JP2018501794A5 - - Google Patents

Description

上記ＣＡＲは、相同性の高い部分を有し得、例えば、膜貫通ドメインおよび／または細胞内シグナル伝達ドメインは、高度に相同である可能性がある。同一または類似のリンカーが、２つのＣＡＲに対して用いられる場合、それらのリンカーも高度に相同であり得る。このことから、それらの配列間での相同組換えの可能性があるので、両ＣＡＲを単一の核酸配列に提供する手法は不適当であると示唆される。しかしながら、本発明者らは、相同性の高い領域をコードする配列の一部分を「コドンゆらぎ」にすることによって、単一の構築物から２つのＣＡＲを高効率で発現することが可能であることを見出した。コドンゆらぎは、同一または類似のアミノ酸配列をコードする配列の領域における代替的コドンの使用を含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを細胞表面に共発現する細胞であって、各ＣＡＲが、抗原結合ドメインを含み、該第１のＣＡＲの該抗原結合ドメインが、ＣＤ１９に結合し、該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが、ＣＤ２２に結合する、細胞。
（項目２）
各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；および
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン
を含み、前記第１のＣＡＲの該スペーサーは、前記第２のＣＡＲの該スペーサーとは異なる、項目１に記載の細胞。
（項目３）
前記第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２２のＩｇドメイン１、２、３または４におけるエピトープに結合する、項目２に記載の細胞。
（項目４）
項目１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の両方をコードする核酸配列。
（項目５）
以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり
；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり、
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
を有し、その核酸配列は、Ｔ細胞において発現されたとき、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面に発現されるように、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする、
項目４に記載の核酸配列。
（項目６）
ｃｏｅｘｐｒが、自己切断性ペプチドを含む配列をコードする、項目５に記載の核酸配列。
（項目７）
相同組換えを回避するために、代替的コドンが、同一または類似のアミノ酸配列をコードする配列の領域で使用される、項目５または６に記載の核酸配列。
（項目８）
（ｉ）項目１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
を有する、第１の核酸配列、および
（ｉｉ）項目１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
ＡｇＢ２−スペーサー２−ＴＭ２
（ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
を有する、第２の核酸配列
を含む、キット。
（項目９）
項目８において定義されたような前記第１の核酸配列を含む第１のベクター；および項目８において定義されたような前記第２の核酸配列を含む第２のベクターを含む、キット。
（項目１０）
前記ベクターが、組込み型ウイルスベクターまたはトランスポゾンである、項目９に記載のキット。
（項目１１）
項目４〜７のいずれかに記載の核酸配列を含む、ベクター。
（項目１２）
項目１１に記載の、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
（項目１３）
項目１〜３のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、項目４〜７のいずれかに記載の核酸配列；項目８において定義されたような第１の核酸配列および第２の核酸配列；ならびに／あるいは項目９において定義されたような第１のベクターおよび第２のベクターまたは項目１１もしくは１２に記載のベクターを細胞に導入する工程を含む、方法。
（項目１４）
前記細胞が、被験体から単離された試料に由来する、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
項目１〜３のいずれかに記載の複数の細胞を含む、医薬組成物。
（項目１６）
項目１５に記載の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、疾患を処置および／または予防するための方法。
（項目１７）
以下の工程：
（ｉ）被験体からの細胞含有試料の単離；
（ｉｉ）項目４〜７のいずれかに記載の核酸配列；項目８において定義されたような第１の核酸配列および第２の核酸配列；項目９もしくは１０において定義されたような第１のベクターおよび第２のベクターまたは項目１１もしくは１２に記載のベクターでの該細胞の形質導入またはトランスフェクション；および
（ｉｉｉ）該被験体に（ｉｉ）からの該細胞を投与すること
を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記疾患が、がんである、項目１６または１７に記載の方法。
（項目１９）
前記がんが、Ｂ細胞悪性腫瘍である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
疾患の処置および／または予防において使用するための項目１５に記載の医薬組成物。
（項目２１）
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における項目１〜３のいずれかに記載の細胞の使用。
（項目２２）
ａ）以下の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）：
ＣＤＲ１−ＳＹＷＭＮ（配列番号１５）；
ＣＤＲ２−ＱＩＷＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫ（配列番号１６）
ＣＤＲ３−ＲＥＴＴＴＶＧＲＹＹＹＡＭＤＹ（配列番号１７）；および
ｂ）以下の配列を有するＣＤＲを有する軽鎖可変領域（ＶＬ）：
ＣＤＲ１−ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＬＮ（配列番号１８）；
ＣＤＲ２−ＤＡＳＮＬＶＳ（配列番号１９）
ＣＤＲ３−ＱＱＳＴＥＤＰＷＴ（配列番号２０）
を含むＣＤ１９結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
（項目２３）
前記ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号２３もしくは配列番号２４として示されている配列を有するＶＨドメイン；または配列番号２５、配列番号２６もしくは配列番号４０として示されている配列を有するＶＬドメイン、ＣＤ１９に結合する能力を保持し、少なくとも９０％の配列同一性を有するそれらの変異型を含む、項目２２に記載のＣＡＲ。
（項目２４）
前記ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号２１、配列番号２２もしくは配列番号３９として示されている配列、またはＣＤ１９に結合する能力を保持し、少なくとも９０％の配列同一性を有するそれらの変異型を含む、項目２２に記載のＣＡＲ。
（項目２５）
ａ）以下の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）：
ＣＤＲ１−ＮＹＷＩＮ（配列番号２７）；
ＣＤＲ２−ＮＩＹＰＳＤＳＦＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号２８）
ＣＤＲ３−ＤＴＱＥＲＳＷＹＦＤＶ（配列番号２９）；および
ｂ）以下の配列を有するＣＤＲを有する軽鎖可変領域（ＶＬ）：
ＣＤＲ１−ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号３０）；
ＣＤＲ２−ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号３１）
ＣＤＲ３−ＳＱＳＴＨＶＰＷＴ（配列番号３２）
を含むＣＤ２２結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
（項目２６）
前記ＣＤ２２結合ドメインが、配列番号３５もしくは配列番号３６として示されている配列を有するＶＨドメイン；または配列番号３７もしくは配列番号３８として示されている配列を有するＶＬドメイン、またはＣＤ２２に結合する能力を保持し、少なくとも９０％の配列同一性を有するそれらの変異型を含む、項目２５に記載のＣＡＲ。
（項目２７）
前記ＣＤ２２結合ドメインが、配列番号３３もしくは配列番号３４として示されている配列、またはＣＤ２２に結合する能力を保持し、少なくとも９０％の配列同一性を有するそれらの変異型を含む、項目２５に記載のＣＡＲ。
（項目２８）
前記第１のＣＡＲが、項目２２〜２４のいずれかにおいて定義されたとおりであり、前記第２のＣＡＲが、項目２５〜２７のいずれかにおいて定義されたとおりである、項目１〜３のいずれかに記載の細胞。
（項目２９）
項目２２〜２４のいずれかにおいて定義されたような第１のＣＡＲおよび項目２５〜２７のいずれかにおいて定義されたような第２のＣＡＲをコードする、項目４〜７のいずれかに記載の核酸配列。
（項目３０）
前記第１の核酸配列が、項目２２〜２４のいずれかにおいて定義されたような第１のＣＡＲをコードし、前記第２の核酸配列が、項目２５〜２７のいずれかにおいて定義されたような第２のＣＡＲをコードする、項目８〜１０のいずれかに記載のキット。
（項目３１）
項目２９に記載の核酸配列を含む、項目１１または１２に記載のベクター。
（項目３２）
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを細胞表面に共発現する細胞であって、各ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含み、該第１のＣＡＲの該細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインを含み；該第２のＣＡＲの該細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体ファミリーのエンドドメインを含む、細胞。
（項目３３）
前記共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインである、項目３２に記載の細胞。
（項目３４）
前記ＴＮＦ受容体ファミリーのエンドドメインが、ＯＸ−４０または４−１ＢＢエンドドメインである、項目３２または３３に記載の細胞。
（項目３５）
前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＴＡＭ含有ドメインも含む、項目３２〜３４のいずれかに記載の細胞。
（項目３６）
前記第１のＣＡＲが、以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−ｃｏｓｔｉｍ−ＩＴＡＭ
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインであり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーであり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインであり；
ｃｏｓｔｉｍは、共刺激ドメインであり；
ＩＴＡＭは、ＩＴＡＭ含有エンドドメインである）
を有し、前記第２のＣＡＲが、以下の構造：
ＡｇＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−ＴＮＦ−ＩＴＡＭ
（ここで、
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインであり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーであり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインであり；
ＴＮＦは、ＴＮＦ受容体のエンドドメインであり；
ＩＴＡＭは、ＩＴＡＭ含有エンドドメインである）
を有する、項目３５に記載の細胞。
（項目３７）
項目３２〜３６のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の両方をコードする核酸配列。
（項目３８）
以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−ｃｏｓｔｉｍ−ＩＴＡＭ１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−ＴＮＦ−ＩＴＡＭ２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｓｔｉｍは、共刺激ドメインをコードする核酸配列であり；
ＩＴＡＭ１は、前記第１のＣＡＲのＩＴＡＭ含有エンドドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり、
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
ＴＮＦは、ＴＮＦ受容体のエンドドメインをコードする核酸配列であり；
ＩＴＡＭ２は、前記第２のＣＡＲのＩＴＡＭ含有エンドドメインをコードする核酸配列であり、
その核酸配列は、細胞において発現されたとき、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲが該細胞表面に発現されるように、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする）を有する、項目３７に記載の核酸配列。
（項目３９）
（ｉ）項目３２〜３６のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−ｃｏｓｔｉｍ−ＩＴＡＭ１
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲ膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｓｔｉｍは、共刺激ドメインをコードする核酸配列であり；
ＩＴＡＭ１は、前記第１のＣＡＲのＩＴＡＭ含有エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する、第１の核酸配列、および
（ｉｉ）項目３２〜３６のいずれかにおいて定義されたような前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−ＴＮＦ−ＩＴＡＭ２
（ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
ＴＮＦは、ＴＮＦ受容体のエンドドメインをコードする核酸配列であり；
ＩＴＡＭ２は、前記第２のＣＡＲのＩＴＡＭ含有エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する、第２の核酸配列
を含む、キット。
（項目４０）
項目３７または３８に記載の核酸配列を含む、ベクター。
（項目４１）
項目３７〜３８のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、項目３７もしくは３８に記載の核酸配列；項目３９において定義されたような第１の核酸配列および第２の核酸配列；または項目４０に記載のベクターを細胞に導入する工程を含む、方法。
（項目４２）
項目３２〜３６のいずれかに記載の複数の細胞を含む、医薬組成物。
（項目４３）
項目４２に記載の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、疾患を処置および／または予防するための方法。
（項目４４）
疾患の処置および／または予防において使用するための項目４２に記載の医薬組成物。
（項目４５）
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における項目３２〜３６のいずれかに記載の細胞の使用。

Claims (15)

1. 第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを別々の分子として細胞表面に共発現する細胞であって、各ＣＡＲが、抗原結合ドメイン、スペーサーおよび膜貫通ドメインを含み、該第１のＣＡＲの該抗原結合ドメインが、ＣＤ１９に結合し、該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが、ＣＤ２２に結合する、細胞。
2. 前記第１のＣＡＲのスペーサーは、前記第２のＣＡＲのスペーサーとは異なる、請求項１に記載の細胞。
3. 前記第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２２のＩｇドメイン１、２、３または４におけるエピトープに結合する、請求項１または２に記載の細胞。
4. 請求項１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の両方をコードする核酸配列。
5. 以下の構造：
   ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２
   （ここで、
   ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
   スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり
   ；
   ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
   ｃｏｅｘｐｒは、自己切断性ペプチドをコードする核酸配列であり、
   ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
   スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
   ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
   を有し、その核酸配列は、Ｔ細胞において発現されたとき、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面に発現されるように、該自己切断性ペプチドで切断されるポリペプチドをコードする、
   請求項４に記載の核酸配列。
6. （ｉ）請求項１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
   ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１
   （ここで、
   ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
   スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
   ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
   を有する、第１の核酸配列、および
   （ｉｉ）請求項１〜３のいずれかにおいて定義されたような前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の核酸配列であって、該核酸配列は、以下の構造：
   ＡｇＢ２−スペーサー２−ＴＭ２
   （ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
   スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
   ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列である）
   を有する、第２の核酸配列
   を含む、キット。
7. 請求項６において定義されたような前記第１の核酸配列を含む第１のベクター；および請求項６において定義されたような前記第２の核酸配列を含む第２のベクターを含む、キット。
8. 請求項４または５に記載の核酸配列を含む、ベクター。
9. 請求項１〜３のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、請求項４または５に記載の核酸配列；請求項６において定義されたような第１の核酸配列および第２の核酸配列；ならびに／あるいは請求項７において定義されたような第１のベクターおよび第２のベクターまたは請求項８に記載のベクターを生体外で細胞に導入する工程を含む、方法。
10. 前記細胞が、被験体から単離された試料に由来する、請求項９に記載の方法。
11. 請求項１〜３のいずれかに記載の複数の細胞を含む、医薬組成物。
12. 疾患の処置および／または予防における使用のための請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 前記使用が、以下の工程：
    （ｉ）被験体からの細胞含有試料の細胞の単離、
    （ｉｉ）請求項４または５に記載の核酸配列；請求項６において定義されたような第１の核酸配列および第２の核酸配列；請求項７において定義されたような第１のベクターおよび第２のベクターまたは請求項８に記載のベクターでの該細胞の形質導入またはトランスフェクト、および
    （ｉｉｉ）該被験体に（ｉｉ）からの該細胞を投与すること
    を含む、請求項１２に記載の使用のための医薬組成物。
14. 前記疾患が、がんである、請求項１２または１３に記載の使用のための医薬組成物。
15. 前記がんが、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。