアリール基は、９または１０個の環原子を有する。
９個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：フタリジル、チオフタリジル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、アゾシニル、インドリジニル、プリニル、インドリニルなどがある。
１０個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：イソキノリニル、キノリニル、キノリジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、フタラジニル、１，７−および１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、クロマニルなどがある。
ヘテロアルコキシ
ヘテロアルコキシは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐のヒドロカルビル鎖であって、−Ｏ−を介して分子の残り部分に結合しており、さらに基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によってさらに１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合にそれを含む炭化水素鎖が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖である。
本文脈において、Ｒｙは各場合で、−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルであり、それらは次に、各場合で、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈において、Ｒｘは、−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルである。
本発明の文脈におけるハロゲンまたはハロゲン原子はフッ素（−Ｆ）、塩素（−Ｃｌ）、臭素（−Ｂｒ）またはヨウ素（−Ｉ）である。
フルオロアルキル、フルオロアルケニルおよびフルオロアルキニルは、アルキル、アルケニルおよびアルキニルが、フッ素によってモノ置換もしくは多置換されていても良いことを意味する。
キネシン紡錘体タンパク質阻害剤プロドラッグは好ましくは、下記式（ＩＩＩ）を有し、そしてそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１は−Ｈ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｈ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５は−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−またはＲ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い。）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−ＭＯＤ、または置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、
それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ、１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、ｎは０、１または２を表し、Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３はＨ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈまたは−ＮＨ２によって置換されていても良く；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３はＨまたはＣＯＯＨを表し；
−ＭＯＤ基は好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する。
当業者に公知の形でのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５もしくはＲ８での、またはＲ２およびＲ４によって形成されたピロリジン環（Ｒ１０）での水素原子の置換によって、式（ＩＩＩ）の化合物をリンカーに結合させることができる。これによって、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８またはＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌがリンカーを表し、＃１がバインダーまたはそれの誘導体の結合を表す式（ＩＩａ）の複合体が得られる。そこで、式（ＩＩａ）によるＫＳＰ阻害剤（またはＫＳＰ−Ｌ）がバインダーと結合している場合、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８もしくはＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーまたはそれの誘導体への結合を表す。すなわち、その複合体の場合、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、−Ｌ−＃１はバインダー、例えば抗体への結合を表す。特に好ましくは、置換基Ｒ１、Ｒ３またはＲ４のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。バインダーは好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片または抗ＥＧＦＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片または抗ＨＥＲ２抗体である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合している抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０およびＴＰＰ−２６５８、または抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブまたはニモツズマブまたはＨＥＲ−２抗体トラスツズマブである。
式ＩＩａにおいて−Ｌ−＃１に代えて、基−Ｌ−＃３が化合物に存在することも可能であり、その際にＬはリンカーを表し、＃３はバインダーまたはそれの誘導体に結合するための反応性基を表す。−Ｌ−＃３を含む化合物は、バインダーまたはそれの誘導体と反応する反応性化合物である。＃３は好ましくは、アミノ基もしくはチオール基と反応して共有結合を形成する、好ましくはタンパク質におけるシステイン残基と反応する基である。タンパク質におけるシステイン残基は、タンパク質中に天然に存在することができるか、生化学的方法によって導入することができるか、好ましくは、事前にバインダーのジスルフィドを還元することで形成することができる。
Ｒ１がＨではない場合、Ｒ１が結合している炭素原子は立体中心であり、それはＬ配置および／またはＤ配置であることができ、好ましくはＬ配置である。
Ｒ２がＨではない場合、Ｒ２が結合している炭素原子は立体中心であり、それはＬ配置および／またはＤ配置であることができる。
置換基Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表す式（ＩＩａ）の化合物が特に好ましく、
特別に好ましいものは、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；またはＸ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すものである。特に好ましいものは、Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表す化合物である。
Ａについては、好ましいものはＣＯ（カルボニル）である。
Ｒ１について好ましいものは、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨであり、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表す。Ｒ４が−Ｌ−＃１を表す場合、Ｒ１は好ましくは−ＭＯＤである（特別には、Ｒ３が−ＭＯＤを表さない場合）。
Ｒ２について好ましいものは−Ｈである。
Ｒ４について好ましいものは、−Ｈ、−Ｌ−＃１または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基である。上記のように、この場合、−Ｌ−＃１は、式−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＸ）−ＣＯ＊−の基を含み、（Ｌ−）アスパラギンまたは（Ｌ−）アスパラギン酸のカルボニル基（＊によって識別）が、上記式中のＲ４に結合している窒素原子に直接結合している。Ｒ４が−Ｌ−＃１を表す場合、Ｒ１またはＲ３は好ましくは−ＭＯＤである。
Ｒ３について好ましいものは、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたはＣ１−１０−アルキル−であり、それはく−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、ＳＯ２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２またはＮＨ２によって置換されていても良、ｎは０、１または２を表す（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）。Ｒ４が−Ｌ−＃１を表す場合、Ｒ３は好ましくは−ＭＯＤである（特別には、Ｒ１が−ＭＯＤを表さない場合）。
Ｒ５について好ましいものは−Ｈまたは−Ｆである。
Ｒ６およびＲ７について好ましいものは、互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンである。
Ｒ８について好ましいものは、分岐のＣ１−５−アルキル基、特には式−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）０−２−Ｒｙの基であり、Ｒｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈまたは−ＮＨ２を表す。特に好ましいものは、式−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）−Ｒｙの基であり、Ｒｙは−Ｈを表す。
Ｒ９について好ましいものは−Ｈまたは−Ｆである。
−ＭＯＤについて好ましいものは、ＨＯＯＣ−（ＣＨＸ）ｘ−ＡＭ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−であり、ｘは２から６の数字を表し、Ｘは−Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、ＡＭは−ＣＯ−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す（特に好ましいものは、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−である。）。
特別に好ましいものは、
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ａが−Ｃ＝（Ｏ）−を表し；
Ｒ１が−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″が−ＨまたはＮＨ２を表し；
Ｒ２が−Ｈを表し；
Ｒ４が、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基を表し；
Ｒ３が、ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化されていても良いＣ１−３−アルキルによってモノ置換または多置換されていても良いフェニル基を表し、またはフッ素化されていても良いＣ１−１０−アルキル基を表し、それは−ＯＹ４、−ＳＹ４、−Ｏ−ＣＯ−Ｙ４、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ４、ＮＨ−ＣＯ−Ｙ４、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ４、Ｓ（Ｏ）ｎ−Ｙ４（ｎは０、１または２を表す。）、−ＳＯ２−ＮＨ−Ｙ４、ＮＨ−Ｙ４またはＮ（Ｙ４）２によって置換されていても良く、Ｙ４はＨ、フェニル（ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化されていても良いＣ１−３−アルキルによってモノ置換または多置換されていても良い）、またはアルキル（そのアルキル基は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、および／または−ＮＨＣＯ−Ｃ１−３−アルキルによって置換されていても良く、アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルを表す。）を表し；
特に好ましくはＲ３が、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し（アルキルは好ましくはＣ１−３−アルキルを意味する。）、
Ｒ５が−Ｈまたは−Ｆであり；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８が分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９が−Ｈまたは−Ｆを表す、式（ＩＩａ）の化合物である。
特別に好ましいものは、
置換基Ｒ４が−Ｌ−＃１を表し、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
ＡがＣＯ（カルボニル）を表し；
Ｒ１が−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″が−Ｈまたは−ＮＨ２、またはＨＯＯＣ−（ＣＨＸ）ｘ−ＡＭ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−を表し、ｘが２から６の数字であり、Ｘが−Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、ＡＭが−ＣＯ−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表し（特に好ましいものは、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−である。）、
Ｒ２が−Ｈを表し；
Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。）またはＨＯＯＣ−（ＣＨＸ）ｘ−ＡＭ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−（ｘは２から６の数字であり、ＸはＨ、ＮＨ２またはＣＯＯＨを表し、ＡＭは−ＣＯ−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す（特に好ましいものは、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−である。）または−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨ（ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−ＣＯＣＨ３である。）を表し；
Ｒ５が−Ｈまたは−Ｆであり；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８が分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９が−Ｈまたは−Ｆを表す、式（ＩＩａ）の化合物でもある。
さらに、下記の場合（単独でまたは組み合わせて）が好ましい。
●Ｒ１が−Ｌ−＃１、−ＣＯＯＨ、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−または−Ｈを表し、
●Ｒ２が−Ｈを表し、
●Ｒ４が式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基を表し；
●Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
●Ｒ３は−（ＣＨ２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い）、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−）、−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨ（ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−ＣＯＣＨ３である。）を表し、または−Ｌ−＃１を表し；
●Ｒ５が−Ｈを表し、
●Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ６およびＲ７が、−Ｆを表し；
●Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表し；および／または
●Ｒ９が−Ｈを表し、
●置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。
さらに、本発明によれば、下記の場合が好ましい。
●Ｒ１が−Ｌ−＃１、−ＣＯＯＨ、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ２）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−または−Ｈを表し、
●Ｒ２が−Ｈを表し、
●Ｒ４が−Ｈまたは式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基を表し、
●Ａが−Ｃ（＝Ｏ）を表し、
●Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。）を表し、または−Ｌ−＃１を表し、
●Ｒ５が−Ｈを表し、
●Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ６およびＲ７が−Ｆを表し；
●Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表し；
●Ｒ９が−Ｈを表し、
●置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。
さらに、本発明によれば、次のＡＤＣ類またはＡＰＤＣ類が好ましい。
式（ＩＩｂ）：
Figure 2018524321
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し（好ましくはＸ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表す。）、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、Ｂは単結合、−Ｏ−ＣＨ２−または−ＣＨ２−Ｏ−を表し、Ｒ２０はＮＨ２、Ｆ、ＣＦ３またはＣＨ３を表し、ｎは０、１または２を表す。
式（ＩＩｃ）：
Figure 2018524321
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し（好ましくはＸ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表す。）、Ａ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは好ましくは、−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨまたは−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３を表し、ＬＥＧはレグマイン開裂性Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−基を表し、Ｒ２１、Ｐ２およびＰ３は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有する。
式（ＩＩｄ）：
Figure 2018524321
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し（好ましくはＸ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表す。）、Ａ、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは好ましくは−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ３は−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨであり、ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−ＣＯＣＨ３を表し、ＬＥＧはレグマイン開裂性Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−基を表し、Ｒ２１、Ｐ２およびＰ３は、式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有する。
式（ＩＩｅ）：
Figure 2018524321
式中、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ａ、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、Ｒ１は−Ｌ−＃を表す。
さらに、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）および（ＩＩｅ）の化合物において（単独でまたは組み合わせて）、
●Ｚが−Ｃｌまたは−Ｂｒを表し；
●Ｒ１が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２を表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ１が−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、Ｙ４基のうちの一方がｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＮＨ２を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、Ｙ４基のうちの一方が−ＣＨ３を表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＮＨ２を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
●Ｙ４の代表的なものの少なくとも一つがｉ−プロピルおよび−ＣＨ３から選択され、
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＮＨＣＨＹ４ＣＯＯＨを表し、Ｙ４が−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
●Ｙ４がアミノベンジルを表し；
●Ｒ２が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ３を表し；
●Ｒ４が−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５がＨを表し；
●Ｒ４が−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表す場合が好ましい。
さらに、式（ＩＩａ）におけるＲ１、Ｒ２またはＲ３が−ＭＯＤを表す場合、特にはＲ４が−Ｌ−＃１を表す場合（特には、−Ｌが、−Ｎ−Ｒ４または−Ｎ−Ｌ−＃１で直接開裂することで、Ｒ４またはＬがＨによって置き換わる開裂性リンカーである場合）が好ましい。
特に好ましくは、Ｒ３は−ＭＯＤを表し、Ｒ１またはＲ４は−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く）、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し；
−ＭＯＤ基は好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する。
特に好ましくは、基−ＭＯＤは、（好ましくは末端）−ＣＯＯＨ基を、例えばベタイン基で有する。好ましくは、基−ＭＯＤは式−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを有し、ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−ＣＯＣＨ３を表す。
さらに、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）または（ＩＩＩｅ）において（単独でまたは組み合わせて）、
●Ｚが−Ｃｌまたは−Ｂｒを表し；
●Ｒ１が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２を表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ１が−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ４を代表するものがｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＮＨ２を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ４を代表するものが−ＣＨ３を表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＮＨ２を表し；
●Ｙ４が、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
●少なくとも一方のＹ４を代表するものが、ｉ−プロピルおよび−ＣＨ３からなる群から選択され；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＮＨＣＨＹ４ＣＯＯＨを表し、Ｙ４が−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
●Ｙ４がアミノベンジルを表し；
●Ｒ２が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ３を表し；
●Ｒ４が−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−Ｈを表し；
●Ｒ４が−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表す場合が好ましい。
好ましいものは、さらに、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１がＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′表し、Ｚ′が−Ｈ、ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４が、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２が−Ｈ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４が、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５が−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４が−Ｈまたはレグマイン−開裂性基Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−を表し；
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−を表し；
Ｒ３が−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎが０、１または２を表し、Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３がＨ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルである。）；
Ｒ５が−Ｈ、−ＭＯＤ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８が（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニルまたは（フッ素化されていても良い）Ｃ４−１０−シクロアルキルを表し；
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つまたはゼロ個が−Ｌ−＃１を表し、
Ｌがリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｒ９が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−ＭＯＤが−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０が−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１が−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
ｎが０または１であり；
ｏが０または１であり；
Ｇ２が、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３が−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し；
−ＭＯＤ基が好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）または（ＩＩＩｅ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
好ましいものは、さらに、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１がＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４が、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２が−Ｈ、−ＣＯ−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４が、−ＮＨＣＯＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、Ｙ５が−Ｈまたは−ＣＯ−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４が−Ｈまたはレグマイン−開裂性基Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−を表し、
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｓ（＝Ｏ）、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝ＮＮＨ２）−を表し；
Ｒ３が−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎが０、１、または２を表し、Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３がＨ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルである。）；
Ｒ５が−Ｈ、−ＭＯＤ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−ＣＯ−ＮＹ１Ｙ２または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、Ｈまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８が（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキルを表し；
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つまたはゼロ個が−Ｌ−＃１を表し、
Ｌがリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｒ９が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−ＭＯＤが−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを表し、ｘが０または１であり、Ｙ５が−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６が−Ｈまたは−ＣＯＣＨ３を表す、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）または（ＩＩＩｅ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明による特に好ましいものは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が上記の意味を有する（例えば式（ＩＩａ）について言及したもの）、下記の式Ｖ、ＶＩおよびＶＩＩの化合物である。
Figure 2018524321
特に好ましいものは、Ｒ１およびＲ５が、Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し；Ｒ２がＨを表し；Ｒ４が式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、Ｐ２が、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；Ｐ３が、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩの化合物である。特別に好ましいものは、相当する式ＶＩの化合物である。
本発明による抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は好ましくは、下記式ＶＩＩＩを有する。
Figure 2018524321
式中、
ｍは０から２の数字であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは−ＣＯＮＨ２または−ＣＯＯＨであり；
Ｌａは自壊性リンカーを表し；
Ｌｃはリンカーを表し；
Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓのうちの一つから誘導される基であり；
Ａ２は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸（従って、複数のＰ３が存在する場合、Ｐ３は異なる意味を有することができる。）のうちの一つから誘導される基であり；
Ｄ１は式ＩＩＩの化合物であり；
ＲはＺ１−（ＣＯ）ｑ−を表し、ｑは０または１であり、Ｚ１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ１基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ１は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキルを表す。）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し、ＡＢは抗体を表し、ｓは１から２０、好ましくは２から８、より好ましくは３から５の数字、例えば４である。
本発明による抗体−プロドラッグ複合体（ＡＰＤＣ）は好ましくは、下記式ＩＸを有する。
Figure 2018524321
式中、
ｍは０から２の数字であり；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｘは−ＣＯＮＨ２または−ＣＯＯＨであり；
Ｌａは自壊性リンカーを表し；
Ｌｂはリンカーを表し；
Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓのうちの一つから誘導される基であり；
Ａ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸（従って、複数のＰ３が存在する場合、Ｐ３は異なる意味を有することができる。）のうちの一つアミノ酸から誘導される基であり；
Ｄ１は式ＩＩＩの化合物であり；
ＲはＺ１−（ＣＯ）ｑ−を表し、ｑは０または１であり、Ｚ１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ１基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ１は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し、ＡＢは抗体を表し、ｓは１から２０、好ましくは２から８、より好ましくは３から５の数字、例えば４である。
リンカー
文献に、例えば抗体などのバインダーに有機分子を共有結合的にカップリング（結合）させるための多様な選択肢が開示されている（例えば、Ｋ． Ｌａｎｇ ａｎｄ Ｊ． Ｗ． Ｃｈｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４−４８０６， Ｍ． Ｒａｓｈｉｄｉａｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２０１３， ２４， １２７７−１２９４参照）。本発明に従って好ましいものは、遊離チオールとして既に存在しているか、ジスルフィド架橋の還元によって発生する抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介した、および／または抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した、ＫＳＰ阻害剤またはプロドラッグの抗体への結合である。しかしながら、チロシン残基を介して、グルタミン残基を介して、非天然アミノ酸の残基を介して、遊離カルボキシル基を介して、または抗体の糖残基を介して、ＫＳＰ阻害剤またはプロドラッグを抗体に結合させることも可能である。
本発明によれば、バインダーの特異的結合部位に薬物分子を結合させて、産生物均一性を高めることも可能である。文献には、各種の結合部位特異的結合方法が記載されている（Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ２６， １７６−１９２（２０１５）；Ｃａｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ５３， １０５８５−１０５８７（２０１４）；Ｂｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ４６−５３（２０１４）；Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４−４５（２０１４）。これらの方法には、特には、例えばトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）、グリシルトランスフェラーゼ類またはホルミルグリシン発生酵素を用いる酵素複合体化法などもある（Ｓｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５−７８４， （２０１５））。
本発明によれば、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤がバインダーのグルタミン側鎖に結合しているキネシン紡錘体タンパク質阻害剤の結合部位特異的バインダー複合体を提供することが可能である。
バインダーが抗体である場合、それは、好ましくは定常領域にアクセプターグルタミを含む。そのようなアクセプターグルタミンは、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば、重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を介して、または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成を介して（例えば、ＰＮＧａｓｅＦによる酵素的脱グリコシルを介して、または重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｘを介して、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング（この場合、ＸはＮ以外のアミノ酸であることができる。））導入することができる。脱グリコシルもしくは脱グリコシル化抗体のその後者の場合、重鎖のグルタミン残基Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンとなる。特に好ましいものは、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。従って、本発明で記載の全ての抗体が同様に、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）（抗体のＫａｂａｔナンバリングシステム、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｌｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１）参照）のＮ以外のいずれかの他のアミノ酸への突然変異によって作られるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。さらに、本明細書に記載の全ての抗体は、同様に、操作により、トランスグルタミナーゼ触媒反応のために１以上のアクセプターグルタミン残基を含む記載の抗体の変異体を含む。
そのような結合部位特異的結合の一つの方法は、トランスグルタミナーゼによる結合体の結合部位特異的結合に関する文献記載のアプローチである。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）も含むトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）は、グルタミン類のγ−カルボニルアミド基とリジン類の一級アミン基の間の共有結合の形成を触媒する酵素のファミリーである。そのようなトランスグルタミナーゼはアミン供与体としてリジン以外の基質も受容することから、それらを用いて、好適なアクセプターグルタミン類で抗体を含むタンパク質を修飾している（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７ （２０１０）； Ｊｏｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４０， ４７−５４ （２０００）； Ｍｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９， ２７１−２７８ （２００８）； Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｇｔｅｓ （Ｄｕｃｒｙ， Ｌ．， Ｅｄ．）， ｐｐ ２０５−２１５， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ． （２０１３））。一方で、遺伝子工学によって抗体に導入されたアクセプターグルタミン残基である人工のグルタミン標識を含む抗体に薬物を結合させるのに、トランスグルタミナーゼが用いられている（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２０， １６１−１６７（２０１３））。他方で、抗体の重鎖の定常領域の保存グルタミン残基Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）は、脱グリコシル化ＩｇＧ１分子の骨格における細菌トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）に対する唯一のγ−カルボニルアミド供与体であることから、アクセプターグルタミンであるが、抗体が重鎖の位置Ｎ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）でグリコシル化されている場合に、ＩｇＧ１の骨格にアクセプターグルタミンは全く存在しないことが報告されている（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））。要約すると、細菌トランスグルタミナーゼを、抗体のアクセプターグルタミン残基でのアミン−薬物基質、例えば薬物−リンカー構築物の結合に用いることができる。そのようなアクセプターグルタミンは、突然変異による抗体の操作によって、または脱グリコシル化抗体の形成によって導入することができる。そのような脱グリコシル化抗体は、Ｎ−グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅＦ）を用いる脱グリコシルによって、または重鎖のグリコシル化部位のＮ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のＮ以外の他のいずれかのアミノ酸への突然変異によって導入することができる。細菌トランスグルタミナーゼを用いるそのような脱グリコシル化抗体の酵素的結合が、突然変異Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））、またはＮ２９７Ｓ（特許出願ＷＯ２０１３０９２９９８Ａ１およびＷＯ２０１３０９２９８３Ａ２を参照する。）を含む脱グリコシル化抗体変異体について記載されている。トランスグルタミナーゼによるそのような脱グリコシル化抗体の酵素的結合によって、両方の重鎖が位置Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）で特異的に官能化されている、２のＤＡＲを有するＡＤＣが提供される。重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｑのみが、重鎖当たりもう一つ別の結合部位を提供する。そのような変異体の結合により、両方の重鎖が位置Ｑ２９５およびＱ２９７で特異的に官能化されている、４のＤＡＲを有するＡＤＣが生じる。
重鎖が突然変異Ｑ２９５ＮおよびＮ２９７Ｑを有する抗体変異体は、位置Ｑ２９７に一つのみのアクセプターグルタミン残基を有する（Ｓｉｍｏｎｅ Ｊｅｇｅｒ， Ｓｉｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ， Ｔｈｅｓｉｓ ａｔ ＥＴＨ Ｚｕｒｉｃｈ （２００９））。細菌トランスグルタミナーゼを用いる脱グリコシル化抗体の結合部位特異的結合について記載した文献にいくつかの例がある（例えばＤｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９， ５６９−５７８ （２０１４）； Ｌｈｏｓｐｉｃｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １２， １８６３−１８７１ （２０１５））。脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合部位特異的官能化の戦略が、図３にまとめてある。
結合部位特異的および結合部位非特異的の両方でのカップリングが、リンカーと称されるものを用いて行われる。リンカーは、イン・ビボで開裂可能なリンカーの群およびイン・ビボで安定なリンカーの群に分類することができる（Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３（２０１０）参照）。イン・ビボで開裂可能なリンカーは、イン・ビボで開裂可能な基を有し、そこで、イン・ビボで化学的に開裂可能な基とイン・ビボで酵素的に開裂可能な基の間で区別することが可能である。「イン・ビボで化学的に開裂可能な」および「イン・ビボで酵素的に開裂可能な」は、リンカーまたは基が循環中では安定であり、標的細胞でもしくは標的細胞内でのみ、そこでの化学的もしくは酵素的に異なる環境（比較的低いｐＨ；高いグルタチオン濃度；レグマイン、カテプシンもしくはプラスチンなどのリソソーム酵素、または例えば、β−グルクロニダーゼ類などのグリオシダーゼ類（ｇｌｙｏｓｉｄａｓｅｓ）の存在）によって開裂することで、低分子量ＫＳＰ阻害剤またはそれの誘導体を放出することを意味する。イン・ビボで化学的に開裂可能な基は、特にはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナールであり；酵素的にイン・ビボで開裂可能な基は、特に２−８−オリゴペプチド基、特別にはジペプチド基またはグリコシドである。ペプチド開裂部位は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００２， １３， ８５５−８６９およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８ （１９９８） ３３４１−３３４６、さらにはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９９８， ９， ６１８−６２６に開示されている。これらには、例えば、アラニン−アラニン−アスパラギン、バリン−アラニン、バリン−リジン、バリン−シトルリン、アラニン−リジンおよびフェニルアラニン−リジン（適宜に、さらなるアミド基を有する）などがある。
遊離薬物の効率的放出を確保するため、酵素的開裂部位と薬物の間に自壊性リンカー要素（例えば、上記式ＩＩａにおけるＳＩＧ、または上記式ＶＩＩＩおよびＩＸにおけるＬａ）と称されるものを組み込んでも良い（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００８， ８， ６１８−６３７）。薬物は、各種機構で、例えば最初に求核基を酵素的に放出し、次に電子カスケードを介して脱離させることで（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， １９９９， ７， １５９７； Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ４５， ９３７；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， １０， ７１）、または相当するリンカー要素の環化によって（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００３， １１， ２２７７；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００７， １５， ４９７３；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ２００７， １７， ２２４１）、またはその二つの組み合わせによって（Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒ． Ｅｄ．， ２００５， ４４， ４３７８）放出させることができる。そのようなリンカー要素の例を下記の図に示す。
Figure 2018524321
例えばヒストンデアセチラーゼおよびカテプシンＬによる薬物放出のための連続酵素段階の例が、Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４， ２７３５に記載されている（図４参照）。
イン・ビボで安定なリンカーは、高い安定性（血漿中２４時間後に５％未満の代謝物）によって区別され、上記のようなイン・ビボで化学的または酵素的に開裂可能基を持たない。
リンカー−Ｌ−（式ＶＩＩＩにおけるＬｃ、ならびに式ＩＸにおけるＬｂなど）は好ましくは、
次の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｖ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍは０または１であり；ＳＧは、（化学的にまたは酵素的に）イン・ビボで開裂可能な基（特に、ジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナール；またはレグマイン、カテプシンまたはプラスミンによって開裂可能な２から８オリゴペプチド基）であり、ＳＧ１はオリゴペプチド基または好ましくはジペプチド基であり、Ｌ１は、イン・ビボで安定な有機基を表し、Ｌ２は、バインダーに対するカップリング基または単結合を表す。ここで、カップリングは好ましくは、抗体のシステイン残基またはリジン残基に対するものである。あるいは、カップリングは、抗体のチロシン残基、グルタミン残基または非天然アミノ酸に対するものであることができる。非天然アミノ酸は、例えば、アルデヒドまたはケト基（例えば、例えばホルミルグリシン）またはアジドもしくはアルキン基（Ｌａｎ ＆ Ｃｈｉｎ， Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４−４８０６参照）を含むことができる。
本発明に従って特に好ましいものは、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）である。代謝により、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）を有する本発明による複合体の投与および抗体のシステインまたはリジン残基へのリンカーのカップリングによって、下記式のシステインまたはリジン誘導体が生じる。
Figure 2018524321
式中、Ｌ１は、各場合で、低分子量ＫＳＰ阻害剤、例えば式（ＩＩＩ）または（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、または（ＩＶ）の化合物に結合しており、−Ｌ−＃１はそれぞれリジンおよびシステインから誘導される上記の二つの基のうちの一つを表す。
本発明に従って好ましいものはさらに、基本的リンカー構造（ｉｉ）および（ｉｖ）であり、特に結合が位置Ｒ１でのものである場合、特には基Ｌ１が下記構造のうちの一つを有する場合である。
（ａ）−ＮＨ−（ＣＨ２）０−４−（ＣＨＣＨ３）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯ−Ｙ７［Ｙ５は、ＨまたはＮＨＹ６を表し、Ｙ６は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３を表し、Ｙ７は、単結合または−ＮＨ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＮＨ２−ＣＯ−を表すことで、開裂後に、相当する構造−ＮＨ−（ＣＨ２）０−４−（ＣＨＣＨ３）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ−（ＣＨ２）０−４−（ＣＨＣＨ３）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＮＨ２−ＣＯＯＨが得られる。］。
（ｂ）−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯ−［ｘは０または１であり、Ｙ５は、ＨまたはＮＨＹ６を表し、Ｙ６は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３を表すことで、開裂後に、相当する構造−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨが得られる。］。
本発明に従って好ましいものは、位置Ｒ４に結合した場合の、特にｍ＝０の場合の基本的リンカー構造（ｉ）でもある。
リンカーがシステイン側鎖またはシステイン残基に結合している場合、Ｌ２は好ましくは、システインのスルフヒドリル基と反応する基から誘導される。これらには、ハロアセチル類、マレイミド類、アジリジン類、アクリロイル類、アリール化化合物、ビニルスルホン類、ピリジルジスルフィド類、ＴＮＢチオール類およびジスルフィド還元剤などがある。これらの基は一般に、スルフヒドリル結合と求電子的に反応して、スルフィド（例えばチオエーテル）またはジスルフィド架橋を形成する。好ましいものは、安定なスルフィド架橋である。Ｌ２は好ましくは
Figure 2018524321
であり、
＃１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃２は、基Ｌ１への結合点を示し、
Ｒ２２は、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＯＮＲ２（Ｒは各場合で、Ｃ１−３−アルキルを表す。）、−ＣＯＮＨ２、好ましくは−ＣＯＯＨを表す。
Ｌ２について特に好ましいものは、
Figure 2018524321
Figure 2018524321
であり、
＃１は抗体の硫黄原子への結合点を示し、＃２は薬物への結合点を示し、ｘは１または２を表し、Ｒ２２は−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ１−３−アルキルを表す。）、−ＣＯＮＨ２、好ましくは−ＣＯＯＨを表す。ｘ＝１であり、Ｒ２２が−ＣＯＯＨを表す場合が好ましい。
本発明による複合体または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の範囲で、特に好ましくは式Ａ３またはＡ４の二つの構造のうちの一つとして存在する。ここで、式Ａ３またはＡ４の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合の数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率で存在する。そして、残りの結合は、下記構造として存在する。
Figure 2018524321
本発明によれば、Ｌ１は好ましくは、下記式によって表される。
Figure 2018524321
式中、
Ｒ１０は、−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
を表し；（Ｇ１が、ＮＨＣＯまたは
Figure 2018524321
を表す場合はＲ１０は好ましくはＮＨ２ではない。）。
ｎは、０または１であり；
ｏは、０または１であり；
Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｙ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（Ｒｙは、−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）および／または４個以下のＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ２−からなる群から選択されるヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、または−ＳＯ−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、前記側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ２は好ましくは、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員、例えば５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ２におけるさらなる中断基は、好ましくは
Figure 2018524321
であり、
Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。
ここで、＃１はＫＳＰ阻害剤またはプロドラッグへの結合であり、＃２は抗体へのカップリング基への結合である（例えばＬ２）。
アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基の直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は通常、言及される個々の数の炭素原子を有するα，ω−二価アルキル基を含む。好ましい例には、メチレン、エタン−１，２−ジイル（１，２−エチレン）、プロパン−１，３−ジイル（１，３−プロピレン）、ブタン−１，４−ジイル（１，４−ブチレン）、ペンタン−１，５−ジイル（１，５−ペンチレン）、ヘキサン−１，６−ジイル（１，６−ヘキシレン）、ヘプタン−１，７−ジイル（１，７−ヘキシレン）、オクタン−１，８−ジイル（１，８−オクチレン）、ノナン−１，９−ジイル（１，９−ノニレン）、デカン−１，１０−ジイル（１，１０−デシレン）などがある。しかしながら、炭化水素鎖におけるアルキレン基は分岐であることもでき、すなわち上記で言及の直鎖アルキレン基の１以上の水素原子がＣ１−１０−アルキル基によって置換されていることで、側鎖を形成していることができる。炭化水素鎖はさらに、環状アルキレン基（シクロアルカンジイル）、例えば１，４−シクロヘキサンジイルまたは１，３−シクロペンタンジイルを含んでいても良い。これらの環状基は不飽和であっても良い。特に、その炭化水素基には、芳香族基（アリーレン基）、例えばフェニレンが存在しても良い。そして、環状アルキレン基およびアリーレン基において、やはり、１以上の水素原子がＣ１−１０−アルキル基によって置換されていても良い。このようにして、分岐していても良い炭化水素鎖が形成される。この炭化水素鎖は、合計０から１００個の炭素原子、好ましくは１から５０個、特に好ましくは２から２５個の炭素原子を有する。
側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって同一でまたは異なってモノ置換または多置換されていても良い。
当該炭化水素鎖は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−ならびにＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは、
Figure 2018524321
）によって同一でまたは異なって１回または複数回中断されていても良い。
Ｇ２におけるさらなる中断基は好ましくは、
Figure 2018524321
である。
好ましくは、リンカーは、下記式：
Figure 2018524321
に相当し、
ｍは、０または１であり；
§は、薬物分子またはプロドラッグへの結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
Ｌ１およびＬ２は上記の意味を有する。
特に好ましくは、Ｌ１は式−ＮＲ１１Ｂ−を有し、
Ｒ１１は、ＨまたはＮＨ２を表し；
Ｂは、−［（ＣＨ２）ｘ−（Ｘ４）ｙ］ｗ−（ＣＨ２）ｚ−を表し、
ｗ＝０から２０であり；
ｘ＝０から５であり；
ｘ＝０から５であり；
ｙ＝０または１であり；
ｚ＝０から５であり；
Ｘ４は、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す。
本発明に従って好ましいリンカーＬは、下記式：
Figure 2018524321
を有し、
＃３は、薬物分子またはプロドラッグへの結合を表し、
＃４は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
Ｒ１１は、−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｂは、−［（ＣＨ２）ｘ−（Ｘ４）ｙ］ｗ−（ＣＨ２）ｚ−を表し、
ｗ＝０から２０であり；
ｘ＝０から５であり；
ｙ＝０または１であり；
ｚ＝１から５であり；
Ｘ４は、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す。
さらに好ましいものは、リンカーＬ１が次の基：
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）６−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）４−§§
§−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）４−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｃ２Ｈ４ＣＯＯＨ）−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）３−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｓ（＝Ｏ）２−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｃ２Ｈ４ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ］−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ［（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２］−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ［（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２］−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
Figure 2018524321
Figure 2018524321
§−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−§§；
§−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−§§；
§−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
Figure 2018524321
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）２−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）２−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）２−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）２−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）５−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）２−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｃ２Ｈ４ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−ＣＨ３］−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（イソＣ３Ｈ７）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｓ（＝Ｏ）２−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§；
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−§§
または
§−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ［（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ］−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（（ＣＨ２）２−Ｏ）４−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−§§
のうちの一つであり、
§が有効成分分子への結合を表し、
§§が抗体への結合を表し、
イソＣ３Ｈ７がイソプロピル基を表すリンカーである。
上記で言及したリンカーは、リンカーがＲ１での水素原子の置換によってカップリングする式（ＩＩａ）の複合体で、またはＲ４での開裂可能リンカーＳＧ１と組み合わせたものが特に好ましく、すなわちＲ１が−Ｌ−＃１を表し、またはＲ４が−ＳＧ１−Ｌ−＃１を表し、＃１が抗体への結合を表す。
本発明に従って好ましいものはさらに、下記のリンカーである。すなわち、本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合で、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、特に好ましくは式Ａ５またはＡ６の二つの構造のうちの一つとして存在する。
Figure 2018524321
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への結合箇所を示し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｒ２２は、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ１−３−アルキルを表す。）、−ＣＯＮＨ２、好ましくは−ＣＯＯＨを表す。
ここで、式Ａ５またはＡ６の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率である。残りの結合は、下記構造として存在する。
Figure 2018524321
システイン側鎖またはシステイン残基に結合した他のリンカー−Ｌ−は次の式を有する。
Figure 2018524321
式中、
§は、薬物分子またはプロドラッグへの結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
ｍは、０、１、２または３を表し；
ｎは、０、１または２を表し；
ｐは、０から２０を表し；
Ｌ３は、
Figure 2018524321
を表し、
ｏは、０または１であり；
Ｇ３は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−またはＳＯ２からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員（好ましくは５から１０員）の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは、
Figure 2018524321
）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
上記式において、好ましくは
ｍは１であり；
ｐは０であり；
ｎは０であり；
Ｌ３は
Figure 2018524321
を表し、
ｏは０または１であり；
Ｇ３は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ（ＣＨ２）ｔ（ＣＯＮＨ）ｕＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ（ＣＨ２）ｗ−を表し、
ｓ、ｔ、ｖおよびｗはそれぞれ互いに独立に、０から２０であり、ｕは０または１である。
上記の式§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§における好ましい基Ｌ１は下記のものであり、それらにおいて、ｒは０から２０、好ましくは０から１５、特に好ましくは１から２０、特別に好ましくは２から１０の数字を表す。
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Ｌ１のさらなる例を表Ｃに示してあり、表中において、この基はボックスで強調してある。
リンカー部分Ｌ１の例を、下記の表ＡおよびＡ′に示してある。その表にはさらに、Ｌ１のこれらの例が好ましく組み合わされる基Ｌ２、さらには好ましいカップリング箇所（Ｒ１またはＲ３またはＲ４）およびｍについての好ましい値を示してあり、これはＬ１の前にカルボニル基があるか否かを問わない（§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§と比較）。これらのリンカーは好ましくは、システイン残基にカップリングしている。Ｌ２がコハク酸イミドであるかそれから誘導されている場合、このイミドは完全にまたは部分的に、上記のような加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態であっても良い。Ｌ１に応じて、開鎖コハク酸アミドへのこの加水分解は、ほぼ明白であるか、全く存在しないことがある。
表Ａ
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
＊＊特に好ましくは、これらの列で提供されるリンカーは、下記のものから選択されるリンカーＬ２に結合する。
Figure 2018524321
式中、＃１はバインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、＃２は基Ｌ１への結合箇所を示し、Ｒ２２は好ましくはＣＯＯＨを表す。本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、バインダーのシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合で、バインダーへのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、特に好ましくは式Ａ７またはＡ８の二つの構造のうちの一つとして存在する。ここで、式Ａ７またはＡ８の構造は通常は一緒に存在し、好ましくはバインダーへの結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率である。残りの結合は、下記構造として存在する。
Figure 2018524321
表Ａ′
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Figure 2018524321
＊＊：表Ａにおける注＊＊を参照する。
＊＊＊：この構造Ｌ２が存在する場合、同時に下記式の構造Ｌ２があっても良い。
Figure 2018524321
相当するリンカーを有する複合体の例は下記構造を有し、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ１は上記の意味を有し、Ｌ２およびＬ３はＬ１と同じ意味を有し、ＡＫ１は、システイン残基を介して結合した抗体を表し、ｎは１から１０の数字である。より好ましくは、ＡＫ１は好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８である。
Figure 2018524321
リンカーがリジン側鎖またはリジン残基に結合している場合、Ｌ２が好ましくはカルボニル基である（カップリングは、例えば相当する活性化カルボン酸を介して行われる。）以外は、システイン側鎖へのカップリングについて上述のものと同じリンカーを用いることができる。
基本構造（ｉ）を有する複合体の例は、次の構造のうちの一つを有し、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ４はＬ１と同じ意味を有し、ＡＫ１はシステイン残基を介して結合した脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、ｎは１から１０の数字であり、式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子は、式Ｒ２１−ＣＯ−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基によって置き換わっている。
Figure 2018524321
式中、Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い：Ｐ２は、単結合またはＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、単結合またはＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸である。
特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８である。
トランスグルタミナーゼ触媒結合の場合、文献に、結合部位特異的にバインダー、例えば抗体に有機分子を共有結合カップリング（連結）させる各種選択肢が開示されている（例えばＳｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５−７８４， （２０１５）、Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４−４５（２０１４）参照）。本発明によれば、好ましいものは、トランスグルタミナーゼを用いる抗体のアクセプターグルタミン残基を介したＫＳＰ阻害剤またはプロドラッグの抗体に対する結合である。そのようなアクセプターグルタミン残基は、抗体の操作によって、または脱グリコシル化抗体を生じる突然変異によって形成することができる。抗体におけるこれらのアクセプターグルタミンの数は、好ましくは２または４である。そのカップリング（連結〜には、好適なリンカーを用いる。好適なリンカー構造は、トランスグルタミナーゼに好適な基質を構成する遊離アミン供与体官能基を有するものである。リンカーは、各種方法で抗体に連結することができる。
好ましくは、トランスグルタミナーゼ触媒結合の場合、リンカーは、上記基本構造（ｉ）から（ｉｖ）のうちの一つを有し、Ｌ１、ＳＧ、ＳＧ１およびｍは上記で提供の意味を有するが、Ｌ２は好ましくは、下記の基のうちの一つである。
Figure 2018524321
［式中、Ｒｙは−Ｈ、ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨ２である。
または
Figure 2018524321
［式中、
Ｒｙは−ＣＯＮＨアルキル、−ＣＯＮＨ２であり、
＃１は、Ｌ１への結合箇所を表し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を表す。］
好ましくは、ＲｙはＨまたは−ＮＨＣＯＭｅである。
相当する複合体の例は、次の構造を有し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＲｙおよびＬ１は上記と同じ意味を有し、ＡＫはバインダー、好ましくは抗体を表し、ｎは好ましくは２または４である。
Figure 2018524321
特に好ましいＫＳＰ阻害剤複合体
本発明によれば、特に好ましいものは、次のＫＳＰ阻害剤複合体であり、ＡＫ（ＡＫ１；ＡＫ２；ＡＫ３）はバインダーまたはそれの誘導体（好ましくは抗体）を表し、ｎは１から５０、好ましくは１．２から２０、より好ましくは２から８の数字である。ＡＫ１は好ましくは、システイン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合している抗体であり；ＡＫ２は好ましくは、リジン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり；ＡＫ３は好ましくは、グルタミン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体である。ここで使用されるバインダーまたは抗体は好ましくは、本説明において好ましいものと記載されているバインダーおよび抗体である。
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ＫＳＰ阻害剤−リンカー中間体またはプロドラッグ−リンカー中間体および複合体の製造
本発明による複合体は、最初に低分子量ＫＳＰ阻害剤またはそれのプロドラッグにリンカーを提供することによって製造される。次に、このようにして得られた中間体をバインダー（好ましくは抗体）と反応させる。
好ましくは、システイン残基へのカップリングのために、下記化合物のうちの一つを、システイン含有バインダー、例えばこの目的のために部分還元されていても良い抗体と反応させる。
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式中、
Ｒは−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
Ｋは、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシまたは−ＯＨによって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−Ｃ６アルキルを表し、
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、ＳＧ１、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は上記と同じ意味を有する。
上記式において、下記の反応図式および構造式でも同様に、式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子が式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基によって置き換わっていることができ、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、およびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い。
上記各化合物および下記化合物において、ｔｅｒｔ−ブチル基は、シクロヘキシルに置き換わっていても良い。
その化合物は、例えば、それのトリフルオロ酢酸塩の形で用いることができる。例えば抗体などのバインダーとの反応の関しては、当該化合物は好ましくは、バインダーに関して２から１２倍モル過剰で用いる。
好ましくは、リジン残基へのカップリングに関しては、下記化合物のうちの一つを、抗体などのリジン含有バインダーと反応させる。
Figure 2018524321
式中、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ４はＬ１と同じ意味を有し、Ｌ１は上記と同じ意味を有する。
システイン残基への中間体カップリングに関しては、その反応は下記のように説明することができる。
Figure 2018524321
他の中間体および他の抗体を同様に反応させることができる。
リジン残基への中間体カップリングに関しては、その反応は下記のように説明することができる。
Figure 2018524321
リンカーに応じて、コハク酸イミド連結ＡＤＣは、結合後に、有利な安定性プロファイルを有する開鎖コハク酸アミドに変換することができる。
Figure 2018524321
この反応（開環）は、ｐＨ７．５から９で、好ましくはｐＨ８で、２５℃から３７℃の温度で、例えば撹拌することで行うことができる。好ましい撹拌時間は８から３０時間である。
上記式において、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、ＳＧ１およびＬ１は上記と同じ意味を有し、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はＬ１と同じ意味を有し；ＲおよびＫは上記と同じ意味を有する。ＡＫ１はシステイン残基を介して結合した脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、ＡＫ２はリジン残基を介して結合した脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。より好ましくは、ＡＫ１およびＡＫ２は、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８である。
さらなる定義
「ＴＧａｓｅ」または「ＴＧ」としても互換的に用いられる「トランスグルタミナーゼ」という表現は、ペプチド結合グルタミンのγ−カルボキサミド基とリジンもしくは構造的に関連のある１級アミン、例えばアミノペンチル基、または例えばペプチド結合リジンのε−アミノ基との間のアシル転位反応を介してタンパク質を連結して、８−（γ−グルタミル）リジンイソペプチド結合を生じさせる能力を有する酵素を意味するものと理解される。ＴＧａｓｅ類には、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）、例えばＥＣ参照番号２．３．２．１３を有する酵素（タンパク質−グルタミン−γ−グルタミルトランスフェラーゼ）などがある。
抗体のアミノ酸残基を指す場合の「アクセプターグルタミン」という表現は、好適な条件下でトランスグルタミナーゼによって認識され、この特異的グルタミンとリジンもしくは構造的に関連する１級アミン、例えばアミノペンチル基との間の反応によりトランスグルタミナーゼ触媒作用下にそれと連結することができるグルタミン残基を意味する。アクセプターグルタミンは、表面露出グルタミンであることができる。
本明細書において「アミノ酸修飾」または「突然変異」は、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入および／または欠失を意味する。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は置換である。本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、タンパク質配列における所定位置での別のアミノ酸によるアミノ酸の置き換えを意味する。例えば、置換Ｙ５０Ｗは、位置５０でのチロシンがトリプトファンによって置き換わっている親ポリペプチドの変異体を説明するものである。ポリペプチドの「変異体」は、基準ポリペプチド、代表的には天然もしくは「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを説明するものである。ポリペプチド変異体は、天然アミノ酸配列での特定の位置での１以上のアミノ酸交換、欠失および／または挿入を有することができる。
「結合部位特異的複合体」という表現は、バインダー、好ましくは抗体、および残基の複合体、好ましくはリンカー−薬物残基を説明するものであり、そのバインダーは、１以上の所定の位置、好ましくはグルタミン残基で官能化されている。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ）は、グルタミン−タンパク質基質の認識において強い特異性を示し、「結合部位特異的複合体化」を触媒することができる。
「均一複合体」または「均一ＡＤＣ」という表現は、バインダーの少なくとも６０％、７０％、８０％または９０％がバインダー当たり同数の複合体化残基を有する結合部位特異的複合体の混合物を説明するものである。抗体の場合、この数は、偶数、好ましくは２または４であるべきである。
バインダー
最も広い意味で、「バインダー」という用語は、バインダー−薬物複合体によって処理されるある種の標的細胞群で存在する標的分子に結合する分子を意味するものと理解される。バインダーという用語は、それの最も広い意味で理解されるべきであり、例えば、レクチン類、ある種の糖鎖に結合することができるタンパク質、およびリン脂質結合タンパク質も含む。そのようなバインダーには、例えば、高分子量タンパク質（結合タンパク質）、ポリペプチド類またはペプチド類（結合ペプチド）、非ペプチド（例えば、Ｋｅｅｆｅ ＡＤ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１０；９：５３７−５５０による総覧があるアプタマー類（ＵＳ５，２７０，１６３））、またはビタミン類）および全ての他の細胞結合性の分子もしくは物質などがある。結合タンパク質は、例えば、抗体、および抗体断片または抗体模倣体、例えばアフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビメール類、ナノボディ類である（Ｇｅｂａｕｅｒ Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．２００９；１３：２４５−２５５；Ｎｕｔｔａｌｌ Ｓ．Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２００８；８：６０８−６１７による総覧）。結合ペプチドは、例えば、リガンド／受容体対のリガンド、例えばリガンド／受容体対ＶＥＧＦ／ＫＤＲのＶＥＧＦ、例えばリガンド／受容体対トランスフェリン／トランスフェリン受容体のトランスフェリンまたはサイトカイン／サイトカイン受容体、例えばリガンド／受容体対ＴＮＦα／ＴＮＦα受容体のＴＮＦαである。
「バインダー」は、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）によって官能化することができるアクセプターグルタミン残基を含むことができる。このアクセプターグルタミンは、バインダー中に天然型で存在することができるか、それは特別に形成される。アクセプターグルタミンは、好適な位置でのグルタミン残基の挿入（例えば、アクセプターグルタミンを含む標識への融合によって、または好適な位置の突然変異によるグルタミン残基の形成を介して）を介して形成することができるか、あるいは、アクセプターグルタミンは、以前にはトランスグルタミナーゼによって認識されなかった特定のグルタミン残基のアクセプターグルタミンへの変換を生じるいずれかのアミノ酸の突然変異によって形成されるか、あるいはアクセプターグルタミンは、翻訳後修飾における修飾（例えば、グリコシル化）によって形成され、その変化は、以前にはトランスグルタミナーゼによって認識されなかった天然グルタミンがアクセプターグルタミンとなる効果を有する。バインダーが抗体である場合、それは好ましくは定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる脱グリコシルによって、または突然変異Ｎ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングによって）によって形成することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、重鎖のグルタミン残基Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。特に好ましいものは、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。
「脱グリコシル化抗体」または「脱グリコシル抗体」という用語は、本明細書において、ＣＨ２ドメインにおける保存Ｌ−グリ時知る化部位に連結されたグリカンを持たないＦＣ領域を含む抗体または抗体誘導体を定義するのに用いられる。脱グリコシル抗体は、例えば、重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔ Ｅｕナンバリング）のグリコシル化部位の突然変異によって、またはグリコシル化能力がない発現系での抗体の発現によって産生され得る。抗体脱グリコシル方法は、一般に知られている（例えば、Ｗｉｎｋｅｌｈａｋｅ ＆ Ｎｉｃｏｌｓｏｎ （１９７６）， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２５１（４）：１０７４−８０）。脱グリコシル化抗体は、例えばＰＮＧａｓｅＦによる酵素的脱グリコシルによって形成することができる。本発明の１実施形態において、脱グリコシル化抗体は、原核生物宿主での発現によって得ることができる。好適な原核生物宿主には、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ならびにシュードモナス属、ストレプトミセス属およびスタフィロコッカス属のいくつかの生物種などがあるが、これらに限定されるものではない。本発明の別の実施形態において、脱グリコシル化抗体は、グリコシル化阻害剤ツニカマイシンとともに哺乳動物細胞発現系を用いることで得ることができる（Ｎｏｓｅ ＆ Ｗｉｇｚｅｌｌ （１９８３）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８０（２１）：６６３２−６）。ここで、その修飾は、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける重鎖の保存Ｎ−グリコシル化Ｎ２９７部位（Ｋａｂａｔナンバリング）でのグリコシル化の防止である。
文献には、有機分子の抗体への結合部位特異的共有結合カップリング（複合体化）の各種選択肢も開示されている。本発明に関して特に注目すべきものは、抗体の２個もしくは４個のアクセプターグルタミン残基を介した抗体への担毒体の結合である。
文献には、有機分子の抗体への均一部位特異的共有結合カップリング（複合体化）の各種選択肢も開示されている。本発明による好ましいものは、抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介した、および／または抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した抗体への担毒体の結合である。しかしながら、抗体の遊離カルボキシル基を介して、または糖残基を介して担毒体を抗体に結合させることも可能である。
最も広い意味での「標的分子」は、標的細胞群に存在し、タンパク質（例えば、増殖因子の受容体）または非ペプチド分子（例えば、糖またはリン脂質）であることができる分子を意味するものと理解される。それは好ましくは、受容体または抗原である。
「細胞外」標的分子という用語は、細胞外にあって細胞に結合した標的分子、または細胞外にある標的分子の一部を説明するものである。すなわちバインダーは、無傷細胞上で、それの細胞外標的分子に結合することができる。細胞外標的分子は、細胞膜に固定されることができるか、細胞膜の構成成分であることができる。当業者であれば、細胞外標的分子を識別する方法については知っている。タンパク質の場合、それは、膜貫通ドメインおよび膜におけるタンパク質の配向を確認することで行い得る。これらのデータは通常、タンパク質データベースに寄託される（例えばＳｗｉｓｓＰｒｏｔ）。
「癌標的分子」という用語は、同じ組織型の非癌細胞上より１以上の癌細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、癌標的分子は、同じ組織型の非癌細胞と比較して１以上の癌細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非癌細胞と比較して癌細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的癌標的分子」）。癌標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いる癌細胞の選択的療法が可能となる。
バインダーは、結合を介してリンカーに結合することができる。バインダーの結合は、バインダーのヘテロ原子を介してであることができる。結合に用いることができるバインダーの本発明によるヘテロ原子は、硫黄（１実施形態では、バインダーのスルフヒドリル基を介して）、酸素（本発明によれば、バインダーのカルボキシル基またはヒドロキシル基によって）および窒素（１実施形態において、バインダーの１級もしくは２級アミン基もしくはアミド基を介して）である。これらのヘテロ原子は、天然バインダー中に存在することができるか、化学的方法または分子生物学の方法によって導入することができる。本発明によれば、担毒体へのバインダーの結合は、標的分子に関してバインダーの結合活性に対するごくわずかな効果しか持たない。好ましい実施形態において、その結合は、標的分子に関してバインダーの結合活性に対して全く効果を持たない。
本発明によれば、「抗体」という用語は、それの最も広い意味で理解すべきであり、免疫グロブリン分子、例えば無傷もしくは修飾モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または多特異的抗体（例えば二重特異抗体）を含む。免疫グロブリン分子は好ましくは、代表的にはジスルフィド架橋によって連結される四つのポリペプチド鎖、二つの重鎖（Ｈ鎖）および二つの軽鎖（Ｌ鎖）を有する分子を含む。各重鎖は、重鎖の可変ドメイン（略称ＶＨ）および重鎖の定常ドメインを含む。重鎖の定常ドメインは、例えば、三つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むことができる。各軽鎖は、可変ドメイン（略称ＶＬ）および定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメインは、ドメイン（略称ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、超可変性を有する領域［相補性決定領域（略称ＣＤＲ）とも称される］および低い配列可変性を有する領域（フレームワーク領域、略称ＦＲ）にさらに細分することができる。代表的には、各ＶＨおよびＶＬ領域は、三つのＣＤＲおよび四つ以下のＦＲからなる。例えば、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４である。抗体は、いずれか好適な生物種、例えばウサギ、ラマ、ラクダ、マウスまたはラットから得ることができる。１実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源のものである。抗体は、例えばヒト、ヒト化またはキメラであることができる。
「モノクローナル」抗体という用語は、実質的に均一な抗体の群から得られる抗体を指し、すなわち、その群の個々の抗体は、数が少ない可能性がある自然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高い特異性を有する単一抗原性結合部位を認識する。モノクローナル抗体という用語は、特定の製造プロセスを指さない。
「無傷」抗体という用語は、軽鎖および重鎖の抗原結合ドメインおよび定常ドメインの両方を含む抗体を指す。定常ドメインは、多くの修飾アミノ酸位置を有する天然ドメインまたはそれの変異体であることができ、脱グリコシル化されていることもできる。
「修飾無傷」抗体という用語は、抗体起源ではないさらなるポリペプチドもしくはタンパク質との共有結合（例えば、ペプチド結合）によってアミノ末端またはカルボキシ末端を介して融合した無傷抗体を指す。さらに、抗体を修飾して、定義の位置で、反応性システインを導入して、担毒体へのカップリングを促進するようにすることができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８， Ａｕｇ．， ２６（８）：９２５−３２参照）。
「ヒト」抗体という用語は、ヒトから得ることができるか、合成ヒト抗体である抗体を指す。「合成」ヒト抗体は、ヒト抗体配列の分析に基づいて合成配列からイン・シリコで部分的または完全に得ることができる抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト起源の抗体配列のライブラリから単離された核酸によってコードされ得る。そのような抗体の例が、Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２０００， １８：８５３−８５６にある。そのような「ヒト」および「合成」抗体には、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれか他のアミノ酸への突然変異によって産生された脱グリコシル化変異体も含まれる。
「ヒト化」または「キメラ」抗体という用語は、配列の非ヒトおよびヒト部分からなる抗体を説明するものである。これらの抗体において、ヒト免疫グロブリン（受容体）の配列の一部が、非ヒト免疫グロブリン（供与体）の配列部分によって置き換わっている。多くの場合で、供与体はマウス免疫グロブリンである。ヒト化抗体の場合、受容体のＣＤＲのアミノ酸が、供与体のアミノ酸によって置き換わっている。場合により、フレームワークのアミノ酸も、供与体の相当するアミノ酸によって置き換わっている。場合により、ヒト化抗体は、抗体の至適化時に導入された、受容体にも供与体にも存在しないアミノ酸を含む。キメラ抗体の場合、供与体免疫グロブリンの可変ドメインが、ヒト抗体の定常領域と融合している。そのような「ヒト化」および「キメラ」抗体には、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれか他のアミノ酸への突然変異によって産生された脱グリコシル化変異体も含まれる。
本明細書で使用される相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、抗原への結合に必要な可変抗体ドメインのアミノ酸を指す。代表的には、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される三つのＣＤＲ領域を有する。各ＣＤＲ領域は、カバットの定義によるアミノ酸および／またはコチアに従って定義される超可変ループのアミノ酸を包含することができる。カバットによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２４から３４（ＣＤＲ１）、５０から５６（ＣＤＲ２）および８９から９７（ＣＤＲ３）、そして可変重鎖の３１から３５（ＣＤＲ１）、５０から６５（ＣＤＲ２）および９５から１０２（ＣＤＲ３）からの領域を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１））。コチアによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２６から３２（ＣＤＲ１）、５０から５２（ＣＤＲ２）および９１から９６（ＣＤＲ３）そして可変重鎖の２６から３２（ＣＤＲ１）、５３から５５（ＣＤＲ２）および９６から１０１（ＣＤＲ３）の領域を含む（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ； Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：）。場合により、ＣＤＲは、カバットおよびコチアに従って定義されるＣＤＲ領域からのアミノ酸を含むことができる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なる群に分けることができる。無傷抗体の主要な５群：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、さらなる下位群（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。異なる群に相当する重鎖の定常ドメインは、［アルファ／α］、［デルタ／δ］、［イプシロン／ε］、［ガンマ／γ］および［ミュー（ｍｙ）／μ］と称される。抗体の三次元構造およびサブユニット構造の両方が公知である。
抗体／免疫グロブリンの「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」という用語は、やはり抗体／免疫グロブリンの抗原結合性ドメインを含む抗体／免疫グロブリンの断片（例えば、ＩｇＧの可変ドメイン）と定義される。抗体の「抗原結合性ドメイン」は代表的には、抗体の１以上の超可変領域、例えばＣＤＲ、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域を含む。しかしながら、抗体の「フレームワーク」または「骨格」領域は、抗原に対する抗体の結合時に関与し得る。そのフレームワーク領域は、ＣＤＲの骨格を形成する。好ましくは、抗原結合性ドメインは、少なくとも可変軽鎖のアミノ酸４から１０３および可変重鎖のアミノ酸５から１０９、より好ましくは可変軽鎖のアミノ酸３から１０７および可変重鎖の４から１１１、特に好ましくは完全な可変軽および重鎖、すなわちＶＬのアミノ酸１から１０９およびＶＨの１から１１３（ＷＯ９７／０８３２０による番号付け）を含む。
本発明の「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡｂｓ）、線状抗体、抗体の個々の鎖（単鎖Ｆｖ、略称ｓｃＦｖ）；および多特異的抗体、例えば二重特異抗体および三重特異抗体、例えば抗体断片から形成されるものを包含するが、これらに限定されるものではない（Ｃ． Ａ． Ｋ Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ， ｅｄｉｔｏｒ （１９９５） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｒ． Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｓ． Ｄｕｅｂｅｌ， ｅｄｉｔｏｒｓ （２００１） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）。「多特異的」または「多機能性」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものである。多特異的抗体は、抗原の異なるエピトープに特異的であることができるか、複数の抗原のエピトープに特異的であることができる（例えば、ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ， ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０ ６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同４，７１４，６８１号；同４，９２５，６４８号；同５，５７３，９２０号；同５，６０１，８１９号；またはＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８：１５４７１５５３参照）。Ｆ（ａｂ′）２またはＦａｂ分子は、Ｃｈ１ドメインとＣＬドメインの間で起こる分子間ジスルフィド相互作用の作用を低減または完全に防止することができるように構築することができる。
「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合する能力を有するタンパク質決定基を指す。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖またはそれらの組み合わせなどの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は特異な三次元構造特性を有し、特異な電荷特性も有する。
「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、それのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、共有結合（例えばペプチド連結）によって、抗体を起源としない別のポリペプチドまたはタンパク質と融合していることができる。さらに、抗体および抗原結合性断片を、規定の場所で反応性システインを導入することで修飾して、担毒体へのカップリングを促進することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８ Ａｕｇ；２６（８）：９２５−３２参照）。
ポリクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ, Ｎａｔｕｒｅ, ２５６, ４９５−４９７, １９７５）。ヒトおよびヒト化モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ９２, ３−１６またはＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ ＵＳ ４，８１６，５６７またはＢｏｓｓ ｅｔ ａｌ ＵＳ４，８１６，３９７）。
当業者は、例えば、トランスジェニックマウス（Ｎ Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９５； １３（１）：６５−９３）またはファージ提示技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． １９９１ Ａｕｇ １５；３５２（６３３６）：６２４−８）によってヒト抗体およびそれの断片を作る多様な方法を知っている。本発明の抗体は、例えば非常に多数の健常志願者から集めた非常に多数の抗体のアミノ酸配列からなる組換え抗体ライブラリーから得ることができる。抗体は、公知の組換えＤＮＡ技術によって作ることも可能である。抗体の核酸配列は、通常の配列決定によって得ることができるか、公開でアクセス可能なデータベースから入手することができる。
「単離」抗体またはバインダーは、精製されて細胞の他の構成要素が除去されたものである。診断的使用または治療的使用を妨害し得る細胞の汚染構成要素は、例えば、酵素類、ホルモン類、または細胞の他のペプチドもしくは非ペプチド構成要素である。好ましい抗体またはバインダーは、抗体またはバインダーに対して９５重量％強の範囲（例えばローリー法、ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル分析またはＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動によって測定）まで精製されているものである。さらに、アミノ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個のアミノ酸を決定することができる程度まで精製されている抗体、または均一となるまで精製された（均一性は還元条件もしくは非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定される（検出は、クマシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌａｕ）染色または好ましくは銀着色によって決定することができる。）。）抗体である。しかしながら、抗体は通常は、１以上の精製段階によって得られる。
「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原／標的分子に結合する抗体またはバインダーを指す。抗体またはバインダーの特異的結合は代表的には、少なくとも１０−７Ｍのアフィニティを有する抗体またはバインダーを説明するものであり（Ｋｄ値として；すなわち好ましくは１０ −７ Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、その抗体またはバインダーは所定の抗原／標的分子でも非常に関連の深い抗原／標的分子でもない非特異的抗原／標的分子（例えばウシ血清アルブミンまたはカゼイン）に対してより、所定の抗原／標的分子に対して少なくとも２倍高いアフィニティを有する。その抗体は好ましくは、少なくとも１０−７Ｍ（Ｋｄ値として；すなわち、好ましくは１０−７Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、好ましくは少なくとも１０−８Ｍ、より好ましくは１０−９Ｍから１０−１１Ｍの範囲のアフィニティを有する。Ｋｄ値は、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。
本発明の抗体−薬物複合体は同様に、これらの範囲のアフィニティを示す。そのアフィニティは、好ましくは薬物の結合によってほとんど影響を受けない（概して、そのアフィニティは一桁未満低下し、すなわち、例えば、多くとも１０−８Ｍから１０−７Ｍである。）。
本発明に従って使用される抗体は、好ましくは高い選択性についても注目すべきものである。高い選択性が存在するのは、本発明の抗体が、独立の他の抗原、例えばヒト血清アルブミンに対してより少なくとも２倍、好ましくは５倍、またはより好ましくは１０倍良好な標的タンパク質に対するアフィニティを示す場合である（アフィニティは、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。）。
さらに、使用される本発明の抗体は、好ましくは交差反応性である。前臨床試験、例えば毒性試験または活性試験（例えば、異種移植マウスでの試験）を容易にし、より良好に解釈できるようにするために、本発明に従って使用される抗体がヒト標的タンパク質に結合するだけでなく、試験に用いられる生物における生物標的タンパク質にも結合する場合が有利である。１実施形態において、本発明に従って使用される抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。毒性試験および活性試験に関しては、齧歯類、イヌおよび非ヒト霊長類の科の生物を用いることが好ましい。好ましい齧歯類種は、マウスおよびラットである。好ましい非ヒト霊長類は、アカゲザル、チンパンジーおよびカニクイザルである。
１実施形態において、本発明に従って用いられる抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、マウス、ラットおよびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）からなる生物種の群から選択される少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。特別に好ましいものは、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくともマウス標的タンパク質に対して交差反応性である本発明に従って用いられる抗体である。好ましいものは、前記別の非ヒト生物種の標的タンパク質に対するアフィニティがヒト標的タンパク質に対するアフィニティと５０倍まで、詳細には１０倍まで異なる交差反応性抗体である。
癌標的分子に対する抗体
バインダー、例えば抗体またはそれの抗原結合性断片が向かう標的分子は、好ましくは癌標的分子である。「癌標的分子」という用語は、同じ組織型の非癌細胞上より１以上の癌細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、癌標的分子は、同じ組織型の非癌細胞と比較して１以上の癌細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非癌細胞と比較して癌細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的癌標的分子」）。癌標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いる癌細胞の選択的療法が可能となる。
抗原、例えば癌細胞抗原に対して特異的である抗体は、当業者が熟知している方法（例えば、組み換え発現）、または市販の方法（例えば、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ， Ｇｅｒｍａｎｙから）によって、当業者が製造することができる。癌療法における公知の市販抗体の例には、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ、Ｒｏｃｈｅ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。トラスツズマブは、細胞に基づくアッセイで（Ｋｄ＝５ｎＭ）、ヒト表皮成受容体の細胞外ドメインに高アフィニティで結合するＩｇＧ１κ型の組み換えヒト化モノクローナル抗体である。その抗体は、ＣＨＯ細胞で組み換え的に産生される。これらの抗体はいずれも、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって、これら抗体の脱グリコシル化変異体としても製造され得る。
好ましい実施形態において、標的分子は選択的癌標的分子である。
特に好ましい実施形態において、標的分子はタンパク質である。
１実施形態において、標的分子は細胞外標的分子である。好ましい実施形態において、細胞外標的分子はタンパク質である。
癌標的分子は当業者には公知である。これらの例を以下に列記する。
癌標的分子の例は次のものである。
（１）ＥＧＦ受容体（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５２１９．２）、配列番号２１３（１２１０アミノ酸）：
＞ｇｉ｜２９７２５６０９｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００５２１９．２｜ＥＧＦＲ受容体前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧＡ
細胞外ドメインは下線によって印を付けている。
（２）メソテリン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１３４２１−３）、配列番号２１４（６２２アミノ酸）：
＞ｓｐ｜Ｑ１３４２１−３｜ＭＳＬＮ＿ＨＵＭＡＮメソテリンＯＳ＝ホモ・サピエンスＧＮ＝ＭＳＬＮのアイソフォーム２
ＭＡＬＰＴＡＲＰＬＬＧＳＣＧＴＰＡＬＧＳＬＬＦＬＬＦＳＬＧＷＶＱＰＳＲＴＬＡＧＥＴＧＱＥＡＡＰＬＤＧＶＬＡＮＰＰＮＩＳＳ
ＬＳＰＲＱＬＬＧＦＰＣＡＥＶＳＧＬＳＴＥＲＶＲＥＬＡＶＡＬＡＱＫＮＶＫＬＳＴＥＱＬＲＣＬＡＨＲＬＳＥＰＰＥＤＬＤＡＬＰＬ
ＤＬＬＬＦＬＮＰＤＡＦＳＧＰＱＡＣＴＲＦＦＳＲＩＴＫＡＮＶＤＬＬＰＲＧＡＰＥＲＱＲＬＬＰＡＡＬＡＣＷＧＶＲＧＳＬＬＳＥＡ
ＤＶＲＡＬＧＧＬＡＣＤＬＰＧＲＦＶＡＥＳＡＥＶＬＬＰＲＬＶＳＣＰＧＰＬＤＱＤＱＱＥＡＡＲＡＡＬＱＧＧＧＰＰＹＧＰＰＳＴＷ
ＳＶＳＴＭＤＡＬＲＧＬＬＰＶＬＧＱＰＩＩＲＳＩＰＱＧＩＶＡＡＷＲＱＲＳＳＲＤＰＳＷＲＱＰＥＲＴＩＬＲＰＲＦＲＲＥＶＥＫＴ
ＡＣＰＳＧＫＫＡＲＥＩＤＥＳＬＩＦＹＫＫＷＥＬＥＡＣＶＤＡＡＬＬＡＴＱＭＤＲＶＮＡＩＰＦＴＹＥＱＬＤＶＬＫＨＫＬＤＥＬＹ
ＰＱＧＹＰＥＳＶＩＱＨＬＧＹＬＦＬＫＭＳＰＥＤＩＲＫＷＮＶＴＳＬＥＴＬＫＡＬＬＥＶＮＫＧＨＥＭＳＰＱＶＡＴＬＩＤＲＦＶＫ
ＧＲＧＱＬＤＫＤＴＬＤＴＬＴＡＦＹＰＧＹＬＣＳＬＳＰＥＥＬＳＳＶＰＰＳＳＩＷＡＶＲＰＱＤＬＤＴＣＤＰＲＱＬＤＶＬＹＰＫＡ
ＲＬＡＦＱＮＭＮＧＳＥＹＦＶＫＩＱＳＦＬＧＧＡＰＴＥＤＬＫＡＬＳＱＱＮＶＳＭＤＬＡＴＦＭＫＬＲＴＤＡＶＬＰＬＴＶＡＥＶＱ
ＫＬＬＧＰＨＶＥＧＬＫＡＥＥＲＨＲＰＶＲＤＷＩＬＲＱＲＱＤＤＬＤＴＬＧＬＧＬＱＧＧＩＰＮＧＹＬＶＬＤＬＳＭＱＥＡＬＳＧＴ
ＰＣＬＬＧＰＧＰＶＬＴＶＬＡＬＬＬＡＳＴＬＡ
メソテリンは、アミノ酸２９６から５９８によってコードされる。アミノ酸３７−２８６は、巨核球強化因子をコードしている。メソテリンは、ＧＰＩアンカーを介して細胞膜に固定されており、細胞外で局在している。
（３）炭酸脱水酵素ＩＸ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１６７９０）、配列番号２１５（４５９アミノ酸）：
＞ｓｐ｜Ｑ１６７９０｜ＣＡＨ９＿ＨＵＭＡＮ炭酸脱水酵素９ＯＳ＝ホモ・サピエンスＧＮ＝ＣＡ９ＰＥ＝１ＳＶ＝２
ＭＡＰＬＣＰＳＰＷＬＰＬＬＩＰＡＰＡＰＧＬＴＶＱＬＬＬＳＬＬＬＬＶＰＶＨＰＱＲＬＰＲＭＱＥＤＳＰＬＧＧＧＳＳＧＥＤＤＰＬ
ＧＥＥＤＬＰＳＥＥＤＳＰＲＥＥＤＰＰＧＥＥＤＬＰＧＥＥＤＬＰＧＥＥＤＬＰＥＶＫＰＫＳＥＥＥＧＳＬＫＬＥＤＬＰＴＶＥＡＰＧ
ＤＰＱＥＰＱＮＮＡＨＲＤＫＥＧＤＤＱＳＨＷＲＹＧＧＤＰＰＷＰＲＶＳＰＡＣＡＧＲＦＱＳＰＶＤＩＲＰＱＬＡＡＦＣＰＡＬＲＰＬ
ＥＬＬＧＦＱＬＰＰＬＰＥＬＲＬＲＮＮＧＨＳＶＱＬＴＬＰＰＧＬＥＭＡＬＧＰＧＲＥＹＲＡＬＱＬＨＬＨＷＧＡＡＧＲＰＧＳＥＨＴ
ＶＥＧＨＲＦＰＡＥＩＨＶＶＨＬＳＴＡＦＡＲＶＤＥＡＬＧＲＰＧＧＬＡＶＬＡＡＦＬＥＥＧＰＥＥＮＳＡＹＥＱＬＬＳＲＬＥＥＩＡ
ＥＥＧＳＥＴＱＶＰＧＬＤＩＳＡＬＬＰＳＤＦＳＲＹＦＱＹＥＧＳＬＴＴＰＰＣＡＱＧＶＩＷＴＶＦＮＱＴＶＭＬＳＡＫＱＬＨＴＬＳ
ＤＴＬＷＧＰＧＤＳＲＬＱＬＮＦＲＡＴＱＰＬＮＧＲＶＩＥＡＳＦＰＡＧＶＤＳＳＰＲＡＡＥＰＶＱＬＮＳＣＬＡＡＧＤＩＬＡＬＶＦ
ＧＬＬＦＡＶＴＳＶＡＦＬＶＱＭＲＲＱＨＲＲＧＴＫＧＧＶＳＹＲＰＡＥＶＡＥＴＧＡ
細胞外ドメインは、下線によって印を付けている。
（４）Ｃ４．４ａ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０５５２１５．２；同義語ＬＹＰＤ３）、配列番号２１６（３４６アミノ酸）：
＞ｇｉ｜９３００４０８８｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０５５２１５．２｜ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有タンパク質３−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＤＰＡＲＫＡＧＡＱＡＭＩＷＴＡＧＷＬＬＬＬＬＬＲＧＧＡＱＡＬＥＣＹＳＣＶＱＫＡＤＤＧＣＳＰＮＫＭＫＴＶＫＣＡＰＧＶＤＶＣＴＥＡＶＧＡＶＥＴＩＨＧＱＦＳＬＡＶＲＧＣＧＳＧＬＰＧＫＮＤＲＧＬＤＬＨＧＬＬＡＦＩＱＬＱＱＣＡＱＤＲＣＮＡＫＬＮＬＴＳＲＡＬＤＰＡＧＮＥＳＡＹＰＰＮＧＶＥＣＹＳＣＶＧＬＳＲＥＡＣＱＧＴＳＰＰＶＶＳＣＹＮＡＳＤＨＶＹＫＧＣＦＤＧＮＶＴＬＴＡＡＮＶＴＶＳＬＰＶＲＧＣＶＱＤＥＦＣＴＲＤＧＶＴＧＰＧＦＴＬＳＧＳＣＣＱＧＳＲＣＮＳＤＬＲＮＫＴＹＦＳＰＲＩＰＰＬＶＲＬＰＰＰＥＰＴＴＶＡＳＴＴＳＶＴＴＳＴＳＡＰＶＲＰＴＳＴＴＫＰＭＰＡＰＴＳＱＴＰＲＱＧＶＥＨＥＡＳＲＤＥＥＰＲＬＴＧＧＡＡＧＨＱＤＲＳＮＳＧＱＹＰＡＫＧＧＰＱＱＰＨＮＫＧＣＶＡＰＴＡＧＬＡＡＬＬＬＡＶＡＡＧＶＬＬ
成熟細胞外ドメインは、下線によって印を付けている。
（５）ＣＤ５２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１７９４．２）、配列番号２１７
＞ｇｉ｜６８３４２０３０｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７９４．２｜ＣＡＭＰＡＴＨ−１抗原−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＫＲＦＬＦＬＬＬＴＩＳＬＬＶＭＶＱＩＱＴＧＬＳＧＱＮＤＴＳＱＴＳＳＰＳＡＳＳＮＩＳＧＧＩＦＬＦＦＶＡＮＡＩＩＨＬＦＣＦＳ
（６）Ｈｅｒ２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００４４３９．２）、配列番号２１８
＞ｇｉ｜５４７９２０９６｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４３９．２｜受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２アイソフォームａ［ホモ・サピエンス］
ＭＥＬＡＡＬＣＲＷＧＬＬＬＡＬＬＰＰＧＡＡＳＴＱＶＣＴＧＴＤＭＫＬＲＬＰＡＳＰＥＴＨＬＤＭＬＲＨＬＹＱＧＣＱＶＶＱＧＮＬＥＬＴＹＬＰＴＮＡＳＬＳＦＬＱＤＩＱＥＶＱＧＹＶＬＩＡＨＮＱＶＲＱＶＰＬＱＲＬＲＩＶＲＧＴＱＬＦＥＤＮＹＡＬＡＶＬＤＮＧＤＰＬＮＮＴＴＰＶＴＧＡＳＰＧＧＬＲＥＬＱＬＲＳＬＴＥＩＬＫＧＧＶＬＩＱＲＮＰＱＬＣＹＱＤＴＩＬＷＫＤＩＦＨＫＮＮＱＬＡＬＴＬＩＤＴＮＲＳＲＡＣＨＰＣＳＰＭＣＫＧＳＲＣＷＧＥＳＳＥＤＣＱＳＬＴＲＴＶＣＡＧＧＣＡＲＣＫＧＰＬＰＴＤＣＣＨＥＱＣＡＡＧＣＴＧＰＫＨＳＤＣＬＡＣＬＨＦＮＨＳＧＩＣＥＬＨＣＰＡＬＶＴＹＮＴＤＴＦＥＳＭＰＮＰＥＧＲＹＴＦＧＡＳＣＶＴＡＣＰＹＮＹＬＳＴＤＶＧＳＣＴＬＶＣＰＬＨＮＱＥＶＴＡＥＤＧＴＱＲＣＥＫＣＳＫＰＣＡＲＶＣＹＧＬＧＭＥＨＬＲＥＶＲＡＶＴＳＡＮＩＱＥＦＡＧＣＫＫＩＦＧＳＬＡＦＬＰＥＳＦＤＧＤＰＡＳＮＴＡＰＬＱＰＥＱＬＱＶＦＥＴＬＥＥＩＴＧＹＬＹＩＳＡＷＰＤＳＬＰＤＬＳＶＦＱＮＬＱＶＩＲＧＲＩＬＨＮＧＡＹＳＬＴＬＱＧＬＧＩＳＷＬＧＬＲＳＬＲＥＬＧＳＧＬＡＬＩＨＨＮＴＨＬＣＦＶＨＴＶＰＷＤＱＬＦＲＮＰＨＱＡＬＬＨＴＡＮＲＰＥＤＥＣＶＧＥＧＬＡＣＨＱＬＣＡＲＧＨＣＷＧＰＧＰＴＱＣＶＮＣＳＱＦＬＲＧＱＥＣＶＥＥＣＲＶＬＱＧＬＰＲＥＹＶＮＡＲＨＣＬＰＣＨＰＥＣＱＰＱＮＧＳＶＴＣＦＧＰＥＡＤＱＣＶＡＣＡＨＹＫＤＰＰＦＣＶＡＲＣＰＳＧＶＫＰＤＬＳＹＭＰＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰＣＰＩＮＣＴＨＳＣＶＤＬＤＤＫＧＣＰＡＥＱＲＡＳＰＬＴＳＩＩＳＡＶＶＧＩＬＬＶＶＶＬＧＶＶＦＧＩＬＩＫＲＲＱＱＫＩＲＫＹＴＭＲＲＬＬＱＥＴＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＡＭＰＮＱＡＱＭＲＩＬＫＥＴＥＬＲＫＶＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＩＷＩＰＤＧＥＮＶＫＩＰＶＡＩＫＶＬＲＥＮＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＧＶＧＳＰＹＶＳＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＶＴＱＬＭＰＹＧＣＬＬＤＨＶＲＥＮＲＧＲＬＧＳＱＤＬＬＮＷＣＭＱＩＡＫＧＭＳＹＬＥＤＶＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＳＰＮＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＲＬＬＤＩＤＥＴＥＹＨＡＤＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＲＲＲＦＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＡＫＰＹＤＧＩＰＡＲＥＩＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＳＥＣＲＰＲＦＲＥＬＶＳＥＦＳＲＭＡＲＤＰＱＲＦＶＶＩＱＮＥＤＬＧＰＡＳＰＬＤＳＴＦＹＲＳＬＬＥＤＤＤＭＧＤＬＶＤＡＥＥＹＬＶＰＱＱＧＦＦＣＰＤＰＡＰＧＡＧＧＭＶＨＨＲＨＲＳＳＳＴＲＳＧＧＧＤＬＴＬＧＬＥＰＳＥＥＥＡＰＲＳＰＬＡＰＳＥＧＡＧＳＤＶＦＤＧＤＬＧＭＧＡＡＫＧＬＱＳＬＰＴＨＤＰＳＰＬＱＲＹＳＥＤＰＴＶＰＬＰＳＥＴＤＧＹＶＡＰＬＴＣＳＰＱＰＥＹＶＮＱＰＤＶＲＰＱＰＰＳＰＲＥＧＰＬＰＡＡＲＰＡＧＡＴＬＥＲＰＫＴＬＳＰＧＫＮＧＶＶＫＤＶＦＡＦＧＧＡＶＥＮＰＥＹＬＴＰＱＧＧＡＡＰＱＰＨＰＰＰＡＦＳＰＡＦＤＮＬＹＹＷＤＱＤＰＰＥＲＧＡＰＰＳＴＦＫＧＴＰＴＡＥＮＰＥＹＬＧＬＤＶＰＶ
（７）ＣＤ２０（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０６８７６９．２）、配列番号２１９
＞ｇｉ｜２３１１０９８７｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８７６９．２｜Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ２０［ホモ・サピエンス］
ＭＴＴＰＲＮＳＶＮＧＴＦＰＡＥＰＭＫＧＰＩＡＭＱＳＧＰＫＰＬＦＲＲＭＳＳＬＶＧＰＴＱＳＦＦＭＲＥＳＫＴＬＧＡＶＱＩＭＮＧＬＦＨＩＡＬＧＧＬＬＭＩＰＡＧＩＹＡＰＩＣＶＴＶＷＹＰＬＷＧＧＩＭＹＩＩＳＧＳＬＬＡＡＴＥＫＮＳＲＫＣＬＶＫＧＫＭＩＭＮＳＬＳＬＦＡＡＩＳＧＭＩＬＳＩＭＤＩＬＮＩＫＩＳＨＦＬＫＭＥＳＬＮＦＩＲＡＨＴＰＹＩＮＩＹＮＣＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴＱＹＣＹＳＩＱＳＬＦＬＧＩＬＳＶＭＬＩＦＡＦＦＱＥＬＶＩＡＧＩＶＥＮＥＷＫＲＴＣＳＲＰＫＳＮＩＶＬＬＳＡＥＥＫＫＥＱＴＩＥＩＫＥＥＶＶＧＬＴＥＴＳＳＱＰＫＮＥＥＤＩＥＩＩＰＩＱＥＥＥＥＥＥＴＥＴＮＦＰＥＰＰＱＤＱＥＳＳＰＩＥＮＤＳＳＰ
（８）リンパ球活性化抗原ＣＤ３０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２８９０８）、配列番号２２０
＞ｇｉ｜６８３４８７１１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１２３４．２｜腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＶＬＬＡＡＬＧＬＬＦＬＧＡＬＲＡＦＰＱＤＲＰＦＥＤＴＣＨＧＮＰＳＨＹＹＤＫＡＶＲＲＣＣＹＲＣＰＭＧＬＦＰＴＱＱＣＰＱＲＰＴＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＤＲＣＴＡＣＶＴＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＶＣＥＣＲＰＧＭＦＣＳＴＳＡＶＮＳＣＡＲＣＦＦＨＳＶＣＰＡＧＭＩＶＫＦＰＧＴＡＱＫＮＴＶＣＥＰＡＳＰＧＶＳＰＡＣＡＳＰＥＮＣＫＥＰＳＳＧＴＩＰＱＡＫＰＴＰＶＳＰＡＴＳＳＡＳＴＭＰＶＲＧＧＴＲＬＡＱＥＡＡＳＫＬＴＲＡＰＤＳＰＳＳＶＧＲＰＳＳＤＰＧＬＳＰＴＱＰＣＰＥＧＳＧＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＧＲＣＴＡＣＶＳＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＴＣＥＣＲＰＧＭＩＣＡＴＳＡＴＮＳＲＡＲＣＶＰＹＰＩＣＡＡＥＴＶＴＫＰＱＤＭＡＥＫＤＴＴＦＥＡＰＰＬＧＴＱＰＤＣＮＰＴＰＥＮＧＥＡＰＡＳＴＳＰＴＱＳＬＬＶＤＳＱＡＳＫＴＬＰＩＰＴＳＡＰＶＡＬＳＳＴＧＫＰＶＬＤＡＧＰＶＬＦＷＶＩＬＶＬＶＶＶＶＧＳＳＡＦＬＬＣＨＲＲＡＣＲＫＲＩＲＱＫＬＨＬＣＹＰＶＱＴＳＱＰＫＬＥＬＶＤＳＲＰＲＲＳＳＴＱＬＲＳＧＡＳＶＴＥＰＶＡＥＥＲＧＬＭＳＱＰＬＭＥＴＣＨＳＶＧＡＡＹＬＥＳＬＰＬＱＤＡＳＰＡＧＧＰＳＳＰＲＤＬＰＥＰＲＶＳＴＥＨＴＮＮＫＩＥＫＩＹＩＭＫＡＤＴＶＩＶＧＴＶＫＡＥＬＰＥＧＲＧＬＡＧＰＡＥＰＥＬＥＥＥＬＥＡＤＨＴＰＨＹＰＥＱＥＴＥＰＰＬＧＳＣＳＤＶＭＬＳＶＥＥＥＧＫＥＤＰＬＰＴＡＡＳＧＫ
（９）リンパ球接着分子ＣＤ２２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０２７３）、配列番号２２１
＞ｇｉ｜１５７１６８３５５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７６２．２｜Ｂ細胞受容体ＣＤ２２アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＨＬＬＧＰＷＬＬＬＬＶＬＥＹＬＡＦＳＤＳＳＫＷＶＦＥＨＰＥＴＬＹＡＷＥＧＡＣＶＷＩＰＣＴＹＲＡＬＤＧＤＬＥＳＦＩＬＦＨＮＰＥＹＮＫＮＴＳＫＦＤＧＴＲＬＹＥＳＴＫＤＧＫＶＰＳＥＱＫＲＶＱＦＬＧＤＫＮＫＮＣＴＬＳＩＨＰＶＨＬＮＤＳＧＱＬＧＬＲＭＥＳＫＴＥＫＷＭＥＲＩＨＬＮＶＳＥＲＰＦＰＰＨＩＱＬＰＰＥＩＱＥＳＱＥＶＴＬＴＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱＬＱＷＬＬＥＧＶＰＭＲＱＡＡＶＴＳＴＳＬＴＩＫＳＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣＱＬＱＤＡＤＧＫＦＬＳＮＤＴＶＱＬＮＶＫＨＴＰＫＬＥＩＫＶＴＰＳＤＡＩＶＲＥＧＤＳＶＴＭＴＣＥＶＳＳＳＮＰＥＹＴＴＶＳＷＬＫＤＧＴＳＬＫＫＱＮＴＦＴＬＮＬＲＥＶＴＫＤＱＳＧＫＹＣＣＱＶＳＮＤＶＧＰＧＲＳＥＥＶＦＬＱＶＱＹＡＰＥＰＳＴＶＱＩＬＨＳＰＡＶＥＧＳＱＶＥＦＬＣＭＳＬＡＮＰＬＰＴＮＹＴＷＹＨＮＧＫＥＭＱＧＲＴＥＥＫＶＨＩＰＫＩＬＰＷＨＡＧＴＹＳＣＶＡＥＮＩＬＧＴＧＱＲＧＰＧＡＥＬＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲＶＡＶＧＬＧＳＣＬＡＩＬＩＬＡＩＣＧＬＫＬＱＲＲＷＫＲＴＱＳＱＱＧＬＱＥＮＳＳＧＱＳＦＦＶＲＮＫＫＶＲＲＡＰＬＳＥＧＰＨＳＬＧＣＹＮＰＭＭＥＤＧＩＳＹＴＴＬＲＦＰＥＭＮＩＰＲＴＧＤＡＥＳＳＥＭＱＲＰＰＰＤＣＤＤＴＶＴＹＳＡＬＨＫＲＱＶＧＤＹＥＮＶＩＰＤＦＰＥＤＥＧＩＨＹＳＥＬＩＱＦＧＶＧＥＲＰＱＡＱＥＮＶＤＹＶＩＬＫＨ
（１０）骨髄（ｍｙｌｏｉｄ）細胞表面抗原ＣＤ３３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０１３８）、配列番号２２２
＞ｇｉ｜１３０９７９９８１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７６３．３｜骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＭＤＰＮＦＷＬＱＶＱＥＳＶＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＴＦＦＨＰＩＰＹＹＤＫＮＳＰＶＨＧＹＷＦＲＥＧＡＩＩＳＲＤＳＰＶＡＴＮＫＬＤＱＥＶＱＥＥＴＱＧＲＦＲＬＬＧＤＰＳＲＮＮＣＳＬＳＩＶＤＡＲＲＲＤＮＧＳＹＦＦＲＭＥＲＧＳＴＫＹＳＹＫＳＰＱＬＳＶＨＶＴＤＬＴＨＲＰＫＩＬＩＰＧＴＬＥＰＧＨＳＫＮＬＴＣＳＶＳＷＡＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＬＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＨＳＳＶＬＩＩＴＰＲＰＱＤＨＧＴＮＬＴＣＱＶＫＦＡＧＡＧＶＴＴＥＲＴＩＱＬＮＶＴＹＶＰＱＮＰＴＴＧＩＦＰＧＤＧＳＧＫＱＥＴＲＡＧＶＶＨＧＡＩＧＧＡＧＶＴＡＬＬＡＬＣＬＣＬＩＦＦＩＶＫＴＨＲＲＫＡＡＲＴＡＶＧＲＮＤＴＨＰＴＴＧＳＡＳＰＫＨＱＫＫＳＫＬＨＧＰＴＥＴＳＳＣＳＧＡＡＰＴＶＥＭＤＥＥＬＨＹＡＳＬＮＦＨＧＭＮＰＳＫＤＴＳＴＥＹＳＥＶＲＴＱ
（１１）膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ１４９５６）、配列番号２２３
＞ｇｉ｜５２６９４７５２｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１００５３４０．１｜膜貫通糖タンパク質ＮＭＢアイソフォームａ−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＥＣＬＹＹＦＬＧＦＬＬＬＡＡＲＬＰＬＤＡＡＫＲＦＨＤＶＬＧＮＥＲＰＳＡＹＭＲＥＨＮＱＬＮＧＷＳＳＤＥＮＤＷＮＥＫＬＹＰＶＷＫＲＧＤＭＲＷＫＮＳＷＫＧＧＲＶＱＡＶＬＴＳＤＳＰＡＬＶＧＳＮＩＴＦＡＶＮＬＩＦＰＲＣＱＫＥＤＡＮＧＮＩＶＹＥＫＮＣＲＮＥＡＧＬＳＡＤＰＹＶＹＮＷＴＡＷＳＥＤＳＤＧＥＮＧＴＧＱＳＨＨＮＶＦＰＤＧＫＰＦＰＨＨＰＧＷＲＲＷＮＦＩＹＶＦＨＴＬＧＱＹＦＱＫＬＧＲＣＳＶＲＶＳＶＮＴＡＮＶＴＬＧＰＱＬＭＥＶＴＶＹＲＲＨＧＲＡＹＶＰＩＡＱＶＫＤＶＹＶＶＴＤＱＩＰＶＦＶＴＭＦＱＫＮＤＲＮＳＳＤＥＴＦＬＫＤＬＰＩＭＦＤＶＬＩＨＤＰＳＨＦＬＮＹＳＴＩＮＹＫＷＳＦＧＤＮＴＧＬＦＶＳＴＮＨＴＶＮＨＴＹＶＬＮＧＴＦＳＬＮＬＴＶＫＡＡＡＰＧＰＣＰＰＰＰＰＰＰＲＰＳＫＰＴＰＳＬＡＴＴＬＫＳＹＤＳＮＴＰＧＰＡＧＤＮＰＬＥＬＳＲＩＰＤＥＮＣＱＩＮＲＹＧＨＦＱＡＴＩＴＩＶＥＧＩＬＥＶＮＩＩＱＭＴＤＶＬＭＰＶＰＷＰＥＳＳＬＩＤＦＶＶＴＣＱＧＳＩＰＴＥＶＣＴＩＩＳＤＰＴＣＥＩＴＱＮＴＶＣＳＰＶＤＶＤＥＭＣＬＬＴＶＲＲＴＦＮＧＳＧＴＹＣＶＮＬＴＬＧＤＤＴＳＬＡＬＴＳＴＬＩＳＶＰＤＲＤＰＡＳＰＬＲＭＡＮＳＡＬＩＳＶＧＣＬＡＩＦＶＴＶＩＳＬＬＶＹＫＫＨＫＥＹＮＰＩＥＮＳＰＧＮＶＶＲＳＫＧＬＳＶＦＬＮＲＡＫＡＶＦＦＰＧＮＱＥＫＤＰＬＬＫＮＱＥＦＫＧＶＳ
（１２）接着分子ＣＤ５６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１３５９１）、配列番号２２４
＞ｇｉ｜９４４２０６８９｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０００６０６．３｜神経細胞接着分子１アイソフォーム１［ホモ・サピエンス］
ＭＬＱＴＫＤＬＩＷＴＬＦＦＬＧＴＡＶＳＬＱＶＤＩＶＰＳＱＧＥＩＳＶＧＥＳＫＦＦＬＣＱＶＡＧＤＡＫＤＫＤＩＳＷＦＳＰＮＧＥＫＬＴＰＮＱＱＲＩＳＶＶＷＮＤＤＳＳＳＴＬＴＩＹＮＡＮＩＤＤＡＧＩＹＫＣＶＶＴＧＥＤＧＳＥＳＥＡＴＶＮＶＫＩＦＱＫＬＭＦＫＮＡＰＴＰＱＥＦＲＥＧＥＤＡＶＩＶＣＤＶＶＳＳＬＰＰＴＩＩＷＫＨＫＧＲＤＶＩＬＫＫＤＶＲＦＩＶＬＳＮＮＹＬＱＩＲＧＩＫＫＴＤＥＧＴＹＲＣＥＧＲＩＬＡＲＧＥＩＮＦＫＤＩＱＶＩＶＮＶＰＰＴＩＱＡＲＱＮＩＶＮＡＴＡＮＬＧＱＳＶＴＬＶＣＤＡＥＧＦＰＥＰＴＭＳＷＴＫＤＧＥＱＩＥＱＥＥＤＤＥＫＹＩＦＳＤＤＳＳＱＬＴＩＫＫＶＤＫＮＤＥＡＥＹＩＣＩＡＥＮＫＡＧＥＱＤＡＴＩＨＬＫＶＦＡＫＰＫＩＴＹＶＥＮＱＴＡＭＥＬＥＥＱＶＴＬＴＣＥＡＳＧＤＰＩＰＳＩＴＷＲＴＳＴＲＮＩＳＳＥＥＫＴＬＤＧＨＭＶＶＲＳＨＡＲＶＳＳＬＴＬＫＳＩＱＹＴＤＡＧＥＹＩＣＴＡＳＮＴＩＧＱＤＳＱＳＭＹＬＥＶＱＹＡＰＫＬＱＧＰＶＡＶＹＴＷＥＧＮ
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（１３）表面分子ＣＤ７０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ３２９７０）、配列番号２２５
＞ｇｉ｜４５０７６０５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１２４３．１｜ＣＤ７０抗原［ホモ・サピエンス］
ＭＰＥＥＧＳＧＣＳＶＲＲＲＰＹＧＣＶＬＲＡＡＬＶＰＬＶＡＧＬＶＩＣＬＶＶＣＩＱＲＦＡＱＡＱＱＱＬＰＬＥＳＬＧＷＤＶＡＥＬＱＬＮＨＴＧＰＱＱＤＰＲＬＹＷＱＧＧＰＡＬＧＲＳＦＬＨＧＰＥＬＤＫＧＱＬＲＩＨＲＤＧＩＹＭＶＨＩＱＶＴＬＡＩＣＳＳＴＴＡＳＲＨＨＰＴＴＬＡＶＧＩＣＳＰＡＳＲＳＩＳＬＬＲＬＳＦＨＱＧＣＴＩＡＳＱＲＬＴＰＬＡＲＧＤＴＬＣＴＮＬＴＧＴＬＬＰＳＲＮＴＤＥＴＦＦＧＶＱＷＶＲＰ
（１４）表面分子ＣＤ７４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０４２３３）、配列番号２２６
＞ｇｉ｜１０８３５０７１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４３４６．１｜ＨＬＡクラスＩＩ組織適合性抗原γ鎖アイソフォームｂ［ホモ・サピエンス］
ＭＨＲＲＲＳＲＳＣＲＥＤＱＫＰＶＭＤＤＱＲＤＬＩＳＮＮＥＱＬＰＭＬＧＲＲＰＧＡＰＥＳＫＣＳＲＧＡＬＹＴＧＦＳＩＬＶＴＬＬＬＡＧＱＡＴＴＡＹＦＬＹＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ
（１５）Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５３９１）、配列番号２２７
＞ｇｉ｜２９６０１０９２１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１１７１５６９．１｜Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲＥＡＴＳＬＡＧＳＱＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭＧＴＷＳＴＲ
（１６）表面タンパク質ムチン−１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５９４１）、配列番号２２８
＞ｇｉ｜６５３０１１１７｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２４４７．４｜ムチン−１アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＴＰＧＴＱＳＰＦＦＬＬＬＬＬＴＶＬＴＶＶＴＧＳＧＨＡＳＳＴＰＧＧＥＫＥＴＳＡＴＱＲＳＳＶＰＳＳＴＥＫＮＡＬＳＴＧＶＳＦＦＦＬＳＦＨＩＳＮＬＱＦＮＳＳＬＥＤＰＳＴＤＹＹＱＥＬＱＲＤＩＳＥＭＦＬＱＩＹＫＱＧＧＦＬＧＬＳＮＩＫＦＲＰＧＳＶＶＶＱＬＴＬＡＦＲＥＧＴＩＮＶＨＤＶＥＴＱＦＮＱＹＫＴＥＡＡＳＲＹＮＬＴＩＳＤＶＳＶＳＤＶＰＦＰＦＳＡＱＳＧＡＧＶＰＧＷＧＩＡＬＬＶＬＶＣＶＬＶＡＬＡＩＶＹＬＩＡＬＡＶＣＱＣＲＲＫＮＹＧＱＬＤＩＦＰＡＲＤＴＹＨＰＭＳＥＹＰＴＹＨＴＨＧＲＹＶＰＰＳＳＴＤＲＳＰＹＥＫＶＳＡＧＮＧＧＳＳＬＳＹＴＮＰＡＶＡＡＴＳＡＮＬ
（１７）表面タンパク質ＣＤ１３８（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１８８２７）、配列番号２２９
＞ｇｉ｜２９５６８０８６｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２９８８．３｜シンデカン−１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＲＡＡＬＷＬＷＬＣＡＬＡＬＳＬＱＰＡＬＰＱＩＶＡＴＮＬＰＰＥＤＱＤＧＳＧＤＤＳＤＮＦＳＧＳＧＡＧＡＬＱＤＩＴＬＳＱＱＴＰＳＴＷＫＤＴＱＬＬＴＡＩＰＴＳＰＥＰＴＧＬＥＡＴＡＡＳＴＳＴＬＰＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰＥＶＥＰＧＬＴＡＲＥＱＥＡＴＰＲＰＲＥＴＴＱＬＰＴＴＨＱＡＳＴＴＴＡＴＴＡＱＥＰＡＴＳＨＰＨＲＤＭＱＰＧＨＨＥＴＳＴＰＡＧＰＳＱＡＤＬＨＴＰＨＴＥＤＧＧＰＳＡＴＥＲＡＡＥＤＧＡＳＳＱＬＰＡＡＥＧＳＧＥＱＤＦＴＦＥＴＳＧＥＮＴＡＶＶＡＶＥＰＤＲＲＮＱＳＰＶＤＱＧＡＴＧＡＳＱＧＬＬＤＲＫＥＶＬＧＧＶＩＡＧＧＬＶＧＬＩＦＡＶＣＬＶＧＦＭＬＹＲＭＫＫＫＤＥＧＳＹＳＬＥＥＰＫＱＡＮＧＧＡＹＱＫＰＴＫＱＥＥＦＹＡ
（１８）インテグリンαＶ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２０１．１）、配列番号２３０
＞ｇｉ｜４５０４７６３｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２２０１．１｜インテグリンα−Ｖアイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＡＦＰＰＲＲＲＬＲＬＧＰＲＧＬＰＬＬＬＳＧＬＬＬＰＬＣＲＡＦＮＬＤＶＤＳＰＡＥＹＳＧＰＥＧＳＹＦＧＦＡＶＤＦＦＶＰＳＡＳＳＲＭＦＬＬＶＧＡＰＫＡＮＴＴＱＰＧＩＶＥＧＧＱＶＬＫＣＤＷＳＳＴＲＲＣＱＰＩＥＦＤＡＴＧＮＲＤＹＡＫＤＤＰＬＥＦＫＳＨＱＷＦＧＡＳＶＲＳＫＱＤＫＩＬＡＣＡＰＬＹＨＷＲＴＥＭＫＱＥＲＥＰＶＧＴＣＦＬＱＤＧＴＫＴＶＥＹＡＰＣＲＳＱＤＩＤＡＤＧＱＧＦＣＱＧＧＦＳＩＤＦＴＫＡＤＲＶＬＬＧＧＰＧＳＦＹＷＱＧＱＬＩＳＤＱＶＡＥＩＶＳＫＹＤＰＮＶＹＳＩＫＹＮＮＱＬＡＴＲＴＡＱＡＩＦＤＤＳＹＬＧＹＳＶＡＶＧＤＦＮＧＤＧＩＤＤＦＶＳＧＶＰＲＡＡＲＴＬＧＭＶＹＩＹＤＧＫＮＭＳＳＬＹＮＦＴＧＥＱＭＡＡＹＦＧＦＳＶＡＡＴＤＩＮＧＤＤＹＡＤＶＦＩＧＡＰＬＦＭＤＲＧＳＤＧＫＬＱＥＶＧＱＶＳＶＳＬＱＲＡＳＧＤＦＱＴＴＫＬＮＧＦＥＶＦＡＲＦＧＳＡＩＡＰＬＧＤＬＤＱＤＧＦＮＤＩＡＩＡＡＰＹＧＧＥＤＫＫＧＩＶＹＩＦＮＧＲＳＴＧＬＮＡＶＰＳＱＩＬＥＧＱＷＡＡＲＳＭＰＰＳＦＧＹＳＭＫＧＡＴＤＩＤＫＮＧＹＰＤＬＩＶＧＡＦＧＶＤＲＡＩＬＹＲＡＲＰＶＩＴＶＮＡＧＬＥＶＹＰＳＩＬＮＱＤＮＫＴＣＳＬＰＧＴＡＬＫＶＳＣＦＮＶＲＦＣＬＫＡＤＧＫＧＶＬＰＲＫＬＮＦＱＶＥＬＬＬＤＫＬＫＱＫＧＡＩＲＲＡＬＦＬＹＳＲＳＰＳＨＳＫＮＭＴＩＳＲＧＧＬＭＱＣＥＥＬＩＡＹＬＲＤＥＳＥＦＲＤＫＬＴＰＩＴＩＦＭＥＹＲＬＤＹＲＴＡＡＤＴＴＧＬＱＰＩＬＮＱＦＴＰＡＮＩＳＲＱＡＨＩＬＬＤＣＧＥＤＮＶＣＫＰＫＬＥＶＳＶＤＳＤＱＫＫＩＹＩＧＤＤＮＰＬＴＬＩＶＫＡＱＮＱＧＥＧＡＹＥＡＥＬＩＶＳＩＰＬＱＡＤＦＩＧＶＶＲＮＮＥＡＬＡＲＬＳＣＡＦＫＴＥＮＱＴＲＱＶＶＣＤＬＧＮＰＭＫＡＧＴＱＬＬＡＧＬＲＦＳＶＨＱＱＳＥＭＤＴＳＶＫＦＤＬＱＩＱＳＳＮＬＦＤＫＶＳＰＶＶＳＨＫＶＤＬＡＶＬＡＡＶＥＩＲＧＶＳＳＰＤＨＩＦＬＰＩＰＮＷＥＨＫＥＮＰＥＴＥＥＤＶＧＰＶＶＱＨＩＹＥＬＲＮＮＧＰＳＳＦＳＫＡＭＬＨＬＱＷＰＹＫＹＮＮＮＴＬＬＹＩＬＨＹＤＩＤＧＰＭＮＣＴＳＤＭＥＩＮＰＬＲＩＫＩＳＳＬＱＴＴＥＫＮＤＴＶＡＧＱＧＥＲＤＨＬＩＴＫＲＤＬＡＬＳＥＧＤＩＨＴＬＧＣＧＶＡＱＣＬＫＩＶＣＱＶＧＲＬＤＲＧＫＳＡＩＬＹＶＫＳＬＬＷＴＥＴＦＭＮＫＥＮＱＮＨＳＹＳＬＫＳＳＡＳＦＮＶＩＥＦＰＹＫＮＬＰＩＥＤＩＴＮＳＴＬＶＴＴＮＶＴＷＧＩＱＰＡＰＭＰＶＰＶＷＶＩＩＬＡＶＬＡＧＬＬＬＬＡＶＬＶＦＶＭＹＲＭＧＦＦＫＲＶＲＰＰＱＥＥＱＥＲＥＱＬＱＰＨＥＮＧＥＧＮＳＥＴ
（１９）奇形癌由来増殖因子１タンパク質ＴＤＧＦ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００３２０３．１）、配列番号２３１
＞ｇｉ｜４５０７４２５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００３２０３．１｜奇形癌由来増殖因子１アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＤＣＲＫＭＡＲＦＳＹＳＶＩＷＩＭＡＩＳＫＶＦＥＬＧＬＶＡＧＬＧＨＱＥＦＡＲＰＳＲＧＹＬＡＦＲＤＤＳＩＷＰＱＥＥＰＡＩＲＰＲＳＳＱＲＶＰＰＭＧＩＱＨＳＫＥＬＮＲＴＣＣＬＮＧＧＴＣＭＬＧＳＦＣＡＣＰＰＳＦＹＧＲＮＣＥＨＤＶＲＫＥＮＣＧＳＶＰＨＤＴＷＬＰＫＫＣＳＬＣＫＣＷＨＧＱＬＲＣＦＰＱＡＦＬＰＧＣＤＧＬＶＭＤＥＨＬＶＡＳＲＴＰＥＬＰＰＳＡＲＴＴＴＦＭＬＶＧＩＣＬＳＩＱＳＹＹ
（２０）前立腺特異的膜抗原ＰＳＭＡ（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ０４６０９）、配列番号２３２
＞ｇｉ｜４７５８３９８｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４６７．１｜グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ２アイソフォーム１［ホモ・サピエンス］
ＭＷＮＬＬＨＥＴＤＳＡＶＡＴＡＲＲＰＲＷＬＣＡＧＡＬＶＬＡＧＧＦＦＬＬＧＦＬＦＧＷＦＩＫＳＳＮＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＹＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＡＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＰＧＹＥＮＶＳＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＫＧＶＩＬＹＳＤＰＡＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＲＧＩＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＰＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＮＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＴＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＨＮＬＴＫＥＬＫＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＧＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＩＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＳＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＳＥＲＬＱＤＦＤＫＳＮＰＩＶＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＫＡＷＧＥＶＫＲＱＩＹＶＡＡＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ
（２１）チロシンタンパク質キナーゼＥＰＨＡ２（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２９３１７）、配列番号２３３
＞ｇｉ｜３２９６７３１１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４２２．２｜エフリンＡ型受容体２−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＥＬＱＡＡＲＡＣＦＡＬＬＷＧＣＡＬＡＡＡＡＡＡＱＧＫＥＶＶＬＬＤＦＡＡＡＧＧＥＬＧＷＬＴＨＰＹＧＫＧＷＤＬＭＱＮＩＭＮＤＭＰＩＹＭＹＳＶＣＮＶＭＳＧＤＱＤＮＷＬＲＴＮＷＶＹＲＧＥＡＥＲＩＦＩＥＬＫＦＴＶＲＤＣＮＳＦＰＧＧＡＳＳＣＫＥＴＦＮＬＹＹＡＥＳＤＬＤＹＧＴＮＦＱＫＲＬＦＴＫＩＤＴＩＡＰＤＥＩＴＶＳＳＤＦＥＡＲＨＶＫＬＮＶＥＥＲＳＶＧＰＬＴＲＫＧＦＹＬＡＦＱＤＩＧＡＣＶＡＬＬＳＶＲＶＹＹＫＫＣＰＥＬＬＱＧＬＡＨＦＰＥＴＩＡＧＳＤＡＰＳＬＡＴＶＡＧＴＣＶＤＨＡＶＶＰＰＧＧＥＥＰＲＭＨＣＡＶＤＧＥＷＬＶＰＩＧＱＣＬＣＱＡＧＹＥＫＶＥＤＡＣＱＡＣＳＰＧＦＦＫＦＥＡＳＥＳＰＣＬＥＣＰＥＨＴＬＰＳＰＥＧＡＴＳＣＥＣＥＥＧＦＦＲＡＰＱＤＰＡＳＭＰＣＴＲＰＰＳＡＰＨＹＬＴＡＶＧＭＧＡＫＶＥＬＲＷＴＰＰＱＤＳＧＧＲＥＤＩＶＹＳＶＴＣＥＱＣＷＰＥＳＧＥＣＧＰＣＥＡＳＶＲＹＳＥＰＰＨＧＬＴＲＴＳＶＴＶＳＤＬＥＰＨＭＮＹＴＦＴＶＥＡＲＮＧＶＳＧＬＶＴＳＲＳＦＲＴＡＳＶＳＩＮＱＴＥＰＰＫＶＲＬＥＧＲＳＴＴＳＬＳＶＳＷＳＩＰＰＰＱＱＳＲＶＷＫＹＥＶＴＹＲＫＫＧＤＳＮＳＹＮＶＲＲＴＥＧＦＳＶＴＬＤＤＬＡＰＤＴＴＹＬＶＱＶＱＡＬＴＱＥＧＱＧＡＧＳＫＶＨＥＦＱＴＬＳＰＥＧＳＧＮＬＡＶＩＧＧＶＡＶＧＶＶＬＬＬＶＬＡＧＶＧＦＦＩＨＲＲＲＫＮＱＲＡＲＱＳＰＥＤＶＹＦＳＫＳＥＱＬＫＰＬＫＴＹＶＤＰＨＴＹＥＤＰＮＱＡＶＬＫＦＴＴＥＩＨＰＳＣＶＴＲＱＫＶＩＧＡＧＥＦＧＥＶＹＫＧＭＬＫＴＳＳＧＫＫＥＶＰＶＡＩＫＴＬＫＡＧＹＴＥＫＱＲＶＤＦＬＧＥＡＧＩＭＧＱＦＳＨＨＮＩＩＲＬＥＧＶＩＳＫＹＫＰＭＭＩＩＴＥＹＭＥＮＧＡＬＤＫＦＬＲＥＫＤＧＥＦＳＶＬＱＬＶＧＭＬＲＧＩＡＡＧＭＫＹＬＡＮＭＮＹＶＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＶＮＳＮＬＶＣＫＶＳＤＦＧＬＳＲＶＬＥＤＤＰＥＡＴＹＴＴＳＧＧＫＩＰＩＲＷＴＡＰＥＡＩＳＹＲＫＦＴＳＡＳＤＶＷＳＦＧＩＶＭＷＥＶＭＴＹＧＥＲＰＹＷＥＬＳＮＨＥＶＭＫＡＩＮＤＧＦＲＬＰＴＰＭＤＣＰＳＡＩＹＱＬＭＭＱＣＷＱＱＥＲＡＲＲＰＫＦＡＤＩＶＳＩＬＤＫＬＩＲＡＰＤＳＬＫＴＬＡＤＦＤＰＲＶＳＩＲＬＰＳＴＳＧＳＥＧＶＰＦＲＴＶＳＥＷＬＥＳＩＫＭＱＱＹＴＥＨＦＭＡＡＧＹＴＡＩＥＫＶＶＱＭＴＮＤＤＩＫＲＩＧＶＲＬＰＧＨＱＫＲＩＡＹＳＬＬＧＬＫＤＱＶＮＴＶＧＩＰＩ
（２２）表面タンパク質ＳＬＣ４４Ａ４（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１１７１５１５）、配列番号２３４
＞ｇｉ｜２９５８４９２８２｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１１７１５１５．１｜コリントランスポーター様タンパク質４アイソフォーム２［ホモ・サピエンス］
ＭＧＧＫＱＲＤＥＤＤＥＡＹＧＫＰＶＫＹＤＰＳＦＲＧＰＩＫＮＲＳＣＴＤＶＩＣＣＶＬＦＬＬＦＩＬＧＹＩＶＶＧＩＶＡＷＬＹＧＤＰＲＱＶＬＹＰＲＮＳＴＧＡＹＣＧＭＧＥＮＫＤＫＰＹＬＬＹＦＮＩＦＳＣＩＬＳＳＮＩＩＳＶＡＥＮＧＬＱＣＰＴＰＱＴＶＩＴＳＬＱＱＥＬＣＰＳＦＬＬＰＳＡＰＡＬＧＲＣＦＰＷＴＮＶＴＰＰＡＬＰＧＩＴＮＤＴＴＩＱＱＧＩＳＧＬＩＤＳＬＮＡＲＤＩＳＶＫＩＦＥＤＦＡＱＳＷＹＷＩＬＶＡＬＧＶＡＬＶＬＳＬＬＦＩＬＬＬＲＬＶＡＧＰＬＶＬＶＬＩＬＧＶＬＧＶＬＡＹＧＩＹＹＣＷＥＥＹＲＶＬＲＤＫＧＡＳＩＳＱＬＧＦＴＴＮＬＳＡＹＱＳＶＱＥＴＷＬＡＡＬＩＶＬＡＶＬＥＡＩＬＬＬＭＬＩＦＬＲＱＲＩＲＩＡＩＡＬＬＫＥＡＳＫＡＶＧＱＭＭＳＴＭＦＹＰＬＶＴＦＶＬＬＬＩＣＩＡＹＷＡＭＴＡＬＹＬＡＴＳＧＱＰＱＹＶＬＷＡＳＮＩＳＳＰＧＣＥＫＶＰＩＮＴＳＣＮＰＴＡＨＬＶＮＳＳＣＰＧＬＭＣＶＦＱＧＹＳＳＫＧＬＩＱＲＳＶＦＮＬＱＩＹＧＶＬＧＬＦＷＴＬＮＷＶＬＡＬＧＱＣＶＬＡＧＡＦＡＳＦＹＷＡＦＨＫＰＱＤＩＰＴＦＰＬＩＳＡＦＩＲＴＬＲＹＨＴＧＳＬＡＦＧＡＬＩＬＴＬＶＱＩＡＲＶＩＬＥＹＩＤＨＫＬＲＧＶＱＮＰＶＡＲＣＩＭＣＣＦＫＣＣＬＷＣＬＥＫＦＩＫＦＬＮＲＮＡＹＩＭＩＡＩＹＧＫＮＦＣＶＳＡＫＮＡＦＭＬＬＭＲＮＩＶＲＶＶＶＬＤＫＶＴＤＬＬＬＦＦＧＫＬＬＶＶＧＧＶＧＶＬＳＦＦＦＦＳＧＲＩＰＧＬＧＫＤＦＫＳＰＨＬＮＹＹＷＬＰＩＭＴＳＩＬＧＡＹＶＩＡＳＧＦＦＳＶＦＧＭＣＶＤＴＬＦＬＣＦＬＥＤＬＥＲＮＮＧＳＬＤＲＰＹＹＭＳＫＳＬＬＫＩＬＧＫＫＮＥＡＰＰＤＮＫＫＲＫＫ
（２３）表面タンパク質ＢＭＰＲ１Ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ００２３８）
（２４）輸送タンパク質ＳＬＣ７Ａ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ０１６５０）
（２５）表皮前立腺抗原ＳＴＥＡＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＥ８）
（２６）卵巣癌抗原ＭＵＣ１６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＷＸＩ７）
（２７）輸送タンパク質ＳＬＣ３４Ａ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ９５４３６）
（２８）表面タンパク質ＳＥＭＡ５ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９Ｐ２８３）
（２９）表面タンパク質ＬＹＰＤ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８Ｎ２Ｇ４）
（３０）エンドセリン受容体Ｂ型ＥＤＮＲＢ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２４５３０）
（３１）薬指タンパク質ＲＮＦ４３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ６８ＤＶ７）
（３２）前立腺癌関連タンパク質ＳＴＥＡＰ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＮＦＴ２）
（３３）カチオンチャンネルＴＲＰＭ４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＴＤ４３）
（３４）補体受容体ＣＤ２１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２００２３）
（３５）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０２５９）
（３６）細胞接着抗原ＣＥＡＣＡＭ６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０１９９）
（３７）ジペプチダーゼＤＰＥＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１６４４４）
（３８）インターロイキン受容体ＩＬ２０Ｒα（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＦ４）
（３９）プロテオグリカンＢＣＡＮ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＧＷ７）
（４０）エフリン受容体ＥＰＨＢ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２９３２３）
（４１）前立腺幹細胞関連タンパク質ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００５６６３．２）
（４２）表面タンパク質ＬＨＦＰＬ３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８６ＵＰ９）
（４３）受容体タンパク質ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＪ３）
（４４）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ａ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１９１２）
（４５）受容体タンパク質ＣＸＣＲ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ３２３０２）
（４６）イオンチャンネルＰ２Ｘ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９３０８６）
（４７）リンパ球抗原ＣＤ１８０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９９４６７）
（４８）受容体タンパク質ＦＣＲＬ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＬＡ６）
（４９）受容体タンパク質ＦＣＲＬ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＤ９）
（５０）ＭＨＣクラスＩＩ分子Ｉａ抗原ＨＬＡ−ＤＯＢ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２１１１．１）
（５１）Ｔ細胞タンパク質ＶＴＣＮ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ７Ｄ３）
（５２）ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９（タンパク質）；配列番号１７０（ＤＮＡ）
（５３）リンパ球抗原ＣＤ３７（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１０４９）
（５４）ＦＧＦ受容体２；ＦＧＦＲ２（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２２６３；公式記号：ＦＧＦＲ２）．ＦＧＦＲ２受容体は、各種スプライス変異体（α、β、ＩＩＩｂ、ＩＩＩｃ）で生じる。全てのスプライス変異体が標的分子として働き得る。
（５５）膜貫通糖タンパク質Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；Ｇｅｎｅ ＩＤ：８０３８１．
（５６）Ｂ細胞受容体ＢＡＦＦＲ（ＣＤ２６８；Ｇｅｎｅ ＩＤ：１１５６５０）
（５７）受容体タンパク質ＲＯＲ１（Ｇｅｎｅ ＩＤ：４９１９）
（５８）表面受容体ＩＬ３ＲＡ（ＣＤ１２３；Ｇｅｎｅ ＩＤ：３５６１）
（５９）ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ５（ＣＤ１８５；Ｇｅｎｅ ＩＤ６４３）
（６０）受容体タンパク質シンシチン（Ｇｅｎｅ ＩＤ３０８１６）。
本発明の好ましい主題において、癌標的分子は、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される細胞外癌標的分子に結合する。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される細胞外癌標的分子に特異的に結合する。好ましい実施形態において、バインダーは、標的細胞上のそれの細胞外標的分子への結合後に、その結合の結果として標的細胞によって内在化される。これによって、免疫複合体またはＡＤＣであることができるバインダー−薬物複合体が、標的細胞によって取り込まれることになる。次に、バインダーが、好ましくは細胞内で、好ましくはリソソームで処理される。
１実施形態において、バインダーは、結合タンパク質である。好ましい実施形態において、バインダーは、抗体、脱グリコシル化抗体、抗原結合抗体断片、多特異的抗体または抗体模倣体である。
好ましい抗体模倣体は、アフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビメール類、またはナノボディ類である。好ましい多特異的抗体は、二重特異性および三重特異性抗体である。
好ましい実施形態において、バインダーは、抗体または抗原結合抗体断片、より好ましくは単離抗体または単離抗原結合抗体断片である。
好ましい抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異性抗体、ＤＡｂｓ、直鎖抗体およびｓｃＦｖである。特に好ましいのは、Ｆａｂ、二重特異性抗体およびｓｃＦｖである。
特に好ましい実施形態において、バインダーは抗体である。特に好ましいのは、モノクローナル抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。さらなる特に好ましいものは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。
癌標的分子に結合する抗体または抗原結合抗体断片は、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。癌標的分子についてのバインダーは、商業的に入手できるか、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。抗体または抗原結合性抗体断片を作るさらなる方法については、ＷＯ２００７／０７０５３８に記載されている（２２頁「抗体」参照）。当業者であれば、ファージ提示ライブラリー（例えばＭｏｒｐｈｏｓｙｓ ＨｕＣＡＬ Ｇｏｌｄ）などのプロセスを収集および使用して抗体または抗原結合性抗体断片を発見する方法については知っている（ＷＯ２００７／０７０５３８、２４頁以降および７０頁のＡＫ実施例１、７２頁のＡＫ実施例２参照）。Ｂ細胞からのＤＮＡライブラリーを用いるさらなる抗体取得方法が、例えば２６頁（ＷＯ２００７／０７０５３８）に記載されている。ヒト化抗体についてのプロセスは、ＷＯ２００７０７０５３８の３０−３２頁に記載されており、Ｑｕｅｅｎ、ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３， １９８９またはＷＯ９０／０７８６に詳細に記載されている。さらに、タンパク質一般および特に抗体の組換え発現方法は当業者には公知である（例えば、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｒｎｅｌ （Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｖｏ１． Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．； １９８９） Ｖｏｌ． １−３）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｆ． Ｍ． Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ［Ｅｄｓ．］， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ／ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．）； Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８８１， Ｐａｕｌ ［Ｅｄ．］）； Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （１９９８））； ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ， ｅｔ ａｌ．， （Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９９８）参照）。当業者であれば、タンパク質／抗体の発現に必要な相当するベクター、プロモーターおよびシグナルペプチドは知っている。通常プロセスが、ＷＯ２００７／０７０５３８の４１−４５頁にも記載されている。ＩｇＧ１抗体の取得方法が、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の７４頁以降の実施例６に記載されている。抗原への結合後の抗体の内在化の決定を可能とするプロセスが当業者には公知であり、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の８０頁に記載されている。当業者は、異なる標的分子特異性を有する抗体の作製と同様にして炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｍｎ）抗体を作るのに用いられているＷＯ２００７／０７０５３８に記載の方法を用いることができる。
抗ＥＧＦＲ抗体
癌標的分子ＥＧＦＲに結合する抗体の例は、セツキシマブ（ＩＮＮ番号７９０６）、パニツムマブ（ＩＮＮ番号８４９９）およびニモツズマブ（ＩＮＮ番号８５４５）．セツキシマブ（Ｄｒｕｇ Ｂａｎｋ受託番号ＤＢ００００２）は、ＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞で産生され、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ／Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．によって販売されているキメラ抗ＥＧＦＲ１抗体である。セツキシマブは、野生型Ｋ−Ｒａｓ遺伝子を有する転移性でＥＧＦＲ発現性の結腸直腸癌の治療に適応される。それは、１０−１０Ｍのアフィニティを有する。
配列：
セツキシマブ軽鎖（κ）、配列番号２３５：
ＤＩＬＬＴＱＳＰＶＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＮＩＨＷＹＱＱＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＮＮＮＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
セツキシマブ重鎖、配列番号２３６：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＮＴＤＹＮＴＰＦＴＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＳＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＡＬＴＹＹＤＹＥＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
パニツムマブ（ＩＮＮ番号８４９９）（Ｄｒｕｇ Ｂａｎｋ受託番号ＤＢ０１２６９）は、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎによって販売されているヒトＥＧＦ受容体１に特異的に結合する組み換えモノクローナルヒトＩｇＧ２抗体である。パニツムマブは、トランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ）の免疫化が起源である。これらのマウスは、ヒト免疫グロブリン（軽および重鎖）を産生することができる。ＥＧＦＲに対する抗体を産生する特異的Ｂ細胞クローンが選択されており、このクローンはＣＨＯ細胞によって不死化されている（チャイニーズハムスター卵巣細胞）。これらの細胞は現在、１００％ヒト抗体の産生に用いられている。パニツムマブは、フルオロピリミジン、オキサリプラチンおよびイリノテカンによる化学療法に抵抗性であるＥＧＦＲ発現性の転移性結腸直腸癌の治療に適応される。それは、１０−１１Ｍのアフィニティを有する。
配列：
パニツムマブ軽鎖（κ）、配列番号２３７：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＨＦＤＨＬＰＬＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
パニツムマブ重鎖、配列番号２３８：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＶＳＳＧＤＹＹＷＴＷＩＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＨＩＹＹＳＧＮＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＳＩＤＴＳＫＴＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＩＹＹＣＶＲＤＲＶＴＧＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ニモツズマブ（ＩＮＮ番号８５４５）（ＥＰ００５８６００２、ＥＰ００７１２８６３）は、ヒトＥＧＦ受容体１に特異的に結合し、ＹＭ ＢｉｏＳｃｉｅｎｅｃｓ Ｉｎｃ． （Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ Ｃａｎａｄａ）によって販売されているヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。それは、非分泌性ＮＳＯ細胞（哺乳動物細胞系）で産生される。ニモツズマブは、頭頸部腫瘍、極めて悪性の星状細胞腫および多形性膠芽腫（ＥＵおよびＵＳでは未承認）および膵臓癌（オーファンドラッグ、ＥＭＡ）の治療用に承認されている。それは、１０−８Ｍのアフィニティを有する。
ニモツズマブ軽鎖（配列番号２３９）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＤＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＦＱＹＳＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＱＩＴＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ニモツズマブ重鎖（配列番号２４０）：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＴＳＧＧＳＮＦＮＥＫＦＫＴＲＶＴＩＴＡＤＥＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＦＹＦＣＴＲＱＧＬＷＦＤＳＤＧＲＧＦＤＦＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
ＥＧＦＲ抗体のさらなる実施形態は、次の通りである。
●ザルツムマブ／２Ｆ８／ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ、Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓから（ＷＯ０２／１００３４８、ＷＯ２００４／０５６８４７、ＩＮＮ番号８６０５）
●ネシツムマブ／１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ／ＩＭＣ−１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．［Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ＆ Ｃｏ］から（ＷＯ２００５／０９０４０７（ＥＰ０１７３５３４８−Ａ１、ＵＳ２００７／０２６４２５３−Ａ１、ＵＳ７，５９８，３５０、ＷＯ２００５／０９０４０７−Ａ１）、ＩＮＮ番号９０８３）
●マツズマブ／抗ＥＧＦＲＭＡｂ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／抗ＥＧＦＲ ＭＡｂ、Ｔａｋｅｄａ／ＥＭＤ７２０００／ＥＭＤ−６２００／ＥＭＤ−７２０００およびＥＭＤ−５５９００／ＭＡｂ４２５／モノクローナル抗体４２５、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／Ｔａｋｅｄａから（ＷＯ９２／１５６８３、ＩＮＮ番号８１０３（マツズマブ））
●ＲＧ−７１６０／ＧＡ−２０１／ＧＡ２０１／Ｒ−７１６０／Ｒ７１６０／ＲＧ７１６０／ＲＯ−４８５８６９６／ＲＯ−５０８３９４５／ＲＯ４８５８６９６／ＲＯ５０８３９４５、Ｇｌｙｃａｒｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ（Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧ）から（ＷＯ２０１０／１１２４１３−Ａ１、ＷＯ２０１０／１１５５５４）
●ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ／ＣｅｔｕＧＥＸ、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ ＧＭＢＨ（ＷＯ２００８／０２８６８６−Ａ２から（ＥＰ０１９００７５０−Ａ１、ＥＰ０１９１１７６６−Ａ１、ＥＰ０２０７３８４２−Ａ２、ＵＳ２０１０／００２８９４７−Ａ１）
●ＩＳＵ−１０１、Ｉｓｕ Ａｂｘｉｓ Ｉｎｃ（ＩＳＵ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ Ｌｔｄ）／Ｓｃａｎｃｅｌｌから（ＷＯ２００８／００４８３４−Ａ１）
●ＡＢＴ−８０６／ｍＡｂ−８０６／ｃｈ−８０６／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ａｂｂｏｔｔ／Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから（ＷＯ０２／０９２７７１、ＷＯ２００５／０８１８５４およびＷＯ２００９／０２３２６５）
●ＳＹＭ−００４（二つのキメラＩｇＧ１抗体（９９２および１０２４）からなる）、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓから（ＷＯ２０１０／０２２７３６−Ａ２）
●ＭＲ１−１／ＭＲ１−１ＫＤＥＬ、ＩＶＡＸ Ｃｏｒｐ（Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｔｄ）から（Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、（特許：ＷＯ２００１／０６２９３１−Ａ２）
●欠失変異体に対する抗体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ａｍｇｅｎ／Ａｂｇｅｎｉｘから（ＷＯ２００５／０１０１５１、ＵＳ７，６２８，９８６）
●ＳＣ−１００、Ｓｃａｎｃｅｌｌ Ｌｔｄから（ＷＯ０１／０８８１３８−Ａ１）
●ＭＤＸ−４４７／ＥＭＤ８２６３３／ＢＡＢ−４４７／Ｈ４４７／ＭＡｂ、ＥＧＦＲ、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ（ＵＳ）／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＥ）／Ｔａｋｅｄａ（ＪＰ）から、（ＷＯ９１／０５８７１、ＷＯ９２／１５６８３）
●抗ＥＧＦＲ−Ｍａｂ、Ｘｅｎｃｏｒから（ＷＯ２００５／０５６６０６）
●ＤＸＬ−１２１８／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（癌）、ＩｎＮｅｘｕｓ、ＩｎＮｅｘｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃから、Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ ＰＨ０４８６３８。
好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブ、ＲＧ−７１６、ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ、ＩＳＵ−１０１、ＡＢＴ−８０６、ＳＹＭ−００４、ＭＲ１−１、ＳＣ−１００、ＭＤＸ−４４７およびＤＸＬ−１２１８からなる群から選択される。
特に好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブおよびマツズマブからなる群から選択される。
当業者であれば、配列変化によって上記の抗体のＣＤＲ領域からさらなる抗体を製造するのに用いることができる方法については知っており、これらのさらなる抗体は、標的分子についての同様もしくはより良好なアフィニティおよび／または特異性を有する。
さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体または抗原結合抗体断片は、次の抗体：セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブ、ＲＧ−７１６、ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ、ＩＳＵ−１０１、ＡＢＴ−８０６、ＳＹＭ−００４、ＭＲ１−１、ＳＣ−１００、ＭＤＸ−４４７およびＤＸＬ−１２１８のうちの一つの軽鎖の３つのＣＤＲ領域および重鎖の３つのＣＤＲ領域を含む抗体または抗原結合抗体断片からなる群から選択される。
さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体または抗原結合抗体断片は、次の抗体：セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブのうちの一つの軽鎖の３つのＣＤＲ領域および重鎖の３つのＣＤＲ領域を含む抗体または抗原結合抗体断片からなる群から選択される。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらを本発明の文脈で用いることができる。
抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体
癌標的分子炭酸脱水酵素ＩＸに結合する抗体の例が、ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２（例えば、請求項１から１６）に記載されている。
好ましい実施形態において、抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体または抗原結合抗体断片は、抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体または抗原結合抗体断片３ｅｅ９（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ａ））、３ｅｆ２（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｂ））、１ｅ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｃ））、３ａ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｄ））、３ａｂ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｅ））、３ａｈ１０（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｆ））、３ｂｂ２（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｇ））、１ａａ１（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｈ））、５ａ６（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｉ））および５ａａ３（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｊ））からなる群から選択される。
抗Ｃ４．４ａ抗体：
本発明によれば、Ｃ４．４ａ抗体を用いることができる。
Ｃ４．４ａ抗体および抗原結合性断片の例は、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２に記載されている。参照によって、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の全ての抗体は本明細書に組み込まれ、それらを本発明で用いることができる。その抗体の配列がＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表１にあり、その表中で各列は、第１欄に挙げられた抗体の可変軽鎖または可変重鎖の個々のＣＤＲアミノ酸配列を示している。
１実施形態において、抗Ｃ４．４ａ抗体またはそれの抗原結合抗体断片は、Ｃ４．４ａを発現する細胞に結合した後に、その細胞によって内在化される。
さらなる実施形態において、抗Ｃ４．４ａ抗体または抗原結合抗体断片は、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表１またはＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表２に挙げた抗体の少なくとも一つ、二つまたは三つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。そのような抗体の好ましい実施形態も同様に、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２に列記されており、参照によって本明細書に組み込まれる。
抗ＨＥＲ２抗体：
癌標的分子Ｈｅｒ２に結合する抗体の例には、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）がある。トラスツズマブは、特に乳癌治療に用いられるヒト化抗体である。
ＨＥＲ２に結合する抗体のさらなる例は、トラスツズマブ（ＩＮＮ７６３７、ＣＡＳ番号：ＲＮ：１８０２８８−６９−１）およびペルツズマブ（ＣＡＳ番号３８０６１０−２７−５）に加えて、ＷＯ２００９／１２３８９４−Ａ２、ＷＯ２００／８１４０６０３−Ａ２またはＷＯ２０１１／０４４３６８−Ａ２に開示の抗体である。抗ＨＥＲ２複合体の例は、トラスツズマブ−エムタンシン（ＩＮＮ番号９２９５）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。さらに、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって製造されるトラスツズマブの脱グリコシル化変異体を用いることが可能である。さらに、トランスグルタミナーゼ介在反応用に１以上のアクセプターグルタミンを含むように改変された抗体の変異体を用いることも可能である。
抗ＣＤ２０抗体：
癌標的分子ＣＤ２０に結合する抗体の例は、リツキシマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。リツキシマブ（ＣＡＳ番号：１７４７２２−３１−７）は、非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるキメラ抗体である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ５２抗体：
癌標的分子ＣＤ５２に結合する抗体の例は、アレムツズマブ（Ｇｅｎｚｙｍｅ）である。アレムツズマブ（ＣＡＳ番号：２１６５０３−５７−０）は、慢性リンパ性白血病の治療に用いられるヒト化抗体である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗メソテリン抗体：
抗メソテリン抗体の例が、例えばＷＯ２００９／０６８２０４に記載されている。参照によって、ＷＯ２００９／０６８２０４に記載の全ての抗体が、本記載に組み込まれることで、これら抗体を、本明細書に開示の本発明の文脈で用いることができる。
本発明に従って用いられる抗メソテリン抗体は、好ましくはメソテリンに結合する不変異体においても注目すべきものである。不変異体結合は、例えば、本発明に従って使用される抗体が、さらなる細胞外タンパク質によってマスクできないメソテリンのエピトープに結合することを特徴とする。そのようなさらなる細胞外タンパク質は、例えば、タンパク質卵巣癌抗原１２５（ＣＡ１２５）である。好ましく使用される抗体は、それのメソテリンへの結合がＣＡ１２５によってブロックされないことを特徴とする。
抗ＣＤ３０抗体
癌標的分子ＣＤ３０に結合し、癌、例えばホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、ブレンツキシマブ、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）およびＷＯ２００８／０９２１１７、ＷＯ２００８／０３６６８８またはＷＯ２００６／０８９２３２に開示の抗体である。抗ＣＤ３０複合体の例は、ブレンツキシマブベドチン（ＩＮＮ番号９１４４）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ２２抗体
癌標的分子ＣＤ２２に結合し、癌、例えばリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、イノツズマブおよびエプラツズマブである。抗ＣＤ２２複合体の例は、イノツズマブオザガマイシン（ｏｚａｇａｍｙｃｉｎ）（ＩＮＮ番号８５７４）または抗ＣＤ２２−ＭＭＡＥおよび抗ＣＤ２２−ＭＣ−ＭＭＡＥ（それぞれＣＡＳＲＮ：１３９５０４−５０−０および４７４６４５−２７−７）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ３３抗体
癌標的分子ＣＤ３３に結合し、癌、例えば白血病の治療に用いることができる抗体の例は、ゲムツヅマブおよびリンツズマブ（ＩＮＮ７５８０）である。抗ＣＤ３３複合体の例は、ゲムツヅマブ−オザガマイシン（ｏｚａｇａｍｙｃｉｎ）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＮＭＢ抗体
癌標的分子ＮＭＢに結合し、癌、例えばメラノーマまたは乳癌の治療に用いることができる抗体の例はグレンバツムマブ（ＩＮＮ９１９９）である。抗ＮＭＢ複合体の例は、グレンバツムマブベドチン（ＣＡＳＲＮ：４７４６４５−２７−７）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ５６抗体
癌標的分子ＣＤ５６に結合し、癌、例えば多発性骨髄種、小細胞肺癌、ＭＣＣまたは卵巣癌の治療に用いることができる抗体の例は、ロルボツズマブである。抗ＣＤ５７複合体の例は、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＡＳＲＮ：１３９５０４−５０−０）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ７０抗体
癌標的分子ＣＤ７０に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫または腎細胞癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００７／０３８６３７−Ａ２およびＷＯ２００８／０７０５９３−Ａ２に開示されている。抗ＣＤ７０複合体の例は、ＳＧＮ−７５（ＣＤ７０ＭＭＡＦ）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ７４抗体
癌標的分子ＣＤ７４に結合し、癌、例えば多発性骨髄種の治療に用いることができる抗体の例は、ミラツズマブである。抗ＣＤ７４複合体の例は、ミラツズマブ−ドキソルビシン（ＣＡＳＲＮ：２３２１４−９２−８）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ１９抗体
癌標的分子ＣＤ１９に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００８／０３１０５６−Ａ２に開示されている。さらなる抗体および抗ＣＤ１９複合体（ＳＡＲ３４１９）の例が、ＷＯ２００８／０４７２４２−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ムチン抗体
癌標的分子ムチン−１に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、クリバツズマブおよびＷＯ２００３／１０６４９５−Ａ２、ＷＯ２００８／０２８６８６−Ａ２に開示の抗体である。抗ムチン複合体の例は、ＷＯ２００５／００９３６９−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ１３８抗体
癌標的分子ＣＤ１３８およびそれの複合体に結合し、癌、例えば多発性骨髄種の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００９／０８０８２９−Ａ１、ＷＯ２００９／０８０８３０−Ａ１で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗インテグリン−αＶ抗体
癌標的分子インテグリンαＶに結合し、癌、例えばメラノーマ、肉腫または癌腫の治療に用いることができる抗体の例は、インテツムマブ（ＣＡＳＲＮ：７２５７３５−２８−４）、アブシキシマブ（ＣＡＳＲＮ：１４３６５３−５３−６）、エタラシズマブ（ＣＡＳＲＮ：８９２５５３−４２−３）およびＵＳ７，４６５，４４９、ＥＰ７１９８５９−Ａ１、ＷＯ２００２／０１２５０１−Ａ１およびＷＯ２００６／０６２７７９−Ａ２に開示の抗体である。抗インテグリンαＶ複合体の例は、インテツムマブ−ＤＭ４およびＷＯ２００７／０２４５３６−Ａ２で開示の他のＡＤＣ類である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＴＤＧＦ１抗体
癌標的分子ＴＤＧＦ１に結合し、癌の治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ０２／０７７０３３−Ａ１、ＵＳ７，３１８，９２４、ＷＯ２００３／０８３０４１−Ａ２およびＷＯ２００２／０８８１７０−Ａ２に開示の抗体である。抗ＴＤＧＦ１複合体の例が、ＷＯ２００２／０８８１７０−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＰＳＭＡ抗体
癌標的分子ＰＳＭＡに結合し、癌、例えば前立腺癌の治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ９７／３５６１６−Ａ１、ＷＯ９９／４７５５４−Ａ１、ＷＯ０１／００９１９２−Ａ１およびＷＯ２００３／０３４９０３に開示の抗体である。抗ＰＳＭＡ複合体の例が、ＷＯ２００９／０２６２７４−Ａ１およびＷＯ２００７／００２２２２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＥＰＨＡ２抗体
癌標的分子ＥＰＨＡ２に結合し、複合体の製造および癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００４／０９１３７５−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体
癌標的分子ＳＬＣ４４Ａ４に結合し、複合体の製造および癌、例えば膵臓癌または前立腺癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００９／０３３０９４−Ａ２およびＵＳ２００９／０１７５７９６−Ａ１で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＨＬＡ−ＤＯＢ抗体
癌標的分子ＨＬＡ−ＤＯＢに結合する抗体の例は、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体Ｌｙｍ−１（ＣＡＳＲＮ：３０１３４４−９９−０）である。抗ＨＬＡ−ＤＯＢ複合体の例が、例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＶＴＣＮ１抗体
癌標的分子ＶＴＣＮ１に結合し、複合体の製造および癌、例えば卵巣癌、膵臓癌、肺癌または乳癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００６／０７４４１８−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体
本発明によれば、抗ＦＧＦＲ２抗体を用いることができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体および抗原結合性断片の例がＷＯ２０１３０７６１８６に記載されている。参照によって、ＷＯ２０１３０７６１８６の全ての抗体が、本発明の説明に組み込まれ、それらを本発明で用いることができる。抗体の配列が、ＷＯ２０１３０７６１８６の表９および表１０に示されている。好ましいものは、Ｍ０４８−Ｄ０１およびＭ０４７−Ｄ０８と称される抗体、抗原結合性断片およびその抗体由来の抗体の変異体である。好ましい抗ＦＧＦＲ２は、ＦＧＦＲ２と称される各種スプライス変異体に結合する。
１実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体またはそれの抗原結合抗体断片は、ＦＧＦＲ２を発現する細胞に結合した後、その細胞によって内在化される。
さらなる実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体または抗原結合抗体断片は、ＷＯ２０１３０７６１８６の表９または表１０に挙げた抗体の少なくとも一つ、二つまたは三つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。そのような抗体の好ましい実施形態も同様に、ＷＯ２０１３０７６１８６に列記されており、参照によって本明細書に組み込まれる。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体
好ましい実施形態において、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片を本発明による方法で用いる場合、この抗体または断片は、下記のものから選択される（同様に、ＷＯ２０１４／１９９８１７（Ａ１）でも公開）。さらに、ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体は当業者に知られており、例えば、ＷＯ２００９／０２０９３３（Ａ２）またはＷＯ２００９１４０１７７（Ａ２）を参照する。さらに、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって産生された記載の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の脱グリコシル化変異体を用いることができる。さらに、トランスグルタミナーゼ介在反応のために１以上のアクセプターグルタミンを含むように改変された抗体の変異体を用いることも可能である。
本発明は特に、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９（タンパク質）；配列番号１７０（ＤＮＡ））の強い活性化を生じることでＴＷＥＡＫＲを過剰発現する各種癌細胞におけるアポトーシスを強く誘発する抗体またはそれの抗原結合性抗体断片またはそれらの変異体との複合体に関するものである。
アポトーシス誘発および既述の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（例えばＰＤＬ−１９２）の増殖の阻害に関係するＴＷＥＡＫＲのアゴニスト活性が制限され、内因性リガンドＴＷＥＡＫの効力に達しない。これらの抗体は、内因性リガンドＴＷＥＡＫと比較して、同様の範囲であるアフィニティでＴＷＥＡＫＲで結合し（Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ． ２０１１ Ｊｕｌ−Ａｕｇ；３（４）：３６２−７５；Ｃｕｌｐ ＰＡ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０ Ｊａｎ １５；１６（２）：４９７−５０８）、そして、より高い結合アフィニティを有する抗体でさえ、必ずしもより効果的なシグナル伝達活性を示すとは限らない（Ｃｕｌｐ ＰＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０ Ｊａｎ １５；１６（２）：４９７−５０８）ことから、このアゴニスト活性の欠如はアフィニティ低下に基づくものではない。さらに、既述の抗体の抗腫瘍活性はＦｃエフェクター機能によって決まることが明らかになり、ＡＤＣＣがマウスモデルでのイン・ビボ効力において重要な役割を果たすことが明らかになっている。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の形成
完全ヒト抗体ファージライブラリー（Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８）を用いて、固定化標的としてヒトおよびマウス−ＴＷＥＡＫＲの二量体Ｆｃ融合細胞外ドメインを用いるタンパク質パニング（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：１１０５−１６）によって、本発明のＴＷＥＡＫＲ特異ヒトモノクローナル抗体を単離した。１１種類の異なるＦａｂファージを同定し、可溶性ＦＡｂのないＣＨ２−ＣＨ３ドメインを提供する哺乳動物ＥｇＧ発現ベクターで、相当する抗体をクローニングした。好ましい抗体を同定した後、これらを全長ＩｇＧとして発現した。個々の抗体の重鎖において突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑを導入することで、記載の抗体の脱グリコシル化変異体を形成した。これらの構築物を、例えば、Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ１２， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ： Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， 編者Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ、Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ， ２００７ （ＡＫ実施例１参照）によって記載の方法に従って、哺乳動物細胞で一時的に発現させた。それらの抗体をタンパク質Ａクロマトグラフィーによって精製し、ＡＫ実施例２に記載の方法に従って、ＥＬＩＳＡおよびＢＩＡｃｏｒｅ分析を用いる可溶性モノマーＴＷＥＡＫＲに対する結合アフィニティによってさらに特性決定した。抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の細胞結合特性を確認するため、多くの細胞系（ＨＴ２９、ＨＳ６８、ＨＳ５７８）に関して、結合をフローサイトメトリーによって調べた。ＮＦκＢレポーター遺伝子アッセイを行って、同定した１１種類全ての抗体（ヒトＩｇＧ１）のアゴニスト活性を調べた。最も高いイン・ビトロ活性を有する抗体（ＴＰＰ−８８３）を、さらなる活性およびアフィニティ成熟に関して選択した（詳細については、ＡＫ実施例１参照）。改善されたアゴニスト活性を有する単一の置換変異体：ＣＤＲ−Ｈ３のＧ１０２Ｔが検出された。最後に、最良の単一置換変異体Ｇ１０２Ｔと比較して高まったアフィニティに基づいて、７種類の変異体を選択した。それの相当するＤＮＡを、哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターにクローニングし、上記のＮＦ−κＢレポーター遺伝子アッセイでの機能活性について調べた。結局、得られた配列をヒト生殖系列配列と比較し、アフィニティおよび効力に対してほとんど効果のない逸脱を調整した。抗体ライブラリースクリーニングにより、そしてアフィニティおよび／または活性成熟によって、次の抗体：「ＴＰＰ−２０９０」、「ＴＰＰ−２１４９」、「ＴＰＰ−２０９３」、「ＴＰＰ−２１４８」、「ＴＰＰ−２０８４」、「ＴＰＰ−２０７７」、「ＴＰＰ−１５３８」、「ＴＰＰ−８８３」、「ＴＰＰ−１８５４」、「ＴＰＰ−１８５３」、「ＴＰＰ−１８５７」、および「ＴＰＰ−１８５８」を得た。
本発明の抗体は、抗体ファージ提示スクリーニングなどの当業界で公知の方法（例えば、Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８参照）、確立されたハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ． １９７５ Ａｕｇ ７；２５６（５５１７）：４９５−７参照）、またはマウスの免疫化、特にはｈＭＡｂマウスの免疫化（例えばＶｅｌｏｃ免疫マウス（登録商標））によってさらに得ることができる。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の特定の実施形態
本発明の１実施形態は、１以上のＴＷＥＡＫＲ発現細胞系においてカスパーゼ３／７の強い誘発を示す抗体またはそれの抗原結合性抗体断片またはそれらの変異体を提供することである。好ましい実施形態において、１以上のＴＷＥＡＫＲ発現細胞系が、ＷｉＤｒ、Ａ２５３、ＮＣＩ−Ｈ３２２、ＨＴ２９および７８６−Ｏからなる群に存在する。本明細書に記載の方法などの当業界で公知の一般的な方法によって、「カスパーゼ３／７の誘発」を測定することができる。１実施形態において、「カスパーゼ３／７の誘発」を、本発明に従って、カスパーゼ３／７溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ８０９３）を用いた活性測定およびＶＩＣＴＯＲ Ｖ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）での発光の読取値を用いて求める。インキュベーション時間が終了した後、カスパーゼ３／７活性を求め、カスパーゼ３／７の誘発係数を、未処理細胞との比較で求めた。抗体は、誘発係数が１．２より大きい、好ましくは１．５より大きい、さらにより好ましくは１．８より大きい、さらにより好ましくは２．１より大きい、さらにより好ましくは２．５より大きい場合に、カスパーゼ３／７の「強い誘発」を示すものと言われる。既述のアゴニスト抗体［例えばＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）、１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）］と比較して、さらには３００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＷＥＡＫと比較して、ＨＴ２９細胞でのカスパーゼ３／７誘発がより強い抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が提供される。癌細胞でのカスパーゼ３／７誘発におけるこの強い活性は、ＷｉＤｒ、Ａ２５３、ＮＩＣ−Ｈ３２２および７８６−Ｏ細胞でも認められ、その場合に、ほとんどの実験で、調べた本発明の抗体が、参考抗体［ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）］および３００ｎｇ／ｍＬのＴＷＥＡＫと比べて高い変動係数を誘発した。本発明の一部の抗体は、中等度のアフィニティ（＞１０ｎＭ）でのみＴＷＥＡＫＲに結合し、それは内因性リガンドＴＷＥＡＫのアフィニティより明らかに小さく、他の既知のアゴニスト抗体の場合より小さかった。この特性は、例えば、腫瘍への浸透がより深くなる可能性などのさらなる可能な利点を提供するものである。
これに関して、本発明の１実施形態は、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９；図１も参照）の位置４７（Ｄ４７）でアスパラギン酸（Ｄ）に選択的に結合することを特徴とする、新たなエピトープでＴＷＥＡＫＲに特異的に結合する抗体またはそれの抗原結合性抗体断片を提供することにある。抗体相互作用についてのある種のＴＷＥＡＫＲアミノ酸について確認された依存性は、これらの抗体において測定されたアゴニスト活性と相関するものである。自然リガンドＴＷＥＡＫは、ＴＷＥＡＫＲの効果的活性化を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインにおいてロイシン４６に応じて結合する（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ ２８０：１８１８−１８２９）。Ｐ４Ａ８は非常に低いアゴニスト活性を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの外のドメインと少なくとも部分的に相互作用する。ＰＬＤ−１９２は、中等度のアゴニスト活性を示し、Ｒ５６に応じてシステイン豊富ドメインに結合するが、ＴＷＥＡＫリガンド部位と反対である。本発明の抗体（例えばＴＰＰ−２０９０）はＤ４７に応じて結合し、ＴＷＥＡＫはＬ４６に応じて結合する。従って、ＴＷＥＡＫは、同様であるが異なる結合部位に結合する（図７）。従って、強いアゴニスト活性を示す本発明の抗体は、非常に高いアゴニスト活性に関係する抗体についての新規なエピトープに結合する（Ｄ４７依存性）。
ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）のアミノ酸は、本発明による抗体の結合に必須であると考えられ、それはＡＫ実施例２および図６に記載のように、この残基をアラニンに変えることによって、抗体がそれのＥＬＩＳＡシグナルの２０％強、あるいは３０％強、あるいは４０％強、あるいは５０％強、あるいは６０％強、あるいは７０％強、あるいは８０％強、あるいは９０％強、あるいは１００％を失ったら、抗体がＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合することを意味する。あるいは、抗体がＴＰＰ−２２０３と比較してＴＰＰ−２６１４へのそれのＥＬＩＳＡシグナルの２０％強、あるいは３０％強、あるいは４０％強、あるいは５０％強、あるいは６０％強、あるいは７０％強、あるいは８０％強、あるいは９０％強、あるいは１００％を失うと、抗体はＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合する。好ましくは、抗体がＴＰＰ−２２０３と比較してＴＰＰ−２６１４へのそれのＥＬＩＳＡシグナルの８０％強を失うと、抗体はＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合する。
本願では、下記の表で示したように、次の本発明の好ましい抗体：「ＴＰＰ−２０９０」、「ＴＰＰ−２１４９」、「ＴＰＰ−２０９３」、「ＴＰＰ−２１４８」、「ＴＰＰ−２０８４」、「ＴＰＰ−２０７７」、「ＴＰＰ−１５３８」、「ＴＰＰ−８８３」、「ＴＰＰ−１８５４」、「ＴＰＰ−１８５３」、「ＴＰＰ−１８５７」、「ＴＰＰ−１８５８」、「ＴＰＰ−２６５８」を挙げている。
表：抗体のタンパク質配列
Figure 2018524321
Figure 2018524321
ＴＰＰ−２０９０は、配列番号２に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２６５８は、配列番号２４１に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−５４４２は、配列番号２４２に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８２５は、配列番号２４３に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４９は、配列番号１２に相当する重鎖の領域および配列番号１１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９３は、配列番号２２に相当する重鎖の領域および配列番号２１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４８は、配列番号３２に相当する重鎖の領域および配列番号３１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０８４は、配列番号４２に相当する重鎖の領域および配列番号４１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０７７は、配列番号５２に相当する重鎖の領域および配列番号５１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１５３８は、配列番号６２に相当する重鎖の領域および配列番号６１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８３は、配列番号７２に相当する重鎖の領域および配列番号７１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５４は、番号８２に相当する重鎖の領域配列および配列番号８１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５３は、配列番号９２に相当する重鎖の領域および配列番号９１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５７は、配列番号１０２に相当する重鎖の領域および配列番号１０１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５８は、番号１１２に相当する重鎖の領域配列および配列番号１１１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９０は、配列番号１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２６５８は、配列番号１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−５４４２は、配列番号１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８２５は、配列番号１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４９は、配列番号２０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９３は、配列番号３０に相当する重鎖の可変領域および配列番号２９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４８は、配列番号４０に相当する重鎖の可変領域および配列番号３９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０８４は、配列番号５０に相当する重鎖の可変領域および配列番号４９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０７７は、配列番号６０に相当する重鎖の可変領域および配列番号５９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１５３８は、配列番号７０に相当する重鎖の可変領域および配列番号６９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８３は、配列番号８０に相当する重鎖の可変領域および配列番号７９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５４は、配列番号９０に相当する重鎖の可変領域および配列番号８９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５３は、配列番号１００に相当する重鎖の可変領域および配列番号９９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５７は、配列番号１１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１０９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５８は、配列番号１２０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１１９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
表：抗体のＤＮＡ配列
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の好ましい実施形態は、下記のものである。
ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でＤに特異的に結合する脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、またはそれの抗原結合性断片。
抗体がアゴニスト抗体である実施形態１による抗体またはそれの抗原結合性断片。
式ＰＹＰＭＸ（配列番号１７１）（ＸはＩまたはＭである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ１；
式ＹＩＳＰＳＧＧＸＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７２）（ＸはＳまたはＫである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ２；および
式ＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹ（配列番号１７３）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ３
を含む可変重鎖
および
式ＲＡＳＱＳＩＳＸＹＬＮ（配列番号１７４）（ＸはＧまたはＳである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ１；
式ＸＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７５）（ＸはＱ、ＡまたはＮである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ２；および
式ＱＱＳＹＸＸＰＸＩＴ（配列番号１７６）（位置５でのＸはＴまたはＳであり、位置６でのＸはＴまたはＳであり、位置８でのＸはＧまたはＦである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ３
を含む可変軽鎖
を含む実施形態１または２による抗体またはそれの抗原結合性断片。
配列番号６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そして
配列番号３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号１６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号２６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号２８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号２３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号２５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号３６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号３８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号３３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号３５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号４６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号４８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号４３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号４５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号５６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号５７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号５８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号５３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号５４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号５５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号６６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号６７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号６８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号６３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号６４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号６５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号７６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号７８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号７３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号７５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号８６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号８７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号８８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号８３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号８４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号８５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号９６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号９７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号９８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号９３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号９４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号９５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号１０６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１０７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１０８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１０３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１０４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１０５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
配列番号１１６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１１７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１１８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１１３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１１４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１１５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
配列番号１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号３０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号２９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号４０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号３９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列配列番号５０に示した重鎖の可変性、そしてさらに配列番号４９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号６０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号５９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号７０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号６９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号８０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号７９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号９０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号８９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号１００に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号１１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１０９に示した軽鎖の可変性配列、または
配列番号１２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１１９に示した軽鎖の可変性配列
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
ＩｇＧ抗体である前出の実施形態のいずれかによる抗体。
配列番号２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１に示した軽鎖の配列、または
配列番号１２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１１に示した軽鎖の配列、または
配列番号２２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号２１に示した軽鎖の配列、または
配列番号３２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号３１に示した軽鎖の配列、または
配列番号４２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号４１に示した軽鎖の配列、または
配列番号５２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号５１に示した軽鎖の配列、または
配列番号６２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号６１に示した軽鎖の配列、または
配列番号７２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号７１に示した軽鎖の配列、または
配列番号８２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号８１に示した軽鎖の配列、または
配列番号９２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号９１に示した軽鎖の配列、または
配列番号１０２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１０１に示した軽鎖の配列、または
配列番号１１２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１１１に示した軽鎖の配列、または
配列番号２４１に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１に示した軽鎖の配列、または
配列番号２４２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１に示した軽鎖の配列、または
配列番号２４３に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１に示した軽鎖の配列
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体。
ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′断片またはＦ（ａｂ′）２断片である前出の実施形態のいずれかによる抗原結合性断片または前出の実施形態のいずれかによる抗体の抗原結合性断片。
モノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である、前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体または抗原結合性断片である前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８である。
本発明の１実施形態は、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤のトランスグルタミナーゼ介在複合体化に好適な抗体を提供するものである。
ヒトアイソタイプの野生型全長抗体は、トランスグルタミナーゼの存在下にアクセス可能で反応性である重鎖における位置２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）に保存アクセプターグルタミンを有することで、抗体が非グリコシル化型である場合に、抗体および好適な化合物の複合体を形成する。そのような脱グリコシル化抗体または脱グリコシル抗体は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおける保存グリコシル化部位Ｎ２９７に連結されたグリカンを持たない。脱グリコシル化抗体は、例えば、重鎖のグリコシル化部位Ｎ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）の突然変異によって、またはグリコシル化能を持たない発現系における抗体の発現によって産生することができる。抗体脱グリコシルの方法は、一般に知られている（例えば、Ｗｉｎｋｅｌｈａｋｅ ＆ Ｎｉｃｏｌｓｏｎ （１９７６）， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２５１（４）：１０７４−８０））。脱グリコシル化抗体は、例えば、ＰＮＧａｓｅＦによる酵素的脱グリコシルによって形成することができる。本発明の１実施形態において、脱グリコシル化抗体は、原核生物宿主での発現によって得ることができる。好適な原核生物宿主には、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ならびにシュードモナス属、ストレプトミセス属およびスタフィロコッカス属のいくつかの生物種などがあるが、これらに限定されるものではない。本発明の別の実施形態において、脱グリコシル化抗体は、グリコシル化阻害剤ツニカマイシンとともに哺乳動物細胞発現系を用いることで得ることができる（Ｎｏｓｅ ＆ Ｗｉｇｚｅｌｌ （１９８３）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８０（２１）：６６３２−６）。ここで、その修飾は、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける重鎖の保存Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）でのグリコシル化の防止である。
本発明の別の実施形態において、脱グリコシル化抗体は、重鎖でのグリコシル化部位Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）の突然変異によって製造される。そのような改変脱グリコシル化抗体の酵素的複合体化が、突然変異Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））、またはＮ２９７Ｓ（特許出願ＷＯ２０１３０９２９９８Ａ１およびＷＯ２０１３０９２９８３Ａ２を参照）を含む抗体変異体について記載されている。さらに、本発明は、トランスグルタミナーゼがＮ２９７Ａ突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を有する脱グリコシル化抗体変異体の複合体化を効率的に触媒できることを示すものである。
トランスグルタミナーゼ存在下でのさらなるまたは別の反応性残基を、抗体操作によって作ることができる。本発明による化合物は、野生型または親抗体の１以上のアミノ酸がグルタミン類で置き換わっているか、グルタミン残基が、適宜に別のアミノ酸（例えばアクセプターグルタミンを含む標識）とともに、親もしくは野生型分子に導入されるグルタミン改変抗体を含む。
トランスグルタミナーゼの存在下に反応性である抗体のグルタミン残基は、重鎖に、代表的には定常領域にある。１実施形態において、位置Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）で、グルタミン以外の残基に代えてアスパラギンとなっている。好ましいものは、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａであり、さらにより好ましいものはＮ２９７Ａである。従って、Ｎ２９７Ｘ置換および位置２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）のグルタミンを有する抗体は、重鎖当たり一つのアクセプターグルタミンを有する。従って、完全ＩｇＧは抗体当たり二つの結合部位を有する。
トランスグルタミナーゼの存在下に反応性である抗体のグルタミン残基は、重鎖に、代表的には定常領域にある。１実施形態において、位置Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）で、グルタミンに代えてアスパラギンとなっている。従って、その抗体はＮ２９７Ｑ置換を有する。従って、Ｎ２９７Ｑ置換および位置２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）のグルタミンを有する抗体は、二つのアクセプターグルタミンを有することから、重鎖当たり二つの結合部位を有する。従って、完全ＩｇＧは抗体当たり四つの結合部位を有する。
トランスグルタミナーゼの存在下に反応性である抗体のグルタミン残基は、重鎖に、代表的には定常領域にある。１実施形態において、位置Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）で、グルタミンに代えてアスパラギンとなっており、位置２９５でグルタミンが代えられている。従って、その抗体はＮ２９７ＱおよびＱ２９５Ｘ置換を有する。好ましいものはＱ２９５Ｎ置換である。従って、Ｎ２９７Ｑ置換を有し、位置２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）にグルタミンを持たない抗体は、一つのアクセプターグルタミンを有することから、重鎖当たり一つの結合部位を有する。従って、完全ＩｇＧは抗体当たり二つの結合部位を有する。
従って、トランスグルタミナーゼ介在結合に好適な好ましい抗体は、
ｉ．Ｘがアスパラギン以外のアミノ酸であるＮ２９７Ｘ置換；より好ましくは、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａ、さらにより好ましくはＮ２９７ＡおよびＮ２９７Ｑ．
ｉｉ．Ｘがグルタミン以外のアミノ酸であるＮ２９７Ｑ置換およびＱ２９５Ｘ置換、好ましくはＱ２９５Ｎ
を含む。
同位体、塩、溶媒和物、同位体変異体
本発明はまた、本発明による化合物の全ての好適な同位体形態を包含する。本発明による化合物の同位体形態は本明細書において、本発明による化合物内の少なくとも一つの原子が同じ原子番号であるが、自然界において通常もしくは支配的にある原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子に交換されている化合物を意味するものと理解される。本発明による化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体があり、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２９Ｉおよび１３１Ｉである。本発明による化合物の特定の同位体型、特別には１以上の放射性同位体が組み込まれているものは、例えば、作用機序または身体中での薬物分布の試験に有用となり得る。製造および検出が比較的容易であることから、特には、３Ｈまたは１４Ｃ同位体で標識された化合物がその目的には好適である。さらに、同位体、例えば重水素を組み込むことにより、化合物の代謝安定性が高くなることで特に治療上有益となり得るものであり、例えば身体中での半減期が長くなり、または必要な活性成分用量が減る。従って、本発明による化合物のそのような修飾も、場合により、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明による化合物の同位体型は、当業者に公知の方法によって、例えばさらに下記に記載の方法および実施例に記載の手順によって、個々の試薬および／または出発化合物の相当する同位体修飾を用いることで製造することができる。
本発明の文脈において好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容される塩である。自体は医薬用途には適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製には用いることができる塩も包含される。
本発明による化合物の生理的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩などがある。
本発明による化合物の生理的に許容される塩にはさらに、通常の塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアもしくは１から１６個の炭素原子を有する有機アミン、例えば好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジンおよび１,２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩などがある。
本発明の文脈で溶媒和物と称されるものは、溶媒分子による配位によって固体または液体での錯体を形成している本発明による化合物の形態である。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特定の形態である。本発明の文脈で好ましい溶媒和物は水和物である。
本発明はさらに、本発明による化合物のプロドラッグも包含する。この文脈での「プロドラッグ」という用語は、自体は生理的に活性または不活性であり得るが、身体に存在中に本発明による化合物に変換される（例えば、代謝的または加水分解的に）化合物を指す。
特定の実施形態
次の実施形態が特に好ましい。
実施形態Ａ：
下記式のＡＰＤＣならびにＡＰＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
Figure 2018524321
式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）または下記式（ＩＩｆ）の化合物であり、バインダーはヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片（好ましくは抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体または抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、より好ましくはＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８）であり、ｎは１から１０の数字である。
式（ＩＩｆ）：
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−（カルボニル）であり；
Ｒ１は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｒ２は−Ｈであり；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ３は−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、ＳＯ２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２またはＮＨ２によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）；
Ｒ５は−Ｈまたは−Ｆであり；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９は−Ｈまたは−Ｆであり、
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つは−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表す。
リンカーは好ましくは、下記のリンカーである。
Figure 2018524321
式中、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は
Figure 2018524321
であり、
＃１は、抗体の硫黄原子への結合箇所を指し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｌ１は、式：
Figure 2018524321
によって表され、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ，ＯおよびＳからなる群から選択される４個以下のヘテロ原子または−ＳＯ−を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
ここで、＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２はバインダー（例えばＬ２）へのカップリング基への結合である。
実施形態Ｂ：
下記式のＡＰＤＣならびにＡＰＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
Figure 2018524321
式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）または下記式（ＩＩｇ）の化合物であり、バインダーは抗体であり、ｎは１から１０の数字である。
式（ＩＩｇ）：
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
ＡはＣＯ（カルボニル）であり；
Ｒ１は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨであり、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｒ２は−Ｈであり；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−のレグマイン−開裂性基を表し；
Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ３は−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、ＳＯ２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２またはＮＨ２によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）；
Ｒ５は−Ｈまたは−Ｆであり；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９は−Ｈまたは−Ｆであり、
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表す。
−Ｌ−は好ましくは、
Figure 2018524321
によって表され、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、
Figure 2018524321
であり、
＃１は、抗体の硫黄原子への結合箇所を示し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018524321
によって表され、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ，ＯおよびＳからなる群から選択される４個以下のヘテロ原子または−ＳＯ−を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は、抗体に対するカップリング基への結合である（例えばＬ２）。
あるいは、リンカーがリジン側鎖またはリジン残基に結合していても良い。
実施形態Ｃ：
下記式のＡＰＤＣならびにＡＰＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
Figure 2018524321
式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は下記式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）または下記式（ＩＩｈ）の化合物であり、バインダーは抗体であり、ｎは１から１０の数字である。
式（ＩＩｈ）：
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−（カルボニル）であり；
Ｒ１は−Ｌ−＃１であり；
Ｒ２は−Ｈであり；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキルを表す。）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ３はＣ１−１０−アルキル−であり、それは−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、−ＳＯ２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く、ｎは０、１または２（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）を表し、または−ＭＯＤであり；
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または
Figure 2018524321
（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２ではない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、基−ＭＯＤは好ましくは少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有し；
Ｒ５はＨまたはＦであり；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９はＨまたはＦであり、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し，
−Ｌ−は、
Figure 2018524321
によって表され、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は、
Figure 2018524321
であり、
＃１は抗体の硫黄原子への結合箇所を指し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018524321
によって表され、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）およびＮ，ＯおよびＳからなる群から選択される４個以下のヘテロ原子または−ＳＯ−もしくは−ＳＯ２−を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、存在する場合に側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は、抗体に対するカップリング基への結合である（例えばＬ２）。
実施形態Ｄ：
下記式の抗体複合体。
Figure 2018524321
式中、
Ｒ２およびＲ５は、−Ｈを表し；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ３は−ＣＨ２ＯＨを表し；
Ｒ１は−Ｌ１−Ｌ２−バインダーを表し、
Ｌ１は
Figure 2018524321
を表し、
＃２はＬ２への結合を表し、＃１はＬ１の結合を表し；
Ｌ２は下記式Ａ５およびＡ６の構造：
Figure 2018524321
の一方または両方を表し、
＃１はバインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｒ２２は−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ１−３−アルキルを表す。）、−ＣＯＮＨ２、好ましくは−ＣＯＯＨを表す。
本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、バインダーのシステイン残基への結合が、特に好ましくは式Ａ５またはＡ６の二つの構造のうちの一つとして、好ましくは８０％超、特に好ましくは９０％超（各場合で、バインダーに対するリンカーの結合の総数に基づいて）の程度で存在する。
ここで、式Ａ５またはＡ６の構造は通常は一緒に存在し、好ましくはバインダーへの結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率で存在する。そして、残りの結合は、下記構造として存在する。
Figure 2018524321
バインダーは、好ましくはバインダータンパク質またはペプチド、特に好ましくはヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片または抗ＥＧＦＲ抗体またはそれの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８、または抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブまたはニモツズマブである。バインダーの代替物として、システイン残基が存在しても良い。
実施形態Ｅ：
下記式のＡＰＤＣならびにＡＰＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
Figure 2018524321
式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は、下記式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）または下記式（ＩＩｉ）の化合物であり、バインダーは抗体であり、ｎは１から１０の数字である。
式（ＩＩｉ）：
Figure 2018524321
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
ＡはＣＯ（カルボニル）であり；
Ｒ１は−Ｈまたは−ＣＯＯＨであり、
Ｒ２は−Ｈであり；
Ｒ４は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、−Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基（ｘは０もしくは１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ３は−Ｌ−＃１であり；
Ｒ５はＨまたはＦであり；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基であり；
Ｒ９は−Ｈまたは−Ｆであり、
−Ｌ−はリンカーを表しおよび＃１は抗体への結合を表し，
−Ｌ−は、
Figure 2018524321
によって表され、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は下記式：
Figure 2018524321
を表し、
＃１は、抗体の硫黄原子もしくは窒素原子への結合箇所を示し、
＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018524321
によって表され、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または
Figure 2018524321
を表し、
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す）およびＮ，ＯおよびＳからなる群から選択される４個以下のヘテロ原子または−ＳＯ−もしくは−ＳＯ２−を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018524321
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、存在する場合に側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は、抗体に対するカップリング基への結合である（例えばＬ２）。
治療用途
治療するのに本発明による化合物を用いることができる過増殖性疾患には、特には癌および腫瘍疾患の群などがある。本発明の文脈において、これらは、特には次の疾患（ただし、これらに限定されるものではない）：乳癌および乳房腫瘍（腺管癌および小葉型などの乳癌、イン・サイツも）、気道の腫瘍（小細胞肺癌および非小細胞癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹の腫瘍および視床下部の腫瘍、星細胞腫、上衣細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫ならびに神経外胚葉性（ｎｅｕｒｏ−ｅｃｔｏｒｍａｌ）腫瘍および松果体腫瘍）、消化器の腫瘍（食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸および肛門の癌）、肝臓腫瘍（特に、肝細胞癌、胆管癌および混合型肝細胞胆管癌）、頭部および頸部領域の腫瘍（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、口咽頭癌、口唇および口腔癌、口腔メラノーマ）、皮膚腫瘍（基底細胞腫、棘細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、肥満細胞腫瘍）、軟組織の腫瘍（特に、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫）、眼球の腫瘍（特に、眼球内メラノーマおよび網膜芽細胞腫）、内分泌腺および外分泌腺の腫瘍（例えば甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺の癌、腺癌）、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍）および生殖器の腫瘍（女性における子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌、および男性における前立腺および睾丸の癌）を意味するものと理解される。これらには、固形型または循環細胞としての血液、リンパ系および脊髄の増殖性疾患などもあり、例えば白血病、リンパ腫および骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性およびヘアリー細胞性の白血病、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系でのリンパ腫である。
ヒトでのこれらの十分に特徴付けられている疾患は、他の哺乳動物でも同等の病因によって生じ得るものであり、本発明の化合物によって同様に治療可能である。
本発明による化合物による上記で言及の癌疾患の治療は、固体腫瘍の治療およびそれの転移型および循環型の治療の両方を含むものである。
本発明の文脈において、「治療」または「治療する」という用語は、従来の意味で用いられ、疾患または健康上の異常と戦い、軽減し、弱化し、または改善すること、ならびに例えば癌の場合でのように、この疾患によって障害される生活条件を改善することを目的として、患者の世話を行い、ケアを行い、看病することを意味する。
従って、本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防のための本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防のための医薬品を製造するための本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防方法での本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、有効量の少なくとも１種類の本発明による化合物を用いて、障害、特別には上記障害を治療および／または予防する方法を提供する。
本発明による化合物は、単独で、または必要に応じて、１以上の他の薬理活性物質と組み合わせて用いることができ、ただしその組み合わせは望ましくないおよび許容できない副作用を生じるものではない。従って、本発明はさらに、特別には上記障害の治療および／または予防のための、少なくとも１種類の本発明による化合物および１以上のさらなる薬物を含む医薬品を提供する。
例えば、本発明の化合物は、癌疾患治療のための既知の抗過剰増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性物質と組み合わせることができる。好適な組み合わせ薬物の例には、下記のものなどがある。
１３１Ｉ−ｃｈＴＮＴ、アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アドゥ−トラスツズマブエムタンシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アレンドロン酸、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、ヘキシル５−アミノレブリネート、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンセスチム、アネトールジチオレチオン、アンギオテンシンＩＩ、アンチトロンビンＩＩＩ、アプレピタント、アルシツモマブ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、アザシチジン、ベロテカン、ベンダムスチン、ベリノスタット、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブセレリン、ボスチニブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシウムホリナート、カルシウムレボホリナート、カペシタビン、カプロマブ、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セレコキシブ、セルモロイキン、セリチニブ、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シドフォビル、シナカルセト、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コパンリシブ、クリサンタスパーゼ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダブラフェニブ、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デプレオチド、デスロレリン、デクスラゾキサン、塩化ジブロスピジウム、ジアンヒドロガラクチトール、ジクロフェナク、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン＋エストロン、ドロナビノール、エドレコロマブ、酢酸エリプチニウム、エンドスタチン、エノシタビン、エンザルタミド、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エポエチンゼータ、エプタプラチン、エリブリン、エルロチニブ、エソメプラゾール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、ファドロゾール、フェンタニル、フルオキシメステロン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、フォルメスタン、ホスアプレピタント、フォテムスチン、フルベストラント、ガドブトロール、ガドテリドール、ガドテル酸メグルミン塩、ガドベルセタミド、ガドキセト酸・２ナトリウム塩（ｇｄ−ｅＯＢ−ＤＴＰＡ・２ナトリウム塩）、硝酸ガリウム、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グルカルピダーゼ、グルトキシム（ｇｌｕｔｏｘｉｍ）、ゴセレリン、グラニセトロン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＳＣＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ），ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、Ｉ−１２５シード、イバンドロン酸、イブリツモマブ チウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インジセトロン、インカドロン酸、インゲノールメブテート、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、イオビトリドール、イオベングアン（１２３Ｉ）、イオメプロール、イピリムマブ、イリノテカン、イトラコナゾール、イキサベピロン、ランレオチド、ランソプラゾール、ラパチニブ、ラソコリン、レナリドマイド、レンチナン、レトロゾール、リュープロレリン、レバミソール、レボノルゲストレル、レボチロキシンナトリウム、リペグフィルグラスチム、リスリド、ロバプラチン、ロムスチン、ロニダミン、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メラルソプロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メスナ、メタドン、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、メチロシン、ミファムルチド、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、モガムリズマブ、モルグラモスチム、モピダモール、モルヒネ塩酸塩、モルヒネ硫酸塩、ナビロン、ナビキシモルス、ナファレリン、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナルトレキソン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネララビン、ネリドロン酸、ニボルマブペンテトレオチド（ｎｉｖｏｌｕｍａｂｐｅｎｔｅｔｒｅｏｔｉｄｅ）、ニロチニブ、ニルタミド、ニモラゾール、ニモツズマブ、ニムスチン、ニトラクリン、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクトレオチド、オファツムマブ、オマセタキシン−メペサクシネート、オメプラゾール、オンダンセトロン、オルゴテイン、オリロチモド、オキサリプラチン、オキシコドン、オキシメトロン、オゾガマイシン、ｐ５３遺伝子治療、パクリタキセル、パラジウム−１０３シード、パロノセトロン、パミドロン酸、パニツムマブ、パントプラゾール、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ペンブロリズマブ、Ｐｅｇ−インターフェロンアルファ−２ｂ、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルフルブタン、ペルホスファミド、ペルツズマブ、ピシバニール、ピロカルピン、ピラルビシン、ピクサントロン、プレリキサホル、プリカマイシン、ポリグルサム、リン酸ポリエストラジオール、ポリビニルピロリドン＋ヒアルロン酸ナトリウム、ポリサッカライド−Ｋ、ポマリドミド、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、プララトレキセート、プレドニムスチン、プレドニゾン、プロカルバジン、プロコダゾール、プロプラノロール、キナゴリド、ラベプラゾール、ラコツモマブ、塩化ラジウム−２２３、ラドチニブ、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ラムシルマブ、ラニムスチン、ラスブリカーゼ、ラゾキサン、レファメチニブ、レゴラフェニブ、リセドロン酸、エチドロン酸レニウム−１８６、リツキシマブ、ロミデプシン、ロムルチド、ロニシクリブ、サマリウム（１５３Ｓｍ）レキシドロナム、サツモマブ、セクレチン、シプロイセル−Ｔ、シゾフィラン、ソブゾキサン、グリシジダゾールナトリウム、ソラフェニブ、スタノゾロール、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タペンタドール、タソネルミン、テセロイキン、テクネチウム（９９ｍＴｃ）ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）メルペンタン、９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−［Ｔｙｒ３］−オクトレオチド、テガフール、テガフール＋ギメラシル＋オテラシル、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラマドール、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリフルリジン＋チピラシル、トラメチニブ、トリロスタン、トリプトレリン、トロホスファミド、トロンボポエチン、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、ヴァラチニブ、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ビスモデギブ、ボリノスタット、イットリウム−９０ガラス微小ビーズ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、ゾレドロン酸、ゾルビシン。
さらに、抗体は、ＭＰＳ１阻害剤または標的：ＯＸ−４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＤＲ３、ＩＤＯ１／ＩＤＯ２、ＬＡＧ−３およびＣＤ４０に対する抗体の群から選択することができる。
さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
概して、本発明の化合物と他の細胞増殖抑制的にまたは細胞毒性的に活性な薬剤との組み合わせで、次の目的を追求することができる。
●個々の有効成分による治療と比較して、腫瘍増殖の遅延、それの大きさの低減、またはさらにそれの完全な除去における効力の改善；
●単独療法の場合より低い用量で使用される化学療法剤使用の可能性；
●個々の投与と比較して副作用少なく、より耐容性のある治療法の可能性；
●より広いスペクトラムの腫瘍の治療の可能性；
●療法に対するより高い応答速度の達成；
●現代の標準療法と比較して長い患者の生存時間。
さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
本発明はさらに、代表的には１以上の不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明による化合物を含む医薬、および上記目的のためのそれの使用を提供する。
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。これに関して、それは好適な形で、例えば非経口的に、可能な場合に吸入によって、またはインプラントもしくはステントとして投与することができる。
本発明による化合物は、これらの投与経路に好適な投与形態で投与することができる。
非経口投与は、吸収段階（例えば、静脈、動脈、心臓内、髄腔内または腰椎内で）を回避することができ、または吸収（例えば、筋肉、皮下、皮内、経皮または腹腔内で）を含むことができる。非経口投与の好適な投与形態には、液剤、懸濁液、乳濁液または凍結乾燥物の形態での注射および注入用製剤などがある。好ましいものは、非経口投与、特別には静脈投与である。
概して、非経口投与の場合、約０．００１から１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１から０．５ｍｇ／ｋｇの量を投与して、効果的な結果を得ることが有利であることが認められている。
そうではあっても、場合により、具体的に体重、投与経路、薬物に対する個体の応答、製剤の種類、および投与を行う時刻もしくは間隔に応じて、指定量から逸脱する必要であることもあり得る。従って、場合により、上記最小量より少ない量で十分である可能性があるが、他の場合には、言及した上限を超えなければならない。より大きい量の投与の場合、それらを１日かけて、いくつかの個々の用量に分けることが得策である可能性がある。
実施例
下記の実施例は、本発明を説明するものである。本発明は実施例に限定されるものではない。
別段の断りがない限り、下記の試験および実施例におけるパーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液における溶媒比、希釈比および濃度データは、各場合で体積基準である。
合成経路：
作業例の例として、下記の図式に、作業例に至る例示的合成経路を示している。これらの図式において、式ＩＩａの位置Ｒ４での（すなわち、−ＮＨ２基での）水素原子は、式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）−ＣＯ−の基または式Ｒ２１−（ＣＯ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基によって置き換わっていても良く、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、およびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い。
図式１：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式２：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式３：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式４：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式５：リジン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
ａ）トリホスゲン、ＴＨＦ、アルゴン下
図式６：リジン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式７：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）エタノール、ピペリジン、メチルアミン、水、ＲＴ；ｃ）ＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｄ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式８：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＤＣＭ／ＴＦＡ２０：１、ＲＴ；ｃ）例えばＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式９：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えば２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えば２Ｍ ＬｉＯＨ溶液、ＴＨＦ、水、ＲＴ、位置異性体のＨＰＬＣ分離；ｃ）例えばＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式１０：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｂ）例えばｐ−ニトロベンジルブロミド、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ；ｃ）例えばエタノール、４０％強度メチルアミン水溶液、５０℃；ｄ）例えば亜ジチオン酸二ナトリウム、ＴＨＦ、水、５０℃；ｅ）例えばＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｆ）例えばピペリジン、４０％強度メチルアミン水溶液、エタノール、５０℃；ｇ）例えばジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｈ）例えばピペリジン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式１１：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＥｔ３Ｎ、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ／酢酸エチル／ＴＨＦ（１：１：１）、ＲＴ；ｃ）例えば４−メチルモルホリン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＨＡＴＵ、ＨＯＡｔ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式１２：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｂ）例えばクロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＣｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、５０℃；ｄ）例えば１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）、Ｔ３Ｐ（Ｒ）、ジイソプロピルエチルアミン、ＭｅＣＮ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式１３：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばメタンスルホニルクロライド、ＮＥｔ３、ジクロロメタン、０℃；ｂ）例えばＮａＮ３、ＤＭＦ、４０℃；ｃ）例えばＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ／酢酸エチル（１：１）、ＲＴ；ｄ）例えばＴＢＡＦ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えば１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン、ＮＥｔ３、ＣａＣＯ３、１，４−ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＮ−クロロコハク酸イミド、ＴＥＭＰＯ、テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム、クロロホルム、０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）；ｇ）例えばＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｈ）例えばクロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｉ）例えばＴＢＡＦ、ＴＨＦ、水、ＲＴ；ｊ）例えば４−メチルモルホリン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｋ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式１４：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばホルムアルデヒド、Ｎａ２ＣＯ３、水、ＲＴ；ｂ）例えばＡｃ２Ｏ、ピリジン、ＴＨＦ、ＲＴ；ｃ）例えばジ−ｔｅｒｔ−ブチルマロネート、ＫＯｔＢｕ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＬｉＢＨ４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＢＤＭＳＣｌ、イミダゾール、ＤＣＭ、ＲＴ；ｆ）例えばデス−マーチンペルヨージナン、ＤＣＭ；ｇ）例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｈ）例えばｎＢｕ４ＮＦ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｉ）例えばＳＯＣｌ２、ＴＨＦ、ＲＴ；ｊ）例えばＡｃＳＫ、ｎＢｕ４ＮＩ、ＤＭＦ、９０℃；ｋ）例えばＮａＯＨ、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｌ）例えばＴＣＥＰ、ジオキサン、ＲＴ；ｍ）例えばエピマーの分離；ｎ）例えば６Ｎ塩酸、ＴＨＦ、ＲＴ；ｏ）例えばＭａｌ−ｄＰＥＧ（３）−Ｍａｌ、ＰＢＳ緩衝液、ＡＣＮ、ＲＴ］
図式１５：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＭａｌ−ｄＰＥＧ（３）−Ｍａｌ、ＰＢＳ緩衝液、ＡＣＮ、ＲＴ］
図式１６：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばＢＦ３ＯＥｔ２、ＴＨＦ、０℃；ｂ）：例えば亜硝酸イソアミル、−１０℃、０．５時間；ｃ）：例えばメチル２−クロロ−３−オキソブタノエート、ピリジン、水、−５℃；ｄ）：例えばＮＥｔ３、トルエン、ＲＴ；ｅ）：例えばＥｔ３ＳｉＨ、ＴＦＡ、ＲＴ；ｆ）：例えばＬｉＢＨ４、ＴＨＦ、６０℃；ｇ）：例えばデス−マーチンペルヨージナン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｈ）：例えば（Ｒ）−（＋）−メチル−２−プロパンスルフィンアミド、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド、ＴＨＦ、ＲＴ；ｉ）：例えばｔｅｒｔ−ＢｕＬｉ、ペンタン、ＴＨＦ、−７８℃；ｊ）：例えばＨＣｌ／ジオキサン、ＴＨＦ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｋ）：例えば３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｌ）：例えば２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｍ）：例えばメチルアミン、水、ＥｔＯＨ、５０℃］
図式１７：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−オキソ−Ｌ−ノルバリネート、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）：例えば２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）：例えばメチルアミン、水、ＥｔＯＨ、６０℃；ｄ）：例えばＴＨＦ、ＤＣＭ、５０℃；ｅ）：例えばＢｏｃ２Ｏ、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｆ）：例えばトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）、ＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｆ）：例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式１８：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式１９：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式２０：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式２１：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式２２：中間体の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、ＴＨＦ／水、ＲＴ；ｄ）例えばＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｅ）例えばＴｅｏｃ−ＯＳｕ、ＮＥｔ３、ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＦｍｏｃ−Ｃｌ、ジイソプロピルエチルアミン、ジオキサン／水２：１、ＲＴ］
図式２３：中間体の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、メタノール、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｅ）例えばＢｏｃ２Ｏ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式２４：中間体の合成
Figure 2018524321
［ａ）：例えばベンジルブロミド、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎａ２ＣＯ３、８５℃；ｃ）例えばＬｉＡｌＨ４、ＴＨＦ、０℃；ＭｎＯ２、ＤＣＭ、ＲＴ；ｄ）例えばＴｉ（ｉＯＰｒ）４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばｔＢｕＬｉ、ＴＨＦ、−７８℃；ＭｅＯＨ、ＮＨ４Ｃｌ；ｆ）例えばＨＣｌ／１，４−ジオキサン］
図式２５：システイン連結ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
図式２６：加水分解コハク酸イミドを介したシステイン連結ＡＤＣ類の合成
この方法は、特にはＬ１＝ＣＨ２であるＡＤＣ類について、それらのＡＤＣを開鎖連結型に変換するのに用いた。
Figure 2018524321
図式２７：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２８：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２９：ＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式３０：中間体およびＡＤＣ前駆体の一般合成方法
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）Ｒ２１−ＣＯＯＨ、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴまたはＲ２１−ＣＯＯＨ、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴまたはＲ２１−ＣＯＯＳｕ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式３１：レグマイン−開裂性リンカーを有するＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式３２：レグマイン−開裂性リンカーを有するＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
さらに、図式３２、３３および３４による他の中間体を、レグマイン開裂性ＡＤＣおよびＡＰＤＣ前駆体に変換することができる。
図式３２から３４に示したベンジルオキシカルボニル基に代わるものとして、ペプチド化学で確立された他の保護基を用い、それらを同様に公知である相当する方法によって結合させることが可能である。保護基戦略の選択は、その分子で起こる他の構造要素との適合性に関連する当業者に公知の要件に応じて行う。その分子におけるさらなる保護基がまだ存在している場合、それらは最終段階で除去することができる。
その合成は、その順序に関して適宜に配列し直すこともできる。
図式３３：レグマイン開裂性頭部基を有するシステイン結合ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）２から５当量ＴＣＥＰ、ＰＢＳｐＨ７．２、室温で３０分撹拌；ｃ）室温でアルゴン下に９０分撹拌し、次にＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってｐＨ８に再緩衝し、アルゴン下に室温で終夜撹拌し、次に超遠心によって濃縮し、ｐＨ７．２のＰＢＳで所望の濃度に設定する。）］
図式３４：レグマイン開裂性リンカーを有するリジン結合ＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、メタノール１．５時間、ＲＴ；ｃ）１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、室温で終夜撹拌；ｄ）ＰＢＳ中のＡＫ２、ＤＭＳＯに溶かした５当量の活性エステルの添加、室温でアルゴン下に６０分間の撹拌、ＤＭＳＯに溶かした追加の５当量の活性エステルの添加、室温でアルゴン下に６０分の撹拌、次にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で平衡としたＰＤ１０カラムによる精製（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、それに続く超遠心による濃縮およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による所望濃度の設定］
図式３５：レグマイン開裂性頭部基を有するＡＤＣ前駆体の合成
Figure 2018524321
［ａ）：ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｂ）クロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）Ｌ−システイン、ＮａＨＣＯ３、ＤＢＵ、イソプロパノール／水、５０℃；ｄ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃；ｆ）；ｄ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ］
図式３６：トランスグルタミナーゼカップリングを介したＡＤＣ類の合成
Figure 2018524321
［ａ：ＡＫ３ ５ｍｇ／ＤＰＢＳ ｐＨ７．４（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）、６当量の担毒体−リンカー前駆体（例えば中間体Ｑ３１−Ｑ３４）、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ溶液１２．５μＬ（１．２５Ｕ）の水中溶液（１００Ｕ／ｍＬ）５０μＬおよびＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ３７．５μＬを加え、３７℃で２４時間インキュベートする。］
Ａ．実施例
略称および頭字語：
Ａ４３１ＮＳ：ヒト腫瘍細胞系
Ａ５４９：ヒト腫瘍細胞系
ＡＢＣＢ１：ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー１（Ｐ−ｇｐおよびＭＤＲ１と同義語）
ａｂｓ．：純粋
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ａｑ．：水系、水溶液
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ＢＣＲＰ：乳癌耐性タンパク質、排出輸送体
ＢＥＰ：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ．：広い（ＮＭＲで）
Ｅｘ．：実施例
ＢｘＰＣ３：ヒト腫瘍細胞系
ｃａ．：約
ＣＩ：化学イオン化（ＭＳで）
Ｄ：二重線（ＮＭＲで）
Ｄ：日
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＤＣＩ：直接化学イオン化（ＭＳで）
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄ：二重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＭＡＰ：４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地（細胞培養のための標準培養液）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ、Ｄ−ＰＢＳ、ＰＢＳ：ダルベッコのリン酸緩衝塩溶液
ＰＢＳ＝ＤＰＢＳ＝Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．４、Ｓｉｇｍａから、Ｎｏ Ｄ８５３７
組成：
ＫＣｌ ０．２ｇ
ＫＨ２ＰＯ４（無水物）０．２ｇ
ＮａＣｌ ８．０ｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４（無水物）１．１５ｇ
Ｈ２Ｏで１リットルとする
Ｄｔ：三重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＴＴ：ＤＬ−ジチオスレイトール
ｄ． Ｔｈ：理論値の（化学収率で）
ＥＤＣ：Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＧＦＲ：上皮増殖因子受容体
ＥＩ：電子衝撃イオン化（ＭＳで）
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着検定法
ｅｑ．：当量
ＥＳＩ：電気スプレーイオン化（ＭＳで）
ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ：ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ（Ｔｏｆ＝飛行時間およびｑ＝四重極を用いる質量分析装置の名称）
ＦＣＳ：ウシ胎仔血清
Ｆｍｏｃ：（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル
ｓａｔ．：飽和
ＧＴＰ：グアノシン５′三リン酸
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣＴ−１１６：ヒト腫瘍細胞系
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸
ＨＯＡｃ：酢酸
ＨＯＡｔ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物
ＨＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
ＨＰＬＣ：高圧高速液体クロマトグラフィー
ＨＴ２９：ヒト腫瘍細胞系
ＩＣ５０：半最大阻害濃度
ｉ．ｍ．：筋肉的に、筋肉への投与
ｉ．ｖ．：静脈的に、静脈への投与
ｃｏｎｃ．：濃
ＫＰＬ−４：ヒト腫瘍細胞系
ＫＵ−１９−１９：ヒト腫瘍細胞系
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー結合質量分析
ＬＬＣ−ＰＫ１細胞：ルイス肺癌ブタ（ｐｏｒｋ）腎臓細胞系
Ｌ−ＭＤＲ：ヒトＭＤＲ１トランスフェクトＬＬＣ−ＰＫ１細胞
ＬｏＶｏ：ヒト腫瘍細胞系
ｍ：多重線（ＮＭＲで）
Ｍｅ：メチル
ＭＤＲ１：多剤耐性タンパク質１
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ｍｉｎ：分
ＭＳ：質量分析
ＭＴＴ：３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド
ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト腫瘍細胞系
ＮＣＩ−Ｈ５２０：ヒト腫瘍細胞系
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリジノン
ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル測定
ＮＭＲＩ：Ｎａｖａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＭＲＩ）由来のマウス系統
Ｎｕｄｅマウス：実験動物
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺癌
ＰＢＳ：リン酸緩衝塩溶液
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム／活性炭
Ｐ−ｐｇ：Ｐ−糖タンパク質（ｇｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、輸送体タンパク質
ＰＮＧａｓｅＦ：糖を開裂させる酵素
ｑｕａｎｔ．：定量的（収率で）
ｑｕａｒｔ：四重線（ＮＭＲで）
ｑｕｉｎｔ：五重線（ＮＭＲで）
Ｒｆ：保持指数（ＴＬＣで）
ＲＴ：室温
Ｒｔ：保持時間（ＨＰＬＣで）
ｓ：一重線（ＮＭＲで）
ｓ．ｃ．：皮下的に、皮下への投与
ＳＣＣ−４：ヒト腫瘍細胞系
ＳＣＣ−９：ヒト腫瘍細胞系
ＳＣＩＤマウス：重度の複合免疫不全を有する試験マウス
ＳＫ−ＨＥＰ−１：ヒト腫瘍細胞系
ｔ：三重線（ＮＭＲで）
ＴＢＡＦ：フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
ＴＣＥＰ：トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン
ＴＥＭＰＯ：（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）オキシル
ｔｅｒｔ：ターシャリー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔ３Ｐ（登録商標）：２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド
ＵＶ：紫外線スペクトル測定
ｖ／ｖ：体積比（溶液のもの）
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル
７８６−Ｏ：ヒト腫瘍細胞系。
アミノ酸略称
Ａｌａ＝アラニン
Ａｒｇ＝アルギニン
Ａｓｎ＝アスパラギン
Ａｓｐ＝アスパラギン酸
Ｃｙｓ＝システイン
Ｇｌｕ＝グルタミン酸
Ｇｌｎ＝グルタミン
Ｇｌｙ＝グリシン
Ｈｉｓ＝ヒスチジン
Ｉｌｅ＝イソロイシン
Ｌｅｕ＝ロイシン
Ｌｙｓ＝リジン
Ｍｅｔ＝メチオニン
Ｎｖａ＝ノルバリン
Ｐｈｅ＝フェニルアラニン
Ｐｒｏ＝プロリン
Ｓｅｒ＝セリン
Ｔｈｒ＝トレオニン
Ｔｒｐ＝トリプトファン
Ｔｙｒ＝チロシン
Ｖａｌ＝バリン。
ＨＰＬＣ法およびＬＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→１．２分５％Ａ→２．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＢＥＨ３００、２．１×１５０ｍｍ、Ｃ１８ １．７μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→１．５分２％Ｂ→８．５分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．５０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＱＭ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ３．５ミクロン；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌの炭酸アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分５％Ａ→４．５分５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→０．３分１０％Ｂ→１．７分９５％Ｂ→２．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９５％Ａ→６．０分５％Ａ→７．５分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
方法６（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ搭載Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ１．９μ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０分９７％Ａ→０．５分９７％Ａ→３．２分５％Ａ→４．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＳ Ｑｕａｄ ６１５０；ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×２．１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→０．３分９０％Ａ→１．７分５％Ａ→３．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０５−３０５ｎｍ。
方法８（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→２．０分２％Ｂ→１３．０分９０％Ｂ→１５．０分９０％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法９：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ精製法（方法ＬＩＮＤ−ＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ（カラムＷａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％アンモニア、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。
または
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ （カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）１００Ａ、ＡＸＩＡ Ｔｅｃｈ． ５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。
方法１０：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ分析法（ＬＩＮＤ＿ＳＱＤ＿ＳＢ＿ＡＱ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ；ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ；カラム：Ｚｏｒｔｅｘ ＳＢ−Ａｑ（Ａｇｉｌｅｎｔ）、５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．８μｍ；移動相Ａ：水＋０．０２５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）＋０．０２５％ギ酸；勾配：０．０分９８％Ａ−０．９分２５％Ａ−１．０分５％Ａ−１．４分５％Ａ−１．４１分９８％Ａ−１．５分９８％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．６００ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０ｎｍ。
方法１１（ＨＰＬＣ）：
装置：ＨＰ１１００シリーズ
カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ−１８ｅ、５０−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４５０．０００１、プレカラムＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄカートリッジキット、ＲＰ−１８ｅ、５−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４７０．０００１
勾配：流量５ｍＬ／分
注入容量５μＬ
溶媒Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％強度）／水（４ｍＬ／Ｌ）
溶媒Ｂ：アセトニトリル
開始２０％Ｂ
０．５０分２０％Ｂ
３．００分９０％Ｂ
３．５０分９０％Ｂ
３．５１分２０％Ｂ
４．００分２０％Ｂ
カラム温度：４０℃
波長：２１０ｎｍ。
方法１２（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＴ−ＭＳ；装置型ＵＨＰＬＣ＋：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×７５ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→２．５分９５％Ｂ→３．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．９０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ／最適積分経路２１０−３００ｎｍ。
方法１３：（ＬＣ−ＭＳ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ） Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ；装置Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨＣ１８ １．７μ ５０×２．１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌギ酸アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９５％Ａ→０．１分９５％Ａ→２．０分１５％Ａ→２．５分１５％Ａ→２．５１分１０％Ａ→３．０分１０％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
以下において製造が明瞭に記載されていない全ての反応物または試薬は、一般に利用可能な提供元から商業的に購入したものである。製造が同様に以下において記載されておらず、商業的に入手できなかったか、通常は使えない供給元から得た他の全ての反応物または試薬については、それらの製造が記載されている刊行文献を挙げてある。
方法１４：（ＬＣ−ＭＳ）（ＭＣＷ−ＬＴＱ−ＰＯＲＯＳＨＥＬＬ−ＴＦＡ９８−１０分）
ＭＳ装置型：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ−ＸＬ；ＨＰＬＣ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ＳＬ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ、ＰＯＲＯＳＨＥＬＬ １２０、３×１５０ｍｍ、ＳＢ−Ｃ１８ ２．７μｍ；溶離液Ａ：水＋０．１％トリフルオロ酢酸１リットル；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０．１％トリフルオロ酢酸１リットル；勾配：０．０分２％Ｂ→０．３分２％Ｂ→５．０分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：４０℃；流量：０．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
原料化合物および中間体：
中間体Ｃ１
トリフルオロ酢酸−（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１：１）
Figure 2018524321
ＷＯ２００６／００２３２６に記載の方法に従って、標題化合物を製造した。
中間体Ｃ２
ｔｅｒｔ−ブチル−（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ホモセリネート４．２２ｇ（１４．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１８０ｍＬに溶かし、ピリジン３．５ｍＬおよび１，１，１−トリアセトキシ−１λ５，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン９．２ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、次にジクロロメタン５００ｍＬで希釈し、１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液で２回抽出し、５％強度クエン酸で２回および１０％強度重炭酸ナトリウム溶液で２回その順で抽出した。有機相を分離し、硫酸マグネシウムで脱水し、真空乾燥した。残留物をジエチルエーテルに取り、ＨＣｌ（ジエチルエーテル中溶液）を加えた。沈殿を濾去し、濾液を濃縮し、アセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート３．７ｇ（９３％）を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階に用いた（Ｒｆ：０．５（ＤＣＭ／メタノール９５／５））。
中間体Ｃ１ ３．５ｇ（９．８５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．１３ｇ（１４．７７ｍｍｏｌ）および酢酸０．７ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温でさらに３０分間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物をアセトニトリル／水に取った。沈殿固体を濾過し、乾燥させて、標題化合物５．４６ｇ（８４％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ３
（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸
Figure 2018524321
中間体Ｃ２ ５．４６ｇ（８．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン４．８ｍＬおよびアセトキシアセチルクロライド２．２ｍＬ（２０．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回と次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル２：１を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ ３４０ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。これによって、アシル化中間体４．５７ｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１ｇ（１．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ２０ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ２０ｍＬを加えた。室温で５時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をｎ−ペンタンで２回磨砕した。各場合で、ｎ−ペンタンを傾斜法で除去し、残った固体を高真空乾燥した。これによって、（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−アミノブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１．１ｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体０．９１ｇ（１．５７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ７０ｍＬに溶かし、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート３．４３ｇ（１５．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．１ｍＬを加えた。室温で３０分間撹拌後、反応液をＤＣＭで希釈し、５％強度クエン酸で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をｎ−ペンタンで２回磨砕し、各場合でｎ−ペンタンを傾斜法で除去した。残った固体をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥して、標題化合物１．１１ｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ４
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ２ ５．４６ｇ（８．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン４．８ｍＬおよびアセトキシアセチルクロライド２．２ｍＬ（２０．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル２：１を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ ３４０ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。これによって、アシル化中間体４．５７ｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１．５ｇ（２．０３５ｍｍｏｌ）をエタノール５０ｍＬに取り、４０％強度メタンアミン水溶液５．８ｍＬを加えた。反応液を５０℃で４時間撹拌し、濃縮した。残留物をＤＣＭに取り、水で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。
残留物を高真空乾燥した。これによって、この中間体１．２３５ｍｇを得て、それをそれ以上精製せずにさらに反応させた。
この中間体１．２３５ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ １５ｍＬを加えた。室温で４時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリルから凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．０４ｇ（定量的）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸
Figure 2018524321
中間体Ｃ４ ０．９ｇ（１．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ６０ｍＬに溶かし、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート２．７ｇ（１２．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３．３ｍＬを加えた。室温で４５分間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をジエチルエーテルに取り、混合物が濁り始めるまでｎ−ペンタンを加えた。反応液を冷却して０℃とし、傾斜法で液を除去した。再度、ｎ−ペンタンを残留物に加え、混合物を傾斜法で液を除去した。残った固体をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥して、標題化合物０．９５ｇ（定量的）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−ヒドラジノ−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ３ １５０ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２１ｍＬに溶かし、次にＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）３７．２ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール３７ｍｇ（０．２４３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８５μＬ、最後に市販の９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルヒドラジンカルボキシレート４５ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、保護中間体６０ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体６０ｍｇ（０．０６７ｍｍｏｌ）をエタノール１９ｍＬに溶かし、ピペリジン６８１μＬおよび４０％強度メタンアミン水溶液３８６μＬを加えた。反応液を５０℃で１８時間撹拌し、濃縮した。残留物をアセトニトリル／水２：１に取り、ＴＦＡでｐＨ２に調節した。次に、混合物を再度濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物２５ｍｇ（理論値の５１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７
１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノイル｝ヒドラジノ）酢酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ３ ０．２ｇ（０．３０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ８０ｍＬに溶かし、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）０．１２５ｇ（０．４６ｍｍｏｌ）、市販のエチルヒドラジノアセテート塩酸塩９４ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５９μＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルおよび水を反応混合物に加え、相を分離した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を真空乾燥し、それ以上精製せずに反応させた。そのために、それをテトラヒドロフラン２０ｍＬに取り、水１０ｍＬおよび２Ｎ水酸化リチウム溶液３．２ｍＬを加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、次に、ＴＦＡを用いてｐＨ７に調節した。反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。このようにして、標題化合物をそれの先に溶出する位置異性体から分離した。相当する分画を合わせ、凍結乾燥し、乾燥することで、標題化合物１９．７ｇ（２段階で理論値の８％）を無色泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
保護中間体段階での位置異性体の分離後に、ＮＭＲスペクトル測定によって、別の実験で、位置異性体の構造割り付けを行った。標題化合物の保護されたエチル（１−｛（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノイル｝ヒドラジノ）アセテート中間体は、次の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムを有していた。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．８（ｍ、２Ｈ）、７．４−７．２（ｍ、６Ｈ）、７．０８（ｍ、１Ｈ）、６．７３（ｄ、１Ｈ）、５．６（ｓ、１Ｈ）、５．２５および４，８９（２ｄ、２Ｈ）、４．８９および４．７７（２ｄ、２Ｈ）、４．６２（ｔ、１Ｈ）、４．３２および３．７８（２ｄ、２Ｈ）、４．１（ｔ、２Ｈ）、３．６２−３．４７（ｍ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、１．４１および０．７２（２ｍ、２Ｈ）、１．３（ｓ、９Ｈ）、１．１８（ｔ、３Ｈ）、０．９２（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｃ８
Ｎ−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニン
Figure 2018524321
中間体Ｃ３ ２９３ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２５ｍＬに溶かし、次にＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）１４４ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１２８ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２１８μＬ、最後に市販の３−メトキシ−３−オキソプロパン−１−アミニウムクロライド７０ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物を高真空乾燥した。これによって、保護中間体１７７ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１７７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍＬに取り、２Ｎ水酸化リチウム溶液２．８ｍＬを加えた。反応液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を水に取り、溶液を５％強度クエン酸を用いてｐＨ５に調節した。混合物をＤＣＭで２回抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。最後に、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥して、標題化合物１３３ｍｇ（理論値の８１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９
（６Ｓ）−６−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−４，７−ジオキソ−３，１１，１４，１７−テトラオキサ−５，８−ジアザエイコサン−２０−酸
Figure 2018524321
最初の段階で、中間体Ｃ５ ７０ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １５ｍＬ中、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩４４ｍｇ（０．２２８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物３５ｍｇ（０．２２８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬの存在下にｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ｝プロパノエート３２ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。
反応液を室温で終夜撹拌し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体３３ｍｇ（理論値の３３％）を得た。これをジクロロメタン１１ｍＬ中のトリフルオロ酢酸１．１ｍＬとともに１時間撹拌して、後処理後、完全脱保護化合物２６ｍｇ（９８％）を得た。
最後に、その中間体をＤＣＭ ２ｍＬに取り、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、各場合でジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート１０ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬを２回加え、室温で３日間撹拌することによって導入した。分取ＨＰＬＣによる生成物の精製によって、標題化合物１６．４ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−（３−アミノベンジル）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
中間体Ｃ１から６段階かけて標題化合物を製造した。最初の段階で、中間体Ｃ１ １ｇ（２．７７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート０．８６４ｇ（５ｍｍｏｌ）をメタノール１００ｍＬ中で合わせ、酢酸４００ｍＬおよび１．２８８ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）ボラン−ピリジン錯体を加えた。反応液を室温で３日間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／酢酸エチル９：１→ジクロロメタン／メタノール９５：５）によって精製した。適切な分画を濃縮し、高真空乾燥して、Ｎ−アルキル化中間体１．２５５ｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１．２５５ｇ（２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１．２ｍＬおよびアセトキシアセチルクロライド０．５２ｍＬ（４．８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
これによって、アシル化中間体５９３ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体９９３ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）をエタノール１００ｍＬに溶かし、１０％パラジウム／活性炭６０ｍｇを加えた後、標準水素圧下で室温で３分間水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱ベンジル化イミダゾール誘導体４９４ｍｇ（理論値の９１％）を実質的に無色の油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１５０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）を最初に、ＤＭＦ １５ｍＬに入れ、炭酸カリウム６９．２ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１５分撹拌後、ｐ−ニトロベンジルブロミド６０ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を終夜撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、ロータリーエバポレータで濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を１，４−ジオキサンから凍結乾燥した。これによって、中間体１６９ｍｇ（定量的）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１６５ｍｇ（０．２５１ｍｍｏｌ）をエタノール３０ｍＬに取り、４０％強度メタンアミン水溶液０．３５ｍＬを加えた。反応液を５０℃で５時間撹拌し、同量のメチルアミン溶液を再度加えた。１０時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮した。蒸留物をジエチルエーテルとともに２回再蒸留し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、この中間体１４８ｍｇ（理論値の８９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
前駆体９８ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ １５ｍＬに溶かし、亜ジチオン酸二ナトリウム５６９ｍｇ（３．２７ｍｍｏｌ）の水（６ｍＬ）中溶液を加え室温で．５０℃で８時間撹拌後、同量のジチオナイト（Ｈ２Ｏ １ｍＬに溶かしたもの）を再度加えた。５０℃でさらに１６時間撹拌した後、反応液を冷却して室温とし、酢酸エチルで抽出した。有機相を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製したた。残留物の１，４−ジオキサンからの凍結乾燥によって、標題化合物４４．５ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１
Ｒ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−ホモシステイン／トリフルオロ酢酸塩（１：１）
Figure 2018524321
最初に（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン９９０．０ｍｇ（２．７９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム８２８．８ｍｇ（３．９１ｍｍｏｌ）および酢酸１２９．９ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ジクロロメタン１５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート（中間体Ｌ５８）６９８．１ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：２）によってクロマトグラフィー精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート１．２５ｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
トリエチルアミン１５１．４ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド１６１．６ｍｇ（１．４３ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート４００．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で３回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲル（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝３：１）によってクロマトグラフィー精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート２５４．４ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋ＨＣＯＯ−）−。
２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート１１７．４ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）をイソプロパノール１０．０ｍＬに溶かし、１Ｍ ＮａＯＨ ９２８．４μＬおよびＤＬ−ホモシステイン５０．２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７５．３ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．４０（ｍ、１Ｈ）、０．７５−０．９１（ｍ、１１Ｈ）、１．３０（ｍ、１Ｈ）、１．９９−２．２３（ｍ、２Ｈ）、２．６３−２．８８（ｍ、４Ｈ）、３．１８−３．６１（ｍ、５Ｈ）、３．７９−４．１０（ｍ、３Ｈ）、４．８９（ｄ、１Ｈ）、４．８９（ｄ、１Ｈ）、５．１６（ｄ、１Ｈ）、５．５６（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｍ、１Ｈ）、６．９１（ｓ、１Ｈ）、６．９７（ｍ、１Ｈ）、７．１３−７．３８（ｍ、６Ｈ）、７．４９（ｓ、１Ｈ）、７．６３（ｍ、１Ｈ）、８．２６（ｓ、３Ｈ）。
中間体Ｃ１２
Ｒ／Ｓ−［（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−カルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル］ホモシステイン
Figure 2018524321
原料としてメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（中間体Ｌ５７）および中間体Ｃ５２を用い、中間体Ｃ１１の合成と同様にして合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１３
９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザオクタデカン−１８−酸
Figure 2018524321
中間体Ｃ１６ ９０．０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）および６−（アセチルスルファニル）ヘキサン酸４３．６ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）をメタノール９．０ｍＬに溶かし、水１滴および炭酸カリウム７３．９ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌し、酢酸エチルで希釈した。有機相を水／飽和ＮａＣｌ溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲルでクロマトグラフィー精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：２）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、理論値の８３％で標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１４
Ｒ／Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］ホモシステイン
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ１６）１００．０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）をイソプロパノール４．０ｍＬに入れ、１Ｍ ＮａＯＨ溶液２７６．５ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ）およびＤ／Ｌ−ホモシステイン４５．９ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈した。有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。
これによって、標題化合物９２．６ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１５
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ１）７５０．０ｍｇ（２．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５．０ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム６２６．０ｍｇ（２．９５ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｃ１３９μＬ（２．４３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート（文献手順Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００３， ４６， ３５３６に従って合成）４２０．３ｍｇ（２．４３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸エチルを加え、反応混合物を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲルでクロマトグラフィー精製した（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝４：１）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物８８１．０ｍｇ（理論値の８２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１６
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１５）３７３．４ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１６９．５ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド１８１．０ｍｇ（１．６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルを加え、混合物を水で繰り返し抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲルでクロマトグラフィー精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：０．５）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物３３６．０ｍｇ（理論値の７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１７
９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−１２−チア−５，９−ジアザヘプタコサン−２７−酸
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ１６）５０．０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、炭酸セシウム６９．１ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）および１−スルファニル−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸２８．８ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で終夜撹拌した。水を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物２５．１ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１８
ｔｅｒｔ−ブチル［２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザペンタコサン−２５−イル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に、９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−１２−チア−５，９−ジアザヘプタコサン−２７−酸（中間体Ｃ１７）２１．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）５．８ｍｇ（０．０．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２６．１ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）２０．９ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１９．７ｍｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１９
ｔｅｒｔ−ブチル（１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７，１３−ジアザ−２−シラヘキサデカン−１６−イル）カーバメート
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ１６）５８．５ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、２−（トリメチルシリル）エチル（２−スルファニルエチル）カーバメート（中間体Ｌ３９）４４．０ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム６４．７ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で４時間撹拌した。その反応を、中間体Ｃ１６ ４６．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）で繰り返した。二つの反応混合物を合わせ、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物９８．０ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２０
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛［（２−アミノエチル）スルファニル］アセチル｝｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル（１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７，１３−ジアザ−２−シラヘキサデカン−１６−イル）カーバメート（中間体Ｃ１９）９８．０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を最初に、に入れ２．０ｍＬＤＭＦ／ｔｅｒｔ−ブタノール（９：１）、および９６．２ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）ＣｓＦを加え．混合物を撹拌し９０℃で１６時間．反応混合物を、によって直接精製し分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物５７．１ｍｇ（理論値の６１％）を得た。その化合物は、相当するスルホキシドも含んでいる。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２１
ｔｅｒｔ−ブチル［３８−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，３１，３７−トリオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３５−チア−４，３２，３８−トリアザヘンテトラコンタン−４１−イル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛［（２−アミノエチル）スルファニル］アセチル｝｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ２０）５７．１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコス−１−イル｝プロパンアミド５３．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１５．５ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物４９．７ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２２
ｔｅｒｔ−ブチル［３８−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３５−オキシド−３，３１，３７−トリオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３５λ４−チア−４，３２，３８−トリアザヘンテトラコンタン−４１−イル］カーバメート
Figure 2018524321
中間体Ｃ２１の合成における副生成物として標題化合物を生成した。これによって、標題化合物１５．５ｍｇ（理論値の１５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２３
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート
立体異性体の混合物
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｌ２８）４１１．２ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ１）３３９．７ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ６８．９ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム４０５．２ｍｇ（１．９１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、酢酸エチルおよび水を残留物に加えた。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、ＢｉｏｔａｇｅＩｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム５０ｇＳＮＡＰ、流量４０ｍＬ／分、石油エーテル／酢酸エチル）を用いて精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート５４１．５ｍｇ（理論値の８１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４および１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート５４１．５ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１３．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１８０．６ｍｇ（１．７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を冷却して０℃とし、アセトキシアセチルクロライド２３３．１ｍｇ（１．７１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。追加のトリエチルアミン１８０．６ｍｇ（１．７８ｍｍｏｌ）およびアセトキシアセチルクロライド２３３．１ｍｇ（１．７１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに８０時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を水と酢酸エチルとの間で分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、ＢｉｏｔａｇｅＩｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム５０ｇＳＮＡＰ、流量４０ｍＬ／分、石油エーテル／酢酸エチル）を用いて精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート５２９．２ｍｇ（理論値の８６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３および１．５６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート５２９．２ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ／ｔｅｒｔ−ブタノール（９：１）１０．０ｍＬに入れ、ＣｓＦ ５０３．７ｍｇ（３．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を９０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、ＢｉｏｔａｇｅＩｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム５０ｇＳＮＡＰ、流量２５ｍＬ／分、ジクロロメタン／メタノール）を用いて精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−アミノピロリジン−１−カルボキシレート１７２．４ｍｇ（理論値の４０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５および１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−アミノピロリジン−１−カルボキシレート１７２．４ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）をメタノール／水（２：１）４．５ｍＬに入れ、炭酸カリウム８０．２ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１１６．０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分および１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２４
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ１）２６．８ｍｇをジクロロメタン３．０ｍＬに溶かし、ＨＯＡｃ ５．２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム２２．４ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｌ２９）６２．４ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート５７．６ｍｇ（理論値の９１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５および１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート７７．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに入れ、トリエチルアミン２１．９ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド２９．５ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を酢酸エチルに取った。有機相を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で各場合で１回ずつ洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧下に留去した。その反応を、ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート７７．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）で繰り返した。合わせた残留物をシリカゲルで精製した（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝２：１）。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート１７１．１ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５６および１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート３０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）０．５ｍＬに入れた。混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物２５．０ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２５
４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ１）１７１．４ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４．０ｍＬに入れ、ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｌ３０）２４８．５ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｃ ３４．８ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム２０４．４ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で６０時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を、ＢｉｏｔａｇｅＩｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、流量２５ｍＬ／分、石油エーテル／酢酸エチル）を用いて精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２６７．０ｍｇ（理論値の７７％）を得た。
Ｃ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２６７．０ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン９１．０ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を冷却して０℃とした。アセトキシアセチルクロライド１１７．４ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。追加のトリエチルアミン５９３．４ｍｇ（５．８７ｍｍｏｌ）およびアセトキシアセチルクロライド４２７．０ｍｇ（３．１３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１０時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２１６．３ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７０および１．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８３［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２１６．３ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ４．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ １６．６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）３６１．１ｍｇ（１．３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で４時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート９４．０ｍｇ（理論値の５１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート５２．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液／アセトニトリル（９：１）４．０ｍＬに入れ、ＴＥＭＰＯ １．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を加えた。亜塩素酸ナトリウム１４．１ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の水溶液（水１．０ｍＬ）および１０％強度次亜塩素酸ナトリウム溶液１１５．８μＬ（０．１６ｍｍｏｌ）を同時に加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を１０％強度亜硫酸ナトリウム溶液に投入し、酢酸エチルを加えた。水相を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、残留物をそれ以上精製せずに次の合成段階に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８３［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、４−｛［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］メチル｝−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸１０３．０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）をメタノール／水（２：１）４．５ｍＬに入れ、炭酸カリウム４５．９ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。減圧下に溶媒留去し、標題化合物をそれ以上精製せずに次の合成段階に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２６
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５９０ｍｇ（１．６９ｍｍｏｌ）および酢酸１５５μＬ（２．７０ｍｍｏｌ、１６２ｍｇ）をジクロロメタン３０ｍＬに入れ、混合物を室温で３０分間撹拌した。ジクロロメタン４０ｍＬに溶かした（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液による抽出によってトリフルオロ酢酸／（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１：１）から得た）６００ｍｇ（１．６８７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−ホルミルプロピル）カーバメート７５０ｍｇ（２．３６２ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって分離した。これによって、標的化合物５１０ｍｇ（理論値の４６％）をジアステレオマー混合物として得た。
異性体１：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分（５１％）；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
異性体２：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分（４９％）；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２７
２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）プロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）プロピル］カーバメート５１０ｍｇ（０，７７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１８１ｍｇ（２４９μＬ、１．７８６ｍｍｏｌ）および２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル２１９ｍｇ（１．５５３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって分離した。これによって、標的化合物２９０ｍｇ（理論値の４９％）をエピマー混合物として得た。
異性体１：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
異性体２：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２８
２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル
Figure 2018524321
２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）プロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル２８５ｍｇ（０．３７６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ５ｍＬに溶かした。１Ｍテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド／ＴＨＦ溶液４５２μＬ（０．４５２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって分離し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物２１４ｍｇ（理論値の８１％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９２％）をエピマー混合物として得た。
異性体１：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
異性体２：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ２９
２−（［３−（アセチルスルファニル）−２−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝プロピル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル
Figure 2018524321
最初に、２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル２１０ｍｇ（０．３０１ｍｍｏｌ）を純粋ＴＨＦ ８ｍＬに入れ、純粋ＴＨＦ ８ｍＬに溶かした塩化チオニル１７８ｍｇ（１．５０３ｍｍｏｌ、１０９μＬ）を室温で滴下し、混合物を室温で４０分間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物を純粋ＤＭＦ １６ｍＬに取り、チオ酢酸カリウム１７２ｍｇ（１．５０３ｍｍｏｌ）およびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージド１３３ｍｇ（０．３６１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を９０℃で２時間撹拌した。冷却後、水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって精製し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物１５５ｍｇ（理論値の６９％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９４％）をエピマー混合物として得た。
異性体１：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
異性体２：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３０
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル［ジスルファンジイルビス（２−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝プロパン−３，１−ジイル）］ビスカーバメート
Figure 2018524321
最初に、２−（［３−（アセチルスルファニル）−２−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝プロピル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１．２２０ｇ（１．０１０ｍｍｏｌ、ＬＣ／ＭＳによる純度＝５８％）をＴＨＦ ３０ｍＬおよびメタノール３０ｍＬに入れ、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、混合物を室温で２時間撹拌した。水を加え、反応混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって分離した。これによって、標的化合物３９０ｍｇ（理論値の５４％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝８６％）をジアステレオマー混合物として得た。
異性体：
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．８１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３１
ｔｅｒｔ−ブチル３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（スルファニルメチル）プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル［ジスルファンジイルビス（２−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝プロパン−３，１−ジイル）］ビスカーバメート３９０ｍｇ（０．２７２ｍｍｏｌ、ＬＣ／ＭＳによる純度＝８６％）を１，４−ジオキサン２０ｍＬおよびＰＢＳ緩衝液１０ｍＬに取り、３，３′，３″−ホスファントリイルトリプロパン酸塩酸塩（１：１）２３４ｍｇ（０．８１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、ジクロロメタンで磨砕し、濾液を濃縮し、高真空乾燥した。残留物をイソプロパノール８ｍＬに溶かし、キラルクロマトグラフィー（カラム：２５０×３０ｍｍ、Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＺ−Ｈ充填、移動相：イソヘキサン／イソプロパノール＝９０：１０）によって精製した。これによって、標的化合物の二つの分画を得た。分画１は異性体１ １８１．２ｍｇ（理論値の５０％）を含み、分画２は異性体２ ９０．２ｍｇ（理論値の２５％）を与えた。
異性体１：
キラルＨＰＬＣ（カラム：２５０×４．６ｍｍ、Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＺ−Ｈ充填、移動相：イソヘキサン／エタノール９０：１０）：Ｒｔ＝６．９８分。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
異性体２：
キラルＨＰＬＣ（カラム：２５０×４．６ｍｍ、Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＺ−Ｈ充填、移動相：イソヘキサン／エタノール９０：１０）：Ｒｔ＝９．３９分。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３２
Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（スルファニルメチル）プロピル｝カーバメート（異性体１）１２３ｍｇ（１９９．４２μｍｏｌ）をＴＨＦ ２ｍＬに溶かし、半濃塩酸１０ｍＬとともに室温で１時間撹拌した。反応溶液をアルゴン下に脱気し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物１０８ｍｇ（理論値の９８％）を得た。
異性体１
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３３
Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体２）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（スルファニルメチル）プロピル｝カーバメート（異性体２）１２３ｍｇ（１９９．４２μｍｏｌ）をＴＨＦ ２ｍＬに溶かし、半濃塩酸１０ｍＬとともに室温で１時間撹拌した。反応溶液をアルゴン下に脱気し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物５８ｍｇ（理論値の６３％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９１％）を得た。
異性体２
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３４
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に、（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液による抽出によってトリフルオロ酢酸／（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１：１）から入手）３．７９０ｇ（１０．０２ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．１８６ｇ（１５．０４ｍｍｏｌ）および６９０μＬ（１２．０３ｍｍｏｌ、７２２ｍｇ）をジクロロメタン１００ｍＬに入れた。混合物を室温で５分間撹拌した。
ｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート４．６８７ｇ（２７．０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮した。残留物をシリカゲルでのクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／酢酸エチル、勾配＝４：１→１：１）によって精製した。これによって、標的化合物２．５７ｇ（理論値の４８％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３５
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（４−ニトロベンゾイル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート２００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を純粋ジクロロメタン９ｍＬに入れ、トリエチルアミン１２０μＬ（０．８６ｍｍｏｌ、８７ｍｇ）を室温で加えた。室温で、純粋ジクロロメタン１ｍＬに溶かした４−ニトロベンゾイルクロライド８３ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で１時間撹拌した。水を加え、混合物をロータリーエバポレータで濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって分離し、乾燥させた。これによって、標的化合物１８１ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３６
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［（４−アミノベンゾイル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（４−ニトロベンゾイル）アミノ］プロピル｝カーバメート１７０ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに入れた。鉄粉１４３ｍｇ（２．５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１６時間撹拌した。冷却後、水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮した。残留物を、ＨＶ下に乾燥させた。これによって、標的化合物１５４ｍｇ（理論値の７７％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝８２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３７
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［（４−アミノベンゾイル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝カーバメート３８．６ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ、ＬＣ／ＭＳ純度＝８２％）を純粋ＤＭＦに溶かし、ＨＡＴＵ ２４．８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１３．０ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン６３ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−オール（ＨＯＡｔ）７．５ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１６時間撹拌した。ＨＡＴＵ １９．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２時間撹拌した。冷却後、反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって直接精製した。これによって、標的化合物６．５ｍｇ（理論値の９％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝７．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２００．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３８
２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
Figure 2018524321
最初に、２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（中間体Ｃ１）３００．０ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ ５８．３ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム２５０．４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール１９７．２ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲル（移動相：酢酸エチル／シクロヘキサン１：５）で精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物３３３．３ｍｇ（７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ３９
２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル
Figure 2018524321
最初に、２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（中間体Ｃ３８）３３２．３ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン８．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１４２．５ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド１８４．０ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲル（移動相：酢酸エチル／シクロヘキサン１：３）で精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物３６７．１ｍｇ（６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ４０
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド
Figure 2018524321
最初に、２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル（中間体Ｃ３９）５８３．１ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）をエタノール１５．０ｍＬに入れ、メタンアミン（４０％水溶液）１．４１ｇ（１８．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去しおよび残留物をトルエンと３回共蒸留した。残留物をシリカゲルによってクロマトグラフィー精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：５）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物３２４．９ｍｇ（７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ４１
トリフルオロ酢酸／Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）５０．０ｍｇ（０．１１ｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネート３０．４ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン３２．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ １９．１ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−（｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート３８．０ｍｇ（５６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−（｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート３３．６ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３．０ｍＬに入れた。ＴＦＡ １１９．４ｍｇ（１．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド（１：１）３２．８ｍｇ（９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド（１：１）２９．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリネート１４．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン１８．２ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド２３．１ｍｇ（６９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１９．４ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ５９．７ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＴＦＡ １１９．４ｍｇ（１．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を再度室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１９．２ｍｇ（９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ４２
２，５−ジフルオロベンゼンジアゾニウムテトラフルオロボレート
Figure 2018524321
最初に、三フッ化ホウ素−ジエチルエーテル錯体３．００ｇ（２１．１６ｍｍｏｌ、２．６８ｍＬ）を入れ、純粋ＴＨＦ ２７ｍＬに溶かした２，５−ジフルオロアニリン１．３７ｇ（１０．５８ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり滴下した。−１０℃で、純粋ＴＨＦ ３ｍＬに溶かした亜硝酸イソアミル溶液１．６１ｇ（１３．７５ｍｍｏｌ、１．８５ｍＬ）を滴下し、撹拌を同じ温度で３０分間続けた。ジエチルエーテル１５ｍＬを加え、沈殿したジアゾニウム塩を濾去し、少量のジエチルエーテルで洗浄し、高真空乾燥した。これによって、標的化合物２．２７ｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝０．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４１［Ｍ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝８．１１−８．１７（ｍ、１Ｈ）、８．３６−８．４３（ｍ、１Ｈ）、８．６９−８．７３（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４３
メチルクロロ［２−（２，５−ジフルオロフェニル）ヒドラジニリデン］アセテート
Figure 2018524321
アルゴン雰囲気下に、最初に、メチル２−クロロ−３−オキソブタノエート３．６３ｇ（２４．１３ｍｍｏｌ）を水１００ｍＬに入れ、ピリジン４８．９０ｇ（６１８．１９ｍｍｏｌ、５０．００ｍＬ）を−５℃で加え、混合物をこの温度で１０分間撹拌した。−５℃で、２，５−ジフルオロベンゼンジアゾニウムテトラフルオロボレート５．００ｇ（２１．９４ｍｍｏｌ）を加えたところ、橙赤色懸濁液が形成された。混合物をこの温度で３０分間撹拌し、反応液を水で希釈し、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。これによって、標的化合物５．５２ｇ（理論値の９７％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝３．８５（ｓ、３Ｈ）、６．８８−６．９４（ｍ、１Ｈ）、７．１６−７．２１（ｍ、１Ｈ）、７．３１−７．３７（ｍ、１Ｈ）、１０．００（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４４
メチル４−ベンゾイル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート
Figure 2018524321
メチルクロロ［２−（２，５−ジフルオロフェニル）ヒドラジニリデン］アセテート（ＬＣ／ＭＳによる純度９６％）３．５０ｇ（１３．５２ｍｍｏｌ）を純粋トルエン９ｍＬに溶かし、（２Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−１−フェニルプロパ−２−エン−１−オン２．６１ｇ（１４．８７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３．０１ｇ（２９．７３ｍｍｏｌ）、４．１４ｍＬ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：０．１％ギ酸含有ＡＣＮ／水、勾配）によって分離した。これによって、標的化合物１．７９ｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝３．８６（ｓ、３Ｈ）、７．４４−７．５０（ｍ、１Ｈ）、７．５５−７．７２（ｍ、４Ｈ）、７．８１−７．８７（ｍ、３Ｈ）、８．８０（ｄ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４５
［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］メタノール
Figure 2018524321
最初に、メチル４−ベンゾイル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（ＬＣ／ＭＳによる純度＝９６％）３．１８ｇ（８．９２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸５０ｍＬに入れ、トリエチルシラン８．７４ｇ（７５．１３ｍｍｏｌ、１２ｍＬ）を滴下し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。得られた残留物を純粋ＴＨＦ １２０ｍＬに取り、ボラン−テトラヒドロフラン錯体２．８９ｇ（３３．６３ｍｍｏｌ、３３．６３ｍＬ）を０℃で滴下した。混合物を終夜撹拌した。変換率が低かったため、追加の１Ｍ水素化ホウ素リチウム溶液／ＴＨＦ１２．３３ｍＬ（１２．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間、６０℃で３０分間および８０℃で２時間撹拌した。０℃で、飽和重炭酸ナトリウム溶液６０ｍＬで注意深く反応停止した。混合物を各場合で酢酸エチル１００ｍＬで２回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標的化合物２．６７ｇ（理論値の７６％、純度＝９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝３．９１（ｓ、２Ｈ）、４．４５（ｄ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、７．１８−７．２３（ｍ、２Ｈ）、７．２７−７．３２（ｍ、４Ｈ）、７．４６−７．５３（ｍ、１Ｈ）、７．６０−７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．９５（ｄ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４６
４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボアルデヒド
Figure 2018524321
［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］メタノール（純度９６％）２．６６ｇ（８．５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５０ｍＬに溶かし、デス−マーチンペルヨージナン４．３３ｇ（１０．２０ｍｍｏｌ）を１回で少量ずつ加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、半濃重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬおよび１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液１００ｍＬを加え、混合物を２０分撹拌した。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで脱水し、高真空下に濃縮した。これによって、標的化合物２．３５ｇ（理論値の８８％、純度＝９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝４．１２（ｓ、２Ｈ）、７．１７−７．２１（ｍ、１Ｈ）、７．２７−７．３１（ｍ、４Ｈ）、７．３７−７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．５７−７．６２（ｍ、１Ｈ）、７．７５−７．７８（ｍ、１Ｈ）、８．２２（ｄ、１Ｈ）、１０．０６（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４７
（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン
Figure 2018524321
４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボアルデヒド２．３５ｇ（７．５６ｍｍｏｌ）を純粋ＴＨＦ ２５ｍＬに溶かし、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド１．１０ｇ（９．０８ｍｍｏｌ）およびチタン（ＩＶ）イソプロポキシド４．７３ｇ（１６．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍＬおよび酢酸エチル３０ｍＬを加えた。珪藻土約３ｇを加え、混合物を１時間沸騰還流させた。混合物を濾過し、有機相を濾液から分離した。水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物をそれ以上精製せずにさらに用いた。
アルゴン雰囲気下に、残留物を純粋ＴＨＦ６０ｍＬに溶かし、冷却して−７８℃とし、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムのペンタン中溶液（ｃ＝１．６ｍｏｌ／Ｌ）１４．５ｍＬ（２３．２４ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を−７８℃で３時間撹拌し、次にメタノール５ｍＬおよび飽和塩化アンモニウム溶液１５ｍＬで反応停止した。撹拌しながら、反応混合物を昇温させて室温とした（約３０分）。混合物を酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物をそれ以上精製せずにさらに用いた。
残留物をＴＨＦ ３０ｍＬおよびメタノール６ｍＬに取り、４Ｎ塩化水素のジオキサン中溶液６ｍＬ（２４．００ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。飽和炭酸ナトリウム溶液１５ｍＬを加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を分離し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって分離した。これによって、標的化合物の二つの分画を得た。第１の分画は生成物１．３１ｇ（理論値の７２％、ＬＣ／ＭＳ純度＝９７％）を与え、第２の分画は生成物０．３７ｇ（理論値の１７％、ＬＣ／ＭＳ純度＝８３％）を与えた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．９１（ｓ、９Ｈ）、１．７１（ｓ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、１Ｈ）、３．８７（ｓ、２Ｈ）、７．１７−７．３２（ｍ、６Ｈ）、７．４５−７．５１（ｍ、１Ｈ）、７．６１−７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．８４（ｓｂｒ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４８
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート
Figure 2018524321
（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン１．２８ｇ（３．３５ｍｍｏｌ、ＬＣ／ＭＳ純度９３％）を純粋ジクロロメタン１００ｍＬに溶かし、酢酸２６１ｍｇ（４．３５ｍｍｏｌ、２５０μＬ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．１４ｇ（４．３４ｍｍｏｌ）を室温で加え、その後５分間撹拌した後に、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート１．１９ｇ（４．３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、ロータリーエバポレータで濃縮し、アセトニトリルおよび水に取り、分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製した。これによって、標的化合物１．６４ｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１３［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．０１（ｓ、９Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）、１．３５（ｓ、９Ｈ）、１．８０−１．８９（ｍ、１Ｈ）、２．０１−２．１１（ｍ、１Ｈ）、２．５４−２．７１（ｍ、２Ｈ）、３．７５−３．８１（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｓ、２Ｈ）、４．１８（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｄ、１Ｈ）、７．２０−７．２４（ｍ、１Ｈ）、７．２８−７．３４（ｍ、５Ｈ）、７．５２−７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．７６−７．８０（ｍ、１Ｈ）、８．１０（ｓｂｒ、１Ｈ）、８．２３（ｓｂｒ、１Ｈ）。
中間体Ｃ４９
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート２２５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を純粋ジクロロメタン１０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１５６ｍｇ（１．５４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド１２５ｍｇ（０．９２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。追加のアセトキシアセチルクロライド２５１ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１８６ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。少量のジクロロメタンを加え、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物をエタノール１０ｍＬに取り、４０％強度メチルアミン水溶液０．９１ｍＬ（１２．６７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で３時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物をジクロロメタンに取り、有機相を水で２回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物をジクロロメタン２ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸２ｍＬ（２５．９６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空乾燥した。残留物を純粋ジクロロメタン１０ｍＬに取り、トリエチルアミン２９８ｍｇ（２．９５ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート４２９ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水、勾配）によって精製した。これによって、標的化合物６２ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１５［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．９１（ｓ、９Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）、２．６４−２．７２（ｍ、４Ｈ）、３．５０−３．５８（ｍ、１Ｈ）、３．７２（ｄｄ、２Ｈ）、４．０７−４．２２（ｍ、２Ｈ）、４．４７−４．５４（ｍ、１Ｈ）、５．７５（ｓ、１Ｈ）、６．８４−６．８９（ｍ、１Ｈ）、７．１５−７．３０（ｍ、６Ｈ）、７．４７−７．５３（ｍ、１Ｈ）、７．７０−７．７５（ｍ、１Ｈ）、８．０９−８．１３（ｍ、１Ｈ）、１１．６６（ｓｂｒ、１Ｈ）。
中間体Ｃ５０
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート
Figure 2018524321
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸６０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を純粋ＤＭＦ １０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ７４ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。７４ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）トリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）を別個に純粋ＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、３８ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを加え、その混合物を反応混合物に滴下した。反応液を室温で３日間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって直接精製した。これによって、標的化合物９．３ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ５１
Ｎ−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニン
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ４７を、中間体Ｃ２と同様にして、ベンジルＮ−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝−β−アラニネートで還元的にアルキル化した。次に、２級アミノ基を、中間体Ｃ２７について記載の方法に従って２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、次に二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウムのメタノール中溶液で加水分解した。標題化合物２３ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５２
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン
Figure 2018524321
最初に、４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１０．００ｇ（４９．０１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １００．０ｍＬに入れ、炭酸セシウム２０．７６ｇ（６３．７２ｍｍｏｌ）およびベンジルブロマイド９．２２ｇ（５３．９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、水と酢酸エチルとの間で分配し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。反応を４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル９０．０ｇで繰り返した。
二つの合わせた反応取得物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｄａｉｓｏ ３００×１００；１０μ、流量：２５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１２５．１５ｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル４．８０ｇ（１６．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに入れ、（２，５−ジフルオロフェニル）ボロン酸３．６１ｇ（２２．８５ｍｍｏｌ）、飽和炭酸ナトリウム１９．２０ｍＬ溶液および［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）：ジクロロメタン１．３３ｇ（１．６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８５℃で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄した。有機相を水で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲルによってクロマトグラフィー精製した（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル１００：３）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（１１．００ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ９０．０ｍＬに入れ、水素化リチウムアルミニウム１．０４ｇ（２７．５０ｍｍｏｌ）（２．４Ｍ ＴＨＦ中溶液）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。０℃で、飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液を加え、酢酸エチルを反応混合物に加えた。有機相を飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタン３０．０ｍＬに溶解させた。酸化マンガン（ＩＶ）３．３８ｇ（３２．９９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。追加の酸化マンガン（ＩＶ）２．２０ｇ（２１．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド）２．８０ｇを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド２８．２１ｇ（９４．８８ｍｍｏｌ）と（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２３．００ｇ（１８９．７７ｍｍｏｌ）を、純粋ＴＨＦ ４０３．０ｍＬに入れ、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド６７．４２ｇ（２３７．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。飽和ＮａＣｌ溶液５００．０ｍＬおよび酢酸エチル１０００．０ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１５００＋３４０ｇＳＮＡＰ、流量２００ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：１０）を用いて精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．６３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（Ｅ／Ｚ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２５．００ｇ（６２．４２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下に純粋ＴＨＦに入れ、冷却して−７８℃とした。ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．７Ｍペンタン中溶液）１２．００ｇ（１８７．２７ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、混合物をこの温度で３時間撹拌した。−７８℃で、メタノール７１．４ｍＬおよび飽和塩化アンモニウム溶液２１４．３ｍＬをその順で加え、反応混合物を昇温させて室温とし、室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２８．００ｇ（６１．０５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン１８６．７ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４−ジオキサン溶液（４．０Ｍ）４５．８ｍＬを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｋｉｎｅｔｉｘ１００×３０；流量：６０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。アセトニトリルを減圧下に留去し、ジクロロメタンを水系残留物に加えた。有機相を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１６．２ｇ（理論値の７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８［Ｍ−ＮＨ２］＋、７０９［２Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８７（ｓ、９Ｈ）、１．５３（ｓ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、１Ｈ）、５．２４（ｄ、２Ｈ）、６．５６（ｓ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、２Ｈ）、７．２０（ｍ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｍ、２Ｈ）、７．４６（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｃ５３
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ２７に記載の方法に従って、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、次に二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。このようにして得られた中間体をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を、室温で標準気圧下に水素で１時間水素化した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階で、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートの存在下にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３４（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ５４
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル］−β−アラニン
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジルＮ−［（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノイル］−β−アラニネートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ２７について記載の方法に従って、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化した。このようにして得られた中間体をメタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を、標準気圧下に室温で水素によって１時間水素化した。エステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。標題化合物４８ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５５
２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
Figure 2018524321
（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン３４０ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ）を純粋ＤＣＭ ７ｍＬに溶かし、酢酸６９ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ、６０μＬ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム２８４ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を１５分間撹拌し、３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール２３３ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４．５時間撹拌した。追加の３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール、６９ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ、６０μＬ）酢酸２３３ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム２８４ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で７時間撹拌した。酢酸エチルを加え、反応混合物を飽和炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって２回精製した［１．）移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配；２．）移動相：ＡＣＮ／水＋１％ＴＦＡ＋１．０％ＮＥｔ３）］。これによって、標的化合物１０８ｍｇ（理論値の２１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ５６
２−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル
Figure 2018524321
最初に、２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１０２ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を純粋ＤＣＭ ２ｍＬに入れ、トリエチルアミン４４ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。０℃で、純粋ＤＣＭ １ｍＬに溶かした２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル３１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４０分間撹拌した。追加の純粋ＤＣＭ ０．５ｍＬに溶かした２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル２６ｍｇおよびトリエチルアミン１９ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で６０分撹拌した。
水を加え、混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製した。これによって、標的化合物１０６ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ５７
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）
Figure 2018524321
標準的方法に従って、ＨＡＴＵの存在下に中間体Ｃ４９を９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（２−アミノエチル）カーバメートとカップリングさせ、次にピペリジンでＦｍｏｃ保護基を除去することで、標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１４ｍｇ（２段階で理論値の４０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５８
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸
Figure 2018524321
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かした中間体Ｌ５７ ８．９９ｇ（２４．５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温でさらに４５分撹拌した。反応液をＤＣＭ ３００ｍＬで希釈し、重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８）。適切な分画を合わせた後、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、メチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、この中間体２．０６ｇ（３．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ７６ｍＬに入れ、トリエチルアミン２．１ｍＬの存在下に０．８１ｍＬ（７．１７ｍｍｏｌ）２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化した。室温で２０時間撹拌後、２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．３６ｍＬおよびトリエチルアミン０．９４ｍＬを加え、反応液を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％強度クエン酸３００ｍＬで２回、飽和重炭酸ナトリウム溶液３００ｍＬで２回および飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで１回の順で抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体２．１７ｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体２．１７ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ５４ｍＬおよび水２７ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液２６ｍＬを加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＴＦＡ １．４ｍＬを用いてｐＨ３から４に調節した。混合物を減圧下に濃縮した。ほとんどのＴＨＦが留去されたら、その水溶液をＤＣＭで２回抽出し、減圧下に濃縮して乾固させた。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８）によって精製した。適切な分画を合わせた後、減圧下に溶媒留去し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．１ｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５６（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．５８（ｍ、１Ｈ）、０．７４−０．９２（ｍ、１１Ｈ）、１．４０（ｍ、１Ｈ）、３．３（ｍ、２Ｈ）、３．７（ｍ、１Ｈ）、３．８−４．０（ｍ、２Ｈ）、４．１５（ｑ、２Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、５．６１（ｓ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、２Ｈ）、７．１３−７．３８（ｍ、７Ｈ）、７．４８（ｓ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、１２．３５（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｃ５９
（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018524321
最初に、ベンジル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノエートの２級アミノ基を、中間体Ｃ５３について記載の方法に従って、トリエチルアミンの存在下に（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイルクロライド（中間体Ｃ５３の中間体）でアシル化した。得られた中間体をエタノールに取り、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に１時間水素化した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ６０
（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018524321
中間体Ｃ５３と同様にして合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６１
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−β−アラニン
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８ ６０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）をβ−アラニネートメチルとカップリングさせ、次に２Ｍ水酸化リチウム溶液でエステル開裂することで、標題化合物を製造した。これによって、２段階で標題化合物６７ｍｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６２
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニン
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８およびメチルＤ−アラニネートから中間体Ｃ６１と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６３
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）
Figure 2018524321
この中間体の合成を、第１段階で、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩２８．７ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２２．９ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３９μＬの存在下での中間体Ｃ３ ５０ｍｇ（０．０７５ｍｍｏｌ）の９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（２−アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）２６．２ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ）とのカップリングによって開始した。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、この中間体４５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体４５ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに取り、４０％強度メタンアミン水溶液１７６μＬを加えた。反応液を５０℃で撹拌し、６時間後および９時間後に同量のメタンアミン溶液を加えた。５０℃でさらに１４時間撹拌後、追加のメタンアミン溶液７００μＬを加え、さらに２０時間撹拌後に、混合物を最終的に濃縮した。残留物をＤＣＭに取り、水で洗浄した。有機相を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮および高真空下での残留物の乾燥によって、ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート３２ｍｇ（理論値の９９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６４
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ６３と同様にして、標題化合物を中間体Ｃ５８から製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６５
（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オン酸
Figure 2018524321
最初に中間体Ｌ６６ ２１５ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２５ｍＬに入れ、デス−マーチンペルヨージナン３７７ｍｇ（０．８９ｍｍｏｌ）およびピリジン１４４μＬ（１．７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応液をジクロロメタン３００ｍＬで希釈し、有機相を各場合で、１０％強度Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液２回、１０％強度クエン酸溶液および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。これによって、アルデヒド３０５ｍｇを得て、それをそれ以上精製せずに反応させた。
中間体Ｃ５２ １７５ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１４７ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）および酢酸３２．５μＬを加えた。室温で５分間撹拌後、上記のアルデヒド２１４ｍｇ（０．５９３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で終夜撹拌した。ここで、期待の生成物に代えて、２−（トリメチルシリル）エチル［（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ブタン−２−イル］カーバメートが生成した。このイミドも標題化合物に変換することもできることから、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切なイミド含有分画を組み合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、上記で挙げたイミド１９５ｍｇ（５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
このイミド６５ｍｇ（９７．５μｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに取り、アセトキシアセチルクロライド３６７μＬ（３．４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５９５μＬを加えた。室温で３０分間撹拌後、反応液を減圧下に加熱せずに濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせて、溶媒留去および高真空乾燥後に、（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イルアセテート２８ｍｇ（理論値の３７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体２８ｍｇ（３７μｍｏｌ）をメタノール３ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液５４８μＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液をトリフルオロ酢酸でｐＨ４に調節し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、溶媒を留去し、残留物を高真空下に乾燥して、標題化合物２６ｍｇ（理論値の９６％）を白色固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６６
２−（トリメチルシリル）エチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（グリシルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＨＡＴＵカップリングおよびＢｏｃ除去）、トリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝カーバメート（１：１）をＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシンおよびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから製造した。
この中間体１３ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）および中間体Ｃ５８ ２５ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、ＨＡＴＵ １９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、中間体１７．８ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１７ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに溶かし、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧で２時間水素化した。触媒を濾去し、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６７
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）６０５．３ｍｇ（１．７１ｍｍｏｌ）を最初に、ジクロロメタン１０．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５０６．７ｍｇ（２．３９ｍｍｏｌ）および酢酸１１７．９ｍｇ（１．９６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ジクロロメタン１０．０ｍＬに溶かした９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−オキソプロピル）カーバメート（中間体Ｌ７０）５８０．０ｍｇ（１．９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲルによってクロマトグラフィー精製した（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル３：１）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５１４．７ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６８
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
化合物中間体Ｃ６７の合成と同様にして、合成を行った。
（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ４７）１０００．０ｍｇ（２．８１ｍｍｏｌ）
水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム８３５．０ｍｇ（３．９４ｍｍｏｌ）
酢酸１９４．０ｍｇ（３．２４ｍｍｏｌ）
ｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート５６０．０ｍｇ（３．２４ｍｍｏｌ）
これによって、標題化合物６９５．８ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６９
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸
Figure 2018524321
最初に（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）１１７．０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸２１．６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を、メタノール３．０ｍＬに入れ、炭酸カリウム８９．５ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物１０６．１ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７００（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ７０
（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018524321
最初に２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成参照）９０８．１ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン５４５．６ｍｇ（５．３９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１０．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して０℃とした。この温度で、クロロアセチルクロライド５９０．５ｍｇ（５．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で３回洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７３．８ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋ＨＣＯＯ−）−。
中間体Ｃ７１
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｌ−システイン５３６．６ｍｇ（４．４３ｍｍｏｌ）を、水２．５ｍＬと重炭酸ナトリウム５３１．５ｍｇ（６．３３ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール２５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）４００．０ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．１６ｇ（７．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４４９．５ｍｇ（理論値の８６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７２
（９Ｓ）−９−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オン酸
Figure 2018524321
最初に中間体Ｌ７２ ９０ｍｇ（０．２１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６ｍＬに入れ、ピリジン８６μＬ（１．０６ｍｍｏｌ）およびデス−マーチンペルヨージナン１３５ｍｇ（０．３１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応液をジクロロメタン３０ｍＬで希釈し、有機相を１０％強度Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液で２回、そして５％強度クエン酸溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。このようにして得られたアルデヒドを、それ以上精製せずに反応させた。
中間体Ｃ５２ ６３ｍｇ（０．１７７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５２．４ｍｇ（０．２４７ｍｍｏｌ）および酢酸２０．２μＬを加えた。室温で５分間撹拌後、上記のアルデヒド８９．６ｍｇ（０．２１２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２０分間撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、ベンジル（９Ｒ）−９−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート７１ｍｇ（２段階で理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体７０ｍｇ（９２μｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに取り、混合物を冷却して１０℃とし、トリエチルアミン５４μＬおよびアセトキシアセチルクロライド２５．５μＬ（０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌後、同量の酸塩化物およびトリエチルアミンを加え、室温でさらに１時間撹拌後に再度加えた。反応を室温でさらに３０分間撹拌し、減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせて、溶媒留去および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、アシル化中間体４６．５ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体４６ｍｇ（５３μｍｏｌ）をメタノール５ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液２．７ｍＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液を酢酸でｐＨ３から４に調節し、水１５ｍＬで希釈した。水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥して、残留物を高真空乾燥した後、標題化合物３７ｍｇ（理論値の９０％）を白色固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７３
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［３−（トリメチルシリル）プロパノイル］−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）６１９ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン８．８ｍＬに入れ、トリエチルアミン８７ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）およびＮ−［２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルオキシ］ピロリジン−２，５−ジオン２２４ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルオキシ］ピロリジン−２，５−ジオン４５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンに取り、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６０２ｍｇ（７１％、純度８７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７４
トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニネート（１１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、１０％パラジウム／活性炭で室温で水素標準圧下に１時間水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１１からの凍結乾燥によって、標題化合物６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ７５
メチル（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート
Figure 2018524321
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（古典的方法によって（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１８４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体２００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１０５μＬおよびアセトキシアセチルクロライド７７μＬ（０．７１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。これによって、標題化合物２１３ｍｇ（７５％）をベージュ泡状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って（塩化亜鉛によるＴｅｏｃ保護基の除去、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンによるアシル化、およびＴＨＦ／水中での水酸化リチウムによるエステル開裂）、標題化合物を中間体Ｃ７５から製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７７
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
最初に４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタン酸（８．３９ｍｇ、４８．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物７．３７ｍｇ（４８．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート１５．５ｍｇ（（４８．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．６０μＬ（４８．１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２５．４μＬ（１４１．９μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、によって直接精製し分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３５．０ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ７８
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−酸
Figure 2018524321
最初に２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成を参照）１９７ｍｇ（０．３５４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、混合物を加熱して４０℃とした。この温度で、ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で５％強度ＫＨＳＯ４溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、メチル１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オエート７４．１ｍｇ（理論値の３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
メチル１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オエート７８．３ｍｇ（１１７μｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ ４．０ｍＬに入れ、メタノール８００μＬ、水１６０μＬおよびＬｉＯＨ水溶液（１Ｍ）２３０μＬ（２３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６４．８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６５４［Ｍ−Ｈ］−。
中間体Ｃ７９
トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）５７．４ｍｇ（８１．８μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．７ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｌ７５）７４．０ｍｇ（１６４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４３μＬ（２５０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ６２．２ｍｇ（１６４μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５２．４ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２２［Ｍ］＋。
アルゴン下に、最初に酢酸パラジウム（ＩＩ）６．２３ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１２μＬ（８３μｍｏｌ）およびトリエチルシラン８９μＬ（５５０μｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ジクロロメタン３．０ｍＬ中の２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５６．７ｍｇ（５５．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮してほぼ乾固させ、アセトニトリル／水を加え、混合物を濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３７．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：）：Ｒｔ＝２．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ８０
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
アルゴン下に、最初に１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｌ９０）４３．４ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに入れ、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物１４．６ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート３０．５ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６．５μＬ（９５．１μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）７９．０ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４９．５μＬ（２８５．３μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン４４．２ｍｇ（理論値の４０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン６０．２ｍｇ（５２．１μｍｏｌ）をエタノール３．０ｍＬに懸濁させ、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温および標準圧で１時間水素化した。２回、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温および標準圧で１時間水素化した。触媒を濾去し、反応混合物から減圧下に溶媒を除去し、真空乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２９．４ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ８１
（Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−シクロヘキシルメタンアミン
Figure 2018524321
アルゴン下に−７８℃で、シクロヘキシルマグネシウムクロライド／ジエチルエーテル（２Ｍ）１８．７ｍＬ（３７．４５ｍｍｏｌ）をジメチル亜鉛３．１２ｍＬ（６．２４ｍｍｏｌ）のトルエン中溶液（２．０Ｍ）に加え、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。（Ｒ）−Ｎ−｛（Ｅ／Ｚ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド５．０ｇ（１２．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中溶液を−７８℃で加え、反応混合物をこの温度で１時間撹拌し、次に室温で４時間撹拌した。−７８℃で、飽和塩化アンモニウム溶液ｍＬを加え、反応混合物を昇温させて室温とした。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、酢酸エチル／シクロヘキサン２５：７５）を用いて精製した。これによって、中間体１．５９ｇ（理論値の２６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４８３［Ｍ−Ｈ］−。
アルゴン下に、最初にこの中間体２６４．０ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン０．５ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４−ジオキサン溶液（４．０Ｍ）１．３６ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタンを加え、反応混合物を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタン９８：２）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させ、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１４８ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝２．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６４［Ｍ−ＮＨ２］＋。
中間体Ｃ８２
２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート
Figure 2018524321
アルゴン下に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３９２．２ｍｇ（１．８５ｍｍｏｌ）および酢酸９１．２９ｍｇ（１．５２ｍｍｏｌ）を、１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−シクロヘキシルメタンアミン（中間体Ｃ８１）５０３．０ｍｇ（１．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート５７４．６（２．３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート１４３ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物をさらに２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を、飽和炭酸ナトリウム溶液でおよび飽和ＮａＣｌ溶液でそれぞれ２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４８８ｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８３
２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート
Figure 2018524321
トリエチルアミン２８０．０ｍｇ（２．７７ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド３９７．８ｍｇ（３．５２ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを加えた２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８２）４８７．９ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８．４０ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４７０ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
中間体Ｃ８４
Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
Ｌ−システイン３２２．１ｍｇ（２．６６ｍｍｏｌ）を水０．１９ｍＬと重炭酸ナトリウム３１９．０ｍｇ（３．８０ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール１．９０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２５０．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６９３．８ｇ（４．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２７６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８５
Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３４．８ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）をＳ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｌ−システイン（１：１）（中間体Ｃ８４）１００ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン４１．５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物８８ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８６
１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸
Figure 2018524321
炭酸カリウム１６１．６５ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２２０．０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸３９．０２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）のメタノール（７．４５ｍＬ）中混合物および数滴の水に加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２０１ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７２６（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ８７
２−（トリメチルシリル）エチル｛１３−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル｝カーバメート
Figure 2018524321
ＤＭＦ中のＮ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）５４．１８ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７１．０１ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １０４．４６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール０．２３ｍＬ（０．１４ｍｍｏｌ）０．５Ｍを、１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ８６）１００ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．３７ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。それ以上後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４１ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８８
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート・トリフルオロ酢酸（１：１）
立体異性体の混合物
Figure 2018524321
水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．７１ｇ（８．０５ｍｍｏｌ）および酢酸０．４０ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）を、（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）２．０４ｍｇ（５．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５１ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。３−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．３２ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．８６ｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｃ８９
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018524321
トリエチルアミン１．３６ｇ（１３．４２ｍｍｏｌ）およびクロルアセチルクロライド２．１３ｇ（１８．８７ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを入れたｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８８）２．８９ｇ（４．１９ｍｍｏｌ、純度８０％）の（４２ｍＬ）ジクロロメタン中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物の異性体１ ４４９ｍｇ（理論値の１７％）および異性体２ ４４２ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
異性体１ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
異性体２ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９０
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（異性体１）
Figure 2018524321
Ｌ−システイン３５７．３ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム４８８．７ｍｇ（４．０７ｍｍｏｌ）を含む水２．３ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール２３．０ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体１）（中間体Ｃ８９、異性体１）３５７．０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．０６ｇ（６．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２５５．０ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９１
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（異性体２）
Figure 2018524321
Ｌ−システイン４５３．５ｍｇ（３．７４ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム４４９．２ｍｇ（５．３５ｍｍｏｌ）を含む水２．１ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール２１．１ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）３２８７．４ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン０．９８ｇ（６．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２１．０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９２
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（異性体１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９０）５０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で４５分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６５ｍｇ（理論値の１００％、純度７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９３
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（異性体２）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９１）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で９０分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６３ｍｇ（理論値の９８％、純度７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９４
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン（異性体１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．５ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９０）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１８．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物５７ｍｇ（理論値の８１％、純度８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９５
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体１）
Figure 2018524321
炭酸カリウム３０２．５ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３８４．０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸７３．０ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３５８．０ｍｇ（理論値の８４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９６
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体２）
Figure 2018524321
炭酸カリウム２２６．０ｍｇ（１．６４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）２８７．０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸５４．６ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３１８．７ｍｇ（理論値の８８％、純度８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９７
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザテトラデカ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）
Figure 2018524321
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ１）２２．７５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を水と混合し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２６ｍｇ（理論値の８４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９８
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザオクタデカ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）
Figure 2018524321
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸３７．３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９９
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１９−トリオキソ−１２，１５−ジオキサ−５−チア−２，９，１８−トリアザテトラコサ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）
Figure 2018524321
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ８２）３５．０５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２５ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１００
２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート
Figure 2018524321
（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（１：１）トリフルオロ酢酸２２．２ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸（中間体Ｃ５８）４５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．８ｍＬ）中溶液に加えた。室温で３０分間撹拌後、ＨＡＴＵ ３９ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を前記混合物に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ８５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０１
トリフルオロ酢酸／メチル（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−アミノブタノエート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（古典的方法によって（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、この中間体２．０６ｇ（３．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ ７６ｍＬに入れ、トリエチルアミン２．１ｍＬの存在下に２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．８１ｍＬ（７．１７ｍｍｏｌ）によってアシル化した。室温で２０時間撹拌後、２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．３６ｍＬおよびトリエチルアミン０．９４ｍＬを加え、反応液を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％強度クエン酸３００ｍＬで２回、飽和重炭酸ナトリウム溶液３００ｍＬで２回、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで１回の順で抽出し、次に硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体２．１７ｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体３２１ｍｇ（０．３４２ｍｍｏｌ）を、２，２，２−トリフルオロエタノール７ｍＬに溶かした。塩化亜鉛２７９．５ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５９９ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加え、混合物を次に減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６０ｍｇ（理論値の２６％）を得て、それはまだ少量の脱アセチル化化合物を含んでいた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分および０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２８および５７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０２
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２について、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートによって還元的アルキル化した。次に、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、最後に、二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム／メタノール溶液で加水分解した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４６（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ１０３
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート
Figure 2018524321
最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｃ１０２ １５１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ９８ １２８ｍｇ（０．２３４ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次に、室温で標準水素圧下で３０分間１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去して、標題化合物を得た。
収量：２段階で理論値の３０％。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０４
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018524321
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン２．２４ｇ（６．３１ｍｍｏｌ）の４Åモレキュラーシーブスの入ったジクロロメタン（５６．０ｍＬ）中溶液に水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．８７ｇ（８．８４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート（文献：ＷＯ２０１４／１５１０３０Ａ１）２．２０ｇ（７．５８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．３９ｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０５
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018524321
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ１０４）６９２．８ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）の４Åモレキュラーシーブスを入れたジクロロメタン（８．７ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を再度、４Åモレキュラーシーブスを入れたジクロロメタン８．７ｍＬに溶かし、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６９１ｍｇ（理論値の７４％、純度６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０６
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸
Figure 2018524321
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ１０５）６９１．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸７６．３ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のメタノール（１５ｍＬ）および水数滴中混合物に、炭酸カリウム３１６ｍｇ（２．２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物５０２ｍｇ（理論値の６７％、純度６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ１０７
Ｓ−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
Ｌ−システイン２０３．６ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム２０１．７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）とともに水０．９５ｍＬに懸濁させた。それに、イソプロパノール９．５ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体１０５）１７０．０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン４３８．５ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返しおよび飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１５２ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０８
２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジネート
Figure 2018524321
中間体Ｃ１０２ １０３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中、２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−β−アラニル−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジネート１１０ｍｇ（０．１７５ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで標題化合物を製造した。次に、Ｚ保護基を、標準水素圧下で１０％パラジウム／活性炭でのジクロロメタン／メタノール１：１中における水素化によって除去して、標題化合物を、収量１１３ｍｇ（２段階で理論値の７５％）で得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
ここで使用した中間体は、ペプチド化学の従来法により、ＨＡＴＵ存在下での市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンおよび２−（トリメチルシリル）エチルＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リジネートのカップリング、Ｚ保護基の水素分解的脱離、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンによるトリメチルシリルエチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）保護基の導入、および最後に７．５％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン中溶液中にて４５分間撹拌することによるＢｏｃ保護基の温和な脱離によって製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０９
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−グルタメート
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵの存在下での市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−β−アラニンおよびジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）のカップリングおよび次にＺ保護基の水素分解的脱離によって、ジペプチド誘導体ジ−ｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニル−Ｌ−グルタメート製造した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのこの中間体と中間体Ｃ１０２とのカップリングと、次に室温で標準水素圧下での４５分間にわたるメタノール中１０％パラジウム／活性体での水素化によるＺ保護基の脱離によって標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１０
ジベンジルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−グルタメート
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム溶液との間での分配によってｐ−トルエンスルホン酸塩から事前に放出されたいたジベンジルＬ−グルタメートを中間体Ｃ６１とカップリングさせ、次にトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛でＴｅｏｃ保護基を脱離させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１１
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｄ−グルタメート
Figure 2018524321
中間体Ｃ１０９と同様にして標題化合物を合成した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１２
Ｎ２−アセチル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｃ１０２および中間体Ｌ１０８のＨＡＴＵカップリングと、次に標準圧下に１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中の水素化によるＺ保護基の脱離によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１３
トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、市販の３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンから出発して、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ存在下でのベンジルアルコールによるエステル化、次にトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離によって、トリフルオロ酢酸／ベンジル−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）を製造した。次に、このアミノ酸単位を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｃ５８にカップリングさせた。最終段階で、６当量の塩化亜鉛とともにトリフルオロエタノール中にて５０℃で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣによる精製を行うことで、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１４
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル４−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）ブタノエート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｃ１０２をｔｅｒｔ−ブチル４−アミノブタノエート塩酸塩（１：１）にカップリングさせた。次に、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で標準水素圧下で１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１５
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−メチルブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。次に、中間体Ｃ２７において記載の方法に従って、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化した。
この中間体１９０ｍｇ（０．２４４ｍｍｏｌ）をエタノール７．５ｍＬに取り、４０％メタンアミン水溶液０．３５ｍＬを加えた。混合物を５０℃で３時間撹拌し、同量のメタンアミンを再度加えた。５０℃でさらに５時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。この中間体７８ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体７８ｍｇ（０．１１８ｍｍｏｌ）をエタノール８ｍＬに溶かし、１０％パラジウム／活性炭１５ｍｇを加えた後、室温で標準水素圧下で３時間水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、標題化合物３３ｍｇ（理論値の４４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝８．１（ｍ、１Ｈ）、８．０（ｍ、３Ｈ）、７．９（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）、７．１５−７．３５（ｍ、５Ｈ）７．０（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｍ、１Ｈ）、５．６（ｓ、１Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．０２および４．２２（２ｄ、２Ｈ）、３．２−３．５（ｍ、６Ｈ）、０．７および１．４６（２ｍ、２Ｈ）、０．８（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｃ１１６
トリフルオロ酢酸／Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド（１：１）
Figure 2018524321
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）（８１．０ｍｇ、１００μｍｏｌ）（中間体Ｆ１０４）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパラギネート（４３．０ｍｇ、１３１μｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かした。反応混合物をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６１μＬ、３５０μｍｏｌ）とともに室温で１時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−アミノ−１−（｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝アミノ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル］カーバメート８４ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−アミノ−１−（｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝アミノ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル］カーバメート（８３．０ｍｇ、９１．５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール５．０ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（７４．８ｍｇ、５４９μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを５０℃でさらに１５分間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（１６０ｍｇ、５４９μｍｏｌ）を混合物に加え、それをアセトニトリル／水５．０ｍＬで希釈し、ＴＦＡ（２０μＬ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。混合物をシリンジフィルターで濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物５０ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートからペプチド化学の古典的方法によって、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２
トリフルオロ酢酸／ｒｅｌ−（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴとのカップリングと次にＴＦＡによる脱保護によって、市販のシス−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−シクロペンタンカルボン酸５０ｍｇ（０．２１４ｍｍｏｌ）および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）６０ｍｇ（０．２３５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物３６ｍｇ（２段階で理論値の３８％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴとのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸５０ｍｇ（０．２１４ｍｍｏｌ）と同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）７２ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１３ｍｇ（２段階で理論値の１６％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロヘキサンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の１−［（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝シクロヘキシル）メチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから、ペプチド化学の古典的方法によって標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−β−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンから、ペプチド化学の古典的方法によって標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ＥＤＣ／ＨＯＢＴの存在下に、市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸をペプチド化学の古典的方法によって製造された部分的に保護されたペプチドｔｅｒｔ−ブチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートとカップリングすることで、標題化合物を製造した。これを次に、温和な条件下に室温で５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で撹拌することによりアミノ基で脱保護し、それによって収率３７％で標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリネートとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから標題化合物を製造した。標題化合物３２ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．３１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８
トリフルオロ酢酸／Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、順次にＨＡＴＵの存在下にＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから標題化合物を製造した。標題化合物１７１ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝０．３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の（４−アミノフェニル）酢酸メチルから、中間体Ｌ７と同様にして標題化合物を製造した。標題化合物３２０ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−ｒｅｌ−Ｎ６−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いるシス−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−シクロペンタンカルボン酸とのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、標題化合物を中間体Ｌ６から製造した。これによって、標題化合物１２ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いる（１Ｓ，２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸とのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、標題化合物を中間体Ｌ６から製造した。これによって、標題化合物１１ｍｇ（２段階で理論値の３９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１２
トリフルオロ酢酸／１−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）
Figure 2018524321
メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート３８１ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）を、ジオキサン／水１：１ ７ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル［２−（２−アミノエトキシ）エチル］カーバメート２２８ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ）に加えた。飽和重炭酸ナトリウム溶液１．２ｍＬを加え、反応液を室温で撹拌した。合計５日間撹拌し、同量の重炭酸ナトリウム溶液をさらに２回加えた後に、トリフルオロ酢酸で酸性とし、ロータリーエバポレータで濃縮し、分取ＨＰＬＣによって残留物を精製することで反応の後処理を行った。適切な分画を合わせ、溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。
残留物をジクロロメタン３ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬを加えた。室温で１５分間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。これによって、標題化合物７０ｍｇ（２段階で理論値の６７％）を樹脂状残留物として得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１３
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸をｔｅｒｔ−ブチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネート塩酸塩（１：１）とカップリングし、次に中間体Ｌ６と同様にしてｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基をやさしく除去することで、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．４２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１４
トリフルオロ酢酸／１−［２−（４−アミノピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ２と同様にして２段階でｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−イルカーバメートおよび（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ｝プロパノエート２．９３ｇ（１０．５８ｍｍｏｌ）をジオキサン／水１：１ １００ｍＬに溶かし、ｐＨ６から７に到達するまで、メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート３．２８ｇ（２１．１５ｍｍｏｌ）および飽和重炭酸ナトリウム溶液を加えた。溶液を室温で３０分間撹拌し、１，４−ジオキサンを減圧下に留去した。次に、水２００ｍＬを加え、混合物を各場合で酢酸エチル３００ｍＬで３回抽出した。有機抽出液を合わせ、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過した。濃縮することで、ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパノエートを褐色油状物として得て、それを高真空乾燥した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
この中間体を、標準的な方法（ＴＦＡによる脱保護、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートとのカップリング、ＴＦＡによるさらなる脱保護）によって標題化合物に変換した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１６
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン５３５ｍｇ（１．７３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９３０ｍＬを、Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン２６６ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２４ｍＬ）中溶液に加えた。反応を超音波浴で２４時間処理し、減圧下に濃縮して乾固させた。残った残留物を分取ＨＰＣＬによって精製し、適切な分画の濃縮および残留物の高真空乾燥後に、標題化合物３３７ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１７
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初にＥＤＣ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１６ １７２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネート塩酸塩（１：１）１２５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）をカップリングさせ、次に室温で１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で２時間撹拌することで温和な条件下にアミノ基を脱保護することで、標題化合物を製造した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、２段階で標題化合物１９４ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１８
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ７と同様にしてペプチド化学の古典的方法に従って順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンを連結し、ＴＦＡによって脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、標題化合物を（４−アミノフェニル）酢酸メチルから製造した。標題化合物３３０ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１９
トリフルオロ酢酸／Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝フェニル）−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
順次にペプチド化学の古典的方法に従って、標題化合物を１，４−フェニレンジアミンから製造した。第１段階で、１，４−フェニレンジアミン９４２ｍｇ（８．７２ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン０．８ｇ（２．９ｍｍｏｌ）でモノアシル化した。第２段階で、同様にして、第２のアニリン性アミノ基を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸でアシル化した。ＴＦＡによる脱保護、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとのカップリングおよびＴＦＡによるさらなる脱保護によって、さらに３合成段階で標題化合物を得て、この経路によって１４８ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０．２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２０
トリフルオロ酢酸／Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、中間体Ｌ８と同様にして市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから、順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングさせ、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリネートとカップリングさせ、ＴＦＡでさらに脱保護することで、標題化合物を製造した。標題化合物１７１ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２１
Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−リジンアミド
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、順次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ２−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジンとカップリングさせ、ピペリジンで脱保護し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネートとカップリングさせ、次に１０％パラジウム／活性炭でベンジルオキシカルボニル保護基を水素分解的に除去することで、市販の（４−アミノフェニル）酢酸メチル０．４２ｇ（２．５６ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。標題化合物３６０ｍｇ（４段階で理論値の３２％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メトキシ−３−オキソプロピル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
順次にペプチド化学の古典的方法に従って、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニンから標題化合物を製造した。第１段階で最初に、この原料２．５ｇ（８．０６ｍｍｏｌ）をセシウム塩に変換し、次にＤＭＦ中ヨードメタンでメチルエステルに変換した。
メタノール中１０％パラジウム／活性炭で水素化分解的に、ニトロ基をアミノ基に変換した。
このようにして生成したアミノ基を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中、Ｎ５−カルバモイル−Ｎ２−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−オルニチンでアシル化した。次の段階で、ＤＭＦ中にてピペリジンでＦｍｏｃ基を除去した。
次に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンとのカップリングを行い、最後にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基をトリフルオロ酢酸で除去した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−β−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンとカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．１９分。
中間体Ｌ２４
トリフルオロ酢酸／１−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロプロパンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロプロパン−カルボン酸１１４ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ２５ｍＬに溶かした。市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）１１０ｍｇ（０．６２３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３９５μＬを加え、混合物を冷却して−１０℃とした。次に、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート２１７ｍｇ（０．７９３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％強度クエン酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液の順で抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体１５２ｍｇを得た。
次に、これらをＤＣＭ １０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬで脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物１５８ｍｇ（２段階で理論値の７１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．１９分。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２５
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン
Figure 2018524321
バリル−Ｌ−アラニン３１．４ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド１１５．０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３３．７ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７４．１ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ２６
Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン
Figure 2018524321
Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００．０ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬに懸濁させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に５時間水素化した。触媒を濾去し、減圧下に溶媒留去した。得られた化合物を、それ以上精製せずに次の段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。次に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応溶液を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０．０ｍＬに入れ、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加えた。混合物を水素で室温で標準気圧下に５時間水素化した。混合物を、セライト（登録商標）を用いて濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。標題化合物（１８２ｍｇ、理論値の７２％）を、それ以上精製せずに次の反応段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ２７
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン
Figure 2018524321
最初にＬ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン（中間体Ｌ２６）３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド４６．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５５．６ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ２８
ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018524321
最初に１−ｔｅｒｔ−ブチル３−エチル−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１，３−ジカルボキシレート（ＷＯ２００６／０６６８９６の文献手順に従って、この化合物を製造した。）４６１．７ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）を、純粋ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して−７８℃とした。水素化ジイソブチルアルミニウム溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）３２６．２ｍｇ（２．２９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、混合物を−７８℃で２時間撹拌した（薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３：１）によってモニタリングした。）。水６０ｍＬに溶かした酒石酸カリウムナトリウム１．３ｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を昇温させて室温とした。酢酸エチルを反応混合物に加え、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６２９．０ｍｇを粗生成物として得て、それをそれ以上精製せずに、次の反応段階で直接用いた。
中間体Ｌ２９
ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート
ジアステレオマーの混合物
Figure 2018524321
最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ＷＯ２００６／１０００３６の文献手順に従って製造したもの）８０７．１ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン８．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン２３６．４ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、メタンスルホニルクロライド２６７．６ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。追加のメタンスルホニルクロライド１３３．８ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１１８．２ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を各場合で飽和重炭酸ナトリウム溶液、５％強度硫酸水素カリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム５０ｇＳＮＡＰ、流量６６ｍＬ／分、シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−｛［（メチルスルホニル）オキシ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート４０２．０ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−｛［（メチルスルホニル）オキシ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート４００．０ｍｇ（０．９４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、アジ化ナトリウム９８．２ｍｇ（１．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で１０時間撹拌した。追加のアジ化ナトリウム３０．７ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４０℃でさらに１０時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を水で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（アジドメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート３０９．５ｍｇ（理論値の８９％）を得た。化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７１［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル３−（アジドメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２５０ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール（１：１）１０．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）２５．０ｍｇを加えた。混合物を水素で室温で標準気圧下に８時間水素化した。反応液をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２２６．２ｍｇ（理論値の８２％）を得た。化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート７１５．０ｍｇ（２．０８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ １５．０ｍＬに溶かし、ＴＢＡＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）２．２８ｍＬ（２．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物（１．５４ｇ）をそれ以上精製せずに合成の次の段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート１．５４ｇ（４．８８ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサンに入れ、塩化カルシウム（無水）５４１．８ｍｇ（４．８８ｍｍｏｌ）および炭酸カルシウム４８８．６ｍｇ（４．８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を高撹拌した。トリエチルアミン５９２．８ｍｇ（５．８６ｍｍｏｌ）および１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン１．５２ｇ（５．８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ６４４．９ｍｇ（１０．７ｍｍｏｌ）および酢酸エチルを加えた。有機相を水で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート３４６．９ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート８０４．０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を、クロロホルム２０．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）２０．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム５９．７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド４２９．９ｍｇ（３．２２ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ３３．５ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。有機相を分離し、減圧下に溶媒を除去した。残留物をシリカゲルによってクロマトグラフィー精製した（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝３：１）。これによって、標題化合物５１７．０ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３０
ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート
立体異性体の混合物
Figure 2018524321
最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ＷＯ２００６／１０００３６の文献手順に従って製造した化合物）２５０．０ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン／ＤＭＳＯ（４：１）１２．５ｍＬに入れ、トリエチルアミン２１９．６ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を加えた。２℃で、三酸化硫黄−ピリジン錯体３４５．５ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加え、混合物を２℃で３時間撹拌した。追加の三酸化硫黄−ピリジン錯体３４５．５ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加え、混合物を室温で１７時間撹拌した。反応混合物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに合成の次の段階で用いた（薄層クロマトグラフィー：石油エーテル／酢酸エチル７：３）。
中間体Ｌ３１
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝マロネート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチルカーバメート５７．２ｇ（４８８．２７ｍｍｏｌ）、３７％強度ホルムアルデヒド水溶液５１．２ｍＬ（６８３．５７ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム２５．９ｇ（２４４．１３ｍｍｏｌ）を水６００ｍＬに加えた。混合物を、溶液がとなるまで昇温させ、室温で１６時間撹拌した。形成された懸濁液をジクロロメタン５００ｍＬで抽出し、有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥して結晶固体を得た。残留物を純粋ＴＨＦ １０００ｍＬに取り、および無水酢酸３２２ｍＬ（３．４１４ｍｏｌ）およびピリジン１３８ｍＬ（１．７０７ｍｏｌ）の混合物を室温で滴下した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ロータリーエバポレータで水浴にて室温で濃縮した。残留物をジエチルエーテルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回および飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に２日間乾燥した。残留物を純粋ＴＨＦ ２０００ｍＬに取り、氷冷しながら１Ｍカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド／ＴＨＦ溶液４５６ｍＬ（４５６．５２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌し、純粋ＴＨＦ ２００ｍＬに溶かしたジ−ｔｅｒｔ−ブチルマロネート１００．８ｇ（４５６．５２ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水を加えた。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、酢酸エチル５００ｍＬに取った。混合物を水５００ｍＬおよび飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで脱水した。有機相をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物をシリカゲルでの濾過（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル、勾配＝３０：１→５：１）によって精製した。これによって、標的化合物３７．０７ｇ（理論値の２２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３２
ｔｅｒｔ−ブチル［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（アセトキシメチル）マロネート３７．０ｇ（１０７．１１ｍｍｏｌ）を純粋ＴＨＦ １０００ｍＬに溶かし、氷冷しながら２Ｍ水素化ホウ素リチウム／ＴＨＦ溶液５３５．５ｍＬ（１０７１．１０ｍｍｏｌ）を滴下した。水１９．３ｍＬ（１０７１．１０ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で４．５時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。残留物を酢酸エチル１５００ｍＬに取り、水１００ｍＬを加え、混合物を水冷しながら（軽い発熱）３０分間撹拌した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル５００ｍＬで２回抽出した。有機相をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標的化合物２０．７ｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６［Ｍ−Ｃ５Ｈ８Ｏ２］＋。
中間体Ｌ３３
ｔｅｒｔ−ブチル［３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート２０．００ｇ（９７．４４ｍｍｏｌ）を純粋ジクロロメタン１０００ｍＬに溶かし、イミダゾール６．６３ｇ（９７．４４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（クロロ）ジメチルシラン１６．１６ｇ（１０７．１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、半濃縮塩化ナトリウム溶液で洗浄した。水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。これによって、標的化合物２８．５０ｇ（理論値の９２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０２（ｓ、６Ｈ）、０．８６（ｓ、９Ｈ）、１．３７（ｓ、９Ｈ）、１．５８−１．７３（ｍ、１Ｈ）、２．９１（ｑ、２Ｈ）、３．３３−３．３６［ｍ、（２Ｈ、隠れている）］、３．５３−３．５８（ｍ、２Ｈ）、６．６５−６．７２（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ３４
ｔｅｒｔ−ブチル（３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−ホルミルプロピル）カーバメート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル［３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−（ヒドロキシ−メチル）プロピル］カーバメート１２．６５ｇ（３９．５９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２００ｍＬに溶かし、ジクロロメタン１５０ｍＬに溶かしたデス−マーチンペルヨージナン１９．３１ｇ（４５．５３ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。混合物を室温で２時間撹拌し、半濃縮重炭酸ナトリウム溶液２５０ｍＬおよび１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液２５０ｍＬを加え、混合物を２０分間撹拌した。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を水３００ｍＬで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。これによって、標的化合物１１．３５ｇ（理論値の９０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０２（ｓ、６Ｈ）、０．８４（ｓ、９Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．４８−１．５１（ｍ、１Ｈ）、３．０８−３．３２［ｍ、（１Ｈ、隠れている）］、３．５０−３．５８（ｍ、２Ｈ）、３．８１−３．９１（ｍ、１Ｈ）、６．７１（ｔ、１Ｈ）、９．６０（ｄ、１Ｈ）。
中間体Ｌ３５
ｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート
Figure 2018524321
文献から公知の方法に従って（例えば、Ｊｅａｎ Ｂａｓｔｉｄｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００３， ４６（１６）， ３５３６−３５４５）標題化合物を製造した。
中間体Ｌ３６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン１００ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４．０ｍＬに取り、トリエチルアミン０．０８ｍＬ（０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン１９９．０ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．０８ｍＬ（０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水（０．１％ＴＦＡ含有））によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７５．７ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３７
Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
中間体Ｌ３６ ７５．７ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ２５ｍＬに懸濁させ、パラジウム／活性炭（１０％）７．５ｍｇを加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に４．５時間水素化した。触媒を濾去し、反応混合物から溶媒を除去し減圧下に、真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の段階に用いた。これによって、標題化合物６４．９ｍｇ（理論値の９３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３８
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
最初に中間体Ｌ３７ ３８．３ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド９６．４ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３９．０μＬ（０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ １６．０μＬ（０．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５８．９ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３９
２−（トリメチルシリル）エチル（２−スルファニルエチル）カーバメート
Figure 2018524321
最初に２−アミノエタンチオール塩酸塩（１：１）３００ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン６６８．０ｍｇ（６．６０ｍｍｏｌ）および１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン７１９．１ｍｇ（２．７７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２日間撹拌した（薄層クロマトグラフィー：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１．５によってモニタリング）。酢酸エチルを加え、反応混合物を水で３回洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。その化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
中間体Ｌ４０
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン
Figure 2018524321
Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬ中で、パラジウム／炭素（１０％）を用い、室温で標準気圧下に水素で水素化した。化合物Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いる。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０．０（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下におよび室温で水素によって水素化した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８２．０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン３０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド４６．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５５．６ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４１
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン
Figure 2018524321
Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を、水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬ中、パラジウム／炭素（１０％）を用いて、室温で標準気圧下に水素によって水素化した。化合物Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いる。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０．０（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下におよび室温で、水素によって水素化した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８２．０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン３０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド３４．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４０．６ｍｇ（理論値の８２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４２
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
最初にＬ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ３７）５０．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド９３．６ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３６．９ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ２１．９ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２０．６ｍｇ（理論値の１４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４３
Ｎ−［６７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６５−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１−イコサオキサ−６４−アザヘプタヘキサコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン
Figure 2018524321
最初にＬ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ３７）１１．３ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛６３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６３−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−イソサオキサトリヘキサコンタ−１−イル｝プロパンアミド５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン８．３ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ４．９ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１５．８ｍｇ（理論値の２０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３７７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４４
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン
Figure 2018524321
Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン７３．３ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ７．０ｍＬに溶かし、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド２００．０ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７８．８ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０３．３ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４５
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ホモセリネート２．００ｇ（７．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン９０ｍＬに溶かし、ピリジン１．７６ｍＬおよび１，１，１−トリアセトキシ−１λ５，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（デス−マーチンペルヨージナン）４．６２ｇ（１０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、ジクロロメタン２００ｍＬで希釈し、１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液で２回、次に５％強度クエン酸で２回および飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回の順で抽出した。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。ジエチルエーテル１００ｍＬおよびシクロヘキサン（体積比＝１：１）を残留物に加えて、白色沈殿を生成させた。これを吸引濾過した。濾液をロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥して、標的化合物１．７４ｇ（理論値の８８％）を明黄色油状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７４［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．３８（ｓ、１８Ｈ）、２．６４−２．８１（ｍ、２Ｈ）、４．３１−４．３６（ｍ、１Ｈ）、７．２３（ｄ、１Ｈ）、９．５９（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｌ４６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−Ｌ−グルタミネート（１：１）
Figure 2018524321
最初にＥＤＣ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）２００ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ）を（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）２６３ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で１時間撹拌することによって温和な条件下でアミノ基を脱保護することにより、標題化合物を製造した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、２段階で標題化合物８５ｍｇ（理論値の２０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ４７
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ８を２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ４８
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ２と同様にして、市販の（１Ｒ，２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ４９
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ブロモアセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にジクロロメタン中で、市販のブロモ無水酢酸を、ペプチド化学の古典的方法に従って製造された部分的に保護されたペプチドｔｅｒｔ−ブチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートとカップリングさせることで、標題化合物を製造した。これを次に、温和な条件下に１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で室温で撹拌することにより、アミノ基で脱保護して、標題化合物を２段階で収率４９％で得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９３および５９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５０
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｓ，３Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５１
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５０（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｌ５２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−ブロモアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメート４２０ｍｇ（２．６２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍＬに取り、ブロモ無水酢酸８１７ｍｇ（３．１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９１３μＬ（５．２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
これによって、保護された中間体５７７ｍｇを得て、それを次にジクロロメタン５０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１０ｍＬを加えた。室温で１時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物７０５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８１および１８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｓ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５０（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｌ５４
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５５
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ６−Ｄ−アラニル−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初にＨＡＴＵの存在下に中間体Ｌ６をＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンとカップリングさせ、次に５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で９０分間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初にＨＡＴＵの存在下に中間体Ｌ６を（１Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸とカップリングさせ、次に２５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で１５分間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５７
メチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート
Figure 2018524321
最初にＬ−アスパラギン酸メチル塩酸塩５００．０ｍｇ（２．７２ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エチル２，５−ジオキソピロリジン−１−カルボキシレート７０６．３ｍｇ（２．７２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン８２６．８ｍｇ（８．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物（３Ｓ）−４−メトキシ−４−オキソ−３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸５８３．９ｍｇ（理論値の７４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝２９０（Ｍ−Ｈ）−。
最初に（３Ｓ）−４−メトキシ−４−オキソ−３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸５９２．９ｍｇを、１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して−１５℃とし、４−メチルモルホリン２０５．８ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸イソブチル２７７．９ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後に沈殿を吸引濾過し、各場合１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬを用いて２回濾過した。濾液を冷却して−１０℃とし、水１０ｍＬに溶かした水素化ホウ素ナトリウム１１５．５ｍｇ（３．０５ｍｍｏｌ）を高撹拌しながら加えた。相を分離し、有機相を各場合で飽和重炭酸ナトリウム溶液で１回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物メチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−ホモセリネート５１５．９ｍｇ（理論値の９１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初にメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−ホモセリネート５５４．９ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン３０．０ｍＬに入れ、デス−マーチンペルヨージナン１．２７ｇ（３．０ｍｍｏｌ）およびピリジン４７４．７ｍｇ（６．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。４時間後、反応液をジクロロメタンで希釈し、有機相を各場合で、１０％強度Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液で３回、１０％強度クエン酸溶液および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。これによって、標題化合物５６５．７ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．９１（ｍ、２Ｈ）、２．７０−２．７９（ｍ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、４．０４（ｍ、２Ｈ）、４．５５（ｍ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、１Ｈ）、９．６０（ｔ、１Ｈ）。
中間体Ｌ５８
２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート
Figure 2018524321
３−アミノ−１−プロパノール４３４．４ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エチル２，５−ジオキソピロリジン−１−カルボキシレート１．５０ｇ（５．７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン５８５．３ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート（９９６．４ｍｇ、理論値の７９％）を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
最初に２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート８０７．０ｍｇ（３．６８ｍｍｏｌ）を、クロロホルム１５．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）１５．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム１０２．２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド７３６．９ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ５７．５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた（８９０．３ｍｇ）。
中間体Ｌ５９
トリフルオロ酢酸／１−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）
Figure 2018524321
最初にｔｅｒｔ−ブチル（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エチル）カーバメート３００．０ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタンに入れ、ＴＦＡ ４．２ｇ（３６．５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した（ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノール１０：１によってモニタリング）。揮発性成分を減圧下に留去し、残留物についてジクロロメタンと４回共蒸留を行った。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６０
６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイルクロライド
Figure 2018524321
６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸２００．０ｍｇ（０．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４．０ｍＬに溶かし、塩化チオニル３３８．０ｍｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、ＤＭＦ １滴を加えた。混合物をさらに１時間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンで３回共蒸留した。粗生成物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
中間体Ｌ６１
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、水素化分解、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリング、およびさらなる水素化分解）、トリペプチド誘導体２−（トリメチルシリル）エチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートをＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから製造した。ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、この部分保護されたペプチド誘導体を市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。これを次に、５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で２．５時間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護し、エステル保護基は保持されたままとした。後処理および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物４３８ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．６９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６２
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って、２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートをＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから製造した。この中間体１４８ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ １９５ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４９μＬの存在下に、中間体Ｌ１６ ２００ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。濃縮および分取ＨＰＬＣによる残留物の精製後に、保護中間体をＤＣＭ ２０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸２ｍＬを加え、室温で１時間撹拌することでｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去した。濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、２５４ｍｇ（２段階で理論値の６３％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．５１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６３
（４Ｓ）−４−｛［（２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝−３−メチルブタノイル］アミノ｝プロパノイル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリングおよびメタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化分解）、トリペプチド誘導体（４Ｓ）−４−｛［（２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］アミノ｝プロパノイル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸を（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸から製造した。この部分保護されたペプチド誘導体を市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとカップリングさせることで、標題化合物を製造した。後処理および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物６０１ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６４
（４Ｓ）−４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離、メタノール中１０％パラジウム／活性炭でのベンジルエステルの水素化分解的開裂、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下での１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとのカップリング）、標題化合物を（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸から製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６５
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｌ−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステルおよびトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離）、標題化合物を３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニンから製造した。これによって、標題化合物３７３ｍｇ（２段階で理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６６
メチル（８Ｓ）−８−（２−ヒドロキシエチル）−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート
Figure 2018524321
最初に（３Ｓ）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸１０００ｍｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を、１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン３４４．４ｍｇ（３．４ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸イソブチル５０４ｍｇ（３．６９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液を冷却して５℃とし、高撹拌しながら、水３ｍＬに溶かした水素化ホウ素ナトリウム１６１ｍｇ（４．２６ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加えた。１時間後、同量の水素化ホウ素ナトリウムを再度加え、反応液をゆっくり昇温させて室温とした。水１７０ｍＬを加え、反応液を、各場合酢酸エチル２００ｍＬで４回抽出した。相を分離し、有機相をクエン酸で１回、次に飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ベンジルｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−ヒドロキシブタン−１，２−ジイル］ビスカーバメート７６０ｍｇ（理論値の７８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
塩化水素／ジオキサン１３ｍＬに溶かしたこの中間体７６０ｍｇ（２．１６ｍｍｏｌ）を室温で２０分間撹拌した。反応液を濃縮して５ｍＬとし、ジエチルエーテルを加えた。沈殿を濾過し、アセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。
このようにして得られた生成物をＤＭＦ １３２ｍＬに溶解させ、４−メトキシ−４−オキソブタン酸３４５．５ｍｇ（２．３５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ９７０ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０２５μＬを加えた。混合物を室温で５分間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残った残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、アセトニトリルを減圧下に留去した。残った水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を濃縮し、真空乾燥した。
このようにして得られた中間体をメタノールに取り、室温で水素標準圧下に１時間１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。
この脱保護化合物２４７ｍｇをＤＭＦ ２０ｍＬに取り、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン３５２ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５９２μＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、５段階で合計収率２１％で標題化合物２１８ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６７
トリフルオロ酢酸／２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル−β−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
ジクロロメタン１０ｍＬ中１．５当量のＥＤＣＩおよび０．１当量の４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンの存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニン１３４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販の１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン５０ｍｇ（０．３５４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。
収量：５６ｍｇ（２段階で理論値の４８％）。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、中間体Ｌ１と同様にして、市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６９
トリフルオロ酢酸／１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］ピペリジン−４−イル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチネート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法によって、ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いるＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンによるエステル化、順次、ＴＦＡによるＢｏｃ除去、次にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＮ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンとのカップリング、最後にさらなるＴＦＡによるＢｏｃ除去により、標題化合物を市販のベンジル４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートから製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７０
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−オキソプロピル）カーバメート
Figure 2018524321
最初に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート１０００．０ｍｇ（３．３６ｍｍｏｌ）を、クロロホルム１５．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）１５．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム９３．５ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド６７３．６ｍｇ（５．０４ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ５２．５ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を高真空乾燥し、シリカゲル（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル３：１−１：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５８９．４ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９６（Ｍ−Ｈ）＋。
中間体Ｌ７１
ｔｅｒｔ−ブチル［４−（クロロカルボニル）フェニル］カーバメート
Figure 2018524321
最初に４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］安息香酸１００．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、オキサリルジクロライド６４．２ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した（ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノールによってモニタリング）。追加のオキサリルジクロライド１９２．６ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ １滴を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンと繰り返し共蒸留した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
中間体Ｌ７２
ベンジル（９Ｓ）−９−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って、Ｚ保護基の水素分解的除去、次にＥＤＣＩ／ＨＯＢＴの存在下に４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブタン酸とのカップリング、次にＴＦＡによるＢｏｃ保護基の脱離、最後にトリエチルアミンの存在下での１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、市販のベンジルｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイル］ビスカーバメートから標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ７３
Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド
Figure 2018524321
６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸３９５．５ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．２１ｇ（９．３６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ８５４．３ｍｇ（２．２５ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメート３００ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌した。混合物の濃縮後、残留物をＤＣＭに取り、水で洗浄した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。これによって、標題化合物４０８ｍｇ（３３％、純度５３％）を得て、それをそれ以上精製せずに用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ １ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エチル）カーバメート（４０８ｍｇ、０．３６５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンと２回共蒸留した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物３８４ｍｇ（９４％、純度５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７４
３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１０７ｍｇ（０．３３５ｍｍｏｌ）および（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセテート９３ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．０７４ｍＬ（０．６７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１３３ｍｇ（８６％、純度１００％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ０．５ｍＬをｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート（１３０ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０２ｍｇ（９０％、純度１００％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７５
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化およびトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離）、標題化合物を３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンから製造した。これによって、標題化合物４０５ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７６
（２Ｓ）−２−ブロモ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、Ｚ保護基およびベンジルエステルの水素分解的除去）、好適に保護されたアスパラギン酸誘導体を、（３Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタン酸から製造した。
このようにして得られた（２Ｓ）−２−アミノ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸４７０ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を、水１０ｍＬに懸濁させ、１Ｍ塩酸１．８ｍＬおよび濃硫酸０．５ｍＬを加え、次に臭化カリウム８６３ｍｇ（７．２５ｍｍｏｌ）を加えた。１０℃で、３０分の期間をかけて亜硝酸ナトリウム１５０ｍｇ（２．１７５ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）中溶液を滴下し、混合物を１０から１５℃で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル５０ｍＬで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒の留去および分取ＨＰＬＣによる生成物の精製によって、標題化合物２６０ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝２９５および２９７（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．９５（ｔ、２Ｈ）、２．９４および３．２（２ｄｄ、２Ｈ）、４．１８（ｔ、２Ｈ）、４．５７（ｔ、１Ｈ）。
中間体Ｌ７７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−２−ブロモアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル［２−（２−アミノエトキシ）エチル］カーバメート４１８ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を最初に、ブロモ無水酢酸６３８ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）と反応させ、次にＢｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で除去した。これによって、標題化合物５５１ｍｇ（２段階で理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法）：Ｒｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７および２２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７８
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニン
Figure 2018524321
ＥＤＣＩ／ＨＯＢｔおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニネート塩酸塩（１：１）とカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７９
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニン
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニネート塩酸塩（１：１）６４．８ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン６５．６ｍｇ（０．６４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニネート８４．５ｍｇ（７７％、純度１００％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ １．６２ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニネート（８２．８ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６２．７ｍｇ（８７％、純度９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８０
２−（トリメチルシリル）エチル３−［（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル）アミノ］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネート
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法に従って（塩からの放出およびＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下の市販の３−オキソ−１−フェニル−２，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−４−アザノナデカン−１９−オン酸とのカップリング、およびさらなるＺ保護基の水素分解的除去）、市販の３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８１
トリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメート（１：１）
Figure 2018524321
ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，２′−スルホニルジエタンアミン２５０ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を１−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］オキシ｝ピロリジン−２，５−ジオン９２．３ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。次に、ＨＰＬＣによる精製を行って、標題化合物７０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５７．１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ−Ｂｏｃ−２，２′−（エチレンジオキシ）ジエチルアミン８８．６ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）およびＮ−スクシニミジル６−マレイミドヘキサノエート１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．０７１ｍＬ（０．６５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２７ｍｇ（理論値の８１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ２．０ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２３ｍｇ（２２５μｍｏｌ）のジクロロメタン（７．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１１１ｍｇ（理論値の１００％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０４（ｍ、２Ｈ）、２．９８（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｍ、４Ｈ）、３，５６（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７２（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２００ｍｇ（０．８０５ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１５０ｍｇ（０．９６６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５６０μＬ（３．２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ４５９ｍｇ（１．２１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させた。有機相を５％強度クエン酸溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９８：２）を用いて精製した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２７６ｍｇ（理論値の８９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ４ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート（２７５ｍｇ、７１４μｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２８１ｍｇ（理論値の９９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２０２ｍｇ（０．６５４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．１３０ｍＬ（１．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０８５ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘンアイコサ−１−イル］カーバメート２７５ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ７８０μＬ（１０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘンアイコサ−１−イル］カーバメート（２６８ｍｇ、５０５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２６６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０３（ｍ、２Ｈ）、２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｍ、４Ｈ）、３，５２（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１１１ｍｇ（０．７１３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４１０μＬ（２．４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ３３９ｍｇ（０．８９２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］カーバメート１３０ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ４１０μＬ（５．３ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］カーバメート（１２６ｍｇ、２６７μｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．２２（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｍ、２Ｈ）、３，５３（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、４．０２（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、８．２１（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８６
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン
Figure 2018524321
Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１００ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）および１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１３４ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド３ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．１５０ｍＬ（１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７１．５ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８７
３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］プロパノエート２５０ｍｇ（１．０７ｍｍｏｌ）、２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１５１ｍｇ（０．９７４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２２４ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩２２４ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド５．０ｍＬに溶かした。反応混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％強度クエン酸溶液で２回、そして飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート２６７ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ １．１ｍＬ（１４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート（２６３ｍｇ、７１０μｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２４０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８８
２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート
Figure 2018524321
Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１５０ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２４６ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．２２０ｍＬ（１．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン３０２ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８２（ｄｄ、６Ｈ）、１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｄ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｍ、１Ｈ）、２．１３（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｔ、２Ｈ）、４．１７（ｍ、２Ｈ）、７．００（ｓ、２Ｈ）、７．７５（ｄ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、１Ｈ）。
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１３０ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６．５ｍＬに溶かし、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。追加の１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。ジクロロメタンを加え、混合物を水で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１７２ｍｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８９
１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｌ−グルタメート塩酸塩（１：１）
Figure 2018524321
（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸１．００ｇ（２．９６ｍｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ １３．０ｍＬに入れ、２−（トリメチルシリル）エタノール５１０μＬ（３．６ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン１０９ｍｇ（８８９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を冷却して０℃とし、Ｎ−エチル−Ｎ′−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩６８２ｍｇ（３．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を酢酸エチルに溶解させた。有機相を０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で２回および飽和塩化ナトリウム溶液洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、シクロヘキサン：酢酸エチル８０：２０）を用いて精製した。これによって、化合物１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート６４９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート６４９ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン７．０ｍＬに溶かし、氷浴冷却しながら、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン１４ｍＬ（５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空乾燥し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９０：１０）によって精製した。これによって、標題化合物３２０ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９０
１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸
Figure 2018524321
最初にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシン１１８ｍｇ（５６６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、ｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２００ｍｇ（６２２μｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物１３０ｍｇ（８４９μｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩１３０ｍｇ（６７９μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％強度クエン酸溶液で２回および飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２７４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ８２０μＬ（１１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２７４ｍｇ（５３５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２６２ｍｇ（理論値の１００％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９１
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル１−｛［３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニル］アミノ｝−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法によって（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−トリメチルシリルエタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニンとのカップリング、およびＦｍｏｃ保護基の除去）、市販の３−オキソ−１−フェニル−２，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−４−アザノナデカン−１９−オン酸から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９２
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−α−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法によってＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＬ−アスパラギン酸ｔｅｒｔ−ブチルと市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンのＨＡＴＵカップリングおよび次にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護により、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９３
Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＬ−アスパラギン酸ｔｅｒｔ−ブチルと市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンのＨＡＴＵカップリング、次にＤＣＭ／メタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によるＺ保護基の脱保護、次にＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での酢酸によるアセチル化、最後にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１９（２ｄ、６Ｈ）、１．８２（ｓ、３Ｈ）、２．５（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｍ、２Ｈ）、４．４８（ｑ、１Ｈ）、６．９（ｓ、１Ｈ）、７．３６（ｓ、１Ｈ）、８．０（ｍ、３Ｈ）、１２．５４（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｌ９４
Ｎ−｛４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタノイル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
最初に、ＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰ存在下での４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブタン酸の２−（トリメチルシリル）エタノールとの反応および次にベンジルエステルの水素化分解的開裂によって、４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１７（Ｍ−Ｈ）−。
さらに、カップリングＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンを−Ｌ−アスパラギン酸を４−ニトロベンジル臭化水素酸塩（１：１）とカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸によってアミノ基を脱保護することで、トリフルオロ酢酸／４−ニトロベンジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギネート（１：１）を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にこれら２種類の中間体カップリングさせ、次にＤＣＭ／メタノール１：９中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってｐ−ニトロベンジルエステルを開裂させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９５
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンおよびｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニネート塩酸塩（１：１）から出発して、この中間体を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２３．１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９６
Ｎ−アセチル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネートのＮ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとのカップリングから始め、次にエタノール中１０％パラジウム／活性炭でのＺ保護基の水素化分解的開裂、最後に得られたジペプチドの１−アセトキシピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、この中間体を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９７
１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オン酸
Figure 2018524321
最初にｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−オエート（１００ｍｇ、２０１μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸（４６．８ｍｇ、３０１μｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物（７６．９ｍｇ、５０２μｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（７７．０ｍｇ、４０２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルを加えた。有機相を５％クエン酸溶液で２回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で、飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オエート１９．１ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オエート（１９．１ｍｇ、３０．１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（６２μＬ、６００μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５７７［Ｍ−Ｈ］−。
中間体Ｌ９８
２，２−ジメチルプロパン酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸をベンジル（２−アミノエチル）カーバメートとカップリングさせた。次に、ＤＣＭ中トリフルオロ酢酸により、Ｂｏｃ保護基およびｔｅｒｔ−ブチルエステルを脱離させた。次に、最初に、ＤＭＦ／水中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンと反応させることでアミノ基を再保護し、次にＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰの存在下に２−（トリメチルシリル）エタノールと反応させることでカルボキシル基を保護した。最後の段階で、エタノール中標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で水素化分解することで、末端アミノ基を脱保護した。触媒の濾去、濃縮、分取ＨＰＬＣによる精製および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９９
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから出発して、ペプチド化学の古典的方法に従い２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートを製造した。次に、この中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、標準的方法によって製造したトリペプチド単位Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニンとカップリングさせた。次に、メタノール中の水素化分解によって、Ｚ保護基を除去し、得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせた。最後の段階で、温和な条件下に１０％トリフルオロ酢酸／ＤＭＦ中、室温で１時間撹拌することにより、側鎖アミノ基を脱保護した。濃縮およびアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１００
３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸
Figure 2018524321
メチル３−シアノプロパノエート（４ｇ、３５．４ｍｍｏｌ）のエタノール（１２０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩３．６９ｇ（５３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１５ｍＬ（１１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解させ、次に水およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、メチル（４Ｚ）−４−アミノ−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート５ｇ（理論値の９７％）を得た。
メチル（４Ｚ）−４−アミノ−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（４．８５ｇ、３３．１９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２０．０ｍＬ）中溶液に、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニン６．９１ｇ（３６．５０ｍｍｏｌ）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド８．２２ｇ（３９．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を水に溶解させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。これによって、メチル（４Ｅ）−４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニル］アミノ｝−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート６．０ｇ（理論値の５７％）を得た。
メチル（４Ｅ）−４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニル］アミノ｝−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（６．０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中溶液を１２０℃で５時間撹拌した。混合物を水と混合し、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、メチル３−（５−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）プロパノエート４ｇ（理論値の７１％）を得た。
メチル（４Ｅ）−４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニル］アミノ｝−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（４．００ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液にＬｉＯＨ（１．６０ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を６０℃で終夜撹拌した。混合物を水と混和し、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をそれ以上精製せずに用いた。これによって、３−（５−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）プロパン酸３．６０ｇ（理論値の８７％）を得た。
３−（５−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）プロパン酸（２．０ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液にトリフルオロ酢酸２．０ｍＬ（２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水と混和し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をそれ以上精製せずに用いた。これによって、３−［５−（２−アミノエチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１．５０ｇ（理論値の７２％）を得た。
３−［５−（２−アミノエチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸（１．５ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に、１−［２−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１．３０ｇ（５．５２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１．５２ｇ（１５．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水と混和し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７７４ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝２．６７（ｔ、２Ｈ）、２．９１（ｔ、２Ｈ）、３．０３（ｔ、２Ｈ）、３．４６（ｑ、２Ｈ）、４．２８（ｓ、２Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、８．３７（ｔ、１Ｈ）、１２．２８（ｂｓ、１Ｈ）。
中間体Ｌ１０１
ｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギネート
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下での市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネート塩酸塩とのＨＡＴＵカップリングと、次にメタノール中１０％パラジウム／活性炭でのＺ保護基の水素化分解的脱離によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝０．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝３２９（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｌ１０２
Ｎ−（３８−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−イル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
最初に、２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−酸２１５ｍｇ（３６５μｍｏｌ）および中間体Ｌ１０１（４０２μｍｏｌ）１３３ｍｇをＤＭＦ １．４ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ １４６ｍｇ（３８４μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６０μＬ（９１０μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。水（１．５ｍＬ）およびＡＣＮ（０．５ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）によって精製し、次に、ＤＣＭ ２ｍＬ中、ＴＦＡ ２ｍＬによるブトキシカルボニル保護基の脱離を行った（室温で３時間撹拌）。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝８４４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０３
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４−ピリジン酢酸の市販のｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニル−Ｌ−アラニネートとのカップリングから始め、次にトリフルオロ酢酸による脱保護、ｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートとのカップリング、次にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０４
Ｎ−イソニコチノイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ１０３と同様にして、イソニコチン酸の市販のｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニル−Ｌ−アラニネートとのカップリングから始め、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０５
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギネートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ１０３と同様にして［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］酢酸の市販のｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニル−Ｌ−アラニネートとのカップリングから始めて標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在での市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンの１−ｔｅｒｔ−ブチル４−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｌ−アスパルテートとのカップリングによって標題化合物を製造した。このアミノ酸単位は、ＥＤＣＩおよびＤＭＡＰの存在下での２−（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、次に５％トリフルオロ酢酸／ＤＣＭによるｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の温和な除去によって（３Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタン酸から製造した。次に、完全保護中間体７４５ｍｇ（１．３１７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ４３．５ｍＬに溶かし、トリフルオロ酢酸３．５ｍＬを加え、室温で５時間撹拌することで、そのｔｅｒｔ−ブチルエステルを温和に加水分解した。分取ＨＰＬＣによる精製後に、得られた生成物混合物から標題化合物１６８ｍｇ（理論値の２５％）を単離した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０７
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での市販のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートとのＨＡＴＵカップリング、次に１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール中の水素化によるＺ保護基の脱保護、次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中の１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンによるアシル化、最後にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０８
Ｎ２−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド
Figure 2018524321
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での市販のＮ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンのベンジル（２−アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）とのＨＡＴＵカップリング、次に１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中の水素化によるＺ保護基の脱離によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０９
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジン
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ／水１：１中の市販のＮ２−アセチル−Ｌ−リジンの１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、この中間体を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１０
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンおよびｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートのカップリングから開始し、次に、標準圧下でのメタノール中１０％パラジウム／活性体での水素化によるＺ保護基の脱離によって標題化合物の合成を行った。次に、脱保護中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｌ１０９とカップリングさせた。次に、７．５％トリフルオロ酢酸のＤＣＭ中溶液中で１時間撹拌することで脱保護を完了させた。最後の段階で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ／水１：１中にて１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンと反応させることで遊離アミノ基を再保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１１
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＮ−メチル−Ｌ−アラニネート塩酸塩（１：１）へのＨＡＴＵカップリングから開始し、次にＤＣＭ中でのトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパルテートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下における１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中のＺ保護基の加水分解的脱離を行った。最後に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４−ピリジン酢酸にカップリングさせ、次にＤＣＭ中でトリフルオロ酢酸によってカルボキシル基の脱保護を行うことで、得られた中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１２
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＮ−メチル−Ｌ−アラニネート塩酸塩（１：１）へのＨＡＴＵカップリングから開始し、次にＤＣＭ中でのトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパルテートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下にて１０％パラジウム／活性炭でＤＣＭ／メタノール１：１中でのＺ保護基の加水分解的脱離を行った。最後に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１−アセトキシピロリジン−２，５−ジオンにカップリングさせ、次にＤＣＭ中でトリフルオロ酢酸によってカルボキシル基の脱保護を行うことで、得られた中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１３
Ｎ−メチル−Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのｔｅｒｔ−ブチルＮ−メチル−Ｌ−アラニネート塩酸塩（１：１）に対するピリジン−４−イル酢酸のＨＡＴＵカップリングから開始し、次にＤＣＭ中でのトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護を行うことで、標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニネートにカップリングさせ、ＤＣＭ中でトリフルオロ酢酸によってカルボキシル基の再脱保護を行った。次に、ｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパルテートに対するカップリングをＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に行い、最後にＤＣＭ中でトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護を行った。ＨＰＬＣ精製後に、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１４
Ｎ−｛［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法により、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＮ−メチル−Ｌ−アラニネート塩酸塩（１：１）に対するＨＡＴＵカップリングから開始し、次にＤＣＭ中でのトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護を行うことで、標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパルテートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下に１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中におけるＺ保護基の加水分解的脱離を行った。最後に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］酢酸にカップリングさせ、次にＤＣＭ中にてトリフルオロ酢酸でカルボキシル基の脱保護を行うことで、得られた中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１５
トリフルオロ酢酸／ジベンジルβ−アラニル−Ｌ−グルタメート（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法により、ＨＡＴＵの存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンにカップリングさせ、最後にＴＦＡによってＢｏｃ保護基を脱離させることで、市販の４−メチルベンゼン−スルホン酸／ジベンジルＬ−グルタメート（１：１）から進めて、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸（中間体Ｃ５）５５ｍｇ（０．０８９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２ｍＬに取り、市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）６８ｍｇ（０．２６８ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩３４．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２７．４ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４７μＬ（０．２７ｍｍｏｌ）をその順で加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残った残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮して、１，４−ジオキサンからの凍結乾燥後に標題化合物２０ｍｇ（理論値の３０％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．４８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体２０ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残った残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。このようにして、標題化合物１９ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝８．２８（ｔ、１Ｈ）、７．９−８．１（ｍ、３Ｈ）、７．７−７．８（ｍ、２Ｈ）、７．２−７．４（ｍ、６Ｈ）７．０−７．１（ｍ、３Ｈ）、５．７（ｓ、１Ｈ）、５．０および５．３（２ｄ、２Ｈ）、４．０８および４．２５（２ｄ、２Ｈ）、３．３−３．６５（ｍ、５Ｈ）、３．１−３．２５（ｍ、２Ｈ）、０．７５および１．４５（２ｍ、２Ｈ）、０．９（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｆ３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（３Ｓ）−３−アミノ−４−｛２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］ヒドラジノ｝−４−オキソブチル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸（中間体Ｃ５）１３ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５ｍＬに取り、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート３３ｍｇ（８６μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５μＬおよび市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンヒドラジド２２ｍｇ（６４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を高真空下に濃縮し、残った残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体９．５ｍｇ（理論値の５３％）を無色泡状物として得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体９．５ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬを加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残った残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。このようにして、標題化合物７ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．７５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ４
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（６−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ヘキシル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、３０ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸（中間体Ｃ５）を、中間体Ｆ３と同様にして、ＨＡＴＵの存在下にトリフルオロ酢酸／９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル−（６−アミノヘキシル）カーバメート（１：１）とカップリングさせた。次に、標準的な方法に従ってＦｍｏｃ保護基をピペリジンで除去した。このアミン成分を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、塩化チオニルを用いて遊離酸から製造した（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイルクロライドとカップリングさせた。最終段階で、Ｂｏｃ保護基を、ＤＣＭ中トリフルオロ酢酸によって除去した。これによって、標題化合物１．１ｍｇ（４段階で３％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ５
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（プロピオニル）アミノ］−Ｎ−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ １６ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ１２ ８．５ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物３ｍｇ（２段階で理論値の１３％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（１６Ｓ）−１６−アミノ−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１２，１５−ジオキソ−３，６，９−トリオキサ−１３，１４−ジアザオクタデカン−１８−イル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−ヒドラジノ−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）（中間体Ｃ６）８ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに取り、市販の３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパン酸６ｍｇ（１９μｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）５．８ｍｇ（１５μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬ（３８μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水１：１に取り、トリフルオロ酢酸でｐＨ２に調節した。分取ＨＰＬＣによって精製を行った。適切な分画を合わせ、濃縮およびアセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥を行って、Ｂｏｃ保護中間体５ｍｇ（理論値の４１％）を得た。トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ基の除去によって、標題化合物４ｍｇ（２段階で理論値の３２％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ７
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ ２５ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ１ ３５ｍｇ（０，１１２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１４．４ｍｇ（２段階で理論値の２９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝８．２（ｍ、１Ｈ）、７．９−８．１（ｍ、３Ｈ）、７．７−７．８（ｍ、２Ｈ）、７．２−７．４（ｍ、６Ｈ）、７．０−７．１２（ｍ、３Ｈ）、５．７（ｓ、１Ｈ）、４．９５および５．３（２ｄ、２Ｈ）、４．１および４．２５（２ｄ、２Ｈ）、４．０（ｓ、２Ｈ）、３．３−３．６５（ｍ、５Ｈ）、３．０−３．１５（ｍ、２Ｈ）、０．７および１．４５（２ｍ、２Ｈ）、０．８８（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｆ８
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ６ １３ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（２段階で理論値の４９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ９
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（３Ｓ）−３−アミノ−４−［１−（２−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）ヒドラジノ］−４−オキソブチル｝−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ７ １．５ｍｇ（０．００２ｍｍｏｌ）および市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）０．９５ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１．１ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１０
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ １４ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ５ １０ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物４．５ｍｇ（２段階で理論値の２２％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロヘキサンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ １２ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ４ １０ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物７ｍｇ（２段階で理論値の３８％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１２
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ５ ４３ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ２ ３０ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。Ｂｏｃ保護中間体の段階で、生成したジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８−１０／１２５×３０／１２ｍＬ／分）によって分離した。分離したジアステレオマーの立体化学を、市販の（１Ｓ、２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から類似の方法で製造した個々のジアステレオマーとの比較によって割り当てた。
分画１：１Ｓ２Ｒジアステレオマー
Figure 2018524321
収量：１３ｍｇ（２２％）
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
分画２：１Ｒ２Ｓジアステレオマー
Figure 2018524321
収量：１０ｍｇ（１７％）
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
次に、１Ｒ２Ｓジアステレオマー１０ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）のＴＦＡによる脱保護により、標題化合物８ｍｇ（理論値の７５％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１３と同様にして合成を行い、１Ｓ２Ｒジアステレオマーの脱保護によって標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵの存在下の中間体Ｃ５ ２０ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ７ １８ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）のカップリング、次にＴＦＡにブロック除去によって、標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１５ｍｇ（２段階で理論値の４９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ存在下での中間体Ｃ８ １５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ８ １４ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）のカップリングと、次に、ＴＦＡによるブロック除去によって、この中間体を製造した。これによって、標題化合物７ｍｇ（２段階で理論値の２７％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｆ３と同様にして、中間体Ｃ３ ２０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵの存在下にトリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）（中間体Ｌ９）とカップリングさせた（収量：１５ｍｇ（理論値の４４％））。
この中間体Ｎ−｛（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド２６ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）をメタノール５ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液１ｍＬを加え、反応液を室温で９０分間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水に取り、ＴＦＡを用いて混合物をｐＨ２に調節した。混合物を再度濃縮して、分取ＨＰＬＣによる残留物の精製後に、カルボキシル化合物２０ｍｇ（８１％）を得た。
この中間体をＤＭＦ ５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ８．４ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬの存在下に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）６ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、保護中間体１７ｍｇ（理論値の７６％）を得た。これらをＤＣＭ ３ｍＬに取り、ＴＦＡ １ｍＬを加えた。室温で４５分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をジエチルエーテルで温浸した。吸引濾過および高真空下での残留物の乾燥によって、標題化合物１５ｍｇ（８１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１７
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１２と同様にして、中間体Ｃ５ ６ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ１０ ８ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。Ｂｏｃ保護中間体の段階で、生成したジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８−１０／１２５×３０／１２ｍＬ／分）によって分離した。分離したジアステレオマーの立体化学を、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から類似の方法で製造した個々のジアステレオマーとの比較によって割り当てた。
分画１：１Ｓ２Ｒジアステレオマー
Figure 2018524321
収量：１ｍｇ
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．７３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
分画２：１Ｒ２Ｓジアステレオマー
Figure 2018524321
収量：０．７ｍｇ
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．８１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＤＣＭ １ｍＬに溶かし、ＴＦＡ １ｍＬを加え、室温で１時間撹拌することで、１Ｒ２Ｓジアステレオマー０．７ｍｇ（０．００１ｍｍｏｌ）の脱保護を完了させた。減圧下での濃縮および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物０．６８ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１８
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ ８．９ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ１１ １３ｍｇ（０，０１４ｍｍｏｌ）から、中間体Ｆ１７と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１９
Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ ２５ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１３ ５５ｍｇ（０．１２２ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続く脱保護によって、中間体Ｆ２と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛４−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］ピペラジン−１−イル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１４ ５５ｍｇ（０．１２２ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続く脱保護によって、中間体Ｆ２と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１２−オキソ−３，６，９−トリオキサ−１３−アザペンタデカン−１５−イル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１５ ７ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続く脱保護により、中間体Ｆ２と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（３Ｓ）−３−アミノ−４−（１−｛２−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝ヒドラジノ）−４−オキソブチル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ７ １３．７ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１ ５．９ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続く脱保護により、中間体Ｆ９と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２３
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＥＤＣ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１７ １６．８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続く脱保護により、中間体Ｆ２と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１６と同様にして、標題化合物の製造を行った。
最初に、中間体Ｆ３と同様にして、中間体Ｃ３ ３０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵの存在下に中間体Ｌ１８とカップリングさせた（収量：２５ｍｇ（理論値の４７％）。
この中間体２７ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）をメタノール５ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液１ｍＬを加え、混合物を室温で３０分間撹拌して、メチルエステルおよびアセチル基の両方を開裂させた。溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水に取り、ＴＦＡを用いて混合物をｐＨ２に調節した。混合物を再度濃縮して、分取ＨＰＬＣによる残留物の精製後に、カルボキシル化合物１５ｍｇ（５８％）を得た。
この中間体をＤＭＦ ３ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６．５ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬの存在下に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）４．４ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、保護中間体１２ｍｇ（理論値の７２％）を得た。これらをＤＣＭ ２ｍＬに取り、ＴＦＡ １ｍＬを加えた。室温で３０分間撹拌後、混合物を濃縮し、アセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。残留物を高真空乾燥して、標題化合物１１ｍｇ（９１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝フェニル）−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ６．４ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７２μＬの存在下での中間体Ｃ８ ９．６ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１９ １０．８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次にＴＦＡによるブロック除去によって、この中間体を製造した。これによって、標題化合物５ｍｇ（２段階で理論値の３１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（１５Ｓ，１９Ｒ）−１５−アミノ−１９−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１８−グリコロイル−２０，２０−ジメチル−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３，１８−ジアザヘニコサン−１−オイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１１μＬ（０．０６ｍｍｏｌ）の存在下での中間体Ｃ９ １６．４ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ２０ １１．２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次にＴＦＡによるブロック除去によって、この中間体を製造した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（２段階で理論値の３７％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（２−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−リジンアミド（２：１）
Figure 2018524321
この中間体を４段階で製造した。
最初の段階で、ＤＭＦ ５ｍＬ中、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩１１ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物８．７ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５μＬ（０．０８５ｍｍｏｌ）の存在下に、中間体Ｃ８ ２０ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ２１ １６．７ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で４日間撹拌後、反応液を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：１８ｍｇ（理論値の５４．５％）。
この中間体１８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）をメタノール４ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液１９４μＬを加え、反応液を室温で終夜撹拌した。追加の水酸化リチウム溶液１１６μＬを加え、反応液を室温でさらに４時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を水に取り、反応液を５％強度クエン酸でｐＨ５に調節した。混合物をジクロロメタンで２回抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで脱水した。有機相を濾過し、濃縮し、残留物を高真空乾燥した。これによって、カルボキシル化合物１０．５ｍｇ（５８％）を得た。
この中間体１０．５ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩３．５ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２．８ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６μＬの存在下に、市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）３ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。終夜撹拌後、同量のカップリング試薬を再度加え、反応液を室温でさらに３日間撹拌した。混合物を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：６ｍｇ（理論値の５２％）。
この中間体６ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ ３ｍＬ中、トリフルオロ酢酸１ｍＬで脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物６ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル｝アミノ）−Ｌ−フェニルアラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
この中間体を５段階で製造した。
最初の段階で、ＨＡＴＵ ４４．３ｍｇ（０．１１７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３０μＬの存在下に、中間体Ｃ８ ４０ｍｇ（０．０５８ｍｍｏｌ）を、中間体Ｌ２２ ４６ｍｇ（０．０５８ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で１時間撹拌後、反応液を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：５３ｍｇ（理論値の６２．５％）。
次の段階で、ＤＭＦ ３ｍＬ中ピペリジン０．６ｍＬでＦｍｏｃ基を除去した。室温で１時間撹拌後、反応液を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：４２ｍｇ（理論値の８２％））。
メチルエステルを開裂させるため、この中間体４２ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ２ｍＬおよび水１ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液３３０μＬを加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。反応液をＴＦＡで中和し、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。高真空乾燥によって、カルボキシル化合物３２ｍｇ（７８％）を得た。
この中間体３２ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．３ｍＬ中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８μＬの存在下に市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１４．６ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。超音波浴で４時間処理した後、反応液を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：２０．４ｍｇ（理論値の６０％）。
最終段階で、この中間体２０．４ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中、トリフルオロ酢酸で脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物２０ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）−Ｌ−フェニルアラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２８と同様にして、標題化合物の製造を行った。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）スルフィニル］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
この中間体を４段階で製造した。
最初の段階で、中間体Ｃ３ ３７．５ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中、ＨＡＴＵ ２５ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２９μＬの存在下に市販のメチル３−［（２−アミノエチル）スルファニル］プロパノエート塩酸塩（１：１）１５ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で１５分撹拌後、カップリング試薬を再度加えた。反応液を室温でさらに１５分間撹拌し、次に濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。収量：２１ｍｇ（理論値の４８％）。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
メチルエステルを開裂させるため、この中間体２１ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）をメタノール５ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液６５５μＬを加え、反応液を室温で終夜撹拌した。この間、硫黄での部分酸化が起こった。反応液を濃縮し、残留物を水に取り、酢酸でｐＨ３に調節した。混合物を酢酸エチル５０ｍＬで２回抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物の高真空乾燥後に得られた混合物を、それ以上精製せずに、ＨＡＴＵ １１．６ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２２μＬの存在下に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）８．４ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）とのカップリングに用いた。反応液を室温で５分間撹拌し、濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、溶液を５％強度クエン酸と次に水で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。高真空下に残留物を乾燥させた後に得られた混合物を、それ以上精製せずに次の段階で用いた。
この粗取得物２２ｍｇをＤＣＭ ２ｍＬに溶かし、トリフルオロ酢酸０．５ｍＬで脱保護した。室温で１０分間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。高真空乾燥によって標題化合物２．１ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（３−｛［２−｛（１Ｒ）−１−［（３−アミノプロピル）（グリコロイル）アミノ］−２，２−ジメチルプロピル｝−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝フェニル）−Ｌ−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ペプチド化学の古典的方法を用い、６段階かけて、この中間体を中間体Ｃ１０から合成した。
最初の段階で、ＤＭＦ ５ｍＬ中、ＨＡＴＵ １００ｍｇ（０．２６６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４６μＬの存在下に、中間体Ｃ１０ ４２ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）をＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン２０．７ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。反応液を室温で終夜撹拌し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、Ｎ−アシル化化合物１６ｍｇ（理論値の２７％）およびＮ−、Ｏ−ビスアシル化化合物９ｍｇ（理論値の１２％）を得た。
Ｎ−アシル化化合物の脱保護を、ＤＭＦ中ピペリジンで行った。ビスアシル化化合物を、エタノール中、ピペリジンおよびメチルアミン水溶液の両方で処理した。両方の場合で、ｔｅｒｔ−ブチル（３−｛［（１Ｒ）−１−｛１−［３−（Ｌ−アラニルアミノ）ベンジル］−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−２，２−ジメチルプロピル］（グリコロイル）アミノ｝プロピル）カーバメートが生成し、分取ＨＰＬＣによる精製によって、純度９５％で１３ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＤＭＦ ２ｍＬ中のこの中間体１３ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬの存在下に２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート９．１ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で２０時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。１，４−ジオキサン／水からの凍結乾燥によって、１０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。
次に、Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中ピペリジンで除去することで、部分脱保護中間体９ｍｇ（定量的）を得た。
この中間体９ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２ｍＬ中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５μＬの存在下に市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン３．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で終夜撹拌後、反応液を濃縮し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水および数滴１，４−ジオキサンからの凍結乾燥によって３ｍｇ（理論値の３２％）を得て、それを最終段階で、ＤＣＭ ２ｍＬ中、トリフルオロ酢酸０．５ｍＬで脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物３．８ｍｇ（定量的）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩１０．５ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物８．４ｍｇ（０，０５５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬ（０．０８ｍｍｏｌ）の存在下での中間体Ｃ５ １５ｍｇ（０，０４１ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ２３ １６．８ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）とのカップリング、次にＴＦＡによるブロック除去によって、この中間体を製造した。これによって、標題化合物３．４ｍｇ（２段階で理論値の１５％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３３
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
この中間体の合成を、第１段階で、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩２８．７ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２２．９ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３９μＬの存在下での中間体Ｃ３ ５０ｍｇ（０．０７５ｍｍｏｌ）の９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（２−アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）２６．２ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ）とのカップリングで開始した。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、この中間体４５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体４５ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに取り、４０％強度メタンアミン水溶液１７６μＬを加えた。反応液を５０℃で撹拌し、同量のメタンアミン溶液を６時間後および９時間後に加えた。５０℃でさらに１４時間撹拌後、追加のメタンアミン溶液７００μＬを加え、さらに２０時間撹拌後、混合物を最後に濃縮した。残留物をＤＣＭに取り、水で洗浄した。有機相を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮および残留物の高真空乾燥によって、ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート３２ｍｇ（理論値の９９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体８．３ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４ｍＬに溶かし、無水ブロモ酢酸３．３ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。残留物をジクロロメタン１ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸０．５ｍＬで脱保護した。濃縮およびアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物１．１ｍｇ（２段階で理論値の９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７／６７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ９．９ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬの存在下での中間体Ｃ５ １４ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ８ １２．７ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）とのカップリングによって、この中間体を製造した。反応液を室温で３０分間撹拌し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製し、アセトニトリル／水から凍結乾燥した。
得られた中間体をジクロロメタン３ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬでブロック除去した。室温で３０分間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物８．２ｍｇ（２段階で理論値の３６％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３５
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
Figure 2018524321
アルゴン下に０℃で、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ３８）５７．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ ９．２ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３２ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬ中のＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）３１．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）に加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．５μＬ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ７．７μＬを加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物３３．４ｍｇ（理論値の３８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５１［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
中間体Ｆ３６
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ３５の製造と同様にして標題化合物の合成を行った。
１５．４ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）。
Ｎ−［３１−（２，５−ドキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ２５）２５．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物１０．７ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２１５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−３−イル）−３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−アミド（１：１）ジアステレオマーの混合物
Figure 2018524321
化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−｛［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］アミノ｝ピロリジン−１−カルボキシレートを、中間体Ｃ２１の合成と同様にして製造した。
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ２３）それぞれ８．０（０．０１ｍｍｏｌ）および１３．０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）。
３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコス−１−イル｝プロパンアミドそれぞれ９．０ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）および１４．７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）。
収量（両方の反応液を合わせた）：
１０．５ｍｇ（４２％）ジアステレオマー１
１１．６ｍｇ（４６％）ジアステレオマー２。
中間体Ｆ３８の合成と同様にして標題化合物を製造した。
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−｛［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］アミノ｝ピロリジン−１−カルボキシレート（ジアステレオマー１）１０．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）
ＴＦＡ ６０．６ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物７．４ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７，３５−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３−チア−６，３４−ジアザヘプタトリアコンタン−１−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［３８−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，３１，３７−トリオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３５−チア−４，３２，３８−トリアザヘンテトラコンタン−４１−イル］カーバメート（中間体Ｃ２１）２４．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．０ｍＬに入れ、ＴＦＡ ８５．８ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物２３．０ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３９
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ３５の合成と同様にして標題化合物を製造した。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ４４）５６．１ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）。
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）４５．０ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物２０．９ｍｇ（理論値の２１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−３−イル）メチル］−３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−アミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−［３３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，３１−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−２，３０−ジアザトリトリアコンタ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレートを、中間体Ｃ２１の合成と同様にして製造した。
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（１：１）（中間体Ｃ２４）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）。
３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコス−１−イル｝プロパンアミド２７．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）。
収量：２０．６ｍｇ（理論値の３９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２００［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３７の合成と同様にして標題化合物を製造した。
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−［３３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，３１−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−２，３０−ジアザトリトリアコンタ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート２６．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）
ＴＦＡ９０．６ｍｇ（０．８０ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物２２．９ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１および０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１００［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７，３５−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３−チア−６，３４−ジアザヘプタトリアコンタン−１−アミド３−オキサイド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ２２ １５．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）から、中間体Ｆ３８と同様にして標題化合物を製造した。これによって、標題化合物４．０ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４２
トリフルオロ酢酸／４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ピロリジン−３−カルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸（中間体Ｃ２５）４０．５ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）１４．５ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６４．４ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ ５０．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。同量の１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンおよびＴ３Ｐを再度加え、混合物を室温でさらに４時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］カルバモイル｝ピロリジン−１−カルボキシレート７．２ｍｇ（理論値の１５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］カルバモイル｝ピロリジン−１−カルボキシレート７．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．０ｍＬに入れ、ＴＦＡ ４３．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物４．５ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４３
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
Figure 2018524321
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ４２）２２．４ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに溶かし、ＨＯＡｔ ４．５ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １５．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）１５．７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１６．７ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−３−イル）メチル］−１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−アミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ４０の合成と同様にして標題化合物を製造した。
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（１：１）（中間体Ｃ２４）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）。
３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド２０．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）。
これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２，１８−ジアザヘニコス−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート２１．８ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−４−［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２，１８−ジアザヘニコス−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート２１．０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）。
ＴＦＡ１６８．３ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物１７．３ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２および０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−リジンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ４６の合成と同様にして合成を行った。
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）２２．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン（中間体Ｌ４１）３６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）。
これによって、化合物Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド１９．８ｍｇ（３４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド１７．０ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物１３．６ｍｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−リジンアミド（１：１）
Figure 2018524321
アルゴン下に０℃で、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン（中間体Ｌ４０）４９．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ ７．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２５．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬ中のＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）２５．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）に加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．６μＬ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド２９．２ｍｇ（理論値の３７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３７２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド２５．２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、ＴＦＡ ８３．７ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で４８時間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物２４．５ｍｇ（理論値の９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２７２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４７
Ｎ−［６７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６５−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１−イコサオキサ−６４−アザヘプタヘキサコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
Figure 2018524321
Ｎ−［６７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６５−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１−イコサオキサ−６４−アザヘプタヘキサコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ４３）１５．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＯＡｔ １．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ５．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ４０）５．２ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物６．８ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８３１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４８
トリフルオロ酢酸／Ｎ１−（３−アミノプロピル）−Ｎ１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−Ｎ１８−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−チアオクタデカン−１，１８−ジアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザペンタコサン−２５−イル］カーバメート（中間体Ｃ１８）１６．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに入れ、ＴＦＡ ２６μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、追加のＴＦＡ ２６μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を再度室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ４９
（２５Ｓ）−２５−アミノ−２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザヘキサコサン−２６−酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ１６の合成と同様にして、化合物ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエートの合成を行った。
中間体Ｃ２ ５０．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）
クロロアセチルクロライド２０．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）
トリエチルアミン１９．０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）。
これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート４３．１ｍｇ（理論値の７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１７の合成と同様にして、化合物（６Ｓ）−９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−１２−チア−５，９−ジアザヘプタコサン−２７−酸の合成を行った。
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート３８．８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）
１−スルファニル−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸１９．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）
炭酸セシウム４５．９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）。
これによって、化合物（６Ｓ）−９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−１２−チア−５，９−ジアザヘプタコサン−２７−酸４０．７ｍｇ（理論値の７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１８の合成と同様にして、化合物ｔｅｒｔ−ブチル（２５Ｓ）−２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザヘキサコサン−２６−オエートの合成を行った。
（６Ｓ）−９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−１２−チア−５，９−ジアザヘプタコサン−２７−酸３７．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）。
１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）９．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）。
これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル（２５Ｓ）−２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザヘキサコサン−２６−オエート２３．４ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３８の合成と同様にして標題化合物の合成を行った。
ｔｅｒｔ−ブチル（２５Ｓ）−２２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４，２１−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−１９−チア−３，２２−ジアザヘキサコサン−２６−オエート２０．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）。
ＴＦＡ１５７．０ｍｇ（１．３７ｍｍｏｌ）。
これによって、標題化合物１３．０ｍｇ（６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５０
トリフルオロ酢酸／１−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロプロパンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ １５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ６．５ｍＬに溶かし、中間体Ｌ２４ １９ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１３μＬおよび２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート１０ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、保護中間体２．４ｍｇを得た。
これらをＤＣＭ １ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸０．１ｍＬで脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物２．６ｍｇ（２段階で理論値の１１％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．４分。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５１
３−｛３−［（３−アミノ−２−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝プロピル）スルファニル］−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル｝−Ｎ−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘプタデカ−１−イル］プロパンアミド（異性体１）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体１）１０．０ｍｇ（１８．０７９μｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液（ＳｉｇｍａＤ８５３７）１００μＬおよびＡＣＮ ２００μＬに入れた。３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘプタデカ−１−イル］プロパンアミド１７．１ｍｇ（３２．５４３μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物１４．０ｍｇ（理論値の７５％）を得た。
異性体１
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５２
３−｛３−［（３−アミノ−２−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝プロピル）スルファニル］−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル｝−Ｎ−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘプタデカ−１−イル］プロパンアミド（異性体２）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体２）６．５ｍｇ（１０．６９４μｍｏｌ、ＬＣ／ＭＳ純度＝９１％）をＰＢＳ緩衝液（ＳｉｇｍａＤ８５３７）１００μＬおよびＡＣＮ ２００μＬに入れた。３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１４−アザヘプタデカ−１−イル］プロパンアミド１０．１ｍｇ（１９．２４９μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物５．０ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
異性体２
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５３
Ｎ−｛３−アミノ−２−［（｛１−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブチル］−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル｝スルファニル）メチル］プロピル｝−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（異性体１）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体１）１０．０ｍｇ（１８．０７９μｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液（ＳｉｇｍａＤ８５３７）２００μＬおよびＡＣＮ ４００μＬに入れた。８．１ｍｇ（３２．５４３μｍｏｌ）１，１′−ブタン−１，４−ジイルビス（１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ＤＭＦ ３００μＬを加え、混合物をさらに１．５時間撹拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物４．０ｍｇ（理論値の２９％）を得た。
異性体１
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５４
Ｎ−｛３−アミノ−２−［（｛１−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブチル］−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル｝スルファニル）メチル］プロピル｝−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（異性体２）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−［３−アミノ−２−（スルファニルメチル）プロピル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（１：１）（異性体２）５．０ｍｇ（９．０４０μｍｏｌ）をＤＭＦ ５００μＬに入れた。１，１′−ブタン−１，４−ジイルビス（１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）４．０ｍｇ（１６．２７１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製し、凍結乾燥した。これによって、標的化合物１．１ｍｇ（理論値の１６％）を得た。
異性体２
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５５
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝カルバモイル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド６．５ｍｇ（４．５μｍｏｌ）をジクロロメタン４４１μＬに溶かし、トリフルオロ酢酸４４μＬ（５７３．１μｍｏｌ）を加えた。反応液を室温でロータリーエバポレータで濃縮し、水およびＡＣＮに取り、凍結乾燥した。これによって、標的化合物５．６ｍｇ（理論値の９４％、ＬＣ／ＭＳによる純度＝９２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１００．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［（２Ｓ）−１−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−１−オキソプロパン−２−イル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ５０と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５７
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［（２Ｒ）−１−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−１−オキソプロパン−２−イル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ５６と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ５８
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド（１：１）（中間体Ｃ４１）１６．２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．３ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）および１，１′−［（１，５−ジオキソペンタｎ−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン１２．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１１．０ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ８２
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
標題化合物の合成を行った。の合成と同様にして中間体Ｆ８３．使用したラセミ中間体は、相当するＲ−異性体中間体と同様にして得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝７．０７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３６［Ｍ＋Ｎａ］＋。
中間体Ｆ８３
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（実施例９８）３０．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニネート２６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン１９．４ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ＨＯＡｃ １１．５ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［（２Ｓ）−１−（｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート４１．９ｍｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［（２Ｓ）−１−（｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート３７．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、２−アミノエタノール１２４．６ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと水との間で分配し、有機相を水で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール１０：１）で精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１４．２ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミドおよび１１．４（０．０３ｍｍｏｌ）２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート１４．１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン７．９ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ＨＯＡｃ ４．７ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１５．９ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１４．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、２−アミノエタノール４４．２ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと水との間で分配し、有機相を水で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール１０：１）で精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド５．７ｍｇ（理論値の５２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド５．５ｍｇ（８．６μｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコス−１−イル｝プロパンアミド６．５ｍｇ（６．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン０．９ｍｇ（８．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ＨＯＡｃ ０．８ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物７．７ｍｇ（理論値の７４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ８４
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ５４ １６．５ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ １１．７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８μＬの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）１０．４ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で５分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水１：１に取った。トリフルオロ酢酸でｐＨを２に調節し、反応液を再度濃縮した。残った残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体８ｍｇ（理論値の４２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２９［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体７．６ｍｇ（０．００８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン９２ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を超音波浴で１時間処理した。酢酸３１μＬを加え、反応液を高真空下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝８．１５（ｔ、１Ｈ）、７．９−８．１（ｍ、４Ｈ）、７．６（ｍ、１Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）、７．１５−７．３５（ｍ、６Ｈ）、６．９−７．０（ｍ、３Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．６（ｓ、１Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．０５および４．２（２ｄ、２Ｈ）、３．１−３．２（ｍ、４Ｈ）、２．１５（ｍ、２Ｈ）、０．７および１．４５（２ｍ、２Ｈ）、０．８（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｆ８５
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ５３ １０ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．４ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ７．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）７ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で１５分撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体６．６ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５８［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体６．６ｍｇ（０．００８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン８６ｍｇ（０．７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を超音波浴で２時間処理した。酢酸４４μＬを加え、反応液を高真空下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３．３ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ８６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ５．８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０μＬの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）４．５ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）との反応により、次に、トリフルオロ酢酸による脱保護により中間体Ｃ５１ ８ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、７ｍｇ（２段階で理論値の７８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ８７
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ１ ２４ｍｇ（０．０７６ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって中間体Ｃ４９ １６ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物３ｍｇ（２段階で理論値の１４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ８８
Figure 2018524321
当該化合物を、中間体Ｆ８と同様にして製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ８９
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ５．８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０μＬの存在下での中間体Ｌ８ ７．４ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５１ ８ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１０ｍｇ（２段階で理論値の７８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ９０
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ３４ｍｇ（０．０８９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬの存在下での中間体Ｌ１７ １３．７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）との反応と、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １１ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、７．５ｍｇ（２段階で理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法８）：Ｒｔ＝６．７８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ９１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート９．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍＬに溶かし、トリフルオロ酢酸７４０ｍｇ（６．４９ｍｍｏｌ、０．５０ｍＬ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をアセトニトリルおよび水に取り、凍結乾燥した。これによって、標的化合物９．２ｍｇ（理論値の９６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１０３
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（３−｛［（１Ｒ）−１−（３−ベンジル−７−クロロ−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−２−メチルプロピル］（４−メチルベンゾイル）アミノ｝プロピル）−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ８．８ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０μＬの存在下での中間体Ｌ４４ １１．３ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）との反応により、Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−［（１Ｒ）−１−（３−ベンジル−７−クロロ−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−２−メチルプロピル］−４−メチルベンズアミド１０ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによって精製を行った。
収量：８．５ｍｇ（理論値の３５％）。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．８２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１０４
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ １３ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０μＬの存在下で中間体Ｌ１ １１ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で６０分間撹拌した後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体１２．３ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
第２段階で、この中間体を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加えた。反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物８．１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１０５
Ｎ２−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５および中間体Ｌ４６から、中間体Ｆ３２と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１０６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５３および中間体Ｌ４７から中間体Ｆ１０４と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．８５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１０７
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １４ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２１μＬの存在下での中間体Ｌ４８ ２２．３ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１３ｍｇ（２段階で理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１０８
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５３ ２０ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ４８ ２４ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）から中間体Ｆ１０４と同様にして標題化合物を製造した。これによって、３ｍｇ（２段階で理論値の１４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１０９
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５７ １７ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬの存在下に市販の１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン７ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で１５分撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、この中間体７ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７および７７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体をに取り１ｍＬジクロロメタンおよびで脱保護し１ｍＬトリフルオロ酢酸．濃縮およびアセトニトリル／水からの凍結乾燥後、標題化合物６ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７／６７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１１０
Ｎ−（ブロモアセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５ １６ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ４９ １７ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）から中間体Ｆ１０９と同様にして標題化合物を製造した。これによって、標題化合物６ｍｇ（２段階で理論値の２４％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３３および９３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１１１
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １２．５ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬ存在下での中間体Ｌ５０ １６ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５ １５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１３ｍｇ（２段階で理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１２
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １４ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２１μＬの存在下での中間体Ｌ５０ １８ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１２ｍｇ（２段階で理論値の５１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １１ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬの存在下での中間体Ｌ５０ １４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）との反応、次にＤＭＦ ２ｍＬ中でのＤＡＢＣＯ １３３ｍｇによる脱保護により、中間体Ｃ５３ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。ＨＰＬＣによる精製によって、４ｍｇ（２段階で理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１４
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １２．６ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬの存在下での中間体Ｌ５１ １６ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５ １５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１１ｍｇ（２段階で理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１５
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １３ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２１μＬの存在下での中間体Ｌ５１ １８ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１２ｍｇ（２段階で理論値の５１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１６
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ８ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬの存在下での中間体Ｌ５１ １１ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）との反応、次にＤＭＦ ２ｍＬ中ＤＡＢＣＯ ８７ｍｇによる脱保護によって、中間体Ｃ５３ １１ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。ＨＰＬＣによる精製によって、３．３ｍｇ（２段階で理論値の２８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（３Ｓ）−３−アミノ−４−｛２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］ヒドラジノ｝−４−オキソブチル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ４９からペプチド化学の古典的方法に従って標題化合物を製造した。最初に、Ｃ４９を、ＨＡＴＵの存在下に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルヒドラジンカルボキシレートとカップリングさせた。Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中ピペリジンで除去し、得られたヒドラジドをＨＡＴＵの存在下に６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸とカップリングさせた。最後の段階で、Ｂｏｃ保護基をジクロロメタン中ＴＦＡで除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（３Ｓ）−３−アミノ−４−｛２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］ヒドラジノ｝−４−オキソブチル］−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初の段階で、ＨＡＴＵ の存在下に市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンヒドラジドとのカップリングによって、中間体Ｆ３と同様にして中間体Ｃ５３ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中ＤＡＢＣＯ １４２ｍｇで除去した。ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物３ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１１９
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８ ２９ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．４ｍＬに取り、中間体Ｌ５２ ３６ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ２５ｍｇ（０．０６５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬを加えた。室温で６０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、中間体２６．４ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２０および８２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体を、２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶解させた。塩化亜鉛６．５ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．９ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加えた。反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１４．４ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６および６７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１２０
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ８．４ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１３μＬの存在下での中間体Ｌ５３ １１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護により、中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、７．５ｍｇ（２段階で理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２１
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ９ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬの存在下での中間体Ｌ５３ １１．５ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、９ｍｇ（２段階で理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２２
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １１ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬの存在下での中間体Ｌ５３ １４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）との反応、次にＤＭＦ ３ｍＬ中ＤＡＢＣＯ ２０２ｍｇによる脱保護によって、中間体Ｃ５３ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。ＨＰＬＣによる精製によって、４ｍｇ（２段階で理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２３
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ８．４ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１３μＬの存在下での中間体Ｌ５４ １１ｍｇ（０．０３０ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、４ｍｇ（２段階で理論値の３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２４
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ９ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬの存在下での中間体Ｌ５４ １１．５ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、９ｍｇ（２段階で理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２５
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １１ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬの存在下での中間体Ｌ５４ １４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）との反応、次にＤＭＦ ３ｍＬ中ＤＡＢＣＯ １２７ｍｇによる脱保護によって、中間体Ｃ５３ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。ＨＰＬＣによる精製によって、３ｍｇ（２段階で理論値の１７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６９［Ｍ＋Ｎａ］＋。
中間体Ｆ１２６
Ｎ−（ブロモアセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ４９ １８ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ４９ ２１ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）から中間体Ｆ１１０ と同様にして標題化合物を製造した。これによって、標題化合物８．７ｍｇ（２段階で理論値の３０％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３３および９３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１２７
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５９ １２ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．４ｍＬに溶かし、中間体Ｌ１ １４．６ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩６ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物５．９ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、この中間体１１ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１１ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン１２３ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を超音波浴で２時間処理した。酢酸６３μＬを加え、反応液を高真空下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２ｍｇ（理論値の２２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９５分。
中間体Ｆ１２８
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｄ−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ２．５ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３μＬの存在下での中間体Ｌ５５ ２．５ｍｇ（０．００３ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５ ３ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１．４ｍｇ（２段階で理論値の３２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１２９
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １２ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬの存在下での中間体Ｌ５６ １９ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ４９ １０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）から中間体Ｆ１２８と同様にして標題化合物を製造した。これによって、１３．５ｍｇ（２段階で理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１４２
Ｒ／Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｒ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２０．０ｍｇ（２３．７μｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１３．４ｍｇ（２６．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン４．８ｍｇ（４７．３４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸３．６ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン１２．４ｍｇ（理論値の４４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−ホモシステイン１０．０ｍｇ（８．８５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノールに溶かし、二塩化亜鉛３．１ｍｇ（２２．７１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸３．９ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を短時間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。直接、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を少量の水で凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．６ｍｇ（理論値の７８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．５０（ｍ、１Ｈ）、０．８１（ｓ、９Ｈ）、１．４９（ｍ、１Ｈ）、１．８９（ｍ、１Ｈ）、２．０５（ｍ、１Ｈ）、２．２９−２．４３（ｍ、４Ｈ）、２．４５−２．５５（ｍ、２Ｈ）、２．５８−２．７４（ｍ、２Ｈ）、３．１０−３．２０（ｍ、２Ｈ）、３．２１−３．４０（ｍ、２Ｈ）、３．４２−３．５４（ｍ、１６Ｈ）、３．５５−３．６５（ｍ、４Ｈ）、４．２８（ｍ、１Ｈ）、４．９１（ｄｄ、１Ｈ）、５．１８（ｄｄ、１Ｈ）、５．６０（ｓ、１Ｈ）、６．９５（ｍ、１Ｈ）、７．００（ｓ、２Ｈ）、７．１５−７．３８（ｍ、７Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）、７．６８（ｍ、１Ｈ）、８．００（ｍ、２Ｈ）。
中間体Ｆ１４３
トリフルオロ酢酸／６−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート３０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）および６−（アセチルスルファニル）ヘキサン酸１３．５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、水１滴を含むメタノール２．０ｍＬに入れた。炭酸カリウム２３．０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加えた。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シライコサン−２０−酸５４．２ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シライコサン−２０−酸５４．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および１−（２−イミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）１６．７ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル３．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７５．０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。Ｔ３Ｐ（５０％アセトニトリル中溶液）６０．０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水で反応停止し、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート４２．８ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート２０．０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌し、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０．１ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）を加え、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物９．２ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１５）５０．０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン２２．７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）および６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイルクロライド（中間体Ｌ６０）ＷＩＳＶ１６４８−１−１ ４９．３ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。
反応混合物を室温で終夜撹拌した。２時間ごとに（３回）、１当量の中間体Ｌ６０および１．２当量のトリエチルアミンを加え、混合物を室温で終夜撹拌した。この手順をさらに２回繰り返した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ）プロピル］カーバメート３０．９ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０６（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ）プロピル］カーバメート２４．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３．０ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ７９．５ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で６時間撹拌した。追加のＴＦＡ ７９．５ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をジクロロメタンとともに３回共蒸留した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物２４．２ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６０６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４５
トリフルオロ酢酸／６−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ヘキサンアミド
Figure 2018524321
最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート９０．０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）、中間体Ｃ１６、および６−（アセチルスルファニル）ヘキサン酸４３．６ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を水１滴を含むメタノール９．０ｍＬに入れ、炭酸カリウム７３．９ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、酢酸エチルを加えた。有機相を水／飽和ＮａＣｌ溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒留去した。残留物をシリカゲルによってクロマトグラフィー精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール１００：２）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザオクタデカン−１８−酸９８．７ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザオクタデカン−１８−酸２０．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）６．５（０．０４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．５ｍＬに入れ、Ｔ３Ｐ ２３．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２９．５ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、水を加えた。反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート１６．７ｍｇ（理論値の９９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート１４．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ４１．０ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。
次に、さらに２回、各場合でＴＦＡ ４１．０ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を１，４−ジオキサンおよび水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２．９ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４６
Ｒ／Ｓ−［２−（［（３Ｓ）−３−アミノ−３−カルボキシプロピル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｒ／Ｓ−［（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−カルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル］ホモシステイン（中間体Ｃ１２）２５．０ｍｇ（２８．１２μｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１５．９ｍｇ（３０．９３μｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン１１．４ｍｇ（１１２．４８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸７．６ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−［（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−カルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル］−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン２３．９ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ／Ｓ−［（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−カルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル］−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン１１．８ｍｇ（８．２３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノールに溶かし、二塩化亜鉛１．７ｍｇ（１２．３５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸３．６ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を短時間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。直接、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物５．８ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０−オキソ−３，６−ジオキサ−１６−チア−９−アザオクタデカン−１８−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザオクタデカン−１８−酸（中間体Ｃ１３）１５．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．５ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２２．１ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）および次にＴ３Ｐ １７．７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、トリフルオロ酢酸／１−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）（中間体Ｌ５９）９．５ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、水で反応停止した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０，１８−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１６−チア−９，１９−ジアザドコサン−２２−イル］カーバメート１４．８ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｔｅｒｔ−ブチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０，１８−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１６−チア−９，１９−ジアザドコサン−２２−イル］カーバメート１４．２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ３５．５ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。追加のＴＦＡ ７１．０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物１４．０ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４８
トリフルオロ酢酸／６−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルフィニル）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１４５の合成における副生成物として、標題化合物が生成した。これによって、標題化合物８．１ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１４９
トリフルオロ酢酸／Ｒ／Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン（１：１）
Figure 2018524321
最初に、Ｒ／Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］ホモシステイン（中間体Ｃ１４）２０．０ｍｇ（２４．９４μｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１４．１ｍｇ（２７．４４μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン５．１ｍｇ（４９．８８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。酢酸３．７ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン１８．２ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ／Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］ホモシステイン１７．６ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ３７．０ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。追加のＴＦＡ ７４．０ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物１６．０ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）エチル］−Ｌ−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
アルゴン下に０℃で、ＤＭＦ １．０ｍＬ中のトリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル［３−（｛［（２−アミノエチル）スルファニル］アセチル｝｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ２０）１０．０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ２５）１２．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ ２．２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ７．６ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）で処理した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．５μＬ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ １．８μＬを加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−アラニンアミド１０．４ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．６０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８７．５［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
最初に、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−アラニンアミド９．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．０ｍＬに入れ、ＴＦＡ １５．８ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を終夜撹拌した。追加のＴＦＡ ３１．６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物１０．２ｍｇ（理論値の９８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３７．５［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
中間体Ｆ１５１
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（３−｛（２Ｓ）−５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル｝プロピル）−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、（２Ｓ）−２−（３−アミノプロピル）−５−（２，５−ジフルオロフェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−フェニル−１，３，４−チアジアゾール−３（２Ｈ）−カルボキサミド５．０ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７．７ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ ９．８（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ４４）９．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物４．３ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１５２
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（３−｛（２Ｓ）−５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル｝プロピル）−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、（２Ｓ）−２−（３−アミノプロピル）−５−（２，５−ジフルオロフェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−フェニル−１，３，４−チアジアゾール−３（２Ｈ）−カルボキサミド５．０ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７．７ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ ９．８（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ２５）１１．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物４．７ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１５３
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロパノイル］アミノ）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ６０から中間体Ｆ１０４と同様にして合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５４
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２と同様にして、中間体Ｃ８ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ６ １５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５５
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１１９について記載の方法に従って、ＨＡＴＵ ８．７ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬの存在下での中間体Ｃ６１ １４ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ６１ １５ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１３ｍｇ（２段階で理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５６
Ｎ−（ブロモアセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従ってトリペプチド誘導体２−（トリメチルシリル）エチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジネートをＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから製造した（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いるエステル化２−（トリメチルシリルエタノール、水素化分解、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリング、さらなる水素化分解による）。
この中間体８４ｍｇ（０．１６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．５ｍＬに取り、１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン５８ｍｇ（０．２４４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水１：１に取り、混合物をトリフルオロ酢酸でｐＨ２に調節し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮後、残留物を５％強度トリフルオロ酢酸のＤＣＭ中溶液１５ｍＬに取り、室温で２時間撹拌した。混合物を軽く冷却しながら濃縮し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。この中間体５３ｍｇ（理論値の５０％）を２段階で得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３７および５３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
標題化合物の合成のため、この中間体１８ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、中間体Ｃ６１ １６ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １９ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９μＬを加えた。室温で５分間撹拌後、トリフルオロ酢酸数滴を加え、反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥後、得られた中間体を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛４．８ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を加えた後、反応液を５０℃で２．５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を加え、反応液をアセトニトリル／水で希釈し、濾過した。精製を分取ＨＰＬＣによって行った。適切な分画の濃縮および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物３．２ｍｇ（理論値の１３％）を２段階で得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３２および９３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６３
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ存在下での中間体Ｃ５８ ３７ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ６１ ４１ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）のカップリング、次に、中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛によるブロック除去によって、標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１２ｍｇ（２段階で理論値の１９％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．４９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６４
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ５８ ２０ｍｇ（０．０３０ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ６２ ２７ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６５
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵの存在下での中間体Ｃ６１ １５ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ６２ １８ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６６
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って、ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いるベンジルアルコールによるエステル化、次にＤＣＭ中でのＴＦＡによるｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の除去によって、トリフルオロ酢酸／ベンジル（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノシクロペンタンカルボキシレート（１：１）を、市販の（１Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から製造した。
この中間体５１ｍｇ（０．０７６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ６ｍＬに取り、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８ ５０ｍｇ（０．０７６ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、中間体をメタノールに取り、水素標準圧下に室温で２時間１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。ジオキサンからの凍結乾燥によって、（１Ｒ，３Ｓ）−３−｛［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］アミノ｝シクロペンタンカルボン酸２１ｍｇ（２段階で理論値の３４％）を得た。
ＨＡＴＵの存在下でのこの中間体１０．５ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ６２ １１．４ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８．６ｍｇ（２段階で理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６７
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １２ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４μＬの存在下での中間体Ｌ５６ ２０ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）との反応、次にトリフルオロ酢酸による脱保護によって、中間体Ｃ５ １１ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）から中間体Ｆ１２９と同様にして標題化合物を製造した。これによって、１１ｍｇ（２段階で理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１６８
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法に従い、ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いるベンジルアルコールによるエステル化、次にＴＦＡ／ＤＣＭによるｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の除去によって、トリフルオロ酢酸／ベンジル（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロペンタンカルボキシレート（１：１）を市販の（１Ｒ，２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から製造した。
この中間体１０２ｍｇ（０．３０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２ｍＬに取り、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８ １００ｍｇ（０．１５２ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、中間体をメタノールに取り、室温で水素標準圧下に２時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］アミノ｝シクロペンタンカルボン酸７０ｍｇ（２段階で理論値の５９％）を得た。
ＨＡＴＵ ９．５ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８μＬの存在下でのこの中間体２０ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ６１ １６．６ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物９．３ｍｇ（２段階で理論値の３０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６９
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１６８に従って、中間体Ｃ５８およびＬ６２から標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１７０
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｎ６−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｄ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
標題化合物を、それのジアステレオマー中間体Ｆ２３と同様にして製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１７１
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｄ−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１５５と同様にして、中間体Ｃ６２およびＬ６１から標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１７２
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ５．５ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１１μＬの存在下での中間体Ｌ６３ ９ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）とのカップリングおよびそれに続くトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン１：１中溶液中での２．５時間にわたる撹拌による脱保護によって、中間体Ｃ６３ １０ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、１１ｍｇ（２段階で理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７３
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ７．７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬの存在下での中間体Ｌ６３ １２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、中間体Ｃ６４ １５ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１２ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７４
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１７２と同様にして、中間体Ｃ５７およびＬ６３から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ６．７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９μＬの存在下での中間体Ｃ６４ １１ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸３．４ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８ｍｇ（２段階で理論値の６９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１２−オキソ−３，６，９−トリオキサ−１３−アザペンタデカン−１５−イル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ３．５ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４μＬの存在下での中間体Ｃ６４ ５ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）の３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパン酸（中間体Ｌ１５下で記載の方法で製造）２ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物２ｍｇ（２段階で理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７７
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ６１に代えて、中間体Ｌ１を用いて中間体Ｆ１６８と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７８
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝シクロペンタンカルボキサミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｌ１に代えて、中間体Ｌ５２を用いて、中間体Ｆ１７７と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８７および７８９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１７９
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １３ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬの存在下での中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）の１−（６−アミノヘキシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン６ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８．５ｍｇ（２段階で理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．２２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１８０
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６μＬの存在下に中間体Ｃ６４ ９．６ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ６４ ５ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって脱保護することによって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物３．１ｍｇ（２段階で理論値の２８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１９２
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｌ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８ ６０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ８ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ４２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６４μＬの存在下に中間体Ｌ６５ ４５ｍｇ（０．１００ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、中間体をエタノール１０ｍＬに取り、室温で水素標準圧下に４５分間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｌ−アラニネート２４．５ｍｇ（２段階で理論値の３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体１０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）をＨＡＴＵ ５．４ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８μＬの存在下に市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸中間体２ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛で脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物３．５ｍｇ（２段階で理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１９３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から、中間体Ｆ１９２と同様にして標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１９４
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、実施例９８から標題化合物を製造した。次の段階で、室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化し、次に１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、中間体Ｆ５８について記載のように脱保護中間体を標題化合物に変換することによりＺ保護基を除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１９５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝−Ｎ′−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ ４０ｍｇ（０．１０５４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６１μＬの存在下でのＤＭＦ ８ｍＬ中での中間体Ｃ６５ ２６ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）の市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）１８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）とのカップリング、次に中間体Ｆ１１９について記載の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１６ｍｇ（２段階で理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝７．９９（ｔ、１Ｈ）、７．９５（ｔ、１Ｈ）、７．６−７．７５（ｍ、４Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）７．２−７．４（ｍ、６Ｈ）、６．８−７．０（ｍ、４Ｈ）、５．６３（ｓ、１Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．２６および４．０（２ｄ、２Ｈ）、３．３−３．６（ｍ、４Ｈ）、３．１５−３．２５（ｍ、３Ｈ）、２．８５−３．０（ｍ、２Ｈ）、２．２−２．３（ｍ、４Ｈ）、０．６４および１，４９（２ｍ、２Ｈ）、０．８１（ｓ、９Ｈ）。
中間体Ｆ１９６
トリフルオロ酢酸／２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、ＨＡＴＵ １３．０ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬの存在下に中間体Ｌ６７ ８．２ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で３０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の組み合わせおよび溶媒留去後、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。これによって、保護中間体４．３ｍｇ（理論値の２０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体４．３ｍｇ（４．５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１ｍＬに溶かし、中間体Ｆ１１９について記載の方法に従って塩化亜鉛３．６５ｍｇ（２７μｍｏｌ）で脱保護した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１ｍｇ（２段階で理論値の２５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０４
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ５８ ２５ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ １７ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２０μＬの存在下に中間体Ｌ６８ １６．５ｍｇ（純度７５％）（０．０３８ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で６０分間撹拌した後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体１８．３ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
第２段階で、この中間体を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２５ｍｇ（０．０８６ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加えた。反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物１１ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０５
トリフルオロ酢酸／１−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］ピペリジン−４−イルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチネート（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６１ ２５ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）および中間体Ｌ６９ ２９ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）のカップリング、次に標準圧下でのパラジウム／活性炭（１０％）による水素化、次にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とのカップリング、最後に塩化亜鉛による２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基の除去によって、合成を行った。ＨＰＬＣ精製によって、１１ｍｇ（４段階で理論値の２６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０６
トリフルオロ酢酸／１−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］ピペリジン−４−イルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２０５と同様にして合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０７
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２０９
Ｒ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｌ−システイン９３．９ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム９３．０ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ）および水０．９ｍＬの溶液に懸濁させた。イソプロパノール６．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）７０．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン２０２．３ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で９０分間撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）を加え、反応液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）５３．９ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）８６．０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド５８．５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４．０ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン２０．９ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ １５．５ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン６８．６ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン４６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１７．０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。追加の二塩化亜鉛８．５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸３６．５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。直接に、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）よって精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１９．４ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１０
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｄ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｄ−システインを用い、中間体Ｆ２０９の合成と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１１
トリフルオロ酢酸／３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］プロパンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）３０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、水１滴を含むメタノール０．５ｍＬ中で、３−スルファニルプロパン酸５．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）とともに入れた。炭酸カリウム２３．０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を水で１回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、化合物１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸３０．３ｍｇ（理論値の８６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸３０．０ｍｇ（０．０４ｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１：１）９．８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル２．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４４．２ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３５．４ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート２２．０ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］カーバメート２２．０ｍｇ（０．０３ｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛９．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１９．５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１５．０ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０−オキソ−３，６−ジオキサ−１３−チア−９−アザペンタデカン−１５−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸（中間体Ｃ６９）２８．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／１−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）（中間体Ｌ５９）１８．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．９ｍＬ中に入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４２．４ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１６−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０，１５−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１３−チア−９，１６−ジアザノナデカン−１９−イル］カーバメート１０．７ｍｇ（理論値の２６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［１６−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１０，１５−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１３−チア−９，１６−ジアザノナデカン−１９−イル］カーバメート１０．７ｍｇ（０．０１ｍｏｌ）をトリフルオロエタノール０．８ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛８．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１７．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって、直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１３
トリフルオロ酢酸／３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸（中間体Ｃ６９）２７．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１．８ｍＬ中にトリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）１５．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）とともに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３２．４ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３２．４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル−［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（０．０１ｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１１．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって、直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物７．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１４
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸１１１．７ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ４６．１（０．３０ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ ９６．６ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３８．９ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１１６．３ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）２５０．０ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−｛［（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノイル］アミノ｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸２５７．０ｍｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ｉｉ）２４．６ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン３３．２ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン２５４．３ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ジクロロメタン５．０ｍＬに溶かした（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−｛［（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノイル］アミノ｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸２３４．１ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をボール紙フィルターで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。加熱せずに減圧下に溶媒留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）１７７．５ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２０．０ｍｇ（２０．８３μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬ中に３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１１．８ｍｇ（２２．９１μｍｏｌ）とともに入れ、４−メチルモルホリン６．３ｍｇ（６２．４９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸４．４ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１９．１ｍｇ（理論値の７４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１７．５ｍｇ（１４．０６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．５ｍｇ（８４．３７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．７ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１５
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［（｛［（２Ｒ）−２−アセトアミド−２−カルボキシエチル］スルファニル｝アセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、Ｎ−アセチル−Ｓ−［２−（［３−（Ｌ−アラニルアミノ）プロピル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（実施例２２９）１４．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート７．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン５．７ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸４．５ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［（｛［（２Ｒ）−２−アセトアミド−２−カルボキシエチル］スルファニル｝アセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１３．３ｍｇ（理論値の７８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［（｛［（２Ｒ）−２−アセトアミド−２−カルボキシエチル］スルファニル｝アセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド１１．１ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をエタノール５．０ｍＬに溶かし、１．０ｍｇパラジウム／活性炭（１０％）を加え、混合物を室温および標準圧で終夜水素化した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキをエタノール／ＴＨＦ／水混合物で洗浄した。減圧下に溶媒を留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［（｛［（２Ｒ）−２−アセトアミド−２−カルボキシエチル］スルファニル｝アセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）７．５ｍｇ（理論値の６９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［（｛［（２Ｒ）−２−アセトアミド−２−カルボキシエチル］スルファニル｝アセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）７．３ｍｇ（８．１２μｍｏｌ）を、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド４．６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）とともにＤＭＦ ０．５ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン２．５ｍｇ（２４．３６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸４．４ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物４．９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１６
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ′−ビス［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン３０．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を、水２．０ｍＬおよびイソプロパノール２．０ｍＬに入れ、ＴＣＥＰ ５６．７ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。イソプロパノール２．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）５０．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。追加の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン４３．１ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に４−メチルベンゼンスルホン酸／ベンジルβ−アラニネート（１：１）１６．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．５ｍＬに入れた。反応混合物を室温で３分間撹拌し、アセトニトリル１．５ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン３０．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．４ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）２９．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。得られた化合物は、ベンジルＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル−β−アラニネートであった。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ベンジルＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル−β−アラニネート４３．８ｍｇ（４３．３μｍｏｌ）をエタノール８．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）４．４ｍｇを加え、混合物を室温および標準圧で終夜水素化した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。さらに２回、残留物を、丁度記載した通りに処理した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）４．９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）１４．５ｍｇ（１６．１μｍｏｌ）を、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド９．１ｍｇ（１７．７μｍｏｌ）とともにＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン４．９ｍｇ（４８．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．４ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）４．９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）１４．１ｍｇ（１１．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。追加の二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。追加の二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を７０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２０．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物６．２ｍｇ（理論値の４４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１７
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321

アルゴン下に、最初に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １５．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．５ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．７ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１１．２ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１０．９ｍｇ（１２．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１０．４ｍｇ（７６．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２２．４ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２１８
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、２２．９ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ９．４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １９．８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７１）５１．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．９ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−｛［（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノイル］アミノ｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸１１．２ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ｉｉ）３．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン５．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン２５４．３ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ジクロロメタン１．０ｍＬに溶かした（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−｛［（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノイル］アミノ｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸１８．６ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。加熱せずに減圧下に溶媒留去した。残留物をアセトニトリルに取り、シリンジフィルターで濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）１１．０ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）１５．０ｍｇ（１５．６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬ中に３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド８．８ｍｇ（１７．２μｍｏｌ）とともに入れ、４−メチルモルホリン４．７ｍｇ（４６．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．３ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１４．２ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１３．８ｍｇ（１１．１μｍｏｌ）をリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かしト、二塩化亜鉛９．１ｍｇ（６６．５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１９．４ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物６．９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２３５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝カルバモイル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（１：１）
Figure 2018524321
２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成を参照）１２０．０ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）および４−ニトロベンゾイルクロライド５２．１ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン８．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン２８．４ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（４−ニトロベンゾイル）アミノ］プロピル｝カーバメート９７．７ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（４−ニトロベンゾイル）アミノ］プロピル｝カーバメート９７．０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）をエタノール５．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）９．７ｍｇを加え、混合物を標準圧で５時間水素化した。反応混合物をボール紙フィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［（４−アミノベンゾイル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝カーバメート８７．４ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［（４−アミノベンゾイル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］プロピル｝カーバメートおよび２５．５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン５９．３ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル５．０ｍＬにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６８．１ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）とともに入れた。Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）７２．７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ベンジル［（２Ｓ）−１−｛［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］アミノ｝−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート５２．２ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ベンジル［（２Ｓ）−１−｛［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］アミノ｝−１−オキソプロパン−２−イル］カーバメート２３．９ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル３．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）２．４ｍｇを加え、混合物を標準圧で２時間水素化した。反応混合物を濾紙で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（［４−（Ｌ−アラニルアミノ）ベンゾイル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート２０．１ｍｇ（理論値の９０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、２−（トリメチルシリル）エチル［３−（［４−（Ｌ−アラニルアミノ）ベンゾイル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート２０．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬ中に２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート１４．９ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）とともに入れ、４−メチルモルホリン５．４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミドを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド１７．０ｍｇ（１７．４μｍｏｌ）を酢酸エチル２．５ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）１．７ｍｇを加え、混合物を標準圧で終夜水素化した。反応混合物を濾紙で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド１５．３ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド１５．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．４ｍＬに３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド７．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）とともに入れ、４−メチルモルホリン１．９ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸１．４ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド１１．７ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−γ−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］カルバモイル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド１１．７ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛３．９ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸８．３ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって、直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物５．４ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２３６
（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝ブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１９２と同様にして、（２Ｒ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２３８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−１−アミノ−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロパン−２−イル｝−Ｎ′−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ７２ １８ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ６ｍＬに取り、ＨＡＴＵ １１．３ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２２μＬの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）７．５ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。室温で１時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。これによって、中間体１５ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
Ｆ１１９について記載のトリフルオロエタノール４ｍＬ中の塩化亜鉛による脱保護中間体によって、この中間体から標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８．５ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
中間体Ｆ２３９
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １５．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．５ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．７ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１１．２ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１０．９ｍｇ（１２．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１０．４ｍｇ（７６．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２２．４ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４０
トリフルオロ酢酸／３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸（中間体Ｃ６９）２７．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）１５．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．８ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３２．４ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３２．４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル−［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（０．０１ｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１１．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物７．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱ブロックによって、同様に中間体Ｃ６６から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３３および７３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ２４２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝プロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321









中間体Ｆ１０４と同様にして標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４３
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エチル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２４２と同様にして標題化合物の合成を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４４
Ｎ−｛２−［（Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイニル）アミノ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド
Figure 2018524321
最初に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［３−（トリメチルシリル）プロパノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７３）１００ｍｇ（約０．１０１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド８８ｍＬに入れ、Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（中間体Ｌ７３）１０７ｍｇ（約０．１５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ４６ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）および８８μＬ（０．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。水／ジクロロメタンを混合物に加え、有機相を水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥した。残留物をそれ以上精製せずにさらに用いた。これによって、標題化合物９２ｍｇ（５９％、純度７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
アルゴン下に、塩化亜鉛４０ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル［（９Ｒ）−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２０−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，１５−トリオキソ−９−｛［３−（トリメチルシリル）プロパノイル］アミノ｝−７−チア−４，１１，１４−トリアザイコサ−１−イル］カーバメート９１ｍｇ（約０．０６ｍｍｏｌ）のトリフルオロエタノール（１．４５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。塩化亜鉛３０ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１時間撹拌した。ＥＤＴＡ ５２ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌後、混合物を水／アセトニトリルでわずかに希釈し、分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配）によって精製した。これによって、標題化合物１７ｍｇ（３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝−Ｎ′−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
ＤＭＦ ８ｍＬ中ＨＡＴＵ １５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９μＬ存在下での中間体Ｃ６５ １０ｍｇ（０．０１３５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１ ８ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってのトリフルオロエタノール中の塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８．８ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４７
トリフルオロ酢酸／メチル４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−ブロモ−４−オキソブタノエート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ６６ １４ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １４ｍＬに溶かし、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）１０．１ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）とともに、１回に少量ずつｐＨを５から６に維持しながら、ピリジン合計２５０μＬを加えた。次に、酢酸でｐＨを４に調節し、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、凍結乾燥および乾燥によって、保護中間体４ｍｇ（理論値の２１％）を得て、それを次に、塩化亜鉛によってアミノ官能基で脱保護した。ＨＰＬＣ精製および凍結乾燥によって、標題化合物３ｍｇ（理論値の７２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０５および８０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２４８
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ存在下での中間体Ｃ５８ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１２ ５ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。これによって、標題化合物６．５ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５４
トリフルオロ酢酸／メチル（３Ｓ）−４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−ブロモ−４−オキソブタノエート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ６６ １５ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸塩酸塩（１：１）から（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ２００、６５、５１７−５２２）に記載の方法に従って合成した（２Ｓ）−２−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸２１ｍｇ（０．０９９ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで、中間体２４７と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０５および８０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５５
Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸１３．１ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ５．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １１．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２．９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）に溶かしたＲ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ１１）３０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ １ｍＬを加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４−［２−［［（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル］−［３−（２−トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］−２−オキソエチル］スルファニル−２−［［（２Ｓ）−５−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］ブタン酸３２ｍｇ（７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−［２−［［（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル］−［３−（２−トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］−２−オキソエチル］スルファニル−２−［［（２Ｓ）−５−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］ブタン酸４１．４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに溶解させ、Ｐｄ／Ｃ ４．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下に水素化した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に加熱せずに留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−（Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２１．１ｍｇ（５６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初にＲ／Ｓ−（Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２０．４ｍｇ（２０．９４μｍｏｌ）を、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１１．８ｍｇ（２３．０４μｍｏｌ）とともにＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン４．２ｍｇ（４１．８８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン９．５ｍｇ（３６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン９．４ｍｇ（７．４７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．１ｍｇ（４４．８１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６．９ｍｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝−Ｎ′−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エチル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６５ １０ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）９．６ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）のカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってのトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５７
Ｒ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）５０．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）および３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ７４）２９ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ２７．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン１７．４ｍｇ（２６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン１７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．６ｍｇ（４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５８
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［３−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−３−オキソプロピル］ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵを用いる中間体Ｃ５８のトリフルオロ酢酸／ベンジル［２−（β−アラニルアミノ）エチル］カーバメート（１：１）とのカップリング、次に水素化分解、次に１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとのカップリングおよび最後に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７および７４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５９
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、室温で水素標準圧下に１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニネート６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体４０ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）を、上記の方法と同様にして、ＨＡＴＵの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシンとカップリングさせ、再度水素化分解的に脱保護した。
この中間体１０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４μＬの存在下に市販の１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン７．７ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１．３ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７および７７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６０
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エチル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵの存在下での中間体Ｃ５８ ２０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ７７ ２５．８ｍｇ（０．０６１ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１１．９ｍｇ（２段階で理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２および７２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６２
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初にＳ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０ｍｇ（３６μｍｏｌ）と３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−［２−（２−｛３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−３−オキソプロポキシ｝エトキシ）エチル］プロパンアミド１６．９ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン１０．９ｍｇ（１０８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸７．５８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン３３．４ｍｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン３２．８ｍｇ（３２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール３．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２６．１ｍｇ（１９２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５６．０ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物２２．９ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６３
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）およびＮ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニン（中間体Ｌ７８）９．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン４．２ｍｇ（１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１１．３ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０．７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（４０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６４
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）およびＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニン（中間体Ｌ７９）１２．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン８．９ｍｇ（２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１５．３ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．１ｍｇ（６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，１７−ジオキソ−１０，１３−ジオキサ−３−チア−７，１６−ジアザドコサン−１−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（４２．７μｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８２）２５．３ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、アセトニトリル１．９ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（３４０μｍｏｌ）および２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド５０％の酢酸エチル中溶液３３μＬ（５６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加え、精製を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２１−トリオキソ−１４，１７−ジオキサ−７−チア−４，１１，２０−トリアザヘキサコサ−１−イル］カーバメート２６．７ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２１−トリオキソ−１４，１７−ジオキサ−７−チア−４，１１，２０−トリアザヘキサコサ−１−イル］カーバメート２５．３ｍｇ（２４．７μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２０．２ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸４３．３ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２３．４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３−ジオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２−ジアザオクタデカン−１８−アミド（１：１）
Figure 2018524321
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を最初に、トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８３）２２．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．９ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３，１８−トリオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２，１９−トリアザドコサン−２２−イル］カーバメート２０．５ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３，１８−トリオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２，１９−トリアザドコサン−２２−イル］カーバメート１９．１ｍｇ（１９．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１６．１ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸３４．６ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１３．９ｍｇ（理論値の７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６７
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−オン酸（中間体Ｌ７４）１３．４ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９．３μＬ（５４．４μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １２．６ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．７μＬ（２７．７μｍｏｌ）に溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２１６の合成参照）２５．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で９０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン６．９０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン６．７０ｍｇ（５．７１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．６７ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，２３−ジオキソ−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３−チア−７，２２−ジアザオクタコサン−１−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８４）３０．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２７−トリオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−７−チア−４，１１，２６−トリアザドトリアコンタ−１−イル］カーバメート２７．９ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２７−トリオキソトリオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−７−チア−４，１１，２６−トリアザドトリアコンタ−１−イル］カーバメート２５．６ｍｇ（２３．０μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１８．８ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸４０．３ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２２．２ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６９
４−｛［（８Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−８−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１７．０ｍｇ（０．０１９５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）４．９９ｍｇ（０．０２５３ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２７μＬ（０．１６ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１５μＬ（０．０２５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート９．５ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート８．３ｍｇ（７．８９μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で６時間撹拌した。二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．１０ｍｇ（理論値の１４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−Ｎ′−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）８．５４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛４−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１４．７ｍｇ（理論値の７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛４−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１３．２ｍｇ（１５．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．９ｍｇ（９４．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．９ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７１
４−｛［（２０Ｒ，２６Ｒ）−２５−（３−アミノプロピル）−２６−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２７，２７−ジメチル−２，１９，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２０−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１９．４ｍｇ（２２．２μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ７４）２１．７ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬ（６７μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １６．９ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，３４−テトラオキソ−５，２１，２４，２７，３０−ペンタオキサ−１４−チア−７，１１，１８，３３−テトラアザ−２−シラペンタトリアコンタン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１８．１ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，３４−テトラオキソ−５，２１，２４，２７，３０−ペンタオキサ−１４−チア−７，１１，１８，３３−テトラアザ−２−シラペンタトリアコンタン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１８．１ｍｇ（１４．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．０ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２５．８ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２．３ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−Ｎ′−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１３．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２２−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８，２３−トリアザヘキサコサン−２６−イル］カーバメート１５．８ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２２−トリオキソトリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８，２３−トリアザヘキサコサン−２６−イル］カーバメート１５．１ｍｇ（１４．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．３ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８−ジアザテトラコサン−２４−アミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）２０．０ｍｇ（２８．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０．０μＬ（５７．０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １３．０ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．０μＬ（２８．５μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１６．７ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］カーバメート１８．６ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル［２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２４−トリオキソトリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］カーバメート１７．１ｍｇ（１６．２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１３．２ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２８．４ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．８０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７４
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１３．９ｍｇ（０．０１６７ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ８６）７．０７ｍｇ（０．０２１７ｍｍｏｌ）とともアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３μＬ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１３μＬ（０．０２２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン３．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１０．６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛８．４６ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１８．１ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．６０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７５
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３９．０ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬに入れ、１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｌ−グルタメート塩酸塩（１：１）（中間体Ｌ８９）４１．６ｍｇ（１１１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２９μＬ（１７０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ４２．３ｍｇ（１１１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−グルタメート５３．１ｍｇ（理論値の９３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）７．６０ｍｇ（３３．９μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１４μＬ（１００μｍｏｌ）およびトリエチルシラン１１０μＬ（６８０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ジクロロメタン３．０ｍＬに溶かした１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−グルタメート６９．２ｍｇ（６７．７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物（１９Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−１９−｛３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８−トリアザ−２−シライコサン−２０−オン酸３８．４ｍｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に（１９Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−１９−｛３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８−トリアザ−２−シライコサン−２０−オン酸（中間体Ｃ６９）１０．０ｍｇ（１０．７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド／２，２，２−トリフルオロエタン−１，１−ジオール（１：１）（中間体Ｌ１）６．７３ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．６μＬ（３２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ８．１７ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ２−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミネート６．９０ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０［Ｍ＋Ｈ］＋。
２−（トリメチルシリル）エチルＮ２−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミネート６．９０ｍｇ（６．２１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛１０．１ｍｇ（７４．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜および室温で７２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５４．５ｍｇ（１８６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７６
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ８７）９．０８ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．３３μＬ（４８．２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １１．０ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．６７μＬ（２４．１μｍｏｌ）に溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）２０．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン４．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン１３．９ｍｇ（１３．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．１ｍｇ（８２．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７７
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）８．９０ｍｇ（８．８８μｍｏｌ）および１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２．３１ｍｇ（９．７７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン２．９μＬ（２７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００８（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（５．７５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２０．２ｍｇ（６９．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．７０ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７８
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）１０．０ｍｇ（９．９８μｍｏｌ）および１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２．７７ｍｇ（１１．０μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン３．３μＬ（３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５．５０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５．５０ｍｇ（５．３６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２８．２ｍｇ（９６．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．７０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７９
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛（２Ｒ）−２−カルボキシ−２−［（３−カルボキシプロパノイル）アミノ］エチル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（１４μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．５ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）４．６０ｍｇ（理論値の４２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１０．０ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（中間体Ｌ８８）７．４１ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．４μＬ（２５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．２０ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ベンズアミド（１：１）
Figure 2018524321
市販の１−（３−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって、中間体Ｃ６４から標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８１
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、修飾アミノ酸構成要素Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニンおよび２−（トリメチルシリル）エチル−３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネートをペプチド化学の古典的方法によって製造した。これらを、ＨＡＴＵおよびモルホリンの存在下にカップリングさせた。次に、１０％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いてｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去して、中間体２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネートを得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１および７９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝プロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法によってｔｅｒｔ−ブチルグリシネートおよびブロモ無水酢酸から、中間体トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ２−（ブロモアセチル）グリシンアミド（１：１）を製造した。
最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７および７４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８３
Ｎ−［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］−Ｎ２−（ブロモアセチル）−Ｌ−α−アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、修飾アミノ酸構成要素（２Ｓ）−２−［（ブロモアセチル）アミノ］−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸およびブロモ無水酢酸を（２Ｓ）−２−アミノ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸およびブロモ無水酢酸から製造し、アミノ酸構成要素２−（トリメチルシリル）エチル−３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネートを市販の３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から製造した。両方の構成要素をＨＡＴＵおよびモルホリンの存在下にカップリングさせ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、５％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得て、従って中間体トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−｛（２Ｒ）−２−アミノ−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ２−（ブロモアセチル）−Ｌ−α−アスパラギナート（１：１）を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５および８３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８４
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｌ８０を市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、１６％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４．４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８５
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−［（１８−ブロモ−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｌ８０を市販のブロモ無水酢酸でアシル化し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、２０％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６７および９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８６
１−［（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニル）アミノ］−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｌ９１を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、Ｂｏｃ保護基を、１２．５％強度ＴＦＡ／ＤＣＭを用いて除去した。得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８８
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−（｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−セリル｝アミノ）−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙ）エチルアミンの存在下に、ｔｅｒｔ−ブチルＯ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−セリネートおよび（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から事前に製造しておいたＮ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−セリンとカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の３８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４．３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８９
Ｎ２−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ６−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｄ−リジン／トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法によって、Ｎ６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−リジンからトリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ６−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｄ−リシネート（１：１）を製造した。
次に、この中間体１２．５ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９０
Ｎ２−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ６−（ブロモアセチル）−Ｄ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学の古典的方法によって、Ｎ６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−リジンから、トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ６−（ブロモアセチル）−Ｄ−リシネート（１：１）を製造した。
この中間体１２ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物７ｍｇ（理論値の３６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２および７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９１
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、実施例Ｍ９から標題化合物を製造した。次の段階で、室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化することでＺ保護基を除去し、次にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ベンゾイル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、市販の１−（３−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１３．５ｍｇ（４３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１２ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９４
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶かし、１，１′−［（１，５−ジオキソペンタｎ−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン１３ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物９ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９５
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド
Figure 2018524321
メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１０ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で２時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）スルホニル］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせることで、中間体Ｌ８１から標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で水素標準圧下に３０分間、１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去した。ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、最後に塩化亜鉛による脱保護によって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９７
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体１）
Figure 2018524321
アルゴン下に、塩化亜鉛１５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９２）３６ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度６８％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．７４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ３２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６．４ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９８
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体２）
Figure 2018524321
アルゴン下に、塩化亜鉛１９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９１）４５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、純度７１％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．９４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ４２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物５．７ｍｇ（理論値の１８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９９
Ｓ−（２−｛（３−アミノプロピル）［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ８４）８８．０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（１．８８ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛７６．８ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １６４．６ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３１ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３００
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）ブタンアミド
Figure 2018524321
アルゴン下に、２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（中間体１００）７ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．２ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛１１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．６ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０２
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイントリフルオロアセテート（１：１）（異性体１）
Figure 2018524321
アルゴン下に、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９４）５６．９ｍｇ（５８．２ｍｍｏｌ、純度８５％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（１．４ｍＬ）中混合物に、塩化亜鉛３１．７ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ６８．０ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３６（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０５
Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，１７−ジオキソ−Ｎ−（ピロリジン−３−イルメチル）−１０，１３−ジオキサ−３−チア−７，１６−ジアザドコサン−１−アミド／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体２）
Figure 2018524321
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１９−トリオキソ−１２，１５−ジオキサ−５−チア−２，９，１８−トリアザテトラコサ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ９９）２４．８０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．６５ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛１３．４２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ２８．７８ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の４４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０６
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵ １６．７ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５μＬ存在下での中間体Ｃ６１ ２４ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ９９ ３０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法によるトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛を用いる脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１９ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０７
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）８．９０ｍｇ（８．８８μｍｏｌ）および１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２．３１ｍｇ（９．７７μｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン２．９μＬ（２７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００８（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート（３１．９ｍｇ、３１．６μｍｏｌ）およびＬ−システイン（７．６６ｍｇ、６３．２μｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２８．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１３．５ｍｇ、１１．６μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶解させ、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（６．７６ｍｇ、１１．６μｍｏｌ）（中間体Ｌ８８）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．０μＬ、２３μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン１１．１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝７．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン（９．４０ｍｇ、６．６５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（５．４４ｍｇ、３９．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（５．４４ｍｇ、３９．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（２３．４ｍｇ、７９．８μｍｏｌ）を反応混合物に加え、１０分間撹拌し、次に水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．６０ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０８
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（１２Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１２，１９−ジカルボキシ−５，１０，１５−トリオキソ−７，１７−ジチア−４，１１，１４−トリアザノナデカ−１−イル］−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１２．７ｍｇ、１４．５μｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン（３．８４ｍｇ、１４．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、室温で終夜撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．５μＬ、１４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）７．４０ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（７．５０ｍｇ、７．０５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶解させ、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（４．１１ｍｇ、純度８２％、７．０５μｍｏｌ）（中間体Ｌ８８）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．５μＬ、１４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（８Ｒ，１５Ｒ）−２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８，１５−ジカルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１０，２０−ジチア−７，１３，１６，２３−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−２６−イル］−Ｌ−アラニンアミド４．３０ｍｇ（４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝６．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（８Ｒ，１５Ｒ）−２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８，１５−ジカルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１０，２０−ジチア−７，１３，１６，２３−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−２６−イル］−Ｌ−アラニンアミド（４．００ｍｇ、３．０５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（２．４９ｍｇ、１８．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌し、それにエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（５．３４ｍｇ、１８．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．５０ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３０９
４−｛［（１１Ｒ，１７Ｒ）−１６−（３−アミノプロピル）−１７−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１８，１８−ジメチル−６，６−ジオキシド−２，１０，１５−トリオキソ−６λ６，１３−ジチア−３，９，１６−トリアザノナデカン−１１−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（５０．０ｍｇ、５７．３μｍｏｌ）（中間体Ｃ７７）およびトリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメート（１：１）（２７．５ｍｇ、６８．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ８１）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（２６．１ｍｇ、６８．７μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ、１７０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１２Ｒ）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６，２６−ジメチル−７，７−ジオキシド−３，１１，１６，２２−テトラオキソ−１−フェニル−２，２３−ジオキサ−７λ６，１４−ジチア−４，１０，１７，２１−テトラアザ−２６−シラヘプタコサン−１２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート５３．９ｍｇ（８１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５．１２ｍｇ、２２．８μｍｏｌ）をＤＣＭ ３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン（９．５μＬ、６８μｍｏｌ）およびトリエチルシラン（７３μＬ、４６０μｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ＤＣＭ ２．０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１２Ｒ）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６，２６−ジメチル−７，７−ジオキシド−３，１１，１６，２２−テトラオキソ−１−フェニル−２，２３−ジオキサ−７λ６，１４−ジチア−４，１０，１７，２１−テトラアザ−２６−シラヘプタコサン−１２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（５２．１ｍｇ、４５．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、水２．０ｍＬと混和した。溶媒を減圧下に留去した。アセトニトリルを残留物に加え、混合物を濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８−トリアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１：１）４３．４ｍｇ（８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初にトリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−２３−アミノ−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８−トリアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１：１）（２０．０ｍｇ、１７．８μｍｏｌ）および（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸（３．３２ｍｇ、２１．４μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（８．１４ｍｇ、２１．４μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．３μＬ、５４μｍｏｌ）を加えた。
反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７，２５−テトラオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８，２４−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１７．４ｍｇ（８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７，２５−テトラオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８，２４−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１５．９ｍｇ、１３．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（７３．２ｍｇ、２５０μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３１０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（８Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−８−イル］−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−アミド（１：１）
Figure 2018524321
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１００ｍｇ、１２０μｍｏｌ）（中間体Ｃ７０）および１−［（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（４４．１ｍｇ、１３２μｍｏｌ）を最初に、ＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン（４０μＬ、３６０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸（４２０μｍｏｌ）で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−システイン６９．４ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝９３３［Ｍ−Ｈ］−。
最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−システイン（２７．０ｍｇ、２８．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１１．４ｍｇ、５７．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ１）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５μＬ、８７μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２２．０ｍｇ、５７．７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛（１６Ｒ）−２１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）カルバモイル］−１４，２０−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラオキサ−１８−チア−１５，２１−ジアザテトラコサン−２４−イル｝カーバメート１３．７ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
２−（トリメチルシリル）エチル｛（１６Ｒ）−２１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）カルバモイル］−１４，２０−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラオキサ−１８−チア−１５，２１−ジアザテトラコサン−２４−イル｝カーバメート（１３．７ｍｇ、１２．３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（１０．１ｍｇ、７３．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（２１．６ｍｇ、７３．８μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを１０分間撹拌し、次に水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．３０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ３１１
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン−トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オン酸（１０．８ｍｇ、１８．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ９７）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．４μＬ、３１．２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７．１０ｍｇ、１８．７μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。次に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１２．９ｍｇ、１５．６μｍｏｌ）（中間体Ｃ７１）を加え、ＤＭＦ １．０ｍＬおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．７μＬ、１５．６μｍｏｌ）に溶かした。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン３．５ｍｇ（１８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１２７６［Ｍ−Ｈ］−。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン（３．５０ｍｇ、２．７４μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（６．２５ｍｇ、１６．４μｍｏｌ）を反応混合物に加えた。それを５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（４７μＬ、１６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１３３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１２
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（Ｌ−γ−グルタミルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、中間体Ｃ１０３から標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化することで、Ｚ保護基を除去した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とのカップリングにより、最後に塩化亜鉛を用いる脱保護および分取ＨＰＬＣによって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１３
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−オン酸５５．０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．６０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１６．９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ５０．０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ１０７）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を混合物に加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の１３％、純度８２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン１０．９ｍｇ（７．８ｍｍｏｌ、純度８２％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．８５ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛４．３ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ９．１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２．３ｍｇ（理論値の２６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１４
トリフルオロ酢酸／３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｓ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド
Figure 2018524321
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体１０６）５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．１４ｍＬ）中溶液に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６．８９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３３．１３ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）を、加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミドトリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｌ１）の溶液２７．２９ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４１ｍｇ（理論値の６８％、純度６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝９５９（Ｍ−Ｈ＋Ｎａ）−。
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザテトラデカ−１−イル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート４１．１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度６６％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（２．５４ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛２４．７ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ５３．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の３６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１５
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパノイル｝−Ｌ−システイン
Figure 2018524321
３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸（中間体Ｌ１００）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．５ｍＬ）中溶液に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１８．０２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３１．８２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドアセテート（１：１）（中間体Ｃ１０７）の溶液５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４９ｍｇ（理論値の２１％、純度３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパノイル｝−Ｌ−システイン４９．０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、純度３１％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．５ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛８．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １７．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３ｍｇ（理論値の２１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３１６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｓ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）アミノ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 2018524321
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体１０６）５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、純度６５％）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１６．８９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３３．１３ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）を、加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドアセテート（１：１）（中間体Ｌ７３）の溶液３７．２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ、純度７０％）を加え、混合物を室温で７分間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物５７ｍｇ（理論値の７７％、純度５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザオクタデカ−１−イル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート５６．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度５９％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（２．８ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛３６．０ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ７８．３ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１６ｍｇ（理論値の４４％、純度８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７（Ｍ＋Ｈ−ＡｃＯＨ）＋。
ＡＰＤＣまたはＡＤＣ前駆体（中間体シリーズＱ）の一般的合成方法
Ｆシリーズの上記中間体（Ｆ１からＦ３０５）は、図式１に従ってＡＰＤＣ前駆体Ｑに変換することができる。ＡＰＤＣ前駆体分子におけるレグマイン開裂性トリペプチドのＮ末端アミノ基の放出の場合、これは最終段階で、各種構造の置換されたアシル基またはアルキル基で修飾して、特性のプロファイルを改善することができる。
例示的方法について、ここで説明する。
Ｆ１９４およびＦ２９４以外の好適な中間体Ｆ１からＦ３０５またはそれの好適に保護された前駆体０．０３７ｍｍｏｌを、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、クロロホルム、トルエン、ＴＨＦ、メタノールまたはそれの混合物１から２０ｍＬ、好ましくは５から１０ｍＬに取り、０．０３９ｍｍｏｌのＮ末端修飾トリペプチド誘導体、例えば中間体Ｌ９２を加え、０．０４１ｍｍｏｌの標準的カップリング試薬、例えばＨＡＴＵ、ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴ、ＢＥＰなど、および０．１１ｍｍｏｌの標準的塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、４−メチルモルホリンなども加える。室温で５分間撹拌後、混合物をトリフルオロ酢酸２滴で酸性とし、濃縮する。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製する。適切な分画を減圧下に濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥する。
結合したトリペプチド誘導体の前記Ｎ末端修飾が保護基である場合、前駆体分子になお存在するあらゆる保護基と同様に、それはその後に、公知の方法によって除去することができ、例えば好ましくは水素化分解によるＺ保護基、酸加水分解によるＢｏｃ保護基、塩基加水分解によるＦｍｏｃ保護基、またはフッ化物によるもしくは塩化亜鉛を用いるＴｅｏｃ基である。
最後に、そうして放出されたアミノ基を、例えば、活性エステル、酸塩化物、イソシアネートなどのアミン反応性基により、または標準的カップリング試薬、例えばＨＡＴＵ、ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴ、ＢＥＰなど、および標準的塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、４−メチルモルホリンなどの存在下でのカルボン酸誘導体とのカップリングによってアシル化またはアルキル化して、特性のプロファイルを改善することができる。分子中にさらなる保護基がなお存在する場合、それは最後の段階で除去することができる。
図式１：
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）Ｒ２２−ＣＯＯＨ、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴまたはＲ２２−ＣＯＯＨ、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴまたはＲ２２−ＣＯＯＳｕ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
さらに、図式２および３による他の中間体を、レグマイン開裂性ＡＤＣ前駆体に変換することができる。
図式２：
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式３：
Figure 2018524321
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴまたはＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ−Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式１から３に示したベンジルオキシカルボニル基に代わるものとして、ペプチド化学で確立された他の保護基を用い、同様に公知である相当する方法によってそれらを結合させることが可能である。保護基戦略の選択を、分子に生じる他の構造要素との適合性に関連する当業者に公知の要件に応じて行う。分子中のさらなる保護基がなお存在する場合、それは最終段階で除去することができる。
それらの合成は、順序に関して並べ変えても良い。
さらに、リンカー構造Ｌ１からＬ２の文脈でのタンパク質反応性基は、特許請求の範囲内で変えることができる。
中間体Ｑ１
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ ３０ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ６ｍＬに取り、中間体Ｌ９２ １６ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １５．５ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．１１ｍｍｏｌを加えた。室温で５分間撹拌後、混合物をトリフルオロ酢酸２滴で酸性とし、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物２１．５ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ２
Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ ３０ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ６ｍＬに取り、中間体Ｌ９３ １４ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １５．５ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．１１２ｍｍｏｌを加えた。室温で５分間撹拌後、追加のＨＡＴＵ １．５ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．０１ｍｍｏｌを加え、混合物を室温でさらに１０分間撹拌した。次に、混合物をトリフルオロ酢酸２滴で酸性とし、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物１２．２ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３
Ｎ−（３−カルボキシプロパノイル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５ｍＬに取り、中間体Ｌ９４ ９．７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ８．５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．０５６ｍｏｌを加え、混合物を室温で５分間撹拌した。次に、混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物５．７ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛２．６ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４５分間撹拌した。次に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５．６ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、混合物をアセトニトリル／水９：１ ３ｍＬで希釈した。次に、トリフルオロ酢酸１０μＬを加え、混合物を室温で１０分間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物３．１ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（１１Ｓ，１５Ｒ）−１５−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−グリコロイル−１６，１６−ジメチル−６，６−ジオキシド−２，１０−ジオキソ−６λ６−チア−３，９，１４−トリアザヘプタデカン−１１−イル］−Ｌ−アスパルタミド（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２９６ ５ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、中間体Ｌ９２ ２．８ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）を加え、ＨＡＴＵ ２．３ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．０１７ｍｍｏｌも加えた。室温で１５分間撹拌後、混合物をトリフルオロ酢酸２滴で酸性とし、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物０．９３ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ５
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｃ１０１における混合物５５ｍｇをＤＭＦ ３３ｍＬに取り、中間体Ｌ９２ ２７．５ｍｇ（０．０６７ｍｍｏｌ）を加え、ＨＡＴＵ ２８ｍｇ（０．０７３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３２μＬも加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
最初に、そうして得られた粗生成物を、ＴＨＦ ４ｍＬに入れ、水２ｍＬおよび２Ｍ水酸化リチウム溶液０．３７５ｍＬを加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、１Ｎ塩酸で中和し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド１０．２ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０４（Ｍ＋Ｈ）＋。
次の段階で、室温で１時間にわたり標準水素圧下でメタノール中１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去し、そうしてＬ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド７．５ｍｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド３．７５ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよび１．２μＬ（０．００７ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．７２ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、減圧下に濃縮し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１．３ｍｇ（理論値の２９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ６
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
Ｆ５に記載のＬ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アスパルタミド中間体３．７５ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン２．２ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．２μＬ（０．００７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、減圧下に濃縮し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物１．９ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ７
Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（｛３−［（ブロモアセチル）アミノ］プロピル｝アミノ）−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｆ２８２ ４．１ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １ｍＬに取り、中間体Ｌ９３ １．７ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ２．２ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン０．６μＬを加えた。室温で６０分間撹拌した後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．２ｍｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４５および１０４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ８
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２０Ｒ）−２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２０−カルボキシ−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１９，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２５７）６．８０ｍｇ（６．３５μｍｏｌ）およびＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン（中間体Ｌ９２）２．７１ｍｇ（６．６３μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ２．６６ｍｇ（６．９８μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３．３μＬ（１９μｍｏｌ）を加えた。室温で４５分間撹拌後、混合物をトリフルオロ酢酸４μＬで酸性とし、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．２０ｍｇ（理論値の１４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ９
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ ５ｍｇ（０．００６２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、中間体Ｌ９５ ２．２ｍｇ（０．００６８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ４．７ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）および５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを加えた。室温で１時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物２ｍｇ（理論値の３２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１０
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ ５ｍｇ（０．００６２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、中間体Ｌ９６ ２．２ｍｇ（０．００６８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ５．９ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）および４当量の４−メチルモルホリンを加えた。室温で２時間撹拌後、混合物を減圧下に濃縮し。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物２．５ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１１
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｑ９と同様にして、中間体Ｆ１０４ ７ｍｇ（０．００８７ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１０３とカップリングさせた。これによって、標題化合物３．５ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１２
Ｎ−イソニコチノイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｑ９と同様にして、中間体Ｆ１０４ ８ｍｇ（０．００９２ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１０４とカップリングさせた。これによって、標題化合物６ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１３
Ｎ−｛［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｑ９と同様にして、中間体Ｆ１０４ ７ｍｇ（０．００８７ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１０５とカップリングさせた。これによって、標題化合物４．６ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１４
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−グルタミド
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体を、中間体Ｑ１と同様にして製造した。
中間体Ｑ１５
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−α−アスパラギン
Figure 2018524321
中間体Ｑ１と同様にして、 中間体Ｆ１０４ １０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１０６とカップリングさせた。次に、塩化亜鉛によってトリメチルシリルエチルエステルを開裂させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１と同様にして、次の中間体Ｑ１６からＱ２２を、相当する中間体前駆体を用いて製造した。
中間体Ｑ１６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１７
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ１８
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｃ１１１から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ１０７とのカップリング、次にトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ１９
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−グリシル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ２０
Ｎ−（３８−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−イル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２０Ｒ）−２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２０−カルボキシ−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１９，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
０℃で、中間体Ｌ１０２ ４７．２ｍｇ（０．０５５９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ０．５０ｍＬに取り、ＨＯＡｔ ７．２ｍｇ（０．０５３ｍｍｏｌ）を加え、ＨＡＴＵ ２０．２ｍｇ（０．０５３２ｍｍｏｌ）および（０．４２５ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７４．１μＬも加えた。０℃で５分間撹拌後、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の中間体Ｆ２５７ ５７．０ｍｇ（０．０５３２ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２時間撹拌後、水（１．０ｍＬ）およびＡＣＮ（１．５ｍＬ）を加えた。混合物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：２→２：１）によって２回精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物９．０ｍｇ（理論値の９．５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝５，４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７８３．８６４３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ２１
Ｎ−（３８−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−イル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
０℃で、中間体Ｆ１０４ ５７．５ｍｇ（０．０７１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ０．８０ｍＬに取り、中間体Ｌ１０２ ６１．２ｍｇ（０．０７２７ｍｍｏｌ）を加え、ＨＡＴＵ ２７．６ｍｇ（０．０７２７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７４．５μＬ（０．４２８ｍｍｏｌ）も加えた。０℃で３０分間撹拌後、水（１．０ｍＬ）およびＡＣＮ（１．５ｍＬ）を加えた。混合物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝４５％→８５％）によって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物３９ｍｇ（理論値の３６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝５，４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１５１９．７５９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ２２
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（Ｌ−γ−グルタミルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｃ１０３から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ９２とのカップリングによって、標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下での室温で３０分間にわたるエタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去し、次に、脱保護中間体を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンと反応させた。最終段階で、塩化亜鉛によって脱保護を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２３
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｍ９から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ９２とのカップリングによって標題化合物を製造した。次の段階で、室温で標準水素圧下での３０分間にわたるエタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去し、次に脱保護中間体を、中間体Ｑ６で記載の方法に従い、１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２４
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
化合物Ｍ９から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ９２とのカップリングによって標題化合物を製造した。次の段階で、室温で標準水素圧下での３０分間にわたるエタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去し、次に脱保護中間体を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとの反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２５
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−［（３−｛［（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルボキシペンチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
化合物Ｃ１０８から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ９２とのカップリングによって標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下での室温で１時間にわたるＤＣＭ−メタノール１：１中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去し、次に１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンの存在下にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとの反応によって、最後に塩化亜鉛による脱保護によって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２６
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−［（３−｛［（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルボキシペンチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｑ２５と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２７
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｃ１０９から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ１０７とのカップリング、次に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ２８
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｃ１１０から出発して、最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ９２とのカップリングによって標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下での室温で１時間にわたるＤＣＭ−メタノール１：１中１０％パラジウム／活性炭での水素化によって全ての保護基を除去し、次に脱保護中間体をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとの反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１１６１［Ｍ−Ｈ］−。
中間体Ｑ２９
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
ＤＭＦ ９ｍＬ中の中間体Ｃ１１０ ４０ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３４μＬの存在下に、中間体Ｌ９２ １９．６ｍｇ（４７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。次に、標準水素圧下での室温で１時間にわたるメタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によって全ての保護基を除去し、脱保護中間体をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとの反応によって変換して標題化合物とし、それ分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３０
Ｎ−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中でのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンの４−ニトロベンジルＬ−アスパラギネート臭化水素酸塩（１：１）とのカップリング、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸によるアミノ基の脱保護によって、トリフルオロ酢酸／４−ニトロベンジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギネート（１：１）を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中でＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンとカップリングさせた。次に、１０％パラジウム／活性炭でＤＣＭ−メタノール１：１中にて水素化することで、ｐ−ニトロベンジルエステルを除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
そうして得られた中間体を、ＤＭＦ中でＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ１１０とカップリングさせた。次に、５０℃で１時間にわたりトリフルオロエタノール中４当量の塩化亜鉛とともに撹拌することでＢｏｃ保護基を除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体４４ｍｇ（３２μｍｏｌ）を、メタノール２０ｍＬ中、文献法（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９３， ５８， ２１９６）によって予め製造した６−オキソヘキサン酸２５．４ｍｇ（１９５μｍｏｌ）と合わせ、酢酸７．８μＬおよびボラン−ピリジン錯体２９ｍｇ（３１３μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。（６Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ，１９Ｓ，２２Ｓ，２５Ｓ）−１６−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１３−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−１９，２２，２５，２６−テトラメチル−３，８，１２，１５，１８，２１，２４−ヘプタオキソ−１−フェニル−２−オキサ−７，１１，１４，１７，２０，２３，２６−ヘプタアザドトリアコンタン−３２−酸２５ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
この中間体２４．５ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ６ｍＬに溶かし、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン３４ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬ、および少量ずつＨＡＴＵ合計５０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌後、反応溶液をＴＦＡでｐＨ３から４に調節し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。保護中間体２３ｍｇ（８７％）を得て、それをエタノール１０ｍＬに取った。１０％パラジウム／活性炭を加えた後、ベンジルエステル基を標準水素圧下で除去し、触媒を濾去した後、残った溶液を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水９：１から凍結乾燥して、標題化合物２０ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−（｛２−［（Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル）アミノ］エチル｝アミノ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド（１：１）
Figure 2018524321
ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で中間体Ｌ１０３を中間体Ｃ１１２とＨＡＴＵカップリングさせ、次に３０分間にわたって６当量の塩化亜鉛とともにトリフルオロエタノール中で５０℃にて撹拌することでＢｏｃ保護基を除去することによって、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３２
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−［（３−｛［（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルボキシペンチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ＤＭＦ中にてＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｌ９２と中間体Ｃ１０８をカップリングさせた。次の段階で、水素標準圧下に室温で１時間にわたりＤＣＭ／メタノール１：１中１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を除去した。次に、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０９と反応させ、次に５０℃で９０分間にわたりトリフルオロエタノール中にて１２当量の塩化亜鉛と撹拌することで脱保護することによって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１１３７（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｑ３３
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（Ｌ−γ−グルタミルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｃ１０３を中間体Ｌ１１０とＨＡＴＵカップリングさせ、次に６時間にわたり１０当量の塩化亜鉛とともにトリフルオロエタノール中５０℃で撹拌することで完全に脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３４
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中、中間体Ｃ１１０を中間体Ｌ１１０とＨＡＴＵカップリングさせることで標題化合物の合成を開始した。次の段階で、水素標準圧下に室温で１時間にわたりＤＣＭ／メタノール１：１中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することでベンジルエステル保護基を除去した。最後の段階で、トリフルオロエタノール中５０℃で８当量の塩化亜鉛とともに６時間撹拌することでＴｅｏｃ保護基を除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３５
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｑ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を、中間体Ｌ１１１ １０ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、標題化合物４ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３６
Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｑ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を、中間体Ｌ１１２ ８ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、標題化合物５．８ｍｇ（理論値の２８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３７
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブチル｝アミノ）−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
最初に、中間体Ｃ１１４ ２０ｍｇ（３１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬ中にＮ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｌ１０４）１１．６ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）とともに入れた。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１１μＬおよびＨＡＴＵ ２１ｍｇ（５５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。次に、５０℃でトリフルオロエタノール中６当量の塩化亜鉛とともに２時間撹拌することで、ｔｅｒｔ−ブチルエステル基を除去した。６当量のＥＤＴＡを加えた後、分取ＨＰＬＣによって精製を行った。最終段階で、得られた中間体をＤＭＦに取り、１５当量の１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオンを加え、５当量のＨＡＴＵおよび５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に６０分間撹拌することで、標題化合物への変換を行った。標題化合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３８
Ｎ−メチル−Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｑ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１１３ １２．５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、標題化合物４ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ３９
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（メチルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
化合物Ｃ１１５から出発して、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０７とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ４０
Ｎ−｛［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
中間体Ｑ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１１４ １２．５ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ４１
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（１６Ｓ）−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６，１８−ジカルボキシ−５，１０，１４−トリオキソ−７−チア−４，１１，１５−トリアザオクタデカ−１−イル］−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸（１７４ｍｇ、純度９４％、２３４μｍｏｌ）（中間体Ｃ６９）およびトリフルオロ酢酸／ジベンジルβ−アラニル−Ｌ−グルタメート（１：１）（１４４ｍｇ、２８１μｍｏｌ）（中間体Ｌ１１５）をＤＭＦ ４．０ｍＬに入れた。ＨＡＴＵ（１０７ｍｇ、２８１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２０μＬ、７００μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを室温で１０分間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ジベンジルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−β−アラニル−Ｌ−グルタメート２２９ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ジベンジルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−β−アラニル−Ｌ−グルタメート（２２６ｍｇ、２０９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１０ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（１７１ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを５０℃で１時間撹拌した。さらに各６当量のＺｎＣｌ２を２回加え、混合物を各回５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（１．１０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を混合物に加え、短時間撹拌した。反応混合物をアセトニトリルに取り、シリンジフィルターで濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／ジベンジルＮ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−β−アラニル−Ｌ−グルタメート（１：１）１８２ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、トリフルオロ酢酸／ジベンジルＮ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−β−アラニル−Ｌ−グルタメート（１：１）（５５．０ｍｇ、５２．３μｍｏｌ）およびＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン（２６．０ｍｇ、６２．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ９２）をＤＭＦ ２．５ｍＬに入れた。反応混合物に、ＨＡＴＵ（２３．９ｍｇ、６２．７μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２７μＬ、１６０μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）１ｍＬを混合物に加え、それを分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物ジベンジル（２Ｓ）−２−｛［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）−１１−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−５，８−ジメチル−３，６，９，１２，１８，２３，２７−ヘプタオキソ−１−フェニル−２−オキサ−２０−チア−４，７，１０，１３，１７，２４−ヘキサアザヘプタコサン−２７−イル］アミノ｝ペンタンジオエート５４．６ｍｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３２８［Ｍ＋Ｈ］＋。
ジベンジル（２Ｓ）−２−｛［（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）−１１−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−５，８−ジメチル−３，６，９，１２，１８，２３，２７−ヘプタオキソ−１−フェニル−２−オキサ−２０−チア−４，７，１０，１３，１７，２４−ヘキサアザヘプタコサン−２７−イル］アミノ｝ペンタンジオエート（５３．３ｍｇ、４０．１μｍｏｌ）を酢酸エチル３．０ｍＬおよびエタノール３．０ｍＬに溶かし、１０％パラジウム／活性炭（５．３７ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温および標準圧で終夜水素化し、濾紙によって濾過した。フィルターケーキを酢酸エチルおよびエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、化合物Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（１６Ｓ）−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６，１８−ジカルボキシ−５，１０，１４−トリオキソ−７−チア−４，１１，１５−トリアザオクタデカ−１−イル］−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）５．６ｍｇ（理論値の１１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（１６Ｓ）−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６，１８−ジカルボキシ−５，１０，１４−トリオキソ−７−チア−４，１１，１５−トリアザオクタデカ−１−イル］−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）（５．４０ｍｇ、４．３０μｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．４６ｍｇ、４．７３μｍｏｌ）をＤＭＦ ０．４９ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．２μＬ、１３μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを室温で４時間３０分撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）０．５ｍＬを混合物に加え、それを、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物４３．１ｍｇ４．１０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ４２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド（１：１）
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド（１：１）（１０．０ｍｇ、１０．９μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１６）およびＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン（２．４２ｍｇ、１０．９μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れた。ＨＡＴＵ（４．９５ｍｇ、１３．０μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．５μＬ、５４μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを室温で１０分間撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）１．０ｍＬを混合物に加え、それを分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物５．６ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｑ４３
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−α−アスパラギル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ１１６ １０ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタン酸３．９ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ６．２ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６μＬを加えた。室温で１５分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。保護中間体８．２ｍｇ（理論値の６８％）を得て、それをトリフルオロエタノール４ｍＬ中５０℃で塩化亜鉛６ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）によって脱保護した。ＥＤＴＡ １３ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）を加え、次にＨＰＬＣ精製した後、標題化合物３ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｑ４４
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−α−アスパラギル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ１１６ １０ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに取り、（２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝プロパノイル］アミノ｝−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタン酸５．３ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ６．２ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６μＬを加えた。室温で１５分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。保護中間体８ｍｇ（理論値の５７％）を得て、それをトリフルオロエタノール２ｍＬ中５０℃で塩化亜鉛５ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）で脱保護した。ＥＤＴＡ １１ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）を加え、次にＨＰＬＣ精製したた後、標題化合物３．５ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｂ：抗体／薬物複合体（ＡＤＣ）の製造
Ｂ−１．抗体形成の一般的方法
完全ヒト抗体ファージライブラリー（Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８）を用いて、固定化標的としてヒトおよびマウスＴＷＥＡＫＲの二量体Ｆｃ融合細胞外ドメインを用いるタンパク質パニング（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：１１０５−１６）によって、ＴＷＥＡＫＲ特異的ヒトモノクローナル抗体を単離した。Ｆａｂファージを確認し、相当する抗体をヒトＩｇＧ１フォーマットに再フォーマットした。脱グリコシル化抗体ＴＰＰ−２６５８を、ＴＰＰ−２０９０（免疫グロブリン類のＫａｂａｔナンバリングシステム）の重鎖に突然変異Ｎ２９７Ａを導入することで形成した。そうして得られた抗体を、本明細書に記載の作業例に用いた。さらに、ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体は当業者に公知であり、例えばＷＯ２００９／０２０９３３（Ａ２）またはＷＯ２００９１４０１７７（Ａ２）を参照する。
市販の抗体セツキシマブ（商標名：Ｅｒｂｉｔｕｘ）、トラスツズマブ（商標名：ハーセプチン；ＩＮＮ７６３７、ＣＡＳ番号：ＲＮ：１８０２８８−６９−１）およびニモツズマブ（商標名：ＣＩＭＡｈｅｒ）を、本明細書に記載の作業例に用いた。
トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に相当）については、配列番号２４４を有する重鎖を用いた。軽鎖は、トラスツズマブからの軽鎖と同一である。
トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に相当）については、配列番号２４５を有する重鎖を用いた。軽鎖は、トラスツズマブからの軽鎖と同一である。
Ｂ−２．哺乳動物細胞で抗体を発現する一般的方法
Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １２ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉｃｈｅａｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ, ２００７によって記載の方法に従って、抗体、例えばＴＰＰ−２６５８、ＴＰＰ−７５１０またはＴＰＰ−７５１１を、一過性哺乳動物細胞培養で製造した。
Ｂ−３．細胞上清からの抗体の一般的精製方法
抗体、例えばＴＰＰ−２６５８、ＴＰＰ−７５１０またはＴＰＰ−７５１１を、細胞培養上清から得た。細胞を遠心することで、細胞上清を清澄化した。次に、細胞上清を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムでのアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。このために、カラムをＤＰＢＳ ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ）中で平衡状態とし、細胞上清を加え、カラムを約１０カラム体積のＤＰＢＳ ｐＨ７．４＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで洗浄した。抗体を５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．５＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで溶離し、次にＤＰＢＳ ｐＨ７．４でのＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）におけるゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。
市販の抗体を、標準的なクロマトグラフィー法（タンパク質Ａクロマトグラフィー、分取ゲル濾過クロマトグラフィー（ＳＥＣ−サイズ排除クロマトグラフィー））により市販品から精製した。
Ｂ−４．システイン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応で用いた。
実施例ａ系：セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｅ系：トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２ ＡＫ）
実施例ｉ系：ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｋ系：ＴＰＰ−２６５８（抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ）
カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。
ＰＢＳ緩衝液に溶かした２から５当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬから１５ｍｇ／ｍＬの範囲での適切な抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加え、混合物を室温で１時間撹拌した。これに関しては、使用した個々の抗体の溶液は、作業例で記載の濃度で用いることができるか、指定の出発濃度の約１／２までＰＢＳ緩衝液で希釈して、好ましい濃度範囲とすることもできる。次に、所期の負荷量に応じて、２から１２当量、好ましくは約５から１０当量のカップリング対象のマレインイミド前駆体化合物またはハライド前駆体化合物をＤＭＳＯ中溶液として加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えるものであってはならない。反応液を、マレインイミド前駆体の場合には室温で６０から２４０分間、ハライド前駆体の場合には室温で８から２４時間撹拌し、次にＰＢＳ平衡化ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、還元およびその後のカップリングに用いた。そうして、ＰＤ１０カラムでの精製により、各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要な場合、低分子量成分をより良好に除去するため、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に、超遠心による濃縮を繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５から１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
リンカーに応じて、実施例で示されているＡＤＣは、多少、抗体に結合した加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態で存在していても良い。
特に、リンカー下位構造：
Figure 2018524321
を介して抗体のチオール基に結合しているＫＳＰ−Ｉ−ＡＤを、開鎖コハク酸アミドを介して結合したＡＤＣを介して、図式２６に従って、カップリング後の再緩衝化およびｐＨ８での約２０から２４時間の撹拌によって、標的指向的に製造することもできる。
＃１は抗体への硫黄架橋を表し、＃２は修飾ＫＳＰ阻害剤への結合点を表す。
リンカーが加水分解された開鎖コハク酸アミドを介して抗体に結合しているそのようなＡＤＣは、下記のような例示的手順により、標的指向的に製造することもできる。
小規模カップリング：
濃度範囲１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬから１５ｍｇ／ｍＬの適切な抗体２から５ｍｇのＰＢＳ緩衝液中溶液に、ＰＢＳ緩衝液に溶かした２から５当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を加え、混合物を室温で３０分から１時間撹拌した。これに関しては、各場合で使用される抗体の溶液は、作業例で指定の濃度で用いることができるか、指定の出発濃度の約１／２までＰＢＳ緩衝液でそれを希釈して、好ましい濃度範囲に到達させることができる。次に、所望の負荷量に従って、２から１２当量、好ましくは約５から１０当量のカップリングされるマレインイミド前駆体化合物を、ＤＭＳＯ中溶液として加える。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えてはならない。混合物を室温で６０から２４０分間撹拌し、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積３から７ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、この溶液を、ＰＢＳ緩衝液でｐＨ７．２の平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。
中規模カップリング：
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．３４４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（１００μＬ）中溶液を、ＰＢＳ緩衝液５ｍＬ中の対象抗体６０ｍｇ（濃度約１２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ６００μＬに溶かした０．００３ｍｍｏｌのマレインイミド前駆体化合物を加えた。室温でさらに１．５時間から２時間撹拌した後、反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１０７５μＬで希釈した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡化しておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総容量１４ｍＬとした。この溶液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。必要な場合、その溶液を再緩衝化してｐＨ７．２とした。そのＡＤＣ溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、適宜に再度濃縮して濃度約１０ｍｇ／ｍＬとした。
作業例での他の加水分解感受性であり得る抗体へのチアニルコハク酸イミド架橋は、次のリンカー下位構造を含み、＃１は抗体へのチオエーテル連結を表し、＃１は修飾ＫＳＰ阻害剤への結合点を表す。
Figure 2018524321
これらのリンカー下位構造は、抗体への連結ユニットを表し、（さらなるリンカー組成物に加えて）腫瘍細胞で生成される代謝物の構造およびプロファイルに対して大きい効果を有する。
示された構造式において、ＡＫ１は次のものを意味することができる。
実施例ａ系：セツキシマブ（部分還元）−Ｓ§１
実施例ｅ系：トラスツズマブ（部分還元）−Ｓ§１
実施例ｉ系：ニモツズマブ（部分還元）−Ｓ§１
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（部分還元）−Ｓ§１。
式中、
§１は、コハク酸イミド基へのまたはいずれかの異性体の加水分解された開鎖コハク酸アミドまたはそれから生じるアルキレン基への連結を表し、
Ｓは、部分還元抗体のシステイン残基の硫黄原子を表す。
Ｂ−５．リジン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応に用いた。
実施例ａ系：セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｅ系：トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２ ＡＫ）
実施例ｉ系：ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｋ系：ＴＰＰ−２６５８（抗ＴＷＥＡＫＲ 抗体）。
カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。
２から８当量のカップリング対象の前駆体化合物を、ＤＭＳＯ中溶液として、所期の負荷量に応じて１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬ濃度範囲の、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬの対象抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加えた。室温で３０分から６時間撹拌後、ＤＭＳＯ中の同量の前駆体化合物を再度加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えてはならない。室温でさらに３０分から６時間撹拌後、反応をＰＢＳで平衡化したＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、カップリングに用いた。従って、ＰＤ１０カラムでの精製によって各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要であれば、低分子量成分の除去をより良好に行うため、限外濾過による濃縮を、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５から１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。
作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
示した構造式において、ＡＫ２は次の意味：
実施例ａ系：セツキシマブ−ＮＨ§２
実施例ｅ系：トラスツズマブ−ＮＨ§２
実施例ｉ系：ニモツズマブ−ＮＨ§２
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８−ＮＨ−§２
を有し、
式中、
§２は、カルボニル基への連結を表し、
ＮＨは、抗体のリジン残留物の側鎖アミノ基を表す。
Ｂ−５ａ．細菌トランスグルタミナーゼによる一般的ＡＤＣ合成方法
実施例ｔ系でのカップリング反応において、下記の抗体を用いた（下記の抗体−ＨＣ−Ｎ２９７Ｚの名称は、両方の重鎖でアミノ酸Ｚに代わってアミノ酸Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）となっている抗体を意味し、ＴＰＰ−ＸＸＸＸ−ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑの名称は、アミノ酸Ｎに代えてアミノ酸Ｑ２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）となっており、両方の重鎖でアミノ酸Ｑに代えてアミノ酸Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）となっているＴＰＰ−ＸＸＸＸを有する抗体を意味する。元の抗体の抗体名は、その名称（例えばトラスツズマブ）として、またはＴＰＰ−ＸＸＸＸ（ＴＰＰ名ＸＸＸＸを有する抗体）として報告することができる。）
ＡＫ３ａ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）
ＡＫ３ｂ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）
ＡＫ３ｃ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−８２２５（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）
ＡＫ３ｄ：ＴＰＰ−７５１０（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）
ＡＫ３ｅ：ＴＰＰ−７５１１（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）。
最大ＤＡＲ２を得るための一般的方法：
相当する脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）抗体変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ａ、またはＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）５ｍｇのＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中溶液（濃度約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、好適な担毒体リンカー前駆体の溶液（例えば中間体Ｑ３１からＱ３４；１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）２０μＬ（６当量）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬを加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して総量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳ平衡ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によってＡＤＣ容量を濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１０００．００６２５μｍｏｌを、その溶液に加えた。ＡＤＣ溶液の作業例で言及した個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
最大ＤＡＲ４を得るための一般的方法：
相当する脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）抗体変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）５ｍｇのＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中溶液（濃度約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、好適な担毒体リンカー前駆体の溶液（例えば中間体Ｑ３１からＱ３４；１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）１６から２０当量を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬ（１０Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して総量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳ平衡ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によってＡＤＣ容量を濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１０００．１μｍｏｌを、その溶液に加えた。ＡＤＣ溶液の作業例で言及した個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
最大ＤＡＲ２を達成するための、より大きい規模でのトランスグルタミナーゼ介在カップリングの一般方法：
特定の抗体の脱グリコシル化変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ａ、ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）３０ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（濃度約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、６当量の適切な担毒体リンカー前駆体の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）２００μＬ（７．５Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。反応混合物を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、小分子およびトランスグルタミナーゼをＡＤＣから分離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮して、最終濃度５から２５ｍｇ／ｍＬとした。次に、その溶液を無菌濾過した。
作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々の濃度を求めた。チャプターＢ７に記載の方法によって、負荷量を求めた。作業例で示した方法に従って、ＡＤＣバッチの特性を決定した。
最大ＤＡＲ４を達成するための、より大きい規模でのトランスグルタミナーゼ介在カップリングの一般方法：
特定の抗体の脱グリコシル化変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）３０ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（濃度約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、１６から２４当量の適切な担毒体リンカー前駆体の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）２４００μＬ（６０Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。反応混合物を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、小分子およびトランスグルタミナーゼをＡＤＣから分離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮して、最終濃度５から２５ｍｇ／ｍＬとした。次に、その溶液を無菌濾過した。
作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々の濃度を求めた。チャプターＢ７に記載の方法によって、負荷量を求めた。作業例で示した方法に従って、ＡＤＣバッチの特性を決定した。
実施例ｔ系について示した構造式において、ＡＫ３は各場合で下記の意味：
ＡＫ３ａ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ−２６５８）（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）−ＣＯ−§２
ＡＫ３ｂ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ−５４４２）（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）−ＣＯ−§２
ＡＫ３ｃ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ−８２２５）（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）−ＣＯ−§２
ＡＫ３ｄ：ＴＰＰ−７５１０（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）−ＣＯ−§２
ＡＫ３ｅ：ＴＰＰ−７５１１（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）−ＣＯ−§２
を有し、
§２は担毒体リンカー前駆体のアミノ基への連結を意味し、
ＣＯは抗体のグルタミン残基の側鎖カルボニル基を表す。
Ｂ−６ａ．閉鎖コハク酸イミド−システイン付加物の一般的製造方法
例示的実施形態において、１０μｍｏｌの上記マレインイミド前駆体化合物をＤＭＦ ３から５ｍＬに取り、Ｌ−システイン２．１ｍｇ（２０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間から２４時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。
Ｂ−６ａａ．異性体開鎖コハク酸アミド−システイン付加物の一般的製造方法：
例示的実施形態において、上記マレインイミド前駆体化合物６８μｍｏｌを、ＤＭＦ １５ｍＬに取り、Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン３６ｍｇ（１３６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約２０時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、次に、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。次に、反応液を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、理論値の約５０％の位置異性体保護中間体を無色泡状物として得た。
最後の段階で、０．０２３ｍｍｏｌのこれらの位置異性体加水分解生成物を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。次に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、加水分解開鎖スルファニルコハク酸アミドを位置異性体混合物として得た。
本発明による複合体のさらなる精製および特性決定
反応後、場合により、反応混合物を、例えば限外濾過によって濃縮し、脱塩し、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５カラムを用いるクロマトグラフィーによって精製した。例えば、ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で、溶離を行った。次に、溶液を無菌濾過し、冷凍した。あるいは、複合体を凍結乾燥することができる。
Ｂ−７．抗体、担毒体負荷量および開鎖システイン付加物の割合の測定
脱グリコシル化および／または変性後の分子量測定に加えてタンパク質同定のため、トリプシン消化を行い、それは、変性、還元および誘導体化後に、トリプシンペプチドを介してタンパク質のアイデンティティーを確認するものである。
作業例に記載の複合体の得られたＰＢＳ緩衝液溶液の担毒体負荷量を、下記のように求めた。
リジン連結ＡＤＣの担毒体負荷量の測定を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。ここで、抗体複合体を最初に、ＰＮＧａｓｅＦで脱グリコシル化し、サンプルを酸性とし、ＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルでの全てのスペクトラムを加え、異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。次に、異なる種のシグナル積分後に、ＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。
還元および変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって、システイン連結複合体の担毒体負荷量を求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。
ＨＰＬＣ分析を、２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ＨＰＬＣシステムで行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ−Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２−３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、次の勾配：０分、２５％Ｂ；３分、２５％Ｂ；２８分、５０％Ｂで流量１ｍＬ／分で用いた。移動相Ａは、０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水からなり、移動相Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。
非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）および重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出されたピークの割り当てを行った。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個の担毒体（Ｌ１）を有する軽鎖および１個、２個および３個の担毒体（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）を有する重鎖に割り当てた。
担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量およびＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から計算したが、ＬＣ負荷量は全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は全ＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算される。個々の場合で、いくつかのピークの共溶出のために、正確に担毒体負荷を決定することはできない可能性がある。
軽鎖および重鎖をＨＰＬＣによって十分に分離できなかった場合、システイン連結複合体の担毒体負荷量の測定は、軽鎖および重鎖での個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。
グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いるオンライン脱塩後に質量分析によって分析した。
ＤＡＲ測定のため、全てのスペクトラムを、ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルに加え、軽鎖および重鎖での異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量およびＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から計算したが、ＬＣ負荷量は全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は全ＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算される。
開鎖システイン付加物の割合を求めるため、全ての単一複合体化軽鎖および重鎖変異体の閉鎖：開鎖システイン付加物（分子量Δ１８ダルトン）の分子量面積比を求めた。全ての変異体の平均によって、開鎖システイン付加物の割合を得た。
グルタミン連結複合体の担毒体負荷量を、還元および変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオトレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。
２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ１２６０ＨＰＬＣシステムで、ＨＰＬＣ分析を行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ−Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２−３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、流量１ｍＬ／分で、次の勾配：０分、３１％Ｂ；１分、３１％Ｂ；１４分、３８％Ｂ、１６分、９５％Ｂによって用いた。移動相Ａは０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液からなり、移動相Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。
非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）および重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出ピークを割り当てた。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個の担毒体を有する軽鎖（Ｌ１）および１個および２個の担毒体を有する重鎖（Ｈ１、Ｈ２）に割り当てた。
担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量およびＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から計算したが、ＬＣ負荷量は全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は全ＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算される。
あるいは、グルタミン連結ＡＤＣの担毒体負荷量の測定を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。ここで、抗体複合体を最初にＰＮＧａｓｅＦで脱グリコシル化し、サンプルを酸性とし、ＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ （Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（総イオンクロマトグラフィー）でのシグナルにおける全てのスペクトラムを加え、各種複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔ逆重畳積分に基づいて計算した。次に、各種複合体種のシグナル積分後に、ＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。
Ｂ−８．ＡＤＣ類の抗原結合のチェック
バインダーの標的分子への結合能力を、カップリングが起こった後に調べた。当業者であれば、この目的に用いられる多種多様の方法については熟知しており、例えば、複合体のアフィニティは、ＥＬＩＳＡ技術または表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標名）測定）を用いて調べることができる。複合体濃度は、例えばタンパク質による抗体複合体についての一般的な方法を用いて当業者が測定することができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．； Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００３；２１：７７８−７８４およびＰｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０２：６１６−６２３も参照）。
代謝物実施形態
実施例Ｍ１
Ｓ−［１−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１０４ １．８ｍｇ（２μｍｏｌ）をＤＭＦ １ｍＬに取り、Ｌ−システイン２．７ｍｇ（２２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。標題化合物０．６ｍｇ（理論値の２６％）が無色泡状物として残った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。
Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン４０６ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １０ｍＬに溶かし、無水マレイン酸１５７．５ｍｇ（１．６０６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１時間撹拌した。中間体Ｃ６６ ７．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をこの溶液１３０μＬに加え、反応液を室温で５分間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、保護中間体１０ｍｇ（８９％）を得たが、ＨＰＬＣによってもＬＣ−ＭＳによっても位置異性体を分離することはできなかった。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後の段階で、この中間体１０ｍｇを２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物８．３ｍｇ（理論値の９９％）を８７：１３の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３分および２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ−ＮＭＲ主位置異性体：（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝８．７（ｍ、１Ｈ）、８．５（ｍ、２Ｈ）、８．１（ｍ、１Ｈ）、７．６（ｍ、１Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）７．４−７．１５（ｍ、６Ｈ）、６．９−７．０（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．６１（ｓ、１Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．２６および４．０６（２ｄ、２Ｈ）、３．５−３．８（ｍ、５Ｈ）、３．０−３．４（ｍ、５Ｈ）、２．７５−３．０（ｍ、３Ｈ）、２．５８および２．５７（ｄｄ、１Ｈ）、０．７７および１，５（２ｍ、２Ｈ）、０．８１（ｓ、９Ｈ）。
別法として、位置異性体標題化合物を次のように製造した。
このために、最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。
中間体Ｆ１０４ ５５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン３６ｍｇ（０．１３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。次に、反応液を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体３７ｍｇ（理論値の５０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．３３分および３．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体２５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１８．５ｍｇ（理論値の８５％）を２１：７９の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３７分および３．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ３
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。
中間体Ｆ１９３ １１ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。その混合物を濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。追加の２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、反応液を室温で終夜撹拌した。混合物を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体４．１ｍｇ（理論値の３８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体４．１ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛３ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸６ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物５ｍｇ（定量的）を２０：８０の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３６分および２．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ４
Ｓ−（１−｛２−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エトキシ］エチル｝−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２４８ ３ｍｇ（４μｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、Ｌ−システイン０．９ｍｇ（８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮して、アセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥後に、標題化合物１．１ｍｇ（理論値の３２％）を白色固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ５
（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−１７−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−４−グリコロイル−２，２−ジメチル−８，１６−ジオキソ−１２−オキサ−４，９，１５−トリアザノナデカン−１９−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−１８−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−４−グリコロイル−２，２−ジメチル−８，１６−ジオキソ−１２−オキサ−４，９，１５−トリアザノナデカン−１９−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２４８の保護中間体８ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン５．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌し、超音波浴で２時間処理した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１５μＬを加え、反応液を室温で１５分間撹拌した。反応液を１Ｍ塩酸でｐＨ約３に調節し、塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで希釈し、酢酸エチル２０ｍＬで２回抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体８．４ｍｇ（２段階で理論値の７８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分および３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体８ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛９．８ｍｇ（０．０７２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で１．５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４ｍｇ（理論値の５９％）を３１：６７の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分および０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ６
２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−（｛（１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝アミノ）−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および
３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−（｛（１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝アミノ）−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
中間体Ｆ２１３ １８ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン１１．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２１．２ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４ｍＬを加え、反応液を室温で３時間撹拌した。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０２ｍＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。酢酸７．２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）を用いて反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１３ｍｇ（２段階で５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で７時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１０．３ｍｇ（８１．４％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ７
Ｓ−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｆ１１９ ６ｍｇ（８μｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、Ｌ−システイン１．８ｍｇ（１５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌し、室温で３日間経過させた。反応を減圧下に濃縮し、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ８
（３Ｒ）−６−｛（１１Ｓ，１５Ｒ）−１１−アミノ−１５−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１４−グリコロイル−１６，１６−ジメチル−２，５，１０−トリオキソ−３，６，９，１４−テトラアザヘプタデカ−１−イル｝−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
実施例１３５からの化合物４ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／水４ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム水溶液４８μＬを加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、アセトニトリル／水から凍結乾燥することで、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ９
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド
Figure 2018524321
最初に（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）１５０．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ ２９．２ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１２５．６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール９８．９ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール１００：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１８８．６ｍｇ（７４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１７１．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン７３．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド９４．９ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１０ｇＳＮＡＰ、流量１２ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：３）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１５９．０ｍｇ（７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１４７．２ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を最初に、エタノール４．０ｍＬに入れ、メタンアミン（４０％水溶液）３５６．２ｍｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をトルエンで３回共蒸留した。残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１０：１）によってクロマトグラフィー精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７．４ｍｇ（６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１０
（２Ｒ，２８Ｒ）−２８−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２５−（カルボキシメチル）−４，２０，２４−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２６−チア−３，１９，２３−トリアザノナコサン−１，２９−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および
（１Ｒ，２８Ｒ，３４Ｒ）−１−アミノ−３３−（３−アミノプロピル）−３４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３５，３５−ジメチル−６，１０，２６，３２−テトラオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−３，３０−ジチア−７，１１，２７，３３−テトラアザヘキサトリアコンタン−１，４，２８−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
Ｒ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２０９）２０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン９．７８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（４７．７ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０８ｍＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。酢酸９．２６ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を用いて、反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１５．３ｍｇ（２段階で２９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１２．２６分および１２．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１５．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１１．９ｍｇ（７９．５％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１１
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１５．０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛７．４ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１５．８ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１１．１ｍｇ（７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１２
４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．５ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．６ｍｇ（４２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１３
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー１（２Ｒ）または（２Ｓ）。
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、メチルＬ−システイネート塩酸塩（１：１）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネートに変換した。
市販の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、追加の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に留去して、４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）−。
この中間体のうち１４５ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマー（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ−Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ−２５％ＥＴＯＨ−８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎＭ）に分離し、エピマー１ ６３ｍｇ（４３％）およびエピマー２ ５８ｍｇ（４０％）を得た。
エピマー１を次のように特性決定した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝７．５７（ｄ、１Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６２（ｓ、３Ｈ）、３．０５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７０−２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．５９（ｄｄ、１Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー２を次のように特性決定した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝７．５８（ｄ、１Ｈ）、４．１６−４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｄｄ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、１Ｈ）、２．７７（ｄｄ、１Ｈ）、２．６１（ｄｄ、１Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー１ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１２ｍｇ（理論値の３１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記で記載の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物２．６ｍｇ（理論値の３０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１４
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー２（２Ｒまたは２Ｓ）。
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１３に記載の中間体エピマー２を、実施例Ｍ１３における記載と同様にして反応させた。
エピマー２ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
次に、この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の５２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１５
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー１（３Ｒまたは３Ｓ）。
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
市販の２−ブロモ−４−エトキシ−４−オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体のうち５１０ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマーに分離して（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ−Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ−１０％ＥｔＯＨ−８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎｍ）、エピマー１ １００ｍｇ（２０％）およびエピマー２ １４１ｍｇ（２８％）を得た。
エピマー１を次のように特性決定した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４２２（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝７．６０（ｄ、１Ｈ）、４．１８−４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．０１−４．０８（ｍ、４Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｄｄ、１Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．９２（ｄｄ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ）、２．６３（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー２を次のように特性決定した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）−。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：Ｄ＝７．５６（ｄ、１Ｈ）、４．２１−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．０１−４．１（ｍ、４Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、１Ｈ）、３．０８（ｄｄ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７８（ｄｄ、１Ｈ）、２．６０（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー１ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
エチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１１ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物３．７ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１６
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー２（３Ｒまたは３Ｓ）。
Figure 2018524321
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１５に記載の中間体エピマー２を、実施例Ｍ１５における記載と同様にして反応させた。
ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー２ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
エチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１３．４ｍｇ（理論値の２８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１３．４ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１７
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸塩酸塩（１：１）
Figure 2018524321
中間体Ｃ５３ １５０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬおよびＤＡＢＣＯ ２．２９ｇ（２０．３９ｍｍｏｌ）に溶かした。反応液を超音波浴で３０分間処理した。酢酸１．１７ｍＬを加えることで、反応液をｐＨ３から４に調節し、混合物を減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製し、適切な分画を室温で減圧下に濃縮した。残留物をアセトニトリル／水１：１に取り、４Ｎ塩酸５ｍＬを加え、混合物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物８１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．６９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１８
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−グルタミネート（１：１）を、ペプチド化学の古典的方法を用いて製造した。次に、ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ５８とカップリングさせた。次に、最初に、ベンジルオキシカルボニル保護基およびベンジルエステルを水素化開裂によって除去し、次に２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基を、塩化亜鉛を用いて除去した。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１９
Ｎ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ペプチド化学において公知の古典的保護基操作を用いて、トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リシネート（１：１）を製造した。ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次に、最初に、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基および２−（トリメチルシリル）エチルエステルを、塩化亜鉛を用いて開裂させた。最後に、ベンジルオキシカルボニル保護基の水素化分解的開裂および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．６５分。
実施例Ｍ２０
（１Ｒ，４Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）−１−アミノ−３２−（３−アミノプロピル）−３３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３４，３４−ジメチル−６，９，２５，３１−テトラオキソ−１３，１６，１９，２２−テトラオキサ−３，２９−ジチア−７，１０，２６，３２−テトラアザペンタトリアコンタン−１，４，２７−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
最初に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、メチルＬ−システイネート塩酸塩（１：１）を、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネートに変換した。
市販の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌した後、追加の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）−。
４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１．６μＬ（１５μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１３．０ｍｇ（７．４４μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（８Ｒ，１１Ｒ）−８，１１−ビス（メトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−６，１３−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７−アザ−２−シラトリデカン−１３−イル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン３．９ｍｇ（理論値の３７％）を得た。
この中間体３．９０ｍｇ（２．７６μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水３：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体３．６ｍｇ（２．６μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１．９２ｍｇ（理論値の５５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ−Ｈ］−。
実施例Ｍ２１
（２Ｒ，２４Ｓ，２７Ｒ）−２７−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２４−（カルボキシメチル）−４，２０，２３−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２５−チア−３，１９，２２−トリアザオクタコサン−１，２８−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
市販の２−ブロモ−４−エトキシ−４−オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸４．３６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．９２ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１．９μＬ（１７μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１５．０ｍｇ（８．５９μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（８Ｒ，１１Ｓ）−１１−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−８−（メトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７−アザ−２−シラドデカン−１２−イル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン３．６ｍｇ（理論値の２６％）を得た。
この中間体６．２０ｍｇ（２．８２μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水１：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製して、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体３．６０ｍｇ（１．６９μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物０．８８ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ−Ｈ］−。
実施例Ｍ２２
（２Ｒ，２７Ｒ）−２７−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２４−（カルボキシメチル）−４，２０，２３−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２５−チア−３，１９，２２−トリアザオクタコサン−１，２８−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および（１Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）−１−アミノ−３２−（３−アミノプロピル）−３３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３４，３４−ジメチル−６，９，２５，３１−テトラオキソ−１３，１６，１９，２２−テトラオキサ−３，２９−ジチア−７，１０，２６，３２−テトラアザペンタトリアコンタン−１，４，２７−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 2018524321
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２５７）１６．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン８．１８ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２８．９ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４６ｍＬを加え、反応液を室温で３時間撹拌した。次に、酢酸５．２μＬ（０．０９２ｍｍｏｌ）を用い、反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これにより、位置異性体保護中間体１２．１ｍｇ（２段階で５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１２．１ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛７．３ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。次に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１５．７ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６．４ｍｇ（５９％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ２３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次に、保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で終夜撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって後処理を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２４
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｄ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＤ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次に、保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２５
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018524321
最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次の段階で、水素標準圧下に４５分間にわたり、室温でメタノール中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を除去した。次に、部分保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛の存在下に５０℃で７時間撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例Ｍ２６
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー混合物
Figure 2018524321
本実施例は、実施例１３および実施例１４からの化合物のエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１３と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマー混合物として製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例Ｍ２７
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー混合物
Figure 2018524321
本実施例は、実施例１５および実施例１６の化合物からのエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１５と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマー混合物として製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＡＰＤＣ類およびＡＤＣ類の作業例
マレイミド基を介して抗体のシステイン側鎖にカップリングさせた作業例の構造式に示したＡＰＤＣおよびＡＤＣは、リンカーおよびカップリング手順に応じて、主として各場合で示した開環型または閉環型で存在する。しかしながら、その製造物は、小さい割合で個々の他の形態を含むことができる。カップリング反応はアルゴン下で行った。
実施例１ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５μＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈し、室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。
溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．４６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例１ｅ
同様にして、中間体Ｑ１をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１ｉ
同様にして、中間体Ｑ１をニモツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１ｋ
同様にして、中間体Ｑ１を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．２６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例１ｋ＊
同様にして、中間体Ｑ１を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８５０ｍｇとカップリングさせた。
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．６８２μＬ）中溶液をＰＢＳ ３．０７ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５０ｍｇ（ｃ＝１６．３ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ３５７μＬに溶かした中間体Ｑ１ ２．５３ｍｇ（０．００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液３．３９１ｍＬで希釈して７．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：９．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈し、室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。
次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例２ｅ
同様にして、中間体Ｑ２をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．４１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２ｋ
同様にして、中間体Ｑ２を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２ｋ＊
実施例１ｋ＊と同様にして、中間体Ｑ２ ２．７７５ｍｇ（０．００２８ｍｍｏｌ）を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ６０ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：９．９７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例３ｋ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ３ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈し、室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。
次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．１５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例４ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例４ｋ
同様にして、中間体Ｑ４を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例５ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ５ ０．２１ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例５ｅ
同様にして、中間体Ｑ５をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例５ｋ
同様にして、中間体Ｑ５を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例６ａ
Figure 2018524321
ここで、ＰＢＳ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｑ６とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２４ｍｇ）の中間体Ｑ６を加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．２６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例６ｅ
同様にして、中間体Ｑ６をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．４。
実施例６ｋ
同様にして、中間体Ｑ６を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．７。
実施例７ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５μＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。次に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ７ ０．２４ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．６。
実施例７ｋ
同様にして、中間体Ｑ７を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例８ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、ＰＢＳ ４５８μＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１８９２μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｑ８ ０．３１４ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部は、閉環型で存在する可能性もある。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．１５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．１。
実施例８ｅ
同様にして、中間体Ｑ８をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．２１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例８ｋ
同様にして、中間体Ｑ８を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例９ｋ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．４５０ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇ（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ９ ０．２４ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１０ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１０ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例１０ｋ
同様にして、中間体Ｑ１０を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１１ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１１ ０．２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９４２ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例１１ｅ
同様にして、中間体Ｑ１１をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１１ｋ
同様にして、中間体Ｑ１１を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１２ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１２ ０．３０５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９４２ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．２３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例１２ｅ
同様にして、中間体Ｑ１２をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１２ｋ
同様にして、中間体Ｑ１２を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１３ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１３ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．１。
実施例１３ｅ
同様にして、中間体Ｑ１３をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１３ｋ
同様にして、中間体Ｑ１３を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例１４ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１４ ０．２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例１４ｅ
同様にして、中間体Ｑ１４をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例１４ｋ
同様にして、中間体Ｑ１４を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例１５ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１５ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１５ｋ
同様にして、中間体Ｑ１５を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例１６ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１６ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例１６ｅ
同様にして、中間体Ｑ１６をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１６ｋ
同様にして、中間体Ｑ１６を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例１７ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５μＬ）中溶液をＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１７ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１７ｅ
同様にして、中間体Ｑ１７をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例１７ｋ
同様にして、中間体Ｑ１７を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．３４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１８ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１８ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例１８ｅ
同様にして、中間体Ｑ１８をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例１８ｋ
同様にして、中間体Ｑ１８を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１９ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ１９ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈し、室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。
次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．３。
実施例１９ｅ
同様にして、中間体Ｑ１９をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例１９ｋ
同様にして、中間体Ｑ１９を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例２０ｋ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１３１ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．２０ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．２３９ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇ（ｃ＝２０．９０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液をＰＢＳ ０．４６１ｍＬで希釈し、室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｑ２０ ０．８３３ｍｇ（０．０００４０ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに１２０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．５０ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．６。
実施例２０ｋ＊
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０７６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．２３９ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇ（ｃ＝２０．９０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液をＰＢＳ ０．２０ｍＬで希釈し、室温で１５０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２０ ０．８３３ｍｇ（０．０００４０ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに１２０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９６ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心による濃縮およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）での再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．１７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．３。
実施例２１ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０７６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．２０ｍＬ）中溶液をＰＢＳ ０．４２７ｍＬ中のセツキシマブ抗体５ｍｇ（ｃ＝１１．７ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で１５０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ４０μＬに溶かした中間体Ｑ２１ ０．８１１ｍｇ（０．０００５３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに１２０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９８ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．３７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：８．１。
実施例２１ｅ
同様にして、中間体Ｑ２１をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．２７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：８．０。
実施例２１ｋ
同様にして、中間体Ｑ２１を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．９。
実施例２２ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２２ ０．２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。
実施例２２ｅ
同様にして、中間体Ｑ２２をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．７。
実施例２２ｋ
同様にして、中間体Ｑ２２を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例２３ａ
Figure 2018524321
ここで、セツキシマブ５ｍｇ／ＰＢＳ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｑ２３とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｑ２３を加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例２３ｅ
同様にして、中間体Ｑ２３をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例２３ｋ
同様にして、中間体Ｑ２３を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．２３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例２４ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２４ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。
実施例２４ｅ
同様にして、中間体Ｑ２４をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．４９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．３。
実施例２４ｋ
同様にして、中間体Ｑ２４を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。
実施例２５ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２５ ０．２１ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例２５ｅ
同様にして、中間体Ｑ２５をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例２５ｋ
同様にして、中間体Ｑ２５を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．４４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例２６ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４９８ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２６ ０．３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液をＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で溶離した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例２６ｅ
同様にして、中間体Ｑ２６をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例２６ｋ
同様にして、中間体Ｑ２６を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例２７ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２７ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例２７ｅ
同様にして、中間体Ｑ２７をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。
実施例２７ｋ
同様にして、中間体Ｑ２７を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例２８ａ
Figure 2018524321
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ２８ ０．３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、反応液をＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で溶離した。次に、超遠心およびＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例２８ｅ
同様にして、中間体Ｑ２８をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例２８ｋ
同様にして、中間体Ｑ２８を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例２９ａ
Figure 2018524321
ここで、セツキシマブ５ｍｇ／ＰＢＳ（ｃ＝９．１ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｑ２９とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２１ｍｇ）の中間体Ｑ２９をアルゴン下に加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．１４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例２９ｅ
同様にして、中間体Ｑ２９をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例２９ｋ
同様にして、中間体Ｑ２９を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例３０ａ
Figure 2018524321
ここで、セツキシマブ５ｍｇ／ＰＢＳ（ｃ＝９．１ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｑ３０とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２２ｍｇ）の中間体Ｑ２９をアルゴン下に加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例３０ｅ
同様にして、中間体Ｑ３０をトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．６。
実施例３０ｋ
同様にして、中間体Ｑ３０を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．８。
実施例３１ｔ
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．４（５３０μＬ）中溶液に（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍＭの中間体Ｑ３１のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬを加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００６２５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例３１ｔ−４
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）３０ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｑ３１のＤＭＳＯ中溶液４８０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）２４００μＬを加え、３７℃で２４時間インキュベートした。反応混合物をゲル濾過クロマトグラフィーにより、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製して、小分子およびトランスグルタミナーゼをＡＤＣから分離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮して、最終濃度約１２ｍｇ／ｍＬとした。次に、その溶液を無菌濾過した。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例３２ｔ
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．４（５３０μＬ）（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）中溶液に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｑ３２のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液５０μＬ（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００６２５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例３３ｔ
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．４（５３０μＬ）（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）中溶液に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｑ３３のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬを加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００６２５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例３４ｔ
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（に相当ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．４（５３０μＬ）（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）中溶液に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｑ３４のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬを加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００６２５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例３４ｔ−４
Figure 2018524321
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）５ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（ｃ＝７．４ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｑ３４のＤＭＳＯ中溶液８３μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬを加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して総容量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して容量約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．１μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例３４ｔｅ−４
Figure 2018524321
実施例３４ｔ−４と同様にして、ＴＰＰ−７５１１（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに相当）も使用およびカップリングさせた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例３５ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ３５ ０．２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、で再希釈しＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３５ｅ
同様にして、中間体Ｑ３５を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３５ｋ
同様にして、中間体Ｑ３５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３６ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ３６ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例３６ｅ
同様にして、中間体Ｑ３６を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例３６ｋ
同様にして、中間体Ｑ３６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例３７ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下でＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｑ３７の溶液を加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間撹拌し．次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムを用いて精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例３７ｅ
同様にして、中間体Ｑ３７を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例３７ｋ
同様にして、中間体Ｑ３７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．２。
実施例３８ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１１ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ３８ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例３８ｅ
同様にして、中間体Ｑ３８を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３８ｋ
同様にして、中間体Ｑ３８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３９ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下でＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ３９ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。次に、超遠心による濃縮、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例３９ｅ
同様にして、中間体Ｑ３９を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３９ｋ
同様にして、中間体Ｑ３９を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４０ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下でＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４０ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例４０ｅ
同様にして、中間体Ｑ４０を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例４０ｋ
同様にして、中間体Ｑ４０を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例４１ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４１ ０．３０８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、ＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製した。この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．２６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４１ｅ
同様にして、中間体Ｑ４１を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例４１ｋ
同様にして、中間体Ｑ４１を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：２．１５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例４２ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４２ ０．２６３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例４２ｅ
同様にして、中間体Ｑ４２を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．５３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。
実施例４２ｋ
同様にして、中間体Ｑ４２を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：０．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例４３ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４３ ０．２７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例４３ｅ
同様にして、中間体Ｑ４３を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例４３ｋ
同様にして、中間体Ｑ４３を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例４４ａ
Figure 2018524321
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｑ４４ ０．２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して容量２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例４４ｅ
同様にして、中間体Ｑ４４を、トラスツズマブ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４４ｋ
同様にして、中間体Ｑ４４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
Ｃ：生物学的効力の評価
本発明による化合物の生理活性を、下記の評価で示すことができる。
ａ．Ｃ−１ａ：ＡＤＣの細胞毒性効果の測定
ＡＤＣの細胞毒性効果の分析を、各種細胞系を用いて行った。
ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト粘液性類表皮肺癌細胞、ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１８４８、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ−陽性；ＥＧＦＲ−陽性。
ＢｘＰＣ３：ヒト膵臓癌細胞、ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１６８７、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ−陽性。
ＬｏＶｏヒト結腸直腸癌細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２２９、ＭＴＴアッセイ用に培養：標準培地：カイン（Ｋａｉｇｈｎ′ｓ）＋Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ２１１２７）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏから、Ｎｏ．１０５００−０６４）。ＣＴＧアッセイ用の培養：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ２４４２）。ＴＷＥＡＫＲ−陽性。
ＫＰＬ４：ヒト乳癌細胞系、Ｂａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ（ＤＳＭＺで２０１２年７月１９日に同一性をチェックおよび確認）、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏから；＃２１８７５−０５９、安定化Ｌ−グルタミン）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１０５００−０６４）；ＨＥＲ２−陽性。
ＳＫ−ＨＥＰ−１：ヒト肝臓癌細胞系、ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−５２、標準培地：アール塩＋Ｇｌｕｔａｍａｘ Ｉ含有ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ４１０９０）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏから、Ｎｏ．１０５００−０６４）；ＥＧＦＲ−陽性、ＴＷＥＡＫＲ−陽性。
個々の細胞系についてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に示された標準的方法によって、細胞を培養する。
ＣＴＧアッセイ
Ｃ−１下に挙げた増殖培地を用い、標準的な方法に従って細胞を培養した。試験は、トリプシン（０．０５％）およびＥＤＴＡ（０．０２％）のＰＢＳ中溶液（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティングおよび白色底の９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０）への細胞播種（７５μＬ／ウェルで、次の細胞数はウェル当たりである。ＮＣＩ−Ｈ２９２：２５００細胞／ウェル、ＢｘＰＣ３：２５００細胞／ウェル、ＬｏＶｏ３０００細胞／ウェル）によって行い、インキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。２４時間後、培地２５μＬ中の抗体薬物複合体（４倍濃縮）を、細胞に加えて、その細胞での最終抗体薬物複合体濃度が３×１０−７Ｍから３×１０−１１Ｍを得た（３連）。次に、細胞をインキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。並行したプレートで、薬物処理開始時（第０日）での細胞活性を、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７３および＃Ｇ７５７１）を用いて求めた。このために、基質１００μＬを各細胞バッチに加え、次に、プレートをアルミニウムホイルで覆い、プレート振盪器上１８０ｒｐｍで２分間振盪し、実験台上に８分間置き、照度計（Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ２、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定した。その基質により、生存細胞のＡＴＰ含有量を検出し、その際に、発光シグナルが発生し、その強度は細胞の生存率に正比例する。抗体薬物複合体とともに７２時間インキュベートした後、これらの細胞の生存率も、上記の方法に従って、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ発光細胞生存率アッセイを用いて求めた。その測定データから、ＤＲＣ（用量応答曲線）解析スプレッドシートおよび４パラメータ適合を用い、第０日との比較で増殖阻害のＩＣ５０を計算した。ＤＲＣ解析スプレッドシートは、ＩＤＢＳ Ｅ−ＷｏｒｋＢｏｏｋ Ｓｕｉｔｅプラットフォーム（ＩＤＢＳ：ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ．， Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ， ＵＫ）に基づいてＢａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａ ＡＧおよびＢａｙｅｒ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓが開発したｂｉｏｂｏｏｋスプレッドシートである。
下記の表１ａに、本アッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を挙げてある。
表１ａ
Figure 2018524321

Figure 2018524321


Figure 2018524321


Figure 2018524321


Figure 2018524321

報告の活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものであり、薬物／ｍＡＢ比が示されている。それらの値は、異なる薬物／ｍＡＢ比に関して逸脱している可能性がある。ＩＣ５０値は、いくつかの独立の実験または個々の値の平均である。抗体薬物複合体の作用は、個々のリンカーおよび担毒体を含む個々のアイソタイプ対照に対して選択的であった。
さらなる参照化合物として、実施例１ｋと同様にして、中間体Ｑ１のＤ−アスパラギンエピマーを抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８とカップリングさせた。
実施例１ｋの対照例
Figure 2018524321
ここで、実施例１ｋと同様にして、Ｑ１のＤ−アスパラギンエピマーを、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ ６０ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１１．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
表１ａに示したように、この対照ＡＤＣは、３細胞系に対してほとんど細胞傷害効果を示さない。
ＭＴＴアッセイ
Ｃ−１下に挙げた増殖培地を用いて、標準的な方法に従って、細胞を培養した。本試験は、ＡｃｃｕｔａｓｅのＰＢＳ中溶液（ＢｉｏｃｈｒｏｍＡＧ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティングおよび白色底の９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０から）への細胞播種（ＮＣＩ Ｈ２９２：２５００細胞／ウェル；ＳＫ−ＨＥＰ−１：１０００細胞／ウェル；ＫＰＬ−４：１２００細胞／ウェル、総体積１００μＬ中）によって行う。次に、細胞を、インキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。次に、濃度１０−５Ｍから１０−１３Ｍでの培地１０μＬ中の抗体薬物複合体をピペットで細胞に加え（三連で）、アッセイ液をインキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。９６時間後、ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ， ＵＳＡ、カタログ番号３０−１０１０Ｋ）を用いて細胞増殖を検出した。このために、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートし、次に界面活性剤を加えることで、細胞を終夜溶解させた。生成した色素を、５７０ｎｍで検出した（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ｐｒｏ， Ｔｅｃａｎ）。測定データを用いて、ＤＲＣ（用量応答曲線）を使用して増殖阻害のＩＣ５０を計算した。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同様に処理した細胞の増殖を、１００％数値と定義した。
下記の表１ｂおよび１ｃに、本アッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を挙げてある。
表１ｂ
Figure 2018524321

Figure 2018524321


Figure 2018524321

表１ｃ
Figure 2018524321

Figure 2018524321


Figure 2018524321

報告の活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものであり、薬物／ｍＡＢ比を示す。値は、異なる薬物／ｍＡＢ比に関して逸脱がある可能性がある。ＩＣ５０値は、いくつかの独立の実験または個別の値の平均である。当該抗体薬物複合体の作用は、個々のリンカーおよび担毒体を含む個々のアイソタイプ対照に関して選択的であった。
この場合もまた、実施例１ｅと同様にして、Ｑ１のＤ−アスパラギンエピマーをトラスツズマブ５ｍｇとカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
表１ｃに示したように、この対照ＡＤＣは、ＫＰＬ４細胞系に対して有意な細胞傷害効果を全く示さない。
Ｃ−１ｂ：選択された実施例によるキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５の阻害の測定
ヒトキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５（ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ, Ｎｏ．０２７ＥＧ０１−ＸＬ）のモータードメインを、１５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．８（５ｍＭ ＭｇＣｌ２および１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｓｉｇｍａ）中室温で５分間、５０μｇ／ｍＬタキソール（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｔ７１９１−５ＭＧ）で安定化した微小管（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｉ）（ウシまたはブタ、ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ）とともに濃度１０ｎＭでインキュベートした。調製したばかりの混合物を３８４ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇから）に小分けした。濃度１．０×１０−６Ｍから１．０×１０−１３Ｍの調べる阻害剤およびＡＴＰ（最終濃度５００μＭ、Ｓｉｇｍａ）を加えた。インキュベーションは室温で２時間であった。マラカイトグリーン（Ｂｉｏｍｏｌ）を用いて形成された無機ホスフェートを検出することで、ＡＴＰａｓｅ活性を検出した。試薬を加えた後、アッセイ液を室温で５０分間インキュベートしてから、波長６２０ｎｍでの吸収を検出した。使用した陽性対照は、モナストロール（Ｓｉｇｍａ、Ｍ８５１５−１ｍｇ）およびイスピネシブ（ＡｄｏｏＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａ１０４８６）であった。用量−活性曲線の個々のデータは、８倍測定である。ＩＣ５０値は、二つの独立の実験の平均である。１００％対照は、阻害剤で処理されなかったサンプルであった。
下記の表２に、記載のアッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を列記し、相当する細胞毒性データをまとめている（ＭＴＴアッセイ）。
表２
Figure 2018524321
Figure 2018524321
報告された活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものである。
Ｃ−１ｃ：酵素アッセイ
ａ：カテプシンＢアッセイ
試験対象のあらゆるカテプシンＢ開裂性プロドラッグに関して、ミクロ反応容器（０．５ｍＬ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆから）で混合物を作った。ここで使用した酵素をヒト肝臓組織から得た。最初にカテプシンＢ（ＳｉｇｍａＣ８５７１２５μｇ）２μｇを入れ、５０ｍＭリン酸Ｎａ緩衝液ｐＨ６．０、２ｍＭ ＤＴＴで合計容量２００μＬとした。次に、試験対象の基質溶液５０μＬをピペットで入れた。混合物を４０℃で３００ｒｐｍの一定の撹拌下にサーモブロック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから）でインキュベートした。酵素反応を速度論的に制御した。このために、サンプル１０μＬを異なる時点で取った。採取したサンプルを直ちに氷冷メタノール２０μＬと混合して、酵素反応を停止してから、−２０℃で冷凍した。サンプリングに選択した時間点は、１０分後、２時間後、４時間後および２４時間後とした。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を行った（逆相ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから、１２００シリーズ）。放出された担毒体の測定によって、酵素反応の半減期ｔ１／２の測定が可能となった。
ｂ：レグマインアッセイ
組み換えヒト酵素でレグマインアッセイを行った。ｒｈレグマイン酵素溶液（カタログ番号２１９９−ＣＹ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、５０ｍＭ酢酸Ｎａ緩衝液／１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ４．０で希釈して所望の濃度とし、３７℃で２時間前インキュベートした。次に、ｒｈレグマインを５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ５．０で１ｎｇ／μＬの最終濃度に調節した。試験対象のあらゆるレグマイン開裂性プロドラッグについて、ミクロ反応容器（０．５ｍＬ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆから）で混合物を作った。そのために、基質溶液を、５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、２５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ５．０で所望の濃度（２倍濃度）に調節した。酵素反応の速度論的測定のため、最初にレグマイン溶液２５０μＬを入れ、基質溶液２５０μＬ（最終濃度：単一濃度）を加えることで酵素反応を開始した。異なる時点で、サンプル５０μＬを取った。このサンプルを直ちに氷冷メタノール１００μＬと混合して、酵素反応を停止してから、−２０℃で冷凍した。サンプリングに選択した時間点は、０．５時間後、１時間後、３時間後および２４時間後とした。次に、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、そしてＬＣ−ＭＳ分析によってサンプルを分析した。放出された担毒体の測定によって、酵素反応の半減期ｔ１／２の測定が可能となった。
レグマイン介在開裂を示すための代表的な例として、レグマインアッセイで製造した基質はモデル化合物ＡおよびＢであった。
参考例：モデル化合物Ａ
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（メチルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−メチルブタンアミド（１：１）を、ＷＯ２０１５０９６９８２Ａ１に記載の方法に従って製造した。次に、この中間体を用いて、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｌ１０３にカップリングさせることで標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０２［Ｍ＋Ｈ］＋。
参考例：モデル化合物Ｂ
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（メチルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018524321
最初に、トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−メチルブタンアミド（１：１）を、ＷＯ２０１５０９６９８２Ａ１に記載の方法に従って製造した。次に、この中間体を用いて、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｌ１１９にカップリングさせることで標題化合物を製造した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１６［Ｍ＋Ｈ］＋。
上記で記載の条件下で、化合物Ａがレグマインから開裂されて、半減期１．１時間で標的化合物となった。
Figure 2018524321
Ｃ−２：内在化アッセイ
内在化は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を介した抗原発現性癌細胞における細胞毒性ペイロードの特異的かつ効率的提供を可能とする重要なプロセスである。このプロセスは、特異的抗体およびアイソタイプ対照抗体の蛍光標識を介してモニタリングされる。最初に、蛍光色素を抗体のリジンに結合させた。結合は、ｐＨ８．３の２倍モル過剰のＣｙｐＨｅｒ ５ＥモノＮＨＳエステル（バッチ３５７３９２, ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。カップリング後、反応混合物をゲルクロマトグラフィー（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ Ｃｏｌｕｍｎｓ、４０Ｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｏ．８７７６８；溶離緩衝液：ダルベッコＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｎｏ．Ｄ８５３７）によって精製して、過剰の色素を除去し、ｐＨを調節した。得られたタンパク質溶液を、ＶＩＶＡＳＰＩＮ５００カラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ｓｔｅｄｉｍ ｂｉｏｔｅｃ）を用いて濃縮する。抗体の色素負荷量を、分光光度分析（ＮａｎｏＤｒｏｐから）および次に計算（Ｄ：Ｐ＝Ａｄｙｅεｐｒｏｔｅｉｎ：（Ａ２８０−０．１６Ａｄｙｅ）εｄｙｅ）によって求めた。
ここで調べた抗体およびアイソタイプ対照の色素負荷量は、同等の次数のものであった。細胞結合アッセイにおいて、前記カップリングが抗体のアフィニティにおける変化をもたらさないことが確認された。
その標識抗体を、内在化アッセイに用いた。処置開始前に、細胞（２×１０４／ウェル）を、９６ウェルＭＴＰ（肉厚、黒色、透明底Ｎｏ４３０８７７６、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから）における培地１００μＬに播いた。３７℃／５％ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、培地を代え、標識抗体を各種濃度で加えた（１０、５、２．５、１、０．１μｇ／ｍＬ）。標識されたアイソタイプ対照（陰性対照）について、同じ処理プロトコールを用いた。選択されたインキュベーション時間は、０時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、３時間、６時間および２４時間であった。ＩｎＣｅｌｌＡｎａｌｙｚｅｒ １０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから）を用いて、蛍光測定を行った。次に、パラメータである顆粒カウント／細胞および総顆粒強度／細胞の測定を介して、動力学的評価を行った。
受容体への結合後、Ｂ７Ｈ３抗体について、それの内在化能力を調べた。このために、異なる受容体発現レベルを有する細胞を選択した。標的介在特異的内在化が抗体で観察されたが、アイソタイプ対照は内在化を全く示さなかった。
Ｃ−３：細胞透過性を求めるためのイン・ビトロ試験
Ｃａｃｏ−２細胞を用いるフラックスアッセイでのイン・ビトロ試験によって、基質の細胞透過性を調べることができる［Ｍ． Ｄ． Ｔｒｏｕｔｍａｎ ａｎｄ Ｄ． Ｒ． Ｔｈａｋｋｅｒ, Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ２０ （８）, １２１０−１２２４（２００３）］。これに関して、２４ウェルフィルタープレート上で、細胞１５から１６日間培養した。透過を求めるため、個々の試験物質を、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００、Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ, Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ４０００（ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧＭＢＨ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）が＞２または＜０．５であった場合に、物質は能動的に輸送されると分類された。
細胞内で放出される担毒体について非常に重要なものは、ＢからＡへの透過性［Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）］およびＰａｐｐ（Ｂ−Ａ）：Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）であり、この浸透率が低いほど、Ｃａｃｏ−２細胞の単層を通る物質の能動輸送および受動輸送が遅くなる。さらに、排出比が能動輸送を示さない場合、その物質は、細胞内放出後に、細胞内でより長く留まることができる。従って、生化学的標的（この場合、キネシンスピンドルタンパク質、ＫＳＰ／Ｅｇ５）との相互作用に使える時間も長くなる。
下記の表３には、このアッセイからの代表的作業例についての浸透率データを示してある。
表３
Figure 2018524321
Figure 2018524321
Ｃ−４：Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）についての基質特性を求めるためのイン・ビトロ試験
多くの腫瘍細胞が、薬物のための輸送タンパク質を発現し、これは非常に多くの場合、細胞増殖抑制剤に対する抵抗性の発達を伴う。従って、そのような輸送タンパク質、例えばＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）またはＢＣＲＰの基質ではない物質は、例えば、改善された活性プロファイルを示し得ると考えられる。
Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）用の物質の基質特性を、Ｐ−ｇｐを過剰発現するＬＬＣ−ＰＫ１細胞（Ｌ−ＭＤＲ１細胞）を用いるフラックスアッセイによって求めた［Ａ．Ｈ． Ｓｃｈｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９６, １６９８−１７０５ （１９９５）］。このために、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞またはＬ−ＭＤＲ１細胞を、３から４日間、９６ウェルフィルタープレートで培養した。透過性を測定するため、個々の試験物質を、単独でまたは阻害剤（例えば、イベルメクチンまたはベラパミル）の存在下に、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣによって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ３０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の排出比が＞２であった場合に、物質はＰ−ｇｐ基質であると分類された。
Ｐ−ｇｐ基質特性の評価のためのさらなる基準として、Ｌ−ＭＤＲ１細胞およびＬＬＣ−ＰＫ１細胞における排出比または阻害剤存在下もしくは非存在下での排出比を比較することができる。これらの値が２より大きい係数だけ異なる場合、対象の物質はＰ−ｇｐ基質である。
Ｃ−５：薬物動態
Ｃ５ａ：イン・ビトロでの内在化後のＡＤＣ代謝物の確認
方法の説明：
免疫複合体を用いる内在化試験を行って、細胞内的に形成された代謝物を分析する。このために、ヒト肺腫瘍細胞ＮＣＩ Ｈ２９２（３×１０５／ウェル）を６ウェルプレートに播き、終夜インキュベートする（３７℃、５％ＣＯ２）。その細胞を１０μｇ／ｍＬ（６６ｎＭ）の被験ＡＤＣで処理する。内在化を、３７℃および５％ＣＯ２で行った。各種時間点で（０、４、２４、４８、７２時間）、さらなる分析用に細胞サンプルと取る。最初に、上清（約５ｍＬ）を回収し、遠心（２分、室温、１０００ｒｐｍ Ｈｅｒａｅｕｓ Ｖａｒｉｏｆｕｇｅ ３．０Ｒ）後に、−８０℃で保存する。細胞をＰＢＳで洗浄し、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて分離し、細胞数を測定する。さらに洗浄した後、所定数の細胞（２×１０５）を溶解緩衝液（哺乳動物細胞溶解キット（Ｓｉｇｍａ ＭＣＬ１）１００ｍＬで処理し、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄ管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆカタログ番号００３０１０８．１１６）中、連続振盪しながら（Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ、１５分、４℃、６５０ｒｐｍ）インキュベートする。インキュベーション後、溶解物を遠心し（１０分、４℃、１２０００ｇ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｒ）、上清を回収する。得られた上清を−８０℃で保存する。そして、全てのサンプルを下記のように分析する。
培養上清または細胞溶解物中の化合物の測定を、メタノールまたはアセトニトリルでタンパク質を沈殿させた後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行う。
培養上清／細胞溶解物５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（一般にはアセトニトリル）１５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０から１００ｎｇ／ｍＬの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１６０００ｇで３分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、移動相に適した緩衝液５００μＬを加え、再度振盪する。
次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、その二つのマトリックスサンプルの測定を行う。
較正のため、０．５から２０００μｇ／Ｌの濃縮液を血漿サンプルに加える。検出限界（ＬＯＱ）は約２μｇ／Ｌである。直線範囲は、２から１０００μｇ／Ｌの幅である。
腫瘍サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍の上清に加える。検出限界は４μｇ／Ｌである。直線範囲は、４から２００μｇ／Ｌの幅である。
妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含んでいる。
Ｃ５ｂ：イン・ビボでのＡＤＣ代謝物の確認
３から３０ｍｇ／ｋｇの異なるＡＤＣを静脈投与した後、ＡＤＣおよび生じる全ての代謝物の血漿濃度および腫瘍濃度を測定することができ、クリアランス（ＣＬ）、曲線下面積（ＡＵＣ）および半減期（ｔ１／２）などの薬物動態パラメータを計算することができる。同様に、血漿、腫瘍および組織におけるＡＤＣの生じ得る代謝物濃度を測定することができる。
参考例（Ｒ１０ｋ）として、アゴニスト抗体ＴＰＰ−２６５８を有するＡＤＣを、非開裂性リンカーを用いて製造した。
参考例Ｒ１０ｋ
Figure 2018524321
ＰＢＳ １０．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８ １５０ｍｇ（ｃ＝１４．２８ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．８６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（２ｍＬ）中溶液を加えた。抗体ＴＰＰ−２６５８およびそれの製造については、ＷＯ２０１５／１８９１４３Ａ１に詳細に記載されている。
混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＤＭＳＯ １２５０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ６．６３ｍｇ（０．００８ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１２５０μＬで希釈した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して、総容量２２．５ｍＬとした。この溶液を室温でアルゴン下に終夜撹拌し、ＰＤ−１０カラムによって再緩衝してｐＨ７．２とした。次に、超遠心による濃縮、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による再希釈および再濃縮を行った。得られたＡＤＣバッチを、次のように特性決定した。
タンパク質濃度：１４．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
生じる代謝物の定量分析
メタノールまたはアセトニトリルによるタンパク質の沈殿後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、腫瘍および組織中の化合物の測定を行った。
腫瘍または組織の後処理中、後者を３倍量の抽出緩衝液で処理した。その抽出緩衝液は、組織タンパク質抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ, Ｒｏｃｋｆｏｒｄ, ＩＬ）５０ｍＬ、完全−プロテアーゼ−阻害剤−カクテルのペレット２個（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧＭＢＨ, Ｍａｎｎｈｅｉｍ, Ｇｅｒｍａｎｙ）および最終濃度１ｍＭでフェニルメチルスルホニルフルオリド（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ, ＭＯ）を含んでいた。最大ストローク数でＴｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）で、サンプルを２０分間２回ホモジナイズする。ホモジネート５０μＬをオートサンプラーバイアルに移し入れ、ＩＳＴＤを含むメタノール１５０μＬを加えた。１６０００ｇで３分間遠心後、上清１０μＬに移動相に適した緩衝液１８０μＬを加え、再度振盪した。そして、腫瘍サンプルは測定準備が整った状態であった。
次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、二つのマトリクスサンプルを測定した。
腫瘍および組織サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍または組織の上清に加えた。検出限界は３μｇ／Ｌであった。直線範囲は、３から２００μｇ／Ｌの幅である。
妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含み、血漿ではさらに５００μｇ／Ｌである。
表：１０ｍｇ／ｋｇの実施例１ｋ＊からのＡＤＣ（ｎ＝３）または１０ｍｇ／ｋｇの参考例Ｒ１０ｋからのＡＤＣ（ｎ＝２）の投与から２４時間後のマウス腫瘍、肝臓および腎臓のＮＣＩ Ｈ２９２異種移植片における異化代謝産物濃度。両方の場合で測定された異化代謝産物はＭ２６であった。
Figure 2018524321
レグマイン開裂性プロドラッグ残基を有する本発明のＡＤＣ実施例１ｋ＊の投与後、活性異化代謝産物Ｍ２６の濃度を腫瘍で測定し、それは同じ抗体を有するがレグマイン開裂性プロドラッグ残基を持たないＡＤＣの投与後に測定したものに匹敵するものであった。一方、特に肝臓における活性代謝物の測定濃度は、実施例１ｋ＊からのＡＤＣの投与後に、参考ＡＤＣ Ｒ１０ｋの投与後よりかなり低かった。レグマイン開裂性プロドラッグ残基を有効成分中で用いる場合に、他の臓器と比較して、標的組織（腫瘍）において有効成分がかなり選択的に放出される。
使用した抗体の定量分析
ＡＤＣの抗体部分を、リガンド結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿サンプルおよび腫瘍溶解物中の総ＩｇＧ濃度として測定した。ここでは、サンドイッチＥＬＩＳＡ方式を用いた。このＥＬＩＳＡは、血漿および腫瘍サンプルでの測定に関して適格性判定し、バリデーションしたものであった。ＥＬＩＳＡプレートを、抗ヒト−ヤギＩｇＧ−Ｆｃ抗体でコーティングした。サンプルとともにインキュベーションした後、プレートを洗浄し、サル抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の検出器（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）複合体とともにインキュベートした。さらなる洗浄段階後、ＨＲＰ基質をＯＰＤに加え、４９０ｎｍでの吸収を介して、発色をモニタリングした。既知ＩｇＧ濃度を有する標準サンプルを、４パラメータ式を用いて適合させた。定量下限（ＬＬＯＱ）および定量上限（ＵＬＯＱ）の範囲内で、未知濃度を内挿によって求めた。
Ｃ−６：イン・ビボ活性試験
本発明による複合体の活性を、例えば異種移植モデルを用いて調べた。当業者であれば、本発明による化合物の活性を調べることができる先行技術の方法については熟知している（例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１；Ｐｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００９ Ｍａｒ １５；６９（６）：２３５８−６４参照）。このために、例えば、バインダーの標的分子を発現する腫瘍細胞系を、齧歯類（例えばマウス）に接種した。次に、本発明による複合体、アイソタイプ対照複合体、対照抗体または等張性生理食塩水を接種動物に投与した。投与は、１回または複数回行った。数日のインキュベーション時間後、複合体処理動物および対照群を比較することで、腫瘍の大きさを測定した。複合体処理動物は、相対的に小さい腫瘍サイズを示した。
Ｃ−６ａ．マウスでの増殖阻害／実験腫瘍の退行
抗体薬物複合体に対する抗原を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制マウス、例えばＮＭＲｉヌードまたはＳＣＩＤマウスの側部に皮下接種する。１００から１０００万個の細胞を細胞培養液から除去し、遠心し、培地または培地／マトリゲルに再懸濁させる。細胞懸濁液をマウスの皮下に注射する。
数日以内に腫瘍が増殖する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で腫瘍が確立された後に、処置を開始する。比較的大きい腫瘍に対する効果を調べるため、腫瘍サイズが５０から１００ｍｍ２でのみ処置を開始することも可能である。
ＡＰＤＣおよびＡＤＣによる処置は、マウスの尾静脈に静脈（ｉ．ｖ．）経路で行う。ＡＤＣは５ｍＬ／ｋｇの体積で投与する。
処置プロトコールは、抗体の薬物動態によって決まる。本発明による複合体を用いると、処置は、標準として２週間もしくは３週間にわたり週１回行う。迅速な評価のために、単回処置を行うプロトコールを用いることができる。しかしながら、治療をさらに続けることも可能であるか、後の時点で、３処置日の第２サイクルを行うことができる。
標準として、処置群当たり動物８匹を用いる。活性物質を投与される群に加えて、同じプロトコールに従って、一つの群を緩衝液のみで対照群として処理する。
実験中、腫瘍面積を、定期的にカリパスを用いて２次元（長さ／幅）で測定する。その腫瘍面積は、長さ×幅として求める。処置群の対照群との平均腫瘍面積の比を、Ｔ／Ｃ面積と記述する。
処置終了後、実験の全ての群を同時に屠殺する場合、腫瘍を摘出し、秤量することができる。処置群の対照群との平均腫瘍重量の比を、Ｔ／Ｃ重量と記述する。
Ｃ−６ｂ．各種腫瘍モデルにおける本発明によるＡＰＤＣ類およびＡＤＣ類の効力
腫瘍細胞を、雌ＮＭＲＩヌードマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の脇腹に皮下接種する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で、静脈処理を抗体−薬物複合体で行う。処理後、適宜に、腫瘍増殖のモニタリングを行う。
本発明によるＡＰＤＣによる処理によって、複合体化アイソタイプ対照抗体に対する、対照群と比較した腫瘍増殖の明確かつ場合により長期の阻害を生じる。表８には、処置開始から計算した、個々の実験終了日での腫瘍重量および腫瘍面積について求めたＴ／Ｃ値を示してある。
表８：
Figure 2018524321

Claims (55)

  1. 下記式のバインダーもしくはそれの誘導体の１以上の薬物分子もしくはそれの１以上のプロドラッグとの複合体、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体（好ましくは抗体）を表し、
    Ｌはリンカーを表し、
    ｎは１から５０、好ましくは１から２０、より好ましくは２から８の数字を表し、
    ＫＳＰはキネシン紡錘体阻害剤もしくはそれのプロドラッグを表し、Ｌ−ＫＳＰは下記式（ＩＩａ）：
    Figure 2018524321
    を有し、
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
    （Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
    Ｒ１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２、または−ＣＯ−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）、または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し；Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    または、Ｒ４は式Ｒ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−もしくはＲ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基または式Ｒ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン−開裂性基を表し、
    Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０もしくは１を表し、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
    またはＲ２およびＲ４が一緒に、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し（ピロリジン環を形成）、
    Ｒ１０はＨ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン（特別にはＦまたはＣｌ）、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−ハロアルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ１−４−アルキル）、−ＯＨまたはＲ２１−ＣＯ−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−を表し、
    ＳＩＧはＣ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表し；
    Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
    Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、または置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、
    それは各場合で、１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ、１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    ｎは０、１または２を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。）；
    Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
    Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、または−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
    ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、または−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
    Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
    置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８のうちの一つは、−Ｌ−＃１を表すか、（Ｒ８の場合）含み、
    −Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
    Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−または
    Figure 2018524321
     を表し（Ｇ１が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018524321
     を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基であり、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−基の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
    ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
    存在する場合に側鎖として炭化水素上で置換されていても良いＣ１−Ｃ１０−アルキル基を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し；
    −ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有し；
    下記の条件（ｉ）から（ｉｉｉ）のうちの１以上が満足され、
    （ｉ）−Ｌ−＃１が、式−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を含み、
    Ｘは−ＮＨ２または−ＣＯＯＨ、好ましくは−ＮＨ２を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    （ｉｉ）Ｒ４が、式Ｒ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
    Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し、
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
    （ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ４が一緒に、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し（ピロリジン環を形成）、ピロリジン環の２級アミノ基の２級水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっており、
    ＳＩＧはＣ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂後に２級アミンを放出する自壊性基を表し、
    Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し、
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である。］
  2. Ｒ４が式Ｒ２１−（Ｃ（＝Ｏ））（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を表す請求項１に記載の複合体。
  3. Ｐ２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＡｓｎから選択される請求項１または２に記載の複合体。
  4. Ｐ３がＰｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、ＳｅｒおよびＧｌｎから選択される前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  5. Ｐ２がＡｌａである前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  6. Ｐ３Ａｌａである前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  7. Ｒ２１が−Ｈ、Ｃ１−５−アルキル−、Ｃ５−１０−アラルキル−、Ｃ１−５−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ基、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシまたはＣ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、そのそれぞれが−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ２または−Ｎ（アルキル）２、または−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２基によって置換されていても良く、
    ｘが０または１であり、
    ｖが１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２が−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  8. Ｒ４が−Ｌ−＃１を表し、式−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を含み、
    Ｐ２が、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり、
    Ｐ３が、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  9. 前記複合体がバインダー−プロドラッグ複合体であり、
    Ｒ４が、式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を表し、
    Ｒ２１がＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、または−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ−Ｒ２２基を表し、
    ｘが０または１であり、
    ｖが１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２が−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し、
    Ｐ２が、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３が、各場合で独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である請求項１から７のうちの１以上に記載の複合体。
  10. Ｒ１またはＲ３が−Ｌ−＃１を表す前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  11. Ｘ１がＣＨであり、Ｘ２がＣであり、Ｘ３がＮである前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  12. Ｒ６およびＲ７が互いに独立に−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表す前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  13. Ｒ６およびＲ７が−Ｆを表す請求項１２に記載の複合体。
  14. Ｒ８がＣ１−４−アルキル、好ましくはｔｅｒｔ−ブチル、またはシクロヘキシルを表す前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  15. Ｒ９がＨを表す前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  16. 前記バインダーまたはそれの誘導体がバインダーペプチドもしくはタンパク質またはバインダーペプチドもしくはタンパク質の誘導体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  17. 各薬物分子が前記リンカーを介して前記バインダーペプチドもしくはタンパク質またはそれの誘導体の異なるアミノ酸に結合している請求項１６に記載の複合体。
  18. 前記複合体がバインダー当たり平均１．２から２０個の薬物分子またはプロドラッグを有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  19. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、抗体または前記バインダーペプチドもしくはタンパク質の誘導体：
    Figure 2018524321
     を表す請求項１６から１８のうちの１以上に記載の複合体。
  20. 前記バインダーが癌標的分子に結合している前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  21. 前記バインダーが細胞外標的分子に結合している請求項２０に記載の複合体。
  22. 前記バインダーが、前記細胞外標的分子への結合後に、前記標的分子を発現する細胞によって内在化され、細胞内で（好ましくはリソソームで）処理される請求項２１に記載の複合体。
  23. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質がヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である請求項１６から２２のうちの１以上に記載の複合体。
  24. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片である請求項２３に記載の複合体。
  25. 前記抗ＴＷＥＡＫＲが、抗体ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合している請求項２４に記載の複合体。
  26. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合している請求項２４または２５のうちの１以上に記載の複合体。
  27. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が抗ＥＧＦＲ抗体であり、Ｒ３が−Ｌ−＃１を表す請求項２４に記載の複合体。
  28. 前記リンカー−Ｌ−が下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
    （ｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｖ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２−
    のうちの一つを有し、
    ｍが０または１であり、ＳＧおよびＳＧ１がイン・ビボ開裂性基を表し、Ｌ１が互いに独立にイン・ビボで開裂しない有機基を表し、Ｌ２がバインダーへのカップリング基を表す前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  29. 前記イン・ビボ開裂性基ＳＧが２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基またはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールもしくはアミナールであり、ＳＧ１が２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基である請求項２８に記載の複合体。
  30. 前記リンカーがシステイン側鎖もしくはシステイン残基に結合しており、下記式を有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
     ［式中、
    ｍは０または１であり；
    §は薬物分子への結合を表し、
    §§はバインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
    −Ｌ２−は
    Figure 2018524321
    を表し、
    ＃１はバインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、
    ＃２は基Ｌ１への結合箇所を示し、
    Ｌ１は−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−を表し、
    Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018524321
     を表し；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ２は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
    Figure 2018524321
    ）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    または下記の基：
    Figure 2018524321
     のうちの一つを表し、
    Ｒｘは−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。］
  31. Ｌ２が、下記式のうちの一つまたは両方によって表される請求項３０に記載の複合体。
    Figure 2018524321
     ［式中、
    ＃１はバインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、
    ＃２は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
    Ｒ２２は−ＣＯＯＨを表し、前記バインダーの硫黄原子への結合が８０％強（バインダーへのリンカーにおける結合の総数に基づいて）の程度までこれら二つの構造のうちの一つに存在する。］
  32. Ｌ１が下記式を有する請求項３０または３１のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、ｒは０から８の数字である。］
  33. 前記炭化水素鎖が下記の基のうちの一つによって中断されている請求項３０から３２のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
     ［式中、Ｘは−ＨまたはＣ１−１０−アルキル基を表し、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。］
  34. 前記リンカーが下記式を有する請求項３０に記載の複合体。
    Figure 2018524321
     ［式中、
    ＃３は薬物分子への結合を表し、
    ＃４はバインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
    Ｒ１１は−ＮＨ２を表し；
    Ｂは−［（ＣＨ２）ｘ−（Ｘ４）ｙ］ｗ−（ＣＨ２）ｚ−を表し、
    ｗは０から２０であり；
    ｘは０から５であり；
    ｙは０または１であり；
    ｚは０から５であり；
    Ｘ４は−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−
    Figure 2018524321
     を表す。］
  35. 前記複合体が下記式のうちの一つを満足する請求項２６から３０のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    ［式中、
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、請求項１におけるものと同じ意味を有し、
    ＡＫ１はバインダーの硫黄原子を介して結合したバインダーペプチドまたはタンパク質を表し；
    ｎは１から２０の数字を表し；
    Ｌ１は、１から７０個の炭素原子を有する分岐していても良いヒドロカルビル基であるか、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    ＳＧ１は、２から８オリゴペプチド、好ましくはジペプチドであり；
    Ｌ４は単結合または基−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−Ｇ４−を表し、
    ｙは０または１を表し、
    Ｇ４は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｎｍｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く；式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子が式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−のレグマイン開裂性基によって置き換わっており、
    Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である。］
  36. 下記式の一方または両方を有するバインダーもしくはそれの誘導体の１以上の薬物分子との複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    ＡＫ１またはＡＫ１Ａはバインダーの硫黄原子を介して結合したバインダーペプチドまたはタンパク質を表し；
    ｎは１から２０の数字を表し；
    Ｌ１は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く；
    式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子が式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−のレグマイン開裂性基によって置き換わっており、
    Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２であり；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸である。］
  37. 前記リンカー−Ｌ−がシステイン側鎖またはシステイン残基に結合しており、下記式を有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
     ［式中、
    §は薬物分子への結合を表し、
    §§はバインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
    ｍは０、１、２または３であり；
    ｎは０、１または２であり；
    ｐは０から２０であり；
    Ｌ３は、下記の基：
    Figure 2018524321
     を表し、
    ｏは０または１であり；
    Ｇ３は、アリール基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキル基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）−および−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。］
  38. 前記リンカー−Ｌ−がシステイン側鎖またはシステイン残基に結合しており、下記式を有する請求項３７に記載の複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    §は薬物分子への結合を表し、
    §§はバインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
    ｍは１であり；
    ｐは０であり；
    ｎは０であり；
    Ｌ３は、下記の基：
    Figure 2018524321
    を表し；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ３は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ（ＣＨ２）ｔ（ＣＯＮＨ）ｕＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ（ＣＨ２）ｗ−を表し、
    ｓ、ｔ、ｖおよびｗはそれぞれ互いに独立に、０から２０であり、
    ｕは０または１である。］
  39. Ｒ２またはＲ３が−Ｌ−＃１を表す前記請求項のうちの１項に記載の複合体。
  40. 前記複合体が下記式のうちの一つを有する請求項３９に記載の複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、請求項４におけるものと同じ意味を有し、
    ＡＫ１はバインダーの硫黄原子を介して結合したバインダーペプチドまたはタンパク質を表し；
    ｎは１から２０の数字を表し；
    Ｌ１は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−基およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｌ２およびＬ３は、アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、その複合体は下記式のうちの一つを満足し、
    ＳＧ１は開裂性基、好ましくは２から８オリゴペプチド、より好ましくはジペプチドを表し、
    ＡＫ１は、システインを介して連結された抗体を表す。］
  41. 前記リンカー−Ｌ−がリジン側鎖に結合しており、下記式を有する請求項１から３２のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    §は薬物分子への結合を表し、
    §§はバインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
    ｘは０または１を表し、
    ＳＧは開裂性基、好ましくは２から８オリゴペプチド、特に好ましくはジペプチドを表し、
    Ｌ４は単結合または基−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−Ｇ４−を表し、
    ｙは０または１を表し、
    Ｇ４は、アリール基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキル基からなる１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎｍｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、または−Ｓ（＝Ｏ）−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。］
  42. 前記複合体が下記式のうちの一つを有する請求項４１に記載のバインダーペプチドまたはタンパク質の複合体。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、請求項１におけるものと同じ意味を有し、
    ＡＫ２はリジン結合抗体を表し；
    ｎは１から２０の数字であり；
    Ｌ４は、アリール基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキル基からなる１から１００個の炭素原子を有する適宜に直鎖もしくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎｍｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    当該複合体は、下記式のうちの一つを満足し、ｎは１から２０の数字であり、式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子が式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−のレグマイン−開裂性基によって置き換わっており、
    Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ５１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、または−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
    ＳＧ１は、開裂性基、好ましくは２から８オリゴペプチド、特に好ましくはジペプチドを表す。］
  43. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体がアゴニスト抗体である請求項２３から４２のうちの１以上に記載の複合体。
  44. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片が、
    ａ．式ＰＹＰＭＸ（配列番号１７１）（ＸはＩまたはＭである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ１；
    ｂ．式ＹＩＳＰＳＧＧＸＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７２）（ＸはＳまたはＫである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ２；および
    ｃ．式ＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹ（配列番号１７３）を含むアミノ酸配列によってコードされた重鎖のＣＤＲ３
    を含む可変重鎖
    および
    を含む可変軽鎖：
    ｄ．式ＲＡＳＱＳＩＳＸＹＬＮ（配列番号１７４）（ＸはＧまたはＳである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ１；
    ｅ．式ＸＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７５）（ＸはＱ、ＡまたはＮである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ２；および
    ｆ．式ＱＱＳＹＸＸＰＸＩＴ（配列番号１７６）（位置５でのＸはＴまたはＳであり、位置６でのＸはＴまたはＳであり、位置８でのＸはＧまたはＦである。）を含むアミノ酸配列によってコードされた軽鎖のＣＤＲ３
    を含む可変軽鎖
    を含む、請求項２３から４３のうちの１以上に記載の複合体。
  45. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片が、
    ａ．配列番号１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｂ．配列番号２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｃ．配列番号３０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号２９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｄ．配列番号４０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号３９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｅ．配列番号５０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号４９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｆ．配列番号６０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号５９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｇ．配列番号７０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号６９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｈ．配列番号８０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号７９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｉ．配列番号９０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号８９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｊ．配列番号１００に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｋ．配列番号１１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１０９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｌ．配列番号１２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１１９に示した軽鎖の可変性配列
    を含む請求項２３から４４のうちの１以上に記載の複合体。
  46. 前記抗体がＩｇＧ抗体である請求項１８から４５のうちの１以上に記載の複合体。
  47. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、
    ａ．配列番号２に示した重鎖の配列、
    および配列番号１に示した軽鎖の配列、または
    ｂ．配列番号１２に示した重鎖の配列、
    および配列番号１１に示した軽鎖の配列、または
    ｃ．配列番号２２に示した重鎖の配列、
    および配列番号２１に示した軽鎖の配列、または
    ｄ．配列番号３２に示した重鎖の配列、
    および配列番号３１に示した軽鎖の配列、または
    ｅ．配列番号４２に示した重鎖の配列、
    および配列番号４１に示した軽鎖の配列、または
    ｆ．配列番号５２に示した重鎖の配列、
    および配列番号５１に示した軽鎖の配列、または
    ｇ．配列番号６２に示した重鎖の配列、
    および配列番号６１に示した軽鎖の配列、または
    ｈ．配列番号７２に示した重鎖の配列、
    および配列番号７１に示した軽鎖の配列、または
    ｉ．配列番号８２に示した重鎖の配列、
    および配列番号８１に示した軽鎖の配列、または
    ｊ．配列番号９２に示した重鎖の配列、
    および配列番号９１に示した軽鎖の配列、または
    ｋ．配列番号１０２に示した重鎖の配列、
    および配列番号１０１に示した軽鎖の配列、または
    ｌ．配列番号１１２に示した重鎖の配列、
    および配列番号１１１に示した軽鎖の配列
    を含む請求項２０から４６のうちの１以上に記載の複合体。
  48. 前記複合体が、バインダーペプチドまたはタンパク質当たり１から１０個、好ましくは２から８個の薬物分子またはプロドラッグ分子を有する、前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  49. 前記抗体−プロドラッグ複合体が下記式のうちの一つを満足する、前記請求項のうちの１以上に記載の抗体−プロドラッグ複合体。
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
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    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    ［式中、
    ｎは１から２０の数字であり、
    ＡＫ１はシステイン結合抗体を表し、
    ＡＫ２はリジン結合抗体を表し、式ＩＩａの位置Ｒ４における（すなわち、−ＮＨ２基における）水素原子が、式Ｒ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基またはカテプシン開裂性基によって置き換わっており、
    Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良く、
    Ｐ２は、単結合またはＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、単結合またはＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸である。］
  50. 前記抗体−プロドラッグ複合体が下記式のうちの一つを満足する請求項１から４８のうちの１以上に記載の抗体−プロドラッグ複合体。
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
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    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
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    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    Figure 2018524321
    ［式中、
    ｎは１から２０の数字であり、
    ＡＫ１は、システイン結合抗体であり、
    ＡＫ２は、リジン結合抗体であり；
    ＡＫ３は、グルタミン結合抗体である。］
  51. ｎが１から２０の数字であり、
    ＡＫ１がシステイン結合抗体を表し、
    ＡＫ２がリジン結合抗体を表し、
    前記抗体−プロドラッグ複合体が、それが基：
    Figure 2018524321
    を有する場合、抗体に結合しており、この基に代えて、少なくとも部分的に当該抗体に結合した加水分解開鎖コハク酸アミドの形態でも存在することもできる、請求項１から５０のうちの１以上に記載の抗体−プロドラッグ複合体。
  52. 不活性で無毒性の医薬として好適な補助剤と組み合わせて前記請求項のうちの１以上に記載の複合体を含む医薬組成物。
  53. 疾患の治療および／または予防方法で使用される前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  54. 過剰増殖性障害および／または血管新生障害の治療方法で使用される前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  55. 下記式（ＩＩＩ）のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤プロドラッグならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018524321
    ［式中、
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
    （Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい。）；
    Ｒ１は−Ｈ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、ＮＨ２、ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２は、−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４は、式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基を表し、
    Ｒ２１はＣ１−１０−アルキル、Ｃ５−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール、Ｃ５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−１０−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシまたはＣ６−１０−アラルコキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨによってモノ置換または多置換されていても良い）、−Ｈまたは−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ−Ｒ２２基を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字を表し、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは個々のＮ−アルキルアミノ酸のうちの一つ、好ましくはＮ−メチルアミノ酸から選択されるアミノ酸であり；
    Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
    Ｒ３は、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基（「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。）によって置換されていても良く、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    ｎは０、１または２を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′、または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
    Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
    Ｒ８は、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、または−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
    ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２によって置換されていても良く；
    Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
    −ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
    Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−または
    Figure 2018524321
     を表し（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018524321
     を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２ではない。）；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−によって同一でまたは異なって１回または複数回中断されていても良く、
    Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
    Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、基−ＭＯＤは好ましくは少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。］
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